CN110483394A - 一种化合物的应用 - Google Patents

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Abstract

本发明属于生物技术的领域，尤其涉及一种化合物的应用。本申请公开了一种化合物在制备检测核酸的荧光探针中的应用，其中，所述化合物具有如式Ⅰ的结构。本申请的化合物在检测水溶液中、凝胶中和细胞中核酸的应用。本发明的化合物在活细胞中标记或显示核酸和核仁分布的应用。本发明化合物Ⅰ选择性强，可用于检测不同类型的核酸，本发明的化合物Ⅰ具有低生物毒性和膜通透性好的特点，根据实验结果可知，还具有显色强、灵敏度高、复染兼容性好、光稳定性较强的特点。

Description

一种化合物的应用
技术领域
本发明属于生物技术的领域，尤其涉及一种化合物的应用。
背景技术
核酸作为一种重要的生物大分子，在活细胞中承担各种重要的生物功能，常见的核酸有RNA、双链DNA、G-四链体DNA等。RNA在活细胞中能够编码，转录和控制基因的表达，调节多种生命活动。G-四链体DNA主要位于基因端粒、启动子等重要位点，承担着生物开关的重要作用。因此，开发性能优异的核酸荧光探针对核酸的形态和功能进行研究有着十分重要的意义。
作为核酸荧光探针的重要一员，小分子探针能与特定的靶分子进行特异性相互作用，并能被特殊的检测技术所探知，小分子探针是指针对某种特定目标生物分子或生物离子的开发的探测器。与普通的检测技术相比，探针技术具有灵敏度高、专一性强、快速准确等优点，适用于分子影像和实时监测。
目前的核酸探针种类很多，例如G-四链体DNA荧光探针和RNA荧光探针。但是，在实际成像应用中存在一些缺陷，现有的G-四链体DNA荧光探针或RNA荧光探针选择性低、具有光致毒性大和光稳定性差等缺点，这些缺陷影响其应用价值。
发明内容
本申请提供了一种化合物的应用以及检测核酸的方法，有效解决了现有技术中核酸探针存在选择性低、具有光致毒性大和光稳定性差的技术问题。
有鉴于此，本申请公开了一种化合物在制备检测核酸的荧光探针中的应用，其中，所述化合物具有如下式Ⅰ的结构，
所述R1选自 所述R2选自
所述R3选自1至n个碳原子的烷基；所述R4选自1至n个碳原子的直链烷基，或1至n个碳原子的支链烷基，或所述R5选自H或-CH3。
更为优选，所述R5选自-CH3。
作为优选，所述R3选自-CH3。
作为优选，所述R4选自-CH3CH2CH2的直链烷烃或-CH3CH2CH2CH2的直链烷烃。
作为优选，所述核酸包括DNA或/和RNA。
作为优选，所述DNA为水溶液中的DNA、凝胶中的DNA、细胞质中的DNA或细胞核中的DNA；所述RNA为水溶液中的RNA、凝胶中的RNA、细胞质中的RNA或细胞核中的RNA。
具体的，本申请公开了化合物Ⅰ在标记或显示核酸和核仁在活细胞中分布的应用。实验结果证实，利用本发明化合物Ⅰ标记后的荧光图像显示，在细胞质和核仁区有明显的红光分布，明确提示本发明化合物Ⅰ能够在活细胞中专一性的成像胞质和核仁中的核酸。
其中，所述凝胶为琼脂糖凝胶或聚丙烯酰胺凝胶。
作为优选，所述DNA包括单链DNA、双链DNA和G-四链体DNA中的一种或多种。
具体的，本申请涉及的化合物Ⅰ由于具有较大的电子共轭体系和平面，与G-四链体DNA和dsDNA发生特异性的堆积作用后，荧光光谱发生明显变化，荧光强度增加百倍，甚至只需普通紫外灯照射下，可肉眼观察，同时与其他的核酸作用较弱，没有明显的荧光信号响应，使本申请的化合物Ⅰ具有很好的特异性识别作用。当将本申请的化合物Ⅰ与不同的核酸混合时，当核酸为G-四链体DNA时，其与化合物Ⅰ分子间的特异性作用，产生荧光光谱的改变，挑选出其为G-四链体探针。当核酸为双链DNA，其与化合物Ⅰ分子间的特异性作用，产生荧光光谱的改变，挑选出其为双链DNA探针。单链DNA则不会产生明显的信号变化。
更为优选，化合物Ⅳ在制备检测水溶液中、凝胶中和细胞中G-四链体DNA的应用。
作为优选，所述单链DNA包括dt21单链DNA。
作为优选，所述双链DNA包括4at双链DNA、ds12双链DNA和ds26双链DNA中的一种或多种。
作为优选，所述G-四链体DNA包括Telo21 G-四链体DNA、Pu27 G-四链体DNA、Htg22G-四链体DNA、Oxy28 G-四链体DNA、pu22 G-四链体DNA、4telo21 G-四链体DNA、ckit2 G-四链体DNA。
作为优选，所述RNA为mRNA。
本申请涉及的化合物Ⅰ由于具有较大的电子共轭体系和平面，与RNA发生特异性的堆积作用后，荧光光谱发生明显变化，荧光强度增加百倍，甚至只需普通紫外灯照射下，可肉眼观察，同时与其他的核酸作用较弱，没有明显的荧光信号响应，使本申请的化合物Ⅰ具有很好的特异性识别作用。当核酸为RNA，其与化合物Ⅰ间的特异性作用，产生荧光光谱的改变，挑选出其为RNA探针。
更为优选，化合物Ⅱ在制备检测水溶液中、凝胶中和细胞中RNA的应用。
具体的，所述检测核酸的波长范围为425nm～490nm。
更优选的，化合物Ⅱ可用于检测RNA、双链DNA、G-四链体DNA，其中，检测RNA的荧光强度为：500～600，检测双链DNA的荧光强度为：700～800，检测G-四链体DNA的荧光强度为：600～700。
化合物Ⅲ可用于检测RNA和G-四链体DNA，其中，检测RNA的荧光强度为：100～200，检测G-四链体DNA的荧光强度为：150～300。
化合物Ⅳ可用于检测G-四链体DNA，其中，检测G-四链体DNA的荧光强度为：300～700。
化合物Ⅴ可用于检测G-四链体DNA，其中，检测G-四链体DNA的荧光强度为：300～700。
化合物Ⅵ可用于检测RNA和G-四链体DNA；其中，检测RNA的荧光强度为：150～200，检测G-四链体DNA的荧光强度为：300～700。
化合物Ⅶ可用于检测RNA、单链DNA、双链DNA和G-四链体DNA，其中，检测RNA的荧光强度为：300～400，检测单链DNA的荧光强度为：150～200；检测双链DNA的荧光强度为：300～650，检测G-四链体DNA的荧光强度为：500～600。
本申请还提供了一种检测核酸的方法，包括以下步骤：
将化合物与待检测物混合，进行荧光检测，根据检测到的荧光强度，判断得到待检测物的核酸种类；
其中，所述化合物具有如下式Ⅰ的结构，
所述R1选自 所述R2选自
所述R3选自1至4个碳原子的烷基；所述R4选自3至4个碳原子的直链烷基，或3至4个碳原子的支链烷基，或所述R5选自-CH3或H；
所述待检测物包括核酸。
其中，本申请的方法可以判断待检测物的单链核酸，双链核酸还是G-四链体DNA。
从以上技术方案可以看出，本申请具有以下优点：
本申请发现化合物Ⅰ具有检测核酸的作用，化合物Ⅰ可以通过与G-四链体形成Π-Π堆积结合核酸，也可以通过***核酸的沟槽，也可以基于化合物Ⅰ带正电，而核酸的磷酸骨架带负电，通过静电作用结合核酸，进而化合物Ⅰ结合在核酸中，通过荧光检测化合物的波长定性检测核酸，通过荧光光谱实验证明，本发明提供的化合物Ⅰ用于制备一系列新型的G-四链体DNA、dsDNA和RNA的选择性识别荧光探针分子，与现有的功能相近的荧光探针比，本发明化合物Ⅰ选择性强，可用于检测不同类型的核酸，基于化合物Ⅰ的结构特性，本发明的化合物Ⅰ为喹啉衍生物，喹啉衍生物具有低生物毒性和膜通透性好的特点，根据实验结果可知，本发明的化合物Ⅰ还具有显色强、灵敏度高、复染兼容性好、光稳定性较强的特点，用于制备检测G-四链体DNA、dsDNA和RNA的核酸探针，以及核仁相关的生理和病理学研究用简捷、直观的生物检测试剂。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍。
图1为本申请实施例的化合物Ⅱ的氢谱图；
图2为本申请实施例的化合物Ⅱ的质谱图；
图3为本申请实施例的化合物Ⅲ的氢谱图；
图4为本申请实施例的化合物Ⅲ的质谱图；
图5为本申请实施例的化合物Ⅳ的氢谱图；
图6为本申请实施例的化合物Ⅳ的质谱图；
图7为本申请实施例的化合物Ⅴ的氢谱图；
图8为本申请实施例的化合物Ⅴ的质谱图；
图9为本申请实施例的化合物Ⅵ的氢谱图；
图10为本申请实施例的化合物Ⅵ的质谱图；
图11为本申请实施例的化合物Ⅶ的氢谱图；
图12为本申请实施例的化合物Ⅶ的质谱图；
图13为本申请实施例的化合物Ⅱ的滴定RNA、dt21、4at、ds26、telo21、pu27、htg22、oxy28的荧光数据的柱状图；
图14为本申请实施例的化合物Ⅲ的滴定RNA、dt21、4at、ds26、telo21、pu27、htg22、oxy28的荧光数据的柱状图；
图15为本申请实施例的化合物Ⅳ的滴定RNA、dt21、4at、ds26、telo21、pu27、htg22、oxy28的荧光数据的柱状图；
图16为本申请实施例的化合物Ⅴ的滴定RNA、dt21、4at、ds26、telo21、pu27、htg22、oxy28的荧光数据的柱状图
图17为本申请实施例的化合物Ⅵ的滴定RNA、dt21、4at、ds26、telo21、pu27、htg22、oxy28的荧光数据的柱状图；
图18为本申请实施例的化合物Ⅶ的滴定RNA、dt21、4at、ds26、telo21、pu27、htg22、oxy28的荧光数据的柱状图；
图19为本申请实施例的化合物Ⅳ滴定RNA、dt21、4at、ds26、telo21、pu27、htg22、oxy28的荧光数据曲线；
图20为本申请实施例的化合物Ⅳ滴定Oxy28(G-四链体DNA)的荧光光谱中Oxy28(G-四链体DNA)的浓度与(F-F0)/F0拟合的曲线；
图21为本申请实施例的化合物Ⅳ与RNA、dt21(单链DNA)、4at(双链DNA)、ds26(双链DNA)、Telo21(G-四链体DNA)、Pu27(G-四链体DNA)、Htg22(G-四链体DNA)、Oxy28(G-四链体DNA)八种核酸与空白对照在紫外灯下溶液的图，其中，1为空白对照，2为RNA，3为dt21(单链DNA)，4为4at(双链DNA)，5为ds26(双链DNA)，6为Oxy28(G-四链体DNA)，7为Htg22(G-四链体DNA)，8为Pu27(G-四链体DNA)，9为Telo21(G-四链体DNA)；
图22为本申请实施例的化合物Ⅳ与RNA、dt21(单链DNA)、4at(双链DNA)、ds26(双链DNA)、Telo21(G-四链体DNA)、Pu27(G-四链体DNA)、Htg22(G-四链体DNA)、Oxy28(G-四链体DNA)八种核酸的凝胶电泳图；
图23为本申请实施例的化合物Ⅳ与染料DAPI复染PC3细胞的细胞成像图，其中，A为明场下的细胞图，B为DAPI染料的检测波长下的细胞成像，C为化合物Ⅳ的检测波长下的细胞成像。
具体实施方式
本发明提供了化合物的应用以及检测核酸的方法，有效解决了现有技术中核酸探针存在选择性低、具有光致毒性大和光稳定性差的技术问题。
下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
其中，以下实施例所用原料均为市售或自制，化合物Ⅰ可以购买或自制。
本申请的化合物Ⅰ的合成路线如下：
将与烷基碘反应，得到化合物将和相应的胺反应得到将与反应得到化合物Ⅱ-Ⅶ。
其中，化合物Ⅱ，化合物Ⅲ，化合物Ⅳ，化合物Ⅴ，化合物Ⅵ，化合物Ⅶ。
以化合物Ⅱ的合成为例，其余化合物合成路线相似：
具体的，化合物1a的制备方法如下：往25ml圆底烧瓶里称取4-氯二甲基喹啉0.2g(1.130mmol)，加入6倍摩尔量的碘甲烷约1.2g，环丁砜5.0ml，将混合物加热到60℃，反应6个小时后，冷却，加入乙酸乙酯后震荡，抽滤，固体用乙酸乙酯洗涤，真空干燥后称重，薄层色谱法初步表明没有副产物，得到0.182g的化合物1a；往25ml圆底烧瓶里称取0.1g的化合物1a，加入2倍摩尔量的吡咯约50微升，甲醇2.5mL，室温下搅拌过夜，加入乙酸乙酯后震荡，抽滤，固体用乙酸乙酯洗涤，真空干燥后称重，薄层色谱法初步表明没有副产物，得到0.095g化合物2a。
实施例1
本申请实施例提供了化合物Ⅱ的制备方法，具体步骤如下：
往25ml圆底烧瓶里称取0.09g的化合物2a，加入两倍摩尔量的对二甲氨基苯甲醛约0.085g，正丁醇2mL，140度反应4h，加入乙酸乙酯后震荡，抽滤，固体用乙酸乙酯洗涤，真空干燥后称重，薄层色谱法初步表明没有副产物，得到0.072g的化合物Ⅱ。按照化合物Ⅰ的合成路线，制备化合物Ⅴ、化合物Ⅵ和化合物Ⅶ。检测化合物Ⅱ、化合物Ⅲ、化合物Ⅳ、化合物Ⅴ、化合物Ⅵ和化合物Ⅶ的氢谱图和质谱图，结果如图1-12，从图1-12可知，本申请实施例成功制备得到化合物Ⅱ、化合物Ⅲ、化合物Ⅳ、化合物Ⅴ、化合物Ⅵ和化合物Ⅶ。
实施例2
本申请实施例提供了化合物Ⅱ、化合物Ⅲ、化合物Ⅳ、化合物Ⅴ、化合物Ⅵ和化合物Ⅶ分别对不同核酸选择性的荧光光谱实验，具体步骤如下：
分别将5mM的化合物Ⅱ、化合物Ⅲ、化合物Ⅳ、化合物Ⅴ、化合物Ⅵ和化合物Ⅶ储备液稀释成5μM的浓度，分别在溶液中加入表1的不同种类的核酸，化合物与核酸混合的质量比例是1:2，然后用荧光分光光度计(狭缝宽度10nm，扫描速度400nm/min，激发波长454nm)测出其各自的荧光强度。结果如图13-18，从图13-18可知，化合物Ⅱ、化合物Ⅲ、化合物Ⅳ、化合物Ⅴ、化合物Ⅵ和化合物Ⅶ对不同种类的核酸具有一定的荧光强度。
表1
核酸类型 核酸序列5’-3’
RNA 从酵母中提取的RNA
ds26(双链DNA) CAATCGGATCGAATTCGATCCGATTG
dt21(单链DNA) TTTTTTTTTTTTTTTTTTTTT
4at(双链DNA) ATATATATATAT
Telo21(G-四链体DNA) GGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG
Pu27(G-四链体DNA) TGGGGAGGGTGGGGAGGGTGGGGAAGG
Htg22(G-四链体DNA) AGGGTTAGGGTTAGGGTTAGGG
Oxy28(G-四链体DNA) GGGGTTTTGGGGTTTTGGGGTTTTGGGG
实施例3
本申请实施例提供了化合物Ⅳ对不同核酸的荧光滴定实验，具体步骤如下：
将5mM的化合物Ⅳ储备液稀释成5μM的浓度，分别再加入表1的不同种类的核酸，然后放置于荧光分光光度计中，逐渐增加溶液中不同核酸的浓度，并进行荧光强度测定。测定条件为：狭缝宽度10nm，扫描速度400nm/min，激发波长450nm。结果如图19所示。从图19的荧光滴定数据可知，化合物Ⅳ对G-四链体DNA具有较高的荧光强度，而对其他的双链DNA、单链DNA的荧光强度较弱。随着核酸浓度的增加，荧光强度逐渐增强，且该荧光探针与Oxy28(G-四链体DNA)和Htg22(G-四链体DNA)相结合荧光强度较强，与其他核酸结合荧光相对弱，说明其对G-四链体有明显的选择性。
实施例4
本申请实施例提供了化合物Ⅳ对Oxy28(G-四链体DNA)检测限的测定，具体步骤如下：
将5mM的化合物Ⅳ储备液稀释成5μM的浓度，再在荧光分光光度计(狭缝宽度10nm，扫描速度200nm/min，激发波长450nm)扫描，再往其中慢慢加入Oxy28(G-四链体DNA)做到使其饱和。检测限的计算公式：
LOD＝K×Sb/m；
其中，K值按照国际纯粹和应用化学联合会建议通常取为3，Sb为荧光仪器多次空白测量所得的标准偏差，m为检测限的计算方法的灵敏度(在拟合曲线中线性关系好的浓度范围内曲线的斜率)，m是浓度C与(F-F0)/F0的所做直线的斜率。结果如图20所示，根据化合物Ⅳ滴定Oxy28(G-四链体DNA)的荧光光谱中Oxy28(G-四链体DNA)的浓度与(F-F0)/F0拟合的曲线，化合物Ⅳ测得的LOD为11.35nmol/L，与通用探针噻唑橙TO比较，化合物Ⅳ有较高的灵敏度。
实施例5
本申请实施例提供了化合物Ⅳ溶液体系荧光可视化实验，具体步骤如下：
在5μM的化合物Ⅳ溶液中加入RNA、dt21(单链DNA)、4at(双链DNA)、ds26(双链DNA)、Telo21(G-四链体DNA)、Pu27(G-四链体DNA)、Htg22(G-四链体DNA)、Oxy28(G-四链体DNA)八种核酸以及一个空白对照，在紫外灯的照射下拍照，结果如图21所示。由图21可知，化合物Ⅳ作用于细胞核及细胞质内的G-4DNA,同时也证明了该系列荧光配体能够在细胞体系对G-4DNA进行成像和检测。图21所示，从图13-18可知，化合物Ⅱ、化合物Ⅲ、化合物Ⅳ、化合物Ⅴ、化合物Ⅵ和化合物Ⅶ对不同种类的核酸具有荧光强度。从图21肉眼观察可知，化合物Ⅳ在水溶液中与Oxy28(G-四链体DNA)，Htg22(G-四链体DNA)的结合之后荧光强度最强，在水溶液中而与双链DNA和单链DNA的荧光信号较弱。
实施例6
本申请实施例提供了化合物Ⅳ与不同核酸的聚丙烯酰胺凝胶电泳实验，具体步骤如下：
1、溶液配制：将29g丙烯酰胺和1gN,N-亚甲基双烯酰胺定容到100ml后得到29％丙烯酰胺；N-N’-亚甲基双烯酰胺(1g)溶解于92mL超纯水中，超声10min溶解后定容到100mL得到1％N,N-亚甲基双烯酰胺溶液；用27g Tris、13.75g硼酸、2.08g EDTA和1L的去离子水配制成5×TBE电泳缓冲液。
2、制胶：将1.27mL水、29％丙烯酰胺、1％N,N-亚甲基双烯酰胺溶液一共6.65mL，2mL 5×TBE电泳缓冲液，0.07mL 10％过硫酸铵和3.5μL TEMED混合后打入玻璃夹板中，然后放入梳子，静置30min完成后静置至胶成型。
3、配样：将1.5μL核酸(分别标记为：RNA﹑dt21、ds26、4at﹑pu27﹑telo21﹑oxy28和htg22)，5μL 6×Loading baffer﹑23.5μL Tris-HCl缓冲溶液混合均匀，配成8个样。
4、跑胶：将配好的样加入到胶的每个跑道中，电泳液用1×TBE，电泳槽外加冰维持低温，开始跑胶。首先在60V电压下跑胶40min，等配好的样完全进入胶后，调节电压到120V，跑胶2.5小时。
(5)凝胶成像：跑胶完成后，小心取出胶，将其放于用Tris-HCl缓冲液稀释到5μM的化合物Ⅳ溶液中进行染色，避光摇晃20min，置于凝胶成像仪中成像和拍照，结果如图22所示。
从图22可知，说明本申请的化合物Ⅳ可以检测聚丙烯酰胺凝胶中的核酸。
实施例7
本申请实施例提供了化合物Ⅳ的细胞成像实验，具体步骤如下：
先将细胞接种于6孔板中，使细胞的密度约为5000个/mL，然后在37℃、5％CO2环境中培养70h。接着弃去6孔板中的细胞培养液，用预冷的1×PBS洗3次，然后再加入预冷的纯甲醇1.5mL常温避光放置2min，最后弃去纯甲醇并再用预冷的1×PBS洗3次，加入1mL的5μM的化合物Ⅳ然后放置20min。弃去6孔板中的化合物Ⅳ溶液，用预冷的1×PBS洗3次，在上述6孔板中加入1μM的DAPI溶液1mL并37℃放置2min，然后再用预冷的1×PBS洗6次，每次浸泡5min。在倒置荧光显微镜下观察细胞染色情况，结果如图23所示。由图23可知，化合物Ⅳ作用于细胞核内的G-四链体DNA，同时也证明了本申请的化合物Ⅳ能够在细胞核对G-四链体DNA进行成像和检测。A图为细胞成像的明场图，用于观察细胞的形态；B图为对细胞用DAPI进行染色，DAPI可对整个细胞核进行染色，C图为化合物Ⅳ对细胞进行染色，可以看到化合物Ⅳ对核仁的染色较明显，而核仁区域富含G-四链体DNA，因此通过ABC三个图，可看到化合物Ⅳ可在细胞体系中检测G-四链体DNA。
本申请的说明书及上述附图中的术语“第一”、“第二”、“第三”、“第四”等(如果存在)是用于区别类似的对象，而不必用于描述特定的顺序或先后次序。应该理解这样使用的数据在适当情况下可以互换，以便这里描述的本申请的实施例例如能够以除了在这里图示或描述的那些以外的顺序实施。此外，术语“包括”和“具有”以及他们的任何变形，意图在于覆盖不排他的包含，例如，包含了一系列步骤或单元的过程、方法、***、产品或设备不必限于清楚地列出的那些步骤或单元，而是可包括没有清楚地列出的或对于这些过程、方法、产品或设备固有的其它步骤或单元。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种化合物在制备检测核酸的荧光探针中的应用，其中，所述化合物具有如下式Ⅰ的结构，
所述R1选自 所述R2选自
所述R3选自1至4个碳原子的烷基；所述R4选自3至4个碳原子的直链烷基，或3至4个碳原子的支链烷基，或所述R5选自-CH3或H。
2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述R3选自-CH3。
3.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述R4选自-CH3CH2CH2的直链烷烃或-CH3CH2CH2CH2的直链烷烃。
4.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述核酸包括DNA或/和RNA。
5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述DNA为水溶液中的DNA、凝胶中的DNA、细胞质中的DNA或细胞核中的DNA；所述RNA为水溶液中的RNA、凝胶中的RNA、细胞质中的RNA或细胞核中的RNA。
6.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述DNA包括单链DNA、双链DNA和G-四链体DNA中的一种或多种。
7.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述单链DNA包括dt21单链DNA。
8.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述双链DNA包括4at双链DNA、ds12双链DNA和ds26双链DNA中的一种或多种。
9.根据权利要求6所述的应用，其特征在于，所述G-四链体DNA包括Telo21 G-四链体DNA、Pu27 G-四链体DNA、Htg22 G-四链体DNA、Oxy28 G-四链体DNA、pu22 G-四链体DNA、4telo21 G-四链体DNA、ckit2 G-四链体DNA。
10.根据权利要求4所述的应用，其特征在于，所述RNA选自mRNA。
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