CN110430870B - 用于治疗肠改变的组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种组合物及其在预防和/或治疗憩室疾病或由此衍变或与此相关的病理中的应用，所述组合物包含一种混合物，该混合物包含以下物质或者由以下物质组成：至少一种越橘属植物的果实的提取物(a)和至少一种药物或食品应用可接受的成分(b)。

Description

用于治疗肠改变的组合物
本发明涉及一种组合物及其在预防和/或治疗憩室疾病或由此衍变或与此相关的病理中的应用，所述组合物包含一种混合物，该混合物包含以下物质或者由以下物质组成：至少一种越橘属植物的果实的提取物(a)和至少一种药物或食品应用可接受的成分(b)。
肠道是许多炎症病理的靶器官，这可能是严重疾病的原因，并且临床医生通常很难处理。
其中，最重要的角色是：
-炎性肠病(IBD)，
-贮袋炎，
-憩室疾病和憩室炎。
炎性肠病(IBD)的特征在于存在肠道粘膜的慢性炎症，其具有间歇性过程并且可能引起严重的并发症。它们包括克罗恩病(CD)、溃疡性直肠结肠炎(URC)和所谓的“不确定性结肠炎”(IC)。
该组的两个最重要的病理，即克罗恩病(CD)和溃疡性直肠结肠炎(URC)有不同症状。
在CD的情况中，最常见的初始症状是腹泻和腹痛，尤其局限于右髂窝(对应于最后的回肠环，这是最常见的疾病部位)。
另一方面，URC自身几乎总是表现出血性腹泻(含有鲜红色的血液和粘液混合粪便)，伴有“里急后重”(不完全排净的感觉)，有时有贫血症。
两种疾病都可以具有交替的潜伏期和炎症突然发作。当肠道炎症再次变得急性时，也会出现发热、体重减轻、虚弱和食欲不振等症状。随着时间的推移，CD可能因狭窄(肠道受影响部分的腔缩小，最终可能导致肠梗阻)、瘘管(肠道与皮肤之间或腹部器官之间的连通)或脓肿的形成而变得复杂。
相比之下，所谓的“不确定性结肠炎”(IC)是一种相对新近知悉的疾病，其中炎症局限于结肠，具有不能分类的组织学、临床、放射学和内窥镜特征，因为它们既不能归因于CD也不能归因于URC；在13％至20％的病例中，它们代表了两者之一的初始形式。
所谓的“不确定性结肠炎”(IC)的特征一般在于：节段性病变的存在，广泛的溃疡，可能涉及右侧结肠(即使远端结肠(左结肠)受到更严重的损害)，并且炎症的存在延伸超过50％的粘膜表面，可能的结肠扩张与中毒性巨结肠相关。
在绝大多数病例中(95％)，症状最初的特征是开始时腹泻性肠蠕动；72％的病例存在血性腹泻，74％存在腹痛。较小比例的患者出现体重减轻(44％)和发烧(26％)。
贮袋炎是回肠储库或贮袋的非特异性炎症，并且是称为回肠袋-***吻合术的外科手术的最常见的长期并发症。
病因仍然未知，很可能是多因素的。已经提出了各种致病假说，包括粪便滞留和细菌过度生长，URC的复发和贮袋粘膜的缺血。
贮尿炎的临床特征是各种症状，其包括***次数和粪便流动性增加、直肠出血、痉挛性腹痛、尿急和里急后重，有时还有失禁和发烧。
结肠憩室病是结肠最常见的解剖学改变，通常在结肠镜检查中被发现。它指的是结肠壁的结构变化的存在，并且表现为以存在称为“憩室”的贮袋为特征；它不同于炎性肠病(IBD)和贮袋炎。
憩室是小的突出袋，其可以在壁的肌肉层的相对弱的点处在结肠的内壁中形成。
即使没有与其存在相关的症状，检测到憩室的情况也称为“憩室病”。实际上，憩室病是一种医学病症，其特征在于沿着消化***的中空器官的壁存在粘膜和粘膜下层的突起，精确地定义为憩室。它们通常形成在结肠的肌肉层(“局部最小抵抗(Locus minorisresistentiae)”)相对弱的区域(由于较高的压力，首先是乙状结肠和直肠)。憩室病自身表现为无症状；如果它出现症状，例如，在憩室炎的情况下，就会提到憩室病理或疾病。
憩室病在西方国家最为常见，年龄在30岁至39岁之间的人群中患病率为5％，而在80岁以上人群中则为60％。
憩室更常见于大肠(或结肠)的下部，其称为乙状结肠。
据信，结肠憩室的发展是结肠腔内压力增加的结果。需要明确的是，憩室的发展是一种完全不同于炎症和/或自身免疫现象(例如慢性炎性肠病(IBD)如克罗恩病和溃疡性结肠炎)的现象，并且根据我们目前的知识，这些病理与憩室病及其相关疾病无关。
憩室的存在是结肠壁结构的永久性解剖学改变，其可以保持无症状或导致症状的发展。据估计，约20％的患者出现症状，在此情况下，该病症被定义为“憩室疾病”(DD)。
无并发症的憩室疾病通常与特定症状无关。憩室疾病是结肠明显出血的常见原因。
DD的亚型是SUDD(症状性无并发症的憩室疾病)，其中在没有肉眼可见的结肠炎或憩室炎的情况下存在归因于憩室的持续性腹部症状。
其他症状通常与憩室疾病的并发症有关，例如“憩室炎”，这是憩室的肉眼可见的急性炎症。憩室炎可能是简单或复杂的，这取决于是否在计算机断层扫描(CT)上观察到诸如脓肿、腹膜炎、阻塞、瘘管或出血等并发症的特征。
憩室炎可引起腹痛、颤抖、发烧和排便习惯的改变。最剧烈的症状与严重并发症有关，例如穿孔(腹中不受约束的破裂)、脓肿(脓液积聚)或瘘管的形成(在憩室穿孔后，在结肠和另一个器官之间或与皮肤之间产生的异常通道)。
导致结肠憩室(憩室病)形成的潜在病理机制仍不清楚。不希望受这种理论的限制，这种形成可能是饮食、肠道微生物群、遗传因素、结肠运动和微观炎症之间复杂相互作用的结果。
虽然尚未得到证实，但目前流行的理论认为，纤维摄入量低的饮食是憩室疾病的原因之一。这种疾病在20世纪早期在美国被注意到，当时某些食物被引入美国饮食，大大减少了美国人群的纤维摄入量。
憩室疾病在工业化国家很常见，特别是在美国、英国和澳大利亚，纤维摄入量低的饮食在那里很普遍。相比之下，这种疾病在亚洲和非洲是罕见的，此处大多数人的膳食摄入纤维都很高。
纤维存在于水果，蔬菜和未精制(完整)谷物中，人体无法完全消化。一些纤维，称为可溶性纤维，易溶于水，在肠道中形成柔软的凝胶状物质，而不溶性纤维几乎完好地穿过肠道。两种类型的纤维都有助于预防便秘，具有易于排出的软便。
便秘表现为需要相当大的努力来排便；这种努力可能导致结肠压力增加，这反过来可能导致结肠内壁通过结肠壁的薄弱点膨胀，这可能会导致贮袋(即憩室)的形成。
缺乏体育锻炼会增加憩室形成的风险，尽管这方面尚未被认为是决定性因素。
目前，肠道休息(纤维含量低的特定饮食)和广谱抗生素(通常与抗痉挛药物相关)被指定为憩室疾病和/或憩室炎的药物疗法。非甾类抗炎药物(NSAID)和皮质类固醇的使用并不常见，因为这些药物可以促进憩室附近的穿孔。在最复杂的情况下，例如腹膜炎、脓肿和瘘管，可能需要紧急切除(伴随或不伴随吻合术)。
目前，没有能够预防憩室形成或诱导其减少或在患憩室疾病或憩室病的个体中有效预防憩室炎的治疗方法。
为了应对现有技术的上述限制，本发明提供了一种用于口服施用的新组合物，其包括来源于越橘属植物的提取物，用于预防或治疗结肠中、或乙状结肠和直肠部分中的憩室病，以及结肠中、或乙状结肠和直肠部分中与憩室的存在有关的病理或疾病，例如憩室疾病、SUDD(症状性无并发症的憩室疾病)和憩室炎。
本发明涉及一种用于口服施用的组合物(CR)，其包含以下物质或者由以下物质组成：
(i)芯，所述芯包含至少一种越橘属植物的提取物(a)和至少一种药物或食品应用可接受的成分或赋形剂(b)，或者由其组成；
(ii)抗胃层，所述抗胃层在所述芯(i)的外部，并且完全包被所述芯(i)和包含至少一种药物或食品应用可接受的成分或赋形剂(c)，其中所述抗胃层(ii)能够在肠道的粘膜中释放提取物(a)；优选地能够在结肠中释放提取物(a)。
本发明还涉及一种用于口服施用的组合物(CR)，其包含以下物质或者由以下物质组成：
(i)芯，所述芯包含至少一种越橘属植物的提取物(a)和至少一种药物或食品应用可接受的成分或赋形剂(b)，或者由其组成；
(ii)抗胃层，所述抗胃层在所述芯(i)的外部，并且完全包被所述芯(i)和包含至少一种药物或食品应用可接受的成分或赋形剂(c)，其中所述抗胃层(ii)能够在结肠中释放提取物(a)。
本发明还涉及一种用于口服施用的组合物(CR)，其包含以下物质或者由以下物质组成：
(i)芯，所述芯包含至少一种越橘属植物的提取物(a)和至少一种药物或食品应用可接受的成分或赋形剂(b)，或者由其组成；
(ii)抗胃层，所述抗胃层在所述芯(i)的外部，并且完全包被所述芯(i)和包含至少一种药物或食品应用可接受的成分或赋形剂(c)，其中所述抗胃层(ii)使得能够在结肠中释放提取物(a)；其中所述组合物用于预防和/或治疗结肠中或乙状结肠和直肠部分中的憩室病，以及结肠中或乙状结肠和直肠部分中与憩室的存在有关的病理或疾病，例如憩室疾病、SUDD(症状性无并发症的憩室疾病)和憩室炎。
本发明的组合物(CR)在胃中受保护并且是粉末、颗粒、薄片、片剂、丸剂或胶囊的固体形式；优选是在胃中受保护的整体片剂。在此情况下，芯(i)由整体片剂代表并与其重合。
本发明涉及一种组合物(C)，其包含以下物质或者由以下物质组成：
-至少一种越橘属植物的果实的提取物(a)，和
-至少一种药物或食品应用可接受的成分或赋形剂(b)，
所述组合物用于预防和/或治疗结肠中或乙状结肠和直肠部分中的憩室病，以及结肠中或乙状结肠和直肠部分中与憩室的存在有关的病理或疾病，例如憩室疾病、SUDD(症状性无并发症的憩室疾病)和憩室炎；优选地其中所述应用包括口服施用(C)。
也可以在抗胃材料的壳(例如胶囊或软胶囊)内含有固体形式(例如粉末、颗粒、珠或微珠、或薄片)的组合物(C)，所述抗胃材料能够在高于6的pH，优选6.5至8的pH，例如7.5的pH下分解。在此情况下，所述胶囊或软胶囊中所含的组合物(C)可有效用于预防和/或治疗结肠中或乙状结肠和直肠部分中的憩室病，以及结肠中或乙状结肠和直肠部分中与憩室的存在有关的病理或疾病，例如憩室疾病、SUDD(症状性无并发症的憩室疾病)和憩室炎；优选地其中所述应用包括口服施用(C)。
下面将说明优选的实施方式，而无意以任何方式限制它们的范围和内容。
除非另有说明，否则组合物中成分的含量是指该成分相对于组合物总重量的重量百分比。
除非另有说明，否则组合物“包含”一种或多种组分的表述意味着除了一种或多种具体提到的组分之外可以存在其他组分。组合物“由给定组分组成”的指示意味着排除了其他组分的存在。
组合物(C)可由(a)和(b)组成，或者除了(a)和(b)之外可以包含其它成分或赋形剂。
作为非限制性实例，可存在于本发明的组合物(CR)和(C)中的所述另外的成分可以是其他活性成分，例如：
·纤维(例如菊粉，车前草)
·酶(例如半乳糖苷酶等)
·抗炎药(例如美沙拉秦及衍生物，倍氯米松和类似活性成分)
·抗生素(例如利福昔明和类似活性成分)
·在肠道水平具有吸收作用和/或袪风和/或口服消泡作用以减少肠道气体形成的物质(例如薄荷，二甲基硅油及衍生物，活性炭)
·抗氧化剂
·具有免疫调节作用的物质
·短链脂肪酸(SCFA，例如丁酸酯和衍生物)
·Ω-3多不饱和脂肪酸
·益生菌，或者：裂解物或提取物形式的微生物(类生元)，由微生物产生的代谢生物产物(后生元)和/或由此衍生的任何其他产物。
可存在于本发明的组合物(CR)和(C)中的所述微生物的非限制性实例是：单独或以各种组合采用的属于乳酸菌、双歧杆菌和肠球菌属的益生菌以及优选属于酵母属的酵母。
在优选实施方式中，所述组合物(CR)或(C)中存在的芯(i)还包含甘露醇和/或至少一种具有抗炎作用的活性成分，其选自甾类抗炎药物、非甾类药物或天然来源的物质或物质的混合物。
本发明还将参考以下附图：
图1：溶出试验的校准曲线。
图2：本发明的在胃中受保护片剂在肠阶段中的溶出试验结果。
图3至10：关于肠粘膜(CacoGoblet)的保护效果的研究结果：用大肠杆菌定殖。
图11：胃肠道的图示。
在本发明的上下文中，术语“抗炎药物”以该术语的通用含义使用，并且如本领域技术人员已知的，表示能够减少或消除炎性过程(特别是但不限于对个体肠道的伤害)的任何物质。
在如上所定义的组合物(CR)中，在芯(i)的外部的抗胃层(ii)包含选自以下的至少一种物质，或者由其组成：Eudragard生物E1207，耐胃液聚合物如聚(丙烯酸甲酯-co-甲基丙烯酸甲酯-co-甲基丙烯酸)7:3:1或另一种阴离子型甲基丙烯酸共聚物，柠檬酸三乙酯E1505，滑石，乙基纤维素，阴离子型甲基丙烯酸酯共聚物和其混合物，虫胶，海藻酸钠和其混合物，淀粉和改性淀粉，油酸，硬脂酸和中链甘油三酯。
在芯(i)的外部的抗胃层(ii)的优选形式包括以下物质或者由以下物质组成：
-耐胃液聚合物，例如聚(丙烯酸甲酯-co-甲基丙烯酸甲酯-co-甲基丙烯酸)7:3:1或另一种阴离子型甲基丙烯酸酯共聚物：5至50mg；10至35mg；18至25mg；
-柠檬酸三乙酯E1505：0.1至5mg；0.3至3mg；0.5至2mg；
-滑石：1至30mg；3至20mg；5至15mg；或者：
-乙基纤维素：5至15mg；8至12mg；9.97mg；
-海藻酸钠：5至15mg；8至12mg；9.30mg；
-氢氧化铵：0.5至4mg；1.5至3mg；2.34mg；
-中链甘油三酯：0.5至5mg；1.5至3mg；2.12mg；
-油酸：0.5至3mg；1至2mg；1.17mg；
-纯化的硬脂酸：0.01至0.5mg；0.05至0.3mg；0.1mg；或者：
-乙基纤维素：5至50mg；10至30mg；15至20mg；
-二氧化钛：0.1至15mg；0.5至10mg；1至5mg；
-海藻酸钠：0.1至5mg；0.3至4mg；0.5至2mg；
-油酸，硬脂酸，中链甘油三酯：其各自为0.01至3mg；0.05至1mg。
在芯(i)的外部的抗胃层(ii)的优选形式包括以下物质或者由以下物质组成：
-
Figure BDA0002077943590000071
生物E1207(Evonik)：例如20.4mg；
-柠檬酸三乙酯E1505：例如1mg；
-滑石：例如10.2mg；或者：
-乙基纤维素：例如9.97mg；
-海藻酸钠：例如9.30mg；
-氢氧化铵：例如2.34mg；
-中链甘油三酯：例如2.12mg；
-油酸：例如1.17mg；
-纯化的硬脂酸：例如0.1mg。
在芯(i)的外部的所述抗胃层(ii)的特征在于根据pH值和/或时间分解和溶出；有利地，所述层(ii)配制和制备成能够在30分钟至120分钟、优选45分钟至90分钟的时间内于约6.5至约8、优选约7至约7.5的pH值内分解和溶出；例如，温度为30℃至40℃，优选34℃至37℃。
经过长时间的研究和大量的实验尝试后，发现有利的是使用一种或多种所述物质形成外部抗胃层能够获得口服使用的组合物(CR)(例如片剂)，其能够完整地通过口腔、食道和胃部，并且芯(i)的外部的所述抗胃层(ii)能够在约6.5至7的pH下于末端回肠处开始初始分解(伴随或不伴随芯(i)的初始溶出和提取物(a)的释放)，随后芯(i)的外部的所述抗胃层(ii)在约7至8的pH下于结肠中分解(伴随于7.5的pH下主要在结肠中的芯(i)的溶出和提取物(a)的释放)(图11)。
进行的实验性试验表明，例如以实施例1和2的整体片剂的形式的本发明的组合物(CR)在1的pH下于2小时内保持完整，而在6的pH下于1小时内保持完整。在7.2的pH下，组合物(CR)的芯(i)的外部的抗胃包衣在约30分钟后开始***，而所述包衣在7.2的pH下在90分钟后充分***；膜/包衣打开，留在其中的是一小部分的芯(i)，或在一些情况下是由芯(i)的完全***而产生的粉末。
对于所述芯(i)中存在的所述提取物(a)的释放，在回肠之前没有释放直至6.5的pH。在末端回肠，存在约5％至约20％、优选约10％至约15％的释放。在pH为约7.5(例如pH为约7.2)的结肠中，存在约80％至约95％、优选约85％至约90％的释放。所述提取物(a)的大部分释放发生在结肠中，这恰恰代表了憩室存在以及病理或疾病表现出来的位置。由此，由于还存在能够发挥抗炎活性的PAC(原花青素)的存在，结肠中释放的提取物(a)能够起作用。
本发明的组合物(CR)是用于膳食补充剂的组合物、或用于医疗设备的组合物、或用于特殊医学目的的食品组合物、或药物组合物的形式；所有组合物都为用于口服使用的药物形式。
在本发明上下文中，使用的术语“医疗设备”具有1997年2月24日的意大利法令第46号的含义，这与世界卫生组织提供的定义相对应，并在URL http://www.who.int/medical_devices/full_deffinition/en/上提供，即，其表示制造商为了诊断、预防、监测、治疗或减轻疾病而要单独或组合使用的单独或组合使用的物质或其他产品，该设备不能通过药理学、免疫学或代谢方法在人体内或体内实现其主要的预期作用，但可通过这种方式辅助其预期功能。
在如上定义的组合物(CR)中，提取物(a)可由果实(更具体为浆果)代表，其属于越橘属，还可选地为接骨木属、枸杞属、巴西莓属(Euterpe)和它们的组合。提取物(a)优选为干提取物。
在如上定义的组合物(CR)中，提取物(a)优选地来自越橘属和红莓苔子(Oxycoccus)亚属(例如大果越橘(Vaccinium macrocarpon)，红莓苔子(Vacciniumoxycoccos))或越橘亚属(例如臼莓(Vaccinium arboreum)，厚叶越橘(Vacciniumcrassifolium)，北方蓝莓(Vaccinium boreale)，欧洲越橘(Vaccinium myrtillus))或其混合物的至少一种植物的果实；优选地，其中提取物(a)是大果越橘或红莓苔子或其混合物的果实。更优选，提取物(a)包含大果越橘的果实，或由其组成。有利地，提取物(a)是干提取物；在一个实施方式中，其是蔓越橘的干提取物，优选含有浓度为按重量或体积计5％至30％的PAC(原花青素)，例如10％，或15％，或20％，或25％。
美洲蔓越橘(大果越橘)是一种属于杜鹃花科的小型常绿灌木，其生长在北方气候区，特别是北美以及欧洲和亚洲的一些北部地区，生成的红色果实类似于浆果，具有浓稠的果肉，通常为酸味。
过去，在北美印第安人中，蔓越橘被认为是一种神圣的果实，既可用作食物，也可用作肾结石和各种泌尿道问题的治疗方法。
现今，美洲蔓越橘因其数不尽的有益特性而在世界范围内使用，根本上归因于原花青素(PAC)含量高，特别是A型原花青素。
美洲蔓越橘提取物首先用于预防和治疗泌尿道疾病，也可用于预防幽门螺杆菌(一种通常导致胃和十二指肠溃疡的细菌)对胃壁的粘附，或者存在于口腔并导致斑块形成的细菌的粘附，或者肠道水平的潜在致病菌(例如大肠杆菌)的粘附。
欧洲专利EP 2135616 B1涉及蔓越橘用于治疗IBD和溃疡性结肠炎中的应用，如上所述，其是完全不同于本发明所涉及的病症的病理。
在本发明的上下文中，蔓越橘用于治疗IBD和溃疡性结肠炎中的应用被排除，因此没有设想，正如没有设想使用蔓越橘来预防幽门螺杆菌对胃壁的粘附一样。此外，蔓越橘用于治疗诸如膀胱炎(膀胱的炎症)或细菌性膀胱炎或非细菌性膀胱炎(例如间质型膀胱炎)等泌尿道感染(UTI)中的应用被排除，因此没有设想。
发明人发现了越橘属(特别是美洲蔓越橘)果实提取物可用于预防和/或治疗(优选通过口服施用)结肠中或乙状结肠和直肠部分中的憩室病和/或结肠中或乙状结肠和直肠部分中由于憩室的存在而衍变或与其有关的病理或疾病，例如憩室疾病、症状性无并发症的憩室疾病(SUDD)和憩室炎。
在本发明的组合物(CR)中，提取物(a)优选含有相对所述提取物(a)总重量按重量计为至少10％、更优选至少15％或20％或30％和/或不超过95％或60％或40％的原花青素，更优选但不限于A型原花青素。原花青素(PAC)是黄烷-3-醇的低聚物和聚合物，属于黄酮类化合物家族，可例如通过Prior,R.L.等.J.Sci Food Agric 2010,90(9),1473-8的“BL-DMAC”方法或等价方法进行定量。所述提取物(a)优选为干提取物；更优选地，其为蔓越橘的干提取物。
本发明的组合物(CR)或(C)至少包含：
-所述提取物(a)，其为150至600mg、优选200至300mg、更优选240至260mg大果越橘的提取物，其含有相对(a)的总重量按重量计为至少10％、更优选至少15％的原花青素(PAC)；
-至少一种药物或食品应用可接受的成分或赋形剂(b)，其可选地选自纤维素、甘露醇、硬脂酸镁、饱和和/或不饱和脂肪酸的镁盐、二氧化硅、羧甲基纤维素、羧乙基纤维素、交联的羧甲基纤维素钠和它们的混合物。所述提取物(a)优选为干提取物；更优选地，其为蔓越橘的干提取物。药物或食品应用可接受的成分或赋形剂(b)优选地选自纤维素、甘露醇、二氧化硅、交联的羧甲基纤维素钠和饱和和/或不饱和脂肪酸的镁盐。
如上定义的组合物(CR)可特别用于治疗和/或预防憩室疾病及与其有关的病理。
在一个实施方式中，本发明提供了一种组合物(C)，其包含以下物质或者由以下物质组成：
-至少一种越橘属植物的果实的提取物(a)，和
-至少一种药物或食品应用可接受的成分(b)，
所述组合物用于预防和/或治疗憩室疾病或由憩室病衍变的病理，优选地其中所述使用包括口服施用(C)。
可以通过任何途径进行施用。优选地，口服组合物，更优选的形式为丸剂、胶囊、片剂、粒状粉末、硬壳胶囊、口服溶出颗粒、小药囊、锭剂或可饮用小瓶。
作为选择，将本发明的组合物配制成液体，例如糖浆或饮料，或者将其加入食品中，例如加入酸奶、奶酪或果汁中。
作为选择，将本发明的组合物配制成能够局部发挥作用的形式，例如通过灌肠剂。
所述组合物(C)优选用于治疗或预防憩室疾病、症状性无并发症的憩室疾病(SUDD)和憩室炎中的至少一种。所述组合物(C)优选用于治疗和/或预防憩室炎。
在优选实施方式中，用于上述应用的组合物(C)的形式为口服药物制剂或膳食补充剂或医疗设备，其包含抗胃包衣并且能够在结肠中释放提取物(a)。
在优选实施方式中，在用于如上所述应用的组合物(C)中，提取物(a)来自下述至少一种植物的果实：越橘属和红莓苔子亚属(例如大果越橘、红莓苔子)或者越橘亚属(例如臼莓、厚叶越橘、北方蓝莓、欧洲越橘(覆盆子))，或它们的混合物。
更优选地，在用于本发明应用的组合物(C)中，提取物(a)来自大果越橘(美国蔓越橘)或红莓苔子或它们的化合物的果实。更优选地，提取物(a)包含大果越橘的果实，或由其组成。提取物(a)优选为干提取物。
在用于本发明应用的组合物(C)中，提取物(a)优选含有相对(a)总重量按重量计为至少10％、更优选至少15％或20％或30％且不超过95％或60％或40％的原花青素，更优选但不限于A型原花青素。有利地，提取物(a)为干提取物；在一个实施方式中，其为蔓越橘的干提取物，优选含有浓度为按重量或体积计5％至30％的PAC(原花青素)，例如10％，或15％，或20％，或25％。
原花青素(PAC)是黄烷-3-醇的低聚物和聚合物，属于黄酮类化合物家族，可例如通过Prior,R.L.等.J.Sci Food Agric 2010,90(9),1473-8的“BL-DMAC”方法或等价方法进行定量。
在本发明的上下文中，药物或食品应用可接受的成分包括技术人员已知的用于制备口服施用形式的所有辅助物质，例如(作为非限制性实例)稀释剂、吸收剂、甜味剂、调味剂、着色剂、润滑剂、抗粘剂、助流剂、粘合剂、崩解剂、表面活性剂、抗菌剂、抗氧化剂、稳定剂、增稠剂、胶凝剂和能够随时间改变活性成分释放的物质(只允许在给定的生理条件下，例如在某一pH间隔内释放)。
用于如上所述应用的组合物(C)优选至少包含：
-(a)150至600mg、优选200至300mg、更优选240至260mg大果越橘的提取物，其含有相对于(a)的总重量按重量计为至少10％、更优选至少15％的原花青素；
-(b)至少一种药学上可接受的成分，其可选地选自纤维素、甘露醇、硬脂酸镁、二氧化硅、羧甲基纤维素和它们的混合物。更优选地，所述组合物(C)还包含在胃中有保护性的包衣，即能够保护至少包含(a)和(b)的混合物免受胃液的作用的包衣。
以下实施例提供了本发明的实际实施方式，并不意图限制其范围和程度。
本发明的组合物(CR)的优选形式如下：
(i)芯，其包含：
含有浓度为10％或15％或30％(重量比)的PACS的蔓越橘提取物：100至500mg；150至400mg；240至300mg
纤维素：100至400mg；200至350mg；300至310mg
甘露醇：1至50mg；5至30mg；10至18mg
二氧化硅：1至50mg；3至30mg；5至8mg
交联的羧甲基纤维素钠：1至30mg；3至20mg；5至12mg
脂肪酸的镁盐：1至30mg；3至20mg；5至10mg
(ii)芯(i)的第一类包衣(膜)，其包含以下试剂：
-耐胃液聚合物，例如聚(丙烯酸甲酯-co-甲基丙烯酸甲酯-co-甲基丙烯酸)7:3:1或另一种阴离子型甲基丙烯酸酯共聚物：5至50mg；10至35mg；18至25mg
-柠檬酸三乙酯E1505：0.1至5mg；0.3至3mg；0.5至2mg
-滑石：1至30mg；3至20mg；5至15mg；or alternatively,
(ii)芯(i)的第二类包衣(膜)，其包含以下试剂：
-乙基纤维素：5至15mg；8至12mg；9.97mg
-海藻酸钠：5至15mg；8至12mg；9.30mg
-氢氧化铵：0.5至4mg；1.5至3mg；2.34mg
-中链甘油三酯：0.5至5mg；1.5至3mg；2.12mg
-油酸：0.5至3mg；1至2mg；1.17mg
-纯化的硬脂酸：0.01至0.5mg；0.05至0.3mg；0.1mg。
本发明的组合物(CR)的优选形式如下：
(i)芯，其包含：
含有浓度为10％或15％或30％(重量比)的PACS的蔓越橘提取物：100至500mg；150至400mg；240至300mg
微晶纤维素：100至400mg；200至350mg；320至335mg
硬脂酸镁：1至30mg；2至20mg；5至10mg
二氧化硅：1至50mg；3至30mg；5至8mg
(ii)芯(i)的第一类包衣(膜)，其包含以下试剂：
-乙基纤维素：5至50mg；10至30mg；15至20mg；
-二氧化钛：0.1至15mg；0.5至10mg；1至5mg
-海藻酸钠：0.1至5mg；0.3至4mg；0.5至2mg
-油酸，硬脂酸，中链甘油三酯：其各自为0.01至3mg；0.05至1mg；或者
(ii)芯(i)的第二类包衣(膜)，其包含以下试剂：
-乙基纤维素：5至15mg；8至12mg；9.97mg
-海藻酸钠：5至15mg；8至12mg；9.30mg
-氢氧化铵：0.5至4mg；1.5至3mg；2.34mg
-中链甘油三酯：0.5至5mg；1.5至3mg；2.12mg
-油酸：0.5至3mg；1至2mg；1.17mg
-纯化的硬脂酸：0.01至0.5mg；0.05至0.3mg；0.1mg。
作为非限制性实例，本发明的组合物(CR)可包含：
实施例1
(i)芯，其包含：
含有15％PACS(重量比)的蔓越橘提取物：240mg
纤维素:304.4mg
甘露醇:15mg
二氧化硅:5.8mg
交联的羧甲基纤维素钠:9mg
脂肪酸的镁盐:5.8mg。
整个芯580mg。重量范围:575mg至585mg。
(ii)芯(i)的包衣(膜)，其包含：
-
Figure BDA0002077943590000131
生物E1207(Evonik):20.4mg
-柠檬酸三乙酯E1505:1mg
-滑石:10.2mg。
整个包衣/膜31.6mg。重量范围：26.1mg至37.7mg。
整个包被/膜覆盖的片剂612mg。重量范围：607mg至617mg。
实施例2
(i)芯，其包含：
含有15％PACS(重量比)的蔓越橘提取物：240mg
纤维素:270mg
甘露醇:29mg
二氧化硅:5.8mg
交联的羧甲基纤维素钠:29mg
脂肪酸的镁盐:5.8mg。
整个芯580mg。重量范围:575mg至585mg。
(ii)芯(i)的包衣(膜)，其包含：
-乙基纤维素:9.97mg
-海藻酸钠:9.30mg
-氢氧化铵:2.34mg
-中链甘油三酯:2.12mg
-油酸:1.17mg
-纯化的硬脂酸:0.1mg。
整个包衣/膜25mg。重量范围：20mg至30mg。
整个包被/膜覆盖的片剂605mg。重量范围：595mg至615mg。
溶出试验
材料：
测试如实施例所述的本发明的胃包衣片。
试剂：
-二甲基氨基肉桂醛(DMAC,乙状结肠，编码D-4506).
-原花青素A2(PCAA2,Sigma,编码28660).
-酶和GID试剂(Sigma)。
方法：
-根据Prior提出的光谱光度测量方法的PCA试验(Multi-laboratory validationof a standard method for quantifying proanthocyanidins in cranberrypowders.J.Sci.Food Agric.(2010),9,1473–1478.DOI 10.1002/jsfa.3966)。
-根据Minekus等提出的方法的体外GID(“A standardised static in vitrodigestion method suitable for food-an international consensus”Food Funct.(2014),6,1113-1124.DOI 10.1039/C3FO60702J)。
结果
将片剂进行体外GID(一式三份)，在胃阶段120分钟后和肠阶段30、60、90和120分钟后取样。使用DMAC方法分析各种样品的以mg当量计的PCAA2含量，并根据图1中所示的校准曲线进行定量(用与在640nm下应用于PCAA2标准的相同方法获得)。
本发明的片剂的溶出曲线在图2中示出。
对于实施例1和2的胃包衣片，获得了基本相同的结果。
在体外GID的胃阶段内，没有分析验证的PCA释放。
在体外肠阶段PCA释放动力学(表示为PCAA2mg当量/片，三次重复的平均值)显示在图2中。在60分钟后在肠阶段内可以分析观察到PCA的释放。
在片剂本身机械破碎和用胃肠液和酶(GID空白)或用Prior等(2010)提出的提取溶剂(丙酮/水/乙酸，75:24.5:0.5v/v/v)进行PCA提取后测定片剂中未消化的PCAA2含量(mg当量)。获得的结果分别等于19.39和19.81PCAA2mg当量/片。
效果的评估
为了评估本发明的效果，特别是关于保护肠粘膜的效果，进行了几项体外试验以确定：
·基于特定蛋白质的分析，通过阻断粘附机制来对抗大肠杆菌菌株粘附的活性。
·基于肠道渗透性的研究，通过减少巨噬细胞中单核细胞活化的抗炎活性，评估如下：
o测量TEER(跨上皮电阻)
跨上皮电阻(TEER)是上皮组织屏障功能的直接测量：它反映了由于厚度和结构引起的整体组织阻力，并且表示单层完整性水平的指示，因此表明细胞之间紧密连结的形成。使用伏特欧姆表(ERS Millicell)测量跨上皮电阻(Ωcm2表示)。
o使用荧光黄进行测试：在待评估物质存在的情况下进行分析。
荧光黄是细胞膜不可透的荧光标记，可以验证细胞连结的完整性(以百分比)。其被用于研究物质在Caco-2/Caco杯状细胞的单核细胞层中的细胞旁水平的渗透性。LY的转运被评估为在一段确定的温育期后向基底外侧隔室的进入。通过具有428nm激发和525nm发射的荧光分光光度计采集荧光物质的读数。
特别地，将使用实验模型Caco2-goblet评估本发明在大肠杆菌诱导的应激后保护肠粘膜的效果，实验模型Caco2-goblet不仅由肠细胞组成，而且由共培养的粘液分泌细胞HT29组成，这是一种更加真实的***。
对肠粘膜(CacoGoblet)的保护效果进行了研究：用大肠杆菌定殖。
1.研究的介绍和目的
Caco-2模型的生物学相关性已经很好地建立，因为它是用于再现肠粘膜功能的体外参考模型。
CacoGoblet是粘液分泌细胞的模型，由微孔聚碳酸酯滤器上的可渗透接种支持物组成，其具有人类粘液杯状细胞以及分化和极化的Caco-2细胞。
出于评估代表索法尔公司(Sofar S.p.A)的蔓越橘提取物的效果的目的，应用基于CacoGoblet模型的实验模型。
通过MTT测定在初步阶段测试非细胞毒性浓度，以排除产品的潜在的固有毒性。
使用了两个方案：
1)共培养***(THP-1细胞和肠上皮细胞)中蔓越橘提取物的抗炎特性
2)蔓越橘防止大肠杆菌粘附到粘膜上的能力
2.试验设计
1)体外共培养***(THP-1细胞和肠上皮细胞)中蔓越橘提取物的抗炎特性
用10ng/ml的IL1β预处理CacoGoblet细胞过夜。一旦移除IL1β，则用非细胞毒性浓度的蔓越橘处理肠模型24小时。用参比分子etacortilen(***磷酸钠)以0.15％进行平行处理，以研究克服粘膜的炎症状态。
然后除去产物，将标记的THP-1细胞(用细胞跟踪剂5-氯甲基-荧光素二乙酸酯标记)加入顶端隔室中的CacoGoblet细胞中，并在37℃温育1小时。
一旦除去非粘附细胞，则在显微镜下评估THP-1细胞的残余表面荧光。
使用THP-1在CacoGoblet上的细胞粘附减少作为终点参数，在静态测定中评估各种化合物在肠道水平的抗炎活性。
2)蔓越橘防止大肠杆菌粘附到粘膜上的能力
将用蔓越橘预处理4小时的CacoGoblet细胞用50μl大肠杆菌(ATCC 8739)在37℃定殖2小时。在定殖结束时，除去过量的细菌并评估以下参数：
-跨上皮电阻(TEER)和荧光黄的细胞旁通道
-α-辅肌动蛋白的免疫荧光：Α-辅肌动蛋白与大肠杆菌蛋白Tir相互作用以形成称为基座的粘附斑块，并且是大肠杆菌感染的标志物。
-用扫描电子显微镜(SEM)对大肠杆菌进行超微结构分析，以评估细菌密度和对CacoGoblet表面的粘附。
3.材料
3.1实验***
CacoGobletTM是一种用于体外评估肠道吸收的即用型粘液分泌试剂盒。该试剂盒包含可渗透支持物，其中24孔有接种人类粘液杯状细胞，Caco-2细胞，在HTS Transwell板中分化和极化，补充有在室温下稳定的专有转运培养基。
CacoGoblet细胞系在分化的第20天供应并连续使用5天，完整培养基被修改并且基于内部程序测量TEER。CacoGobletTM技术数据表附于附录I。
含有10％FBS、1％谷氨酰胺200mM和1％NEAA的DMEM(批次RNBF5082)用作培养基，如表1所示。
Figure BDA0002077943590000171
表1
3.1.1培养条件和实验***的使用
在收到CacoGoblet产品后，取出装有平板的拉链袋。打开拉链，将袋子在室温下置于暗处，直到同一周的周五。在周五将板在37℃、5％CO2、饱和湿度下温育4小时。更改介质并在下周一开始实验。
3.2所检查物质：识别和表征
赞助商负责安全数据表和所检查物质的表征(图2)。
Figure BDA0002077943590000181
表2
3.3阴性和阳性对照
阴性对照就是培养基本身。
方案1的阳性对照：白介素1β(SRP6169；批号9E126460).(表3)
Figure BDA0002077943590000191
表3
4.方法
4.1大肠杆菌.
菌株：大肠杆菌ATCC 8739，批号。
在实验前一周，在营养肉汤中接种菌株。此外，将其接种在具有琼脂培养基的平板上，以验证其正常形态。然后在37℃下温育16-24小时。
4.1.1大肠杆菌悬浮液的制备和定殖程序
在定殖当天，检查大肠杆菌溶液在600nm处的光密度(OD)，并根据内部程序用于制备定殖悬浮液(PM 18)。
通过在平板上接种适当的10倍稀释液(从未稀释的版本到每个隔室的悬浮液的10-7稀释度)进行细菌计数以验证营养琼脂培养基中的每个接种物。应用于CacoGoblet的活菌数对应于1.2*107CFU。
4.2跨上皮电阻试验(TEER)
4.2.1原理
跨上皮电阻(TEER)是皮肤屏障功能的直接测量：其反映了组织的整体阻力(由于其结构和厚度)，并且在紧密连结方面测量屏障的完整性。
单层的分化Caco-2细胞的TEER值表明单层自身的完整性程度，因此表明在肠细胞之间形成紧密连结。TEER(单位Ω*cm2)的测量使用伏特-欧姆表(Millicell ERS)(范围200-2000Ω)进行。
4.2.2程序
通过使用正确的电极进行***测量并将电极的短端定位在***物内的顶端位置(在0.3ml培养基中)，在培养21天后于单层高分化的CacoGoblet细胞上评估TEER。将电极的长端在基底外侧位置浸没在孔中(在0.9ml培养基中)。
4.3使用荧光黄的试验
4.3.1原理
荧光黄(LY)是一种不透细胞膜的荧光染料。其用于研究物质的细胞旁渗透性。当连结完好时，荧光黄具有非常低的渗透性；另一方面，如果连结被破坏，则荧光黄的流动更大。因此，该试验使得可以在待检查物质存在下验证细胞连结的完整性。
4.3.2程序
在暴露于待检物质后，将荧光黄(LY)以100μM的浓度应用于顶端隔室，溶于盐水溶液(0.25ml)中。在基底外侧隔室中加入0.70ml盐水溶液。LY的转运根据在37℃下温育1小时的限定时间段后从顶端隔室到基底外侧隔室的通道进行评估。
通过具有428nm激发和525nm发射的荧光分光光度计(TECAN INFINITE M200)采集读数。
渗透率百分比通过以下公式计算：
LY流量＝(RFUBL/RFUAP初始)x 100
在完整的CacoGoblet单层中，LY流量应小于1.4％。
4.4扫描电子显微镜(SEM)
通过SEM检查的样品用2.5％戊二醛在0.1M PBS中的溶液固定24小时，在0.1M二甲胂酸钠缓冲液(pH 7.4)中洗涤，并在相同样品中的1％四氧化锇(OsO4)中萃取(在室温下2小时)。然后将样品在室温下以升高的乙醇度和六甲基二硅氮烷过夜脱水。
将样品置于具有碳标签的销上，并使用Polaron Equipment Limited的SEM E5100金属涂料器涂覆一层金，然后转移至Zeiss乙状结肠电子扫描显微镜以供观察和拍照。
研究期间产生的SEM样品(表4)
Figure BDA0002077943590000211
表4
4.5免疫荧光：α-辅肌动蛋白
4.5.1原理
免疫荧光标记是用于检测组织切片的细胞区室中的特定结构或分子的组织学技术。该技术基于结合抗原用于检测靶分子的抗体的特异性和通过荧光显微镜检测***，使用间接方法：能够特异性识别靶标的第一抗体和与荧光团结合的能够识别第一抗体的第二抗体。
4.5.2程序
在冷乙醇中固定30分钟并在冷丙酮中固定3分钟后，用PBS洗涤肠粘膜，用PBS中的1％BSA封闭非特异性反应30分钟。将每个***物在4℃下与1μg/ml的α辅肌动蛋白抗体(单克隆小鼠抗体,ab18061,批次GR256204-1)在PBS中的1％BSA中温育过夜。洗涤后，将组织在室温下温育1小时，其中第二抗体(山羊抗小鼠抗体Alexa Fluor 488,Invitrogen A10-680)1:400在PBS中的1％BSA中。洗涤后，用DAPI染色细胞核并在Leica DM 2500荧光显微镜下进行分析。
4.6单核细胞-上皮细胞粘附试验
4.6.1原理
在粘附试验之前，用促炎细胞因子IL-1β处理CacoGoblet细胞过夜，以产生发炎的粘膜。然后将处理过的单层用产物处理24小时。将标记的THP-1细胞加入每个孔中的CacoGoblet之上。用荧光染料氯甲基荧光素二乙酸酯(CMFDA；Invitrogen)标记THP-1细胞。温育后，轻轻洗涤单层以除去非粘附的THP-1细胞。在荧光显微镜下观察用荧光染料标记的粘附细胞。
4.6.2程序
在处理后，在标记的THP-1细胞施加在CacoGoblet之上。
用荧光染料氯甲基荧光素二乙酸酯(CMFDA Exc.492,Em 517；Invitrogen)标记THP-1细胞。
温育1小时后，轻轻洗涤单层以除去非粘附的THP-1细胞。在荧光显微镜下观察用荧光染料标记的粘附细胞。
5.结果
5.1通过MTT试验的细胞活力
MTT试验的结果显示在图3中。图3显示用蔓越橘以10-100-1000μg/ml处理24小时后的细胞活力。
阴性对照(培养基本身)被设定为100％的活力。
在测试的所有浓度下，与阴性对照相比，产物没有降低活力。
选择用于研究效果的非细胞毒性浓度为1000μg/ml。在该浓度下，用MTT试验检测的物质的干扰为32％。
体外共培养***(THP-1细胞和肠上皮细胞)中蔓越橘提取物的抗炎特性
5.2单核细胞-上皮细胞粘附试验
在处理后，将标记的THP-1细胞施加在CacoGoblet之上。
温育1小时后，轻轻洗涤单层以除去未粘附的THP-1细胞。在荧光显微镜下观察用荧光染料标记的粘附细胞；结果呈现在图4中。
图4显示未处理的发炎CacoGoblet中的单核细胞-上皮细胞粘附。
√如所预期的，在用IL1β处理后，观察到THP-1细胞粘附增加。
√如所预期的，极少数THP-1细胞显示出与CacoGoblet上皮细胞粘附(阴性对照,NT)。
√蔓越橘本身在健康粘膜上减少了THP-1细胞的粘附。
√在发炎的粘膜上施用etacortilen后，观察到THP-1细胞粘附显著降低。
√在发炎的粘膜上施用蔓越橘后，观察到THP-1细胞粘附显著降低，略小于用etacortilen处理之后。
蔓越橘防止大肠杆菌粘附到粘膜上的能力
5.3TEER的测量
图5显示了在基础(0小时)、在产品处理4小时后、和大肠杆菌定殖2小时后(总共处理6小时)以ohm*cm2表示的跨上皮电阻(TEER)的结果。
处理前(T＝0小时)的TEER值表明屏障的总阻力与紧密连结结构的完整性相关。
TEER是粘膜屏障完整性的物理参数，其用于表征产品对粘膜上皮细胞水平的离子细胞旁流动的影响。
图5显示了在基础(0小时)、在1000μg/ml蔓越橘本身处理4小时后、或大肠杆菌定殖2小时后以ohm*cm2表示的跨上皮电阻(TEER)。6小时为阴性对照的总培养时间。
如图5所示，大肠杆菌定殖使得TEER在2小时处理后从274.67ohm*cm2降至218.68ohm*cm2(-21％)。
用蔓越橘进行的4小时预处理使TEER从315ohm*cm2增加到325.82ohm*cm2，并抵消了大肠杆菌的粘附(TEER恢复3％)。
在4小时处理后，蔓越橘本身引起了TEER值增加了43％(从299.86ohm*cm2至430.54ohm*cm2)：这些结果表明在大肠杆菌存在和不存在的情况下，蔓越橘提取物在上皮屏障上的成膜有效性和积极效果。
5.4使用荧光黄的试验：细胞旁渗透性
在暴露期结束时评估荧光黄(LY)的细胞旁流动；荧光测量的结果显示在图6中。
图6显示了在顶端隔室中LY与时间零点处的LY相比的％流量。图6显示了处理6小时(蔓越橘处理4小时，大肠杆菌定殖2小时)后LY的流量。
阴性对照(NC)对LY具有0.52％的渗透性。
大肠杆菌对LY的渗透性(0.91％)大于阴性对照(相对于NC，LY的通过增加74％)。
阴性对照和测试产品之间没有显著差异：用蔓越橘预处理可恢复肠上皮，防止大肠杆菌粘附。
蔓越橘本身具有保护效果：与阴性对照相比，观察到LY的通过减少29％。
5.5α-辅肌动蛋白的免疫荧光染色
下面的一系列图像显示了在荧光显微镜下分析的样品。绿色代表位于膜水平的蛋白质α-辅肌动蛋白。α-辅肌动蛋白与大肠杆菌蛋白Tir相互作用以形成称为基座的粘附斑块，并且是大肠杆菌感染的标志物。
图7显示了由大肠杆菌定殖并用蔓越橘处理或未处理的样品中α-辅肌动蛋白的免疫荧光。
在大肠杆菌定殖后，与阴性对照相比，膜水平的荧光颜色增加是明显的。
蔓越橘以其本身施用或作为大肠杆菌定殖前的预处理时诱导α-辅肌动蛋白略微减少(相比于大肠杆菌定殖没有显著差异)。
5.6扫描电子显微镜
图8显示了从文献中提取的Caco-2细胞微绒毛的超微结构图像(BCD Cancer20088:227)。
在未处理的Caco-2细胞中，可以观察到大量的微绒毛。细胞边缘不会出现。插图：存在长的微绒毛。b.用EGF处理的细胞。许多囊泡是明显的。插图：存在数量减少的微绒毛。c-f：处理过的细胞。微绒毛数量减少并失去其立位。
大肠杆菌对Caco-2细胞定殖的历史VitroScreen数据：大肠杆菌对细胞层的增殖和粘附是明显的(红色箭头)。
图9A和9B显示在扫描电子显微镜下分析的样品。
图10A显示阴性对照：6小时未处理的CacoGoblet。
如所预期的，阴性对照显示没有细胞应激或细菌污染。组织是营养性的，具有结构良好的细胞桥粒(1000x)。微绒毛在整个表面上看起来组织良好：可以观察到微绒毛的密集刷状边界(5000x,红框)。
图10B显示大肠杆菌对组织定殖2小时。
由于技术问题的解决，CacoGoblet表面上没有大肠杆菌的增殖。然而，单层显示表面上的微绒毛受损；与阴性对照相比，它们的数量较少，并且已经失去其正常位置(10000x,红框)，这表明大肠杆菌对刷状边界造成了损害。
图10C显示在大肠杆菌定殖2小时前用蔓越橘预处理4小时。
单层呈现结构良好，表面上显示出微绒毛(5000x)。可见的大肠杆菌细胞很少，其形态发生改变(10000x，红色箭头)，有明显的裂解迹象。此外，丰富的细菌碎片(10000x，红星)明显，表明蔓越橘处理对大肠杆菌造成损害。
6.结论
出于代表索法尔公司评估蔓越橘提取物的效果的目的，应用基于体外CacoGoblet模型的各种实验模型。
通过MTT测定在初步阶段测试非细胞毒性浓度，以排除产品的潜在的固有毒性。
选择用于效果研究的最高非细胞毒性浓度为1000μg/ml。
使用了两个方案：
1)共培养***(THP-1细胞和肠上皮细胞)中蔓越橘提取物的抗炎特性
2)蔓越橘防止大肠杆菌粘附的能力
评估以下参数以得出关于以下内容的结论：
-具有IL1-β诱导的炎症的CacoGoblet中的单核细胞-上皮细胞粘附(抗炎效果)
-跨上皮电阻(TEER)和LY的细胞旁流动(上皮屏障的改变)
-用扫描电子显微镜(SEM)进行大肠杆菌的超结构分析
(抵消大肠杆菌的粘附和增殖)
-免疫荧光定位α-辅肌动蛋白(抵消大肠杆菌的粘附)
总之，结果表明：
1)施用于发炎的肠粘膜上的蔓越橘引起对THP-1细胞的粘附的显著降低，表明显著的抗炎作用。
2)用蔓越橘预处理4小时稍微抵消了由大肠杆菌粘附引起的屏障损伤；蔓越橘本身在处理4小时后引起TEER值增加43％，表明优异的成膜能力。
3)蔓越橘本身对屏障的完整性起保护作用：与阴性对照相比，观察到LY通过减少29％。与阴性对照相比，测试的产品没有显著差异：用蔓越橘预处理恢复肠上皮并防止大肠杆菌粘附。
4)在所采用的实验条件下，作为大肠杆菌粘附的生物标志物的α-辅肌动蛋白的染色并没有由于用蔓越橘处理而有显着改变；然而，观察到荧光略微降低。
5)通过扫描电子显微镜分析揭示了蔓越橘抗大肠杆菌的粘附、活力和形态的直接活性。

Claims (10)

1.至少一种越橘属植物的提取物(a)在制备用于口服施用的组合物中的应用，所述组合物用于预防和/或治疗结肠憩室病以及与憩室的存在有关的结肠憩室炎，其中所述组合物包含以下物质：
(i) 芯，所述芯包含至少一种越橘属植物的提取物(a)和至少一种药物或食品应用可接受的成分(b)，或者由(a)和(b)组成，其中，所述提取物(a)含有浓度为按重量或体积计5%至30 %的原花青素；
(ii) 抗胃层，所述抗胃层在所述芯(i)的外部，并且完全包被(i)并包含至少一种药物或食品应用可接受的成分(c)，其中所述抗胃层(ii)能够使提取物(a)在结肠中释放，
其中，在所述芯(i)的外部的所述抗胃层(ii)的特征在于能够在7至7.5的pH值，在60分钟至120分钟的时间内分解和溶出，
在所述芯(i)的外部的所述抗胃层(ii)包含以下物质或者由以下物质组成：
- Eudragard ®生物E1207；
- 柠檬酸三乙酯E1505；
- 滑石，
或者，
在所述芯(i)的外部的所述抗胃层(ii)包含以下物质或者由以下物质组成：
- 乙基纤维素；
- 海藻酸钠；
- 氢氧化铵；
- 中链甘油三酯；
- 油酸；
- 纯化的硬脂酸。
2.如权利要求1所述的应用，其中，所述至少一种越橘属植物的提取物(a)为干提取物。
3. 如权利要求1或2所述的应用，其中，所述至少一种越橘属植物的提取物(a)的存在量为150 mg至600 mg。
4.如权利要求3所述的应用，其中，所述提取物(a)的存在量为200 mg至300 mg。
5.如权利要求1或2所述的应用，其中，所述提取物(a)含有浓度为按重量或体积计10%，或15%，或20%，或25%的原花青素。
6.如权利要求1所述的应用，其中，在所述芯(i)的外部的所述抗胃层(ii)能够在7至7.5的pH值，在60分钟至90分钟的时间内分解和溶出。
7.如权利要求1或2所述的应用，其中，在所述芯(i)的外部的所述抗胃层(ii)包含以下物质或者由以下物质组成：
- 乙基纤维素：5至15 mg；
- 海藻酸钠：5至15 mg；
- 氢氧化铵：0.5至4 mg；
- 中链甘油三酯：0.5至5 mg；
- 油酸：0.5至3 mg；
- 纯化的硬脂酸：0.01至0.5 mg。
8.如权利要求1或2所述的应用，其中，在所述芯(i)的外部的所述抗胃层(ii)包含以下物质或者由以下物质组成：
乙基纤维素：8至12 mg；
- 海藻酸钠：8至12 mg；
- 氢氧化铵：1.5至3 mg；
- 中链甘油三酯：1.5至3 mg；
- 油酸：1至2 mg；
- 纯化的硬脂酸：0.05至0.3 mg。
9.如权利要求1或2所述的应用，其中，在所述芯(i)的外部的所述抗胃层(ii)包含以下物质或者由以下物质组成：
- Eudragard ®生物E1207：20.4 mg；
- 柠檬酸三乙酯E1505：1 mg；
- 滑石：10.2 mg。
10.如权利要求1或2所述的应用，其中，在所述芯(i)的外部的所述抗胃层(ii)包含以下物质或者由以下物质组成：
- 乙基纤维素：9.97 mg；
- 海藻酸钠：9.30 mg；
- 氢氧化铵：2.34 mg；
- 中链甘油三酯：2.12 mg；
- 油酸：1.17 mg；
- 纯化的硬脂酸：0.1 mg。
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