CN110157619A - 一种纤维素分解菌剂制备应用方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种纤维素分解菌剂制备应用方法，该方法的具体步骤如下:1）、准备样品：腐殖土；2）、准备培养基：若干组纤维素刚果红培养基、纤维素分解菌培养基；3）、将步骤1）中的腐殖土提取5g并同100ml蒸馏水一同添加入试管内，于65℃下水浴72h，然后稀释至10^(‑2)，然后分别吸取0.1ml涂布于步骤2）中的若干组纤维素刚果红培养基上，45℃培养；4）、步骤3）中若干组纤维素刚果红培养基培养一段时间后，纤维素刚果红培养基上周围出现清晰透明圈的菌株，通过划线法分离产生明显的透明圈的菌落；本方法所设计的纤维素分解菌剂可提高畜禽生产性能，提高饲料利用率，改善饲料的营养价值，降低饲料成本和提高经济效益。

Description

一种纤维素分解菌剂制备应用方法
技术领域
本发明涉及纤维素分解菌剂制备技术领域，具体为一种纤维素分解菌剂制备应用方法。
背景技术
维素（cellulose）是由葡萄糖组成的大分子多糖。不溶于水及一般有机溶剂。是植物细胞壁的主要成分。纤维素是自然界中分布最广、含量最多的一种多糖，占植物界碳含量的50%以上。棉花的纤维素含量接近100%，为天然的最纯纤维素来源。一般木材中，纤维素占40～50%，还有10～30%的半纤维素和20～30%的木质素。纤维素是植物细胞壁的主要结构成分，通常与半纤维素、果胶和木质素结合在一起，其结合方式和程度对植物源食品的质地影响很大。而植物在成熟和后熟时质地的变化则有果胶物质发生变化引起的。人体消化道内不存在纤维素酶，纤维素是一种重要的膳食纤维。自然界中分布最广、含量最多的一种多糖。
常见的畜禽饲料如谷物、豆类、麦类及加工副产品等都含有大量的纤维素。除了反刍动物借助瘤胃微生物可以利用一部分外，其它动物如猪、鸡等单胃动物则不能利用纤维素。
我国是一个饲料资源十分紧张的国家，土地少、人口多，人畜争粮的矛盾十分突出。要保持我国饲料工业和畜牧业的持续发展，必须解决好饲料问题，否则将严重制约其发展。纤维素是自然界中十分丰富的资源，是800-1200个葡萄糖分子聚合而成。因此，可通过微生物发酵充分利用农副产品下脚料、秸秆、糠生产纤维素酶添加剂，用于提高畜禽生产性能，提高饲料利用率，改善饲料的营养价值，降低饲料成本和提高经济效益。
发明内容
本发明的目的在于提供一种纤维素分解菌剂制备应用方法，以解决上述背景技术中提出的现有市场上的现有纤维素分解菌剂对畜禽饲料纤维素分解率不能满足需求的问题。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：一种纤维素分解菌剂制备应用方法，所述技术的步骤包括 ：
1）、准备样品：腐殖土；
2）、准备培养基：若干组纤维素刚果红培养基、纤维素分解菌培养基；
3）、将步骤1）中的腐殖土提取5g并同100ml蒸馏水一同添加入试管内，于65 ℃下水浴72h，然后稀释至10^(-2)，然后分别吸取0.1ml涂布于步骤2）中的若干组纤维素刚果红培养基上，45 ℃培养；
4）、步骤3）中若干组纤维素刚果红培养基培养一段时间后，纤维素刚果红培养基上周围出现清晰透明圈的菌株，通过划线法分离产生明显的透明圈的菌落；
5）、将步骤4）中的分离的菌株接种至纤维素分解菌培养基上，在30℃-37℃培养，然后进行纯化，再进行固体发酵及得固体型纤维素酶菌剂；
6）、在含有大量的纤维素的猪日粮饲料内添加步骤5）得到的固体型纤维素酶菌剂1.2%，结果表明，添加1.2%固体型纤维素酶菌剂组与对照组相比生长及增重分别提高16.84%和21.86%，且中性洗涤纤维消化率由30.3%提高到34.1%，酸性洗涤纤维消化率从68.8%提高到73.9%，能量消化率由69.3%提高到71.8%；
7）、在含有大量的纤维素的鸡日粮饲料内添加步骤5）得到的固体型纤维素酶菌剂0.1%，结果表明，添加0.1%固体型纤维素酶菌剂组比对照组在1-2、3-6、7-8周三个生长阶段日增重分别提高4.31%、4.54%、4.13%，耗料比分别下降1.56%、4.50%、4.3%。
优选的，所述步骤4）中的若干组纤维素刚果红培养基在培养一段时间后均往上添加NaCl溶液。
优选的，所述步骤2）中的纤维素刚果红培养基由CMC-Na 2g/L，(NH4)2SO4 2g/L，NaCl 0.5g/L，K2HPO4 1g/L，MgSO4 7H2O 0.5g/L，刚果红0.4g/L，琼脂12g/L和pH7.0组成。
优选的，所述步骤2）中的纤维素分解菌培养基由纤维素粉5g，NaNO3 1g，KCl0.5g，Na2HPO4 7H2O 1.2g，KH2PO4 0.9g，MgSO4 7H2O 0.5g，酵母膏0.5g，水解酵素0.5g和100ml蒸馏水组成。
与现有技术相比，本发明的有益效果是：本方法所设计的纤维素分解菌剂对纤维素分解率高，可达65-75%，其在猪日粮的应用中，结果表明，添加1.2%固体型纤维素酶菌剂组与对照组相比生长及增重分别提高16.84%和21.86%，且中性洗涤纤维消化率由30.3%提高到34.1%，酸性洗涤纤维消化率从68.8%提高到73.9%，能量消化率由69.3%提高到71.8%；在鸡日粮的应用中，结果表明，添加0.1%固体型纤维素酶菌剂组比对照组在1-2、3-6、7-8周三个生长阶段日增重分别提高4.31%、4.54%、4.13%，耗料比分别下降1.56%、4.50%、4.3%，本方法所设计的纤维素分解菌剂可提高畜禽生产性能，提高饲料利用率，改善饲料的营养价值，降低饲料成本和提高经济效益。
具体实施方式
下面对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1：
本发明提供一种技术方案：一种纤维素分解菌剂制备应用方法，包括以下步骤：
1）、准备样品：腐殖土；
2）、准备培养基：若干组纤维素刚果红培养基、纤维素分解菌培养基；
3）、将步骤1）中的腐殖土提取5g并同100ml蒸馏水一同添加入试管内，于65 ℃下水浴72h，然后稀释至10^(-2)，然后分别吸取0.1ml涂布于步骤2）中的若干组纤维素刚果红培养基上，45 ℃培养；
4）、步骤3）中若干组纤维素刚果红培养基培养一段时间后，纤维素刚果红培养基上周围出现清晰透明圈的菌株，通过划线法分离产生明显的透明圈的菌落；
5）、将步骤4）中的分离的菌株接种至纤维素分解菌培养基上，在30℃-37℃培养，然后进行纯化，再进行固体发酵及得固体型纤维素酶菌剂；
6）、在含有大量的纤维素的猪日粮饲料内添加步骤5）得到的固体型纤维素酶菌剂1.2%，结果表明，添加1.2%固体型纤维素酶菌剂组与对照组相比生长及增重分别提高16.84%和21.86%，且中性洗涤纤维消化率由30.3%提高到34.1%，酸性洗涤纤维消化率从68.8%提高到73.9%，能量消化率由69.3%提高到71.8%；
7）、在含有大量的纤维素的鸡日粮饲料内添加步骤5）得到的固体型纤维素酶菌剂0.1%，结果表明，添加0.1%固体型纤维素酶菌剂组比对照组在1-2、3-6、7-8周三个生长阶段日增重分别提高4.31%、4.54%、4.13%，耗料比分别下降1.56%、4.50%、4.3%。
上述实施例中，具体的，步骤4）中的若干组纤维素刚果红培养基在培养一段时间后均往上添加NaCl溶液，该NaCl溶液起到漂洗作用，洗去与纤维素结合不牢的刚果红，使得留下的大大小小中大的透明圈则代表分解纤维素强。
上述实施例中，具体的，所述步骤2）中的纤维素刚果红培养基由CMC-Na 2g/L，(NH4)2SO4 2g/L，NaCl 0.5g/L，K2HPO4 1g/L，MgSO4 7H2O 0.5g/L，刚果红0.4g/L，琼脂12g/L和pH7.0组成。
上述实施例中，具体的，所述步骤2）中的纤维素分解菌培养基由纤维素粉5g，NaNO3 1g，KCl 0.5g，Na2HPO4 7H2O 1.2g，KH2PO4 0.9g，MgSO4 7H2O 0.5g，酵母膏0.5g，水解酵素0.5g和100ml蒸馏水组成。
实施例2：
本发明提供一种技术方案：一种纤维素分解菌剂制备应用方法，包括以下步骤：
1）、准备样品：腐殖土；
2）、准备培养基：若干组纤维素刚果红培养基、纤维素分解菌培养基；
3）、将步骤1）中的腐殖土提取5g并同100ml蒸馏水一同添加入试管内，于65 ℃下水浴72h，然后稀释至10^(-2)，然后分别吸取0.1ml涂布于步骤2）中的若干组纤维素刚果红培养基上，45 ℃培养；
4）、步骤3）中若干组纤维素刚果红培养基培养一段时间后，纤维素刚果红培养基上周围出现清晰透明圈的菌株，通过划线法分离产生明显的透明圈的菌落；
5）、将步骤4）中的分离的菌株接种至纤维素分解菌培养基上，在30℃-37℃培养，然后进行纯化，再进行液体发酵及得液体型纤维素酶菌剂；
6）、在含有大量的纤维素的猪日粮饲料内添加步骤5）得到的液体型纤维素酶菌剂1.2%，结果表明，添加1.2%液体型纤维素酶菌剂组与对照组相比生长及增重分别提高16.84%和21.86%，且中性洗涤纤维消化率由30.3%提高到38.1%，酸性洗涤纤维消化率从68.8%提高到80.9%，能量消化率由69.3%提高到73.8%；
7）、在含有大量的纤维素的鸡日粮饲料内添加步骤5）得到的液体型纤维素酶菌剂0.1%，结果表明，添加0.1%液体型纤维素酶菌剂组比对照组在1-2、3-6、7-8周三个生长阶段日增重分别提高4.71%、5.04%、4.53%，耗料比分别下降1.89%、5.02%、4.7%。
上述实施例中，具体的，步骤4）中的若干组纤维素刚果红培养基在培养一段时间后均往上添加NaCl溶液，该NaCl溶液起到漂洗作用，洗去与纤维素结合不牢的刚果红，使得留下的大大小小中大的透明圈则代表分解纤维素强。
上述实施例中，具体的，所述步骤2）中的纤维素刚果红培养基由CMC-Na 2g/L，(NH4)2SO4 2g/L，NaCl 0.5g/L，K2HPO4 1g/L，MgSO4 7H2O 0.5g/L，刚果红0.4g/L，琼脂12g/L和pH7.0组成。
上述实施例中，具体的，所述步骤2）中的纤维素分解菌培养基由纤维素粉5g，NaNO3 1g，KCl 0.5g，Na2HPO4 7H2O 1.2g，KH2PO4 0.9g，MgSO4 7H2O 0.5g，酵母膏0.5g，水解酵素0.5g和100ml蒸馏水组成。
尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种纤维素分解菌剂制备应用方法，其特征在于：包括以下步骤：
1）、准备样品：腐殖土；
2）、准备培养基：若干组纤维素刚果红培养基、纤维素分解菌培养基；
3）、将步骤1）中的腐殖土提取5g并同100ml蒸馏水一同添加入试管内，于65 ℃下水浴72h，然后稀释至10^(-2)，然后分别吸取0.1ml涂布于步骤2）中的若干组纤维素刚果红培养基上，45 ℃培养；
4）、步骤3）中若干组纤维素刚果红培养基培养一段时间后，纤维素刚果红培养基上周围出现清晰透明圈的菌株，通过划线法分离产生明显的透明圈的菌落；
5）、将步骤4）中的分离的菌株接种至纤维素分解菌培养基上，在30℃-37℃培养，然后进行纯化，再进行固体发酵及得固体型纤维素酶菌剂；
6）、在含有大量的纤维素的猪日粮饲料内添加步骤5）得到的固体型纤维素酶菌剂1.2%，结果表明，添加1.2%固体型纤维素酶菌剂组与对照组相比生长及增重分别提高16.84%和21.86%，且中性洗涤纤维消化率由30.3%提高到34.1%，酸性洗涤纤维消化率从68.8%提高到73.9%，能量消化率由69.3%提高到71.8%；
7）、在含有大量的纤维素的鸡日粮饲料内添加步骤5）得到的固体型纤维素酶菌剂0.1%，结果表明，添加0.1%固体型纤维素酶菌剂组比对照组在1-2、3-6、7-8周三个生长阶段日增重分别提高4.31%、4.54%、4.13%，耗料比分别下降1.56%、4.50%、4.3%。
2.根据权利要求1所述的一种纤维素分解菌剂制备应用方法，其特征在于：所述步骤4）中的若干组纤维素刚果红培养基在培养一段时间后均往上添加NaCl溶液。
3.根据权利要求1所述的一种纤维素分解菌剂制备应用方法，其特征在于：所述步骤2）中的纤维素刚果红培养基由CMC-Na 2g/L，(NH4)2SO4 2g/L，NaCl 0.5g/L，K2HPO4 1g/L，MgSO4 7H2O 0.5g/L，刚果红0.4g/L，琼脂12g/L和pH7.0组成。
4.根据权利要求1所述的一种纤维素分解菌剂制备应用方法，其特征在于：所述步骤2）中的纤维素分解菌培养基由纤维素粉5g，NaNO3 1g，KCl 0.5g，Na2HPO4 7H2O 1.2g，KH2PO40.9g，MgSO4 7H2O 0.5g，酵母膏0.5g，水解酵素0.5g和100ml蒸馏水组成。
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