CN110684815A - 一种鱿鱼墨活性肽的制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及生物提取技术领域，针对鱿鱼下脚料被丢弃污染环境的问题，提供一种鱿鱼墨活性肽的制备方法，包括以下步骤：（a）将鱿鱼放在鱿鱼处理装置中，取出鱿鱼的墨囊并收集鱿鱼墨；（b）将鱿鱼墨与水按体积比1:(10‑20)混合，调节pH值为1‑4，用0.1%胃蛋白酶在30‑40℃酶解1‑3 h，接着调节pH值为7‑9，用0.1%复合蛋白酶50‑60℃酶解1‑2 h，制得酶解液，离心取上清液；（c）在酶解液上清液中加入5‑20%(m/v)的三氯乙酸溶液，混匀、静置，离心取上清液，脱盐后冷冻干燥得鱿鱼墨活性肽。本发明有效利用鱿鱼下脚料之一的墨汁制备具有丰富生理功能的活性肽，变废为宝。
Description
技术领域
本发明涉及生物提取技术领域，尤其涉及一种鱿鱼墨活性肽的制备方法。
背景技术
鱿鱼是头足类海洋动物中枪乌贼和柔鱼的俗称。鱿鱼因其味道鲜美、营养丰富而逐渐成为人类重要的蛋白质资源，但是鱿鱼不可食用的部分往往得不到有效利用，这些废弃物包括占鱿鱼质量30%左右的墨囊、内脏、表皮等，其中墨囊占鱿鱼质量的百分数为11.3%，对这些废弃物，一般处理方法是就地掩埋，这不仅是对渔业资源的浪费，还加剧了环境污染。
鱿鱼的墨囊中有墨汁，鱿鱼墨汁中所含有的生物大分子多聚体的代称，是已知唯一能够保护生物体免受辐射伤害的天然内源生物聚合体，含有多肽片断、酸性多糖、酪氨酸酶等多种生物活性成分，具有清除自由基和结合潜在毒性离子的特性，应用潜力巨大。自从科学家证实鱿鱼墨中富含抗癌物质以后，一向被视为废弃物的鱿鱼墨慢慢被重视起来。例如一篇公开号CN106174412 A，名称为《一种墨鱼汁酱的生产方法》的中国专利，公开了一种墨鱼汁酱的生产方法，属于食品加工技术领域，包括以下工艺步骤：1）原料处理；2）热汤处理；3）冷却；4）调配；5）过胶体磨；6）均质；7）煮沸；8）热灌装；9）灭菌；10）冷却。该发明以天然墨鱼墨和抗性淀粉为原料，采用全新物理加工技术生产，不仅最大程度的保留了黑色素和蛋白多糖复合体的天然功效，而且通过科学配伍提升了产品的感官品质和加工特性。而对鱿鱼墨有关其生物活性的研究还较少见，而且鱿鱼墨囊处理不方便，也为研究带来一些困难。据此需要一种理想的技术方法解决以上问题。
发明内容
本发明为了克服鱿鱼下脚料被丢弃污染环境的问题，提供一种鱿鱼墨活性肽的制备方法，有效利用鱿鱼下脚料之一的墨汁制备具有丰富生理功能的活性肽，变废为宝。本发明还提供一种方便提取墨汁的装置，防止提取过程中鱿鱼墨乱溅。
为了实现上述目的，本发明采用以下技术方案：
一种鱿鱼墨活性肽的制备方法，包括以下步骤：
（a）将鱿鱼放在鱿鱼处理装置中，取出鱿鱼的墨囊并收集鱿鱼墨；
（b）将鱿鱼墨与水按体积比1:(10-20)混合，调节pH值为1-4，用0.1%胃蛋白酶在30-40℃酶解1-3 h，接着调节pH值为7-9，用0.1%复合蛋白酶50-60 ℃酶解1-2 h，制得酶解液，离心取上清液；
（c）在酶解液上清液中加入5-20%(m/v)的三氯乙酸溶液，混匀、静置，离心取上清液，脱盐后冷冻干燥得鱿鱼墨活性肽。
本发明用鱿鱼提取鱿鱼墨，现用现取，鱿鱼墨比从冷藏的鱿鱼墨囊中提取出来的鱿鱼墨新鲜，而且不用担心鱿鱼墨囊运输储存过程中破裂。鱿鱼墨经过胃蛋白酶和复合蛋白酶的两次酶解，蛋白质分解更彻底。之后利用三氯乙酸使多余蛋白质形成不溶性盐而沉淀下来，最后脱盐冷冻干燥即可得到鱿鱼墨活性肽。有效利用鱿鱼下脚料之一的鱿鱼墨制备活性肽，变废为宝，制得的鱿鱼墨活性肽具有抗菌和抗氧化活性，同时减小了对环境的负担，环境友好。
作为优选，所述步骤（a）中的鱿鱼处理装置包括平台、位于平台下方起支撑作用的支腿和罩在平台上方防止鱿鱼墨溅出的透明盖子，盖子侧面设有操作孔供手穿过，平台上设有放置鱿鱼的处理台、供水的水龙头、放置墨囊的墨囊池和搅拌器，搅拌器作用于墨囊池内的墨囊，墨囊池底面设有过滤孔，平台下方设有收集鱿鱼墨的收集桶，墨囊池底面与收集桶连通。鱿鱼的墨囊位于肚皮较深处，摘取不易，而且摘取过程中容易破裂，鱿鱼墨溅到衣服上极难清理。针对这个问题，本发明设计了一个专门用于取鱿鱼墨的鱿鱼处理装置，在平台上方罩有透明的盖子，盖子上开设操作孔，处理鱿鱼时双手伸入，透过盖子观察内部情况。先将鱿鱼放在处理台上，摘头、取墨囊，墨囊简单冲洗后放入墨囊池，处理好所有鱿鱼后，打开搅拌器，搅拌器将墨囊弄破，鱿鱼墨流出，经过墨囊池底面流进收集桶。墨囊池底面设有过滤孔，可以过滤掉鱿鱼墨中的墨囊碎片等杂质。这样一来，从鱿鱼中摘取墨囊并收集鱿鱼墨的处理过程都在鱿鱼处理装置中进行，鱿鱼墨不会溅出鱿鱼处理装置，可以保持整个过程的干净整洁，而且处理方便，不用事先采购墨囊来冷藏，避免了墨囊在储藏过程中的变质和破损。
作为优选，搅拌器端部设置搅拌桨，搅拌桨上设有分别朝向侧面和底面的尖锥，尖锥用于刺破墨囊。搅拌桨在侧面和底面分别设置尖锥，可以从侧面刺破墨囊，也能刺破搅拌桨正下方的墨囊，有利于鱿鱼墨的流出。
作为优选，墨囊池底面的过滤孔孔径为0.15-0.25 mm。这个孔径过滤出来的鱿鱼墨可以不经处理直接用于下一步操作，简单方便。
作为优选，所述步骤（b）中复合蛋白酶的质量配比为碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:风味蛋白酶=(1-3):(2-4):(2-4)。多种蛋白酶复合的酶比单一酶的酶解效率更高、酶解效果更好。
作为优选，所述步骤（b）中的离心操作条件为8000 rpm下离心5-10 min。
作为优选，所述步骤（c）中酶解液上清液和三氯乙酸溶液的体积比为1:1。
因此，本发明具有如下有益效果：（1）有效利用鱿鱼下脚料之一的鱿鱼墨制备具有丰富生理功能的活性肽，变废为宝，同时减小了对环境的负担；（2）本发明设计了一个专门用于取鱿鱼墨的鱿鱼处理装置，从鱿鱼中摘取墨囊并收集鱿鱼墨的处理过程都在鱿鱼处理装置中进行，鱿鱼墨不会溅出鱿鱼处理装置，可以保持整个过程的干净整洁，而且处理方便，不用事先采购墨囊来冷藏，避免了墨囊在储藏过程中的变质和破损；（3）鱿鱼墨经过胃蛋白酶和复合蛋白酶的两次酶解，蛋白质分解更彻底；（4）多种蛋白酶复合的复合蛋白酶比单一酶的酶解效率更高、酶解效果更好。
附图说明
图1是鱿鱼处理装置的结构示意图。
图2是平台的俯视图。
图中：1、平台，2、处理台，21、防滑纹路，3、水龙头，4、墨囊池，41、过滤孔，42、漏斗部，43、收集桶，5、搅拌器，51、搅拌桨，511、尖锥，6、鱿鱼池，7、废物池，8、盖子，81、操作孔，9、支腿。
具体实施方式
如图1、2所示，鱿鱼处理装置包括平台1、位于平台1下方起支撑作用的支腿9和罩在平台1上方防止鱿鱼墨溅出的透明盖子8，盖子8侧面设有操作孔81供手穿过，操作孔81距离平台1有一段距离，防止鱿鱼墨从操作孔81溅出，操作孔81上可以设置一层可从下部掀开的薄膜起阻挡作用，操作时双手伸进操作孔81处理鱿鱼，眼睛通过透明的盖子8观察内部情况。平台1上从左到右依次设有废物池7、处理台2、墨囊池4和鱿鱼池6，鱿鱼放在处理台2上，破开鱿鱼取鱿鱼墨囊的过程在处理台2上进行。为了防止鱿鱼打滑，处理台2上表面设有凹凸不平的防滑纹路21。处理台2中间设有可旋转的水龙头3，为整个鱿鱼处理装置供水。取出鱿鱼的墨囊后简单冲洗下墨囊表面污秽，将其放入墨囊池4中。鱿鱼可进一步处理，取出头、内脏等不能食用的部分，放进废物池7，鱿鱼肉则放进鱿鱼池6。废物池7凸出平台1底部，处理过程中若满了可以取下清理后再装到平台1底部。废物池7和鱿鱼池6底部均设有排水口，与水管连通，排出污水。墨囊池4边上设有搅拌器5，搅拌器5包括搅拌轴和搅拌桨51，搅拌轴伸进墨囊池4并靠近墨囊池4底部，搅拌轴的底端设有搅拌桨51，六个弯刀形的搅拌桨51均匀分布在搅拌轴底端一周，搅拌轴工作时朝搅拌桨51弯刀形的弯曲方向旋转，搅拌桨51可以打破并搅碎墨囊使墨汁流出，搅拌桨51在弯刀形的弯曲内侧以及底部分别设有朝向侧面和底面的尖锥511，可以从侧面刺破墨囊，也能刺破搅拌桨51正下方的墨囊，有利于鱿鱼墨的流出。墨囊池4底面设有孔径为0.20 mm的过滤孔41（图中只是为了示意，不代表实际大小），可以过滤掉鱿鱼墨中的墨囊碎片等杂质，甚至从过滤孔41流出的鱿鱼墨可以不经处理直接用于下一步操作，简单方便。墨囊池4底面的外侧面设有一由大变小的漏斗部42，漏斗部42底端通过水管与设在平台1下方的收集桶43连通，鱿鱼墨最后流入收集桶43中被收集。如果鱿鱼墨流出不完全，可以将收集桶43设为两个支口的密封容器，一个支口通过水管与漏斗部42底端密封连接，另一个支口与真空泵连接，对鱿鱼墨进行减压抽滤。
在鱿鱼处理装置中处理鱿鱼的步骤是：先将要处理的鱿鱼放在处理台2上，盖上盖子8，双手伸进操作孔81对鱿鱼进行摘头、取墨囊、取内脏等处理，墨囊简单冲洗后放入墨囊池4，不可食用的头、内脏等放入废物池7等待后续处理，处理干净的鱿鱼肉放入鱿鱼池6。处理好所有鱿鱼后，打开搅拌器5，搅拌器5将墨囊弄破，鱿鱼墨流出，经过墨囊池4底面的过滤孔41流进收集桶43。从鱿鱼中摘取墨囊并收集鱿鱼墨都在鱿鱼处理装置中进行，鱿鱼墨不会溅出鱿鱼处理装置，可以保持整个过程的干净整洁，而且处理方便，不用事先采购墨囊来冷藏，避免了墨囊在储藏过程中的变质和破损；同时将鱿鱼肉和不能食用部分分开，鱿鱼处理的整个过程方便、整洁。
下面通过具体实施例，对本发明的技术方案做进一步说明。
本发明中，若非特指，所采用的原料和设备等均可从市场购得或是本领域常用的，实施例中的方法，如无特别说明，均为本领域的常规方法。
实施例1
（a）用上述鱿鱼处理装置中收集得鱿鱼墨；
（b）将鱿鱼墨与水按体积比1:20混合，调节pH值为1，用0.1%胃蛋白酶在30 ℃酶解3 h，接着调节pH值为7，用0.1%复合蛋白酶50 ℃酶解1 h，复合蛋白酶的质量配比为碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:风味蛋白酶=1:2:4，制得酶解液，6000 rpm下离心15 min取上清液；
（c）在酶解液上清液中加入2倍体积的5%(m/v)的三氯乙酸溶液，混匀后于室温下静置60 min，离心取上清液，透析脱盐后，冷冻干燥得鱿鱼墨活性肽。
实施例2
（a）用上述鱿鱼处理装置中收集得鱿鱼墨；
（b）将鱿鱼墨与水按体积比1:15混合，调节pH值为4，用0.1%胃蛋白酶在40 ℃酶解1 h，接着调节pH值为9，用0.1%复合蛋白酶60 ℃酶解1 h，复合蛋白酶的质量配比为碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:风味蛋白酶=3:4:2，制得酶解液，8000 rpm下离心5 min取上清液；
（c）在酶解液上清液中加入等体积的20%(m/v)的三氯乙酸溶液，混匀后于室温下静置60 min，离心取上清液，透析脱盐后，冷冻干燥得鱿鱼墨活性肽。
实施例3
（a）用上述鱿鱼处理装置中收集得鱿鱼墨；
（b）将鱿鱼墨与水按体积比1:10混合，调节pH值为3，用0.1%胃蛋白酶在35 ℃酶解2 h，接着调节pH值为8，用0.1%复合蛋白酶55 ℃酶解2 h，复合蛋白酶的质量配比为碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:风味蛋白酶=1:2:2，制得酶解液，8000 rpm下离心5 min取上清液；
（c）在酶解液上清液中加入等体积的15%(m/v)的三氯乙酸溶液，混匀后于室温下静置60 min，离心取上清液，透析脱盐后，冷冻干燥得鱿鱼墨活性肽。
实施例4
（a）用上述鱿鱼处理装置中收集得鱿鱼墨；
（b）将鱿鱼墨与水按体积比1:10混合，调节pH值为3，用0.1%胃蛋白酶在35 ℃酶解2 h，接着调节pH值为8，用0.1%复合蛋白酶55 ℃酶解2 h，复合蛋白酶的质量配比为碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶=1:2，制得酶解液，8000 rpm下离心5 min取上清液；
（c）在酶解液上清液中加入等体积的15%(m/v)的三氯乙酸溶液，混匀后于室温下静置60 min，离心取上清液，透析脱盐后，冷冻干燥得鱿鱼墨活性肽。
本发明有效利用鱿鱼下脚料之一的鱿鱼墨制备活性肽，变废为宝，制得的鱿鱼墨活性肽具有抗菌和抗氧化活性，同时减小了对环境的负担，环境友好。
Claims (7)
1.一种鱿鱼墨活性肽的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（a）将鱿鱼放在鱿鱼处理装置中，取出鱿鱼的墨囊并收集鱿鱼墨；
（b）将鱿鱼墨与水按体积比1:(10-20)混合，调节pH值为1-4，用0.1%胃蛋白酶在30-40℃酶解1-3 h，接着调节pH值为7-9，用0.1%复合蛋白酶50-60 ℃酶解1-2 h，制得酶解液，离心取上清液；
（c）在酶解液上清液中加入5-20%(m/v)的三氯乙酸溶液，混匀、静置，离心取上清液，脱盐后冷冻干燥得鱿鱼墨活性肽。
2.根据权利要求1所述的一种鱿鱼墨活性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤（a）中的鱿鱼处理装置包括平台（1）、位于平台（1）下方起支撑作用的支腿（9）和罩在平台（1）上方防止鱿鱼墨溅出的透明盖子（8），盖子（8）侧面设有操作孔（81）供手穿过，平台（1）上设有放置鱿鱼的处理台（2）、供水的水龙头（3）、放置墨囊的墨囊池（4）和搅拌器（5），搅拌器（5）作用于墨囊池（4）内的墨囊，墨囊池（4）底面设有过滤孔（41），平台（1）下方设有收集鱿鱼墨的收集桶，墨囊池（4）底面与收集桶（43）连通。
3.根据权利要求2所述的一种鱿鱼墨活性肽的制备方法，其特征在于，搅拌器（5）端部设置搅拌桨（51），搅拌桨（51）上设有分别朝向侧面和底面的尖锥（511），尖锥（511）用于刺破墨囊。
4.根据权利要求2所述的一种鱿鱼墨活性肽的制备方法，其特征在于，墨囊池（4）底面的过滤孔（411）孔径为0.15-0.25 mm。
5.根据权利要求1所述的一种鱿鱼墨活性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤（b）中复合蛋白酶的质量配比为碱性蛋白酶:木瓜蛋白酶:风味蛋白酶=(1-3):(2-4):(2-4)。
6.根据权利要求1所述的一种鱿鱼墨活性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤（b）中的离心操作条件为8000 rpm下离心5-10 min。
7.根据权利要求1或5或6所述的一种鱿鱼墨活性肽的制备方法，其特征在于，所述步骤（c）中酶解液上清液和三氯乙酸溶液的体积比为1:1。
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