CN110760404B - 一种芽孢杆菌混菌麸曲及其制备工艺、应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种芽孢杆菌混菌麸曲及其制备工艺、应用。本发明先将多种芽孢杆菌分别在牛肉膏蛋白胨液体培养基中培养,然后将培养得到的芽孢杆菌分别接种于一级麸曲载体中,并恒温培养,得到分别含有不同芽孢杆菌的一级单菌麸曲。随后,将得到的一级单菌麸曲分别进行扩大培养,得到二级单菌麸曲。再将多种二级单菌麸曲混合并接种至本发明的二级麸曲载体中,进行恒温培养,得到含有多种芽孢杆菌的混菌麸曲。由于本发明制得麸曲含有多种芽孢杆菌,其在白酒酿造中更有助于香气提升和降低高级醇。且整个制备过程简单,将芽孢杆菌融合在麸曲中,也够有利于保存和使用。
Description
技术领域
本发明涉及酿酒技术领域,具体涉及一种芽孢杆菌混菌麸曲及其制备工艺、应用。
背景技术
芽孢杆菌是大曲中数量较多的细菌之一,它具有水解蛋白质和淀粉的能力,在白酒固态发酵中能代谢出多种风味成分。近年的研究表明,枯草芽孢杆菌(Bacillussubtilis)在发酵过程中产酶和代谢产物十分复杂,其功能作用十分丰富,对白酒生产过程功能微生物的研究及其生产应用已得以证实,同时在酿醋、制酱领域的研究成果也给予其充分的佐证。大量研究结果表明,具有产酱香风味物质的地衣芽孢杆菌(Bacilluslicheniformis)大量存在于酱香型白酒生产微生态环境和酿造过程,它在酱香型白酒酿造过程中发挥着重要作用,是酱香白酒酿造微生物种群中的优势菌。
目前,对于芽孢杆菌在酿造中的使用存在于一下几个方面的问题:(1)没有一套将芽孢杆菌用于白酒酿造中的完整工艺;(2)许多使用芽孢杆菌都是以单菌的形式加以利用,白酒香气还有待提高;(3)利用芽孢杆菌制备的酿酒产品不利于长期保存;(4)应用的方法不适合于白酒生产。
发明内容
为了解决芽孢杆菌在酿酒中的应用问题,本发明的目的在于开发一种能够大量保存,工艺流程简单,适合于白酒企业应用的芽孢杆菌混菌麸曲,提升白酒的香气成分。本发明解决上述技术问题的技术方案如下:
一种芽孢杆菌混菌麸曲的制备工艺,包括以下步骤:
(1)将多种芽孢杆菌的菌悬液分别接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中恒温培养;
(2)将麸皮、全麦粉和水混合均匀,灭菌,冷却,得到一级麸曲载体;将步骤(1)得到多种芽孢杆菌分别加入至无菌生理盐水中,然后将得到的多种菌悬液分别加入至所述一级麸曲载体中混合均匀,恒温培养,分别制得与每种芽孢杆菌相对应的一级单菌麸曲;
(3)对步骤(2)得到的一级单菌麸曲分别进行扩大培养,得到二级单菌麸曲;
(4)将麸皮、全麦粉和水混合均匀,灭菌,冷却,得到二级麸曲载体;将步骤(3)制得的多种二级单菌麸曲混合接种至所述二级麸曲载体中混合均匀,恒温培养,干燥,制得芽孢杆菌混菌麸曲。
本发明先将多种芽孢杆菌分别在牛肉膏蛋白胨液体培养基中培养,然后将培养得到的芽孢杆菌分别与本发明的一级麸曲载体混合并恒温培养,得到分别含有不同芽孢杆菌的一级单菌麸曲。随后,将得到的一级单菌麸曲分别进行扩大培养,得到二级单菌麸曲。再将多种二级单菌麸曲混合并接种至本发明的二级麸曲载体中进行恒温培养,得到含有多种芽孢杆菌的混菌麸曲。
由于本发明制得麸曲含有多种芽孢杆菌,其在白酒酿造中更有助于香气提升。且整个制备过程简单,将芽孢杆菌融合在麸曲中,也够有利于保存和使用。
进一步地,在本发明较佳的实施例中,上述步骤(1)中,多种芽孢杆菌包括:枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌;培养条件为:在36-38℃、130-160r/min的摇床下培养14-18h。
本发明选择贝莱斯芽孢杆菌、枯草芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和短小芽孢杆菌作为混菌组分,该三种菌类在发酵中期能够抑制酵母菌的数量,从而降低酵母菌产生高级醇的含量,具有降低白酒中高级醇的作用;此外,本发明还添加地衣芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌,其能够产生吡嗪类化合物,具有增加白酒酱香味的功能;再者,本发明选择的这些芽孢杆菌均有利于产酸,从而提高白酒质量。
优选地,上述培养条件为在36℃、160r/min的摇床下培养18h;或者,在38℃、130r/min的摇床下培养14h;或者,在37℃、150r/min的摇床下培养16h。
进一步地,在本发明较佳的实施例中,上述步骤(1)中,所述牛肉膏蛋白胨液体培养基通过以下方法制得:
按重量份计,取牛肉膏2-6份、蛋白胨6-18份、NaCl 3.5-10份、琼脂15-20份和蒸馏水1000份混合,然后在pH 7.2-7.4、110-130℃的条件下灭菌15-25min。
优选地,牛肉膏蛋白胨液体培养基通过以下方法制得:按重量份计,取牛肉膏2份、蛋白胨6份、NaCl 3.5份、琼脂15份和蒸馏水1000份混合,然后在pH 7.2、110℃的条件下灭菌15min。
优选地,牛肉膏蛋白胨液体培养基通过以下方法制得:按重量份计,取牛肉膏6份、蛋白胨18份、NaCl 10份、琼脂20份和蒸馏水1000份混合,然后在pH7.4、130℃的条件下灭菌25min。
优选地,牛肉膏蛋白胨液体培养基通过以下方法制得:按重量份计,取牛肉膏3份、蛋白胨10份、NaCl5份、琼脂16份和蒸馏水1000份混合,然后在pH7.3、121℃的条件下灭菌20min。
进一步地,在本发明较佳的实施例中,上述步骤(2)中,每种芽孢杆菌的菌总数为107-108个/mL、接种量为(4mL-5mL)/100g;麸皮、全麦粉和水的重量比为(8-12):1:(12-15),培养条件为:在36-38℃下恒温培养1.5-2.5天。
优选地,步骤(2)中,每种芽孢杆菌的菌总数为5×107个/mL、接种量为4.5mL/100g;或者,每种芽孢杆菌的菌总数为108个/mL、接种量为5mL/100g;或者,每种芽孢杆菌的菌总数为107个/mL、接种量为4mL/100g。
优选地,步骤(2)中,麸皮、全麦粉和水的重量比为8:1:12或者12:1:15或者10:1:14。
优选地,培养温度为37℃。
进一步地,在本发明较佳的实施例中,上述步骤(3)中,进行5-15倍扩大培养,培养条件为:在36-38℃下恒温培养55-65h。
进一步地,在本发明较佳的实施例中,上述步骤(4)中,麸皮、全麦粉和水的重量比为(11-15):(1.1-1.5):(19-23);多种二级单菌麸曲的总接种量为0.5-0.6%;培养条件为:在36-38℃下培养6-8天;干燥温度为35-40℃。
优选地,步骤(4)中,麸皮、全麦粉和水的重量比为11:1.1:19或者15:1.5:23或者13:1.3:20。需要说明的是,多种二级单菌麸曲的混合比例可以根据实际情况进行选择,本发明对此不做特别限定。
本发明对每个培养步骤的培养条件进行优化设计,得到适应于对应步骤最佳的培养环境,包括对培养基组分比例的限定、培养温度、培养时间等,使得每个培养步骤获得的菌种数量和蛋白酶活力良好,且有利于保藏。
上述的制备工艺制备得到的芽孢杆菌混菌麸曲。
本发明的芽孢杆菌混菌麸曲,在入库前:水分4-8%,淀粉含量8-12%,还原糖35-45g/Kg,酸度2-4%,蛋白酶活力50U/g,芽孢杆菌数量3×106-3×107。在无曲虫影响的情况下,本发明的芽孢杆菌混菌麸曲的保质期可达2年。
上述的芽孢杆菌混菌麸曲在酿酒中的应用。
进一步地,在本发明较佳的实施例中,上述芽孢杆菌混菌麸曲在酿造小曲酒中的应用,芽孢杆菌混菌麸曲和小曲的质量比(2-3):2,总用曲量为0.5-0.7%。
芽孢杆菌混菌麸曲在酿造小曲酒中应用的具体过程为:
S1:将高粱于沸水中浸泡6-8小时,使之增重45%-50%。
S2:初蒸15-20min,然后在70℃下闷粮2h-2.5h。
S3:复蒸65-70min,使之增重120%-130%。
S4:将蒸制后的高粱摊凉,然后加入芽孢杆菌混菌麸曲和小曲,在45-50℃保持2h,芽孢杆菌混菌麸曲和小曲的质量比(2-3):2,总用曲量为0.5-0.7%。
S5:堆积培菌(时间20h-24h,堆积前25℃,堆积后33℃-35℃,酵母数106个/g,糖分4%-5%)。
S6:入缸发酵(入缸温度24℃-25℃,发酵时间为8-12天,温度“前缓中挺后缓”)。
S7:蒸馏(探气上甑,酒醅均匀疏松,不能过慢,火力均匀,取摘酒精度52%以上)。
进一步地,在本发明较佳的实施例中,上述芽孢杆菌混菌麸曲在酿造大曲酒中的应用,芽孢杆菌混菌麸曲的用量为0.3-0.5%。
芽孢杆菌混菌麸曲在酿造大曲酒中应用的具体过程为:
在大曲酒生产中的应用适合用于有堆积工艺的大曲酒生产,本发明采用酱酒的生产工艺,下沙和糙沙两轮均不加麸曲,第3至第8轮添加麸曲。
将上一轮蒸酒后的酒醅,出甑加水,冷却,然后加入总量3%尾酒和高温大曲和麸曲,堆积,入窖发酵,出窖酒醅蒸酒。
浓香型白酒酿造所用的中温大曲的用曲量在12-20%之间,酱香型白酒酿造作用的高温大曲在40-50%,清香型白酒酿造所用的低温曲大约在10-18%。(大曲虽然用量很大,但是单位含量中包含的微生物量没有麸曲多,而且里面包含的菌种种类较多,所以单个菌类数量并不高)。
本发明具有以下有益效果:
本发明的芽孢杆菌混菌麸曲容易制备,产品容易保存,使用方便,对各种白酒生产均可使用,可选任意选择多种芽孢杆菌菌种制备麸曲,对白酒酿造有增香和降低高级醇的功能。
具体实施方式
以下结合实施例对本发明的原理和特征进行描述,所举实例只用于解释本发明,并非用于限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者,按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者,均为可以通过市售购买获得的常规产品。
本发明的下列实施例中采用的芽孢杆菌包括:枯草芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌。在本发明的其他实施例中,还可以有其他芽孢杆菌的组合配方,例如可以选择枯草芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌中的至少两者制备麸曲。
实施例1:
本实施例的芽孢杆菌混菌麸曲的制备工艺包括以下步骤:
(1)将枯草芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌的菌悬液分别接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中恒温培养,培养条件为:在37℃、150r/min的摇床下培养16h。
所述牛肉膏蛋白胨液体培养基通过以下方法制得:
按重量份计,取牛肉膏2份、蛋白胨8份、NaCl 3.5份、琼脂15份和蒸馏水1000份混合,然后在pH 7.2、110℃的条件下灭菌15min。
(2)将麸皮、全麦粉和水混合均匀,麸皮、全麦粉和水的重量比为8:1:12,灭菌,冷却,得到一级麸曲载体;将步骤(1)得到多种芽孢杆菌分别加入至无菌生理盐水中,然后分别加入至所述一级麸曲载体中混合均匀,恒温培养,培养条件为:在37℃下恒温培养2天,分别制得与每种芽孢杆菌相对应的一级单菌麸曲。
(3)对步骤(2)得到的一级单菌麸曲分别进行10倍扩大培养,培养条件为:在37℃下恒温培养60h,得到二级单菌麸曲。
(4)将麸皮、全麦粉和水混合均匀,麸皮、全麦粉和水的重量比为11:1.1:19,灭菌,冷却,得到二级麸曲载体;将步骤(3)制得的二级单菌麸曲等比混合,按总接种量为0.5%,接种至所述二级麸曲载体中混合均匀,恒温培养,培养条件为:在37℃下培养7天;干燥,干燥温度为35℃,制得芽孢杆菌混菌麸曲。
实施例2:
本实施例的芽孢杆菌混菌麸曲的制备工艺包括以下步骤:
(1)将枯草芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌的菌悬液分别接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中恒温培养,培养条件为:在37℃、150r/min的摇床下培养16h。
所述牛肉膏蛋白胨液体培养基通过以下方法制得:
按重量份计,取牛肉膏6份、蛋白胨18份、NaCl 10份、琼脂20份和蒸馏水1000份混合,然后在pH 7.4、130℃的条件下灭菌25min。
(2)将麸皮、全麦粉和水混合均匀,麸皮、全麦粉和水的重量比为12:1:15,灭菌,冷却,得到一级麸曲载体;将步骤(1)得到多种芽孢杆菌分别加入至无菌生理盐水中,然后分别加入至所述一级麸曲载体中混合均匀,恒温培养,培养条件为:在37℃下恒温培养2天,分别制得与每种芽孢杆菌相对应的一级单菌麸曲。
(3)对步骤(2)得到的一级单菌麸曲分别进行10倍扩大培养,培养条件为:在37℃下恒温培养60h,得到二级单菌麸曲。
(4)将麸皮、全麦粉和水混合均匀,麸皮、全麦粉和水的重量比为15:1.5:23,灭菌,冷却,得到二级麸曲载体;将步骤(3)制得的二级单菌麸曲等比混合,按总接种量为0.6%,接种至所述二级麸曲载体中混合均匀,恒温培养,培养条件为:在37℃下培养7天;干燥,干燥温度为40℃,制得芽孢杆菌混菌麸曲。
实施例3:
本实施例的芽孢杆菌混菌麸曲的制备工艺包括以下步骤:
(1)将枯草芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌的菌悬液分别接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中恒温培养,培养条件为:在37℃、150r/min的摇床下培养16h。
所述牛肉膏蛋白胨液体培养基通过以下方法制得:
按重量份计,取牛肉膏6份、蛋白胨18份、NaCl 10份、琼脂20份和蒸馏水1000份混合,然后在pH7.4、130℃的条件下灭菌25min。
(2)将麸皮、全麦粉和水混合均匀,麸皮、全麦粉和水的重量比为10:1:14,灭菌,冷却,得到一级麸曲载体;将步骤(1)得到多种芽孢杆菌分别加入至无菌生理盐水中,然后分别加入至所述一级麸曲载体中混合均匀,恒温培养,培养条件为:在37℃下恒温培养2天,分别制得与每种芽孢杆菌相对应的一级单菌麸曲。
(3)对步骤(2)得到的一级单菌麸曲分别进行10倍扩大培养,培养条件为:在37℃下恒温培养60h,得到二级单菌麸曲。
(4)将麸皮、全麦粉和水混合均匀,麸皮、全麦粉和水的重量比为12:1.3:20,灭菌,冷却,得到二级麸曲载体;将步骤(3)制得的二级单菌麸曲等比混合,按总接种量为0.55%,接种至所述二级麸曲载体中混合均匀,恒温培养,培养条件为:在37℃下培养7天;干燥,干燥温度为37℃,制得芽孢杆菌混菌麸曲。
实施例4:
芽孢杆菌混菌麸曲在酿造小曲酒中的应用。
芽孢杆菌混菌麸曲在酿造小曲酒中应用的具体过程为:
S1:将高粱于沸水中浸泡6小时,使之增重45%。
S2:初蒸15min,然后在70℃下闷粮2.5h。
S3:复蒸65min,使之增重120%。
S4:将蒸制后的高粱摊凉,然后加入芽孢杆菌混菌麸曲和小曲,在45℃保持2h,芽孢杆菌混菌麸曲和小曲的质量比1:1,总用曲量为0.5%。
S5:堆积培菌(时间20h,堆积前25℃,堆积后33℃,酵母数106个/g,糖分4%)。
S6:入缸发酵(入缸温度24℃,发酵时间为12天,温度“前缓中挺后缓”)。
S7:蒸馏(探气上甑,酒醅均匀疏松,不能过慢,火力均匀,取摘酒精度52%以上)。
实施例5:
芽孢杆菌混菌麸曲在酿造小曲酒中的应用。
芽孢杆菌混菌麸曲在酿造小曲酒中应用的具体过程为:
S1:将高粱于沸水中浸泡8小时,使之增重50%。
S2:初蒸20min,然后在70℃下闷粮2.5h。
S3:复蒸70min,使之增重130%。
S4:将蒸制后的高粱摊凉,然后加入芽孢杆菌混菌麸曲和小曲,在50℃保持2h,芽孢杆菌混菌麸曲和小曲的质量比3:2,总用曲量为0.7%。
S5:堆积培菌(时间24h,堆积前25℃,堆积后35℃,酵母数106个/g,糖分5%)。
S6:入缸发酵(入缸温度25℃,发酵时间为8天,温度“前缓中挺后缓”)。
S7:蒸馏(探气上甑,酒醅均匀疏松,不能过慢,火力均匀,取摘酒精度52%以上)。
实施例6:
芽孢杆菌混菌麸曲在酿造小曲酒中的应用。
芽孢杆菌混菌麸曲在酿造小曲酒中应用的具体过程为:
S1:将高粱于沸水中浸泡7小时,使之增重48%。
S2:初蒸18min,然后在70℃下闷粮2.2h。
S3:复蒸68min,使之增重125%。
S4:将蒸制后的高粱摊凉,然后加入芽孢杆菌混菌麸曲和小曲,在48℃保持2h,芽孢杆菌混菌麸曲和小曲的质量比1.2:1,总用曲量为0.6%。
S5:堆积培菌(时间22h,堆积前25℃,堆积后34℃,酵母数106个/g,糖分4.5%)。
S6:入缸发酵(入缸温度24.5℃,发酵时间为10天,温度“前缓中挺后缓”)。
S7:蒸馏(探气上甑,酒醅均匀疏松,不能过慢,火力均匀,取摘酒精度52%以上)。
实施例7:
芽孢杆菌混菌麸曲在酿造大曲酒中应用的具体过程为:
在大曲酒生产中的应用适合用于有堆积工艺的大曲酒生产,本发明采用酱酒的生产工艺,下沙和糙沙两轮均不加麸曲,第3至第8轮添加麸曲。
将上一轮蒸酒后的酒醅,出甑加水,冷却,然后加入总量3%尾酒和高温大曲和麸曲,堆积,入窖发酵,出窖酒醅蒸酒。芽孢杆菌混菌麸曲的用量为0.3%。
实施例8:
芽孢杆菌混菌麸曲在酿造大曲酒中应用的具体过程为:
在大曲酒生产中的应用适合用于有堆积工艺的大曲酒生产,本发明采用酱酒的生产工艺,下沙和糙沙两轮均不加麸曲,第3至第8轮添加麸曲。
将上一轮蒸酒后的酒醅,出甑加水,冷却,然后加入总量3%尾酒和高温大曲和麸曲,堆积,入窖发酵,出窖酒醅蒸酒。芽孢杆菌混菌麸曲的用量为0.4%。
实施例9:
芽孢杆菌混菌麸曲在酿造大曲酒中应用的具体过程为:
在大曲酒生产中的应用适合用于有堆积工艺的大曲酒生产,本发明采用酱酒的生产工艺,下沙和糙沙两轮均不加麸曲,第3至第8轮添加麸曲。
将上一轮蒸酒后的酒醅,出甑加水,冷却,然后加入总量3%尾酒和高温大曲和麸曲,堆积,入窖发酵,出窖酒醅蒸酒。芽孢杆菌混菌麸曲的用量为0.5%。
试验例1:
本试验例,以酿造小曲酒为例,说明本发明实施例芽孢杆菌混菌麸曲在酿酒中的作用。
实验组1-3的芽孢杆菌混菌麸曲的指标参数见表1。
表1
实验组1 | 实验组2 | 实验组3 | |
菌数(个) | <![CDATA[1.3×10<sup>9</sup>]]> | <![CDATA[2.5×10<sup>9</sup>]]> | <![CDATA[1.7×10<sup>9</sup>]]> |
蛋白酶活力U | 51 | 47 | 54 |
淀粉含量 | 11.32% | 9.13% | 10.46% |
将芽孢杆菌混菌麸曲在小曲中的应用,其工艺条件为:高粱沸水浸泡7小时,增重47%,初蒸17min,闷粮2.5h,复蒸65min,增重约125%,堆积培菌时间20h-24h,堆积前25℃,堆积后33℃-35℃,酵母数106个/g,糖分4%-5%,摊凉2h,拌曲0.6%,麸曲:小曲=3:2,入缸发酵发酵时间为7天,蒸馏。计算出酒率,检测酒中的香味成分,对照组直接用6%的小曲进行相同工艺的发酵生产。检测方法参照:GB/T 10345—2007《白酒分析方法》,检测结果见表2。
表2
实验组1、2、3分别为实施例1、2、3制得的芽孢杆菌混菌麸曲按照上述工艺进行酿造。
试验例2:
本发明实施例的芽孢杆菌混菌麸曲在酿造酱香型白酒第三次取酒的风味分析,结果见表3。对照组直接用不添加与麸曲重量相同的麸皮进行相同工艺的发酵生产。
表3
7次实验 | 8次实验 | 9次实验 | 对照组 | |
风味数量(个) | 78 | 73 | 75 | 75 |
酯类(个) | 31 | 30 | 32 | 31 |
浓度(mg/L) | 3679.3 | 3893.4 | 3745.4 | 3765.4 |
醇类(个) | 7 | 7 | 7 | 7 |
浓度(mg/L) | 724.6 | 712.2 | 721.3 | 833.6 |
芳香族(个) | 15 | 14 | 13 | 14 |
浓度(mg/L) | 157.8 | 158.5 | 168.3 | 185.4 |
含氮类化合物(个) | /4 | 4 | 4 | 4 |
浓度(mg/L) | 34.4 | 32.3 | 37.4 | 11.2 |
醛酮类(个) | 8 | 8 | 7 | 8 |
浓度(mg/L) | 78.9 | 73.4 | 75.6 | 84.3 |
酸类(个) | 6 | 6 | 6 | 6 |
浓度(mg/L) | 139.4 | 138.8 | 128.5 | 134.3 |
其它(个) | 11 | 8 | 10 | 9 |
浓度(mg/L) | 343.2 | 359.4 | 329.1 | 338.3 |
四组实验的出酒率分别为:54.6%、53.6%、54.2%、54.4%,出酒率基本无差异,检测每次实验的第三次取酒的成分,从上面可以看出主要的差异性在芳香族(糠醛类化合物有一定的含量差异分别为113.4、114.3、123.6、148.9)、含氮类化合物(吡嗪)和醇类(主要是3-甲基丁醇有差异:593.2、589.4、578.9、734.3)。
以上所述仅为本发明的较佳实施例,并不用以限制本发明,凡在本发明的精神和原则之内,所作的任何修改、等同替换、改进等,均应包含在本发明的保护范围之内。
Claims (5)
1.一种芽孢杆菌混菌麸曲的制备工艺,其特征在于,包括以下步骤:
(1)将多种芽孢杆菌的菌悬液分别接种到牛肉膏蛋白胨液体培养基中恒温培养;
(2)将麸皮、全麦粉和水混合均匀,灭菌,冷却,得到一级麸曲载体;将步骤(1)得到多种芽孢杆菌分别加入至无菌生理盐水中,然后将得到的多种菌悬液分别加入至所述一级麸曲载体中混合均匀,恒温培养,分别制得与每种芽孢杆菌相对应的一级单菌麸曲;
(3)对步骤(2)得到的一级单菌麸曲分别进行扩大培养,得到二级单菌麸曲;
(4)将麸皮、全麦粉和水混合均匀,灭菌,冷却,得到二级麸曲载体;将步骤(3)制得的多种二级单菌麸曲混合接种至所述二级麸曲载体中混合均匀,恒温培养,干燥,制得芽孢杆菌混菌麸曲;
其中,步骤(1)中,多种芽孢杆菌包括:枯草芽孢杆菌、短小芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、解淀粉芽孢杆菌、贝莱斯芽孢杆菌和巨大芽孢杆菌;培养条件为:在 36-38℃、130-160r/min的摇床下培养 14-18h;
步骤(2)中,每种芽孢杆菌的菌总数为107-108个/mL、接种量为(4 mL -5mL)/100g;麸皮、全麦粉和水的重量比为(8-12):1:(12-15),培养条件为:在36-38℃下恒温培养1.5-2.5天;
步骤(3)中,进行5-15倍扩大培养,培养条件为:在36-38℃下恒温培养55-65h;
步骤(4)中,培养条件为:在36-38℃下培养6-8天;干燥温度为35-40℃;
步骤(1)中,所述牛肉膏蛋白胨液体培养基通过以下方法制得:
按重量份计,取牛肉膏2-6份、蛋白胨6-18份、NaCl 3.5-10份、琼脂15-20份和蒸馏水1000份混合,然后在pH 7.2-7.4、110-130℃的条件下灭菌15-25 min;
步骤(4)中,麸皮、全麦粉和水的重量比为(11-15):(1.1-1.5):(19-23);多种二级单菌麸曲的总接种量为0.5-0.6%。
2.权利要求1所述的制备工艺制备得到的芽孢杆菌混菌麸曲。
3.权利要求2所述的芽孢杆菌混菌麸曲在酿酒中的应用。
4.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,芽孢杆菌混菌麸曲在酿造小曲酒中的应用,芽孢杆菌混菌麸曲和小曲的质量比(2-3):2,总用曲量为0.5-0.7%。
5.根据权利要求3所述的应用,其特征在于,芽孢杆菌混菌麸曲在酿造大曲酒中的应用,芽孢杆菌混菌麸曲的用量为0.3-0.5%。
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