CN110461831B - 作为登革热病毒复制抑制剂的经取代的二氢吲哚衍生物 - Google Patents

Abstract

本发明涉及经取代的二氢吲哚衍生物，通过使用所述化合物预防或治疗登革热病毒感染的方法，并且还涉及所述化合物用作药物、更优选地用作治疗或预防登革热病毒感染的药物。此外，本发明涉及这些化合物的药物组合物或组合制剂，涉及用作药物、更优选地用于预防或治疗登革热病毒感染的组合物或制剂。本发明还涉及用于制备这些化合物的方法。

Description

作为登革热病毒复制抑制剂的经取代的二氢吲哚衍生物

本发明涉及经取代的二氢吲哚衍生物，通过使用所述化合物预防或治疗登革热病毒感染的方法，并且还涉及所述化合物用作药物、更优选地用作治疗或预防登革热病毒感染的药物。此外，本发明涉及这些化合物的药物组合物或组合制剂，涉及用作药物、更优选地用于预防或治疗登革热病毒感染的组合物或制剂。本发明还涉及用于制备这些化合物的方法。

背景技术

通过蚊子或蜱传播的黄病毒在人中引起危及生命的感染，如脑炎和出血热。已知黄病毒登革热的四种不同的但密切相关的血清型，所谓的DENV-1、-2、-3和-4。登革热是在全世界大多数热带和亚热带地区地方性的，主要在城市和半城市地区。根据世界卫生组织(WHO)，25亿人(其中10亿儿童)处于DENV感染的风险(WHO，2002)。估计每年在世界范围内发生5000万至1亿登革热[DF]病例、50万严重登革热疾病(即登革出血热[DHF]和登革休克综合征[DSS])病例以及超过20,000例死亡。DHF已经成为流行地区中儿童之中住院和死亡的一个主要原因。总而言之，登革热代表虫媒病毒(arboviral)疾病的最常见原因。由于在位于拉丁美洲、东南亚和西太平洋的国家(包括巴西、波多黎各、委内瑞拉、柬埔寨、印度尼西亚、越南、泰国)中的最近大暴发，登革热病例的数量已经在过去几年急剧上升。随着疾病传播至新的区域，不仅登革热病例的数量在增加，而且暴发倾向于更严重。

虽然随着

疫苗的可用性，针对登革热的疫苗开发正在取得进展，但是遇到许多困难。这些困难包括被称为抗体依赖性增强作用(ADE)的现象的存在。从一种血清型感染中恢复提供针对该血清型的终身免疫，但是仅赋予针对其他三种血清型中的一种的随后感染的部分和短暂保护。

在感染另一种血清型之后，预先存在的异源抗体与新感染的登革病毒血清型形成复合物，但是不中和病原体。相反，据信促进病毒进入细胞，从而导致不受控制的病毒复制和更高的峰病毒滴度。在原发感染和继发感染两者中，更高的病毒滴度与更严重的登革热疾病相关。因为母体抗体能够容易地通过母乳喂养传递至婴儿，所以这可能是儿童比成年人更多受严重登革热疾病影响的原因之一。

在具有两种或更多种血清型同时流通的区域(还被称为超流行地区)，严重登革热疾病的风险显著更高，这是由于经历继发性、更严重感染的风险增加。此外，在超流行性的情况下，更强毒株出现的概率增加，这进而增加登革出血热(DHF)或登革休克综合征的概率。

携带登革热的蚊子，包括埃及伊蚊(Aedes aegypti)和白纹伊蚊(Aedesalbopictus)(虎斑蚊(tiger mosquito))在地球上向北方移动。根据美国(US)疾病控制与预防中心(CDC)，两种蚊子当前在得克萨斯州南部普遍存在。携带登革热的蚊子向北传播不限于美国，而且也已在欧洲观察到。

在墨西哥首次批准了由赛诺菲巴斯德公司(Sanofi Pasteur)生产的登革热疫苗

并在同时获得更多国家的批准。尽管如此，由于功效有限，尤其是针对DENV-1和DENV-2，在黄病毒初次感染受试者中的功效低和漫长的给药方案，该疫苗留下了相当大的改进余地。

尽管存在这些缺点，该疫苗是流行地区的规则改变者，因为它将为大部分人群提供保护，但是可能不能保护非常小的婴儿，这些婴儿承载着登革热的最大负担。此外，给药方案和在黄病毒初次感染受试者中的功效非常有限使它对于从非流行地区到登革热流行地区的游客而言是不合适的并且可能是不值得的/成本有效的。登革热疫苗的上述缺点是为何需要预暴露预防性登革热抗病毒剂的原因。

此外，当前不可获得用于治疗或预防登革热病毒感染的特异性抗病毒药物。显然，对于用于预防或治疗动物中(更具体地人中)的病毒感染并且尤其是针对由黄病毒(更具体地登革病毒)引起的病毒感染的治疗剂仍然存在巨大未满足的医学需求。高度需要具有良好抗病毒效力、无副作用或低水平的副作用、针对多种登革热病毒血清型的广谱活性、低毒性和/或良好药代动力学或药效-动力学特性的化合物。

WO-2010/021878披露了2-苯基吡咯烷和二氢吲哚衍生物作为冷薄荷醇受体拮抗剂用于治疗炎性疾病和中央疾病(central disease)。WO-2013/045516披露了吲哚和二氢吲哚衍生物用于治疗登革热病毒感染。

本发明现在提供化合物、经取代的二氢吲哚衍生物，这些化合物显示针对所有四种(4)登革热病毒血清型的高效活性。

发明内容

本发明是基于上文提到的问题中的至少一个可以通过本发明的当前化合物来解决的出人意料的发现。

本发明提供化合物，这些化合物已显示具有针对当前已知的所有四种(4)血清型的有效抗病毒活性。此外，本发明证明这些化合物有效地抑制登革热病毒(DENV)的增殖。因此，这些化合物构成可用于治疗和/或预防动物、哺乳动物和人中的病毒感染，更具体地用于治疗和/或预防登革热病毒感染的一类有用的有效化合物。

此外，本发明涉及这类化合物作为药物的用途，并且涉及其用于制造用以治疗和/或预防动物或哺乳动物(更具体地人)中的病毒感染，特别是属于登革热病毒家族的病毒感染的药剂的用途。本发明还涉及用于制备所有这类化合物的方法，并且涉及包含有效量的这些化合物的药物组合物。

本发明还涉及一种通过向有需要的患者给予有效量的一种或多种这类化合物或其药学上可接受的盐任选地与一种或多种其他药物(像另一种抗病毒剂)的组合来治疗或预防人中的登革热病毒感染的方法。

本发明的一个方面提供具有式(I)的化合物，该化合物包括其任何立体化学异构形式：

其中

R¹是氯或氟；

R²是-CH₂CH₂OH、或C_3-5烷基COOH；

R³是三氟甲基、或三氟甲氧基；

R⁴是氢、氟、或甲氧基；以及

R⁵是氢或甲基；

或其药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物。

如此用使用的术语“C_3-5烷基”定义了具有从3个至5个碳原子的直链和支链饱和的烃基，例如像，丙基、丁基、戊基、1,1-二甲基丙基、2-甲基丙基、2-甲基丁基等等。

具体地，上述化合物选自下组，该组由以下组成：

本发明的一部分还是药物组合物，该药物组合物包含以上提及的化合物或其立体异构形式、药学上可接受的盐、溶剂化物或多晶型物，连同一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。

所述化合物的药学上可接受的盐包括其酸加成盐和碱盐。合适的酸加成盐是从形成无毒盐的酸形成的。合适的碱盐是从形成无毒盐的碱形成的。

如上文所提及的药学上可接受的酸加成盐意指包含具有式(I)的化合物所能形成的治疗活性的无毒酸加成盐形式。这些药学上可接受的酸加成盐可以方便地通过用这种适当的酸来处理碱形式来获得。适当的酸包括例如，无机酸，如氢卤酸(例如盐酸或氢溴酸)、硫酸、硝酸、磷酸以及类似酸；或有机酸，例如像乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(即乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己氨基磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、双羟萘酸以及类似酸。

本发明的化合物还可以按非溶剂化的和溶剂化的形式存在。术语“溶剂化物”在此用以描述包含本发明的化合物以及一种或多种药学上可接受的溶剂分子(例如，乙醇)的分子复合物。

术语“多晶型物”是指本发明的化合物能够以一种以上的形式或晶体结构存在。

可以将本发明的化合物以晶态的或非晶态的产品给予。其可通过如沉淀、结晶、冷冻干燥、喷雾干燥或蒸发干燥等方法以例如固体填料、粉末或膜形式获得。它们可以单独给予或与一种或多种本发明的其他化合物组合给予或与一种或多种其他药物组合给予。通常，它们将作为与一种或多种药学上可接受的赋形剂相缔合的一种制剂给予。术语“赋形剂”在此用以描述除本发明的一种或多种化合物之外的任何成分。赋形剂的选择大体上取决于如具体给予模式、赋形剂对溶解性和稳定性的影响以及剂型的性质等因素。

本发明的化合物或其任何亚群可以被配制成用于给予目的不同药物形式。作为适当的组合物，可能引用了所有经常用于全身性给药的组合物。为了制备本发明的药物组合物，将作为活性成分的有效量的具体化合物(任选地呈加成盐形式)与药学上可接受的载体组合在紧密混合物中，该载体取决于用于给予所希望的制剂的形式可以采用多种形式。令人希望地，这些药物组合物处于适合于例如口服或经直肠给予的单位剂型。例如，在制备处于口服剂型的组合物中，可使用任何常见药物介质，在口服液体制剂(如悬浮液、糖浆剂、酏剂、乳液以及溶液)的情况下，例如像水、二醇类、油类、醇类等；或者在粉剂、丸剂、胶囊剂和片剂的情况中，固体载体诸如淀粉、糖、高岭土、稀释剂、润滑剂、粘合剂、崩解剂以及类似物。因为其容易给予，片剂和胶囊剂代表最有利的口服单位剂型，在该情况下显然使用固体药物载体。还包括在使用之前不久可以被转变为液体形式的固体形式制剂。

为了便于给予和剂量的均一性，将上述药物组合物配制成单位剂型是特别有利的。如在此使用的单位剂型指的是适合作为单位剂量的物理离散单位，各单位含有预定量的活性成分，该预定量的活性成分经计算与所需药物载体相结合而产生所希望的治疗效果。此类单位剂型的实例是片剂(包括刻痕或包衣的片剂)、胶囊剂、丸剂、粉末包(powderpacket)、糯米纸囊剂(wafer)、栓剂、可注射溶液或悬浮液以及类似剂型，及其分离的多剂量形式(multiples)。

在感染性疾病治疗领域中的普通技术人员将能够从下文所呈现的测试结果来确定有效量。通常，预期每日有效量将为从0.01mg/kg至50mg/kg体重，更优选从0.1mg/kg至10mg/kg体重。可以适当地将所需剂量在全天中以适当的时间间隔作为两个、三个、四个或更多个子剂量给予。所述子剂量可配制成单位剂型，例如每单位剂型包含1mg至1000mg，且具体来说5mg至200mg活性成分。

如本领域的普通技术人员所熟知的，给予的精确剂量和频率取决于本发明所使用的具体化合物、正在被治疗的具体病状、正在被治疗的病状的严重性、具体患者的年龄、体重和总体身体状况以及个体可能服用的其他药物。此外，显而易见的是可根据所治疗受试者的反应和/或根据用本发明的化合物开处方的医师的评估来降低或增加有效量。因此，上文所述的有效量范围仅为指导且并不打算在任何程度上限制本发明的范围或使用。

本披露还旨在包括存在于本发明的化合物中的原子的任何同位素。例如，氢的同位素包括氚和氘，并且碳的同位素包括C-13和C-14。

用于本发明中的这些化合物还可以其立体化学异构形式存在，从而定义由相同键序列键合的相同原子组成但具有不同三维结构的不可互换的所有可能的化合物。除非另外提及或指明，化合物的化学命名涵盖所述化合物可以具有的所有可能的立体化学异构形式的混合物。

所述混合物可以包含所述化合物的基本分子结构的所有非对映异构体和/或对映异构体。用于本发明中的处于纯形式的或彼此混合的化合物的所有立体化学异构形式旨在被涵盖于本发明的范围内，包括任何外消旋混合物或外消旋体。

在此提到的化合物和中间体的纯的立体异构形式被定义为基本上不具有所述化合物或中间体的相同基本分子结构的其他对映异构或非对映异构形式的异构体。具体地说，术语‘立体异构纯’涉及具有至少80％立体异构过量(即，最少90％的一种异构体和最大10％的其他可能的异构体)到100％立体异构过量(即，100％的一种异构体并且没有其他异构体)的化合物或中间体，更具体地具有90％至100％立体异构过量，甚至更具体地具有94％至100％立体异构过量并且最具体地具有97％至100％立体异构过量的化合物或中间体。应当以类似的方式理解术语‘对映异构纯’和‘非对映异构纯’，但是讨论中的分别是关于混合物中的对映异构过量以及非对映异构过量。

可以通过领域已知的程序的应用来获得用于本发明中的化合物和中间体的纯的立体异构形式。例如，对映异构体可以通过用光学活性酸或碱使它们的非对映异构盐进行选择性结晶而得以彼此分离。它们的实例是酒石酸、二苯甲酰基酒石酸、二甲苯甲酰基酒石酸以及樟脑磺酸。可替代地，可以通过使用手性固定相的层析技术分离对映异构体。所述纯的立体化学异构形式还可以衍生自适当起始材料的相对应的纯的立体化学异构形式，其前提是反应立体特异性地发生。优选地，如果一种具体的立体异构体是所希望的，那么所述化合物将通过立体专一的制备方法得以合成。这些方法将有利地使用对映异构体纯的起始材料。

本发明的具有式(I)的化合物均具有至少一个如下图所示的用*标记的碳原子表示的手性碳原子：

由于所述手性碳原子的存在，“式(I)的化合物”可以是(R)-对映异构体、(S)-对映异构体、外消旋体形式、或两种单独的对映异构体以任何比例的任何可能的组合。当不知道对映异构体的绝对(R)-或(S)-构型时，可以在测量所述具体的对映异构体的比旋光度之后，通过指示该对映异构体是否是右旋的(+)-或左旋的(-)-来鉴定此对映异构体。

在本发明的一方面中涉及第一组具有式(I)的化合物，其中该具有式(I)的化合物具有(+)比旋光度。

在本发明的另一方面中涉及第二组具有式(I)的化合物，其中该具有式(I)的化合物具有(-)比旋光度。

实例

LC/MS方法

使用LC泵、二极管阵列(DAD)或UV检测器以及如在对应的方法中所指定的柱进行高效液相色谱法(HPLC)测量。如果必要的话，包括其他检测器(参见下文的方法表格)。

将来自柱的流带至配置有大气压离子源的质谱仪(MS)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(MW)的离子在技术人员的知识内。利用适宜软件进行数据采集。

通过其实验保留时间(R_t)和离子描述化合物。如果未在数据表中不同地指定，那么报道的分子离子对应于[M+H]⁺(质子化的分子)和/或[M-H]^-(去质子的分子)。在该化合物不是直接可电离的情况下，指定加合物类型(即[M+NH₄]⁺、[M+HCOO]^-等)。对于具有多种同位素模式的分子(Br、Cl)来说，所报道的值是针对最低同位素质量获得的值。所获得的所有结果均具有实验不确定性，这通常与所使用方法相关。

下文中，“SQD”意指单四极检测器，“MSD”质量选择性检测器，“RT”室温，“BEH”桥连乙基硅氧烷/二氧化硅杂化体，“DAD”二极管阵列检测器，“HSS”高强度二氧化硅。

LC/MS方法代码(以mL/分钟来表示流量；以℃表示柱温度(T)；以分钟表示运行时间)。

SFC-MS方法

使用分析型超临界流体色谱法(SFC)***来进行SFC测量，该***由以下构成：用于递送二氧化碳(CO₂)和改性剂的二元泵、自动进样器、柱温箱、配备有经得起400巴的高压流动池的二极管阵列检测器。如果配置有质谱仪(MS)，来自该柱的流被引至该(MS)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(MW)的离子在技术人员的知识内。利用适宜软件进行数据采集。

分析型SFC/MS方法(以mL/min表示流量；以℃表示柱温度(T)；以分钟表示运行时间，以巴表示背压(BPR)。

熔点

值是峰值亦或熔融范围，并且所获得的值具有

通常与这种分析方法相关的实验不确定性。

DSC823e(指示为DSC)

对于多种化合物，熔点是用DSC823e(梅特勒-托利多(Mettler-Toledo))来确定的。使用10℃/分钟的温度梯度来测量熔点。最高温度是300℃。

旋光度：

在铂金埃尔默(Perkin-Elmer)341旋光计上用钠灯测量旋光度并且记录如下：[α]°(λ，c g/100ml，溶剂，T℃)。

[α]_λ ^T＝(100α)/(l×c)：其中l是以dm计的路径长度并且c是针对在温度T(℃)和波长λ(以nm计)下的样品的以g/100ml计的浓度。如果所使用的光波长是589nm(钠D线)，那么可以改为使用符号D。始终应给出旋转符号(+或-)。当使用这一等式时，常常在旋转后的括号中提供浓度和溶剂。使用度报道旋转并且浓度不带单位的给出(将其假定为g/100ml)。

实验部分使用的缩写

实例1：2-(4-氟-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮(化合物1)的合成以及手性分离为对映异构体1A和1B。

中间体1a的合成：

将4-氟-2-甲氧基苯基乙酸[CAS 886498-61-9](10g，54.3mmol)在EtOH(200mL)和H₂SO₄(2mL)中的溶液在回流下加热12h。添加水并将该混合物在减压下浓缩至初始体积的一半。添加冰。将该溶液用K₂CO₃碱化并用EtOAc萃取。将有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(4-氟-2-甲氧基苯基)乙酸乙基酯1a(11.6g)。将该化合物直接用于下个步骤。

中间体1b的合成：

在-30℃，将三溴化硼在CH₂Cl₂(109.3mL，109.3mmol)中的1M溶液逐滴添加至2-(4-氟-2-甲氧基苯基)乙酸乙基酯1a(11.6g，54.7mmol)于CH₂Cl₂(300mL)中的溶液中。将该反应在-20℃搅拌1h，并然后用CH₃OH淬灭。通过添加NaHCO₃的饱和水溶液将pH调节至8。将该溶液用CH₂Cl₂萃取并将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(4-氟-2-羟基苯基)乙酸乙基酯1b(10.8g)。将该化合物直接用于下个步骤而无需进一步纯化。

中间体1c的合成：

在10℃，向2-(4-氟-2-羟基苯基)乙酸乙基酯1b(10.6g，53.5mmol)和碳酸铯(34.8g，106.9mmol)于DMF(200mL)中的混合物中添加(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷[CAS 86864-60-0](13.8mL，64.2mmol)。将该反应混合物在室温搅拌过夜。添加H₂O并且将该反应混合物用EtOAc萃取。将有机相经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μM，40g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯级分合并并将溶剂在减压下去除以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)乙酸乙基酯1c(17.7g)。

中间体1d的合成：

向在-78℃冷却的1M双(三甲基甲硅烷基)胺基锂在THF(28.05mL，28.05mmol)中的溶液中添加2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)乙酸乙基酯1c(5g，14.03mmol)在THF(30mL)中的溶液。在-78℃搅拌1h之后，添加三甲基氯硅烷(2.85mL，22.4mmol)。将该反应混合物在-78℃搅拌15min。添加在THF(30mL)中的N-溴代琥珀酰亚胺(3g，16.8mmol)并在-55℃继续搅拌2h。将该反应混合物倾倒进H₂O中并用EtOAc萃取两次。将有机相合并，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以给出2-溴-2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)乙酸乙基酯1d(6.57g)，将其用于下个步骤而无需进一步纯化。

中间体1e的合成：

将2-溴-2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)乙酸乙基酯1d(3.1g，7.12mmol)、3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯胺[CAS 1220630-56-7](2.03g，10.7mmol)和二异丙基乙胺(2.45mL，14.2mmol)在CH₃CN(60mL)中的混合物在50℃搅拌18h。将该反应混合物在减压下浓缩。将残余物用EtOAc吸收并用0.5N HCl、水和盐水洗涤。将有机相经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc，梯度80/20至60/40)进行纯化以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸乙基酯1e(2.5g)。

中间体1f的合成：

在10℃，将氢氧化锂一水合物(226mg，5.397mmol)在水(25mL)中的溶液逐滴添加至2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸乙基酯1e(2.45g，4.498mmol)于THF/CH₃OH(1/1)的溶剂混合物(50mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌6h，用水稀释并冷却至0℃。将该溶液缓慢地用0.5N HCl酸化至pH 6，并用EtOAc萃取。将有机层经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸1f(2.05g)。将该化合物直接用于下个步骤而无需进一步纯化。

中间体1g的合成：

向2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸1f(1.58g，3.06mmol)于DMF(20mL)中的溶液中添加HATU(1.74g，4.60mmol)、二异丙基乙胺(1.5mL，9.17mmol)和6-(三氟甲基)二氢吲哚[CAS181513-29-1](572mg，3.06mmol)。将该反应混合物在室温搅拌2h。将该反应混合物用水稀释。将沉淀物过滤出，用水洗涤并用EtOAc吸收。将有机层用K₂CO₃在水中的10％溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮1g(2.1g)。将该粗化合物直接用于下个步骤。

化合物1的合成以及手性分离成对映异构体1A和1B：

在N₂流下，在5℃，将在二噁烷(7.65mL，30.6mmol)中的4M HCl逐滴添加至2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮1g(2.1g，3.06mmol)于MeOH(40mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌1h。将混合物冷却至0℃，用10％的K₂CO₃水性溶液碱化并用EtOAc萃取。将有机相分离，经MgSO₄干燥，过滤并将溶剂在减压下浓缩。将残余物从CH₃CN/二异丙醚结晶以给出呈外消旋体的2-(4-氟-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮1(800mg)。

将化合物1(720mg)的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

IA 5μm 250×20mm，流动相：70％CO₂、30％EtOH(+0.3％iPrNH₂))进行分离。将第一洗脱对映异构体(303mg)从Et₂O结晶以给出对映异构体1A(270mg)。将第二洗脱对映异构体(320mg)从Et₂O结晶以给出对映异构体1B(274mg)。

化合物1：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.15-3.30(m,2H)3.73(s,3H)3.74-3.85(m,2H)4.06-4.17(m,3H)4.45(td,J＝10.3,6.1Hz,1H)4.98(t,J＝5.4Hz,1H)5.83(d,J＝8.5Hz,1H)6.35(s,1H)6.66(t,J＝1.9Hz,1H)6.76-6.82(m,2H)6.84(s,1H)6.98(dd,J＝11.2,2.4Hz,1H)7.37-7.42(m,2H)7.44-7.49(m,1H)8.16(s,1H)8.39(s,1H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.06min，MH⁺572

熔点：151℃

对映异构体1A：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.15-3.29(m,2H)3.73(s,3H)3.74-3.86(m,2H)4.06-4.19(m,3H)4.45(td,J＝10.2,6.3Hz,1H)4.97(t,J＝5.5Hz,1H)5.83(d,J＝8.8Hz,1H)6.36(s,1H)6.66(t,J＝1.9Hz,1H)6.76-6.82(m,2H)6.84(s,1H)6.98(dd,J＝11.3,2.5Hz,1H)7.37-7.42(m,2H)7.46(d,J＝7.9Hz,1H)8.16(s,1H)8.39(s,1H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.06分钟，MH⁺572

[α]_D ²⁰：-44.8°(c 0.2525，DMF)

手性SFC(方法SFC-A)：R_t 2.59min，MH⁺572，手性纯度100％。

熔点：163℃

对映异构体1B：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.15-3.30(m,2H)3.73(s,3H)3.74-3.85(m,2H)4.06-4.19(m,3H)4.45(td,J＝10.3,6.1Hz,1H)4.97(t,J＝5.5Hz,1H)5.83(d,J＝8.5Hz,1H)6.36(s,1H)6.66(t,J＝1.9Hz,1H)6.76-6.82(m,2H)6.84(s,1H)6.98(dd,J＝11.2,2.4Hz,1H)7.36-7.43(m,2H)7.46(d,J＝7.9Hz,1H)8.16(s,1H)8.39(s,1H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.06min，MH⁺572

[α]_D ²⁰：+36.2°(c 0.2567，DMF)

手性SFC(方法SFC-A)：R_t 3.15min，MH⁺572，手性纯度98.07％。

熔点：162℃

实例2：2-(4-氟-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮(化合物2)的合成以及手性分离为对映异构体2A和2B。

中间体2a的合成：

在-10℃，经30min将1-甲氧基-4-硝基-2-(三氟甲基)苯[CAS 654-76-2](24.5g，110.8mmol)和4-氯苯氧基乙腈[CAS 3598-13-8](20.4g，121.9mmol)于DMF(100mL)中的混合物逐滴添加至tBuOK(27.35g，243.7mmol)在DMF(100mL)中的搅拌的溶液中。在添加之后，将该紫色溶液维持在-10℃持续1h。添加500mL的冰水和500mL的6N HCl，并将沉淀物过滤出，用水洗涤并在减压下干燥以得到40.4g的2-(5-甲氧基-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙腈2a(原样用于下个步骤中)。

中间体2b的合成：

将2-(5-甲氧基-2-硝基-4-(三氟甲基)苯基)乙腈2a(26g，99.9mmol)在乙醇/水(9/1)(500mL)和AcOH(5.2mL)中的溶液用10％Pd/C(15.3g)作为催化剂在3.5Bar的压力下氢化1h。将该反应混合物通过

垫过滤并将滤饼用CH₂Cl₂和CH₃OH的溶剂混合物洗涤。将滤液在减压下浓缩。将残余物使用庚烷/EtOAc 80/20作为洗脱液，通过用二氧化硅60μm-200μm填充的玻璃过滤器过滤。将含有预期的化合物的级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出5-甲氧基-6-(三氟甲基)-1H-吲哚2b(15.6g)。

中间体2c的合成：

在0℃，将BH₃-吡啶(23.5mL，232.4mmol)逐滴添加至5-甲氧基-6-(三氟甲基)-1H-吲哚2b(10g，46.5mmol)于EtOH(60mL)中的溶液中。缓慢地添加6N HCl(140mL)，同时保持温度低于10℃。将该混合物在0℃搅拌2h。添加水(200mL)并将该混合物用浓NaOH水性溶液碱化至pH 8-9(保持反应温度低于20℃)。将沉淀物过滤出，用水洗涤(两次)并在减压下与甲苯共蒸发以给出5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚2c(9g)。

中间体2d的合成：

向2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸1f(1.02g，1.97mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(1.13g，2.96mmol)、二异丙基乙胺(979μL，5.92mmol)和5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚2c(429mg，1.97mmol)。将该反应混合物在室温搅拌2h。将该反应混合物用水稀释。将沉淀物过滤出，用水洗涤并用EtOAc吸收。将有机层用K₂CO₃在水中的10％溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮2d(1.36g)。将该化合物原样用于下一反应步骤中。

化合物2的合成以及手性分离成对映异构体2A和2B：

在N₂流下，在5℃，将在二噁烷(4.75mL，18.99mmol)中4M HCl的逐滴添加至2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮2d(1.36g，1.9mmol)于MeOH(25mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌1h。将混合物冷却至0℃，用10％的K₂CO₃水性溶液碱化并用EtOAc萃取。将有机相分离，经MgSO₄干燥，过滤并将溶剂在减压下浓缩。将残余物从MeOH结晶以给出呈外消旋体的2-(4-氟-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮2(850mg)。

将化合物2(800mg)的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

IA 5μm 250×20mm，流动相：6％CH₂Cl₂、70％CO₂、24％EtOH(+0.3％iPrNH₂))进行分离。将第一洗脱对映异构体(370mg)通过用二异丙醚研磨进行固化以给出对映异构体2A(329mg)。将第二洗脱对映异构体(400mg)通过在硅胶上快速层析(15-40μm，24g，CH₂Cl₂/MeOH 99/1)进一步纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩。将残余物(320mg)通过用二异丙醚研磨进行固化以给出对映异构体2B(262mg)。

化合物2：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.15-3.30(m,2H)3.72(s,3H)3.74-3.83(m,2H)3.84(s,3H)4.04-4.18(m,3H)4.43(td,J＝10.4,6.3Hz,1H)4.99(t,J＝5.7Hz,1H)5.81(d,J＝8.5Hz,1H)6.35(s,1H)6.65(t,J＝1.9Hz,1H)6.75-6.81(m,2H)6.83(s,1H)6.98(dd,J＝11.2,2.4Hz,1H)7.24(s,1H)7.39(dd,J＝8.5,6.9Hz,1H)8.16(s,1H)8.35(s,1H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.99min，MH⁺602

熔点：192℃

对映异构体2A：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.16-3.28(m,2H)3.72(s,3H)3.74-3.83(m,2H)3.84(s,3H)4.03-4.18(m,3H)4.37-4.49(m,1H)4.97(t,J＝5.6Hz,1H)5.81(d,J＝8.1Hz,1H)6.35(s,1H)6.65(s,1H)6.73-6.81(m,2H)6.83(s,1H)6.97(dd,J＝11.1,2.0Hz,1H)7.23(s,1H)7.39(t,J＝7.6Hz,1H)8.15(s,1H)8.35(s,1H)9.12(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.97分钟，MH⁺602

[α]_D ²⁰：-45.0°(c 0.2425，DMF)

手性SFC(方法SFC-A)：R_t4.14 min，MH⁺602，手性纯度100％。

对映异构体2B：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.16-3.28(m,2H)3.72(s,3H)3.74-3.83(m,2H)3.84(s,3H)4.02-4.20(m,3H)4.42(td,J＝10.2,6.3Hz,1H)4.97(t,J＝5.6Hz,1H)5.81(d,J＝8.6Hz,1H)6.35(s,1H)6.65(s,1H)6.73-6.81(m,2H)6.83(s,1H)6.97(dd,J＝11.4,2.3Hz,1H)7.23(s,1H)7.36-7.43(m,1H)8.15(s,1H)8.35(s,1H)9.12(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.97min，MH⁺602

[α]_D ²⁰：+43.4°(c 0.2007，DMF)

手性SFC(方法SFC-A)：R_t 5.08min，MH⁺602，手性纯度100％。

实例3：2-(4-氟-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮(化合物3)的合成以及手性分离为对映异构体3A和3B。

中间体3a的合成：

向2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸1f(1.02g，1.974mmol)于DMF(10mL)中的溶液中添加HATU(1.13g，2.96mmol)、二异丙基乙胺(979μL，5.92mmol)和6-(三氟甲氧基)二氢吲哚[CAS 959235-95-1](401mg，1.97mmol)。将该反应混合物在室温搅拌2h。将该反应混合物用水稀释。将沉淀物过滤出，用水洗涤并用EtOAc吸收。将有机层用K₂CO₃在水中的10％溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)-oxy)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮3a(1.34g)。将该粗化合物直接用于下一个反应步骤中。

化合物3的合成以及手性分离成对映异构体3A和3B：

在N₂流下，在5℃，将在二噁烷(4.27mL，17.1mmol)中的4M HCl逐滴添加至2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氟苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮3a(1.2g，1.71mmol)于MeOH(25mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌1h。将混合物冷却至0℃，用10％的K₂CO₃水性溶液碱化并用EtOAc萃取。将有机相分离，经MgSO₄干燥，过滤并将溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，40g，CH₂Cl₂/MeOH梯度99.5/0.5至99/1)进行纯化。将纯级分合并，并在减压下浓缩至干燥以给出呈外消旋体的2-(4-氟-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮3(550mg)。将此级分的部分从MeOH结晶以提供化合物3(36mg)。

将剩余材料用于经由制备型手性SFC(固定相：

AD-H 5μm 250×20mm，流动相：65％CO₂、35％EtOH(+0.3％iPrNH₂))分离化合物3的对映异构体。将第一洗脱对映异构体(210mg)通过用二异丙醚/庚烷研磨进行固化以给出对映异构体3A(182mg)。将第二洗脱对映异构体(230mg)通过在硅胶上快速层析(15-40μm，24g，CH₂Cl₂/MeOH 99/1)进一步纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩。将残余物(180mg)通过用二异丙醚/庚烷研磨进行以固化给出对映异构体3B(137mg)。

化合物3：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.06-3.25(m,2H)3.73(s,3H)3.75–3.86(m,2H)4.06-4.17(m,3H)4.38-4.50(m,1H)4.95(br s,1H)5.81(d,J＝8.6Hz,1H)6.35(s,1H)6.65(s,1H)6.75-6.81(m,2H)6.83(s,1H)6.94-7.04(m,2H)7.33(d,J＝8.6Hz,1H)7.36-7.43(m,1H)8.04(s,1H)8.15(s,1H)9.11(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.13min，MH⁺588

熔点：178℃

对映异构体3A：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.06-3.26(m,2H)3.72(s,3H)3.74-3.86(m,2H)4.05-4.18(m,3H)4.38-4.50(m,1H)4.97(t,J＝5.3Hz,1H)5.82(d,J＝8.6Hz,1H)6.35(s,1H)6.65(s,1H)6.74-6.86(m,3H)6.94-7.04(m,2H)7.34(d,J＝8.1Hz,1H)7.36-7.42(m,1H)8.04(s,1H)8.15(s,1H)9.12(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.11分钟，MH⁺588

[α]_D ²⁰：-38.2°(c 0.28，DMF)

手性SFC(方法SFC-B)：R_t 3.38min，MH⁺588，手性纯度100％。

对映异构体3B：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.07–3.26(m,2H)3.72(s,3H)3.74-3.86(m,2H)4.04-4.20(m,3H)4.38-4.50(m,1H)4.97(t,J＝5.6Hz,1H)5.81(d,J＝8.6Hz,1H)6.35(s,1H)6.65(s,1H)6.74-6.87(m,3H)6.94-7.03(m,2H)7.34(d,J＝8.1Hz,1H)7.36-7.42(m,1H)8.04(s,1H)8.15(s,1H)9.12(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.11min，MH⁺588

[α]_D ²⁰：+40.9°(c 0.23，DMF)

手性SFC(方法SFC-B)：R_t 5.31min，MH⁺588，手性纯度100％。

实例4：2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮(化合物4)的合成以及手性分离为对映异构体4A和4B。

中间体4a的合成：

将2-(4-氯-2-甲氧基苯基)乙酸[CAS 170737-95-8](20g，101mmol)在干燥THF(300mL)中的溶液冷却到0℃。添加草酰氯(18mL，202mmol)和两滴DMF。将该反应混合物在室温搅拌30min。并将溶剂在减压下蒸发。将残余物溶解于乙醇(300mL)中，并将该反应混合物在室温搅拌1h。将该反应混合物在减压下浓缩以给出2-(4-氯-2-甲氧基苯基)乙酸乙基酯4a(23g)，将其用于下个步骤而无需进一步纯化。

中间体4b的合成：

向2-(4-氯-2-甲氧基苯基)乙酸乙基酯4a(10g，44mmol)在CH₂Cl₂(350mL)(在-30℃冷却的)中的溶液中逐滴添加于CH₂Cl₂(87.5mL，87.5mmol)中的1M BBr₃溶液同时保持温度低于-20℃。在用甲醇淬灭之前，将该反应混合物在-30℃搅拌1h。通过添加NaHCO₃的饱和水溶液将pH调整到8。分离各相。将水相用CH₂Cl₂进行萃取。将有机相合并，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以得到2-(4-氯-2-羟基苯基)乙酸乙基酯4b(9.5g)，将其用于下个步骤而无需进一步纯化。

中间体4c的合成：

向2-(4-氯-2-羟基苯基)乙酸乙基酯4b[CAS 1261826-30-5](2.82g，13.1mmol)和碳酸铯(8.56g，26.3mmol)于DMF(50mL)中的混合物中添加苄基2-溴乙基醚[CAS 1462-37-9](2.29g，14.5mmol)。将该反应混合物在室温搅拌24h。添加H₂O并将该反应混合物用EtOAc萃取。将有机相经Na₂SO₄干燥，过滤并且在减压下浓缩。将残余物通过使用在庚烷中的EtOAc(2％至20％)的梯度在硅胶上快速层析进行纯化以给出2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸乙基酯4c(4.17g)。

中间体4d的合成：

向2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸乙基酯4c(4.17g，12.0mmol)在EtOH(80mL)和THF(40mL)的混合物的溶液中添加0.5NNaOH(72mL，36.0mmol)。将该反应混合物在室温下搅拌3h。将该反应混合物在减压下部分浓缩以去除有机溶剂。将残余物用1N HCl酸化到pH 2-3并且将混合物用EtOAc萃取。将有机相经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以给出2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸4d(3.83g)。

中间体4e的合成：

将2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸4d(7.12g，22.2mmol)在亚硫酰氯(50mL，689mmol)中的溶液在室温搅拌18h。将该反应混合物在减压下浓缩，并与甲苯共蒸发以给出2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酰氯4e(7.53g)，将其用于下个步骤而无需进一步纯化。

中间体4f的合成：

在N₂气氛下，将2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酰氯4e(5.29g，15.6mmol)在CH₃CN(50mL)中的溶液中逐滴添加至6-(三氟甲基)二氢吲哚[CAS 181513-29-1](2.92g，15.6mmol)和碳酸氢钠(1.44g，17.1mmol)于CH₃CN(50mL)中的搅拌的混合物中。将该反应混合物在室温下搅拌65h，并倾倒进水(500mL)中。将产物用Et₂O萃取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且在减压下蒸发。在静置时该残余物固化。将该产物在二异丙醚(25mL)中搅拌，过滤出，用二异丙醚洗涤(3x)，并在真空下在45℃干燥以提供2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮4f(6.97g)。

中间体4g的合成：

将2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮4f(1.5g，3.06mmol)于2-Me-THF(125mL)中的溶液在N₂流下搅拌并冷却至-78℃。逐滴添加锂双(三甲基甲硅烷基)酰胺在1M THF(6.12mL，6.12mmol)中的溶液并将所得混合物在-78℃搅拌20分钟。逐滴添加三甲基氯硅烷(626μL，4.90mmol)并将该混合物在-78℃搅拌25min。逐滴添加N-溴代琥珀酰亚胺(599mg，3.37mmol)于2-Me-THF(50mL)中的溶液，并将该反应混合物在-78℃搅拌1h。立即添加NH₄Cl(60mL)的水性饱和溶液，并将该所得混合物搅拌无需冷却直至温度达到0℃。添加水(20mL)，并在搅拌30min之后，将各层分离。将有机层经MgSO₄干燥，过滤，在减压下蒸发，并与CH₃CN共蒸发以提供2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-溴-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮4g(1.16g)。将该产物无需进一步纯化用于下一个步骤。

中间体4h的合成：

在N₂气氛下，向2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-溴-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮4g(1.74g，3.06mmol)在CH₃CN(100mL)中的搅拌的溶液添加3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯胺[CAS 1220630-56-7](874mg，4.59mmol)、和二异丙基乙胺(1.06mL，6.12mmol)，并将该反应混合物在室温搅拌20h并然后在50℃搅拌7h。将该混合物冷却至室温并倾倒进搅拌的H₂O(400mL)中。将产物用Et₂O萃取(2x)。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤，并在减压下蒸发。将残余物通过在硅胶上快速层析(40g)，使用庚烷/EtOAc/EtOH 100/0/0至40/45/15的梯度进行纯化。将所希望的级分合并，并将溶剂在减压下蒸发，并与甲苯共蒸发。将残余物在真空下在50℃干燥以提供2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮4h(1.43g)。

化合物4的合成以及手性分离成对映异构体4A和4B：

将2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮4h(1.43g，2.11mmol)于THF(15mL)在EtOAc(75mL)中的溶剂混合物的溶液使用Pd/C(0.5g)作为催化剂在室温下在H₂的大气压下氢化5h。将催化剂经

通过过滤去除。将滤饼用THF洗涤若干次，并将合并的滤液在减压下蒸发。将固体残余物在溶剂混合物CH₂Cl₂/EtOAc/MeOH 1/2/1中搅拌。将沉淀物过滤出，用EtOAc洗涤(2x)，并在真空下在45℃干燥以提供外消旋的2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮(化合物4，600mg)。

将化合物4(700mg)的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

Diacel AD 20×250mm，流动相：CO₂、MeOH/iPrOH(50/50)+0.4％iPrNH₂)进行分离。合并产物级分且在减压下蒸发以提供作为第一洗脱产物的对映异构体4A和作为第二洗脱产物的对映异构体4B。将两种对映异构体通过在硅胶上快速层析(4g)，使用庚烷/EtOAc/EtOH 100/0/0至40/45/15的梯度进一步纯化。将所希望的级分合并且在减压下蒸发。将残余物在水(3mL)和MeOH(0.75mL)中搅拌。将固体过滤出，用水洗涤(3x)，并在真空下在50℃干燥以提供对映异构体4A(81mg)和对映异构体4B(132mg)。

对映异构体4A：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.18-3.28(m,2H)3.73(s,3H)3.74-3.84(m,2H)4.08-4.19(m,3H)4.44(td,J＝10.2,6.7Hz,1H)4.96(t,J＝5.6Hz,1H)5.84(d,J＝8.6Hz,1H)6.35(t,J＝2.1Hz,1H)6.66(t,J＝1.7Hz,1H)6.79-6.87(m,2H)7.02(dd,J＝8.3,1.9Hz,1H)7.15(d,J＝1.8Hz,1H)7.34-7.43(m,2H)7.43-7.51(m,1H)8.15(s,1H)8.38(br s,1H)9.12(s,1H)

LC/MS(方法LC-C)：R_t 1.16min，MH⁺588

[α]_D ²⁰：-42.9°(c 0.515，DMF)

手性SFC(方法SFC-K)：R_t 2.91分钟，MH⁺588，手性纯度100％。

对映异构体4B：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.15-3.28(m,2H)3.73(s,3H)3.74-3.84(m,2H)4.07-4.22(m,3H)4.44(td,J＝10.1,6.6Hz,1H)4.96(t,J＝5.5Hz,1H)5.84(d,J＝8.6Hz,1H)6.35(t,J＝2.0Hz,1H)6.67(t,J＝1.9Hz,1H)6.79-6.87(m,2H)7.03(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H)7.15(d,J＝2.0Hz,1H)7.34-7.42(m,2H)7.43-7.49(m,1H)8.16(s,1H)8.38(br s,1H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-C)：R_t 1.15min，MH⁺588

[α]_D ²⁰：+39.5°(c 0.595，DMF)

手性SFC(方法SFC-K)：R_t2.78分钟，MH⁺588，手性纯度100％。

实例5：2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮(化合物5)的合成以及手性分离为对映异构体5A和5B。

中间体5a的合成：

在10℃，向2-(4-氯-2-羟基苯基)乙酸乙基酯4b(5.2g，24.2mmol)和碳酸铯(15.8g，48.5mmol)于DMF(90mL)中的混合物中添加(2-溴乙氧基)(叔丁基)二甲基硅烷[CAS86864-60-0](6.26mL，29.1mmol)。将该反应混合物在室温搅拌过夜。添加H₂O并且将该反应混合物用EtOAc萃取。将有机相经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 80/20)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下去除以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸乙基酯5a(7.8g)。

中间体5b的合成：

向冷却至-70℃的在THF(41.8mL,41.8mmol)中的1M双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂溶液中添加2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸乙基酯5a(7.8g，20.9mmol)在THF(45mL)中的溶液。在-70℃在1h之后，添加三甲基氯硅烷(4.24mL，33.5mmol)。将该反应混合物在-70℃搅拌15min。添加在THF(45mL)中的N-溴代琥珀酰亚胺(4.46g，25.1mmol)并在-55℃继续搅拌2h。将该反应混合物倾倒进H₂O中并用EtOAc萃取两次。将有机相合并，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以给出2-溴-2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸乙基酯5b(10.1g)，将其用于下个步骤而无需进一步纯化。

中间体5c的合成：

将2-溴-2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)乙酸乙基酯5b(4.75g，10.5mmol)、3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯胺[CAS 1220630-56-7](3g，15.8mmol)和二异丙基乙胺(3.62mL，21.0mmol)在CH₃CN(90mL)中的混合物在50℃搅拌24h。将该反应混合物在减压下浓缩。将残余物用EtOAc吸收并用0.5N HCl、水和盐水洗涤。将有机相经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc梯度80/20至70/30)进行纯化以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸乙基酯5c(3.7g)。

中间体5d的合成：

在10℃，将在水(25mL)中的氢氧化锂一水合物(523mg，12.5mmol)逐滴添加至2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸乙基酯5c(3.5g，6.24mmol)于THF/CH₃OH(1/1)(50mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌2h，用水稀释并冷却至0℃。将该溶液缓慢地用0.5NHCl酸化至pH6，并用EtOAc萃取。将有机层经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸5d(3.1g)。将该化合物原样用于下个步骤中。

中间体5e的合成：

将5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚2c(400mg，1.84mmol)、2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸5d(982mg，1.84mmol)、HATU(1.05g，2.76mmol)和二异丙基乙胺(913μL，5.53mmol)于DMF(10mL)中的混合物在室温搅拌2h。将该混合物用水稀释。将沉淀物过滤出并用水洗涤。将沉淀物用EtOAc吸收，用在水中10％的K₂CO₃溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮5e(1.35g)。将该化合物原样用于下一反应步骤中。

化合物5的合成以及手性分离成对映异构体5A和5B：

在N₂流下，在5℃，将在二噁烷(4.6mL，18.4mmol)中的4M HCl逐滴添加至2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮5e(1.35g，1.84mmol)于MeOH(25mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌1h。将混合物冷却至0℃，用10％的K₂CO₃水性溶液碱化并用EtOAc萃取。将有机相分离，经MgSO₄干燥，过滤并将溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，40g，CH₂Cl₂/MeOH 98.5/1.5)进行纯化。将纯级分合并，并在减压下浓缩至干燥。将残余物(980mg)从MeOH结晶以得到呈外消旋体的2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙酮5(805mg)。

将化合物5(771mg)的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

IA 5μm 250x20 mm，流动相：6％CH₂Cl₂、70％CO₂、24％EtOH(+0.3％iPrNH₂))进行分离。将第一洗脱对映异构体(375mg)通过用二异丙醚研磨进行固化以给出对映异构体5A(308mg)。将第二洗脱对映异构体(400mg)通过在硅胶上快速层析(15-40μm，24g，CH₂Cl₂/MeOH 99/1)进一步纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩。将残余物(340mg)通过用二异丙醚研磨进行固化以给出对映异构体5B(291mg)。

化合物5：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.15-3.30(m,2H)3.72(s,3H)3.74-3.83(m,2H)3.85(s,3H)4.06-4.20(m,3H)4.41(td,J＝10.2,6.3Hz,1H)4.99(t,J＝5.5Hz,1H)5.82(d,J＝8.5Hz,1H)6.35(s,1H)6.65(t,J＝1.9Hz,1H)6.80-6.85(m,2H)7.02(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H)7.15(d,J＝2.2Hz,1H)7.24(s,1H)7.37(d,J＝8.5Hz,1H)8.16(s,1H)8.34(s,1H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.13min，MH⁺618

熔点：228℃

对映异构体5A：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.16-3.28(m,2H)3.72(s,3H)3.74-3.83(m,2H)3.84(s,3H)4.06-4.21(m,3H)4.35-4.46(m,1H)4.97(t,J＝5.6Hz,1H)5.81(d,J＝8.6Hz,1H)6.35(s,1H)6.65(s,1H)6.77-6.86(m,2H)7.02(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H)7.14(d,J＝1.5Hz,1H)7.24(s,1H)7.38(d,J＝8.6Hz,1H)8.15(s,1H)8.34(s,1H)9.12(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.11分钟，MH⁺618

[α]_D ²⁰：-40.3°(c 0.2383，DMF)

手性SFC(方法SFC-C)：R_t 2.75min，MH⁺618，手性纯度100％。

对映异构体5B：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.16-3.28(m,2H)3.72(s,3H)3.74-3.83(m,2H)3.84(s,3H)4.06-4.20(m,3H)4.36-4.46(m,1H)4.97(t,J＝5.6Hz,1H)5.81(d,J＝8.6Hz,1H)6.35(s,1H)6.65(s,1H)6.78-6.85(m,2H)7.01(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H)7.14(d,J＝1.5Hz,1H)7.24(s,1H)7.38(d,J＝8.1Hz,1H)8.15(s,1H)8.34(s,1H)9.12(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.11min，MH⁺618

[α]_D ²⁰：+40.0°(c 0.22，DMF)

手性SFC(方法SFC-C)：R_t 3.60min，MH⁺618，手性纯度98.47％。

实例6(方法1)：2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮(化合物6)的合成以及手性分离为对映异构体6A和6B。

中间体6a的合成：

将6-(三氟甲氧基)二氢吲哚[CAS 959235-95-1](837mg，4.12mmol)、2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸5d(2.196g，4.12mmol)、HATU(2.35g，6.18mmol)和二异丙基乙胺(2mL，12.36mmol)于DMF(20mL)中的混合物在室温搅拌2h。将该混合物用水稀释。将所得粘性材料用EtOAc吸收，用在水中10％的K₂CO₃溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc梯度70/30至60/40)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮6a(1.65g)。

化合物6的合成以及手性分离成对映异构体6A和6B：

在N₂流下，在5℃，将在二噁烷(6.5mL，21.6mmol)中的4M HCl逐滴添加至2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮6a(1.85g，2.58mmol)于MeOH(40mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌1h。将该混合物冷却至0℃，用10％的K₂CO₃水性溶液碱化并用EtOAc萃取。将有机相分离，经MgSO₄干燥，过滤并将溶剂在减压下浓缩。将化合物从CH₂Cl₂结晶以得到呈外消旋体的2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮6(1.47g)。

将化合物6的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

IC 5μm 250×30mm，流动相：70％CO₂、30％iPrOH(+0.3％iPrNH₂))进行分离。将第一洗脱对映异构体(585mg)通过在硅胶上快速层析(15μm-40μm，24g，CH₂Cl₂/MeOH 99/1)进一步纯化以在MeOH/二异丙醚/庚烷中固化之后，给出对映异构体6A(491mg)。将第二洗脱对映异构体(400mg)通过在硅胶上快速层析(15μm-40μm，24g，CH₂Cl₂/MeOH 99/1)进一步纯化以在MeOH/二异丙醚/庚烷中固化之后，给出对映异构体6B(467mg)。

化合物6：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.08-3.23(m,2H)3.73(s,3H)3.75-3.84(m,2H)4.07-4.22(m,3H)4.37-4.49(m,1H)4.94(br s,1H)5.82(d,J＝8.6Hz,1H)6.35(s,1H)6.64-6.68(m,1H)6.79-6.86(m,2H)6.98-7.05(m,2H)7.15(d,J＝2.0Hz,1H)7.34(d,J＝8.6Hz,1H)7.37(d,J＝8.1Hz,1H)8.04(s,1H)8.15(s,1H)9.11(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.27min，MH⁺604

熔点：161℃

对映异构体6A：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.10-3.25(m,2H)3.73(s,3H)3.74-3.84(m,2H)4.06-4.23(m,3H)4.39-4.48(m,1H)4.99(br t,J＝5.4Hz,1H)5.83(br d,J＝8.5Hz,1H)6.36(br s,1H)6.67(s,1H)6.84(s,1H)6.88(br d,J＝8.5Hz,1H)7.03(brt,J＝7.6Hz,2H)7.16(s,1H)7.36(dd,J＝11.8,8.4Hz,2H)8.04(br s,1H)8.17(s,1H)9.14(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.25分钟，MH⁺604

[α]_D ²⁰：+45.9°(c 0.29，DMF)

手性SFC(方法SFC-D)：R_t4.20 min，MH⁺604，手性纯度100％。

对映异构体6B：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.09-3.25(m,2H)3.73(s,3H)3.74-3.83(m,2H)4.06-4.21(m,3H)4.43(td,J＝10.2,6.6Hz,1H)4.98(t,J＝5.4Hz,1H)5.83(d,J＝8.5Hz,1H)6.35(s,1H)6.66(s,1H)6.83(s,1H)6.88(d,J＝8.8Hz,1H)6.99-7.06(m,2H)7.15(d,J＝1.6Hz,1H)7.36(dd,J＝12.6,8.2Hz,2H)8.04(s,1H)8.16(s,1H)9.14(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.31min，MH⁺604

[α]_D ²⁰：-46.3°(c 0.3，DMF)

手性SFC(方法SFC-D)：R_t 5.30min，MH⁺604，手性纯度100％。

实例6(方法2)：2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮(化合物6)的合成。

中间体6b的合成：

在N₂流下，向在-70℃冷却的在THF(23mL，34.4mmol)中的1.5M双(三甲基甲硅烷基)酰胺锂溶液中添加2-(4-氯-2-羟基苯基)乙酸乙基酯4c(6g，17.2mmol)在THF(35mL)中的溶液。在-70℃在1h之后，添加三甲基氯硅烷(3.5mL，27.5mmol)。将该反应混合物在-70℃搅拌15min。添加在THF(35mL)中的N-溴代琥珀酰亚胺(3.7g，20.6mmol)并在-70℃继续搅拌2h。将该反应混合物倾倒进中H₂O并用EtOAc萃取。将有机相合并，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以给出2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-溴乙酸乙基酯6b(8.2g)，将其用于下一步骤而无需进一步纯化。

中间体6c的合成：

将2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-溴乙酸酯6b(6.5g，15.2mmol)、3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯胺[CAS 1220630-56-7](4.6g，24.1mmol)和二异丙基乙胺(5.3mL，30.4mmol)在CH₃CN(130mL)中的混合物在50℃搅拌24h。将溶剂在减压下浓缩。将残余物用EtOAc稀释。将该溶液过滤以去除固体颗粒(残余苯胺)。将该有机层在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc梯度80/20至70/30)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下去除以给出2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸乙基酯6c(4.8g)。

中间体6d的合成：

在10℃，将氢氧化锂一水合物(500mg，11.9mmol)添加至2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸乙基酯6c(3.2g，5.96mmol)于MeOH/THF/水(1/1/1)(50mL)中的溶液中。将该混合物在室温搅拌2h。将该混合物用冰水稀释并冷却至0℃。将所得混合物用0.5N HCl酸化高达pH 6-7并用EtOAc萃取。将有机层合并，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸6d(2.75g)。将该化合物用于下一反应步骤中而无需进一步纯化。

中间体6e的合成：

将6-(三氟甲氧基)二氢吲哚[CAS 959235-95-1](1.2g，5.89mmol)、2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸6d(2.5g，4.91mmol)、HATU(2.29g，6.01mmol)和二异丙基乙胺(1.99mL，12.0mmol)于DMF(18mL)中的混合物在室温搅拌2h。将该混合物用水稀释。将沉淀物过滤出并用水洗涤。将沉淀物用EtOAc吸收，用在水中10％的K₂CO₃溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将该化合物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，220g，庚烷/EtOAc 50/50)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮6e(2.5g)。

化合物6的合成：

将2-(2-(2-(苄氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮6e(2g，2.88mmol)在EtOAc/MeOH/THF(1/1/1)(100mL)中的混合物用Pd/C(10％)(3.07g，2.88mmol)作为催化剂在H₂的大气压下氢化50min。将该反应用MeOH稀释并通过

垫过滤。将滤液在减压下浓缩。将残余物(1.42g)与另一批次组合(总量：1.65g)，并经由手性SFC(固定相：NH₂5μm 150×30mm，流动相：70％CO₂、30％iPrOH(+0.3％iPrNH₂))进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出呈外消旋体的2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮6(1.36g)。

实例7：2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酮(化合物7)的合成以及手性分离为对映异构体7A和7B。

中间体7a的合成：

在0℃，将BH₃-吡啶(10.45mL，103.4mmol)逐滴添加至5-氟-6-(三氟甲基)-1H-吲哚[CAS 1493800-10-4](7g，34.5mmol)于EtOH(45mL)中的溶液中。缓慢地添加6NHCl(105mL)，同时保持温度低于10℃。将该混合物在0℃搅拌2h。添加水(210mL)并将该混合物用浓NaOH水性溶液碱化至pH 8-9(保持反应温度低于20℃)。添加EtOAc。将有机层分离，用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物在减压下与甲苯共蒸发。将粗品通过在硅胶上快速层析(20-45μm，120g，CH₂Cl₂/MeOH 98.5/1.5)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下去除以给出5-氟-6-(三氟甲基)二氢吲哚7a(3.5g)。

中间体7b的合成：

将5-氟-6-(三氟甲基)二氢吲哚7a(385mg，1.88mmol)、2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸5d(1g，1.88mmol)、HATU(1.07g，2.814mmol)和二异丙基乙胺(930μL，5.63mmol)于DMF(10mL)中的混合物在室温搅拌2h。将该混合物用水稀释。将所得粘性材料用EtOAc吸收。将有机层用在水中10％的K₂CO₃溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酮7b(1.4g)。

化合物7的合成以及手性分离成对映异构体7A和7B：

在N₂流下，在5℃，将在二噁烷(4.9mL，19.4mmol)中的4M HCl逐滴添加至2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酮7b(1.4g，1.94mmol)于MeOH(25mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌1h。将混合物冷却至0℃，用10％的K₂CO₃水性溶液碱化并用EtOAc萃取。将有机层分离，经MgSO₄干燥，过滤并且在减压下浓缩溶剂。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，40g，CH₂Cl₂/MeOH 98/2)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出呈外消旋体的2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酮7(737mg)。

将化合物7的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

AD-H 5μm 250×30mm，流动相：60％CO₂、40％EtOH(+0.3％iPrNH₂))进行分离。将第一洗脱对映异构体(325mg)从二异丙醚/石油醚结晶以给出对映异构体7A(244mg)。将第二洗脱对映异构体(310mg)从二异丙醚/石油醚结晶以给出对映异构体7B(220mg)。

化合物7：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.19–3.30(m,2H)3.63-3.87(m,5H)4.05-4.24(m,3H)4.40–4.49(m,1H)4.97(br s,1H)5.83(br d,J＝6.9Hz,1H)6.35(br s,1H)6.67(br s,1H)6.80–6.89(m,2H)7.03(br d,J＝7.3Hz,1H)7.15(br s,1H)7.37(br d,J＝7.6Hz,1H)7.47(br d,J＝9.5Hz,1H)8.16(br s,1H)8.39(brd,J＝4.4Hz,1H)9.14(br s,1H)

LC/MS(方法LC-B)：R_t 3.14min，MH⁺606

熔点：140℃

对映异构体7A：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.20-3.30(m,2H)3.69-3.86(m,5H)4.06-4.23(m,3H)4.40-4.50(m,1H)4.98(br t,J＝5.2Hz,1H)5.83(br d,J＝8.8Hz,1H)6.35(br s,1H)6.67(s,1H)6.82-6.89(m,2H)7.03(br d,J＝8.2Hz,1H)7.16(s,1H)7.37(d,J＝8.2Hz,1H)7.47(br d,J＝10.1Hz,1H)8.17(s,1H)8.39(brd,J＝6.3Hz,1H)9.14(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.27分钟，MH⁺606

[α]_D ²⁰：-44.3°(c 0.282，DMF)

手性SFC(方法SFC-B)：R_t 2.89min，MH⁺606，手性纯度100％。

熔点：166℃

对映异构体7B：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.18-3.30(m,2H)3.69–3.86(m,5H)4.07-4.22(m,3H)4.40-4.50(m,1H)4.97(br t,J＝5.2Hz,1H)5.83(br d,J＝8.8Hz,1H)6.35(br s,1H)6.67(s,1H)6.81-6.89(m,2H)7.03(br d,J＝8.2Hz,1H)7.16(s,1H)7.37(brd,J＝8.2Hz,1H)7.47(brd,J＝10.1Hz,1H)8.17(s,1H)8.39(brd,J＝6.3Hz,1H)9.14(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.27min，MH⁺606

[α]_D ²⁰：+35.6°(c 0.281，DMF)

手性SFC(方法SFC-B)：R_t4.92 min，MH⁺606，手性纯度100％。

熔点：100℃

实例8：2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮(化合物8)的合成以及手性分离为对映异构体8A和8B。

中间体8a的合成：

在5℃，将4-甲氧基-3-(三氟甲氧基)苯胺[CAS 647855-21-8](3.1g，15.0mmol)于甲苯(50mL)中的溶液用N-溴代琥珀酰亚胺(2.8g，15.7mmol)处理，并将所得混合物在5-10℃搅拌2h。将该混合物用水稀释并用EtOAc萃取。将合并的萃取物经MgSO₄干燥，过滤并在减压下蒸发。通过在硅胶上快速层析(15-40μm，24g，庚烷/EtOAc梯度95/5至90/10)进行纯化。将纯级分合并并蒸发至干燥以给出2-溴-4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯胺8a(2.5g)。

中间体8b的合成：

将2-溴-4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)苯胺8a(2.72g，9.51mmol)于DMF(30mL)中的溶液用N₂脱气15min。添加二氯双(三苯基膦)钯(II)(667mg，0.95mmol)、碘化亚铜(I)(362mg，1.90mmol)、三乙胺(3.96mL，28.53mmol)和三甲基甲硅烷基乙炔(3.95mL，28.5mmol)。在N₂流下，将该反应混合物在70℃加热12h。在冷却至室温之后，将该反应混合物用H₂O稀释并用EtOAc萃取。将有机相合并，经MgSO₄干燥，过滤且在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，80g，庚烷/EtOAc 85/15)进行纯化。将纯级分合并，并蒸发至干燥以给出4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺8b(1.4g)。

中间体8c的合成：

在N₂流下，向4-甲氧基-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺8b(1.2g，3.96mmol)于NMP(11mL)中的溶液中一次性添加tBuOK(1.33g，11.9mmol)。将该反应混合物在80℃加热4h，倾倒进冰/水中，并用3N HCl酸化至pH 4-5。将反应混合物用EtOAc萃取。将有机相合并，用H₂O洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，40g，庚烷/EtOAc 85/15)进行纯化。将纯级分合并，并蒸发至干燥以给出5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚8c(490mg)。

中间体8d的合成：

在0℃，将BH₃-吡啶(10.5mL，103.8mmol)逐滴添加至5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚8c(8g，34.6mmol)于EtOH(45mL)中的溶液中。逐滴添加6N HCl(6mL)同时保持温度低于10℃。将该混合物在0℃搅拌3h。添加水(210mL)并将该混合物用在水中的NaOH浓溶液碱化至pH 8-9(维持反应温度低于20℃)。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下蒸发。添加甲苯，并将溶液在减压下浓缩以给出5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚8d(7.5g)。

中间体8e的合成：

将5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚8d(437mg，1.88mmol)、2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸5d(1g，1.88mmol)、HATU(1.07g，2.81mmol)和二异丙基乙胺(930μL，5.63mmol)于DMF(10mL)中的混合物在室温搅拌2h。将该混合物用水稀释。将所得粘性材料用EtOAc吸收。将有机溶液用在水中10％的K₂CO₃溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮8e(1.5g)。将该化合物原样用于下一反应步骤中。

化合物8的合成以及手性分离成对映异构体8A和8B：

在N₂流下，在5℃，将在二噁烷(4.9mL，19.4mmol)中的4M HCl逐滴添加至2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮8e(1.4g，1.94mmol)于MeOH(25mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌1h。将混合物冷却至0℃，用10％的K₂CO₃水性溶液碱化并用EtOAc萃取。将有机层分离，经MgSO₄干燥，过滤并且在减压下浓缩溶剂。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，40g，CH₂Cl₂/MeOH/NH₄OH 98.4/1.5/0.1)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以在从CH₂Cl₂结晶之后给出呈外消旋体的2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(5-甲氧基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮8(850mg)。

将化合物8的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

IC 5μm 250×30mm，流动相：60％CO₂、40％iPrOH)进行分离。将第一洗脱对映异构体(410mg)通过用二异丙醚研磨进行固化以给出对映异构体8A(314mg)。将第二洗脱对映异构体(388mg)通过用二异丙醚研磨进行固化以给出对映异构体8B(300mg)。

化合物8：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.07-3.27(m,2H)3.70-3.85(m,8H)4.07-4.19(m,3H)4.35-4.45(m,1H)4.97(t,J＝5.6Hz,1H)5.80(d,J＝8.6Hz,1H)6.34(s,1H)6.63-6.67(m,1H)6.80-6.87(m,2H)7.02(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H)7.14(d,J＝2.0Hz,1H)7.20(s,1H)7.37(d,J＝8.6Hz,1H)8.06(s,1H)8.15(s,1H)9.12(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.20min，MH⁺634

熔点：181℃

对映异构体8A：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.09-3.26(m,2H)3.70-3.85(m,8H)4.08-4.20(m,3H)4.40(td,J＝10.3,6.5Hz,1H)4.99(brt,J＝5.4Hz,1H)5.81(d,J＝8.5Hz,1H)6.35(s,1H)6.66(s,1H)6.83(s,1H)6.86(d,J＝8.8Hz,1H)7.03(dd,J＝8.2,1.3Hz,1H)7.15(d,J＝1.6Hz,1H)7.21(s,1H)7.38(d,J＝8.2Hz,1H)8.07(s,1H)8.16(s,1H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-B)：R_t 3.09min，MH⁺634

[α]_D ²⁰：+39.3°(c 0.3，DMF)

手性SFC(方法SFC-E)：R_t 3.39min，MH⁺634，手性纯度100％。

对映异构体8B：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.09-3.27(m,2H)3.70-3.85(m,8H)4.06-4.19(m,3H)4.40(td,J＝10.2,6.6Hz,1H)4.99(brt,J＝5.2Hz,1H)5.81(d,J＝8.5Hz,1H)6.35(s,1H)6.66(s,1H)6.83(s,1H)6.86(d,J＝8.8Hz,1H)7.03(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H)7.15(d,J＝1.6Hz,1H)7.21(s,1H)7.38(d,J＝8.2Hz,1H)8.07(s,1H)8.16(s,1H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.07min，MH⁺634

[α]_D ²⁰：-44.4°(c 0.295，DMF)

手性SFC(方法SFC-E)：R_t 5.69min，MH⁺634，手性纯度100％。

实例9：2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酮(化合物9)的合成以及手性分离为对映异构体9A和9B。

中间体9a的合成：

用冰浴将4-溴-2-氟-1-(三氟甲氧基)苯[CAS 105529-58-6](98.7g，381.1mmol)于浓H₂SO₄(98％，200mL)中的溶液冷却至0℃。分部分添加KNO₃(43.0g，425.3mmol)。在添加之后，去除冰浴并将混合物在室温搅拌16h。伴随搅拌将该反应混合物倾倒进冰水(2L)中。将该混合物用CH₂Cl₂(3×500mL)萃取。将合并的有机层用饱和的水性NaHCO₃溶液(2×500mL)、盐水(500mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以得到1-溴-5-氟-2-硝基-4-(三氟甲氧基)苯9a(117.2g)，将其用于下个步骤而无需进一步纯化。

中间体9b的合成：

在N₂-气氛下，向1-溴-5-氟-2-硝基-4-(三氟甲氧基)苯9a(70.0g，230mmol)和NH₄Cl(123.2g，2.30mol)于iPrOH(1L)和水(330mL)中的搅拌的悬浮液中添加还原铁粉末(64.3g，1.15mol)。将该反应混合物在60℃搅拌16h。将该反应混合物用EtOAc(1L)稀释并通过

过滤。将滤液在减压下浓缩。将残余物在EtOAc(1L)与水(800mL)之间分配。将各层分离并将有机相用盐水(1L)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过在减压下蒸馏进行纯化(油泵，b.p.60℃至64℃)。获得呈黄色油的2-溴-4-氟-5-(三氟甲氧基)苯胺9b(47.3g)。

中间体9c的合成：

向2-溴-4-氟-5-(三氟甲氧基)苯胺9b(18.4g，67.2mmol)、乙炔基(三甲基)硅烷(19.9g，202.4mmol,28.00mL)于Et₃N(300mL)中的混合物中添加CuI(1.28g，6.72mmol)和Pd(PPh₃)₂Cl₂(2.40g，3.42mmol)。将该反应混合物在N₂-气氛下在90℃加热16h。在冷却至室温之后，将该混合物用MTBE(300mL)稀释并通过

过滤。将滤液在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(

220g

二氧化硅快速柱，洗脱液：在石油醚中0至5％EtOAc的梯度，100mL/min)进行纯化。获得呈棕色油的4-氟-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺9c(16.1g，90％纯度)。

中间体9d的合成：

在N₂-气氛下，将4-氟-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺9c(16.1g，55.3mmol)和tBuOK(18.6g，165.8mmol)于NMP(220.00mL)中的混合物在90℃加热16h。在冷却至室温之后，将反应混合物倾倒进冰水(1L)中并用MTBE(3×300mL)萃取。将合并的有机相用水(2×200mL)、盐水(300mL)洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(

120g

二氧化硅快速柱，洗脱液：在石油醚中0至5％EtOAc的梯度，85mL/min)进行纯化以得到呈深绿色油的5-氟-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚9d(11g)产物。将残余物与另一个级分合并(总量＝17.2g)并通过在减压下蒸馏(油泵，b.p.60℃至64℃)进一步纯化以提供呈无色油的5-氟-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚9d(14.7g，95％纯度)。

中间体9e的合成：

在0℃，将BH₃-吡啶(13.8mL，136.9mmol)逐滴添加至5-氟-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚9d(6g，27.4mmol)于EtOH(40mL)中的溶液中。逐滴添加6N HCl(90mL)同时保持温度低于10℃。将该混合物在0℃搅拌2h。添加水(100mL)并将该混合物用在水中的NaOH浓缩溶液碱化直至pH 8-9(维持反应温度低于20℃)。将该混合物用CH₂Cl₂萃取。将有机层用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下蒸发。添加甲苯并将溶液在减压下浓缩以给出5.52g的5-氟-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚9e。将该化合物用于下一反应步骤中而无需进一步纯化。

中间体9f的合成：

将5-氟-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚9e(169mg，0.76mmol)、2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸5d(407mg，0.76mmol)、HATU(435mg，1.15mmol)和二异丙基乙胺(379μL，2.29mmol)于DMF(3.9mL)中的混合物在室温搅拌2h。将该混合物用水稀释。将所得粘性材料用EtOAc吸收。将有机溶液用在水中10％的K₂CO₃溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，24g，庚烷/EtOAc 70/30)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酮9f(257mg)。

化合物9的合成以及手性分离成对映异构体9A和9B：

在N₂流下，在5℃，将在二噁烷(873μL，3.49mmol)中的4M HCl逐滴添加至2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酮9f(257mg，0.35mmol)于MeOH(4mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌1h。将混合物冷却至0℃，用10％的K₂CO₃水性溶液碱化并用EtOAc萃取。将有机层分离，用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，12g，CH₂Cl₂/MeOH 98.5/1.5)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出呈外消旋体的2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-1-(5-氟-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酮9(210mg)。将小级分(17mg)经由反相色谱(固定相：YMC-actus Triart-C1810μm 30×150mm，流动相：从50％NH₄HCO₃ 0.2％、50％CH₃CN至0％NH₄HCO₃ 0.2％、100％CH₃CN的梯度)进一步纯化以得到7mg。将残余物通过从CH₃CN(1ml)和水(4mL)的溶剂混合物冻干进行固化。

将化合物9的对映异构体(190mg)经由制备型手性SFC(固定相：

AD-H5μm 250×30mm，流动相：65％CO₂、35％EtOH(+0.3％iPrNH₂))进行分离。将第一洗脱对映异构体(58mg)溶解于CH₃CN(2ml)中，添加水(8mL)并将该混合物冻干以给出呈粉末的对映异构体9A(58mg)。将第二洗脱对映异构体(59mg)溶解于CH₃CN(2ml)中，添加水(8mL)并将该混合物冻干以给出呈粉末的对映异构体9B(59mg)。

化合物9：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 3.13-3.30(m,2H)3.72(s,3H)3.70-3.80(m,2H)4.06-4.22(m,3H)4.42(td,J＝10.4,6.3Hz,1H)4.97(br s,1H)5.82(d,J＝8.5Hz,1H)6.34(s,1H)6.66(t,J＝1.9Hz,1H)6.82(s,1H)6.87(d,J＝8.2Hz,1H)7.03(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H)7.15(d,J＝2.2Hz,1H)7.36(d,J＝8.2Hz,1H)7.45(d,J＝9.8Hz,1H)8.14-8.18(m,2H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 3.32min，MH⁺622

对映异构体9A：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.12-3.28(m,2H)3.72(s,3H)3.69-3.82(m,2H)3.99-4.22(m,3H)4.42(td,J＝10.0,6.8Hz,1H)4.96(t,J＝5.3Hz,1H)5.81(d,J＝9.1Hz,1H)6.34(s,1H)6.66(t,J＝1.8Hz,1H)6.80-6.88(m,2H)7.02(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H)7.15(d,J＝2.0Hz,1H)7.36(d,J＝8.6Hz,1H)7.45(d,J＝10.1Hz,1H)8.13-8.18(m,2H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-B)：R_t 3.17min，MH⁺622

[α]_D ²⁰：-35.1°(c 0.276，DMF)

手性SFC(方法SFC-B)：R_t 2.75min，MH⁺622，手性纯度100％。

对映异构体9B：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 3.12-3.28(m,2H)3.72(s,3H)3.69-3.82(m,2H)3.99-4.22(m,3H)4.42(td,J＝10.0,6.8Hz,1H)4.96(t,J＝5.3Hz,1H)5.81(d,J＝9.1Hz,1H)6.34(s,1H)6.66(t,J＝1.8Hz,1H)6.80-6.88(m,2H)7.02(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H)7.15(d,J＝2.0Hz,1H)7.36(d,J＝8.6Hz,1H)7.45(d,J＝10.1Hz,1H)8.13-8.18(m,2H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-B)：R_t 3.17min，MH⁺622

[α]_D ²⁰：+32.3°(c 0.254，DMF)

手性SFC(方法SFC-B)：R_t 3.75min，MH⁺622，手性纯度100％。

实例10：2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮(化合物10)的合成以及手性分离为对映异构体10A和10B。

中间体10a的合成：

向2-甲基-4-(三氟甲氧基)苯胺[CAS 86256-59-9](10.0g，52.3mmol)于二噁烷(20mL)中的溶液中添加三氟乙酸酐(8mL，57.2mmol)。将该反应混合物在室温搅拌1h。将该反应混合物在减压下浓缩。将残余物分配于EtOAc与1N HCl之间。分离各相。将有机相用在水中的NaHCO₃的饱和溶液、H₂O和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩以得到呈白色粉末的14.7g的2,2,2-三氟-N-(2-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基)乙酰胺10a。将该化合物用于下一步骤中而无需进一步纯化。

中间体10c的合成：

向在0℃冷却的乙酸酐(11.4mL，61.1mmol)中逐滴添加70％硝酸(3.9mL)。分部分添加2,2,2-三氟-N-(2-甲基-4-(三氟甲氧基)苯基)-乙酰胺10a(5g，17.4mmol)，并将反应混合物在55℃加热12h。在冷却至室温之后，将该反应混合物用EtOAc稀释并用H₂O洗涤。将有机相用盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物溶解于甲醇(46mL)中。添加2M K₂CO₃(23mL，46mmol)，并将该反应混合物在70℃加热4h。添加另外2M K₂CO₃(10mL，20mmol)并将该反应混合物在70℃加热12h。将该反应混合物在减压下部分浓缩以去除甲醇。将残余物用EtOAc萃取。将有机相用H₂O和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤且在减压下浓缩。将残余物通过使用在庚烷中EtOAc(20％至50％)的梯度在硅胶上快速层析进行纯化以得到3.6g的呈黄色固体的2-甲基-6-硝基-4-(三氟甲氧基)苯胺10c。

中间体10d的合成：

向2-甲基-6-硝基-4-(三氟甲氧基)苯胺10c(1.8g，7.69mmol)于乙酸(10.9mL)中的溶液中逐滴添加亚硝酸钠(0.806g，11.7mmol)于H₂SO₄/H₂O(2mL，1/1)中的溶液。将该反应混合物在室温搅拌30min。添加H₂O(22mL)和脲(0.802g，13.4mmol)。在室温10min之后，逐滴添加碘化钾(1.7g，10.2mmol)于H₂O(11mL)中的溶液。将该反应混合物在室温搅拌30min，将黄色固体过滤出，用H₂O洗涤并干燥以给出2.4g的2-碘-1-甲基-3-硝基-5-(三氟甲氧基)苯10d。

中间体10e的合成：

向2-碘-1-甲基-3-硝基-5-(三氟甲氧基)苯10d(3.5g，10.0mmol)于EtOH(30mL)中的溶液中添加NH₄Cl(2.7g，49.9mmol)于H₂O(30mL)中的溶液。将该反应混合物在50℃加热。添加铁(2.6g，46.9mmol)并将该反应混合物在回流下加热40min。在冷却至室温之后，将该反应混合物通过

过滤。将固体用EtOH洗涤。将滤液在减压下部分浓缩以去除EtOH。将残余物在EtOAc与在水中的NaHCO₃的饱和溶液之间分配。分离各相。将有机相用H₂O和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤且在减压下浓缩。将残余物通过使用在庚烷中EtOAc(0％至25％)的梯度在硅胶上快速层析进行纯化以得到2.9g的呈黄色油的2-碘-3-甲基-5-(三氟甲氧基)苯胺10e。

中间体10f的合成：

将2-碘-3-甲基-5-(三氟甲氧基)苯胺10e(2.9g，9.1mmol)于三乙胺(23mL)中的溶液用氩气脱气15min。添加二氯双(三苯基膦)钯(II)(0.327g，0.47mmol)、碘化亚铜(I)(0.164g，0.86mmol)和三甲基甲硅烷基乙炔(1.8mL，13.1mmol)。将该反应混合物在65℃加热12h。在冷却至室温之后，将该反应混合物用H₂O稀释并用EtOAc(3x)萃取。将有机相合并，用H₂O和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过使用在庚烷中EtOAc(0％至20％)的梯度在硅胶上快速层析进行纯化以得到2.6g的呈橙色油的3-甲基-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺10f。

中间体10g的合成：

向3-甲基-5-(三氟甲氧基)-2-((三甲基甲硅烷基)乙炔基)苯胺10f(2.7g，9.3mmol)于NMP(27mL)中的溶液中添加tBuOK(3.1g，27.8mmol)。将该反应混合物在80℃加热4h。在冷却至室温之后，将该反应混合物用H₂O稀释并用EtOAc萃取(2x)。将有机相合并，用H₂O和盐水洗涤，经Na₂SO₄干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过使用在庚烷中EtOAc(0％至20％)的梯度在硅胶上快速层析进行纯化以得到1.7g的呈橙色油的4-甲基-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚10g。

中间体10h的合成：

在0℃，将BH₃-吡啶(1.2mL，11.6mmol)逐滴添加至4-甲基-6-(三氟甲氧基)-1H-吲哚10g(0.5g，2.32mmol)于EtOH(3mL)中的溶液中。缓慢地逐滴添加6N HCl(6mL)，同时保持反应温度低于10℃。将该混合物在0℃搅拌3h。添加水(12mL)并将该混合物用在水中的NaOH浓溶液碱化直至pH8-9(维持反应温度低于20℃)。将该混合物用EtOAc进行萃取。将有机层用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下蒸发。添加甲苯并将该溶液在减压下浓缩以给出450mg的4-甲基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚10h。

中间体10i的合成：

将4-甲基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚10h(163mg，0.75mmol)、2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸5d(400mg，0.75mmol)、HATU(428mg，1.13mmol)和二异丙基乙胺(372μL，2.25mmol)于DMF(3.8mL)中的混合物在室温搅拌2h。将该混合物用水稀释。将所得粘性材料用EtOAc吸收。将有机层用在水中10％的K₂CO₃溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将化合物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，24g，庚烷/EtOAc梯度80/20至70/30)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮10i(226mg)。

化合物10的合成以及手性分离成对映异构体10A和10B：

在N₂流下，在5℃，将在二噁烷(772μL，3.1mmol)中的4M HCl逐滴添加至2-(2-(2-((叔丁基二甲基甲硅烷基)氧基)乙氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮10i(226mg，0.31mmol)于MeOH(4mL)中的溶液中。将该反应在室温搅拌1h。将混合物冷却至0℃，用10％的K₂CO₃水性溶液碱化并用EtOAc萃取。将有机层分离，用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，12g，CH₂Cl₂/MeOH 98.5/1.5)进行纯化。经由反相色谱(固定相：YMC-actus Triart-C18 10μm 30×150mm，流动相：梯度从55％NH₄HCO₃ 0.2％、45％CH₃CN至0％NH₄HCO₃ 0.2％、100％CH₃CN)进行第二纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下浓缩以给出呈外消旋体的2-(4-氯-2-(2-羟基乙氧基)苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-1-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙酮10(78mg)。将小级分通过用CH₃CN/二异丙醚研磨进行固化以提供化合物10(9mg)。将剩余量用于经由制备型手性SFC(固定相：

AD-H 5μm 250×30mm，流动相：60％CO₂、40％iPrOH)分离化合物10的对映异构体。将第一洗脱对映异构体(27mg)溶解于CH₃CN(2ml)中，添加水(8mL)并将该混合物冻干以给出呈粉末的对映异构体10A(25mg)。将第二洗脱对映异构体(28mg)溶解于CH₃CN(2ml)中，添加水(8mL)并将混合物冻干以给出呈粉末的对映异构体10B(22mg)。

化合物10：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 2.21(s,3H)3.01-3.13(m,2H)3.72(s,3H)3.70-3.82(m,2H)4.08-4.22(m,3H)4.40-4.48(m,1H)4.98(t,J＝5.4Hz,1H)5.82(d,J＝8.5Hz,1H)6.35(br s,1H)6.66(s,1H)6.82-6.90(m,3H)7.02(dd,J＝8.4,1.7Hz,1H)7.15(d,J＝1.6Hz,1H)7.36(d,J＝8.2Hz,1H)7.89(s,1H)8.16(s,1H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-B)：R_t 3.26min，MH⁺618

对映异构体10A：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 2.21(s,3H)3.01-3.14(m,2H)3.72(s,3H)3.71-3.83(m,2H)4.07-4.22(m,3H)4.44(td,J＝10.2,6.5Hz,1H)4.98(t,J＝5.5Hz,1H)5.82(d,J＝8.5Hz,1H)6.35(s,1H)6.66(t,J＝1.9Hz,1H)6.81-6.90(m,3H)7.02(dd,J＝8.4,2.1Hz,1H)7.15(d,J＝1.9Hz,1H)7.36(d,J＝8.2Hz,1H)7.89(s,1H)8.16(s,1H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-B)：R_t 3.26min，MH⁺618

[α]_D ²⁰：-38.4°(c 0.279，DMF)

手性SFC(方法SFC-F)：R_t 1.41min，MH⁺618，手性纯度100％。

对映异构体10B：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 2.21(s,3H)3.00-3.14(m,2H)3.72(s,3H)3.71-3.82(m,2H)4.06-4.23(m,3H)4.44(td,J＝10.1,6.9Hz,1H)4.95-5.02(m,1H)5.82(d,J＝8.5Hz,1H)6.35(s,1H)6.66(t,J＝1.7Hz,1H)6.82-6.90(m,3H)7.02(dd,J＝8.5,1.9Hz,1H)7.15(d,J＝1.9Hz,1H)7.36(d,J＝8.2Hz,1H)7.89(s,1H)8.16(s,1H)9.13(s,1H)

LC/MS(方法LC-B)：R_t 3.26min，MH⁺618

[α]_D ²⁰：+37.5°(c 0.299，DMF)

手性SFC(方法SFC-F)：R_t 1.82min，MH⁺618，手性纯度100％。

实例11：4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)丁酸(化合物11)的合成以及手性分离为对映异构体11A和11B。

中间体11a的合成：

在10℃，向2-(4-氯-2-羟基苯基)乙酸乙基酯4b(8.5g，39.6mmol)和Cs₂CO₃(25.8g，79.2mmol)于DMF(130mL)中的悬浮液中逐滴添加4-溴丁酸叔丁基酯[CAS 110611-91-1](7mL，39.6mmol)。将混合物在室温下搅拌过夜。将混合物用EtOAc和水稀释。倾析各层。将有机层用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc 90/10)进行纯化。将纯级分合并并浓缩至干燥以给出叔丁基4-(5-氯-2-(2-乙氧基-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸酯11a(12.7g)。

中间体11b的合成：

在N₂流下，将烧瓶用在THF(23.5mL，35.3mmol)中1.5M的LiHMDS填充，并将溶液冷却至-78℃。逐滴添加4-(5-氯-2-(2-乙氧基-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯11a(6.3g，17.6mmol)于THF(60mL)中的溶液，并将该混合物在-78℃搅拌15min。添加三甲基氯硅烷(3.6mL，28.3mmol)。在-78℃15min之后，添加在THF(40mL)中的N-溴代琥珀酰亚胺(3.77g，21.2mmol)，并将混合物在-70℃搅拌1h。将该反应用水淬灭并用EtOAc萃取。将有机层分离，用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以产生叔丁基4-(2-(1-溴-2-乙氧基-2-氧代乙基)-5-氯苯氧基)丁酸酯11b(7.6g)。将该化合物直接用于下一反应步骤中而无需进一步纯化。

中间体11c的合成：

在室温向4-(2-(1-溴-2-乙氧基-2-氧代乙基)-5-氯苯氧基)丁酸叔丁基酯11b(7.6g，17.4mmol)于CH₃CN(140mL)中的溶液中添加二异丙基乙胺(4.8mL，27.9mmol)和3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯胺[CAS 1220630-56-7](4g，20.9mmol)。将该混合物在65℃搅拌24h。将混合物用EtOAc稀释，用0.5N HCl(两次)和水洗涤。将有机层经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc85/15至70/30)进行纯化。将纯级分合并并浓缩至干燥以给出4-(5-氯-2-(2-乙氧基-1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯11c(6.6g)。

中间体11d的合成：

将4-(5-氯-2-(2-乙氧基-1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯11c(6.6g，12.1mmol)和氢氧化锂一水合物(1.52g，36.3mmol)于THF/水(1/1)(160mL)中的混合物在室温搅拌1h。将该混合物用水稀释。将水性溶液用3N HCl缓慢地酸化并用EtOAc萃取。将合并的有机层经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩以给出2-(2-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸11d(6.2g)。将没有进一步纯化的该粗产物用于下一个步骤中。

中间体11e的合成：

将6-(三氟甲基)二氢吲哚[CAS 181513-29-1](290mg，1.55mmol)、2-(2-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸11d(800mg，1.55mmol)、HATU(880mg，2.32mmol)和二异丙基乙胺(770μL，4.64mmol)于DMF(30mL)中的混合物在室温搅拌2h。将该混合物用水稀释。将沉淀物过滤出，用水洗涤并用EtOAc吸收。将有机层用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物从二异丙醚结晶以给出4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯11e(500mg)。

化合物11的合成以及手性分离成对映异构体11A和11B：

将4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯11e(500mg，0.729mmol)于二噁烷(5mL)中的4M HCl中的溶液在5℃搅拌3h并在室温搅拌8h。将沉淀物过滤出，用二噁烷/二异丙醚洗涤并干燥以给出呈外消旋体的4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)丁酸11(430mg，0.4H₂O(通过滴定确定))。

将化合物11的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

AD-H 5μm250×30mm，流动相：65％CO₂、35％EtOH)进行分离。将第一洗脱对映异构体(80mg)通过用石油醚/二异丙醚滴定进行固化以给出对映异构体11A(65mg)。将第二洗脱对映异构体(126mg)通过用石油醚/二异丙醚滴定进行固化以给出对映异构体11B(110mg)。

化合物11：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 1.94-2.02(m,2H)2.31-2.42(m,2H)3.15-3.35(m,2H)3.73(s,3H)4.01-4.24(m,3H)4.22-4.49(m,1H)5.73(s,1H)6.34(s,1H)6.67(s,1H)6.82(s,1H)7.02(dd,J＝8.1,2.0Hz,1H)7.13(d,J＝2.0Hz,1H)7.33(d,J＝8.0Hz,1H)7.38(d,J＝7.6Hz,1H)7.45(d,J＝7.6Hz,1H)8.16(s,1H)8.38(s,1H)9.15(s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.70min，MH⁺630

对映异构体11A：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 1.98(br s,2H)2.28-2.45(m,2H)3.13-3.29(m,2H)3.74(s,3H)4.02-4.17(m,3H)4.36-4.44(m,1H)5.74(br d,J＝8.5Hz,1H)6.35(br s,1H)6.68(s,1H)6.80-6.88(m,2H)7.03(br d,J＝7.9Hz,1H)7.14(s,1H)7.33(d,J＝7.8Hz,1H)7.37-7.40(m,1H)7.46(br d,J＝7.6Hz,1H)8.16(s,1H)8.39(s,1H)9.16(s,1H)12.13(brs,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.79分钟，MH⁺630

[α]_D ²⁰：-28.9°(c 0.26，DMF)

手性SFC(方法SFC-G)：R_t 3.31min，MH⁺630，手性纯度100％。

对映异构体11B：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 1.91-2.04(m,2H)2.28-2.46(m,2H)3.16-3.30(m,2H)3.73(s,3H)4.02-4.18(m,3H)4.35-4.44(m,1H)5.73(br d,J＝8.5Hz,1H)6.34(br s,1H)6.68(s,1H)6.80-6.87(m,2H)7.02(br d,J＝7.9Hz,1H)7.13(s,1H)7.31-7.41(m,2H)7.45(br d,J＝7.9Hz,1H)8.16(s,1H)8.38(s,1H)9.16(s,1H)12.13(br s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.79min，MH⁺630

[α]_D ²⁰：+23.8°(c 0.29，DMF)

手性SFC(方法SFC-G)：R_t4.32 min，MH⁺630，手性纯度100％。

实例12：4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸(化合物12)的合成以及手性分离为对映异构体12A和12B。

中间体12a的合成：

将5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚2c(630mg，2.9mmol)、2-(2-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸11d(1.5g，2.9mmol)、HATU(1.65g，4.35mmol)和二异丙基乙胺(1.45mL，8.7mmol)于DMF(30mL)中的混合物在室温搅拌2h。将该混合物用水稀释。将沉淀物过滤出，用水洗涤并用EtOAc吸收。将有机溶液用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc 60/40)进行纯化。在从***/二异丙醚结晶化之后，将纯级分合并并浓缩至干燥以给出4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯12a(1.45g)。

化合物12的合成以及手性分离成对映异构体12A和12B：

将4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯12a(1.45g，2.03mmol)于二噁烷(12mL)中的4M HCl中的溶液在5℃搅拌3h并在室温搅拌12h。将沉淀物过滤出，用二噁烷/二异丙醚洗涤并干燥以提供粗化合物12(1.02g)。将小部分(90mg)通过手性SFC(固定相：2-乙基吡啶6μm 150×21.2mm，流动相：60％CO₂、40％iPrOH)进一步纯化以在通过用CH₃CN/二异丙醚研磨进行固化之后，给出呈外消旋体的4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-(5-甲氧基-6-(三氟甲基)二氢吲哚-1-基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸12(70mg)。将剩余量用于分离对映异构体。

将化合物12的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

AS-H 5μm250×20mm，流动相：63％CO₂、37％iPrOH)进行分离。将第一洗脱对映异构体(458mg)在1NHCl和EtOAc的混合物中搅拌。将有机层分离，经MgSO₄干燥，过滤并且在减压下浓缩溶剂。将残余物通过用二异丙醚/石油醚研磨进行固化以给出对映异构体12A(270mg)。将第二洗脱对映异构体(405mg)在1N HCl和EtOAc的混合物中搅拌。将有机层分离，经MgSO₄干燥，过滤并且在减压下浓缩溶剂。将残余物通过用二异丙醚/石油醚研磨进行固化以给出对映异构体12B(272mg)。

化合物12：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 1.95-2.04(m,2H)2.31-2.45(m,2H)3.15-3.28(m,2H)3.73(s,3H)3.84(s,3H)3.98-4.17(m,3H)4.33-4.41(m,1H)5.70(br d,J＝8.6Hz,1H)6.33(s,1H)6.66(s,1H)6.77-6.83(m,2H)7.01(br d,J＝8.6Hz,1H)7.12(s,1H)7.23(s,1H)7.33(d,J＝8.6Hz,1H)8.15(s,1H)8.34(s,1H)9.13(s,1H)12.07(br s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.72min，MH⁺660

对映异构体12A：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 1.94-2.05(m,2H)2.31-2.46(m,2H)3.16-3.31(m,2H)3.73(s,3H)3.85(s,3H)3.99-4.18(m,3H)4.38(td,J＝10.2,6.5Hz,1H)5.71(d,J＝8.5Hz,1H)6.34(s,1H)6.67(s,1H)6.82(s,1H)6.83(d,J＝9.5Hz,1H)7.02(dd,J＝8.2,1.6Hz,1H)7.13(s,1H)7.23(s,1H)7.33(d,J＝8.2Hz,1H)8.16(s,1H)8.34(s,1H)9.15(s,1H)12.11(br s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.70分钟，MH⁺660

[α]_D ²⁰：+30.4°(c 0.257，DMF)

手性SFC(方法SFC-H)：R_t 3.71min，MH⁺660，手性纯度100％。

对映异构体12B：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 1.91-2.08(m,2H)2.32-2.44(m,2H)3.16-3.31(m,2H)3.73(s,3H)3.85(s,3H)3.99-4.17(m,3H)4.38(td,J＝10.3,6.6Hz,1H)5.71(d,J＝8.5Hz,1H)6.34(s,1H)6.67(s,1H)6.79-6.85(m,2H)7.02(d,J＝8.1Hz,1H)7.13(s,1H)7.23(s,1H)7.33(d,J＝8.2Hz,1H)8.16(s,1H)8.34(s,1H)9.15(s,1H)12.12(br s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.70min，MH⁺630

[α]_D ²⁰：-36.9°(c 0.287，DMF)

手性SFC(方法SFC-H)：R_t 5.91min，MH⁺660，手性纯度100％。

实例13：4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)丁酸(化合物13)的合成以及手性分离为对映异构体13A和13B。

中间体13a的合成：

将6-(三氟甲氧基)二氢吲哚[CAS 959235-95-1](590mg，2.9mmol)、2-(2-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸11d(1.5g，2.9mmol)、HATU(1.65g，4.35mmol)和二异丙基乙胺(1.45mL，8.7mmol)于DMF(60mL)中的混合物在室温搅拌12h。将该混合物用水稀释。将沉淀物过滤出，用水洗涤并用EtOAc吸收。将有机层用水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，120g，庚烷/EtOAc 60/40)进行纯化。将纯级分合并并浓缩至干燥以在从***/二异丙醚结晶化之后，给出在4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)-丁酸叔丁基酯13a(1.05g)。

化合物13的合成以及手性分离为对映异构体13A和13B：

将4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯13a(1.05g，1.50mmol)于二噁烷(9.5mL)中的4M HCl中的溶液在5℃搅拌3h并在室温搅拌12h。将沉淀物过滤出，用二噁烷/二异丙醚洗涤并干燥以给出呈外消旋体的4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)丁酸13(965mg，0.23H₂O(通过滴定确定))。

将化合物13的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

AS-H 5μm250×20mm，流动相：80％CO₂、20％EtOH)进行分离。将第一洗脱对映异构体(390mg)通过用石油醚/二异丙醚研磨进行固化以给出对映异构体13A(260mg)。将第二洗脱对映异构体(350mg)通过用石油醚/二异丙醚研磨进行固化以给出对映异构体13B(188mg)。

化合物13：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 1.94-2.03(m,2H)2.33-2.41(m,2H)3.10-3.24(m,2H)3.73(s,3H)4.04-4.26(m,3H)4.39(td,J＝10.2,6.5Hz,1H)5.71(s,1H)6.34(s,1H)6.67(s,1H)6.81(s,1H)6.99-7.07(m,2H)7.13(d,J＝1.6Hz,1H)7.27-7.39(m,2H)8.04(s,1H)8.16(s,1H)9.15(s,1H)12.08(br s,1H)

LC/MS(方法LC-B)：R_t 2.73min，MH⁺646

对映异构体13A：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 1.93-2.03(m,2H)2.34-2.47(m,2H)3.13-3.21(m,2H)3.73(s,3H)4.03-4.17(m,3H)4.39(td,J＝10.1,6.6Hz,1H)5.72(d,J＝8.5Hz,1H)6.35(s,1H)6.68(s,1H)6.82(s,1H)6.87(d,J＝8.2Hz,1H)7.02(t,J＝8.4Hz,1H)7.13(s,1H)7.27–7.39(m,2H)8.04(s,1H)8.16(s,1H)9.15(s,1H)12.10(br s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.83分钟，MH⁺646

[α]_D ²⁰：+38.4°(c 0.276，DMF)

手性SFC(方法SFC-I)：R_t4.96分钟，MH⁺646，手性纯度100％。

对映异构体13B：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 1.91-2.02(m,2H)2.33-2.41(m,2H)3.10-3.24(m,2H)3.73(s,3H)4.04-4.17(m,3H)4.39(td,J＝10.1,6.6Hz,1H)5.72(d,J＝8.5Hz,1H)6.35(s,1H)6.68(s,1H)6.81-6.89(m,2H)6.99-7.05(m,2H)7.12-7.15(m,1H)7.27-7.40(m,2H)8.04(s,1H)8.16(s,1H)9.16(s,1H)12.11(br s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.83min，MH⁺646

[α]_D ²⁰：-43.2°(c 0.273，DMF)

手性SFC(方法SFC-I)：R_t 6.56min，MH⁺646，手性纯度100％。

实例14：4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)-2,2-二甲基丁酸(化合物14)的合成以及手性分离为对映异构体14A和14B。

中间体14a的合成：

向2-(4-氯-2-羟基苯基)乙酸甲基酯[CAS 518979-09-4](1g，4.99mmol)和碳酸铯(3.25g，9.97mmol)于DMF(30mL)中的混合物中添加4-溴-2,2-二甲基丁酸甲基酯[CAS4833-99-2](1.09g，5.23mmol)。将该反应混合物在室温搅拌20h。将该反应混合物倾倒进搅拌的水(150mL)中并将产物用Et₂O萃取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且在减压下蒸发。将该产物在室温静置时结晶。将固体残余物在5mL二异丙醚中搅拌。将沉淀物过滤出，用二异丙醚洗涤(3x)，并在真空下在45℃干燥以提供4-(5-氯-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯氧基)-2,2-二甲基丁酸甲基酯14a(0.897g)。

中间体14b的合成：

将4-(5-氯-2-(2-甲氧基-2-氧代乙基)苯氧基)-2,2-二甲基丁酸甲基酯14a(0.897g，2.73mmol)于MeOH(10mL)和二噁烷(5mL)的溶剂混合物中的溶液在冰浴上冷却。在0℃，小心地添加1M NaOH(2.73mL，2.73mmol)。将该反应混合物在0℃搅拌2h并在室温搅拌14h。将该反应混合物倾倒进水(50mL)中，搅拌15分钟并放置30分钟。将固体级分(未反应的中间体14a)过滤出，并用水洗涤(3x)。将合并的滤液通过逐滴添加1N HCl(2.8mL)(同时搅拌)进行酸化。在10min之后，将沉淀物过滤出，用水洗涤(3x)，并在真空下在45℃干燥以提供2-(4-氯-2-(4-甲氧基-3,3-二甲基-4-氧代丁氧基)苯基)乙酸14b(0.576g)。

中间体14c的合成：

在N₂气氛下，向2-(4-氯-2-(4-甲氧基-3,3-二甲基-4-氧代丁氧基)苯基)乙酸14b(576mg，1.83mmol)、6-(三氟甲氧基)二氢吲哚[CAS 959235-95-1](409mg，2.01mmol)和二异丙基乙胺(907μL，5.49mmol)于DMF(7.5mL)中的搅拌的溶液中添加HATU(1.07g，2.75mmol)，并将该反应混合物在室温搅拌5h。添加水(30mL)并将产物用Et₂O萃取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且在减压下蒸发。将残余物通过使用庚烷/EtOAc 100/0至0/100的梯度在硅胶上快速层析(40g)进行纯化。将所希望的级分合并，并在减压下蒸发，并与甲苯共蒸发。将残余物在真空下在45℃干燥以提供呈粉末的甲基4-(5-氯-2-(2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)-2,2-二甲基丁酸酯14c(790mg)。

中间体14d的合成：

将4-(5-氯-2-(2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)-2,2-二甲基丁酸甲基酯14c(790mg，1.58mmol)于2-Me-THF(30mL)中的溶液在N₂-流下搅拌并冷却至-78℃。逐滴添加1M锂双(三甲基甲硅烷基)酰胺于THF(3.16mL，3.16mmol)中的溶液，并将所得混合物在-78℃搅拌30分钟。逐滴添加三甲基氯硅烷(323μL，2.53mmol)，并将混合物在-78℃搅拌25min。逐滴添加N-溴代琥珀酰亚胺(352mg，1.98mmol)于2-Me-THF(7.5mL)和THF(2.5mL)中的溶液，并将该反应混合物在-78℃搅拌45min。缓慢地添加NH₄Cl的水性饱和溶液(50mL)，并将所得混合物搅拌无需冷却直至温度达到0℃。添加水(10mL)，并在搅拌30min之后，将各层分离。将有机层经MgSO₄干燥，过滤，在减压下蒸发，并与CH₃CN共蒸发以提供4-(2-(1-溴-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)-5-氯苯氧基)-2,2-二甲基丁酸甲基酯14d(915mg)。将该产物无需进一步纯化用于下一个步骤。

中间体14e的合成：

在N₂-气氛下，向4-(2-(1-溴-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)-5-氯苯氧基)-2,2-二甲基丁酸甲基酯14d(915mg，1.58mmol)于CH₃CN(40mL)中的搅拌的溶液中添加3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯胺[CAS 1220630-56-7](301mg，1.58mmol)和二异丙基乙胺(545μL，3.16mmol)，并将该反应混合物在50℃搅拌18h并在70℃搅拌6h。将混合物冷却至室温并倾倒进搅拌的H₂O(200mL)中。将产物用Et₂O萃取(2x)。将合并的有机层用盐水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并且在减压下蒸发。将残余物通过在硅胶上快速层析(40g)，使用庚烷/EtOAc/EtOH 100/0/0至40/45/15的梯度进行纯化。将所希望的级分合并并将溶剂在减压下蒸发并与二噁烷共蒸发以提供4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)-2,2-二甲基丁酸甲基酯14e(1.09g)。将该产物不经纯化而用于下一步骤中。

化合物14的合成以及手性分离为对映异构体14A和14B：

将1M NaOH(3.95mL，3.95mmol)添加至4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)-2,2-二甲基丁酸甲基酯14e(1.09g，1.58mmol)于二噁烷(6.5mL)中的搅拌的溶液中。将该反应混合物在室温搅拌40h。添加水(21mL)和1N HCl(4.1mL)，并在搅拌10分钟之后将沉淀物过滤出，并用水洗涤(3x)。将固体残余物(0.9g)在CH₂Cl₂(7.5mL)中搅拌45分钟，过滤出，用CH₂Cl₂洗涤(3x)，并在真空下在45℃干燥以提供外消旋的4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代-2-(6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)乙基)苯氧基)-2,2-二甲基丁酸(化合物14，590mg)。

将化合物14的对映异构体(557mg)经由制备型手性SFC(固定相：

Diacel AD 20×250mm，流动相：CO₂,EtOH+0.4％iPrNH₂)进行分离。将含有第一洗脱产物的级分合并，在减压下蒸发并与CH₃CN共蒸发。将残余物从Et₂O/庚烷3/1中结晶，过滤出，并用Et₂O洗涤(3x)，并在真空下在50℃干燥以提供对映异构体14A(96mg)。将含有第二洗脱产物的级分合并，在减压下蒸发并与CH₃CN共蒸发。将残余物从Et₂O结晶，过滤出，用Et₂O洗涤(3x)，并在真空下在50℃干燥以提供对映异构体14B(35mg+106mg(第二批))。

化合物14：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 1.11(d,J＝5.1Hz,6H)1.86-2.03(m,2H)3.09-3.28(m,2H)3.73(s,3H)4.01-4.18(m,3H)4.38(td,J＝10.2,6.6Hz,1H)5.69(d,J＝8.6Hz,1H)6.33(t,J＝2.0Hz,1H)6.67(t,J＝1.9Hz,1H)6.79-6.86(m,2H)6.97-7.05(m,2H)7.18(d,J＝1.8Hz,1H)7.31(d,J＝8.1Hz,1H)7.34(d,J＝8.1Hz,1H)8.03(br s,1H)8.15(s,1H)9.14(s,1H)12.25(br s,1H)

LC/MS(方法LC-C)：R_t 1.12min，MH⁺674

对映异构体14A：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 1.11(d,J＝5.1Hz,6H)1.87-2.02(m,2H)3.09-3.26(m,2H)3.73(s,3H)4.02-4.18(m,3H)4.37(td,J＝10.2,6.6Hz,1H)5.69(d,J＝8.8Hz,1H)6.33(t,J＝2.2Hz,1H)6.67(t,J＝1.8Hz,1H)6.79-6.86(m,2H)6.99-7.04(m,2H)7.18(d,J＝2.0Hz,1H)7.31(d,J＝8.1Hz,1H)7.34(d,J＝8.4Hz,1H)8.03(br s,1H)8.15(s,1H)9.14(s,1H)12.25(br s,1H)

LC/MS(方法LC-D)：R_t 2.09分钟，MH⁺674

[α]_D ²⁰：-32.8°(c 0.528，DMF)

手性SFC(方法SFC-K)：R_t 3.63分钟，MH⁺674，手性纯度100％。

熔点：111℃

对映异构体14B：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 1.11(d,J＝5.1Hz,6H)1.87-2.02(m,2H)3.10-3.27(m,2H)3.73(s,3H)4.03-4.18(m,3H)4.38(td,J＝10.2,6.5Hz,1H)5.69(d,J＝8.6Hz,1H)6.33(t,J＝1.9Hz,1H)6.67(t,J＝1.9Hz,1H)6.79-6.86(m,2H)6.98-7.05(m,2H)7.18(d,J＝1.8Hz,1H)7.31(d,J＝8.4Hz,1H)7.34(d,J＝8.1Hz,1H)8.03(br s,1H)8.15(s,1H)9.14(s,1H)12.25(br s,1H)

LC/MS(方法LC-D)：R_t 2.08分钟，MH⁺674

[α]_D ²⁰：+32.8°(c 0.515，DMF)

手性SFC(方法SFC-K)：R_t4.22分钟，MH⁺674，手性纯度100％。

熔点：177℃

实例15：4-(5-氯-2-(2-(5-氟-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸(化合物15)的合成以及手性分离为对映异构体15A和15B。

中间体15a的合成：

将5-氟-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚9e(321mg，1.45mmol)、2-(2-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸11d(750mg，1.45mmol)、HATU(827mg，2.18mmol)和二异丙基乙胺(719μL，4.35mmol)于DMF(30mL)中的混合物在室温搅拌12h。将该混合物用水稀释。将沉淀物过滤出，用水洗涤并用EtOAc吸收。将有机溶液用在水中10％的K₂CO₃溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，40g，CH₂Cl₂/MeOH 98/2)进行纯化。将纯级分合并，并浓缩至干燥以给出4-(5-氯-2-(2-(5-氟-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯15a(1.05g)。

化合物15的合成以及手性分离为对映异构体15A和15B：

将4-(5-氯-2-(2-(5-氟-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯15a(1.05g，1.46mmol)于二噁烷(8mL)中的4M HCl中的溶液在5℃搅拌3h，并在室温搅拌12h。将沉淀物过滤出，用二噁烷/二异丙醚洗涤并干燥。将残余物(580mg)溶解在THF(2.5mL)中，并逐滴添加氢氧化锂一水合物(180mg，4.277mmol)于水(2.5mL)中的溶液。将混合物在室温搅拌18h。将该反应冷却至0℃，并添加水和冰。通过添加3N HCl将pH调节至6。将产物用EtOAc萃取。将有机层分离，经MgSO₄干燥，过滤并且在减压下浓缩溶剂。将小级分的残余物从CH₂Cl₂结晶以给出呈外消旋体的4-(5-氯-2-(2-(5-氟-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸15(24mg)。将剩余量通过在硅胶上快速层析(20-45μm，24g，CH₂Cl₂/MeOH梯度99.5/0.5至90/10)进一步纯化。将纯级分合并并浓缩至干燥以提供第二级分的化合物15(382mg)。

将化合物15(382mg)的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

OD-H5μm 250×30mm，流动相：75％CO₂、25％MeOH(+0.3％iPrNH₂))进行分离。将第一洗脱对映异构体(178mg)通过用庚烷/二异丙醚滴定以给出对映异构体15A(140mg)进行固化。将第二洗脱对映异构体(187mg)通过用庚烷/二异丙醚滴定以给出对映异构体15B(136mg)进行固化。

化合物15：

¹H NMR(500MHz,DMSO-d₆)δppm 1.90-2.04(m,2H)2.28-2.46(m,2H)3.11-3.28(m,2H)3.73(s,3H)4.03-4.18(m,3H)4.33-4.42(m,1H)5.71(d,J＝8.8Hz,1H)6.34(s,1H)6.67(s,1H)6.81(s,1H)6.87(br d,J＝8.8Hz,1H)7.02(dd,J＝8.2,1.9Hz,1H)7.12(s,1H)7.31(d,J＝8.2Hz,1H)7.43(d,J＝9.8Hz,1H)8.12-8.20(m,2H)9.16(s,1H)12.12(br s,1H)

LC/MS(方法LC-B)：R_t 2.72min，MH⁺664

熔点：188℃

对映异构体15A：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 1.88-2.12(m,2H)2.19-2.42(m,2H)2.96-3.24(m,2H)3.73(s,3H)3.89-4.16(m,3H)4.25-4.43(m,1H)5.72(d,J＝8.6Hz,1H)6.34(s,1H)6.66(s,1H)6.79-6.86(m,2H)7.01(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H)7.09-7.14(m,1H)7.32(d,J＝8.1Hz,1H)7.41(d,J＝9.6Hz,1H)8.12-8.17(m,2H)9.16(s,1H)

LC/MS(方法LC-B)：R_t 2.75min，MH⁺664

[α]_D ²⁰：-31.5°(c 0.267，DMF)

手性SFC(方法SFC-J)：R_t 2.66min，MH⁺664，手性纯度99.69％。

对映异构体15B：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 1.88-2.04(m,2H)2.22-2.43(m,2H)3.12-3.40(m,2H)3.72(s,3H)4.03-4.17(m,3H)4.33-4.43(m,1H)5.72(d,J＝8.6Hz,1H)6.34(s,1H)6.67(s,1H)6.78-6.87(m,2H)7.01(dd,J＝8.3,1.8Hz,1H)7.09-7.13(m,1H)7.32(d,J＝8.1Hz,1H)7.41(d,J＝9.6Hz,1H)8.12-8.18(m,2H)9.16(s,1H)

LC/MS(方法LC-B)：R_t 2.73min，MH⁺664

[α]_D ²⁰：+28.2°(c 0.262，DMF)

手性SFC(方法SFC-J)：R_t 3.53min，MH⁺664，手性纯度98.93％。

实例16：4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸(化合物16)的合成以及手性分离为对映异构体16A和16B。

中间体16a的合成：

将4-甲基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚10h(336mg，1.55mmol)、2-(2-(4-(叔丁氧基)-4-氧代丁氧基)-4-氯苯基)-2-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)乙酸11d(800mg，1.55mmol)、HATU(883mg，2.32mmol)和二异丙基乙胺(767μL，4.64mmol)于DMF(30mL)中的混合物在室温搅拌12h。将该混合物用水稀释。将沉淀物过滤出，用水洗涤并用EtOAc吸收。将有机溶液用在水中10％的K₂CO₃溶液、水洗涤，经MgSO₄干燥，过滤并将该溶剂在减压下浓缩。将残余物通过在硅胶上快速层析(15-40μm，40g，庚烷/EtAOc梯度90/10至70/30)进行纯化。将纯级分合并并浓缩至干燥以给出4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯16a(816mg)。

化合物16的合成以及手性分离为对映异构体16A和16B：

将4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸叔丁基酯16a(816mg，1.14mmol)于二噁烷(7mL)中的4M HCl中的溶液在5℃搅拌2h，并在室温搅拌12h。将沉淀物过滤出，用二噁烷/二异丙醚洗涤并干燥。将残余物通过在硅胶上快速层析(20-45μm，40g，CH₂Cl₂/MeOH梯度100/0至95/5)进行纯化。将纯级分合并，并将溶剂在减压下蒸发以在从CH₃CN/二异丙醚结晶化之后给出4-(5-氯-2-(1-((3-甲氧基-5-(1H-1,2,4-***-1-基)苯基)氨基)-2-(4-甲基-6-(三氟甲氧基)二氢吲哚-1-基)-2-氧代乙基)苯氧基)丁酸16(495mg)。

将化合物16的对映异构体经由制备型手性SFC(固定相：

AD-H 5μm250×30mm，流动相：65％CO₂、35％iPrOH(+0.3％iPrNH₂))进行分离。将第一洗脱对映异构体(145mg)通过在硅胶上快速层析(10-40μm，24g，CH₂Cl₂/MeOH 98/2)进一步纯化。将纯级分合并并将溶剂在减压下浓缩以在通过用二异丙醚/戊烷研磨进行固化之后给出对映异构体16A(99mg)。将第二洗脱对映异构体(149mg)通过在硅胶上快速层析(10-40μm，24g，CH₂Cl₂/MeOH 98/2)进一步纯化。将纯级分合并并将溶剂在减压下浓缩以在通过用二异丙醚/戊烷研磨进行固化之后给出对映异构体16B(95mg)。

化合物16：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 1.91-2.05(m,2H)2.20(s,3H)2.29-2.43(m,2H)3.01-3.27(m,2H)3.72(s,3H)4.02-4.18(m,3H)4.35-4.44(m,1H)5.71(br d,J＝8.6Hz,1H)6.34(br s,1H)6.67(s,1H)6.78-6.90(m,3H)7.01(br d,J＝7.1Hz,1H)7.12(s,1H)7.31(d,J＝8.1Hz,1H)7.88(br s,1H)8.15(s,1H)9.14(s,1H)12.07(br s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.93min，MH⁺660

熔点：214℃

对映异构体16A：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 1.92-2.04(m,2H)2.20(s,3H)2.30-2.44(m,2H)2.99-3.16(m,2H)3.73(s,3H)4.04-4.17(m,3H)4.35-4.44(m,1H)5.71(br d,J＝8.6Hz,1H)6.34(br s,1H)6.67(s,1H)6.79-6.89(m,3H)7.02(br d,J＝8.6Hz,1H)7.12(s,1H)7.32(d,J＝8.1Hz,1H)7.89(s,1H)8.15(s,1H)9.14(s,1H)12.09(br s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.94分钟，MH⁺660

[α]_D ²⁰：-35.4°(c 0.263，DMF)

手性SFC(方法SFC-F)：R_t 1.61min，MH⁺660，手性纯度100％。

对映异构体16B：

¹H NMR(400MHz,DMSO-d₆)δppm 1.91-2.04(m,2H)2.20(s,3H)2.30-2.44(m,2H)3.00-3.15(m,2H)3.73(s,3H)4.03-4.17(m,3H)4.35-4.44(m,1H)5.71(d,J＝8.6Hz,1H)6.34(s,1H)6.67(s,1H)6.79-6.89(m,3H)7.02(dd,J＝8.1,1.5Hz,1H)7.10-7.14(m,1H)7.32(d,J＝8.59Hz,1H)7.89(s,1H)8.15(s,1H)9.14(s,1H)12.10(br s,1H)

LC/MS(方法LC-A)：R_t 2.94min，MH⁺660

[α]_D ²⁰：+34.3°(c 0.274，DMF)

手性SFC(方法SFC-F)：R_t2.22 min，MH⁺660，手性纯度99.47％。

表：如上文描述的制备化合物

本发明的化合物的抗病毒活性

DENV-2抗病毒测定

本发明的所有化合物的抗病毒活性针对DENV-216681株进行测试，该菌株用增强型绿色荧光蛋白标记(eGPF)。培养基由补充有2％热灭活的胎牛血清、0.04％庆大霉素(50mg/mL)以及2mM L谷氨酰胺的最低必需培养基组成。将获自ECACC的Vero细胞悬浮于培养基中，并且将25μL添加至384孔板(2500个细胞/孔)，这些板已经含有抗病毒化合物。通常，这些板含有测试化合物的9个稀释步骤的5倍连续稀释液，在于100％DMSO(200nL)中的最终浓度的200倍下。此外，一式四份地测试每一化合物浓度(对于多数活性化合物而言，最终浓度范围：25μM–0.000064μM或2.5μM–0.0000064μM)。最后，每个板包含被指定为病毒对照(在不存在化合物的情况下包含细胞和病毒)、细胞对照(在不存在病毒和化合物的情况下包含细胞)和培养基对照(在不存在细胞、病毒和化合物的情况下包含培养基)的孔。向被指定为培养基对照的这些孔添加25μL的培养基而不是Vero细胞。一旦细胞被添加到这些板，就将这些板在室温下孵育30分钟以便允许这些细胞在这些孔内均匀地分布。接着，将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃，5％CO₂)中孵育直到第二天。然后，以0.5的感染复数(MOI)添加用eGFP标记的DENV-2株16681。因此，将15μL的病毒悬浮液添加至所有含有测试化合物的孔中并且添加至被指定为病毒对照的孔中。并行地，将15μL的培养基添加至培养基对照和细胞对照。接着，将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃,5％CO₂)中孵育3天。在读出当天，使用一个自动化荧光显微镜在488nm(蓝色激光)下测量eGFP荧光。使用一种内部LIMS***，计算每种化合物的抑制剂量反应曲线并且测定半最大有效浓度(EC₅₀)。因此，使用以下公式来计算每一测试浓度的抑制百分比(I)：I＝100*(S_T-S_CC)/(S_VC-S_CC)；S_T、S_CC和S_VC分别是测试化合物孔、细胞对照孔和病毒对照孔中的eGFP信号的量。EC₅₀表示如通过相较于病毒对照的eGFP荧光强度的50％降低所测量，病毒复制被抑制50％的化合物的浓度。使用线性内插法计算EC₅₀(表1)。

并行地，在相同板上评定这些化合物的毒性。一旦进行eGFP信号的读出，就将40μL的ATPlite(一种细胞存活力染色剂)添加至384孔板的所有孔。ATP存在于所有代谢活性细胞中，并且当细胞经历坏死或凋亡时，浓度下降非常迅速。ATPLite测定***是基于通过ATP与添加的荧光素酶和萤虫素反应引起的光的产生。将这些板在室温下孵育10分钟。接着，在ViewLux上测量这些板。还测定了半最大细胞毒性浓度(CC₅₀)，其被定义为使发光信号相较于细胞对照孔的发光信号降低50％所需的浓度。最后，测定这些化合物的选择性指数(SI)，该指数如下计算：SI＝CC₅₀/EC₅₀。

表1：在DENV-2抗病毒测定中本发明的化合物的EC₅₀、CC₅₀和SI

N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。

四价逆转录酶定量-PCR(RT-qPCR)测定：方案A。

在RT-qPCR测定中测试本发明的化合物针对DENV-1菌株TC974#666(NCPV)、DENV-2菌株16681、DENV-3菌株H87(NCPV)和DENV-4菌株H241(NCPV)的抗病毒活性。因此，在存在或不存在测试化合物的情况下用DENV-1抑或-2抑或-3抑或-4感染Vero细胞。在感染后第3天，将细胞溶解并且细胞溶解产物用于制备病毒靶标(DENV的3’UTR；表2)和细胞参考基因(β-肌动蛋白，表2)两者的cDNA。随后，在Lightcycler480仪上进行双重实时PCR。所生成的Cp值与这些靶标的RNA表达的量成反比。通过一种测试化合物抑制DENV复制导致3’UTR基因的Cp的移位。另一方面，如果测试化合物对这些细胞来说是具有毒性的，那么将观察到对β-肌动蛋白表达的类似作用。对比ΔΔCp方法用于计算EC₅₀，该方法是基于用细胞管家基因(β-肌动蛋白)标准化的靶基因(3’UTR)的相对基因表达。此外，CC₅₀值是基于针对管家基因β-肌动蛋白获取的Cp值。

表2：用于实时定量RT-PCR的引物和探针。

^a报道染料(FAM，HEX)和淬灭剂(ZEN和IABkFQ)元素以粗体和斜体指示。

^b这些引物和探针的核苷酸序列选自登革热病毒基因组的3’UTR区中的保守区，其是基于保藏在Genbank的四种登革热血清型的300个核苷酸序列的比对(Gong等人，2013，Methods Mol Biol[分子生物学方法]，第16章)。

培养基由补充有2％热灭活的胎牛血清、0.04％庆大霉素(50mg/mL)以及2mM L-谷氨酰胺的最低必需培养基组成。将获自ECACC的Vero细胞悬浮于培养基中，并且将75μL/孔添加在96孔板(10000个细胞/孔)中，这些板已经含有抗病毒化合物。通常，这些板包含测试化合物的9个稀释步骤的5倍连续稀释液，在于100％DMSO中的最终浓度的200倍下(500nL；对于多数活性化合物而言，最终浓度范围：25μM–0.000064μM或2.5μM–0.0000064μM)。此外，每个板包含被指定为病毒对照(在不存在化合物的情况下包含细胞和病毒)和细胞对照(在不存在病毒和化合物的情况下包含细胞)的孔。一旦将这些细胞添加在这些板中，就将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃，5％CO₂)中孵育直到第二天。稀释登革热病毒血清型1、2、3和4，以便在测定中获得约22-24的Cp。因此，将25μL的病毒悬浮液添加至所有含有测试化合物的孔中并且添加至被指定为病毒对照的孔中。并行地，将25μL的培养基添加至细胞对照。接着，将这些板在一个完全润湿的孵育箱(37℃,5％CO₂)中孵育3天。在3天之后，将上清液从这些孔中除去并且将这些孔用冰冷PBS(约100μL)洗涤两次。将这些96-孔板内的细胞沉淀储存在-80℃下持续至少1天。接着，根据制造商的指导(生命技术公司(LifeTechnologies))使用Cells-to-CT^TM溶解试剂盒提取RNA。这些细胞溶解产物可以储存在-80℃下或立即用于逆转录步骤中。

在逆转录步骤的准备中，制备混合物A(表3A)并且将7.57μL/孔分配在一个96孔板中。在添加5μL的细胞溶解产物之后，进行在75℃下的五分钟变性步骤(表3B)。之后，添加7.43μL的混合物B(表3C)并且起始逆转录步骤(表3D)以产生cDNA。

最后，制备RT-qPCR混合物，混合物C(表4A)，并且将该混合物(22.02μL/孔)分配在96孔LightCycler qPCR板中，向这些板添加3μL的cDNA，并且根据表4B中的条件在LightCycler 480上进行qPCR。

使用LightCycler软件和一种内部LIMS***，计算每种化合物的剂量反应曲线，并且测定半最大有效浓度(EC₅₀)和半最大细胞毒性浓度(CC₅₀)(表5-8)。

表3：使用混合物A、变性、混合物B和逆转录进行cDNA合成。

表4：qPCR混合物和方案。

表5：在RT-qPCR测定中化合物针对血清型1的EC₅₀、CC₅₀和SI

N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。

表6：在RT-qPCR测定中化合物针对血清型2的EC₅₀、CC₅₀和SI

N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。

表7：在RT-qPCR测定中化合物针对血清型3的EC₅₀、CC₅₀和SI

N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。

表8：在RT-qPCR测定中化合物针对血清型4的EC₅₀、CC₅₀和SI

N＝对这些化合物进行测试的独立实验的数目。

Claims (7)

1.一种具有式(I)的化合物

其中

R¹是氯或氟；

R²是-CH₂CH₂OH、或C_3-5烷基COOH；

R³是三氟甲基、或三氟甲氧基；

R⁴是氢、氟、或甲氧基；以及

R⁵是氢或甲基；

或其药学上可接受的盐。

2.根据权利要求1所述的化合物或其立体异构形式，或其药学上可接受的盐，其中所述化合物选自下组，该组由以下组成：

3.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物具有(+)比旋光度。

4.根据权利要求1所述的化合物，其中所述化合物选自：

5.一种药物组合物，该药物组合物包含根据权利要求1至4中任一项所述的化合物连同一种或多种药学上可接受的赋形剂、稀释剂或载体。

6.根据权利要求1至4中任一项所述的具有式(I)的化合物在制备用于治疗登革热感染并用于预防或治疗与登革热感染有关的疾病的药物中的用途。

7.根据权利要求6所述的具有式(I)的化合物的用途，其中该登革热感染是通过DENV-1、DENV-2、DENV-3或DENV-4菌株的病毒感染的。