CN110719786A - 用于治疗成人和青少年的低磷酸酯酶症(hpp)的方法 - Google Patents
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Abstract
本公开的特征在于用于通过向患者施用可溶性碱性磷酸酶(sALP)来治疗所述患者(例如，患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或患有HPP的青少年)的低磷酸酯酶症(HPP)的方法，所述患者表现出例如血浆样品中的焦磷酸盐(PPi)或5’‑磷酸吡哆醛(PLP)浓度降低、身体受损或步行能力降低。
Description
技术领域
本公开的特征是用于治疗低磷酸酯酶症(HPP)的方法。
背景技术
低磷酸酯酶症(HPP)是一种罕见的、可遗传的骨骼疾病，对于最严重的疾病形式而言发病率为每100,000名出生人数中有1例。该疾患是由编码非组织特异性碱性磷酸酶(TNALP)的基因中的功能丧失性突变而引起的。HPP表现出一系列显著症状和严重程度，从佝偻病到在子宫内几乎完全没有骨矿化。
HPP的表现因患者而异，并且在患者年龄之间有所不同。大多数患有HPP的患者展示出骨骼变化、身材矮小、慢性疼痛、下肢疼痛、步态障碍和过早、无创伤性牙齿脱落。例如，患有HPP的成人的常见症状可包括骨软化、骨矿化程度低、无机焦磷酸盐(PPi)、5'-磷酸吡哆醛(PLP)或磷酸乙醇胺(PEA)的血液和/或尿液水平升高、矿质过少、高钙尿症、身材矮小、骨骼畸形、蹒跚步态、骨痛、骨折、二水焦磷酸钙结晶沉积、关节炎和焦磷酸性关节病。患有HPP的青少年的常见症状可包括PPi、PEA或PLP的血液或尿液水平升高、骨软化、骨骼畸形、张力减退、肌无力、类风湿性并发症、关节炎、假性痛风、蹒跚步态、行走困难、骨痛、疼痛、牙齿过早脱落、矿质过少、肺发育不全、呼吸功能不全、癫痫发作、高钙尿症、身材矮小和生长延迟。
由于与HPP相关的身体损伤，患有HPP的成年患者常常表现出相对于健康受试者降低的步行能力(Weinstein RS,Whyte MP,Arch Intern Med.1981；141(6):727-731)。成年HPP患者可能遭受焦磷酸钙沉积病(CPPD)、假性痛风、软骨钙质沉着病、钙化性关节周炎、椎骨粉碎性骨折、股骨转子下骨折、跖骨骨折和/或假骨折(Coe JD等，J Bone Joint SurgAm.1986；68(7):981-990；Sutton,RAL等，J Bone Miner Res.2012；27(5):987-994)。其它症状，如佝偻病、佝偻病肋骨、重度矿质过少、发育停滞、运动发育迟缓、增重不足、肺发育不全、呼吸功能不全、呼吸衰竭、颅缝早闭(包括颅缝早闭的并发症)和癫痫发作，出现在患有HPP的幼儿或婴儿中，但未出现在患有HPP的成人中。
值得注意的是，用治疗剂长期治疗HPP，尤其是特定的生理和身体损伤以及与成人和青少年形式的HPP相关的步行能力降低的功效和安全性是未知的。因此，需要可用于长期持续治疗和监测成人和青少年患者中的HPP的方法，使得这些患者可以忍受减少的身体和生理损伤并且可以恢复适当水平的行走能力。
发明内容
公开了(1)鉴定患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)和/或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)以便用可溶性碱性磷酸酶(sALP；例如，SEQ ID NO:1)治疗的方法，和(2)用sALP对此类患者的治疗。如本文所定义的成人HPP的症状包括，例如磷酸乙醇胺(PEA)的血液和/或尿液水平升高、矿质过少、高钙尿症、骨骼畸形、蹒跚步态、骨痛、骨折、二水焦磷酸钙结晶沉积、关节炎、焦磷酸性关节病、软骨钙质沉着病、钙化性关节周炎和假骨折。如本文所定义的青少年HPP的症状可包括，例如PPi、PEA或PLP的血液或尿液水平升高、骨软化、一种或多种骨骼畸形、张力减退、肌无力、类风湿性并发症、关节炎、假性痛风、蹒跚步态、行走困难、骨痛、疼痛、牙齿过早脱落、矿质过少、肺发育不全、呼吸功能不全、癫痫发作、高钙尿症、身材矮小和生长延迟。
可用于评估使用sALP(例如，SEQ ID NO:1)进行治疗的需要或功效的示例性量度包括(1)血浆PPi和PLP浓度，(2)六分钟步行测试(Six Minute Walk Test,6MWT)，(3)第2版布尼氏动作精熟度测试(Bruininks-Oseretsky Test of Motor Proficiency 2ndEdition，BOT-2)，(4)手握式测力法(Handheld Dynamometry,HHD)，(5)下肢功能量表(Lower Extremity Function Scale,LEFS)，和(6)简明疼痛量表-简表(Brief PainInventory-Short Form,BPI-SF)。其它测试和量度可包括Tinetti性能导向的移动性评估(Tinetti Performance Oriented Mobility Assessment(POMA；任选地修改))和时空步态分析软件和硬件，诸如
(Clinical Image Retrieval System Inc.)。所述方法还包括单独或组合使用一种或多种描述的量度(例如，BOT-2、6MWT、血浆PPi和PLP浓度、HHD、LEFS或BPI-SF)以评估对于患有HPP的患者使用sALP(例如，SEQ ID NO:1)的治疗功效，其中相对于某一评分或值的改善证明sALP对治疗HPP有效。另外，来自患有HPP的患者的样品(例如，血浆样品)中ALP的活性水平也可以单独使用或与这些量度中的一种或每一种组合使用以评估sALP(例如，SEQ ID NO:1)对于患者的治疗功效。另外，方法还包括改变sALP(例如，SEQ ID NO:1)施用的剂量和/或频率以便确定施用于患有HPP的成人(例如，具有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年的sALP的有效量。
第一方面特征是一种治疗被表征为具有成人HPP的症状的约18岁或以上的小儿发作型HPP患者(例如，人)的HPP的方法，所述方法包括以治疗方案向所述患者施用sALP(例如，SEQ ID NO:1)，所述治疗方案提供约1mg/kg/周至约9mg/kg/周，优选6mg/kg/周的sALP，持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。优选地，成年患者就用sALP治疗而言是无治疗经历的(即，未治疗过的)。具体而言，sALP包括与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列(例如，asfotasealfa)。施用sALP(例如，SEQ ID NO:1)产生以下一种或多种结果：(i)来自所述患者的血浆样品中的PPi浓度相对于来自约18岁或以上的未治疗的小儿发作型HPP受试者的血浆样品中的PPi浓度在统计学上显著降低至少约1μM；(ii)来自所述患者的血浆样品中的PLP浓度相对于来自约18岁或以上的未治疗的小儿发作型HPP受试者的血浆样品中的PLP浓度在统计学上显著降低至少约100ng/ml；和(iii)正如通过6MWT所评估的，所述患者的步行距离相对于未施用的患者的6分钟步行距离在统计学上显著增加至少50米。另外，在施用sALP(例如，SEQ ID NO:1)之后，样品(例如，血浆样品)中ALP的活性可增加。
作为这些方法的结果，来自所述患者(例如，约18岁或以上的无治疗经历的小儿发作型HPP患者)的血浆样品中PPi浓度的降低，来自所述患者的血浆样品中PLP浓度的降低，和/或所述患者步行距离的增加在至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)期间维持。
在施用sALP(例如，SEQ ID NO:1)之前，患者(例如，约18岁或以上的无治疗经历的小儿发作型HPP患者)可以被表征为具有高达约6μM的血浆PPi浓度(例如，约3.5μM、约4μM、约4.5μM、约5μM或约5.5μM或在约3.5μM至约6μM范围内的血浆PPi浓度)，高达1300ng/ml的血浆PLP浓度(例如，约200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml、500ng/ml、600ng/ml、700ng/ml、800ng/ml、900ng/ml、1000ng/ml、1100ng/ml、1200ng/ml或1300ng/ml的血浆PLP浓度，或在约200ng/ml至约1300ng/ml范围内的血浆PLP浓度)，和/或约350米或更短的六分钟步行距离(例如，约50米、75米、100米、125米、150米、175米、200米、225米、250米、275米或350米的六分钟步行距离，或者在约50米至约350米范围内的六分钟步行距离)。在施用sALP持续治疗期后，来自所述患者的血浆样品中PPi浓度的降低可为至少约2μM(例如，在施用sALP后所述患者表现出在约2μM至约5μM范围内的血浆PPi浓度)，来自所述患者的样品中PLP浓度的降低为至少约200ng/ml(例如，在施用sALP后所述患者表现出在约2ng/ml至约150ng/ml范围内的血浆PLP浓度)，和/或六分钟步行距离增加至少100米或更多(例如，在施用sALP后所述患者表现出六分钟步行距离为约420米或更长)。在施用sALP(SEQ ID NO:1)之后，患者还可表现出对辅助移动装置(例如，助行器、轮椅、背带、拐杖和矫形器)的依赖性降低和/或骨折(例如，椎骨粉碎性骨折、股骨转子下骨折或跖骨骨折)的发生率降低。也可以将患者从使用sALP的治疗中排除，例如，血清钙水平低于健康受试者的范围(例如，约8.5至约10.2mg/dl)，血清磷酸盐水平低于健康受试者的范围(例如，约2.5至约4.5mg/dl)，血清维生素D水平低于健康受试者的范围(例如，约20ng/ml)，血清肌酸酐高于健康受试者的范围(例如，约0.6mg/dl至1.2mg/dl)，和/或甲状旁腺激素水平高于健康受试者的范围(例如，约10至约65pg/ml)。
第二方面的特征是一种在约13岁或以上的患者(例如，人)中治疗HPP的方法，所述方法包括以治疗方案向所述患者施用sALP(例如，SEQ ID NO:1)，所述治疗方案提供约1mg/kg/周至约9mg/kg/周，优选6mg/kg/周的sALP，持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。所述患者就用sALP治疗而言可以是无治疗经历的。具体而言，sALP包括与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列(例如，asfotase alfa)。施用sALP(例如，SEQ ID NO:1)产生以下一种或多种结果：(i)患者的百分比(％)预测HHD评分相对于用sALP治疗之前患者的％预测HHD评分的变化为约5％或更多(例如，约5％、6％、7％、8％、9％、10％、11％、12％、13％、14％、15％、16％、17％、18％、19％或20％或更多)；(ii)患者的LEFS评分相对于用sALP治疗之前患者的LEFS评分变化为约3或更多(例如，约3、4、5、6、7、8、9或10或更多)；以及(iii)患者的BPI-SF评分相对于用sALP治疗之前患者的BPI-SF评分变化为约-2或更多(例如，约-2、约-3、约-4、约-5、约-6或约-7或更多)。
在第一或第二方面，sALP(例如，SEQ ID NO:1)可以每天、每周、每月或每年施用一次或多次(例如，每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次，或每周七次)。具体而言，可以在每周的两天，每周的三天，每周的四天，每周的五天，每周的六天或每周的七天分多个剂量施用sALP。例如，sALP(例如，SEQ ID NO:1)以约2.1mg/kg/周至约3.5mg/kg/周的初始剂量(例如，约0.3mg/kg/天至约0.5mg/kg/天的sALP初始剂量)施用，随后增加至约6mg/kg/周或更多(例如，9mg/kg/周)的剂量。具体而言，初始剂量可以在至少六个月、至少一年、至少两年、至少三年或至少四年或更长(例如，至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年、至少十年，或十年以上，诸如患者终生)的治疗期后增加。而且，sALP(例如，SEQ ID NO:1)可以约1.3mg/kg/周、约2.7mg/kg/周，或约6mg/kg/周或更高(例如，约9mg/kg/周)的剂量施用，例如sALP以约2mg/kg每周三次、约3mg/kg每周两次、约3mg/kg每周三次或约1mg/kg每周六次的剂量施用。另外，sALP可以连续或隔日施用，每天一次。此外，sALP(例如，SEQ ID NO:1)可以以治疗成人HPP的至少一种症状(例如，以下的至少一种或多种：磷酸乙醇胺(PEA)的血液和/或尿液水平升高、矿质过少、高钙尿症、骨骼畸形、蹒跚步态、骨痛、骨折(例如，椎骨粉碎性骨折、股骨转子下骨折或跖骨骨折)、二水焦磷酸钙结晶沉积、关节炎、焦磷酸性关节病、软骨钙质沉着病、钙化性关节周炎和假骨折)的治疗有效量施用。
在第一或第二方面，sALP(例如，SEQ ID NO:1)以包含至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂(诸如盐水或氯化钠和磷酸钠)的组合物施用。例如，至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂包括150mM氯化钠和25mM磷酸钠。而且，药物组合物可以皮下、肌肉内、静脉内、口服、鼻腔、舌下、鞘内或皮内施用。具体而言，药物组合物经皮下施用。
第三方面的特征是sALP，其包括与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列(例如，asfotase alfa)，用于在约18岁或以上的无治疗经历的小儿发作型HPP患者(例如，人)中治疗低磷酸酯酶症(HPP)。具体而言，将sALP配制为用于在以下治疗方案中施用，所述治疗方案提供约1mg/kg/周至约9mg/kg/周，优选6mg/kg/周的sALP，持续至少两周的治疗期，例如至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。sALP(例如，SEQ ID NO:1)的特征在于，向患者施用sALP产生以下一种或多种结果：(i)来自所述患者的血浆样品中的PPi浓度相对于来自约18岁或以上的未治疗的小儿发作型HPP受试者的血浆样品中的PPi浓度在统计学上显著降低至少约1μM；(ii)来自所述患者的血浆样品中的PLP浓度相对于来自约18岁或以上的未治疗的小儿发作型HPP受试者的血浆样品中的PLP浓度在统计学上显著降低至少约100ng/ml；和(iii)正如通过6MWT所评估的，所述患者的步行距离相对于未施用的患者的6分钟步行距离在统计学上显著增加至少50米。
在第三方面，sALP的特征可在于，来自所述患者(例如，约18岁或以上的无治疗经历的小儿发作型HPP患者)的血浆样品中PPi浓度的降低，来自所述患者的血浆样品中PLP浓度的降低，和/或所述患者步行距离的增加在至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)期间维持。
在第三方面，sALP(例如，SEQ ID NO:1)的特征可在于，在施用sALP之前，患者(例如，约18岁或以上的无治疗经历的小儿发作型HPP患者)表现出血浆PPi浓度为约6μM，血浆PLP浓度高达1300ng/ml，和/或六分钟步行距离为约350米或更短。具体而，sALP的特征在于，来自所述患者的血浆样品中PPi浓度的降低为至少约2μM(例如，在施用sALP后所述患者表现出约2μM至约5μM的血浆PPi浓度)，来自所述患者的样品中PLP浓度的降低为至少约200ng/ml(例如，在施用sALP后所述患者表现出约2ng/ml至约150ng/ml的血浆PLP浓度)，和/或施用sALP持续至少一年的治疗期引起六分钟步行距离增加至少100米或更多(例如，在施用sALP后所述患者表现出六分钟步行距离为约420米或更长)。在施用sALP(例如，SEQID NO:1)之后，患者还可表现出对辅助移动装置(例如，助行器、轮椅、背带、拐杖和矫形器)的依赖性降低和/或骨折(例如，椎骨粉碎性骨折、股骨转子下骨折或跖骨骨折)的发生率降低。
在第三方面，可以将sALP(例如，SEQ ID NO:1)配制为用于每天、每周、每月或每年施用一次或多次(例如，每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次，或每周七次)。具体而言，将sALP配制为用于在每周的两天，每周的三天，每周的四天，每周的五天，每周的六天或每周的七天分多个剂量施用。例如，将sALP(例如，SEQ ID NO:1)配制为用于以约2.1mg/kg/周至约3.5mg/kg/周的初始剂量(例如，约0.3mg/kg/天至约0.5mg/kg/天的sALP初始剂量)施用，随后增加至约6mg/kg/周或更多(例如，9mg/kg/周)的剂量。具体而言，初始剂量可以在至少六个月、至少一年、至少两年、至少三年或至少四年或更长(例如，至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年、至少十年，或十年以上，诸如患者终生)的治疗期后增加。而且，可以将sALP(例如，SEQ ID NO:1)配制为用于以约1.3mg/kg/周、约2.7mg/kg/周，或约6mg/kg/周或更高(例如，约9mg/kg/周)的剂量施用，例如将sALP配制为用于以约2mg/kg每周三次、约3mg/kg每周两次、约3mg/kg每周三次或约1mg/kg每周六次的剂量施用。另外，可以将sALP配制为用于连续或隔日施用，每天一次。此外，可以将sALP(例如，SEQ ID NO:1)配制为用于以治疗成人HPP的至少一种症状(例如，以下的至少一种或多种：磷酸乙醇胺(PEA)的血液和/或尿液水平升高、矿质过少、高钙尿症、骨骼畸形、蹒跚步态、骨痛、骨折(例如，椎骨粉碎性骨折、股骨转子下骨折或跖骨骨折)、二水焦磷酸钙结晶沉积、关节炎、焦磷酸性关节病、软骨钙质沉着病、钙化性关节周炎和假骨折)的治疗有效量施用。
在第三方面，可以将sALP(例如，SEQ ID NO:1)配制为用于以包含至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂(诸如盐水或氯化钠和磷酸钠)的组合物施用。例如，至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂包括150mM氯化钠和25mM磷酸钠。而且，可以将药物组合物配制为用于皮下、肌肉内、静脉内、口服、鼻腔、舌下、鞘内或皮内施用。具体而言，将药物组合物配制为用于皮下施用。
在以上任何方面，患者(例如，18岁或以上的无治疗经历的小儿发作型HPP患者)可以是未根据围产期、婴儿期或儿童期HPP症状的存在进行诊断的患者，所述症状诸如佝偻病、佝偻病肋骨、重度矿质过少、发育停滞、运动发育迟缓、增重不足、肺发育不全、呼吸功能不全、呼吸衰竭、颅缝早闭(包括颅缝早闭的并发症)和癫痫发作。
在以上任何方面，所述患者是人。患者(例如，约18岁或以上的无治疗经历的小儿发作型HPP患者)在施用sALP(例如，SEQ ID NO:1)后可能不表现出异位性钙化。例如，所述患者在施用所述sALP至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年或更长时间后未表现出异位性钙化。而且，患者(例如，约13岁或以上的HPP患者，诸如约18岁或以上的无治疗经历的小儿发作型HPP患者)可能对sALP(例如，SEQ ID NO:1)的施用表现出耐受性，例如选自由以下组成的组的至少一种不良事件的缺乏或发生率降低：注射部位红斑、血红蛋白减少、发热、肺炎、上呼吸道感染、中耳炎、呕吐、便秘、腹泻、牙齿脱落、鼻咽炎、皮疹、龋病和易怒。
在以上任何方面，sALP(例如，SEQ ID NO:1)包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列或由其组成。例如，sALP(例如，SEQ ID NO:1)对PEA、PPi和PLP具有生理活性，具有催化能力以改善骨中的骨骼矿化，和/或是碱性磷酸酶的可溶性细胞外结构域。
在以上任何方面，施用sALP可引起来自患者的血浆样品中的PPi和/或PLP浓度的最小二乘方平均值相比于基线的统计学显著变化。施用sALP可以产生约2,000U×天/L至约7,000U×天/L的AUClast，其中所述AUClast等于在给药间隔期中从零时到最后观察到的浓度的时间的浓度-时间曲线下面积。施用sALP可以产生约4,000U×天/L至约10,000U×天/L的AUCinf，其中所述AUCinf等于从零时到无限时间的浓度-时间曲线下面积。施用sALP可以产生约3天至约8天的t1/2。
定义
如本文所用，除非另有说明，否则“一”或“一种(个)”意指“至少一种”或“一种或多种”。另外，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一”、“一种(个)”和“所述(该)”包括复数指代物。
如本文所用，“约”是指所述值的±10％，并且优选为所述值的±5％，或更优选为所述值的±2％的量。
如本文所用，“至少”是指≤所述值的10％，并且优选≤所述值的5％，或更优选≤所述值的±2％的量。
“asfotase alfa”意指配制用于治疗HPP的人TNALP(hTNALP)融合蛋白。Asfotasealfa(
Alexion Pharmaceuticals,Inc.)是包含两条相同多肽链的可溶性糖蛋白的融合蛋白，其中每条多肽链均包含SEQ ID NO:1的氨基酸残基1-726。每条多肽链的结构均包括hTNALP的催化结构域，即人免疫球蛋白G1 Fc结构域，和用作骨靶向结构域的十-天冬氨酸肽(结构hTNALP-Fc-D10)。两条多肽链通过两个二硫键共价连接。asfotasealfa已经以商品名
在全球范围内，包括在美国、欧洲、日本、加拿大、以色列、澳大利亚和韩国获得批准。
如本文所用，“平均数”是指表示数据集的平均值或中值的数值。数据集的平均值是通过将该集合中的值的总和除以它们的数量来计算的。数据集的中值是通过确定奇数列表中的中间值或通过确定偶数列表中间的两个数据值的平均值来计算的。
如本文所用，术语“骨靶向部分”是指长度为1至50个氨基酸残基的氨基酸序列，该氨基酸序列对骨基质具有足够的亲和力，使得骨靶向部分异乎寻常地对骨基质具有约10-6M至约10-15M(例如，10-7M、10-8M、10-9M、10-10M、10-11M、10-12M、10-13M、10-14M或10-15M)的体内结合亲和力。
如本文可互换使用的术语“简明疼痛量表-简表”和“BPI-SF”是指测量患者，尤其是患有HPP的患者(例如，约13岁或以上的患者)的疼痛的方法。BPI-SF是特此通过引用整体并入本文的Cleeland和Ryan(Ann Acad Med Singapore,23(2),129-138；1994)中描述的一种自我报告的疼痛测量。BPI-SF是设计用于评估疼痛的严重程度和疼痛对日常功能的影响的问卷。BPI-SF由11项组成，这11项利用数字评定量表来评估问卷调查前24小时内的疼痛严重程度(4项)和疼痛干扰(7项)。BPI-SF问卷以0(无疼痛)至10(剧烈疼痛或疼痛引起的严重干扰)的数字评定量表提供了关于疼痛强度和疼痛干扰患者(例如，约13岁或以上的HPP患者)日常功能的程度的信息；评分越低表明生活质量越好，并且疼痛减轻。例如，HPP青少年和成人的BPI-SF评分是11次疼痛评估的综合。
如本文所用，术语“第2版布尼氏动作精熟度测试”或“BOT-2”是指针对患者(例如患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)的粗大和精细动作表现的标准化测试的第二版。参见Bruininks,R.H.(2005)。Bruininks-Oseretsky Test of MotorProficiency,(BOT-2).Minneapolis,MN:Pearson Assessment，其特此通过引用整体并入。单独施用BOT-2以评估一系列患者的粗大和精细动作技能。例如，BOT-2可用于评价患有HPP的患者(例如，患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)的身体损伤和移动性限制。BOT-2提供以下示例性方面的综合BOT-2评分：力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和上肢协调。例如，BOT-2力量总评分可以通过让患者进行仰卧起坐(sit-up)、两头起(v-up)、立定跳远(standing long jump)、背靠墙直角坐(wall sit)和俯卧撑(push-up)来测定。可以通过让患者跨越平衡木或进行往返跑、双腿侧跳或单腿侧跳来测定奔跑速度和敏捷性总评分。BOT-2总力量及BOT-2奔跑速度和敏捷性总评分范围为0至25，其中认为约10至25的评分代表健康受试者。力量及奔跑速度和敏捷性的标准评分为15+/-5。成人评分未赋范(不使用量表评分)，因此点值越高代表表现更好。可以使用平均或中值评分，对于较小的样本大小或较小的数据集，优选中值评分。
如本文所用，术语“具有催化能力”是指sALP水解骨矿化抑制剂无机焦磷酸盐(PPi)以提供无机磷酸盐(Pi)，从而降低PPi的细胞外浓度。因此，具有催化能力的sALP通过调节PPi的浓度来改善骨中的骨骼矿化。
用“细胞外结构域”意指天然蛋白(例如，碱性磷酸酶)的任何功能性细胞外部分。具体而言，细胞外结构域缺乏信号肽。
用“Fc”意指免疫球蛋白(例如IgG-1、IgG-2、IgG-3、IgG-3或IgG-4)的可结晶片段区域，包括免疫球蛋白重链的CH2和CH3结构域。Fc还可以包括连接Fab区和Fc区的铰链区的任何部分。Fc可以是任何哺乳动物(包括人)的，并且可以经翻译后修饰(例如，通过糖基化)。在非限制性实例中，Fc可以是具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列的人IgG-1的可结晶片段区域。
用“片段”意指多肽或核酸分子的一部分，其优选含有参考核酸分子或多肽的全长的至少10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、75％、80％、85％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或更多。片段可以含有例如10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、95、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280、290、300、400、500、600、700个或更多个氨基酸残基，最多含有所述多肽的整个长度。示例性sALP片段具有ALP(例如，SEQ ID NOs:2-6)的氨基酸残基18-498、18-499、18-500、18-501、18-502、18-503、18-504、18-505、18-506、18-507、18-508、18-509、18-510、18-511或18-512，并且可以包括附加的C-末端和/或N-末端部分。
如本文中可互换使用的术语“手握式测力法”和“HHD”是指测量受试者(尤其是约13岁或以上的患有HPP的受试者)的握力和肌肉力量的方法。可以使用测力计评估患有HPP的受试者的握力、膝关节屈曲、膝关节伸展、髋关节屈曲、髋关节伸展和髋关节外展。例如，约13岁或以上的患有HPP的受试者的膝关节屈曲和伸展以及髋关节屈曲、伸展和外展可以使用例如MICROFET2TM测力计来测量，而受试者的握力可以使用例如
握力计来测量。具体而言，管理员保持测力计固定，并且受试者对测力计施加最大的力。以磅为单位收集峰力数据，然后转换为牛顿(N)。然后使用肢长以N-米计算扭矩值。然后可以将扭矩值与例如大约相同年龄、相同性别和/或相同身高的正常受试者的值进行比较，并表示为百分比值以生成所述受试者的HHD评分。
如本文所用，术语“低磷酸酯酶症”或“HPP”是指由例如编码非组织特异性碱性磷酸酶(TNALP)的ALPL(碱性磷酸酶，肝/骨/肾)基因中的一种或多种功能丧失性突变引起的罕见的、可遗传性骨骼疾患。HPP可进一步表征为婴儿期HPP、儿童期HPP、围产期HPP(例如，良性围产期HPP或致死性围产期HPP)、牙HPP、青少年HPP或成人HPP。例如，“成人HPP”描述18岁或以上的患有HPP的患者。“青少年HPP”描述约13岁至约17岁的患有HPP的患者。如本文所用，术语“成人HPP”是指特征在于存在以下症状中的一种或多种的病状或表型：无机焦磷酸盐(PPi)、磷酸乙醇胺(PEA)或5'-磷酸吡哆醛(PLP)的血液和/或尿液水平升高，矿质过少、高钙尿症、骨骼畸形、蹒跚步态、骨痛、骨折(例如，椎骨粉碎性骨折、股骨转子下骨折或跖骨骨折)、二水焦磷酸钙结晶沉积、关节炎、焦磷酸性关节病、软骨钙质沉着病、钙化性关节周炎和假骨折。如本文所用，术语“青少年HPP”是指特征在于存在以下症状中的一种或多种的病状或表型：PPi、PEA或PLP的血液或尿液水平升高、骨软化、一种或多种骨骼畸形、张力减退、肌无力、类风湿性并发症、关节炎、假性痛风、蹒跚步态、行走困难、骨痛、疼痛、牙齿过早脱落、矿质过少、肺发育不全、呼吸功能不全、癫痫发作、高钙尿症、身材矮小和生长延迟。
如本文中可互换使用的术语“下肢功能量表”和“LEFS”是指测量患者，尤其是患有HPP的患者(例如，约13岁或以上的患者)的下肢功能性伤残的方法。LEFS是Binkley等(PhysTher.79:371-83,1999)描述的一种自我报告的测量，其特此通过引用整体并入。总LEFS评分范围从0到80，其中评分越高表明下肢功能越好。约9分的LEFS评分变化被认为是临床上有意义的变化。有执照的物理治疗师可以以面谈形式向HPP患者(例如，约13岁或以上的HPP患者)施用LEFS。较高的LEFS评分表明下肢功能得到改善，包括过渡运动(例如，离开浴缸或在床上滚动)、移动(例如，在不平坦的地面上步行或奔跑)、爬楼梯和下蹲。LEFS可用于评价HPP患者的单侧或双侧下肢的功能损伤，包括随时间推移监测患者以及评价asfotase alfa治疗的有效性的能力。
用“无治疗经历的患者”或“无治疗经历的受试者”意指患有小儿发作型HPP，先前尚未接受过用碱性磷酸酶或具有碱性磷酸酶活性的多肽治疗的患者或受试者，所述多肽诸如sALP(例如，TNALP，例如，SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体，例如，asfotase alfa)。
术语“小儿发作型低磷酸酯酶症”和“小儿发作型HPP”是指受试者在约18岁之前出现HPP症状。
术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用并且是指如本文所述，构成整个或部分天然存在的或非天然存在的多肽或肽的两个或更多个天然或非天然氨基酸残基的任何链，而不论翻译后修饰(例如，糖基化或磷酸化)如何。
用“药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂”分别意指受试者(例如，人)生理上可接受的，同时保持与其一起施用的药物组合物的治疗性质的载体、稀释剂或赋形剂。一种示例性药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂是生理盐水。例如，药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂可包括氯化钠(例如，150mM氯化钠)和磷酸钠(例如，25mM磷酸钠)。其它生理上可接受的载体、稀释剂或赋形剂及其配制物是本领域技术人员已知的。
用“药物组合物”意指用至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂配制的含有如本文所述的多肽的组合物(例如，包含sALP诸如asfotase alfa的组合物)。药物组合物可以经政府监管机构的批准，作为治疗或预防患者疾病或事件的治疗方案的一部分制造或销售。可以将药物组合物配制为，例如用于皮下施用、静脉内施用(例如，作为不含颗粒栓的无菌溶液和适于静脉内使用的溶剂体系)，用于口服施用(例如片剂、胶囊、囊片、囊形片或糖浆)，或本文描述的任何其它配制物(例如呈单位剂型)。
如本文所用，术语“身体损伤”是指与HPP相关的生理状况，诸如骨无力和肌无力，其可以限制或消除例如患者(例如，患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)的步行能力、功能性耐力和进行日常生活活动(ADL)的能力。具体而言，身体损伤可限制或消除患者进行ADL的能力，ADL是健康受试者每天无需辅助进行的常规活动，诸如功能性移动或转移(例如，步行)、洗浴和淋浴、穿衣、自给、个人卫生和装扮。如本文所述，治疗性组合物(例如，包含sALP(诸如asfotase alfa)的组合物)可以施用于患者(例如，患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)以降低与HPP表型相关的身体损伤的严重程度和/或频率和/或增加患者的步行能力(例如，由患者在六分钟内步行的距离来测定的步行能力)。
如本文所用，术语“生理活性”是指sALP(例如，SEQ ID NO:1)水解磷酸乙醇胺(PEA)、无机焦磷酸盐(PPi)和5'-磷酸吡哆醛(PLP)以提供Pi，从而降低PEA、PPi和PLP的细胞外浓度。
术语“sALP”、“可溶性碱性磷酸酶”和“碱性磷酸酶的细胞外结构域”可互换使用并且是指可溶性、非膜结合的碱性磷酸酶或其结构域、生物活性片段或生物活性变体。sALP包括，例如，缺乏C-末端糖脂锚(GPI信号序列，例如包含人TNALP(SEQ ID NO:2、3、4、5或6)的氨基酸残基18-502或由其组成的多肽)的碱性磷酸酶。具体而言，TNALP可包括，例如，包含SEQ ID NO:1的氨基酸残基1-485或由其组成的多肽(诸如asfotase alfa)，或与SEQ IDNO:1的氨基酸残基1-485具有至少95％序列同一性的多肽变体。sALP还包括，例如，人TNALP的哺乳动物直系同源物，诸如恒河猴TNALP(SEQ ID NO:7)、大鼠TNALP(SEQ ID NO:8)、犬TNALP(SEQ ID NO:9)、猪TNALP(SEQ ID NO:10)、鼠TNALP(SEQ ID NO:11)、牛TNALP(SEQ IDNOs:12-14)或猫TNALP(SEQ ID NO:15)。sALP还包括可溶性、非膜结合形式的人PALP(例如，包含SEQ ID NO:16或17的氨基酸残基18-502或由其组成的多肽)、GCALP(例如，包含SEQ IDNO:18的氨基酸残基18-502或由其组成的多肽)和IALP(例如，包含SEQ ID NO:19的氨基酸残基18-502或由其组成的多肽)，以及保持碱性磷酸酶活性(例如，水解PPi的能力)的其它变体和类似物。具体而言，sALP缺乏N-末端信号肽(例如，SEQ ID NO:2-6、8、11-13或15的氨基酸1-17，或SEQ ID NO:7的氨基酸1-25)。
用“sALP多肽”意指具有结构A-sALP-B的多肽，其中sALP如本文所定义且A和B各自不存在或是至少一个氨基酸的氨基酸序列(例如，本文描述的任何sALP融合多肽(例如SEQID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))。
用“信号肽”意指在多肽的N-末端的引导多肽朝向分泌途径(例如，细胞外空间)的短肽(长度为5-30个氨基酸)。信号肽通常在多肽分泌期间被裂解。信号序列可以将多肽引导至细胞内区室或细胞器，例如高尔基体。可以通过同源性或生物活性鉴定信号序列为具有使多肽靶向细胞特定区域的已知功能的肽。本领域的普通技术人员可以通过使用容易获得的软件(例如，威斯康星大学生物技术中心，遗传计算机组的序列分析软件包，1710University Avenue,Madison,Wis.53705，BLAST或PILEUP/PRETTYBOX程序)来鉴定信号肽。信号肽可以是例如与SEQ ID NOs:2-6的氨基酸残基1-17或SEQ ID NO:7的氨基酸残基1-25基本上相同的信号肽。
如本文所用，当多肽或核酸序列称为与参考序列具有“至少X％序列同一性”时，其中“X”是实数，其意指将序列进行最佳比对时，多肽或核酸中至少X％的氨基酸残基或核苷酸与参考序列的氨基酸残基或核苷酸相同。可以以本领域技术范围内的各种方式确定序列的最佳比对，例如，Smith Waterman比对算法(Smith等，J.Mol.Biol.147:195-7,1981)和BLAST(基本局部比对搜索工具；Altschul等，J.Mol.Biol.215:403-10,1990)。这些和其它比对算法可以使用公开可用的计算机软件访问，诸如并入GeneMatcher Plus(Schwarz和Dayhoff，Atlas of Protein Sequence and Structure,Dayhoff,M.O.,Ed.pp 353-358,1979)中的“Best Fit”(Smith和Waterman，Advances in Applied Mathematics,482-489,1981)，BLAST、BLAST-2、BLAST-P、BLAST-N、BLAST-X、WU-BLAST-2、ALIGN、ALIGN-2、CLUSTAL、Megalign(DNASTAR)或用于比对的其它软件/硬件。另外，本领域技术人员可以确定用于测量比对(包括在所比较的序列长度上实现最佳比对所需的任何算法)的适当参数。
术语“患者”或“受试者”是指哺乳动物，包括但不限于人或非人哺乳动物，诸如牛、马、犬、绵羊或猫。特别关注的是人患者。
如本文所用，“肠胃外施用”、“经肠胃外施用”和其它语法等同短语是指除肠内和局部施用以外的施用模式，通常通过注射施用，包括但不限于皮下、皮内、静脉内、鼻内、眼内、肺、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、皮内、肺内、腹膜内、经气管内、表皮下、关节内、包膜下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外、脑内、颅内、颈动脉内和胸骨内注射和输注。
如本文所用，“六分钟步行测试”和“6MWT”是指用于评估患者(例如，患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)的步行能力，尤其是患者轮流抬起和放下每只脚的能力的标准化测试。参见美国胸腔学会声明：六分钟步行测试指南(American Journal ofRespiratory and Critical Care Medicine,166(1):111-7,2002)，其特此通过引用整体并入。6MWT由患者在六分钟的时间内在平坦、坚硬的表面上步行的距离(例如，以米计)来确定。然后可将6MWT距离与患者在基线时的6MWT距离，未治疗的受试者(例如，大约相同年龄、身高和/或性别的未治疗的受试者)的6MWT距离或健康受试者(例如，大约相同年龄、身高和/或性别的健康受试者)的6MWT距离进行比较并表示为百分比以确定6MWT值。
用“治疗有效量”意指多肽(例如，sALP，诸如SEQ ID NO:1)或本文描述的核酸分子足以大幅改善、治疗、预防、延迟、抑制或阻止成人HPP的至少一种症状(例如，PPi、PLP和PEA的血液和/或尿液水平升高、矿质过少、高钙尿症、骨骼畸形、蹒跚步态、骨痛、骨折、二水焦磷酸钙结晶沉积、关节炎、焦磷酸性关节病、软骨钙质沉着病、钙化性关节周炎和假骨折)的量。本文描述的组合物的治疗有效量可取决于所治疾患的严重程度和患者的状况、体重和总体状态，并且可由普通技术人员在考虑此类因素的情况下确定。治疗有效量的本文描述的组合物可以在一段时间内以单剂量或多剂量施用给患者。
用“治疗”意指意在治愈、缓解、稳定成人HPP，降低成人HPP的可能性或预防成人HPP，例如通过施用药物组合物(例如，sALP，诸如SEQ ID NO:1)而对患者的医疗管理和/或对表现出或可能患上成人HPP的患者的管理。该术语包括积极治疗，即专门针对改善或与治愈疾病、病理状况、疾患或事件相关的治疗，并且还包括病因治疗，即针对消除相关疾病、病理状况、疾患或事件的病因的治疗。另外，该术语包括姑息治疗，即设计用于减轻或改善至少一种症状而不是治愈所述疾病、病理状况、疾患或事件的治疗；对症治疗，即针对相关疾病、病理状况、疾患或事件的全身症状的治疗；预防性治疗，即旨在最小化或部分或完全抑制相关疾病、病理状况、疾患或事件的发展的治疗，例如，在尚未患病但对特定疾病、病理状况、疾患或事件敏感或另外处于特定疾病、病理状况、疾患或事件的风险中的患者中；和支持性治疗，即用于补充针对改善相关疾病、病理状况、疾患或事件的另一种特定疗法的治疗。
根据以下具体实施方式、附图和权利要求书，本公开的其它特征和优点将显而易见。
附图说明
图1A-1B是显示来自小儿发作型低磷酸酯酶症(HPP)成年患者的血浆样品中的无机焦磷酸盐(PPi；图1A)和5’-磷酸吡哆醛(PLP；图1B)浓度从基线到用asfotase alfa治疗六个月的中值变化的图。将数据表示为中值(最小值，最大值)。a P值比较组合asfotase-alfa治疗组(接受剂量为0.3mg/kg/天和0.5mg/kg/天的asfotase alfa的成年HPP患者)与未治疗的对照组。示出了评估血浆PPi和PLP浓度的受治疗的患者和未治疗的对照受试者的数量(n)。
图2是显示来自于在6年的治疗期内施用asfotase alfa的小儿发作型HPP成年患者的血浆样品中的中值PPi浓度的图。示出了18岁以上的健康受试者的PPi浓度的正常上限和正常下限。对照组在联合治疗组后六个月开始用asfotase alfa进行治疗。示出了其中通过方案修改将asfotase alfa增加至6mg/kg/周的剂量的治疗期。a对于六个月时中值血浆PPi浓度相比于基线的变化，P<0.0001。
图3是显示来自于在6年的治疗期内施用asfotase alfa的小儿发作型HPP成年患者的血浆样品中的中值PLP浓度的图。示出了18岁以上的健康受试者的PLP浓度的正常上限和正常下限。对照组在联合治疗组后六个月开始用asfotase alfa进行治疗。示出了其中通过方案修改将asfotase alfa增加至6mg/kg/周的剂量的治疗期。a对于六个月时中值血浆PPi浓度相比于基线的变化，P<0.0001。
图4是显示在6年的治疗期内施用asfotase alfa的小儿发作型HPP成年患者的百分比预测中值六分钟步行测试(6MWT)距离的图。对于每个时间间隔(基线、6个月、1年、2年、3年、4年、5年和6年)，示出了中值、最小值、最大值和n值。灰色区域表示年龄匹配和身高匹配的健康同辈的6MWT距离的正常范围。对照组在联合治疗组后六个月开始用asfotasealfa进行治疗。示出了其中通过方案修改将asfotase alfa增加至6mg/kg/周的剂量的治疗期。a整个治疗期在方案修改为6mg/kg/周之前将接受0.3mg/kg/天和0.5mg/kg/天的asfotase alfa的HPP患者合并。
图5是显示在6年的治疗期内施用asfotase alfa的小儿发作型HPP成年患者的第2版布尼氏动作精熟度测试(BOT-2)的中值总奔跑速度和敏捷性测试评分的图。对于每个时间间隔(基线、6个月、1年、2年、3年、4年、5年和6年)，示出了中值、最小值、最大值和n值。对照组在联合治疗组后六个月开始用asfotase alfa进行治疗。对于基线，整个治疗期在方案修改为6mg/kg/周之前将接受0.3mg/kg/天和0.5mg/kg/天的asfotase alfa的HPP患者合并。
图6是显示在6年的治疗期内施用asfotase alfa的小儿发作型HPP成年患者的中值总BOT-2力量测试评分的图。对于每个时间间隔(基线、6个月、1年、2年、3年、4年、5年和6年)，示出了中值、最小值、最大值和n值。对照组在联合治疗组后六个月开始用asfotasealfa进行治疗。对于基线，整个治疗期在方案修改为6mg/kg/周之前将接受0.3mg/kg/天和0.5mg/kg/天的asfotase alfa的HPP患者合并。
图7是显示在五年的时间段内向患有HPP的青少年和成人施用asfotase alfa的研究设计的示意图，所述时间段包括用asfotase alfa治疗(从基线开始)到六个月的初始阶段和用asfotase alfa治疗的延长阶段(从治疗六个月到治疗五年或更长时间)。a每3个月针对体重变化调整一次asfotase alfa的剂量；除非研究人员在咨询医疗监查员后批准了超过80mg的剂量，否则最大剂量为80mg的asfotase alfa。b在所有患者中通过方案修改而增加asfotase alfa的剂量。在延长阶段期间，所有患者最初接受0.5mg/kg/周的asfotasealfa日剂量，持续大约6个月至1年，稍后改为6天/周的1mg/kg。
图8是显示在研究的不同阶段(筛查、随机化，从基线到asfotase alfa治疗六个月的初步治疗期，从asfotase治疗六个月到一年的开放标签延长期，以及将asfotase alfa的剂量增加到6天/周施用1mg/kg/天直至研究第五年的时期)中青少年和成年HPP患者的数量的示意图。
图9A-B是显示来自青少年和成年HPP患者的血浆样品中的5’-磷酸吡哆醛(PLP；图9A)和无机焦磷酸盐(PPi；图9B)浓度从基线到用asfotase alfa治疗六个月的中值变化的图。将数据表示为中值(最小值，最大值)。a P值比较组合asfotase-alfa治疗组(接受剂量为0.3mg/kg/天和0.5mg/kg/天的asfotase alfa的成年和青少年HPP患者)与未治疗的对照组。示出了评估血浆PPi和PLP浓度的受治疗的患者和未治疗的对照受试者的数量(n)。
图10A-10B是显示来自于在五年的治疗期内施用asfotase alfa的青少年和成年HPP患者的血浆样品中的中值PLP(图10A)和PPi(图10B)浓度的图。还示出了健康受试者的PPi和PLP浓度的正常上限和正常下限。对照组在联合治疗组后六个月开始用asfotasealfa进行治疗。示出了其中通过方案修改将asfotase alfa增加至6mg/kg/周的剂量的治疗期。
图11A-11B是显示在5年的治疗期内施用asfotase alfa的青少年和成年HPP患者在6MWT中步行的中值距离(图11A)和百分比预测中值6MWT距离(图11B)的图。对于每个时间间隔(基线、6个月、1年、2年、3年、4年和5年)，示出了中值、最小值、最大值和n值。灰色区域表示年龄匹配和身高匹配的健康同辈的6MWT距离的正常范围。对照组在联合治疗组后六个月开始用asfotase alfa进行治疗。示出了其中通过方案修改将asfotase alfa增加至6mg/kg/周的剂量的治疗期。
图12A-12B是显示在患有HPP的青少年(图12A)和患有小儿发作型HPP的成人(图12B)中，筛查时在6MWT期间步行的距离与基线之间的相关性的图。
图13是显示在5年的治疗期内施用asfotase alfa的青少年和成年HPP患者的中值总BOT-2奔跑速度和敏捷性测试评分和中值总BOT-2力量测试评分相比于基线的变化的图。对于每个时间间隔(基线、6个月、1年、2年、3年、4年和5年)，示出了中值、最小值、最大值和n值。对照组在联合治疗组后六个月开始用asfotase alfa进行治疗。对于基线，整个治疗期在方案修改为6mg/kg/周之前将接受0.3mg/kg/天和0.5mg/kg/天的asfotase alfa的HPP患者合并。
图14是显示在2a期临床试验期间接受不同浓度的asfotase alfa的患者的给药方案的示意图。
图15是显示在2a期临床试验期间从基线到第9周第3剂前在PPi的最小二乘方平均值(LSM)变化之间观察到的显著差异的图。
图16是显示在2a期临床试验期间从基线到第9周第3剂前在PLP的LSM变化之间观察到的显著差异的图。
图17A-17B是显示每个剂量组群的给药方案(图17A)以及药代动力学、药效学和免疫原性评估的时间表(图17B)的示意图。
图18A-18B是显示在第1天的初始剂量后(图18A)和在第61天的多次给药事件后(图18B)，每天每个剂量组群(0.5mg/kg 3×/周、2mg/kg 3×/周和2mg/kg 3×/周)中asfotase alfa活性(U/L)的个体PK曲线的图。
图19A-19C是显示在第1天的初始剂量后(图20A)，在第15-61天的多次给药事件后(图19B)，以及在第61天的多次给药事件后(图19C)，每天每个剂量组群中的asfotase alfaalfa活性(U/L)的PK曲线的平均值±SD的图。
图20A-20B是显示在第1天的初始剂量后(图20A)和在第61天的多次给药事件后(图20B)，每天每个剂量组群中的剂量标准化asfotase alfa活性(U/L)的平均值±SD的图。
图21是按asfotase alfa Cavg,ss暴露四分位数显示第61天相比于基线的变化的图。CBL PPi值的中值由方框中心的一条线指定。方框表示四分位距(IQR)。须状线代表1.5*IQR。在须状线外用实心圆圈标记异常值。
具体实施方式
我们已经发现asfotase alfa(SEQ ID NO:1，
AlexionPharmaceuticals,Inc.)可以有效地用于在患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)中治疗低磷酸酯酶症(HPP)、其症状和与之相关的身体损伤，持续很长一段时间(例如，至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年、至少十年，或十年以上，诸如患者终生)。具体而言，可以施用asfotasealfa(SEQ ID NO:1)以治疗患有HPP的成人或青少年，所述成人或青少年表现出身体损伤(例如，骨或肌无力)；相对于健康受试者(例如，大约相同年龄、性别和/或身高的未患HPP的受试者)降低的步行能力；样品(例如，血浆样品)中相对于健康受试者(例如，大约相同年龄、相同性别和/或身高的未患HPP的受试者)降低的碱性磷酸酶(ALP)水平；相对于健康受试者(例如，大约相同年龄、相同性别和/或身高的未患HPP的受试者)减小的握力和肌肉力量；相对于健康受试者(例如，大约相同年龄、相同性别和/或身高的未患HPP的受试者)加剧的下肢功能性伤残；或相对于健康受试者(例如，大约相同年龄、相同性别和/或身高的未患HPP的受试者)增加的疼痛。此外，患有HPP的成人或青少年可以是先前尚未接受过用asfotase alfa(SEQ ID NO:1)治疗的无治疗经历的患者。
描述了用于将asfotase alfa(SEQ ID NO:1)施用给患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的方法，所述成人或青少年表现出在来自患有HPP的成人或青少年的血浆样品中的无机焦磷酸(PPi)或5'-磷酸吡哆醛(PLP)浓度相对于来自患有HPP的未治疗的成人或青少年的血浆样品中的PPi或PLP浓度升高。在施用sALP之前，HPP患者可以表征为具有高达约6μM的血浆PPi浓度和/或高达1300ng/ml的PLP浓度。另外，描述了将asfotase alfa(SEQ ID NO:1)施用给患有HPP的成人(例如，患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的方法，所述方法引起患有HPP的成人的步行能力的改善。例如，可以将asfotase alfa(SEQ ID NO:1)施用给步行能力降低的患有HPP的成人或青少年，使得在施用sALP之前，将患者表征为具有约350米或更短的六分钟步行距离。例如，患有HPP的成人在施用sALP后表现出对辅助移动装置(诸如助行器、轮椅、背带、拐杖和矫形器)的依赖性降低。
还描述了用于将asfotase alfa(SEQ ID NO:1)施用给患有HPP的成人(例如，患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的方法，所述成人或青少年具有指示身体损伤的第2版布尼氏动作精熟度测试(BOT-2)的总奔跑速度和敏捷性测试或力量评分(例如，在力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和上肢协调中的一个或多个BOT-2评分方面，BOT-2评分小于约7)。例如，可以将asfotase alfa(SEQ ID NO:1)施用给患有HPP的成人，其BOT-2奔跑速度和敏捷性评分小于约6。此外，可以将asfotase alfa(SEQ ID NO:1)施用给患有HPP的成人，其BOT-2力量评分小于约12。
还描述了用于将asfotase alfa(SEQ ID NO:1)施用给患有HPP的成人(例如，患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的方法，所述成人或青少年具有指示握力和肌肉力量减小的手握式测力法(HHD)评分(例如，小于约50，诸如约10、20、30、40或50的HHD评分)，指示下肢功能性伤残加剧的下肢功能量表(LEFS)评分(例如，小于约40，诸如约10、20、30或40的LEFS评分)，和/或指示疼痛的简明疼痛量表-简表(BPI-SF)(例如，大于约10，诸如约10、约15、约20、约25或约30或更高的评分)。
在任何这些方法中，可以将asfotase alfa(SEQ ID NO:1)施用给患有HPP的成人(例如，患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年，持续很长一段时间，例如至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年、至少十年，或十年以上，诸如患者终生)。此外，鉴于本文描述的使用asfotase alfa的结果，其它sALP(诸如与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体)可用于治疗患有HPP的成人(例如，患有小儿发作型HPP的成人)，持续很长一段时间，例如至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年、至少十年，或十年以上，诸如患者终生)。
治疗方法
本文提供了用于治疗患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的方法。患有HPP的成人(例如，患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)可以在一定年龄范围内，例如约18岁至约20岁，约20岁至约25岁，约25岁至约30岁，约30岁至约35岁，约35岁至约40岁，约40岁至约45岁，约45岁至约50岁，约50岁至约55岁，约60岁至约65岁，约20岁至约约30岁，约30岁至约40岁，约40岁至约50岁，约50岁至约60岁，约60岁至约70岁，约20岁至约65岁，约30岁至约65岁，或65岁以上，通过施用sALP(诸如TNALP，例如sALP融合多肽，诸如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))来治疗。
可以在施用sALP(诸如TNALP，例如sALP融合多肽，诸如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))之前，诊断成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)患有HPP。患有HPP的成人(例如，患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年相对于未患HPP的成人，可以表现出例如身体损伤和步行能力受损。
另外，患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)可以是先前尚未接受用sALP(诸如TNALP，例如sALP融合多肽，诸如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗的无治疗经历的患者。该方法涉及将sALP(诸如TNALP，例如sALP融合多肽，诸如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))施用给患有HPP的成人或患有HPP的青少年，例如施用sALP持续至少一年的治疗期(例如，至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年、至少十年，或十年以上，诸如患者终生)。
具体而言，可以在治疗期将sALP(诸如asfotase alfa)施用给患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)，先前确定所述成人或青少年的血浆PPi浓度高达约6μM(例如，约3.5μM、约4μM、约4.5μM、约5μM或约5.5μM)，血浆PLP浓度高达约1300ng/ml(例如，血浆PLP浓度为约200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml、500ng/ml、600ng/ml、700ng/ml、800ng/ml、900ng/ml、1000ng/ml、1100ng/ml、1200ng/ml或1300ng/ml)，六分钟步行距离为约350米或更短(例如，六分钟步行距离为约50米、75米、100米、125米、150米、175米、200米、225米、250米、275米或350米)，总BOT-2奔跑速度和敏捷性评分低于约6.0，总BOT-2力量评分低于约12，HHD评分低于预测HHD评分的约80％(例如，预测HHD评分的约30％、约35％、约40％、约45％、约50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约75％)，LEFS评分低于约40(例如，LEFS评分低于约10、约20、约30或约40)，和/或BPI-SF评分低于约12(例如，BPI-SF评分低于约0、约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10)。而且，可以将患有HPP的成人或青少年的血浆PPi浓度、血浆PLP浓度、六分钟步行距离、BOT-2力量评分、BOT-2奔跑速度和敏捷性评分、HHD评分、LEFS评分和BPI-SF评分分别与患者基线时的血浆PPi浓度、血浆PLP浓度、六分钟步行距离、BOT-2力量评分、BOT-2奔跑速度和敏捷性评分、HHD评分、LEFS评分和BPI-SF评分进行比较以评估用sALP治疗后在成人或青少年中的效果。
另外，可以将患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的血浆PPi浓度、血浆PLP浓度、六分钟步行距离、BOT-2力量评分、BOT-2奔跑速度和敏捷性评分、HHD评分、LEFS评分和BPI-SF评分与健康患者的血浆PPi浓度、血浆PLP浓度、六分钟步行距离、BOT-2力量评分、BOT-2奔跑速度和敏捷性评分、HHD评分、LEFS评分和BPI-SF评分进行比较以测定在施用了sALP(例如，asfotase alfa)的成人或青少年中的治疗效果。具体而言，可以施用sALP持续至少一年的治疗期(例如，至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年、至少十年，或十年以上，诸如持续患者终生)。可替代地，该方法可包括在施用本文所述的sALP(诸如，asfotase alfa)之前测定血浆PPi浓度、血浆PLP浓度、六分钟步行距离、BOT-2力量评分、BOT-2奔跑速度和敏捷性评分、HHD评分、LEFS评分和BPI-SF评分，以评估在成人或青少年中用sALP治疗的效果。
另外，描述的量度中的每种(例如，血浆PPi浓度、血浆PLP浓度、六分钟步行距离、BOT-2力量评分、BOT-2奔跑速度和敏捷性评分、HHD评分、LEFS评分和BPI-SF评分)可以单独使用或以任何组合使用以评估在患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)中使用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的治疗功效，其中相对于所测量度的某个值或评分的改善可用于显示在使用sALP的HPP患者中的治疗效果。
成人和青少年的低磷酸酯酶症
患有成人HPP的患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有青少年HPP的患者(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)可以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。具体而言，如本文所述，可以施用asfotasealfa
以治疗成年患者(例如，无治疗经历的患者)中的小儿发作型HPP。因此，该方法可用于缓解本文所述HPP的任何症状中的一种或多种或全部，尤其是在施用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))，持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年)时。具体而言，治疗期为至少六周。
例如，该方法可用于治疗成人HPP的症状，包括但不限于磷酸乙醇胺(PEA)的血液和/或尿液水平升高、矿质过少、高钙尿症、骨骼畸形、蹒跚步态、骨痛、骨折(例如，椎骨粉碎性骨折、股骨转子下骨折或跖骨骨折)、二水焦磷酸钙结晶沉积、关节炎、焦磷酸性关节病、软骨钙质沉着病、钙化性关节周炎和假骨折。该方法还可用于治疗青少年HPP的症状，包括但不限于PPi、PEA或PLP的血液或尿液水平升高、骨软化、一种或多种骨骼畸形、张力减退、肌无力、类风湿性并发症、关节炎、假性痛风、蹒跚步态、行走困难、骨痛、疼痛、牙齿过早脱落、矿质过少、肺发育不全、呼吸功能不全、癫痫发作、高钙尿症、身材矮小和生长延迟。
可用于评估使用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ IDNO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))进行治疗的需要或功效的示例性量度包括(1)血浆PPi和/或PLP浓度，(2)六分钟步行测试(6MWT)，(3)第2版布尼氏动作精熟度测试(BOT-2)，(4)手握式测力法(HHD)，(5)下肢功能量表(LEFS)，和(6)简明疼痛量表-简表(BPI-SF)，这些在下面有进一步描述。
血浆无机焦磷酸盐(PPi)和5'-磷酸吡哆醛(PLP)浓度
可以通过测定来自患者的样品(诸如血浆或尿液样品)中的PPi和PLP浓度来鉴定患有HPP的患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotasealfa))进行治疗。本领域技术人员已知的任何方法均可用于定量血浆样品中或可替代地尿液样品中的PPi和PLP浓度，如Whyte等，1995(J.Clin.Invest.95(4):1440-1445)中所详细描述的那样，该文献特此通过引用整体并入。定量血浆或尿液样品中的PPi浓度的方法在Cheung等，1977(Anal.Biochem.83:61-63)；Cook等，1978(Anal.Biochem.91:557-565)和Johnson等，1968(Anal.Biochem.26:137-145)中也有描述，这些文献各自特此通过引用整体并入。具体而言，血浆样品中的PPi和PLP浓度可用于评价患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的ALP活性。
与健康受试者(例如，大约相同年龄、相同性别和/或相同身高的健康受试者)相比，HPP患者通常表现出升高的PPi和PLP血浆浓度，诸如高达约6μM的PPi浓度(例如，约3.5μM、约4μM、约4.5μM、约5μM或约5.5μM)和/或高达约1300ng/ml的PLP浓度(例如，约200ng/ml、300ng/ml、400ng/ml、500ng/ml、600ng/ml、700ng/ml、800ng/ml、900ng/ml、1000ng/ml、1100ng/ml、1200ng/ml或1300ng/ml的血浆PLP浓度)。健康成人的血浆PPi浓度的正常下限为约1μM，而正常上限为约5.9μM。健康成人的血浆PLP浓度的正常下限低于约10ng/ml，而正常上限为约60ng/ml。健康青少年的血浆PPi浓度的正常下限低于约0.75μM，而正常上限为约4.78μM。健康青少年的血浆PLP浓度的正常下限低于约5.74ng/ml，而正常上限为约61.15ng/ml。
具有升高的PPi和/或PLP血浆浓度的HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)可以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，诸如通过施用sALP持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。例如，具有高达约6μM的PPi浓度的HPP患者((例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)在治疗期间可以用sALP治疗。同样，具有高达约1300ng/ml的PLP浓度的HPP患者在治疗期间可以用sALP治疗。
该方法引起来自患者的样品(例如，血浆样品)中的PPi和/或PLP浓度在统计学上显著降低。例如，用sALP治疗引起来自所述患者的样品(例如，血浆样品)中的PPi浓度相对于来自未治疗的HPP患者(例如，约18岁或以上的小儿发作型HPP受试者)的样品(例如，血浆样品)中的PPi浓度降低约1μM、约1.5μM、约2μM、约2.5μM或约3μM或25％或更多(例如，30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％，或60％以上)。因此，在施用sALP之后，患者表现出例如约2μM至约5μM、约3μM至约5μM、约2μM至约4μM，或约2μM至约3μM的血浆PPi浓度。
同样，用sALP治疗引起来自所述患者的样品(例如，血浆样品)中的PLP浓度相对于来自未治疗的HPP患者(例如，约18岁或以上的小儿发作型HPP受试者)的样品(例如，血浆样品)中的PLP浓度降低约100ng/ml、125ng/ml、150ng/ml、175ng/ml、200ng/ml、225ng/ml或250ng/ml或50％或更多(例如，55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或95％以上)。因此，在施用sALP之后，患者表现出例如约2ng/ml至约150ng/ml、约4ng/ml至约100ng/ml、约10ng/ml至约75ng/ml或约1ng/ml至约50ng/ml的血浆PLP浓度。
HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的血浆PPi和/或PLP浓度的降低可以在施用sALP的整个期间维持。例如，血浆PPi浓度降低约25％并且在用sALP治疗期间保持为降低的血浆PPi浓度的±10％和/或血浆PLP浓度降低约50％并且在用sALP治疗期间保持为降低的血浆PLP浓度的±10％。
可替代地，当施用sALP不会引起来自HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的血浆样品中的PPi浓度降低约25％或更多时，可以改变sALP施用的剂量和/或频率以便确定用于HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)的sALP的有效量。同样，当施用sALP不会引起来自患者的血浆样品中的PLP浓度降低约50％或更多时，可以改变sALP施用的剂量和/或频率以便确定用于HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的sALP的有效量。例如，sALP的剂量可以从例如约2.1mg/kg/周或约3.5mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或约9mg/kg/周。
六分钟步行测试(6MWT)
可以使用6MWT鉴定患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))进行治疗。具体而言，可以使用6MWT来评价患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的步行能力以生成成人或青少年的6MWT值。
6MWT可以在室内或室外使用具有坚硬表面的平坦、笔直的封闭走廊(例如，长度约30米)进行。可以使用秒表或其它计时器来跟踪时间，并且可以使用机械计数器或其它装置来测定HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)步行的距离(例如，以米计)。例如，走廊的长度可以每三米进行标记，以确定HPP患者步行的米数，其中30米处的折返点和起始线也有标记。然后可以将患者在六分钟内步行的距离与例如大约相同年龄、相同性别和/或相同身高的未治疗的受试者的预测步行米数进行比较，并表示为百分比值以生成患者的6MWT值。可以将患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的6MWT值与患者在基线时的6MWT值进行比较。另外，可以将患有HPP的成人或青少年的6MWT值与健康患者的6MWT值进行比较。
6MWT小于预测6MWT值的约80％的HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)可以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，诸如通过施用sALP持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。6MWT小于预测6MWT值的约80％(例如，预测6MWT值的约50％、约55％、约60％、约65％、约70％或约75％)的HPP患者可以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。
该方法可以引起HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的6MWT值的改善。例如，用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，诸如用sALP治疗持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)，可以引起6MWT值增加到患者的预测6MWT值的80％或更高(例如，预测6MWT值的约82％、约84％、约86％、约88％、约90％、约92％、约94％、约96％、约98％或更高)。
HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的6MWT值的增加可以在施用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的整个期间维持，例如持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。例如，6MWT值增加到高于患者的预测6MWT值的约80％，并且在用sALP(例如，asfotase alfa)治疗期间保持为增加的6MWT值的±10％。
同样，HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的步行能力的改善可以在施用sALP的整个期间维持，例如持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。例如，HPP患者在用sALP治疗期间表现出对辅助移动装置(诸如助行器、轮椅、背带、拐杖或矫形器)的依赖性降低。
可替代地，当施用sALP不会引起6MWT值增加到高于预测6MWT值(例如，大约相同年龄、相同性别和/或高度的患有HPP的未治疗的受试者的预测6MWT值)的80％时，可以改变sALP施用的剂量和/或频率以便确定用于HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的sALP的有效量。例如，sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的剂量可以从例如约2.1mg/kg/周或约3.5mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或约9mg/kg/周。
第2版布尼氏动作精熟度测试(BOT-2)
可以使用BOT-2奔跑速度和敏捷性以及BOT-2力量测试鉴定患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotasealfa))进行治疗。具体而言，BOT-2速度和敏捷性以及BOT-2力量测试可用于评价患有HPP的成人中的身体损伤和移动性限制，以生成该成人的总BOT-2速度和敏捷性评分和/或总BOT-2力量评分。
BOT-2包括一系列测试用于评价患有HPP的患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的身体损伤，这可以用例如包括所述测试的工具箱进行。BOT-2提供以下方面的综合BOT-2评分：力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和上肢协调。例如，患有HPP的成人或青少年可以进行仰卧起坐、两头起、立定跳远、背靠墙直角坐和/或俯卧撑以测定BOT-2力量评分；患有HPP的成人或青少年可以跨越平衡木和/或进行往返跑、双腿侧跳或单腿侧跳来测定BOT-2奔跑速度和敏捷性评分；患有HPP的成人或青少年可以剪出一个圆和/或连接点以测定BOT-2精细动作精度评分；患有HPP的成人或青少年可以临摹星形和/或临摹正方形以测定BOT-2精细动作整合评分；患有HPP的成人或青少年可以转移便士，将卡片分类和/或串接方块以测定手灵巧度评分；患有HPP的成人或青少年可以轻拍他或她的脚和手指和/或进行开合跳来测定BOT-2两侧协调评分；患有HPP的成人或青少年可以沿着一条线向前步行和/或在平衡木上单腿站立以测定BOT-2平衡评分；并且患有HPP的成人或青少年可以向目标掷球和/或接住抛的球以测定BOT-2上肢协调评分。BOT-2评分是评估的每个区域的加和。而且，用于评估患者身体精熟度的BOT-2评分可以是原始加和评分或标准评分。
患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)，或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)可以在一个或多个方面(力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和上肢协调)进行测试以生成指示成人或青少年的身体损伤的BOT-2评分。在每个BOT-2方面(力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和上肢协调)中，患有HPP的成人或青少年可以进行一项或多项测试以测定成人或青少年的BOT-2评分，例如，成人或青少年可以进行仰卧起坐、两头起、立定跳远、背靠墙直角坐和俯卧撑中的一项或多项以测定BOT-2力量评分。如果需要，可以只进行单次测试(例如，选自仰卧起坐、两头起、立定跳远、背靠墙直角坐和俯卧撑中的一项测试)以测定患有HPP的成人或青少年的BOT-2评分(例如，BOT-2力量评分)。
可以将患有HPP的患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的每项BOT-2评分(力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和上肢协调)与未患HPP的患者(例如，约18岁或以上的未患HPP的成人或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的BOT-2评分进行比较，以便例如测定BOT-2评分的标准偏差。可以将患有HPP的患者的每项BOT-2评分(例如，力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和上肢协调)与其他HPP患者(例如，大约相同年龄、身高和/或性别的HPP患者)的BOT-2评分进行比较，以便例如测定HPP患者的BOT-2评分。
BOT-2评分(例如，力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和上肢协调评分)的范围从约0到等于或小于约25，其中大于约10的评分被认为代表健康受试者(例如，未患HPP的患者)。具有小于约10的BOT-2评分(例如，力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和上肢协调评分)的患者可以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，诸如通过施用sALP持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。
例如，BOT-2奔跑速度和敏捷性评分小于10(例如，约0、约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10)的HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)可以用sALP(诸如TNALP，例如SEQID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。类似地，BOT-2力量评分小于12(例如，约0、约1、约2、约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9、约10、约11、约12、约13或约14)的HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)然后可以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。
该方法引起HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的BOT-2评分(例如，力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和/或上肢协调评分)的改善。例如，用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，诸如用sALP治疗持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)，可以引起BOT-2力量评分增加到约10至约20或更高(例如，约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24或约25)。另外，用sALP(诸如TNALP，例如SEQ IDNO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，诸如用sALP治疗持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)，可以引起BOT-2奔跑速度和敏捷性评分增加到约9至约20或更高(例如，约9、约10、约11、约12、约13、约14、约15、约16、约17、约18、约19、约20、约21、约22、约23、约24或约25)。
BOT-2评分(例如，力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和上肢协调评分)的增加可以在施用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的整个过程中维持，例如持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。同样，身体损伤的减少可以在施用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的整个过程中维持，例如持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。
HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的BOT-2评分(力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和/或上肢协调评分)可以单独或组合用于评估使用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的治疗功效，其中相对于某一测试评分的改善证明sALP对治疗与HPP相关的身体损伤有效。例如，当向HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)施用sALP引起BOT-2奔跑速度和敏捷性评分增加到约9或更高(其中所述患者先前具有小于约7的BOT-2奔跑速度和敏捷性评分)时，则认为sALP在例如治疗与HPP相关的身体损伤方面有效。可替代地，相比于治疗前的BOT-2奔跑速度和敏捷性评分增加至少两分或更多(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10分)指示有功效(例如，外加1年以上治疗的持续高分时)。
另外，在每个BOT-2方面(力量、奔跑速度和敏捷性、精细动作精度、精细动作整合、手灵巧度、两侧协调、平衡和上肢协调)中，HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)可以进行一项或多项测试以测定患者的BOT-2评分。例如，患有HPP的成人或青少年可以进行仰卧起坐、两头起、立定跳远、背靠墙直角坐和俯卧撑中的一项或多项以测定BOT-2力量评分并评估施用sALP的治疗功效。患有HPP的成人或青少年可以进行平衡木、往返跑、双腿侧跳和/或单腿侧跳中的一项或多项以测定BOT-2奔跑速度和敏捷性评分并评估施用sALP的治疗功效。患有HPP的成人或青少年可以剪出一个圆和/或连接点以测定BOT-2精细动作精度评分并评估施用sALP的治疗功效。患有HPP的成人或青少年可以临摹星形和/或临摹正方形以测定BOT-2精细动作整合评分并评估施用sALP的治疗功效。患有HPP的成人或青少年可以进行转移便士、卡片分类和/或串接方块中的一项或多项以测定BOT-2手灵巧度评分并评估施用sALP的治疗功效。患有HPP的成人或青少年可以轻拍他或她的脚和手指和/或进行开合跳来测定BOT-2两侧协调评分并评估施用sALP的治疗功效。患有HPP的成人或青少年可以沿着一条线向前步行和/或在平衡木上单腿站立以测定BOT-2平衡评分并评估施用sALP的治疗功效。患有HPP的成人或青少年可以向目标掷球和/或接住抛的球以测定BOT-2上肢协调评分并评估施用sALP的治疗功效。
可替代地，当施用sALP不会引起BOT-2奔跑速度和敏捷性评分增加到约9以上(例如，相比于用sALP治疗之前的BOT-2奔跑速度和敏捷性评分增加至少2至10分(例如，2、3、4、5、6、7、8、9或10分))时，可以改变sALP施用的剂量和/或频率以便确定用于HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的sALP的有效量。例如，sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的剂量可以从例如约2.1mg/kg/周或约3.5mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或增加至约9mg/kg/周。
手握式测力法(HHD)
HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的握力和肌肉力量可以使用手握式测力法(HHD)进行评估。例如，HPP患者的膝关节屈曲和伸展以及髋关节屈曲、伸展和外展可以使用例如MICROFET2TM测力计来测量，而HPP患者的握力可以使用例如
握力计来测量。具体而言，管理员保持测力计固定，并且患者对测力计施加最大的力。以磅为单位收集峰力数据，然后转换为牛顿(N)。然后使用肢长以N-米计算扭矩值。然后可以将扭矩值与例如大约相同年龄、相同性别和/或相同身高的正常受试者的扭矩值进行比较，并表示为百分比值以生成所述受试者的HHD评分。
HHD评分低于预测HHD评分的约80％(例如，相对于大约相同年龄、相同性别和/或相同身高的正常受试者)的HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)可以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))进行治疗。例如，HHD低于预测HHD评分的约80％的HPP患者可以用sALP治疗，持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。
该方法可以引起HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的HHD评分的改善。例如，用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，诸如用sALP治疗持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)，可以引起HHD评分增加了患者的预测HHD评分的5％或更高(例如，增加约5％、约10％、约15％、约20％、约25％、约30％、约35％、约40％、约45％或约50％)。
HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的HHD评分的增加可以在施用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的整个期间维持，例如持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或HPP患者终生；尤其是至少六周)。例如，HHD评分增加了预测HHD评分的约5％或更高，并且在用sALP治疗期间保持为增加的HHD评分的±10％。可替代地，当施用sALP不会引起HHD评分增加预测HHD评分的约5％或更高(例如，大约相同年龄、相同性别和/或高度的HPP患者)时，可以改变sALP施用的剂量和/或频率，以便确定用于HPP患者的sALP的有效量。例如，sALP的剂量可以从例如约2.1mg/kg/周或约3.5mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或约9mg/kg/周。
下肢功能量表(LEFS)
HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)加剧的下肢功能性伤残可以使用下肢功能量表(LEFS)进行评估。LEFS可用于评价HPP患者的单侧或双侧下肢的功能损伤，包括随时间推移监测患者以及评价asfotase alfa治疗的有效性的能力。有执照的物理治疗师可以以面谈形式向HPP患者(例如，约13岁或以上的HPP患者)施用LEFS。
LEFS评分低于约40(例如，LEFS评分为约10、约15、约20、约25、约30、约35或约40)的HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)可以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))进行治疗。例如，LEFS评分低于约40(例如，LEFS评分为约10、约15、约20、约25、约30、约35或约40)的HPP患者可以用sALP治疗，持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。
该方法可以引起HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的LEFS评分的改善。例如，用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，诸如用sALP治疗持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)，可以引起LEFS评分增加约3或更多(例如，约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10)。
HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的LEFS评分的增加可以在施用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的整个期间维持，例如持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或HPP患者终生；尤其是至少六周)。例如，LEFS评分可以增加约3或更多(例如，约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10)并且在用sALP治疗期间保持为增加的LEFS评分的±10％。可替代地，当施用sALP不会引起LEFS评分增加约3或更多(例如，约3、约4、约5、约6、约7、约8、约9或约10)时，可以改变sALP的剂量和/或频率以便确定用于HPP患者的sALP的有效量。例如，sALP的剂量可以从例如约2.1mg/kg/周或约3.5mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或约9mg/kg/周。
简明疼痛量表-简表(BPI-SF)
HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的疼痛可以使用简明疼痛量表-简表(BPI-SF)进行评估。BPI-SF是设计用于评估疼痛的严重程度和疼痛对日常功能的影响的问卷。BPI-SF由11项组成，这11项利用数字评定量表来评估问卷调查前24小时内的疼痛严重程度(4项)和疼痛干扰(7项)。BPI-SF问卷以0(无疼痛)至10(剧烈疼痛或疼痛引起的严重干扰)的数字评定量表提供了关于疼痛强度和疼痛干扰HPP患者(例如，约13岁或以上的HPP患者)日常功能的程度的信息；评分越低表明生活质量越好，并且疼痛减轻。例如，HPP青少年和成人的BPI-SF评分是11次疼痛评估的综合。
BPI-SF评分高于约10(例如，BPI-SF评分为约10、约15、约20、约25或约30或更高)的HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)可以用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))进行治疗。例如，BPI-SF评分高于约10(例如，BPI-SF评分为约10、约15、约20、约25或约30或更高)的HPP患者可以用sALP治疗，持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)。
该方法可以引起HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的BPI-SF评分的改善。例如，用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))治疗，诸如用sALP治疗持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周)，可以引起BPI-SF评分降低约-2或更多(例如，约-2、约-3、约-4、约-5、约-6、约-7或更多)。
HPP患者(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的BPI-SF评分的降低可以在施用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的整个期间维持，例如持续至少两周的治疗期(例如，至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或HPP患者终生；尤其是至少六周)。例如，BPI-SF评分降低约-2或更多(例如，约-2、约-3、约-4、约-5、约-6、约-7或更多)并且在用sALP治疗期间保持为降低的BPI-SF评分的±10％。
可替代地，当施用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ IDNO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))不会引起BPI-SF评分降低约-2或更多(例如，约-2、约-3、约-4、约-5、约-6或约-7或更多)时，可以改变sALP的剂量和/或频率以便确定用于HPP患者的sALP的有效量。例如，sALP的剂量可以从例如约2.1mg/kg/周或约3.5mg/kg/周增加至约6mg/kg/周或约9mg/kg/周。
碱性磷酸酶
asfotase alfa是配制用于治疗HPP的人TNALP(hTNALP；SEQ ID NO:1)融合多肽。具体而言，asfotase alfa(SEQ ID NO:1)可以有效地用于在患有HPP的成人((例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人，或约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)中治疗低磷酸酯酶症(HPP)、其症状和与之相关的身体损伤，持续很长一段时间(例如，至少六个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年、至少十年，或十年以上，诸如患者终生)。
鉴于本文描述的结果，治疗方法不限于施用特定碱性磷酸酶(ALP)或编码ALP的核酸序列。碱性磷酸酶涵盖一类催化磷酸部分的裂解(例如，焦磷酸盐PPi的水解)的酶。有四种已知的哺乳动物碱性磷酸酶(ALP)同工酶：非组织特异性碱性磷酸酶(TNALP；下文有进一步描述)、胎盘碱性磷酸酶(PLALP)(例如，登录号P05187、NP_112603和NP_001623)、生殖细胞碱性磷酸酶(GALP)(例如，登录号P10696)和肠碱性磷酸酶(IALP)(例如，登录号P09923和NP_001622)。除了上面讨论的示例性ALP之外，可以使用具有相同或相似的ALP催化位点结构和/或酶活性的任何多肽(例如，作为如本文所定义的sALP或sALP融合多肽)用于治疗HPP患者，诸如患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)。包含sALP的骨递送偶联物在国际公开号：WO 2005/103263和WO2008/138131中有进一步描述。
可根据本文描述的方法使用的TNALP包括例如人TNALP(登录号NP_000469、AAI10910、AAH90861、AAH66116、AAH21289和AAI26166)；恒河猴TNALP(登录号XP_01109717)；大鼠TNALP(登录号NP_037191)；狗TNALP(登录号AAF64516)；猪TNALP(登录号AAN64273)；小鼠(登录号NP_031457)；牛TNALP(登录号NP_789828、NP_776412、AAM 8209和AAC33858)和大鼠TNALP(登录号NP_001036028)。具体而言，TNALP可以是重组人TNALP(例如，SEQ ID NO:1，asfotase alfa；参见美国专利号7,763,712和7,960,529，其通过引用整体并入本文)，其用于治疗HPP患者，诸如患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)。TNALP也可以是与上述TNALP的多肽或核酸序列具有至少约95％序列同一性的TNALP。
可溶性碱性磷酸酶
可用于本文描述的方法中的ALP包括本文描述的任何碱性磷酸酶的可溶性(例如，细胞外或非膜结合)形式。sALP可以是，例如，人非组织特异性碱性磷酸酶(人TNALP(hTNALP))的可溶形式。该方法不限于特定sALP，并且可以包括对例如磷酸乙醇胺(PEA)、无机焦磷酸盐(PPi)和5'-磷酸吡哆醛(PLP)具有生理活性的任何sALP。具体而言，sALP是具有催化能力以改善骨中的骨骼矿化的sALP。所述方法还包括编码本文描述的sALP的核酸，所述sALP可用于治疗本文描述的病状，例如HPP，例如患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)。
TNALP是由C末端的糖脂部分锚定的膜结合蛋白(Swiss-Prot,P05186)。该糖脂锚(GPI)是翻译后在去除疏水性C-末端之后添加的，其用作临时膜锚和添加GPI的信号。虽然GPI锚位于细胞膜中，但TNALP的剩余部分是细胞外的。具体而言，可以工程改造TNALP(例如，人TNALP(hTNALP))以用终止密码子替换疏水性C-末端序列的第一个氨基酸(丙氨酸)，从而产生含有天然锚定形式的TNALP的所有氨基酸残基而缺乏GPI膜锚的工程改造的hTNALP。本领域的技术人员将认识到，GPI膜锚的位置将在不同的ALP中变化，并且可包括例如在多肽C-末端的最后10、12、14、16、18、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、32、34、36、38、40、45、50个或更多个氨基酸残基。重组sTNALP可包括例如氨基酸1至502(被分泌时为18至502)、氨基酸1至501(被分泌时为18至501)、氨基酸1至504(被分泌时为18至504)、氨基酸1至505(被分泌时为18-505)或氨基酸1至502。因此，天然ALP的C-末端可被某些氨基酸截短而不影响ALP活性。
除了C-末端GPI锚之外，TNALP还具有N-末端信号肽序列。N-末端信号肽在被合成时存在于合成的蛋白质上，但是在易位到ER中后从TNALP上裂解。sALP包括其分泌(即，缺少N-末端信号)和非分泌(即，具有N末端-信号)的形式。本领域的技术人员将认识到，N-末端信号肽的位置将在不同的碱性磷酸酶中变化，并且可包括例如在多肽N-末端的前5、8、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、27、30个或更多个氨基酸残基。本领域技术人员可以预测信号序列裂解位点的位置，例如通过适当的计算机算法，诸如Bendtsen等(J.Mol.Biol.340(4):783-795,2004)描述的且在www.cbs.dtu.dk/services/SignalP/网页上可用的计算机算法。
所述方法还可以使用源自ALP同工酶(例如，TNALP、PALP、GCALP、IALP等)的细胞外结构域的sALP共有序列进行。因此，类似于上文讨论的sTNALP，本公开还提供了其它可溶性人ALP同工酶，即没有肽信号，优选包含ALP的细胞外结构域。sALP还包括满足源自人ALP同工酶和哺乳动物TNALP直系同源物(人、小鼠、大鼠、牛、猫和狗)的ALP细胞外结构域的共有序列或源自仅仅是哺乳动物TNALP直系同源物(人、小鼠、大鼠、牛、猫和狗)的ALP细胞外结构域的共有序列的多肽序列。sALP还包括满足源自这些TNALP直系同源物或人ALP同工酶的各种组合的类似共有序列的那些。此类共有序列例如在WO 2008/138131中给出。
本方法的sALP不但可以包括上述sALP的野生型序列，而且可以包括与这些碱性磷酸酶(例如，SEQ ID NO:1-24；例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))具有至少50％(例如，55％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性的任何多肽。可以引入ALP序列中的突变的实例在美国公开号2013/0323244中有描述，其特此通过引用整体并入。sALP可任选地在任何一个或多个适当的氨基酸残基处被糖基化。另外，sALP可以与本文描述的任何sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))具有至少50％(例如，55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性。相对于本文描述的任何sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))，sALP可以具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10个或更多个添加、缺失或取代。
sALP融合多肽
本文描述的任何sALP和接头都可以组合成sALP多肽，例如A-sALP-B的sALP多肽，其中A和B各自不存在或是至少一个氨基酸的氨基酸序列(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotasealfa))。当存在时，A和/或B可以是本文描述的任何接头。在一些sALP多肽中，A不存在，B不存在，或A和B均不存在。如本文所述，本发明的sALP多肽可任选地包含Fc区以提供sALP融合多肽。如本文所述，sALP多肽可任选地包含骨靶向部分。在一些sALP多肽中，可以在骨靶向部分和sALP(诸如二肽序列(例如，亮氨酸-赖氨酸或天冬氨酸-异亮氨酸))之间包括接头(例如，柔性接头)。下面描述了其它示例性Fc区、接头和骨靶向部分。
本文描述的任何sALP、接头和Fc区都可以组合成包括结构Z-sALP-Y-间隔区-X-Wn-V、Z-Wn-X-间隔区-Y-sALP-V、Z-sALP-Y-Wn-X-间隔区-V和Z-Wn-X-sALP-Y-间隔区-V的融合多肽，例如重组融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))。具体而言，所述结构可以是Z-sALP-Y-间隔区-X-Wn-V或Z-Wn-X-间隔区-Y-sALP-V。sALP可以是ALP的全长或功能片段，诸如ALP的可溶性、细胞外结构域，如本文所述(例如，TNALP、PALP、GCALP和IALP)。X、Y、Z和V中的任何一个和/或间隔区可以不存在或者是至少一个氨基酸的氨基酸序列。Wn可以是骨靶向部分，例如，具有一系列连续的Asp或Glu残基，其中n＝1至50，例如，n＝3-30，例如5-15，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、36、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49或50。如果存在，骨靶向部分可以位于融合多肽中的任何位置，例如在N-末端或C-末端处或附近，和/或在接头区中。例如，骨靶向部分位于C-末端。sALP多肽和融合多肽也可以不包含骨靶向部分。
本发明的sALP融合多肽可具有结构hTNALP-Fc-D10。具体而言，sALP融合多肽可包括SEQ ID NO:1的氨基酸序列或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa)。
有用的间隔区包括但不限于包含Fc的多肽，以及能够缓和因末端高度带负电的肽(例如，Wn)的存在而引起的排斥力的亲水性柔性多肽。例如，sALP可以是在N-末端或C-末端结构域处包含免疫球蛋白的Fc区的融合多肽。免疫球蛋白分子具有本领域熟知的结构。它包括通过链间二硫键连接的两条轻链(每条约23kD)和两条重链(每条约50-70kD)。免疫球蛋白易于蛋白水解裂解(例如，通过木瓜蛋白酶裂解)成Fab(含有轻链及重链的VH和CH1结构域)和Fc(含有重链的CH2和CH3结构域，以及相邻序列)。如本文所描述的有用的Fc片段包括任何免疫球蛋白分子的Fc片段，所述免疫球蛋白分子包括来自任何哺乳动物(例如人)的IgG、IgM、IgA、IgD或IgE，及其各种亚类(例如，IgG-1、IgG-2、IgG-3、IgG-4、IgA-1、IgA-2)。例如，Fc片段是人IgG-1。本发明的Fc片段可包括，例如，重链的CH2和CH3结构域以及铰链区的任何部分。Fc区可任选地在本领域技术人员已知的任何一个或多个适当的氨基酸残基处糖基化。具体而言，融合多肽的Fc片段具有SEQ ID NO:20的氨基酸序列，或与SEQ ID NO:20具有至少50％(例如，55％、60％、65％、70％、75％、80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或更高)的序列同一性。工程化改造的，例如非天然存在的Fc区可以用于本发明的方法中，例如，如国际申请公布号WO2005/007809中所述，其特此通过引用并入。如本文所描述的Fc片段相对于本文描述的任何Fc片段可具有1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、25、30、35、40、50个或更多个添加、缺失或取代。
本文描述的sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ IDNO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))可包括介于Fc片段之间的肽接头区。另外，可以在Fc片段和任选的骨靶向部分之间包括肽接头区。接头区可具有允许sALP保持生物活性(例如，不受空间位阻)的任何序列和长度。示例性接头长度为1至200个氨基酸残基，例如1-5、6-10、11-15、16-20、21-25、26-30、31-35、36-40、41-45、46-50、51-55、56-60、61-65、66-70、71-75、76-80、81-85、86-90、91-95、96-100、101-110、111-120、121-130、131-140、141-150、151-160、161-170、171-180、181-190或191-200个氨基酸残基。例如，接头包括柔性部分或由柔性部分组成，柔性部分例如无显著固定的二级或三级结构的区域。示例性柔性接头是富甘氨酸接头，例如含有至少50％、60％、65％、70％、75％、80％、85％、90％、95％或甚至100％的甘氨酸残基。接头也可以含有例如丝氨酸残基。在一些情况下，接头的氨基酸序列仅由甘氨酸和丝氨酸残基组成。接头可任选地在任何一个或多个适当的氨基酸残基处被糖基化。另外，如本文所描述的接头可包含共价或非共价连接的任何其它序列或部分。也可以不存在接头，其中Fc片段和sALP直接融合在一起，没有中间残基。根据本公开，可以将某些Fc-sALP或sALP-Fc融合多肽视为1)没有接头，或2)具有与sALP的一部分对应的接头。例如，可以将直接与hsTNALP(1-502)融合的Fc视为没有接头，其中hsTNALP是氨基酸1-502，或者视为具有17个氨基酸的接头，其中hsTNALP(18-502)。
根据用于产生融合多肽的克隆策略，可以将另外的氨基酸残基引入多肽中。例如，另外的氨基酸残基不提供另外的GPI锚定信号，以便将多肽保持为可溶形式。此外，任何此类另外的氨基酸残基，当被并入本发明的多肽中时，不为宿主细胞的内切蛋白酶提供裂解位点。设计的序列被宿主细胞的内切蛋白酶裂解的可能性可以如Ikezawa所描述的那样进行预测(Biol.Pharm.Bull.25:409-417,2002)。
本发明的sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))可以缔合成二聚体或四聚体。例如，两个sALP-Fc单体可以通过位于Fc片段的铰链区中的两个二硫键共价连接。另外，本发明的多肽或融合多肽(例如，sALP多肽或融合多肽)可以经糖基化或PEG化。
核酸和多肽的产生
编码sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的核酸可以通过本领域已知的任何方法生产。通常，编码所需融合多肽的核酸是使用分子克隆方法产生的，并且通常置于载体，诸如质粒或病毒中。载体用于将核酸转化到适于融合多肽表达的宿主细胞中。例如，在Maniatis等(Cold Springs Harbor Laboratory,1989)中公开了代表性方法。许多细胞类型可以用作适当的宿主细胞，但优选哺乳动物细胞，因为它们能够赋予适当的翻译后修饰。宿主细胞可包括，例如中国仓鼠卵巢(CHO)细胞、L细胞、C127细胞、3T3细胞、BHK细胞、COS-7细胞或本领域已知的任何其它合适的宿主细胞。例如，宿主细胞是中国仓鼠卵巢(CHO)细胞(例如，CHO-DG44细胞)。
sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQ IDNO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))可以在适于实现sALP多肽在宿主细胞中的表达的任何条件下产生。此类条件包括适当选择用缓冲剂、碳酸氢盐和/或HEPES等组分，如氯、磷酸根、钙、钠、钾、镁、铁等离子，如单糖、氨基酸、潜在脂质、核苷酸、维生素等碳源和如胰岛素等生长因子制备的培养基；常规的市售培养基如α-MEM、DMEM、Ham's-F12和补充有2-4mM L-谷氨酰胺和5％胎牛血清的IMDM；常规的市售无动物蛋白质的培养基，如补充2-4mM L-谷氨酰胺的HycloneTMSFM4CHO、Sigma CHO DHFR-、CambrexPOWERTMCHO CD。理想地制备这些培养基而不含胸苷、次黄嘌呤和L-甘氨酸以保持选择压力，从而允许稳定的蛋白质-产物表达。
药物组合物和配制物
可用于本文描述的方法中的组合物(例如，包含sALP或sALP融合多肽，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))可以通过本领域已知的多种方法施用。如本领域技术人员所认识到的，施用途径和/或模式将根据所需结果而变化。施用途径可取决于多种因素，诸如环境和治疗目的。具体而言，本文描述的多肽和融合多肽可以通过本领域已知的任何途径施用，例如皮下(例如，通过皮下注射)、静脉内、口服、经鼻、肌肉内、舌下、鞘内或皮内。举例来说，可用于本文描述的方法中的药物组合物可以是液体、溶液、混悬液、丸剂、胶囊、片剂、囊形片、粉剂、凝胶、软膏、乳膏、喷雾剂、雾剂、雾化蒸气、气溶胶或磷脂复合物(phytosome)的形式。
剂量
可以向患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)施用任何量的药物组合物(例如，包含sALP或sALP融合多肽，诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))。剂量将取决于许多因素，包括施用模式和患者的年龄。可以按范围为例如0.01mg/kg至500mg/kg患者(例如，0.05mg/kg至500mg/kg，0.1mg/kg至20mg/kg，5mg/kg至500mg/kg，0.1mg/kg至100mg/kg，10mg/kg至100mg/kg，0.1mg/kg至50mg/kg，0.5mg/kg至25mg/kg，1.0mg/kg至10mg/kg，1.5mg/kg至5mg/kg，或2.0mg/kg至3.0mg/kg)或为1μg/kg至1,000μg/kg(例如，5μg/kg至1,000μg/kg，1μg/kg至750μg/kg，5μg/kg至750μg/kg，10μg/kg至750μg/kg，1μg/kg至500μg/kg，5μg/kg至500μg/kg，10μg/kg至500μg/kg，1μg/kg至100μg/kg，5μg/kg至100μg/kg，10μg/kg至100μg/kg，1μg/kg至50μg/kg，5μg/kg至50μg/kg或10μg/kg至50μg/kg患者)的个别剂量将本文描述的sALP多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ IDNO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))施用给HPP患者，诸如患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)。
sALP的示例性剂量包括例如0.01、0.05、0.1、0.5、1、2、2.5、5、10、20、25、50、100、125、150、200、250或500mg/kg；或1、2、2.5、5、10、20、25、50、100、125、150、200、250、500、750、900或1,000μg/kg。具体而言，根据本公开的组合物(例如，包含sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa)))，可以按范围为约0.001mg/kg/天至约500mg/kg/天、约0.01mg/kg/天至约100mg/kg/天、或约0.01mg/kg/天至约20mg/kg/天的剂量施用给患者。例如，sALP组合物(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))可以按范围为例如约0.5mg/kg/周至约140mg/kg/周，例如约0.8mg/kg/周至约50mg/kg/周，或约1mg/kg/至约10mg/kg/周(例如，约6或约9mg/kg/周)的周剂量施用给患者。具体而言，可以按2mg/kg每周三次(总剂量6mg/kg/周)、1mg/kg每周一次(总剂量6mg/kg/周)、3mg/kg每周三次(总剂量9mg/kg/周)、0.5mg/kg每周三次(总剂量1.5mg/kg/周)或9.3mg/kg每周三次(总剂量28mg/kg/周)的剂量施用sALP(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))。临床医生将根据常规因素，诸如疾病的程度和来自HPP患者，诸如患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的不同参数调整剂量。
包含sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ IDNO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的组合物的剂量可以单剂量或多剂量方案提供。可以例如每小时一次、每两小时一次、每天一次、每两天一次、每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次、每周一次、每两周一次、每月一次、每两月一次或每年一次施用剂量。可替代地，可以例如每天两次、三次、四次、五次、六次、七次、八次、九次、10次、11次或12次施用剂量。具体而言，给药方案是每周一次。给药方案的持续时间可以是例如1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29或30天、数周或数月，或甚至是HPP患者，诸如患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的剩余寿命。临床医生将根据常规因素，诸如疾病的程度和来自HPP患者，诸如患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)的不同参数调整剂量的量、频率和持续时间。
例如，可以将sALP或sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))配制成注射液，该注射液是一种透明、无色至浅黄色的水溶液，pH 7.4。可以将sALP或sALP多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))配制成12mg/0.3mL、18mg/0.45mL、28mg/0.7mL、40mg/1ml或80mg/0.8mL的浓度。具体而言，该组合物可以配制成40mg/ml注射液，其中每ml溶液含有40mg的sALP或sALP多肽(例如，每个小瓶含有0.3ml溶液和12mg的sALP(40mg/ml)，每个小瓶含有0.45ml溶液和18mg的sALP(40mg/ml)，每个小瓶含有0.7ml溶液和28mg的sALP(40mg/ml)，或每个小瓶含有1.0ml溶液和40mg的asfotase alfa(40mg/ml))。可以将sALP和sALP多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))配制成浓度为100mg/ml的注射液，其中每1ml溶液含有100mg的sALP或sALP多肽(例如，每个小瓶含有0.8ml溶液和80mg的asfotase alfa(100mg/ml))。注射在患者体内的sALP的体积可以是例如0.15ml、0.18ml、0.20ml、0.23ml、0.25ml、0.28ml、0.30ml、0.33ml、0.35ml、0.38ml、0.40ml、0.43ml、0.45ml、0.48ml、0.50ml、0.63ml、0.75ml、0.88ml或1.00ml。
例如，sALP或sALP融合多肽((诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa)的推荐剂量是每周三次皮下施用2mg/kg体重，或者是每周六次皮下施用1mg/kg体重的剂量方案。下面提供了其它剂量信息(表1)。具体而言，施用剂量为6mg/kg/周的40kg患者将接受每周注射三次0.8ml中的80mg的sALP或每周注射六次1.00ml中的40mg的sALP，而施用剂量为6mg/kg/周的50kg患者将接受每周注射六次0.05ml中的50mg的sALP。
表1.ASFOTASE ALFA的给药
配制物
包含sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ IDNO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的组合物可以根据标准方法配制。药物配制物是一种完善的技术，并且在例如Gennaro(2000)Remington:The Science and Practice of Pharmacy，第20版，Lippincott,Williams&Wilkins(ISBN:0683306472)；Ansel等(1999)Pharmaceutical Dosage Forms and Drug DeliverySystems，第7版，Lippincott Williams&Wilkins Publishers(ISBN:0683305727)；和Kibbe(2000)Handbook of Pharmaceutical Excipients American PharmaceuticalAssociation，第3版(ISBN:091733096X)中有进一步描述。例如，可以将sALP组合物(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))配制成例如合适浓度的且适于储存在2-8℃(例如，4℃)下的缓冲溶液。还可以配制组合物用于在低于0℃(例如，-20℃或-80℃)的温度下储存。可以进一步配制组合物用于在2-8℃(例如，4℃)下储存长达2年(例如，一个月、两个月、三个月、四个月、五个月、六个月、七个月、八个月、九个月、10个月、11个月、1个年、11/2年或2年)。因此，本文描述的组合物可以在2-8℃(例如，4℃)下稳定储存至少1年。
包含sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ IDNO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的组合物可以呈多种形式。这些形式包括例如液体、半固体和固体剂型，诸如液体溶液(例如注射液和输注液)、分散体或混悬液、片剂、丸剂、粉剂、脂质体和栓剂。优选形式部分取决于预期施用模式和治疗应用。
例如，预期用于全身或局部递送的组合物可以是可注射或可输注溶液的形式。因此，可以将组合物(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ ID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))配制成通过肠胃外途径(例如，皮下、静脉内、腹膜内或肌肉内注射)进行施用。
包含sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP融合多肽或与SEQID NO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的组合物可以配制成溶液、微乳液、分散体、脂质体或适于在高浓度下稳定储存的其它有序结构。无菌注射液可以通过将本文描述的组合物以所需的量掺入根据需要含有上面列举的成分中的一种或组合的适当溶剂中，然后过滤灭菌来制备。通常，通过将本文描述的组合物掺入无菌媒介物中来制备分散体，所述无菌媒介物含有基础分散介质和来自上面列举的那些的其它所需成分。在用于制备无菌注射液的无菌粉末的情况下，制备方法包括真空干燥和冷冻干燥，其产生本文描述的组合物加上来自其先前无菌过滤溶液的任何其它所需成分的粉剂(参见下文)。可以例如通过使用包衣(诸如卵磷脂)，在分散体的情况下通过保持所需粒度以及通过使用表面活性剂来保持溶液的适当流动性。通过在组合物中包括延迟吸收的试剂，例如单硬脂酸盐和明胶，可以实现可注射组合物的延长吸收。
本文描述的组合物还可以配制成免疫脂质体组合物。此类配制物可以通过本领域已知的方法制备，诸如Epstein等(1985)Proc Natl Acad Sci USA 82:3688；Hwang等(1980)Proc Natl Acad Sci USA77:4030；和美国专利号4,485,045和4,544,545中描述的方法。在例如美国专利号5,013,556中公开了循环时间增加的脂质体。
包含sALP和sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ IDNO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的组合物也可以用载体配制，所述载体将保护组合物(例如，sALP多肽或sALP融合多肽)免于快速释放，诸如控释配制物，包括植入物和微囊化递送***。可以使用生物可降解的、生物相容性聚合物，诸如乙烯乙酸乙烯酯、聚酸酐、聚乙醇酸、胶原、聚原酸酯和聚乳酸。用于制备此类配制物的许多方法是本领域已知的。参见，例如J.R.Robinson(1978)Sustained and ControlledRelease Drug Delivery Systems,Marcel Dekker,Inc.,New York。
当组合物要与第二活性剂组合使用时，所述组合物可与第二剂共同配制，或者所述组合物可与第二剂配制物分开配制。例如，各种药物组合物可以混合，例如，就在施用之前混合，并一起施用或者可以分开施用，例如在相同或不同时间施用。
载体/媒介物
含有sALP或sALP融合多肽(诸如TNALP，例如SEQ ID NO:1的sALP多肽或与SEQ IDNO:1的序列具有至少95％序列同一性的多肽变体(例如，asfotase alfa))的制剂可以与药学上可接受的水性或非水性溶剂、混悬液或乳液组合提供给HPP患者，诸如患有HPP的成人(例如，约18岁或以上的患有HPP的成人，诸如患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年(例如，约13岁至约17岁的患有HPP的青少年)。非水性溶剂的实例是丙二醇、聚乙二醇、植物油、鱼油以及可注射有机酯。水性载体包括水、水-醇溶液、乳液或混悬液，包括盐水和缓冲的医学胃肠外媒介物，包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖溶液(Ringer's dextrosesolution)、葡萄糖加氯化钠溶液、含乳糖的林格氏溶液或不挥发性油。例如，药学上可接受的载体可包括氯化钠和/或磷酸钠，其中所述组合物包括例如约150mM氯化钠和/或约25mM磷酸钠，pH 7.4。
静脉内媒介物可包括流体和营养补充剂、电解质补充剂，诸如基于林格氏葡萄糖的补充剂，等等。其中可以包括药学上可接受的盐，例如，无机酸盐诸如盐酸盐、氢溴酸盐、磷酸盐、硫酸盐等；和有机酸的盐诸如乙酸盐、丙酸盐、丙二酸盐、苯甲酸盐等。另外，此类媒介物中可以存在诸如润湿剂或乳化剂、pH缓冲物质等辅助物质。在Remington'sPharmaceutical Sciences(Mack Pub.Co.,N.J.1991)中提供了药学上可接受的载体的详尽讨论。
以下实施例旨在说明而不是限制本公开。这些研究的特征是向患有HPP的成人(诸如约18岁或以上的患有小儿发作型HPP的成人)或患有HPP的青少年施用asfotase alfa(SEQ ID NO:1)，施用asfotase alfa之后对这些患者中的HPP症状的分析，以及长期与之相关的身体损伤。
实施例1.用Asfotase Alfa治疗小儿发作型低磷酸酯酶症(HPP)患者
约12岁至约66岁的患有低磷酸酯酶症(HPP)的青少年和成人参与研究以测定用可溶性碱性磷酸酶(sALP)(asfotase alfa；SEQ ID NO:1)治疗的功效、安全性和耐受性。对12名约18岁至约66岁的患有小儿发作型低磷酸酯酶症(HPP)的成人进行了亚群分析，以研究用asfotase alfa治疗的生物化学和功能改善。在6个月的初始阶段研究期间，9名患有的HPP成人接受用asfotase alfa治疗(治疗组)，3名患有HPP的成人未接受用asfotase alfa治疗(对照组)。对照组中HPP症状发作的中值年龄为3岁，最小为0.8岁，最大为4岁，而治疗组中HPP症状发作的中值年龄为2岁，最小为0.1岁，最大为4岁(表2，对于所有结果而言合并了剂量治疗组(2.1mg/kg/周和3.5mg/kg/周))。除非另有说明)，否则将数据表示为中值(最小值，最大值)。总共2名对照成人为女性(67％)，7名受治疗的成人为女性(78％)。
表2.用asfotase alfa治疗前小儿发作型HPP患者的基线特征。
选择用asfotase alfa治疗的HPP患者的血清ALP低于经年龄调整的正常范围，血浆5'-磷酸吡哆醇(PLP)浓度至少是正常上限的两倍，并且在骨骼X射线照片和/或骨活检中具有骨质减少或骨软化的迹象。因血清钙或磷酸盐水平低于正常范围，血清维生素D水平低于20ng/mL，血清肌酐或甲状旁腺激素水平高于正常上限，或者可严重干扰患者对研究方案的依从性的医疗状况或其它情有可原的情况而将患者从研究中排除。
在用asfotase alfa治疗6个月的初始阶段，经由皮下施用，4名成人接受剂量为0.3mg/kg/天(2.1mg/kg/周)的asfotase alfa和5名成人接受剂量为0.5mg/kg/天(3.5mg/kg/周)的asfotase alfa。初始对照组中的3名患者未接受asfotase alfa治疗。在初始阶段研究后，治疗组和对照组患者(总共12名患者)接受用asfotase alfa治疗。asfotase alfa经由皮下施用以0.5mg/kg/天(3.5mg/kg/周)的初始剂量施用，初始剂量在1年后增加到1mg/kg/天，经由皮下施用，每天一次，持续6天(6mg/kg/周)。在延长阶段的剩余时间内，asfotase alfa的剂量保持在6mg/kg/周。
在延长阶段期间用于评估asfotase alfa对HPP小儿发作型成人的治疗的量度包括：1)用于评估ALP活性的患者血浆样品中无机焦磷酸盐(PPi)和5'-磷酸吡哆醛(PLP)浓度的变化；2)用于评估步行能力的六分钟步行测试(6MWT)值；3)用于评估身体功能的第2版布尼氏动作精熟度测试(BOT-2)评分。
实施例2.施用asfotase alfa后血浆无机焦磷酸盐(PPi)和5'-磷酸吡哆醛(PLP)浓度在统计学上显著的中值降低
通过定量ALP底物PPi和PLP的浓度来评估从HPP成人收集的血浆样品中的ALP活性，如Whyte等，1995(J.Clin.Invest.95(4):1440-1445)所述，其特此通过引用整体并入。来自对照成人和用asfotase alfa治疗的成人的血浆样品中的PPi和PLP中值浓度在基线时相比于正常范围升高(表3)。类似地，与经年龄和性别调整的正常下限(LLN)ALP活性值(对于18岁至50岁以下而言为31U/L或对于50岁至70岁以下而言为35U/L)相比，对照组(21.0U/L)和治疗组(18.0U/L)的ALP活性值相对较低。
表3.患有小儿发作型HPP的成人在用asfotase alfa治疗之前的碱性磷酸酶(ALP)活性及血浆无机焦磷酸盐(PPi)和5'-磷酸吡哆醛(PLP)浓度的测量。除非另有说明，否则将所有数据都表示为中值(最小值，最大值)。a将初始治疗组合并用于分析。b将对照和治疗成人合并，因为所有成人在延长阶段都接受治疗。LLN，正常下限。
血浆PPi中值浓度对于对照组而言在基线时为5.9μM(最小血浆PPi浓度为5.2μM；最大血浆PPi浓度为6.6μM)，并且对于治疗组而言在基线时为5.5μM(最小血浆PPi浓度为2.2μM；最大血浆PPi浓度为8.2μM)(表3)。用asfotase alfa治疗6个月后血浆PPi浓度降低，正如对于用asfotase alfa治疗的患者而言相比于基线在统计学上显著的中值变化为-3.0所示，相比而言未治疗的对照组变化为-0.3(图1A)。基于比较治疗组与对照组的精确威尔科克森秩和检验(exact Wilcoxon rank sum test)，PPi浓度相比于基线的中值变化的P值为0.0364。对于两个不同剂量组而言用asfotase alfa治疗6个月后对血浆PPi浓度的分析显示，对于用0.3mg/kg/天的asfotase alfa治疗的患者而言相比于基线的中值变化为-2.870，而对于用0.5mg/kg/天的asfotase alfa治疗的患者而言为-2.990(表4，基于比较每个治疗组与对照组的精确威尔科克森秩和检验的P值；估计值和精确置信区间来自Hodges-Lehmann-Sen方法中治疗组与对照组之间分布的位置偏移)。
表4.患有小儿发作型HPP的成人在用asfotase alfa治疗6个月后对PPi浓度的统计分析
血浆PLP中值浓度对于对照组而言在基线时为199.0ng/ml(最小血浆PLP浓度为196.0ng/ml；最大血浆PLP浓度为474.0ng/ml)，对于治疗组而言在基线时为267.0ng/ml(最小血浆PLP浓度为28.8ng/ml；最大血浆PLP浓度为1270.0ng/ml)(表3)。用asfotase alfa治疗6个月后血浆PLP浓度降低，正如对于用asfotase alfa治疗的患者而言相比于基线在统计学上显著的中值变化为-254.5所示，相比而言对照组变化为140.0(图1B)。基于比较治疗组与对照组的精确威尔科克森秩和检验(exact Wilcoxon rank sum test)，PLP浓度相比于基线的中值变化的P值为0.0364。对于两个不同剂量组而言用asfotase alfa治疗6个月后对血浆PLP浓度的分析显示，对于用0.3mg/kg/天的asfotase alfa治疗的患者而言相比于基线的中值变化为-298.60，而对于用0.5mg/kg/天的asfotase alfa治疗的患者而言为-254.50(表5；基于比较每个治疗组与对照组的精确威尔科克森秩和检验的P值，估计值和精确置信区间来自Hodges-Lehmann-Sen方法中治疗组与对照组之间分布的位置偏移)。
表5.患有小儿发作型HPP的成人在用asfotase alfa治疗6个月后的PLP浓度的统计分析
a基于比较每个治疗组与对照组的精确威尔科克森秩和检验的P值b估计值和精确置信区间来自Hodges-Lehmann-Sen方法中治疗组与对照组之间分布的位置偏移。
对于所有后续测量，在每个相应的时间点(asfotase alfa治疗6个月、1年、2年、3年、4年、5年和6年)将治疗组和对照组的血浆PPi和PLP浓度合并，因为对照组在6个月的初始阶段后接受用asfotase alfa治疗。在用asfotase alfa治疗的整个延长阶段中，血浆PPi浓度的降低维持(图2)。在用asfotase alfa治疗6个月后，血浆PPi中值浓度从5.53μM(最小血浆PPi浓度为2.15μM；最大血浆PPi浓度为8.20μM)降低到3.30μM(最小血浆PPi浓度为0.75μM；最大血浆PPi浓度为5.02μM)。在1年时PPi中值浓度为3.74μM(最小血浆PPi浓度为1.62μM；最大血浆PPi浓度为5.40μM)；在2年时PPi中值浓度为2.49μM(最小血浆PPi浓度为1.32μM；最大血浆PPi浓度为10.90μM)；在3年时PPi中值浓度为2.09μM(最小血浆PPi浓度为1.24μM；最大血浆PPi浓度为2.94μM)；在4年时PPi中值浓度为2.49μM(最小血浆PPi浓度为1.09μM；最大血浆PPi浓度为4.52μM)；在5年时PPi中值浓度为2.2μM(最小血浆PPi浓度为0.92μM；最大血浆PPi浓度为5.36μM)；并且在5年时PPi中值浓度为2.60μM(最小血浆PPi浓度为1.95μM；最大血浆PPi浓度为4.84μM)。样本量为6个月时9名HPP小儿发作型成人，1年至5年时12名HPP小儿发作型成人和6年时3名HPP小儿发作型成人。
同样，在用asfotase alfa治疗的整个延长阶段中，血浆PLP浓度的降低维持(图3)。在用asfotase alfa治疗6个月后，血浆PLP中值浓度从267.0ng/ml(最小血浆PLP浓度为28.8ng/ml；最大血浆PLP浓度为1270.0ng/ml)降低到21.6ng/ml(最小血浆PLP浓度为2.5ng/ml；最大血浆浓度为141.0ng/ml)。在1年时PLP中值浓度为65.1ng/ml(最小血浆PLP浓度为15.9ng/ml；最大血浆PLP浓度为367.0ng/ml)；在2年时PLP中值浓度为20.1ng/m(最小血浆PLP浓度为2.7ng/ml；最大血浆PLP浓度为45.7ng/ml)；在3年时PLP中值浓度为14.0ng/ml(最小血浆PLP浓度为2.5ng/ml；最大血浆PLP浓度为36.2ng/ml)；在4年时PLP中值浓度为12.0ng/ml(最小血浆PLP浓度为2.5ng/ml；最大血浆PLP浓度为38.4ng/ml)；在5年时PLP中值浓度为7.8ng/ml(最小血浆PLP浓度为2.5ng/ml；最大血浆PLP浓度为29.5ng/ml)；并且在6年时PLP中值浓度为6.0ng/ml(最小血浆PLP浓度为4.7ng/ml；最大血浆PLP浓度为15.1ng/ml)。样本量为6个月和1年时9名HPP小儿发作型成人，2年至5年时12名HPP小儿发作型成人和六年时3名HPP小儿发作型成人。
实施例3.用六分钟步行测试(6MWT)评估的小儿发作型HPP成年患者的身体功能和步行能力的改善
用六分钟步行测试(6MWT)评估HPP小儿发作型患者的身体功能和步行能力。用asfotase alfa治疗的患者在6分钟内的平均步行距离从基线时的315.0米(最小距离为223.0，最大距离为540.0)提高至在用asfotase alfa治疗1年后在6分钟内的平均步行距离为421.5米(最小距离为204.0，最大距离为640.0)。相比之下，未治疗的对照组在6分钟内的平均步行距离未从基线时的401.0米(最小距离为6.0，最大距离为440.0)提高至在用asfotase alfa治疗6年后在6分钟内的平均步行距离为355.0米(最小距离为13.0，最大距离为420.0)。
用asfotase alfa治疗1年后相比于基线的平均变化是在6分钟内步行88.0米的距离，而未经治疗6个月后对照组相比于基线的中值变化是在6分钟内步行-20.0米(表6)。这一变化包括对照组中在基线时无法步行整6分钟的3名患者。治疗组在6MWT中相比于基线的平均变化为17.6％，用asfotase alfa治疗1年后从基线时预测6MWT值的62.8％(最小预测6MWT值为42.4％，最大预测6MWT值为101.3％)增加到预测6MWT值的85.0％(最小预测6MWT值为31.1％，最大预测6MWT值为121.3％)。相比之下，未治疗的对照组在6MWT中相比于基线的平均变化为-6.2，用asfotase alfa治疗1年后从基线时预测6MWT值的85.8％(最小预测6MWT值为79.1％，最大预测6MWT值为92.4％)降低到预测6MWT值的79.6％(最小预测6MWT值为70.4％，最大预测6MWT值为88.7％)。另外，对照和asfotase alfa治疗的小儿发作型HPP患者之间在6个月时的百分比预测6MWT值相比于基线的变化具有统计学意义(p＝0.04)。因此，用asfotase治疗1年后的HPP患者在步行能力方面表现出统计学上显著的改善，而对照组患者的步行能力减退或没有改善。
表6.患有小儿发作型HPP的成人在用asfotase alfa治疗6个月后的六分钟步行距离
an＝12，具有1年时的数据。bn＝10，具有1年时的数据和n＝9，具有针对相比于基线的变化的数据。
对于基线后的6MWT值，在每个相应的时间点(asfotase alfa治疗1年、2年、3年、4年、5年和6年)将治疗组和对照组的6MWT值合并，因为对照组在6个月的初始阶段后接受用asfotase alfa治疗。6MWT的变化表示用asfotase alfa治疗6个月后从基线时预测6MWT值的62.9％(最小预测6MWT值为42.4％，最大预测6MWT值为101.3％；n＝8)增加到预测6MWT值的80.8％(最小预测6MWT值为46.0％，最大预测6MWT值为109.0％；n＝8)(图4)。在用asfotase alfa治疗的整个过程中6MWT值的增加维持在用asfotase alfa治疗1年后预测6MWT值的85％(最小预测6MWT值为31.1％；最大预测6MWT值为121.3％；n＝10)；2年后为预测6MWT值的91.8％(最小预测6MWT值为63.3％；最大预测6MWT值为120.8％；n＝9)；3年后为预测6MWT值的93.5％(最小预测6MWT值为64.7％；最大预测6MWT值为121.6％；n＝8)；4年后为预测6MWT值的91.7％(最小预测6MWT值为59.0％；最大预测6MWT值为133.4％；n＝8)；和5年后为预测6MWT值的85.1％(最小预测6MWT值为61.5％；最大预测6MWT值为137.4％；n＝8)。总之，用asfotase alfa治疗的患有HPP的患者的6MWT值到6个月时，从基线时预测6MWT值的76％提高到预测6MWT值的80.8％，这在相同年龄和身高的健康受试者的正常范围内。在用asfotase alfa治疗4年的整个期间，6MWT值的改善得以维持。
实施例4.用第2版布尼氏动作精熟度测试(BOT-2)评估的小儿发作型HPP成年患者的身体功能改善
用第2版布尼氏动作精熟度测试(BOT-2)的奔跑速度和敏捷性测试及力量测试评估HPP患者的身体功能和损伤。用于评估HPP患者的奔跑速度和敏捷性的BOT-2测试包括50英尺往返跑、在平衡木上侧迈步，以及单腿和双腿侧跳。用于评估HPP患者力量的BOT-2测试包括仰卧起坐、两头起、立定跳远、背靠墙直角坐和俯卧撑。然后根据每个时间间隔(基线、6个月、1年、2年、3年、4年、5年和6年)每项BOT-2测试所获得的分数总和来确定BOT-2速度和敏捷性总评分及BOT-2力量总评分。对于基线后的BOT-2评分，在每个相应的时间点(asfotase alfa治疗6个月、1年、2年、3年、4年、5年和6年)将治疗组和对照组的BOT-2评分合并，因为对照组在6个月的初始阶段后接受用asfotase alfa治疗。
用asfotase alfa治疗6个月后BOT-2奔跑速度和敏捷性总评分从基线时为6的中值BOT-2奔跑速度和敏捷性总评分(最小BOT-2评分为0；最大BOT-2评分为27；n＝9)提高到6个月时的10.5(最小BOT-2评分为5；最大BOT-2评分为27；n＝8)(图5)。在用asfotase alfa治疗的整个延长阶段中，中值BOT-2奔跑速度和敏捷性总评分的提高得以维持，其中1年时中值BOT-2奔跑速度和敏捷性总评分为9.0(最小BOT-2评分为4；最大评分为35；n＝11)；2年时中值BOT-2奔跑速度和敏捷性总评分为10.0(最小BOT-2评分为3；最大评分为33；n＝11)；3年时中值BOT-2奔跑速度和敏捷性总评分为10.0(最小BOT-2评分为4；最大评分为30；n＝10)；4年时中值BOT-2奔跑速度和敏捷性总评分为9(最小BOT-2评分为4；最大评分为31；n＝11)；和5年时中值BOT-2奔跑速度和敏捷性总评分为8.0(最小BOT-2评分为0；最大评分为35；n＝9)。用asfotase alfa治疗6个月后BOT-2力量总评分从基线时为12的中值BOT-2力量总评分(最小BOT-2评分为2；最大评分为30；n＝5)提高到6个月时的14(最小BOT-2评分为8；最大评分为35；n＝5)(图6)。
实施例5.施用Asfotase Alfa后小儿发作型HPP成年患者骨矿化的改善
对于未治疗的对照患者而言在基线和6个月时，和对于用asfotase alfa治疗的患者而言在基线和1年时在股骨颈、腰椎和全身进行双能X射线吸收测定(DXA)。在患有小儿发作型HPP的成人中，经治疗的患者在asfotase alfa施用6个月后表现出腰椎骨矿物质密度(BMD)相比于基线增加。在用asfotase alfa治疗六个月后观察到腰椎BMD在统计学上显著的增加(表7)。
表7.在基线时患有小儿发作型HPP的成人在用asfotase alfa治疗12个月后的腰椎骨矿物质密度
对于未治疗的对照患者而言在基线和6个月时和对于用asfotase alfa治疗的患者而言在基线和1年时还进行了骨活检，以测定类骨质体积和厚度(表8)以及矿化延迟时间(表9)。用asfotase alfa治疗一年后，观察到类骨质体积/骨体积(％)和类骨质厚度(μm)在统计学上显著的降低。该测试比DXA测试具有显著更大的侵入性。
表8：在基线时患有小儿发作型HPP的成人在用asfotase alfa治疗12个月后的类骨质体积/骨体积和类骨质厚度
在基线时，所有HPP患者的矿化延迟时间延长，但包括很大程度的患者间变异性。对于这种类型的组织形态学测量和测试，预计此类变异性。用asfotase alfa治疗1年后，治疗组的矿化延迟时间相对于未治疗的对照组减少，治疗组相比于基线的平均变化为-696天，对照组在6个月时相比于基线的平均变化为65天。这些结果表明，在小儿发作型成年HPP患者中施用asfotase alfa促进了骨矿化。
表9：在基线时患有小儿发作型HPP的成人在用asfotase alfa治疗12个月后的矿化延迟时间
实施例6.用Asfotase Alfa治疗HPP青少年和成人的研究设计约13岁至约65岁的患有HPP的青少年和成人参与研究以测定用sALP(asfotase alfa；图7)治疗的功效、安全性和耐受性。在用asfotase alfa治疗6个月的初始阶段，共有19名患者随机分组为通过皮下施用接受剂量为0.3mg/kg/天(2.1mg/kg/周；n＝7)的asfotase alfa，通过皮下施用接受剂量为0.5mg/kg/天(3.5mg/kg/周；n＝6)的asfotase alfa，或在对照组中不进行治疗(n＝6)(图8)。在6个月的初始阶段研究后，治疗组和对照组患者均通过皮下施用接受用剂量为0.5mg/kg/天(3.5mg/kg/周)的asfotase alfa进行治疗。在延长阶段的前6个月之后，对于所有患者，根据方案修改，剂量增加至1mg/kg/天，持续6天/周(6mg/kg/周)。研究纳入和排除标准在表10中有描述。表11汇总了HPP青少年和成人的患者人口统计状况和基线特征，包括HPP疾病相关病史。
表10：用asfotase alfa治疗的患有HPP的青少年和成人的研究的关键纳入和排除标准
a在测定PLP水平之前未施用维生素B6≥1周
b通过骨活检证实骨软化
c在对活检进行读数之前未进行治疗，但所有患者均通过活检确认患有骨软化。
d由于水平低而未能筛查的患者可在补充后由研究者自行决定重新筛查。
e允许先前使用二膦酸盐的患者必须具有在正常范围或升高范围内的血清C-端肽和尿N-端肽或脱氧吡啶啉水平。
表11.用asfotase alfa治疗的患有HPP的青少年和成人的人口统计状况和基线特征
a因为所有患者在延长阶段都接受治疗，所以进行合并。
b将asfotase alfa治疗组合并用于分析。
c最初被归类为患有成人HPP的一名患者后来被确定为在儿童期具有HPP的体征和症状。
ALP＝碱性磷酸酶；HPP＝低磷酸酯酶症。
在延长阶段期间用于评估用asfotase alfa治疗HPP青少年和成人的量度包括：1)用于评估ALP活性的患者血浆样品中无机焦磷酸盐(PPi)和5'-磷酸吡哆醛(PLP)浓度的变化；2)用于评估步行能力的六分钟步行测试(6MWT)值；3)用于评估身体功能的第2版布尼氏动作精熟度测试(BOT-2)评分；4)用于评估力量的手握式测力法(HHD)；5)用于评估伤残的下肢功能量表(LEFS)；和6)用于评估疼痛的简明疼痛量表-简表(BPI-SF)。
对包括所有随机患者的意向治疗群体的完整分析集合进行功效分析；所有患者均接受其随机分组的治疗。在初始治疗期间，在合并的asfotase alfa治疗组和对照组之间进行组比较。还通过对asfotase alfa暴露持续长达5年时间来进行了分析；对于对照组的患者而言，在延长阶段开始6个月后开始进行asfotase alfa治疗。对于从基线到第6个月的PPi和PLP血浆浓度变化的结果测量，使用0.05的双侧α对每个参数使用精确威尔科克森秩和检验进行合并的asfotase alfa治疗组和对照组之间的比较；使用进行的最后一次观测结果输入缺失值。对于6MWT，如果患者在基线时步行了整6分钟，则计算定义为基于年龄、性别和身高的正常预测步行距离的百分比的百分比(％)预测值。
实施例7.向HPP成人和青少年施用Asfotase Alfa后PPi和PLP浓度的中值下降
通过定量ALP底物PPi和PLP的浓度来评估从HPP青少年和成人收集的血浆样品中的ALP活性，如Whyte等，1995(J.Clin.Invest.95(4):1440-1445)。在6个月后，相对于对照组，用asfotase alfa治疗的青少年和成年HPP患者的PPi(-2.2μm)和PLP(-254.5ng/ml)血浆浓度存在较大的变化(分别为图9A和9B)。组间差异对于血浆PLP的变化在统计学上显著(P＝0.0285)，但对于血浆PPi的变化在统计学上不显著(P＝0.0715)。排除了对照组中具有高基线PPi浓度(12.1μM)的一名患者的事后敏感性分析显示与对照组相比，在第6个月时asfotase alfa组中的血浆PPi浓度有显著降低(P＝0.0044)。青少年和成年HPP患者血浆PPi和PLP浓度的中值降低在五年的asfotase alfa治疗过程中得以维持(分别为图10A和10B)。
实施例8.用六分钟步行测试(6MWT)评估的青少年和成年HPP患者的身体功能和步行能力的改善
用六分钟步行测试(6MWT)评估HPP青少年和成人的身体功能和步行能力。对于基线后的6MWT值，在每个相应的时间点(asfotase alfa治疗1年、2年、3年、4年和5年)将治疗组和对照组的6MWT值合并，因为对照组在6个月的初始阶段后转换并开始接受用asfotasealfa治疗。原始对照组在治疗组后六个月开始用asfotase alfa进行治疗。所有分析的基线都是患者接受第一剂asfotase alfa之前的最后一次评估。仅当患者步行整六分钟时才计算预测6MWT值。最初分配到对照组的三名患者未包括在％预测分析中，因为这些患者由于身体和/或认知损伤而不能在基线时步行整6分钟。在基线测量时，19名患者中有5名使用辅助行走装置(n＝3，asfotase alfa组；n＝2，对照组)。
用asfotase alfa治疗的青少年和成年HPP患者在用asfotase alfa治疗六个月后，从治疗开始时的355米(最小距离10米；最大距离620米)提高到450米(最小距离280米；最大距离707米)(图11A)。同样，在用asfotase alfa治疗六个月后，中值％预测6MWT步行距离从基线时76％的预测值(最小值42％，最大值101％)增加到85％(最小值29％，最大值109％)(图11B)。在用asfotase alfa治疗五年的整个期间，6MWT步行距离和％预测6MWT步行距离的改善得以维持。在用asfotase alfa治疗两年后，使用辅助行走装置的五名患者全部得到改善：一名患者从轮椅进展到拐杖，一名从助行器进展到手杖，一名从轮式助行器进展到独立行走，两名从手杖进展到独立行走。
还进行了事后分析，以评价青少年HPP患者(n＝4)和患有小儿发作型HPP的成人(n＝9)在用asfotase alfa治疗前后的6MWT结果。通过计算筛查时间点相对于基线的6MWT步行距离之间的皮尔逊相关系数(r)来评价6MWT的重测信度，并计算双侧P值(精确检验零假设：r＝0)。对于约13至约17岁的青少年和大于约18岁的成人，单独分析重测信度。在筛查时间点相对于基线的步行距离之间的皮尔逊相关系数(r)对于青少年HPP患者为0.81(P＝0.1250)(图12A)，对于小儿发作型HPP成年患者为0.94(P＝0.0001)(图12B)。使用应用于筛查时间点和基线6MWT数据的基于分布的方法计算青少年HPP患者(n＝4)和患有小儿发作型HPP的成人(n＝9)的6MWT的最小临床意义差异值(MCID)。当前的事后分析使用基于测量标准误(SEM)和1/3标准偏差(SD)分布的方法来估计MCID。MCID的最保守估计对于患有小儿发作型HPP的青少年而言为43米(SEM方法；n＝4)，对于患有小儿发作型HPP的成人而言为31米(SD方法；n＝9)，所述青少年和成人在筛查时间点和基线时完成了6MWT。
实施例9.用第2版布尼氏动作精熟度测试(BOT-2)评估的青少年和成年HPP患者的身体功能改善
用第2版布尼氏动作精熟度测试(BOT-2)的奔跑速度和敏捷性测试及力量测试评估HPP青少年和成人的身体功能和损伤。用于评估HPP患者的奔跑速度和敏捷性的BOT-2测试包括50英尺往返跑、在平衡木上侧迈步，以及单腿和双腿侧跳。用于评估HPP患者力量的BOT-2测试包括仰卧起坐、两头起、立定跳远、背靠墙直角坐和俯卧撑。然后根据每个时间间隔(基线、6个月、1年、2年、3年、4年和5年)每项BOT-2测试所获得的分数总和来确定BOT-2速度和敏捷性总评分及BOT-2力量总评分。对于基线后的BOT-2评分，在每个相应的时间点(asfotase alfa治疗6个月、1年、2年、3年、4年和5年)将治疗组和对照组的BOT-2评分合并，因为对照组在6个月的初始阶段后接受用asfotase alfa治疗。患有HPP的成人和青少年的中值BOT-2奔跑速度和敏捷性总评分在基线时为6.5(最小值为0，最大值为39)，在用asfotase alfa治疗5年后改善4.0(最小值为-5，最大值为18)(图13)。中值BOT-2力量总分在治疗开始时为13.5(最小值为0，最大值为33)，并且用asfotase alfa治疗五年后改善3.5(最小值为-9，最大值为9)(图13)。
实施例10.用手握式测力法(HHD)评估的青少年和成年HPP患者的握力和肌肉力量的改善
使用手握式测力法(HHD)评估HPP青少年和成人的握力和肌肉力量。通过施用HHD测试以下双侧肌群：握力肌、膝屈肌、膝伸肌、髋屈肌、髋伸肌和髋外展肌。以磅为单位报告力量。以磅(力)来评估测量值，换算为牛顿(N)，并使用肢长以牛顿米(NM)计算扭矩。在小于16岁的患者中使用扭矩来确定基于年龄、性别和体重的％预测HHD评分，并且将力用于成人中的％预测HHD评分比较。
针对HPP青少年和成年患者(n＝13)预测的HHD髋关节外展％的中值在基线时为45.60％(最小值为9.1％，最大值为126.2％)。在用asfotase alfa治疗的HPP患者中，在用asfotase alfa治疗24周后观察到髋部近端肌肉力量的改善。从基线到第24周的％预测值(优势侧)的中值变化在联合asfotase alfa治疗组中为11.10％(最小值为-25.7％，最大值为20.4％)，相比而言在对照组中对于髋关节外展而言为6.70％(最小值为-7.1％，最大值为12.0％)。从基线到第24周的％预测值(优势侧)的中值变化在联合asfotase alfa治疗组中为7.95％(最小值为12.6％，最大值为19.5％)，相比而言在对照组中对于髋关节伸展而言为1.90％(最小值为15.0％，最大值为11.2％)。
用asfotase alfa治疗的青少年和成年HPP患者在用asfotase alfa治疗后显示出髋关节外展有所改善，48周时(中值变化为11.00％的预测值(最小值为-15.0％，最大值为30.5％))，96周时(中值变化为11.95％的预测值(最小值为-14.0％，最大值为47.2％))，144周时(中值变化为17.05％的预测值(最小值为-6.7％，最大值为55.5％))，192周时(中值变化为19.45％的预测值(最小值为-24.2％，最大值为94.7％))和240周时(中值变化为9.80％的预测值(最小值为-7.2％，最大值为155.2％))。用asfotase alfa治疗的青少年和成年HPP患者在用asfotase alfa治疗后显示出髋关节伸展有所改善，24周时(中值变化为6.20％的预测值(最小值为-12.6％，最大值为19.5％))，48周时(中值变化为4.90％的预测值(最小值为1.7％，最大值为27.7％))，96周时(中值变化为6.75％的预测值(最小值为-24.1％，最大值为31.2％))，144周时(中值变化为15.40％的预测值(最小值为-15.6％，最大值为45.2％))，192周时(中值变化为17.10％的预测值(最小值为-3.2％，最大值为50.2％))和240周时(中值变化为12.40％的预测值(最小值为-9.2％，最大值为45.1％))。用asfotase alfa治疗的青少年和成年HPP患者在用asfotase alfa治疗240周后显示出髋关节外展有所改善。青少年和成年HPP患者膝关节伸展的中值变化为16.05％的预测值(最小值为7.1％，最大值为40.7％)且膝关节屈曲的中值变化为14.30％的预测值(最小值为2.1％，最大值为68.0％))。
实施例11.用下肢功能量表(LEFS)评估的青少年和成年HPP患者的下肢功能性伤残的改善
使用下肢功能量表(LEFS)评估HPP青少年和成人下肢的功能性伤残。有执照的物理治疗师可以以面谈形式向HPP患者施用LEFS。总LEFS评分范围从0到80，其中评分越高表明下肢功能越好。对照组的基线平均值和中值LEFS评分远低于联合asfotase alfa组。与未治疗的对照组相比，青少年和成年HPP患者的联合asfotase alfa治疗组的LEFS评分有所改善(表12)。在对照组的5名患者中的1名(20.0％)中观察到从基线到第24周的临床上有意义的改善(增加≥9分)，相比而言用asfotase alfa治疗的13名HPP患者中有4名(30.8％)具有临床上有意义的改善。
表12.HPP患者的下肢功能量表(LEFS)功能性伤残评分从基线到用Asfotase Alfa治疗第24周的改善
*基于比较治疗组与对照组的精确威尔科克森秩和检验的P值
在用asfotase alfa治疗期间，具有基线LEFS评分数据的18名患者中有14名(77.8％)的总LEFS评分从基线到用asfotase alfa治疗5年有所增加(改善)。另外，总共18名患者中有8名(44.4％)在最终评估时与基线LEFS评分相比，在LEFS评分方面展现出临床上有意义的改善(≥9分)。所有18名患者从基线到最后一次全部暴露于asfotase alfa的平均变化为7.5(标准差为13.33)。
实施例12.用简明疼痛量表-简表(BPI-SF)评估的青少年和成年HPP患者的疼痛
使用简明疼痛量表-简表(BPI-SF)评估HPP青少年和成人的疼痛。HPP青少年和成人的BPI-SF评分是11次疼痛评估的综合。在HPP青少年和成人的BPI-SF综合评分方面，基线和第24周之间没有平均值增加(表13)。BPI-SF评分从基线到第24周的平均值和中值变化在用asfotase alfa治疗的HPP青少年和成人与对照组之间相似。
表13.HPP患者的简明疼痛量表-简表(BPI-SF)评分从基线到Asfotase Alfa治疗第24周无变化
*基于比较治疗组与对照组的精确威尔科克森秩和检验的P值
在用asfotase alfa治疗五年期间，HPP青少年和成人以及对照患者的BPI-SF评分与最初24周治疗期间观察到的一致。到用asfotase alfa治疗96周(N＝19)和144周(N＝17)时，对于用asfotase alfa治疗的HPP青少年和成人以及对照患者而言，中值改善分别为-4.0(范围：-13,11)和-4.0(范围：-24,9)。在用asfotase alfa治疗192周(N＝15)和240周(N＝16)时，对于HPP青少年和成人以及对照患者而言，中值改善分别为-3.0(范围：-20,8)和-3.5(范围：-20,5)。因此，HPP青少年和成人在用asfotase alfa治疗超过约5年后未显示疼痛增加。
实施例13.对于用Asfotase Alfa长期治疗的耐受性
通常，在患有HPP的青少年和成人中用asfotase alfa治疗耐受良好，其中大多数不良事件(AE)由注射部位反应(ISR)和关节痛组成。安全性评估包括持续监测不良事件(AE)，包括ISR和注射相关反应(IAR)。ISR定位于施用部位，并且在开始asfotase alfa治疗后的任何时间点发生。IAR包括在asfotase alfa施用后3小时内发生的***性体征、症状或发现(例如，全身性荨麻疹或瘙痒、低血压或呼吸窘迫)。
在asfotase alfa治疗期间未发生死亡。仅一名患者由于注射部位超敏性和类过敏性反应(各1次)而退出。所有患者在研究期间经历至少一次治疗突发不良事件(TEAE)；大多数TEAE的强度是轻度的(864/1145(75％))或中度的(229/1145(20％))。在超过三名HPP患者中报告了以下的TEAE：关节痛、注射部位红斑、四肢疼痛、背痛、注射部位血肿、骨痛、注射部位变色、眼科钙化、肌肉骨骼疼痛、外周性水肿、头晕、足部骨折、注射部位反应、关节肿胀、上呼吸道感染、头痛、注射部位疼痛、鼻咽炎、咳嗽、跌倒、注射部位萎缩、注射部位瘙痒、手术疼痛、鼻窦炎、疲劳、注射部位肿胀、注射部位肥大、恶心、口咽疼痛、骨关节炎、感觉异常和创伤后疼痛(表14)。
表14.在用asfotase alfa治疗期间在超过三名HPP患者中发生的治疗突发不良事件(TEAE)
aTEAE包括优选术语“沉积眼”和“结膜沉积物”。
最常见的TEAE是发生在所有患者中的ISR(385/1145(34％))；最常见的ISR(≥5％的ISR)是红斑(121/385(31％))、变色(66/385(17％))、未另外说明的ISR(56/385(15％))、血肿(33/385(9％))、疼痛(26/385(7％))和瘙痒(20/385(5％))。共有两名患者经历了被归类为超敏性IAR的TEAES(在一名患者中为口腔感觉减退和寒战；在一名患者中为类过敏性反应)，这些TEAES均被认为强度是中度的。针对9名患者总共报告了29例治疗突发性严重AE(SAE)，并且研究人员将针对两名患者报告的8例SAE评估为与asfotase alfa施用相关(一名患者中的口腔感觉减退、寒战、肢体疼痛和头痛及一名患者中的超敏性反应和类过敏性反应)。总的来说，在HPP青少年和成人中施用asfotase alfa耐受良好。
实施例14.来自于患有小儿HPP的成人中的Asfotase Alfa的2a期随机化、多中心、开放标签的剂量范围研究的药效学结果
在6-12岁的患者以及患有HPP的青少年和成人的研究中，asfotase alfa降低了循环PPi和PLP水平并改善了功能结果。asfotase alfa已在美国、欧洲和日本获得批准用于在所有年龄段的患有小儿发作型HPP的患者中治疗HPP，推荐剂量为2.0mg/kg每周3次，或1.0mg/kg每周6次。在美国，当治疗医师认为疗效不足时，可将该剂量增加至3.0mg/kg每周3次。
在患有小儿发作型HPP的成人中，在包括2.0mg/kg每周3次的当前推荐剂量的6倍范围内的3个剂量下评价asfotase alfa的药效学、药代动力学和安全性/耐受性。测量药效学和安全性/耐受性。
合格的患者包括年龄≥18岁的患有小儿发作型HPP且进行了HPP诊断的男性和非妊娠妇女，正如HPP相关骨骼异常的记录史和以下一种或多种情况所表明的那样：记录的TNSALP基因(ALPL)突变、筛查时血清碱性磷酸酶活性低于按年龄调整的正常范围并且PLP高于正常上限(PLP的历史结果可用于确定患者资格；血浆PLP的标准不适用于接受吡哆醇治疗的患者)，筛查时血浆PPi≥3.9μM，且进入研究3年内未进行asfotase alfa治疗。
研究设计和治疗是一项为期13周的2a期、多中心、随机化、开放标签的剂量-反应研究。筛查后，初始磨合期容许取样进行底物分析。然后将患者按1:1:1随机分组，在第1周期间皮下(SC)施用单剂量的asfotase alfa(0.5、2.0或3.0mg/kg)。患者在第2周期间未接受asfotase alfa。然后从第3周到第9周以0.5、2.0或3.0mg/kg的剂量皮下施用asfotasealfa，每周3次(相当于1.5、6.0或9.0mg/kg/周)(图14)。
药效学结果测量是血浆PPi(主要)和PLP(次要)从基线到第9周第3剂前(谷)的变化，其中将基线定义为首次皮下注射asfotase alfa之前的所有评估的平均值。在筛查、磨合、第1周、第9周和第13周期间在诊所收集用于测量血浆PPi和PLP的血液样品。可以在诊所或家中收集第2-8周和第10-12周的血液样品。其它次要结果测量包括安全性/耐受性和药代动力学参数。报告了药效学和安全性/耐受性结果。
主要假设检验了组群之间血浆PPi相比于基线的变化的差异在第9周第3剂前是否与零时不同。为了控制多重性，使用固定顺序检验程序首先测定3.0和0.5mg/kg组群之间的差异，并且只有当这在统计学上显著时，才测定2.0和0.5mg/kg组群之间的差异。执行显著性检验时使用双侧5％I型误差(P<0.05)。如果在0.05的显著性检验水平下两个比较都拒绝零假设，则满足主要结果测量(对于两者而言P<0.05)。使用基于限制最大似然(REML)的重复测量混合模型进行初步分析以估计从基线到第9周(第3剂前；第61天)的变化。该模型使用来自于在第4周(第22天)、第5周(第29天)、第7周(第43天)、第8周(第50天)、第9周(第57天)和第9周(第61天)获得的给药前样品的结果。不包括第3周(第15天)给药前的时间点，因为它是在单剂量后的2周清洗期之后收集的并且预计会产生与基线时的那些相似的值。按照该方案，未在第6周收集药效学评估。该分析包括就诊的固定分类效应、治疗组群、基线PPi、性别、基线重量分组(≥中值与<中值)和研究药物批次分配的协变量。使用非结构化协方差结构来模拟患者内误差，并使用Kenward-Roger近似法来估计分母自由度。
在筛查的35名患者中，27名被招收并完成了该研究。表15中汇总了人口统计状况和基线疾病特征。在3个剂量组群中，中值年龄为45.0岁(范围：18-77岁)，并且大多数患者为白人(96％)和女性(59％)。
表15.人口统计状况和基线HPP特征
a基于第一个体征/症状时的年龄的分类集合。
b作为中心实验室研究的一部分进行的基因突变分析。
cPPi的正常范围：对于年龄为13-18岁的患者而言为0.75-4.78μM，并且对于年龄>18岁的患者而言为1.00-5.82。
dPLP的正常范围：对于年龄为6-18岁的患者而言为5.74-61.15ng/mL，对于年龄>18岁的患者而言为2.81-26.70ng/mL。
eALP的正常范围：对于年龄为16-19岁的男性患者而言为60-270U/L，对于年龄>19岁的男性患者而言为40-120U/L，并且对于年龄>15岁的女性患者而言为40-120U/L。对于分析，将低于18U/L的LLOQ的值设为18U/L。
AA＝asfotase alfa；ALP＝碱性磷酸酶；HPP＝低磷酸酯酶症；TNSALP＝非组织特异性碱性磷酸酶；PLP＝5'-磷酸吡哆醛；PPi＝无机焦磷酸盐；SD＝标准偏差。
从基线到第9周第3剂前在PPi的最小二乘方平均值(LSM)变化之间观察到显著差异(表16和图15)。从基线到第9周第3剂前在PLP的LSM变化之间观察到显著差异(表16和图16)。
表16.PPi和PLP从基线到第9周第3剂前的平均值变化
a在多次给药期间每周施用3次的剂量。
b在第61天收集第9周第3剂前的样品。
c一名患者没有结果
d来自于初步分析基于限制最大似然的重复测量混合模型。
AA＝asfotase alfa；CI＝置信区间；LSM＝最小二乘方平均值；PLP＝5'-磷酸吡哆醛；PPi＝无机焦磷酸盐；SD＝标准差；SE＝标准误差。
关于安全性和耐受性，表17中呈现了在≥5名患者中观察到的治疗突发不良事件(TEAE)。例如，注射部位反应(21名患者中有137个事件)在2.0和3.0mg/kg组群中更常见。观察到脂肪营养不良(在2.0mg/kg组群的1名患者中有2个事件)。在肾脏(2名患者；2.0和3.0mg/kg组群中各1名)、眼睛(2.0mg/kg组群中的1名患者)和肝脏(3.0mg/kg组群中的1名患者)中观察到异位性钙化(4名患者中有4个事件；2.0和3.0mg/kg组群中各2名)。还观察到超敏性反应(在2.0mg/kg组群的1名患者中有4个事件)。总的来说，99％(480/485)的TEAE严重程度为轻度或中度。未报告严重的TEAE，也没有患者因TEAE而退出研究。
表17.≥5名患者中的治疗突发不良事件
a在多次给药期间每周施用3次的剂量。
AA＝asfotase alfa。
用推荐剂量(2.0或3.0mg/kg)或以上的asfotase alfa治疗的患有小儿发作型HPP的成年患者，与用低于推荐剂量(0.5mg/kg)治疗的患者相比，在其第9周第3剂前的PPi和PLP值方面相比于基线有统计学显著性降低。随着剂量的增加，注射部位反应更频繁。在其它方面，asfotase alfa在所有剂量下都耐受良好。
实施例15.来自研究AA-HPP-208的患有小儿发作型低磷酸酯酶症的成年患者中的asfotase alpha的群体药代动力学和药代动力学-药效学分析
我们使用非区室分析(NCA)计算asfotase alfa药代动力学(PK)参数，以便描述asfotase alfa在患有小儿发作型HPP的成年患者中的PK。我们估计了群体PK参数，包括典型值和随机的个体间和残差变异性以及确定的个体特异性协变量因子(例如，体重)，这些预测群体PK分析中原因不明的随机变异性。我们描述了asfotase alfa暴露与PPi响应之间的群体药代动力学-药效学(PKPD)关系。另外，我们估计了群体PK-PPi参数，包括典型值和随机的个体间和残差变异性。此外，我们模拟了患有小儿发作型HPP的asfotase alfa成年患者中PK-PPi之间的暴露-响应(ER)关系，以支持推荐剂量为6mg/kg/周。最后，我们描述了未接受含维生素B6的补充剂治疗的患者中asfotase alfa暴露与吡哆醛-50-磷酸(PLP)反应之间的群体PKPD关系。这包括对PK-PLP剂量或ER的描述以及对典型值及随机的个体间和残差变异性的估计。
2a期研究(方案AA-HPP-208)是在大约13周内在27名HPP患者中，三种递增的asfotase alfa多次给药方案的随机化、平行组设计(图17A-17B)。该研究由筛选期、单剂量期(3周)和多剂量治疗期(10周)组成。该研究由0.5、2.0或3.0mg/kg单剂量的asfotasealfa组成，然后在2周后开始相同量的多个剂量，3次/周。研究中包括27个个体(每个组群大约9个)，并且在单次和多次给药后进行富PK、PPi和PLP取样，在积聚阶段期间进行稀疏取样。
针对所有三个组群获得个体和平均PK曲线。个体PK曲线指示从第1天的单次给药事件之后(图18A)到第61天的多次给药事件之后(图18B)的asfotase alfa积聚。单剂量和多剂量平均值±SD PK曲线均显示，在测试的0.5至3mg/kg剂量范围内，asfotase alfa表现出线性PK并且增加暴露(图19A和19C)。在第29天左右(或在重复给药4周后)达到稳态，其中在所有三种给药方案下，asfotase alfa谷浓度始终达到稳定水平(图19B)。剂量标准化平均值±SD PK曲线显示，asfotase alfa PK大致与剂量成比例(或在比例范围的2倍以内)从0.5mg/kg增加到3.0mg/kg(图20A-20B)。
将群体PK数据，包括浓度观测结果、给药史、事件时间和协变量因子(年龄、身高、体重、性别和种族)，集合并格式化以供分析。使用PhoenixWinNonlin v 7.0(Certara,Princeton NJ,USA)中的NCA模块估计PK参数值。NCA的数据集源自
群体PKPD数据集。使用源自浓度结果的PK参数评估asfotase alfa的剂量比例。经合格安装非线性混合效应建模
软件7.3版(ICON Development Solutions,Hanover,MD)，通过非线性混合效应建模来进行重复测量终点的群体PKPD分析。
先前的建模工作表明asfotase alfa遵循多区室配置，所以初始建模是使用两室模型进行的，其中一级吸收根据清除率(CL)、中心分布体积(V2)、外周分布体积(V3)、区室间清除率(Q)、绝对生物利用度(F)、吸收速率常数(ka)和皮下吸收延迟时间(ALAG)(ADVAN13)而参数化，具有适当的随机效应分布。通过各种拟合优度标准来指导模型选择，拟合优度标准包括诊断散点图、具有至少2个有效数位的收敛性、参数估计值的合理性、参数估计值的精确度、
<0.95的模型参数估计误差之间的相关性、和给出最小目标函数值和估计参数的数量的AIC。报告了最终模型参数估计值，其中估计不确定性的测量包括渐近标准误差(从
$COVARIANCE步骤获得)。
先前用asfotase alfa进行的建模工作也指导协变量建模。构建完整模型需要小心避免预测值的相关性或共线性。估计模型参数，并通过对所有协变量效应的图形检查来进行对任何剩余趋势的评估。关于参数的临床相关性的推论基于所得的完整模型的参数估计和估计精度的测量。还估计了个体PK参数，并且计算了在给药间隔期间在稳态时的平均浓度(Cavg,ss)。进行预测检查模型评价步骤以评估最终模型和参数的性能。
对于PK-PPi数据分析，绘制根据相比于基线的变化的血浆PPi响应，并且跨暴露四分位数汇总。研究第61天给药前的PPi浓度低于PPi正常下限(1.33μM)(LLN)的频率按Cavg,ss的四分位数范围和治疗组群进行制表。计算范围为253-6800U/L的asfotase alfa的单个值Cavg,ss，并用于以图形方式和定量评估这种ER关系。
Asfotase alfa PKPD数据集由27名患者组成，所述患者在整个研究持续期间贡献总共1140个血清asfotase alfa浓度和1293个血浆PPi浓度。有198个低于定量限值的观测结果，占血清asfotase alfa观测结果总数的17％以上。研究群体由年龄范围为18至77岁且体重范围为48.2至121.3kg的11名男性和16名女性组成。大多数患者为白人(96.3％)。身高、性别、年龄和种族都包括在数据集中，并且出于完整性以表格格式汇总，但未被视为群体模型中的潜在协变量。用于分析的药物批次信息包括批次活性、总唾液酸含量(TSAC)和批量大小。
NCA分析揭示，相对较长的半衰期和给药频率导致在所有剂量水平下的显著积聚。在每个组群中在浓度与时间曲线中观察到广泛的个体间变异性，但是当在半对数图上查看时，所有曲线似乎都显示出单指数递减。暴露估计值(给药间隔期内的最大浓度(Cmax)，从零时到给药间隔期内最后观测到的浓度的时间的浓度-时间曲线下面积(AUClast)，以及从零时到无限时间的浓度-时间曲线下面积(AUCinf)随剂量增加和在单剂量和多剂量施用之间增加。由于在0.5mg/kg组群中高于检测下限的浓度有限，所以AUCinf、皮下给药后的表观清除率(CL/F)、皮下给药后的表观分布容积(Vz/F)和终末半衰期(t1/2)不可评价。CL/F和Vz/F的几何平均估计值分别对于2.0mg/kg组群而言为18.8L/天和99.1L，且对于3.0mg/kg组群而言为22.1L/天和150L。t1/2的估计值的几何平均值范围为3.66至5.54天-1。在单剂量和多剂量组群中，给药间隔内最大浓度的中值时间(Tmax)估计范围分别为1.91至3.0和0.747至1.16天。使用适于单剂量和多剂量Cmax值及单剂量AUCinf和AUClast值的幂模型的对数形式来评估asfotase alfa PK中的剂量比例。
在断定不成比例的情况下，除单剂量Cmax外，所有结果均不确定。对于单剂量Cmax参数，拒绝比例的阈值剂量比为7.85。与数据集中18.2的最大剂量比相比，这些参数的最大比例剂量比范围为1.37至1.69。
我们之前的建模工作表明asfotase alfa遵循多区室配置，所以初始建模是使用具有一级吸收的两室模型进行的，其具有适当的随机效应分布。来自先前分析的完整协变量模型包括异速增长体重、TSAC和抗药中和性抗体(NAb)对CL；异速增长体重对V2、V3和Q的预定效应，以及作为F和ka的协变量的制造批次批量大小，因为包括多个批量大小。目前分析的制造批次仅包括20K批量大小，因此每批次观测到的原料药活性也作为剂量的直接因素包括在模型中，但这不是估计的协变量效应。参考协变量效应(70kg，1.7mol/mol，不存在抗药物抗体，20K批次大小)的PK模型参数的典型估计值(95％Ci)对于CL/F、表观(皮下)中心分布容积(V2/F)、表观(皮下)外周分布容积(V3/F)、表观(皮下)区室间清除率(Q/F)和单剂量吸收速率常数(kaSD)而言分别为17.9(13.7,23.4)L/天、36.6(0.876,1530)L、95.7(18.5,496)L、3490(6.47,1.88e+06)L/天和1.10(0.603,2.02)天-1。这些结果与NCA的结果一致，并且与先前分析的结果略微一致。
还研究了协变量因子对asfotase alfa PK的影响。协变量对CL/F、V2/F、V3/F和Q/F的预期影响通过计算归因于可与零效应区分开的每个预测值的值的Cavg,ss来进行说明。在体重(48.2和121.3kg)、TSAC(1.4和1.6mol/mol)的极值之间和在抗药物抗体存在或不存在的情况下，当TSAC的标准化值为1.7时预测的中值Cavg,ss范围为1750U/L至2769U/L。与基础模型CL/F(48.8CV％)方差估计值相比时，在最终模型中对于CL/F而言原因不明的随机变异性(％CV)降低(43.9％变异系数(CV％))。这一发现的临床相关性是，对于已知协变量的剂量调整预计不会导致反应变异性有意义的降低。
最终群体PK模型提供了对PK数据的良好描述。拟合优度标准揭示最终模型与观测到的数据一致，并且未留下***性偏差。模型评价结果提供了最终模型的固定和随机效应分量都反映观测到的数据的证据。
随着asfotase alfa暴露的增加，血浆PPi反应趋于更大，但在暴露四分位数间注意到响应的大量重叠。在高于2030U/L的中值asfotase alfa Cavg,ss的浓度下这种PPi响应的频率似乎达到66.7％的稳定水平，表明使中值Cavg,ss增加超过2030U/L似乎对增加PPi响应的频率没有进一步影响。
使用NCA计算asfotase alfa PK参数并汇总在表18中。相对较长的半衰期和给药频率导致在所有剂量水平下的显著积聚，然而在0.5mg/kg群组中由于高于检测下限的浓度有限，AUCinf、CL/F、Vz/F和t1/2无法评价。
表18.PK NCA参数汇总
除了tmax之外，为所有参数提供了几何平均值和几何CV％，其中提供了中值和范围。
λz＝终末配置速率常数；AUCinf＝从零时到无限时间的浓度-时间曲线下面积；AUClast＝从零时到给药间隔期内最后观测到的浓度的时间的浓度-时间曲线下面积；CL/F＝皮下给药后的表观清除率；Cmax＝给药间隔期内的最大浓度；CtroughR＝第一剂量后48小时的浓度与多次给药后第61天给药前的浓度的比率；NE＝不可评价；t1/2＝终末半衰期；tmax＝给药间隔期内最大浓度的时间；Vz/F＝皮下给药后的表观分布容积。
血清asfotase alfa浓度-时间数据的综合图和平均值图显示随着剂量增加而暴露增加，但0.5mg/kg组群中的大部分浓度在第1天给药后具有低于定量限值(BLQ)的数据。在每个组群中在浓度与时间曲线中观察到广泛的患者间变异性，但是当在半对数图上查看时，所有曲线似乎都显示出单指数递减。
暴露估计值(Cmax、AUClast和AUCinf)随剂量增加和在单剂量和多剂量施用之间增加。由于在0.5mg/kg组群中高于检测下限的浓度有限，所以AUCinf、CL/F、Vz/F和t1/2不可评价。CL/F和Vz/F的几何平均估计值分别对于2.0mg/kg组群而言为18.8L/天和99.1L，且对于3.0mg/kg组群而言为22 1L/天和150L。t1/2估计值的几何平均值范围为3.66至5.54天。在单剂量和多剂量组群中，中值tmax估计值范围分别为1.91至3.0天和0.747至1.16天。
考虑到连续剂量之间的不规则时间(即每周给药3次在7天的周期中产生2次2天的间隔和1次3天的间隔)，不能用标准方法直接评估积聚比率。通过计算第一剂量施用后48小时的浓度与多次给药后第61天给药前的浓度的比率来评估每周给药3次的积聚量近似值。在3个组群中，这些比率的几何平均值范围为3.14至4.68。表19中示出了完整模型群体PK模型。
表19.完整模型：群体PK模型30502
*95％CI源自从NONMEM$COVARIANCE步骤获得的标准误差
IIV＝个体间变异性，CV＝变异系数，SD＝标准偏差
在患有小儿发作型HPP的成年患者中通过具有有吸收滞后时间的一级吸收的两室模型，描述asfotase alfa的群体PK。为17.9(13.7,23.4)L/小时、36.6(0.876,1530)L、95.7(18.5,496)L、3490(6.47,1.88e+06)L/天和1.10(0.603,2.02)天-1的典型群体参数估计值(95％CI)，是分别针对CL/F、V2/F、V3/F、Q/F和kaSD估计的。CL/F和Vz/F的估计值在NCA和群体分析之间是一致的。
可预测群体中原因不明的随机变异性的个体特异性协变量因子包括异速增殖体重对CL/F、V2/F、V3/F和Q/F的影响，以及抗体状态和TSAC对CL/F的影响。单剂量与多剂量施用的效果也包括在ka中。
Asfotase alfa暴露与PPi响应之间的群体PKPD关系用预测Cavg,ss的四分位数进行制表并以图形方式检查。随着剂量和asfotase alfa暴露的增加，血浆PPi响应趋于更大，但在暴露四分位数间注意到响应的大量重叠(图21和表20)。
表20.PK-PPi响应：研究第61天的Cavg,ss暴露(U/L)与相比于基线PPi(μM)响应的变化
| Cavgbin(U/L) | N | 平均值 | 中值 | 最小值 | 最大值 |
| [253,935] | 7 | -2.44 | -2.94 | -5.64 | 0.192 |
| (9.35,2.03e+03] | 7 | -2.89 | -2.35 | -4.99 | -0.938 |
| (2.03e+03,2.63e+03] | 6 | -4.14 | -4.62 | -5.46 | -1.85 |
| (2.63e+03,6.8e+03] | 7 | -3.83 | -3.64 | -5.03 | -2.87 |
N＝患者数量，Cavgbin＝Cavg,ss四分位数范围，其中汇总了相比于基线PPi数据的所有变化，Cavg,ss＝使用CL＝F的个体经验贝叶斯估计值(bayes estimates)并且假设施用给每位患者的最后一个剂量(活性单位)在7天给药间隔期内施用3次而计算的平均稳态asfotase alfa浓度。
在高于2030U/L的中值asfotase alfa Cavg,ss的浓度下，PPi反应的频率似乎达到66.7％的稳定水平(表21)。
表21.依据Cavg,ss四分位数的PPi<LLN：依据暴露四分位数在研究第61天PPi<正常下限(1.33μM)的频率
| Cavgbin(U/L) | N | 频率(％) |
| [253,935] | 7 | 0.0 |
| (9.35,2.03e+03] | 7 | 14.3 |
| (2.03e+03,2.63e+03] | 6 | 66.7 |
| (2.63e+03,6.8e+03] | 7 | 66.7 |
N＝患者数量，Cavgbin＝Cavg,ss四分位数范围，其中汇总了相比于基线PPi数据的所有变化，Cavg,ss＝使用CL＝F的个体经验贝叶斯估计值(bayes estimates)并且假设施用给每位患者的最后一个剂量(活性单位)在7天给药间隔期内施用3次而计算的平均稳态asfotase alfa浓度。使用研究第61天给药前的PPi浓度计算的频率。
在AA-HPP-208成年患者中针对2mg/kg x 3天/周治疗的中值预测Cavg,ss值(1810U/L)接近该阈值浓度，而实现PPi响应的患者的频率(20％)与该剂量下针对成人群体的先前预测(17.6％)一致。总的来说，这些结果支持在具有小儿表型的成年HPP患者中进行2mg/kgx 3天/周的给药方案。
来自患有小儿发作型HPP的成年患者的这些数据证实了2mg/kg x 3天/周的给药方案在患有HPP的青少年患者中的功效。来自研究AA-HPP-208的新可用剂量范围和PK/PD数据显示了在≥18岁的成年HPP患者(先前未经试验的患者群体)中的有效剂量，并且证实患有小儿发作型HPP的成年患者受益于asfotase alfa治疗。
另外，在患有小儿发作型HPP的小儿患者对比成人患者中，确认asfotase alfa治疗有效性的能力存在显著差异。例如，在小儿患者中，可以使用射线照相印象变化(RGI-C)量表来评估asfotase alfa功效，以评估小儿患者中的骨骼变化。RGI-C量表在HPP中受限，因为它只可以评估具有开放生长面的那些(即小儿患者)。因此，RGI-C量表不能用于评估在患有小儿发作型HPP的成年患者中的功效。尽管如此，来自研究AA-HPP-208的PK/PD/功效结果证实了asfotase alfa在这些成年患者中的治疗有效性。
最后，在研究AA-HPP-208之前，没有数据说明患有小儿发作型HPP的成年患者是否良好耐受asfotase alfa治疗。这些数据证实，尽管asfotase alfa治疗的副作用在小儿患者与青少年和成年患者群体中不同，但两组均良好耐受asfotase alfa治疗，副作用最小。
其它实施方案
以上说明书中提到的所有公开、专利和专利申请特此通过引用并入，其程度如同特别且单独地指出将每个单独的公开、专利或专利申请通过引用整体并入一样。在不脱离要求保护的本发明的范围和精神的情况下，描述的本发明的方法、药物组合物和试剂盒的各种修改和变化对于本领域技术人员而言将是显而易见的。尽管已经结合具体实施方案描述了本公开，但是应该理解能够进行进一步的修改，并且所要求保护的本发明不应该过度地限于这些具体实施方案。
Claims (90)
1.一种治疗被表征为具有成人HPP的至少一种症状的约18岁或以上的无治疗经历的小儿发作型HPP患者的低磷酸酯酶症(HPP)的方法，其中所述方法包括以治疗方案向所述患者施用可溶性碱性磷酸酶(sALP)，所述治疗方案提供约1mg/kg/周至约9mg/kg/周，优选6mg/kg/周的所述sALP，持续至少两周的治疗期，其中所述sALP包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述sALP的施用产生以下一种或多种结果：
(i)来自所述患者的血浆样品中的无机焦磷酸盐(PPi)浓度相对于来自约18岁或以上的未治疗的小儿发作型HPP受试者的血浆样品中的PPi浓度在统计学上显著降低至少约1μM；
(ii)来自所述患者的血浆样品中的5'-磷酸吡哆醛(PLP)浓度相对于来自约18岁或以上的未治疗的小儿发作型HPP受试者的血浆样品中的PLP浓度在统计学上显著降低至少约100ng/ml；
(iii)如通过六分钟步行测试(6MWT)所评估的，所述患者的步行距离相对于未施用的患者的6分钟步行距离在统计学上显著增加至少50米。
2.如权利要求1所述的方法，其中所述治疗期为至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周。
3.如权利要求1或2所述的方法，其中来自所述患者的血浆样品中的PPi浓度的降低，来自所述患者的血浆样品中的PLP浓度的降低和/或所述患者在所述增加后的步行距离在所述治疗期期间维持。
4.如权利要求1至3中任一项所述的方法，其中所述患者的PPi血浆浓度降低至少约2μM。
5.如权利要求1至4中任一项所述的方法，其中在施用所述sALP之前，所述患者的血浆PPi浓度为约6μM。
6.如权利要求1至5中任一项所述的方法，其中在施用所述sALP之后，所述患者的血浆PPi浓度为约2μM至约5μM。
7.如权利要求1至6中任一项所述的方法，其中PLP浓度的所述降低为至少约200ng/ml。
8.如权利要求1至7中任一项所述的方法，其中在施用所述sALP之前，所述患者的血浆PLP浓度高达1300ng/ml。
9.如权利要求1至8中任一项所述的方法，其中在施用所述sALP之后，所述患者的血浆PLP浓度为约2ng/ml至约150ng/ml。
10.如权利要求1至9中任一项所述的方法，其中施用所述sALP持续至少一年的治疗期引起六分钟步行距离增加至少100米或更多。
11.如权利要求1至10中任一项所述的方法，其中在施用所述sALP之前，所述患者被表征为具有约350米或更短的六分钟步行距离。
12.如权利要求1至11中任一项所述的方法，其中在施用所述sALP之后，所述患者表现出六分钟步行距离为约420米或更长。
13.如权利要求1至12中任一项所述的方法，其中在施用所述sALP之后，所述患者表现出对辅助移动装置的依赖性降低。
14.如权利要求13所述的方法，其中所述辅助移动装置是选自由以下组成的组的至少一种装置：助行器、轮椅、背带、拐杖和矫形器。
15.如权利要求1至14中任一项所述的方法，其中在施用所述sALP之后，所述患者经历降低的骨折发生率。
16.一种治疗约13岁或以上的患者的低磷酸酯酶症(HPP)的方法，其中所述方法包括以治疗方案向所述患者施用可溶性碱性磷酸酶(sALP)，所述治疗方案提供约1mg/kg/周至约9mg/kg/周，优选6mg/kg/周的所述sALP，持续至少两周的治疗期，其中所述sALP包含与SEQID NO:1的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述sALP的施用产生以下一种或多种结果：
(i)所述患者的百分比(％)预测手握式测力法(HHD)评分相对于未施用所述sALP的患者的％预测HHD评分的变化为约5％或更多；
(ii)所述患者的下肢功能量表(LEFS)评分相对于未施用所述sALP的患者的所述LEFS评分变化为约3或更多；以及
(iii)所述患者的简明疼痛量表-简表(BPI-SF)评分相对于未施用所述sALP的患者的BPI-SF评分变化为约-2或更多。
17.一种治疗约13岁或以上的患者的低磷酸酯酶症(HPP)的方法，其中所述方法包括以治疗方案向所述患者施用可溶性碱性磷酸酶(sALP)，所述治疗方案提供约1mg/kg/周至约9mg/kg/周，优选6mg/kg/周的所述sALP，持续至少两周的治疗期，其中所述sALP包含与SEQID NO:1的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，并且其中所述sALP的施用产生以下一种或多种结果：
(i)来自所述患者的血浆样品中的PPi浓度相对于来自未施用所述sALP的患者的血浆样品中的PPi浓度降低约25％或更多；
(ii)来自所述患者的血浆样品中的PLP浓度相对于来自未施用所述sALP的患者的血浆样品中的PLP浓度降低约50％或更多；以及
(iii)所述患者的6MWT值相对于未施用所述sALP的患者的6MWT值增加至所述患者的预测6MWT值的约80％或约80％以上。
18.如权利要求1至17中任一项所述的方法，其中每天、每周或每月一次或多次施用所述sALP。
19.如权利要求18所述的方法，其中每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每周七次施用所述sALP。
20.如权利要求1至19中任一项所述的方法，其中在每周的两天，每周的三天，每周的四天，每周的五天，每周的六天或每周的七天分多个剂量施用所述sALP。
21.如权利要求1至20中任一项所述的方法，其中以约2.1mg/kg/周至约3.5mg/kg/周的初始剂量施用所述sALP，随后增加至约6mg/kg/周的剂量。
22.如权利要求21所述的方法，其中以约0.3mg/kg/天至约0.5mg/kg/天的sALP的初始剂量施用所述sALP。
23.如权利要求21或22所述的方法，其中所述初始剂量在至少六个月、至少一年、至少两年、至少三年或至少四年或更长的治疗期后增加。
24.如权利要求1至23中任一项所述的方法，其中以约1.3mg/kg/周、约2.7mg/kg/周或约6mg/kg/周的剂量施用所述sALP。
25.如权利要求1至24中任一项所述的方法，其中以约2mg/kg每周三次，约3mg/kg每周两次，约3mg/kg每周三次或约1mg/kg每周六次的剂量施用所述sALP。
26.如权利要求25所述的方法，其中连续或隔日施用所述sALP，每天一次。
27.如权利要求1至26中任一项所述的方法，其中所述sALP包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
28.如权利要求27所述的方法，其中所述sALP由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成。
29.如权利要求1至28中任一项所述的方法，其中以治疗成人HPP的至少一种症状的治疗有效量施用所述sALP。
30.如权利要求29所述的方法，其中所述成人HPP的至少一种症状包括以下的至少一种或多种：磷酸乙醇胺(PEA)的血液和/或尿液水平升高、矿质过少、高钙尿症、骨骼畸形、蹒跚步态、骨痛、骨折、二水焦磷酸钙结晶沉积、关节炎、焦磷酸性关节病、软骨钙质沉着病、钙化性关节周炎和假骨折。
31.如权利要求1至30中任一项所述的方法，其中所述患者在施用所述sALP之后，未表现出异位性钙化。
32.如权利要求31所述的方法，其中所述患者在施用所述sALP至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年或更长时间后未表现出异位性钙化。
33.如权利要求1至32中任一项所述的方法，其中所述患者对所述sALP的施用表现出耐受性。
34.如权利要求33所述的方法，其中所述耐受性包括选自由以下组成的组的至少一种不良事件的缺乏或发生率降低：注射部位红斑、血红蛋白减少、发热、肺炎、上呼吸道感染、中耳炎、呕吐、便秘、腹泻、牙齿脱落、鼻咽炎、皮疹、龋病和易怒。
35.如权利要求1至34中任一项所述的方法，其中所述sALP以包含至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的组合物施用。
36.如权利要求35所述的方法，其中所述至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂是盐水。
37.如权利要求35所述的方法，其中所述至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂包括氯化钠和磷酸钠。
38.如权利要求37所述的方法，其中所述至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂包括约150mM氯化钠和约25mM磷酸钠。
39.如权利要求35至38中任一项所述的方法，其中所述组合物经皮下、肌肉内、静脉内、口服、鼻腔、舌下、鞘内或皮内施用。
40.如权利要求39所述的方法，其中所述组合物经皮下施用。
41.如权利要求1至40中任一项所述的方法，其中所述sALP对PEA、PPi和PLP具有生理活性。
42.如权利要求1至41中任一项所述的方法，其中所述sALP具有催化能力以改善骨中的骨骼矿化。
43.如权利要求1至42中任一项所述的方法，其中所述sALP是碱性磷酸酶的可溶性细胞外结构域。
44.如权利要求1至43中任一项所述的方法，其中所述患者为人。
45.一种可溶性碱性磷酸酶(sALP)，其包含与SEQ ID NO:1的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的氨基酸序列，用于治疗被表征为具有成人HPP的至少一种症状的约18岁或以上的无治疗经历的小儿发作型HPP患者的低磷酸酯酶症(HPP)，其中将所述sALP配制为用于以治疗方案施用，所述治疗方案提供约1mg/kg/周至约9mg/kg/周，特别是6mg/kg/周的所述sALP，持续至少两周的治疗期，其特征在于向所述患者施用所述sALP产生以下一种或多种结果：
(i)来自所述患者的血浆样品中的无机焦磷酸盐(PPi)浓度相对于来自约18岁或以上的未治疗的小儿发作型HPP受试者的血浆样品中的PPi浓度在统计学上显著降低至少约1μM；
(ii)来自所述患者的血浆样品中的5'-磷酸吡哆醛(PLP)浓度相对于来自约18岁或以上的未治疗的小儿发作型HPP受试者的血浆样品中的PLP浓度在统计学上显著降低至少约100ng/ml；
(iii)如通过六分钟步行测试(6MWT)所评估的，所述患者的步行距离相对于未施用的患者的6分钟步行距离在统计学上显著增加至少50米。
46.如权利要求45所述的sALP，其特征在于所述治疗期为至少三周、至少四周、至少五周、至少六周、至少七周、至少八周、至少九周、至少十周、至少三个月、至少四个月、至少五个月、至少六个月、至少七个月、至少八个月、至少九个月、至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年，或所述患者终生；尤其是至少六周。
47.如权利要求45或46所述的sALP，其特征在于来自所述患者的血浆样品中的PPi浓度的降低，来自所述患者的血浆样品中的PLP浓度的降低和/或所述患者在所述增加后的步行距离在所述治疗期期间维持。
48.如权利要求45至47中任一项所述的sALP，其特征在于所述患者的PPi血浆浓度降低至少约2μM。
49.如权利要求45至48中任一项所述的sALP，其特征在于在施用所述sALP之前，所述患者的血浆PPi浓度为约6μM。
50.如权利要求45至49中任一项所述的sALP，其特征在于在施用所述sALP之后，所述患者的血浆PPi浓度为约2μM至约5μM。
51.如权利要求45至50中任一项所述的sALP，其特征在于PLP浓度的所述降低为至少约200ng/ml。
52.如权利要求45至51中任一项所述的sALP，其特征在于在施用所述sALP之前，所述患者的血浆PLP浓度高达1300ng/ml。
53.如权利要求45至52中任一项所述的sALP，其特征在于在施用所述sALP之后，所述患者的血浆PLP浓度为约2ng/ml至约150ng/ml。
54.如权利要求45至53中任一项所述的sALP，其特征在于在施用所述sALP之前，所述患者表现出六分钟步行距离为约350米或更短。
55.如权利要求45至54中任一项所述的sALP，其特征在于施用所述sALP持续至少一年的治疗期引起六分钟步行距离增加至少100米或更多。
56.如权利要求45至55中任一项所述的sALP，其特征在于在施用所述sALP之后，所述患者表现出六分钟步行距离为约420米或更长。
57.如权利要求45至56中任一项所述的sALP，其特征在于在施用所述sALP之后，所述患者表现出对辅助移动装置的依赖性降低。
58.如权利要求57所述的sALP，其中所述辅助移动装置是选自由以下组成的组的至少一种装置：助行器、轮椅、背带、拐杖和矫形器。
59.如权利要求45至58中任一项所述的sALP，其特征在于在施用所述sALP之后，所述患者经历降低的骨折发生率。
60.如权利要求45至59中任一项所述的sALP，其中将所述sALP配制为用于每天、每周或每月施用一次或多次。
61.如权利要求60所述的sALP，其中将所述sALP配制为用于每周两次、每周三次、每周四次、每周五次、每周六次或每周七次施用。
62.如权利要求45至61中任一项所述的sALP，其中将所述sALP配制为用于在每周的两天，每周的三天，每周的四天，每周的五天，每周的六天或每周的七天分多个剂量施用。
63.如权利要求45至62中任一项所述的sALP，其中将所述sALP配制为用于以约2.1mg/kg/周至约3.5mg/kg/周的初始剂量施用，随后增加至约6mg/kg/周的剂量。
64.如权利要求63所述的sALP，其中将所述sALP配制为用于以约0.3mg/kg/天至约0.5mg/kg/天的sALP的初始剂量施用。
65.如权利要求63或64所述的sALP，其特征在于所述治疗方案的所述初始剂量在至少六个月、至少一年、至少两年、至少三年或至少四年或更长的治疗期后增加。
66.如权利要求45至65中任一项所述的sALP，其中将所述sALP配制为用于以约1.3mg/kg/周、约2.7mg/kg/周或约6mg/kg/周的剂量施用。
67.如权利要求45至66中任一项所述的sALP，其中将所述sALP配制为用于以约2mg/kg每周三次，约3mg/kg每周两次，约3mg/kg每周三次或约1mg/kg每周六次的剂量施用。
68.如权利要求67所述的sALP，其中将所述sALP配制为用于连续或隔日施用，每天一次。
69.如权利要求45至68中任一项所述的sALP，其中所述sALP包含SEQ ID NO:1的氨基酸序列。
70.如权利要求69所述的sALP，其中所述sALP由SEQ ID NO:1的氨基酸序列组成。
71.如权利要求45至70中任一项所述的sALP，其中将所述sALP配制为用于以治疗HPP的至少一种症状的治疗有效量施用。
72.如权利要求71所述的sALP，其中所述HPP的至少一种症状包括以下的至少一种或多种：磷酸乙醇胺(PEA)的血液和/或尿液水平升高、矿质过少、高钙尿症、骨骼畸形、蹒跚步态、骨痛、骨折、二水焦磷酸钙结晶沉积、关节炎和焦磷酸性关节病。
73.如权利要求45至72中任一项所述的sALP，其特征在于所述患者在施用所述sALP之后，未表现出异位性钙化。
74.如权利要求73所述的sALP，其特征在于所述患者在施用所述sALP至少一年、至少两年、至少三年、至少四年、至少五年、至少六年、至少七年、至少八年、至少九年，或至少十年或更长时间后未表现出异位性钙化。
75.如权利要求45至74中任一项所述的sALP，其中所述患者对所述sALP的施用表现出耐受性。
76.如权利要求75所述的sALP，其中所述耐受性包括选自由以下组成的组的至少一种不良事件的缺乏或发生率降低：注射部位红斑、血红蛋白减少、发热、肺炎、上呼吸道感染、中耳炎、呕吐、便秘、腹泻、牙齿脱落、鼻咽炎、皮疹、龋病和易怒。
77.如权利要求45至76中任一项所述的sALP，其中将所述sALP配制为用于以包含至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂的组合物施用。
78.如权利要求77所述的sALP，其中所述至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂是盐水。
79.如权利要求78所述的sALP，其中所述至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂包括氯化钠和磷酸钠。
80.如权利要求79所述的sALP，其中所述至少一种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂包括约150mM氯化钠和约25mM磷酸钠。
81.如权利要求45至80中任一项所述的sALP，其中将所述组合物配制为用于皮下、肌肉内、静脉内、口服、鼻腔、舌下、鞘内或皮内施用。
82.如权利要求81所述的sALP，其中将所述组合物配制为用于皮下施用。
83.如权利要求45至82中任一项所述的sALP，其中所述sALP对PEA、PPi和PLP具有生理活性。
84.如权利要求45至83中任一项所述的sALP，其中所述sALP具有催化能力以改善骨中的骨骼矿化。
85.如权利要求45至84中任一项所述的sALP，其中所述sALP是碱性磷酸酶的可溶性细胞外结构域。
86.如权利要求45至85中任一项所述的sALP，其中所述患者为人。
87.如权利要求1-44中任一项所述的方法，其中施用所述sALP产生以下一种或两种结果：
(i)来自所述患者的血浆样品中的PPi浓度的最小二乘方平均值相比于基线的统计学显著变化；或
(ii)来自所述患者的血浆样品中的PLP浓度的最小二乘方平均值相比于基线的统计学显著变化。
88.如权利要求1-44和87中任一项所述的方法，其中施用所述sALP产生约2,000U×天/L至约7,000U×天/L的AUClast，其中所述AUClast等于在给药间隔中从零时到最后观察到的浓度的时间的浓度-时间曲线下面积。
89.如权利要求1-44、87和88中任一项所述的方法，其中施用所述sALP产生约4,000U×天/L至约10,000U×天/L的AUCinf，其中AUCinf等于从零时间到无限时间的浓度-时间曲线下面积。
90.如权利要求1至44和87至89中任一项所述的方法，其中施用所述sALP产生约3天至约8天的t1/2。
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