CN110592218A

CN110592218A - 一种诊治乳腺癌的生物标志物

Info

Publication number: CN110592218A
Application number: CN201911006958.0A
Authority: CN
Inventors: 雷海; 贾新建; 罗雪; 易瑛
Original assignee: Peoples Hospital of Deyang City
Current assignee: Peoples Hospital of Deyang City
Priority date: 2019-10-22
Filing date: 2019-10-22
Publication date: 2019-12-20
Anticipated expiration: 2039-10-22
Also published as: CN110592218B

Abstract

本发明公开了一种诊治乳腺癌的生物标志物，所述生物标志物为lncRNA LINC02343。本发明通过检测癌组织与正常组织中的差异表达基因，发现了LINC02343在乳腺癌中表达上调，提示LINC02343可作为检测靶标应用于乳腺癌的诊断和治疗，本发明同时用体外细胞实验证明了LINC02343与乳腺癌细胞的增殖、迁移和侵袭有关，说明LINC02343可应用于乳腺癌的治疗。

Description

一种诊治乳腺癌的生物标志物

技术领域

本发明属于生物医药领域，涉及一种诊治乳腺癌的生物标志物，所述生物标志物为LINC02343。

背景技术

随着乳腺癌发病率的不断升高，现已成为女性发病率最高的恶性肿瘤，目前该病在我国的发病率仍不断升高。在过去的几十年内***性的治疗已使得乳腺癌的死亡率大大降低，但其死亡率仍位居恶性肿瘤死亡率的第二位(Siegel R,Naishadham D,JemalA.Cancer statistics[J],2012.CA Cancer J Clin,2012,62(1):10-29)。根据基因表达谱的不同，在mRNA水平将乳腺癌分成不同的分子亚型，主要包括:三阴型乳腺癌、HER-2扩增型乳腺癌、正常细胞样乳腺癌、Luminal A型乳腺癌及Luminal B型乳腺癌。目前，被公认的乳腺癌分子分型主要包括四类:Luminal A型乳腺癌，Luminal B型乳腺癌，三阴型乳腺癌和HER-2过表达型乳腺癌。虽然现有的分子分型对患者的治疗及预后评估提供了较好的依据，但对于其中部分高异质性的乳腺癌患者仍不能解决治疗上的困境。

近年来，随着分子生物学、基因组学的研究进展，从分子机制上探讨恶性肿瘤的转移及复发，以及分子靶向治疗逐渐成为肿瘤学的热点研究方向。已有越来越多的学者提出乳腺癌具有高度异质性，这种预后上的差异被认为是由于肿瘤的分子差异造成的，不同乳腺癌的分子亚型需要作为独立的疾病接受相应的生物学治疗(Sarlie T，Perou CM,Tibshirani R，et a1.Gene expression patterns of breast carcinomas distinguishtumor subclasses with clinical implications[J].Proc Natl Acad Sci USA.2001,98(19):10869-74.)。因此，现阶段我们需要寻找更为准确、更多的肿瘤标志物和治疗靶点，改善传统的癌症评估方法，为乳腺癌的治疗制定个体化方案，评估疗效，预测预后(EtzioniR,urban N,Ramsey S，et al.The case for early detection[J].NaI RevCancer,2003,3:243-252.)。

随着生物技术的发展以及分子研究的深入，人们发现之前被称为“暗物质”的长链非编码RNA(long non-coding RNA，LncRNA)在肿瘤的发生发展中起着重要的作用。lncRNA是一种长度大于200bp，缺少开放阅读框，不能编码蛋白质的RNA，与细胞的增殖、分化、代谢、免疫和凋亡相关。研究与乳腺癌相关的lncRNA，对于实现乳腺癌的进一步分型，以及精准医疗具有重要的意义。

发明内容

为了弥补现有技术的不足，本发明经过广泛而深入的研究，通过高通量测序的方法，检测乳腺癌标本中lncRNA在肿瘤组织和正常组织的表达，发现其中具有明显表达差异的lncRNA，探讨其与乳腺癌的发生之间的关系，从而为乳腺癌的诊断及精准靶向治疗寻找更好的途径和方法。

为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

本发明的第一方面提供了一种试剂，所述试剂能够检测样本中LINC02343的水平。

“LINC02343”位于13号染色体上，基因ID为105370158，包括LINC02343基因及其的同源物，突变，和同等型。该术语涵盖全长，未加工的LINC02343，以及源自细胞中加工的任何形式的LINC02343。该术语涵盖LINC02343的天然发生变体(例如剪接变体或等位变体)。该术语涵盖例如LINC02343基因，人LINC02343的基因序列(NR_146542.1)，以及来自任何其它脊椎动物来源。

进一步，所述试剂包括：

特异性识别LINC02343的探针；或

特异性扩增LINC02343的引物。

在本发明的一个具体实施方案中，特异性扩增LINC02343的引物序列如SEQ IDNO.1～2所示。

本发明的第二方面提供了一种试剂盒，所述试剂盒包括本发明第一方面所述的试剂。

作为一种非限制性实施方案，试剂盒包含一组寡核苷酸引物，所述引物足以检测和/或定量本发明所述的内在基因。寡核苷酸引物可以以冻干或重构的形式提供，或者可以作为一组核苷酸序列提供。在一个实施方案中，以微孔板(microplate)的形式提供引物，其中每一个引物组占用微孔板中的一个孔(或多个孔，如在重复的情况下)。微孔板可以进一步包含足以检测如下所述的一个或多个看家基因的引物。试剂盒可以进一步包含足以扩增本发明所述的基因的表达产物的试剂和说明。

为了便于快速访问，例如为进行比较、检查、恢复、和/或修改，分子特征/表达概况典型地记录在数据库中。最典型地，数据库是可由计算机设备访问的关系数据库，虽然可以使用其它形式，例如作为照片、模拟或数字成像读数、电子表格等的表达概况的手动访问索引文件。无论最初记录的表达模式本质上是模拟的或数字的，表达模式、表达概况(集合的表达模式)和分子特征(相关表达模式)以数字形式储存并通过数据库访问。典型地，数据库在中央设备编辑并维持，可以在本地和/或远程访问。

本发明的第三方面提供了一种芯片，所述芯片包括本发明第一方面所述的试剂。进一步，试剂盒还可以包含计算机可读介质。

“芯片”也称为“阵列”，指包含连接的核酸或肽探针的固体支持物。阵列通常包含按照不同的已知位置连接至基底表面的多种不同的核酸或肽探针。这些阵列，也称为“微阵列”，通常可以利用机械合成方法或光引导合成方法来产生这些阵列，所述光引导合成方法合并了光刻方法和固相合成方法的组合。阵列可以包含平坦的表面，或者可以是珠子、凝胶、聚合物表面、诸如光纤的纤维、玻璃或任何其它合适的基底上的核酸或肽。可以以一定的方式来包装阵列，从而允许进行全功能装置的诊断或其它方式的操纵。

“微阵列”是杂交阵列原件有序排列在基质上，所述杂交阵列原件诸如聚核苷酸探针(例如寡核苷酸)或结合剂(例如抗体)。所述基质可以是固体基质，例如，玻璃或二氧化硅玻片、珠、纤维光学粘结剂或半固态基质，例如硝酸纤维素膜。核苷酸序列可以是DNA、RNA或其中的任何排列。

本发明的第四方面提供了一种核酸膜条，所述核酸膜条包括本发明第一方面所述的试剂。

核酸膜条包括基底和固定于所述基底上的寡核苷酸探针；所述基底可以是任何适于固定寡核苷酸探针的基底，例如尼龙膜、硝酸纤维素膜、聚丙烯膜、玻璃片、硅胶晶片、微缩磁珠等。

本发明的第五方面提供了一种组合物，所述组合物包括LINC02343的抑制剂。所述抑制剂包括以LINC02343为靶标、且能够抑制LINC02343基因表达或基因转录的干扰分子，包括：shRNA(小发夹RNA)、小干扰RNA(siRNA)、dsRNA、微小RNA、反义核酸，或能表达或形成所述shRNA、小干扰RNA、dsRNA、微小RNA、反义核酸的构建物。

进一步，所述抑制剂为siRNA。

作为一种优选的实施方案，所述siRNA的序列如SEQ ID NO.5～10所示。

本发明的第六方面提供了一种筛选治疗乳腺癌的候选药物的方法，所述方法包括：

用待筛选物质处理表达或含有LINC02343的培养体系；和

检测所述体系中LINC02343的表达水平；

其中，若所述待筛选物质可以抑制LINC02343的水平，则表明该待筛选物质是治疗乳腺癌的候选药物。

本发明的第七方面提供了如下任一项所述的应用：

a.本发明第一方面所述的试剂、本发明第二方面所述的试剂盒、本发明第三方面所述的芯片、本发明第四方面所述的核酸膜条在制备早期诊断乳腺癌的产品中的应用；

b.本发明第五方面所述的组合物在制备治疗乳腺癌的药物中的应用；

c.本发明第六方面所述的方法在筛选治疗乳腺癌的候选药物中的应用；

d.LINC02343在制备治疗乳腺癌的药物中的应用；

e.LINC02343在构建诊断乳腺癌的计算模型中的应用。

进一步，本发明第七方面所述的应用中的乳腺癌为Luminal A型乳腺癌。

本发明包括任何本领域可用的检测内在基因LINC02343表达的方法。“检测表达”是指确定内在基因的RNA转录物或其表达产物的量或存在。检测本公开的内在基因表达，即基因表达概况分析的方法包括基于多核苷酸杂交分析的方法、基于多核苷酸测序的方法。这些方法通常检测本文所述的内在基因的表达产物(例如lncRNA)。

许多表达检测方法使用分离的RNA。起始材料典型地是从生物样品，例如分别从肿瘤或肿瘤细胞系，以及相应的正常组织或细胞系分离的总RNA。如果RNA的来源是原发性肿瘤，则可以从冷冻的或保存的石蜡包埋并固定的(例如***固定的)组织样品(例如病理学家指导的组织核心样品)中提取RNA(例如mRNA)。

在本发明的一个实施方案中，通过评价一个或多个主体样品中本发明所述的内在基因的表达模式或表达概况来评估乳腺癌亚型。为了讨论的目的，术语主体，或主体样品，指个体，不管其健康和/或疾病状态。主体可以是受试者、研究参与者、对照主体、筛选主体、或任何由其获得样品的并在本发明的背景下被评估的其他类别的个体。相应地，主体可以被诊断为患有乳腺癌，可以呈现出乳腺癌的一种或几种症状，或者对于乳腺癌的诱发因素，例如家族(遗传)或医疗史(医疗)因素，可以正在接受乳腺癌的治疗或疗法，等等。或者，就任何上述因素或标准而言，主体可以是健康的。应当理解本文使用的术语“健康”是相对于乳腺癌状态而言的，因为术语“健康”不能定义为相应于任何绝对的评价或状态。因此，对于任何特定疾病或疾病标准来说，被定义为健康的个体可以实际上被诊断为患有任何其它一种或多种疾病，或者表现出任何其它一种或多种疾病标准，包括一种或多种除乳腺癌以外的癌症。但是，健康对照优选没有任何癌症。

在特定的实施方案中，预测乳腺癌内在亚型的方法包括收集包含癌细胞或组织的生物样品，例如乳腺组织样品或原发乳腺肿瘤组织样品。“生物样品”或“样本”意指任何在其中可以检测内在基因表达的细胞、组织、或体液的取样。这种生物样品的实例包括，但不限于活组织检查和涂片。可用于本发明的体液包括血液、淋巴液、尿液、唾液、***抽吸液、妇科液体、或任何其它身体分泌液或其衍生物。血液可以包括全血、血浆、血清或任何血液衍生物。在一些实施方案中，生物样品包括乳腺细胞，特别是来自活组织检查的乳腺组织，例如乳腺肿瘤组织样品。可以通过多种技术从主体获得生物样品，包括，例如通过刮擦或擦抹一个区域、通过使用针抽吸细胞或体液、或者通过移除组织样品(即活组织检查)。收集各种生物样品的方法是本领域熟知的。在一些实施方案中，通过，例如，细针抽吸活检，穿刺活检，或切除活检获得乳腺组织样品。可以对细胞或组织应用固定剂和染色液以保存样本并便于检查。生物样品，特别是乳腺组织样品，可以转移至载玻片以进行放大观察。在一个实施方案中，生物样品是***固定、石蜡包埋的乳腺组织样品，特别是原发乳腺肿瘤样品。在不同的实施方案中，从病理学家指导的组织核心样品获得组织样品。

本发明的优点和有益效果：

本发明首次发现了LINC02343基因的表达水平与乳腺癌相关，LINC02343在乳腺癌患者中表达上调，通过检测受试者样本中LINC02343的表达水平，可以判断受试者是否患有乳腺癌，以及患乳腺癌的风险，从而指导临床医师给受试者提供预防方案或者治疗方案，同时采用分子标记物进行诊断，具有及时性、灵敏性、特异性。

附图说明

图1是利用QPCR检测LINC02343基因在乳腺癌组织中的表达情况图。

图2是利用QPCR检测siRNA沉默LINC02343的情况图。

图3是利用CCK检测LINC02343对MCF-7细胞的增殖影响图。

图4是利用Transwell小室检测LINC02343对MCF-7细胞迁移侵袭能力的影响图，其中图A是细胞迁移图，图B是细胞侵袭图。

具体的实施方式

下面结合附图和实施例对本发明作进一步详细的说明。以下实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。

实施例1筛选与乳腺癌相关的基因标志物

1、样品收集

分别收集4例Luminal A型乳腺癌的癌组织及相对应的正常组织样本(距离肿瘤边缘5公分)，进行高通量测序，所有患者术前未进行化疗、放疗以及内分泌治疗。

2、RNA样品的制备及质量分析

使用Takara RNA提取试剂盒(Code NO.9767)提取组织中的RNA，步骤如下：

1)将新鲜的或超低温冻存的动物组织样品迅速转移至液氮预冷的研钵中，用研杵研磨组织，其间不断加入液氮，直至研磨成粉末状。将研磨成粉末状的样品加入到含有裂解Buffer RL的1.5ml灭菌离心管中，用移液器反复吹打直至裂解液中无明显沉淀。

2)将裂解液在12,000rpm，4℃离心5min。

3)小心吸取上清液到新的1.5ml RNase Free Tube中。

4)加入与液体等体积的70％乙醇，使用移液枪将溶液混合均匀。

5)立即将混合液全部转入到RNA Spin Column中。

6)12,000rpm，离心1min，弃滤液。将RNA Spin Column放回到2ml收集管中。

7)将500μl的Buffer RWA加入至RNA Spin Column中，12,000rpm离心30s，弃滤液。

8)将600μl的Buffer RWB加入至RNA Spin Column中，12,000rpm离心30s，弃滤液。

9)重复步骤8)。

10)将RNA Spin Column重新安置于2ml收集管上，12,000rpm离心2min。

11)将RNA Spin Column安置于1.5ml的无RNA酶收集管上，在RNA Spin Column膜中央处加入50～200μl的RNase Free dH₂O或0.1％DEPC处理水，室温静置5min。

12)12,000rpm离心2min洗脱RNA。

13)检测RNA浓度，鉴定RNA的产量和纯度。

3、cDNA文库的构建及测序

1)总RNA DNase I消化：利用DNase I消化Total RNA样品中存在的DNA片段，磁珠纯化回收反应产物，最后溶解于DEPC水；

2)去除rRNA：取消化好的Total RNA样品，使用Epicentre的Ribo-Zero试剂盒去除rRNA，去除之后进行Agilent 2100检测，验证rRNA去除效果；

3)RNA打断：取上一步样品，加入打断Buffer，置于PCR仪中进行热打断，打断到140-160nt；

4)反转录一链的合成：向打断后的样品中加入适量引物，充分混匀后在Thermomixer适温反应一定时间，使之打开二级结构并与引物结合，再加入提前配制的一链合成反应体系Mix，在PCR仪上按相应程序合成一链cDNA；

5)反转录二链的合成：配制二链合成反应体系，在Thermomixer上适温反应一定时间，合成带有dUTP的二链cDNA，反应产物用磁珠进行纯化回收；

6)末端修复：配制末端修复反应体系，在Thermomixer中适温反应一定时间，在酶的作用下，对反转录得到的cDNA双链的粘性末端进行修复，末端修复产物用磁珠进行纯化回收，最后将样品溶于EB Solution；

7)cDNA 3’末端加“A”：配制加“A”反应体系，在Thermomixer中适温反应一定时间，在酶的作用下，使末端修复的产物cDNA的3’末端加上A碱基；

8)cDNA 5’adapter的连接：配制接头连接反应体系，在Thermomixer中适温反应一定时间，在酶的作用下，使接头与A碱基连接，产物用磁珠进行纯化回收；

9)UNG消化cDNA二链：配制UNG消化反应体系，通过UNG酶消化掉双链DNA中的二链，并用磁珠对产物进行纯化回收；

10)PCR反应及产物回收：配制PCR反应体系，选择适当的PCR反应程序，对上步骤得到的产物进行扩增，对PCR产物进行磁珠纯化回收，回收产物溶于EB溶液中，贴上标签。

11)文库质量检测：使用Agilent 2100Bioanalyzer和ABI StepOnePlus Real-Time PCR System对文库质量进行检测；

12)上机测序：检测合格的文库，加入NaOH变性成单链，按照预期上机数据量，稀释至一定的上机浓度。变性稀释后的文库加入到FlowCell内，与FlowCell上的接头杂交，在cBot上完成桥式PCR扩增，最后使用Illumina Hiseq x-ten平台进行测序。

4、生物信息学分析

1)用cutadapt对reads的5’和3’段进行trim，trim掉质量<20的碱基，并且删掉N大于10％的reads；

2)hisat2比对到参考基因组上。参考基因组来自于Ensembl数据库，基因组版本GRCh38，基因注释信息为Ensemble 92；

3)stringtie定量lncRNA的表达量并标准化输出；

4)edgeR包比较对照组跟疾病组lncRNA的表达差异，差异变动lncRNA的筛选标准是|log₂FC|>1且pvalue<0.05。

5、结果

测序数据如表1所示，生物信息学分析发现，LINC02343在乳腺癌患者中表达显著上调，提示LINC02343可能作为检测靶标应用于乳腺癌的早期诊断。

表1测序数据

实施例2 QPCR测序验证LINC02343基因的差异表达

1、按照实施例1的收集方式收集的25例Luminal A型乳腺癌患者癌组织样本和正常组织样本对LINC02343基因差异表达进行大样本QPCR验证。

2、RNA提取

Takara RNA提取试剂盒(Code NO.9767)提取组织中的RNA，具体步骤参见实施例1。

3、QPCR

根据LINC02343和GADPH的基因序列设计引物，引物序列如表2所示。

表2扩增引物

使用TaKaRa One Step TB Green^TM Prime Script^TM RT-PCR试剂盒(CodeNo.RR066A)进行PCR反应，反应体系和反应条件如表3所示。在Thermal CyclerRealTime System扩增仪上进行PCR扩增，反应结束后确认Real Time PCR的扩增曲线和溶解曲线，ΔΔCT法进行相对定量。

表3 QPCR反应体系和反应条件

4、结果

QPCR结果如图1所示，与正常组织相比，LINC02343在Luminal A型乳腺癌组织中表达上调，差异具有统计学意义(P<0.05)，同高通量测序结果一致。其中，LINC02343在23例癌组织中表达上调，2例无显著变化，LINC02343在1例正常组织中表达上调，在其余24例正常组织中则无显著变化，提示可通过检测LINC02343的水平判断受试者是否患有乳腺癌，当LINC02343的水平显著增加时，受试者患有乳腺癌或者存在患有乳腺癌的风险，通过LINC02343与乳腺癌之间的关系可以设计靶向LINC02343的shRNA、siRNA从而治疗乳腺癌，同时可以基于LINC02343与乳腺癌的关系，构建预测乳腺癌的计算模型。

实施例3 LINC02343在乳腺癌细胞系中的表达情况

1、细胞培养

培养Luminal A型乳腺癌的MCF-7细胞系，于5％CO₂，37℃的恒温培养箱中进行培养，所有细胞培养基中加10％胎牛血清以及1％P/S。2-3天换液1次，使用0.25％含EDTA的胰蛋白酶进行常规消化，按1:3的比例将细胞进行传代。

2、siRNA序列

本申请所用的siRNA-NC、siRNA-LINC02343购自上海吉码制药技术有限公司，沉默LINC02343的序列如表4所示。

表4 siRNA序列

3、转染

使用Invitrogen公司的Lipofectamin^TM2000试剂进行细胞转染，将实验分为三组：对照组(MCF-7)、阴性对照组(siRNA-NC)和实验组(siRNA1、siRNA2、siRNA3)，其中阴性对照组siRNA与LINC02343基因的序列无同源性。

细胞转染前准备取培养箱中提前种植在6孔板中的细胞，用无血清的OPTI-MEM转染液冲洗转染细胞两次后，每孔中加入1500μl OPTI-MEM转染液，6孔板放回细胞培养箱中继续培养，转染时培养基内含有血清。将使用无血清的OPTI-MEM稀释的siRNA与Lipofectamine^TM试剂混匀后孵育15min，将孵育好的转染复合物加入细胞中于培养箱中进行培养，6h后弃掉转染液，细胞放回到培养箱内继续培养。

4、QPCR检测LINC02343的表达水平

1)RNA的提取

使用Takara RNA提取试剂盒(Code NO.9767)提取培养细胞中的总RNA。

2)QPCR检测步骤同实施例2

5、结果

siRNA1～3小分子对LINC02343都有较好的沉默效果，其中siRNA2的沉默效果最为显著(P<0.05)(图2)，因此选择siRNA2作为沉默序列应用于后续的功能验证，本实验中所有细胞实验均重复3次。

实施例4 CCK-8法检测LINC02343基因对乳腺癌细胞增殖的影响

用siRNA2转染的乳腺癌细胞作为实验组，siRNA-NC转染的细胞作为对照组，加入到96孔板中，每孔加入的细胞数量为3000个，每组设置5个复孔。分别用于24h、48h、72h、96h检测时间点检测。每隔24h细胞孔中加入10μl的CCK-8检测液，将96孔板继续放入细胞培养箱中孵育4h左右，用酶标仪检测各孔在450nm波长处的吸光度值并记录数据，连续测到96h。根据检测的OD值的平均值，绘制生长曲线。

生长曲线结果显示，实验组在转染siRNA2后，细胞的增殖能力明显低于对照组(图3)，说明LINC02343影响乳腺癌细胞的增殖，改变LINC02343的表达水平可以改变乳腺癌细胞的增殖能力。

实施例5 Transwell小室检测LINC02343对细胞迁移及侵袭的影响

1、Transwell小室制备

无菌条件下Matrigel冰浴融化后按1:8比例稀释Matrigel胶，在Transwell上室内部缓慢加入上室底部，铺胶后迅速移入37℃的细胞培养箱中温育至其凝固成胶状。

2、迁移实验中，上室加入数量为5×10⁴的100μl细胞悬液，下室加入600μl含10％胎牛血清培养基，每组设置3个复孔；侵袭实验中，向铺有Matrigel胶的上室中加入数量为1×10⁵的100μl细胞悬液，下室加入600μl含10％胎牛血清培养基，每组设置3个复孔；Transewll小室放入细胞培养箱内继续培养24h。

3、染色

取出Transwell用PBS洗2遍，使用多聚甲醛进行固定，加入结晶紫染色，室温染色20min，用PBS漂洗2遍，放入荧光显微镜下观察并计数。

4、结果

Transwell实验结果显示，转染siRNA2组的迁移(图4A)、侵袭(图4B)细胞数降低，说明细胞的迁移、侵袭能力较对照组受到抑制(P<0.05)，提示LINC02343可用于乳腺癌细胞的迁移、侵袭的治疗。

上述实施例的说明只是用于理解本发明的方法及其核心思想。应当指出，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以对本发明进行若干改进和修饰，这些改进和修饰也将落入本发明权利要求的保护范围内。

序列表

<110> 德阳市人民医院

<120> 一种诊治乳腺癌的生物标志物

<160> 10

<170> SIPOSequenceListing 1.0

<210> 1

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 1

ttaatctacc ttctgtga 18

<210> 2

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 2

caactatatg accttctg 18

<210> 3

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 3

aatcccatca ccatcttcca g 21

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 4

gagccccagc cttctccat 19

<210> 5

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 5

acaauucccu ucaguuuccc u 21

<210> 6

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 6

ggaaacugaa gggaauugug u 21

<210> 7

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 7

agugaaagug cucuguauga u 21

<210> 8

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 8

cauacagagc acuuucacug c 21

<210> 9

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 9

auugucauuu auuacacucu g 21

<210> 10

<211> 21

<212> RNA

<213> 人工序列(Artificial Sequence)

<400> 10

gaguguaaua aaugacaaug a 21

Claims

1.一种试剂，其特征在于，所述试剂能够检测样本中LINC02343的水平。

2.根据权利要求1所述的试剂，其特征在于，包括：

特异性识别LINC02343基因的探针；或

特异性扩增LINC02343基因的引物。

3.根据权利要求2所述的试剂，其特征在于，特异性扩增LINC02343的引物序列如SEQID NO.1～2所示。

4.一种试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括权利要求1-3任一项所述的试剂。

5.一种芯片，其特征在于，所述芯片包括权利要求1-3任一项所述的试剂。

6.一种核酸膜条，其特征在于，所述核酸膜条包括权利要求1-3任一项所述的试剂。

7.一种组合物，其特征在于，所述组合物包括LINC02343的抑制剂。

8.根据权利要求7所述的组合物，其特征在于，所述抑制剂为siRNA。

9.一种筛选治疗乳腺癌的候选药物的方法，其特征在于，所述方法包括：

用待筛选物质处理表达或含有LINC02343的培养体系；和

检测所述体系中LINC02343的表达水平；

10.如下任一项所述的应用：

a.权利要求1-3任一项所述的试剂、权利要求4所述的试剂盒、权利要求5所述的芯片、权利要求6所述的核酸膜条在制备早期诊断乳腺癌的产品中的应用；

b.权利要求7或8所述的组合物在制备治疗乳腺癌的药物中的应用；

c.权利要求9所述的方法在筛选治疗乳腺癌的候选药物中的应用；

d.LINC02343在制备治疗乳腺癌的药物中的应用；

e.LINC02343在构建诊断乳腺癌的计算模型中的应用。