CN110420198A - 靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***及制备方法 - Google Patents

靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***及制备方法 Download PDF

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Abstract

靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***及制备方法，其结构式为：其制备时以具有精确、高度支化、单分散、完全对称的球形分子结构的PAMAM G5.0树枝状高分子为载体，采用能够包合溶解胆固醇、促进胆固醇在动脉粥样硬化病变部位的清除和消退的β‑CD进行修饰，并利用Mannose与巨噬细胞表面Mannose受体特异性结合实现靶向作用。本发明提供的靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***及制备方法具有无免疫原性、低毒、较好的稳定性等优点，同时具有很好的靶向作用，能够有效地清除动脉粥样硬化病变部位并启动抗炎机制促进斑块的消退，减轻药物治疗和手术治疗对患者造成的毒性等相关副作用，具有广泛的临床医学效果。

Description

靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***及制备方法
技术领域
本发明涉及医药化工技术领域，特别是一种具有β-CD及Mannose修饰的靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***及制备方法。
背景技术
动脉粥样硬化是指早期动脉内膜局部损伤后，脂质沉积，进而内膜纤维组织增生，内膜局部增厚，形成黄色或灰黄色状如粥样物质的斑块。动脉粥样硬化是心脑血管疾病的主要病理基础，由斑块引起的血管狭窄会导致动脉供血不足和各种症状的心血管疾病，最严重的并发症是斑块破裂导致的心肌梗死，脑卒中等，每年约有一千多万人死于动脉粥样硬化所引起的心血管疾病，严重危害人类生命健康。
目前，动脉粥样硬化的治疗主要是全身药物治疗和手术治疗，无靶向动脉粥样硬化病灶部位的治疗策略。药物治疗主要是减少细胞内胆固醇合成从而降低血浆胆固醇，长期服用会产生肌毒性和肝毒性；手术治疗创伤性大，费用高，对高龄老人不适宜，因此设计一种疗效好，副作用少，价格低的治疗方法刻不容缓，近年来，靶向治疗动脉粥样硬化逐渐受到了科学家们的注意。
PAMAM G5.0树枝状高分子是一种人工合成的新型纳米高分子化合物，具有精确、高度支化、单分散、完全对称的球形分子结构，并且具有内部空腔结构且表面有大量可供修饰的官能团，无免疫原性、低毒、较好的稳定性，因此是很好的药物载体。并且β-CD独特的分子特性能包合溶解胆固醇，促进胆固醇在动脉粥样硬化病变部位的清除，并能溶解胆固醇结晶，启动抗炎机制，从而促进了斑块的消退。有研究证明，Mannose可以与巨噬细胞表面Mannose受体特异性结合，因此用Mannose作为靶向分子。三者有效的结合构建靶向动脉粥样硬化巨噬细胞的靶向纳米载体***。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术的上述不足而提供一种具有β-CD及Mannose修饰的靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***及制备方法和应用。本发明是以树状大分子PAMAM G5.0为载体，分别用β-CD和靶向分子Mannose修饰，制备动脉粥样硬化纳米粒子靶向载体***，从而达到靶向动脉粥样硬化的目的。
本发明的技术方案是：靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***，其结构式为：
结构数据为：(0<x≤100，0<y≤100，0<n≤100)，1HNMR(D2O,ppm)：4.98(H-1-CD)，4.19-4.18(t,-CH2-CH2-OC＝O)，4.19-4.18(t,-CH2-CH2-OC＝O)，4.02-4.01(t,-CH2-CH2-)，3.67-3.74(m,-CH2-CH2-)，3.62(s,-CH2-O-CH2)，3.45-3.55(m,PEG-DA)，3.25-3.20(m,H-2,4-CD)，2.70-2.59(m,NCH2CH2CONH-)，2.52-2.54(t,-NCH2CH2CO-)，2.37-2.39(t,-NCH2CH2CO-)，FT-IR(KBr):3428cm-1(N-H),2914cm-1(C-H)，1635cm-1(C＝O),1474cm-1(C-N)，1338cm-1,1246cm-1,1098cm-1(C-O-C)，949cm-1,663cm-1(N-H)。
本发明的技术方案是：前述靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***的制备方法，包括以下步骤：
A、取重结晶的β-CD 11.35g置于反应容器A中，加入95ml蒸馏水，调节温度至4℃以下，然后缓慢滴加NaOH溶液，待β-CD完全溶解，滴加对甲苯磺酰氯溶液，搅拌4h后抽滤，滤液用稀盐酸调PH至7～8，在冰箱0～4℃下放置10～12h，然后抽滤，滤饼干燥，在水中重结晶3次获得第一中间产物；
所述的NaOH溶液为NaOH与水的混合物，将1.2g NaOH溶于3.6ml水中，获得NaOH溶液；
所述的对甲苯磺酰氯溶液为对甲苯磺酰氯与乙腈的混合物，将1.91g对甲苯磺酰氯溶于5.7ml乙腈中，获得对甲苯磺酰氯溶液；
B、取丁二酸酐1.5g置于反应容器B中，加入20ml CHCl2形成丁二酸酐溶液，用N2保护；取PEG2000 5g溶于10ml CHCl2中，缓慢滴加至上述丁二酸酐溶液中，调节温度至50℃搅拌至澄清；滴入DMAP溶液，调节温度至100℃，冷凝回流4h后，旋干溶剂，向残余物中加入20ml饱和NaHCO3溶液，抽滤，滤液用稀盐酸酸化至无气泡产生，依次用20mlCHCl2萃取两次，混合萃取后的两次CHCl2溶液，用饱和NaCl洗涤，再用无水Na2SO4干燥，滤液浓缩后加入无水***，在冰箱0～4℃下放置10-12h后产生白色蜡状固体，用乙酸乙酯重结晶获得第二中间产物；
所述的DMAP溶液为DMAP与CHCl2的混合物，将0.2g DMAP溶于5ml CHCl2中，得到DMAP溶液；
C、取Mannose 1g置于反应容器C中，加入10ml无水醋酸酐，用N2保护，冷凝回流，加热搅拌至微沸至Mannose完全溶解后，调节温度至60℃，加入1g乙酸钠，搅拌30min；然后升温至100℃搅拌3h，搅拌后待温度降至室温，用15ml CHCl2萃取，取萃取液下层，然后依次用20ml饱和NaHCO3、20ml饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩得棕黄色粘稠物，用无水乙醇重结晶三次得到第三中间产物；
D、取10ml的四氢呋喃置于反应容器D中，加入0.5ml无水乙二胺搅拌，缓慢滴加0.5ml冰醋酸，然后加入0.7g第三中间产物，搅拌24h后加入10ml蒸馏水，再加10ml CHCl2萃取，依次用20ml稀盐酸、20ml饱和NaHCO3、20ml蒸馏水洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得到黄色粘稠物粗产品；
取粗产品置入层析柱中，用洗脱剂洗脱去除杂质，得到第四中间产物；
所述的洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯，石油醚与乙酸乙酯的比例为20：1。
E、将1.1g第二中间产物置于反应容器E中，加入20ml CHCl2，依次滴加DCC的CHCl2溶液、DMAP的CHCl2溶液，用N2保护,搅拌30min，然后分3次加入第四中间产物，每次加0.12g，室温搅拌72h。
抽滤，滤液置冰箱0～4℃下静置，再抽滤，直到冰箱中滤液无白色沉淀产生，浓缩得到棕黄色粘稠物，在乙酸乙酯中重结晶3次获得第五中间产物；
所述的DCC的CHCl2溶液为0.3g DCC溶于2ml CHCl2溶液中，得到DCC的CHCl2溶液；
所述的DMAP的CHCl2溶液为0.05g DMAP溶于2ml CHCl2溶液中，得到DMAP的CHCl2溶液。
F、取PAMAM G5.0的甲醇溶液200μl置反应容器F中，用N2吹干；
加入3ml DMSO形成PAMAM G5.0甲醇溶液，用N2保护；
取0.035g第一中间产物溶于2ml DMSO中，并缓慢滴入上述PAMAM G5.0甲醇溶液中，调节温度至60℃保持，避光搅拌5天后；将搅拌后的溶液置于MWCO为8000-14000的透析袋中，用去离子水透析3天，冷冻干燥获得黄色粉末状的第六中间产物；
G、取0.0253g第五中间产物溶于4ml DMSO中置反应容器G中，然后加入EDC.HCL0.004g，室温条件下搅拌30min，加入NHS 0.004g，用N2保护，搅拌6h得到第五中间产物溶液；
然后取0.005g第六中间产物溶于5ml DMSO中形成第六中间产物溶液，将第五中间产物溶液缓慢滴入第六中间产物溶液中，室温条件下避光搅拌5天，将搅拌后的溶液置于MWCO为8000-14000的透析袋中，用去离子水透析3天，冻干得黄色粉末状的第七中间产物；
H、取0.005g第七中间产物置反应容器H中，加入5ml 85％的乙醇溶解，调节温度至44℃，然后缓慢滴加水合肼1ml，搅拌6h，将搅拌后的溶液置于MWCO为8000-14000的透析袋中，用去离子水透析3天，获得最终产物：靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***CD-PAMAM-PEG-Man。
本发明的技术方案是：前述靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***制备的各种药物剂型以及药物剂型在治疗动脉粥样硬化中的应用。
本发明与现有技术相比具有如下特点：
本发明制备的纳米粒子是一种新的具有靶向的纳米载体，与以往的靶向载体不同，本发明是靶向动脉粥样硬化相关的巨噬细胞，同时本发明制备的靶向纳米载体具有修饰β-CD，其独特的分子特性能包合溶解并移除动脉粥样硬化斑块内的胆固醇，有效减少斑块内的胆固醇结晶，并能抑制炎症，最终使斑块减小。同时，β-CD能促进巨噬细胞依赖肝X受体的抗炎重编程，启动抗炎机制，从而促进了斑块的消退，对心血管具有保护作用。
以下结合附图和具体实施方式对本发明的详细结构作进一步描述。
附图说明
图1为本发明的纳米载体***制备过程反应方程式；
图2为本发明的纳米载体***的核磁共振结构数据图；
图3为本发明的纳米载体***粒度分布情况图；
图4为本发明的纳米载体***透射电镜图；
图5(a)～5(d)为本发明的纳米载体***在倒置荧光显微镜下观察的性能测定图。
具体实施方式
实施例一，如图1-2所示，靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***，其结构式为：
结构数据为：(0<x≤100，0<y≤100，0<n≤100)，1HNMR(D2O,ppm)：4.98(H-1-CD)，4.19-4.18(t,-CH2-CH2-OC＝O)，4.19-4.18(t,-CH2-CH2-OC＝O)，4.02-4.01(t,-CH2-CH2-)，3.67-3.74(m,-CH2-CH2-)，3.62(s,-CH2-O-CH2)，3.45-3.55(m,PEG-DA)，3.25-3.20(m,H-2,4-CD)，2.70-2.59(m,NCH2CH2CONH-)，2.52-2.54(t,-NCH2CH2CO-)，2.37-2.39(t,-NCH2CH2CO-)，FT-IR(KBr):3428cm-1(N-H),2914cm-1(C-H)，1635cm-1(C＝O),1474cm-1(C-N)，1338cm-1,1246cm-1,1098cm-1(C-O-C)，949cm-1,663cm-1(N-H)。
前述靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***的制备方法，包括以下步骤：
A、取重结晶的β-CD 11.35g置于反应容器A中，加入95ml蒸馏水，调节温度至4℃以下，然后缓慢滴加NaOH溶液，待β-CD完全溶解，滴加对甲苯磺酰氯溶液，搅拌4h后抽滤，滤液用稀盐酸调PH至7～8，在冰箱0～4℃下放置10～12h，然后抽滤，滤饼干燥，在水中重结晶3次获得第一中间产物；
所述的NaOH溶液为NaOH与水的混合物，将1.2g NaOH溶于3.6ml水中，获得NaOH溶液；
所述的对甲苯磺酰氯溶液为对甲苯磺酰氯与乙腈的混合物，将1.91g对甲苯磺酰氯溶于5.7ml乙腈中，获得对甲苯磺酰氯溶液；
B、取丁二酸酐1.5g置于反应容器B中，加入20ml CHCl2形成丁二酸酐溶液，用N2保护；
取PEG2000 5g溶于10ml CHCl2中，缓慢滴加至上述丁二酸酐溶液中，调节温度至50℃搅拌至澄清；
滴入DMAP溶液，调节温度至100℃，冷凝回流4h后，旋干溶剂，向残余物中加入20ml饱和NaHCO3溶液，抽滤，滤液用稀盐酸酸化至无气泡产生，依次用20mlCHCl2萃取两次，混合萃取后的两次CHCl2溶液，用饱和NaCl洗涤，再用无水Na2SO4干燥，滤液浓缩后加入无水***，在冰箱0～4℃下放置10-12h后产生白色蜡状固体，用乙酸乙酯重结晶获得第二中间产物；
所述的DMAP溶液为DMAP与CHCl2的混合物，将0.2g DMAP溶于5ml CHCl2中，得到DMAP溶液；
C、取Mannose 1g置于反应容器C中，加入10ml无水醋酸酐，用N2保护，冷凝回流，加热搅拌至微沸至Mannose完全溶解后，调节温度至60℃，加入1g乙酸钠，搅拌30min；
然后升温至100℃搅拌3h，搅拌后待温度降至室温，用15ml CHCl2萃取，取萃取液下层，然后依次用20ml饱和NaHCO3、20ml饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩得棕黄色粘稠物，用无水乙醇重结晶三次得到第三中间产物；
D、取10ml的四氢呋喃置于反应容器D中，加入0.5ml无水乙二胺搅拌，缓慢滴加0.5ml冰醋酸，然后加入0.7g第三中间产物，搅拌24h后加入10ml蒸馏水，再加10ml CHCl2萃取，依次用20ml稀盐酸、20ml饱和NaHCO3、20ml蒸馏水洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得到黄色粘稠物粗产品；
取粗产品置入层析柱中，用洗脱剂洗脱去除杂质，得到第四中间产物；
所述的洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯，石油醚与乙酸乙酯的比例为20：1。
E、将1.1g第二中间产物置于反应容器E中，加入20ml CHCl2，依次滴加DCC的CHCl2溶液、DMAP的CHCl2溶液，用N2保护,搅拌30min，然后分3次加入第四中间产物，每次加0.12g，室温搅拌72h。
抽滤，滤液置冰箱0～4℃下静置，再抽滤，直到冰箱中滤液无白色沉淀产生，浓缩得到棕黄色粘稠物，在乙酸乙酯中重结晶3次获得第五中间产物；
所述的DCC的CHCl2溶液为0.3g DCC溶于2ml CHCl2溶液中，得到DCC的CHCl2溶液；
所述的DMAP的CHCl2溶液为0.05g DMAP溶于2ml CHCl2溶液中，得到DMAP的CHCl2溶液。
F、取PAMAM G5.0的甲醇溶液200μl置反应容器F中，用N2吹干；
加入3ml DMSO形成PAMAM G5.0甲醇溶液，用N2保护；
取0.035g第一中间产物溶于2ml DMSO中，并缓慢滴入上述PAMAM G5.0甲醇溶液中，调节温度至60℃保持，避光搅拌5天后；将搅拌后的溶液置于MWCO为8000-14000的透析袋中，用去离子水透析3天，冷冻干燥获得黄色粉末状的第六中间产物；
G、取0.0253g第五中间产物溶于4ml DMSO中置反应容器G中，然后加入EDC.HCL0.004g，室温条件下搅拌30min，加入NHS 0.004g，用N2保护，搅拌6h得到第五中间产物溶液；
然后取0.005g第六中间产物溶于5ml DMSO中形成第六中间产物溶液，将第五中间产物溶液缓慢滴入第六中间产物溶液中，室温条件下避光搅拌5天，将搅拌后的溶液置于MWCO为8000-14000的透析袋中，用去离子水透析3天，冻干得黄色粉末状的第七中间产物；
H、取0.005g第七中间产物置反应容器H中，加入5ml 85％的乙醇溶解，调节温度至44℃，然后缓慢滴加水合肼1ml，搅拌6h，将搅拌后的溶液置于MWCO为8000-14000的透析袋中，用去离子水透析3天，获得最终产物：靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***CD-PAMAM-PEG-Man。
在透射电镜下对本发明的靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***进行分析如图3-4所示，根据图3所示计算出制备的纳米载体平均粒子大小为119nm。
对本发明提供的靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***进行靶向性能测定：
为了观察吸收情况，纳米粒子需要用荧光分子FITC标记制备的纳米载体，未连接靶向分子Mannose的纳米载体CD-G5和连接靶向分子Mannose的纳米载体CD-G5-PEG-Man均标记上荧光分子FITC，检测其靶向性：将小鼠腹膜巨噬细胞分别孵育在300nM的CD-G5-FITC和CD-G5-PEG-Man-FITC中24h，在每次处理结束时用DPBS洗涤细胞，然后用4％的甲醛在室温条件下固定30分钟，用0.1％Triton X-100透化5分钟，然后用DAPI复染细胞核，在倒置荧光显微镜下进行观察，观察结构如图5所示，图5(a)、图5(c)示出的分别是连接靶向分子Mannose的纳米载体CD-G5-PEG-Man和未连接靶向分子Mannose的纳米载体CD-G5下小鼠腹膜巨噬细胞DAPI复染的细胞核，图5(b)、图5(d)示出的分别是连接靶向分子Mannose的纳米载体CD-G5-PEG-Man和未连接靶向分子Mannose的纳米载体CD-G5下小鼠腹膜巨噬细胞荧光标记靶向纳米载体。
由图5(a)、图5(b)中看出加CD-G5-Man-FITC的小鼠腹膜巨噬细胞在细胞核的位置都对应的有荧光吸收；由图5(c)、图5(d)中看出加CD-G5-FITC的小鼠腹膜巨噬细胞在细胞核的位置对应的有荧光吸收的较少，由此能够得出本发明制备的靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***具有靶向动脉粥样硬化巨噬细胞的作用。
实施例二，将实施例一的靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***制备成各种药物剂型，以及所述药物剂型在治疗动脉粥样硬化中的应用。

Claims (3)

1.靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***，其特征是：其结构式为：
其结构数据为：(0<x≤100，0<y≤100，0<n≤100)，1HNMR(D2O,ppm)：4.98(H-1-CD)，4.19-4.18(t,-CH2-CH2-OC＝O)，4.19-4.18(t,-CH2-CH2-OC＝O)，4.02-4.01(t,-CH2-CH2-)，3.67-3.74(m,-CH2-CH2-)，3.62(s,-CH2-O-CH2)，3.45-3.55(m,PEG-DA)，3.25-3.20(m,H-2,4-CD)，2.70-2.59(m,NCH2CH2CONH-)，2.52-2.54(t,-NCH2CH2CO-)，2.37-2.39(t,-NCH2CH2CO-)，FT-IR(KBr):3428cm-1(N-H),2914cm-1(C-H)，1635cm-1(C＝O),1474cm-1(C-N)，1338cm-1,1246cm-1,1098cm-1(C-O-C)，949cm-1,663cm-1(N-H)。
2.如权利要求1所述的靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***的制备方法，其特征是：其具体步骤如下,
A、取重结晶的β-CD 11.35g置于反应容器A中，加入95ml蒸馏水，调节温度至4℃以下，然后缓慢滴加NaOH溶液，待β-CD完全溶解，滴加对甲苯磺酰氯溶液，搅拌4h后抽滤，滤液用稀盐酸调PH至7～8，在冰箱0～4℃下放置10～12h，然后抽滤，滤饼干燥，在水中重结晶3次获得第一中间产物；
其中，所述的NaOH溶液为NaOH与水的混合物，将1.2g NaOH溶于3.6ml水中，获得NaOH溶液；
所述的对甲苯磺酰氯溶液为对甲苯磺酰氯与乙腈的混合物，将1.91g对甲苯磺酰氯溶于5.7ml乙腈中，获得对甲苯磺酰氯溶液；
B、取丁二酸酐1.5g置于反应容器B中，加入20ml CHCl2形成丁二酸酐溶液，用N2保护；
取PEG2000 5g溶于10ml CHCl2中，并缓慢滴加至上述丁二酸酐溶液中，调节温度至50℃搅拌至澄清；
滴入DMAP溶液，调节温度至100℃，冷凝回流4h后，旋干溶剂，向残余物中加入20ml饱和NaHCO3溶液，抽滤，滤液用稀盐酸酸化至无气泡产生，依次用20mlCHCl2萃取两次，混合萃取后的两次CHCl2溶液，用饱和NaCl洗涤，再用无水Na2SO4干燥，滤液浓缩后加入无水***，在冰箱0～4℃下放置10-12h后产生白色蜡状固体，用乙酸乙酯重结晶获得第二中间产物；
其中，所述的DMAP溶液为DMAP与CHCl2的混合物，将0.2g DMAP溶于5ml CHCl2中，得到DMAP溶液；
C、取Mannose 1g置于反应容器C中，加入10ml无水醋酸酐，用N2保护，冷凝回流，加热搅拌至微沸至Mannose完全溶解后，调节温度至60℃，加入1g乙酸钠，搅拌30min；
然后升温至100℃搅拌3h，搅拌后待温度降至室温，用15ml CHCl2萃取，取萃取液下层，然后依次用20ml饱和NaHCO3、20ml饱和NaCl洗涤，无水Na2SO4干燥，浓缩得棕黄色粘稠物，用无水乙醇重结晶三次得到第三中间产物；
D、取10ml的四氢呋喃置于反应容器D中，加入0.5ml无水乙二胺搅拌，缓慢滴加0.5ml冰醋酸，然后加入0.7g第三中间产物，搅拌24h后加入10ml蒸馏水，再加10ml CHCl2萃取，依次用20ml稀盐酸、20ml饱和NaHCO3、20ml蒸馏水洗涤，无水硫酸镁干燥，浓缩得到黄色粘稠物粗产品；
取粗产品置入层析柱中，用洗脱剂洗脱去除杂质，得到第四中间产物；
所述的洗脱剂为石油醚与乙酸乙酯，石油醚与乙酸乙酯的比例为20：1；
E、将1.1g第二中间产物置于反应容器E中，加入20ml CHCl2，依次滴加DCC的CHCl2溶液、DMAP的CHCl2溶液，用N2保护,搅拌30min，然后分3次加入第四中间产物，每次加0.12g，室温搅拌72h；
抽滤，滤液置冰箱0～4℃下静置，再抽滤，直到冰箱中滤液无白色沉淀产生，浓缩得到棕黄色粘稠物，在乙酸乙酯中重结晶3次获得第五中间产物；
其中，所述的DCC的CHCl2溶液为0.3g DCC溶于2ml CHCl2溶液中，得到DCC的CHCl2溶液；
所述的DMAP的CHCl2溶液为0.05g DMAP溶于2ml CHCl2溶液中，得到DMAP的CHCl2溶液；
F、取PAMAM G5.0的甲醇溶液200μl置反应容器F中，用N2吹干；
加入3ml DMSO形成PAMAM G5.0甲醇溶液，用N2保护；
取0.035g第一中间产物溶于2ml DMSO中，并缓慢滴入上述PAMAM G5.0甲醇溶液中，调节温度至60℃保持，避光搅拌5天；将搅拌后的溶液置于MWCO为8000-14000的透析袋中，用去离子水透析3天，冷冻干燥获得黄色粉末状的第六中间产物；
G、取0.0253g第五中间产物溶于4ml DMSO中置反应容器G中，然后加入EDC.HCL0.004g，室温条件下搅拌30min，加入NHS0.004g，用N2保护，搅拌6h得到第五中间产物溶液；
然后取0.005g第六中间产物溶于5ml DMSO中形成第六中间产物溶液，将第五中间产物溶液缓慢滴入第六中间产物溶液中，室温条件下避光搅拌5天，将搅拌后的溶液置于MWCO为8000-14000的透析袋中，用去离子水透析3天，冻干得黄色粉末状的第七中间产物；
H、取0.005g第七中间产物置反应容器H中，加入5ml85％的乙醇溶解，调节温度至44℃，然后缓慢滴加水合肼1ml，搅拌6h，将搅拌后的溶液置于MWCO为8000-14000的透析袋中，用去离子水透析3天，获得最终产物：靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***CD-PAMAM-PEG-Man。
3.如权利要求1所述的靶向动脉粥样硬化巨噬细胞树状纳米载体***制备的各种药物剂型以及药物剂型在治疗动脉粥样硬化中的应用。
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