CN109991319B

CN109991319B - 噻吗洛尔类化合物及马来酸噻吗洛尔有关杂质分离方法及其应用

Info

Publication number: CN109991319B
Application number: CN201711482793.5A
Authority: CN
Inventors: 周小顺; 牟东升; 李彤彤; 黄秀琴; 李进; 贺容丽; 刘文双
Original assignee: Wuhan Conform Pharmaceutical Co ltd
Current assignee: Wuhan Conform Pharmaceutical Co ltd
Priority date: 2017-12-29
Filing date: 2017-12-29
Publication date: 2021-11-12
Anticipated expiration: 2037-12-29
Also published as: CN109991319A

Abstract

本发明公开了一种噻吗洛尔类化合物和/或马来酸噻吗洛尔有关杂质的分离方法及应用。本发明过将填料为表面键合有奎宁类衍生物的硅胶的色谱柱应用于高效液相色谱条件中，对噻吗洛尔类化合物、马来酸噻吗洛尔类化合物及马来酸噻吗洛尔有关杂质进行分离。该方法采用反相高效液相体系，可实现对噻吗洛尔类化合物及马来酸噻吗洛尔有关杂质的有效分离，准确度高，灵敏度高，对环境友好，可用于噻吗洛尔类化合物的定量检测。

Description

噻吗洛尔类化合物及马来酸噻吗洛尔有关杂质分离方法及其应用

技术领域

本发明涉及噻吗洛尔类化合物及马来酸噻吗洛尔有关杂质的分离方法及其应用。

背景技术

S-噻吗洛尔，为非选择性强效β受体阻滞剂。无内源性拟交感活性，无局麻作用，有微弱的膜稳定作用。对β受体阻断作用为***的5～10倍，对心肌抑制作用较***轻。用药后可使心率减慢，心肌收缩力减弱，心肌耗氧量降低。

从S-噻吗洛尔的结构式中可以看出：S-噻吗洛尔具有一个手性碳原子，其构型为S型，因此噻吗洛尔存在一个构型为R型的对映异构体。众所周知，只有S型的噻吗洛尔才是治疗的有效成分，而R型的噻吗洛尔及其有关物质等则必须作为杂质严格控制其含量。

目前的欧洲药典EP9.0和美国药典USP40中对马来酸噻吗洛尔对映异构体纯度有相关的检测方法；其中，美国药典中采用Tris 3,5－二甲基苯基氨基甲酸酯纤维素涂覆多孔硅胶微球为填充材料的色谱柱，欧洲药典中的色谱柱为填料为硅胶固定相纤维素衍生物的手性柱，但无论是欧洲药典还是美国药典中的色谱条件均是采用正相高效液相色谱***，且流动相使用的有机溶剂都是具有较强挥发性例如采用正己烷作为流动相，而试验室配备的高效液相色谱仪大多不耐受正己烷，正己烷长期使用会导致高效液相色谱仪中真空泵的损坏。并且，在欧洲药典和美国药典中均未记载对噻吗洛尔中的其他杂质如何进行分离的技术方案。

因此，如何提供一种操作方便、绿色的且经济有效的分离马来酸噻吗洛尔异构体的方法，是本领域亟需解决的技术问题。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是为了克服现有技术中对马来酸噻吗洛尔异构体分离时采用正相***时溶剂挥发性大，及正相溶剂容易对高效液相色谱仪造成损害、S-噻吗洛尔中有关杂质、或S-马来酸噻吗洛尔中有关杂质难以分离的缺陷，从而提供了一种噻吗洛尔类化合物及马来酸噻吗洛尔有关杂质的分离方法及其应用。该分离方法通过将填料为表面键合有奎宁类衍生物的硅胶的色谱柱应用于高效液相色谱条件中，对马来酸噻吗洛尔有关杂质及噻吗洛尔类化合物进行分离。该方法采用反相高效液相体系，可实现对马来酸噻吗洛尔有关杂质及噻吗洛尔类化合物的有效分离，准确度高，灵敏度高，对环境友好，可用于噻吗洛尔类化合物的定量检测。

本发明是通过以下技术方案解决上述技术问题的。

本发明提供了一种马来酸噻吗洛尔有关杂质和/或噻吗洛尔类化合物的分离方法，其包含以下步骤，采用高效液相色谱法对样品进行分离，即可；

所述噻吗洛尔类化合物为包含任意比例的R-噻吗洛尔和/或S-噻吗洛尔；

所述马来酸噻吗洛尔有关杂质包含马来酸、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质I、杂质G和杂质F中的一种或多种；

所述样品为包含马来酸噻吗洛尔有关杂质、噻吗洛尔类化合物和马来酸噻吗洛尔类化合物中的任意两种或两种以上化合物的混合物；

所述马来酸噻吗洛尔类化合物包含任意比例的S-马来酸噻吗洛尔和/或R-马来酸噻吗洛尔；

所述的高效液相色谱法中的色谱柱为填料为表面共价键合有奎宁类衍生物的硅胶色谱柱，例如，填料为硅胶表面共价键合-奎宁(8S,9R)-(1S,2S)-环己基氨基磺酸衍生物的硅胶色谱柱，再例如

ZWIX(+)；

所述马来酸噻吗洛尔有关杂质中的所述杂质B为：

(R)-3-(叔丁氨基)-2-[(4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-基)氧代]-1-丙醇，和/或(S)-3-(叔丁氨基)-2-[(4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-基)氧代]-1-丙醇；

所述杂质C为(R)-N-(叔丁基)-2，3-二-[(4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-基)氧代]-1-丙胺，和/或，(2S)-N-(叔丁基)-2，3-二-[(4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-基)氧代]-1-丙胺；

所述杂质D为4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-醇；

所述杂质E为(R，2Z)-1-(叔丁氨基)-3-[(4-吗啉基-1，2，5-噻二唑-3-基)氧代]-顺丁烯二酸单异丙酯；

所述杂质G为：4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3(二氢)-酮-1-氧化物；

所述杂质I为：(2R)-1-(乙基氨基)-3-[(4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-基)氧代]-2-丙醇，和/或(2S)-1-(乙基氨基)-3-[(4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-基)氧代]-2-丙醇；

所述杂质F为：3-氯-4-***基-1,2,5-噻二唑。

本发明中，所述样品可为所述马来酸噻吗洛尔有关杂质、所述噻吗洛尔类化合物和所述马来酸噻吗洛类化合物中的任意两种或两种以上化合物组成的混合物。

本发明中，所述噻吗洛尔类化合物可为R-噻吗洛尔和/或S-噻吗洛尔。

本发明中，所述马来酸噻吗洛尔有关杂质可为马来酸、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质I、杂质G和杂质F中的一种或多种。

本发明中，当所述样品为R-噻吗洛尔和S-噻吗洛尔的混合物时，所述R-噻吗洛尔和S-噻吗洛尔的比例可为任意比例，例如1:9。

本发明中，当所述样品为R-马来酸噻吗洛尔和S-噻吗洛尔的混合物时，所述R-马来酸噻吗洛尔和S-噻吗洛尔的比例可为任意比例，例如0.01:0.99～0.99:0.01，再例如1:9。

本发明中，当所述样品为R-噻吗洛尔和S-马来酸噻吗洛尔的混合物时，所述R-噻吗洛尔和S-马来酸噻吗洛尔的比例可为任意比例，例如0.01:0.99～0.99:0.01，再例如1:9。

本发明中，当所述样品中含有马来酸时，所述马来酸在所述样品中的含量可为1％～10％，例如1.37％。

本发明中，所述高效液相色谱法中的流动相溶剂可采用醇类溶剂(例如选自甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或多种，和腈类溶剂(例如乙腈)；较佳地，所述流动相溶剂为甲醇和乙腈。

其中所述高效液相色谱法可采用梯度或等度洗脱的方式，例如采用等度洗脱时，所述醇类溶剂和所述腈类溶剂的体积比可为(15:85)～(5:95)，例如10:90。

其中，所述流动相溶剂中可含有添加剂，所述添加剂可为酸(例如选自甲酸、乙酸和三氟乙酸中的一种或多种，)和碱(例如三乙胺和/或二乙胺)。

其中，所述添加剂的添加量可为所述流动相溶剂体积的0.1％～0.5％，例如0.47％。

其中，所述添加剂中酸和碱的摩尔用量比可为1:2～6:1，例如1:1～4:1，再例如2:1～4:1。

本发明中，所述色谱柱的长度可为100mm～250mm，例如150mm。

本发明中，所述色谱柱的填料的粒径可为3～5μm，例如5μm。

本发明中，所述色谱中的内径可为4～6mm，例如4.0mm。

本发明中，所述高效液相色谱法中色谱柱的温度可为5～45℃，例如20～30℃，再例如20～25℃。

本发明中，所述高效液相色谱法中流速可为0.2～1mol/min，例如0.3～0.6ml/min。

本发明还提供了一种分析检测方法，其特征在于，包含以下步骤：

步骤(1)、分别配置一定浓度的对照品溶液和样品溶液；

步骤(2)、将如前任一项中所述的分离方法中的高效液相色谱法中的高效液相色谱仪配合紫外或二极管阵列检测器，测得所述对照品溶液和所述样品中各组分的峰面积；所述高效液相色谱仪包含色谱柱；

步骤(3)、根据不加校正因子的主成分自身对照法，由步骤(2)中所得的峰面积计算得出所述样品中各成分的含量；

所述样品为马来酸噻吗洛尔有关杂质、噻吗洛尔类化合物和马来酸噻吗洛尔中的任意一种或多种，所述马来酸噻吗洛尔有关杂质、所述噻吗洛尔类化合物和所述马来酸噻吗洛尔类化合物的定义定义如前所述。

所述分析检测方法中，所述二极管阵列检测器可为PAD或DAD检测器。

所述分析检测方法中，所述紫外或二极管阵列检测器的检测波长可为290～300nm，例如298nm。

所述分析检测方法中，所述步骤(1)中所述对照品和所述样品溶液的配置可选用醇类溶剂(例如甲醇)、腈类溶剂(例如乙腈)和水中的一种或多种作为溶剂。

在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳实例。

本发明所用试剂和原料均市售可得。

本发明的积极进步效果在于：

(1)本发明采用的色谱柱通过反相***实现了对所述马来酸噻吗洛尔有关物质和/或噻吗洛尔类化合物进行了分离。

(2)本发明采用等度洗脱的方式实现了噻吗洛尔及其对映异构体的有效分离，并准确测得其含量，解决了其合成加工过程中噻吗洛尔的对映异构体对产品纯度的干扰，能全面有效地控制S-噻吗洛尔的质量。

(3)该方法操作简单，专属性强、灵敏度高，能有效的对本发明中所述的噻吗洛尔类化合物进行质量控制。

具体实施方式

下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商品说明书选择。

实施例1：

1、仪器：岛津LC-20AT，检测器的型号是SPD-M20A赛多利斯科学仪器有限公司的电子分析天平，型号为SECURA125。

2、高效液相色谱条件：

流动相：甲醇：乙腈＝10:90(向混合液中加入50mmol甲酸和25mmol二乙胺，占流动相体积的0.45％)

色谱柱

ZWIX(+)150×4mm，4.0μm；

检测波长为298nm；

柱温为25℃；

流速0.5ml/min。

3、测定方法：

3.1精密称取S-噻吗洛尔(厂家：EP，批号：Batch3.0)和R-噻吗洛尔(厂家：EP，批号：Batch3.0)对照品适量，加甲醇溶解并稀释成每1ml中含有S-噻吗洛尔1mg和R-噻吗洛尔0.1mg的溶液作为***适应性溶液。

采用第2节所述的高效液相色谱条件进行实验，结果如下：

其中，峰号1为马来酸；峰号2为R-噻吗洛尔；峰号3为S-噻吗洛尔。

3.2

精密称取杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质I、杂质G和杂质F(杂质B厂家为TLC，批号为1638-094A5；杂质C厂家为USP，批号为F000S0；杂质D厂家为TLC，批号为1261-043A2；杂质E厂家为TLC，批号为1724-048A2；杂质I厂家为武汉科福新药，批号为TML-20170209-2；杂质G厂家为TLC，批号为1855-074A2和杂质F厂家TLC，批号为1250-053A1)，分别用甲醇溶解并稀释成每1ml中含有马来酸0.01mg、杂质B 0.01mg、杂质C 0.01mg、杂质D 0.01mg、杂质E0.1mg、杂质I 0.01mg、杂质G 0.01mg和杂质F 0.1mg的溶液。

采用第2节所述的高效液相色谱条件进行实验，得到色谱图，发现：

杂质B保留时间为8.789min和9.594min；杂质C保留时间为8.175min；杂质E保留时间为8.882min；杂质D保留时间为5.740min；杂质G保留时间为4.514min；杂质I保留时间为14.482min；杂质F保留时间为3.165min；

可见，该色谱条件不仅可将R-噻吗洛尔和S-噻吗洛尔分开，还可将R-噻吗洛尔、S-噻吗洛尔与马来酸噻吗洛尔中的众多有关杂质分离开，有利于S-马来酸噻吗洛尔品质的监控。

3.3供试品溶液的检测：

取S-马来酸噻吗洛尔(厂家EP，批号：Batch3.0)10mg和1mg R-噻吗洛尔置于10ml量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，5μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行检测，得到高效液相色谱图，结果如下：

在对马来酸噻吗洛尔进行分析检测时，发现在该方法中，两种异构体也可进行准确检测。

结果表明该色谱条件能够有效分离S-噻吗洛尔、R-噻吗洛尔和马来酸，并且峰型较好，基线较平稳，分离度大于1.5。

实施例2

参照照实施例1的3.1的样品及操作方法进行实验，不同之处在于流动相为甲醇：乙腈＝15:85(向混合液中加入50mmol甲酸和25mmol二乙胺，加入量的百分比0.45％)。得到高效色谱图，结果如下:

3.4加样回收实验

准确度是通过在供试品溶液中加入80％，100％和120％三个不同浓度R-噻吗洛尔储备液(2μg/ml)的回收率所得，加入已知量的R-噻吗洛尔，再测定加样样品中R-噻吗洛尔的测定结果和理论值之间的比值(回收率)，以百分率％表达，要求回收率在90.0～110.0％之间，回收率的RSD小于10.0％，以证实方法具有良好的准确度。

测定结果见下表：

在80％，100％和120％三个不同水平的浓度下，R-噻吗洛尔的回收率为90.07～102.99％，在(90.0～110.0％)之间，9个回收率的RSD为4.32％，小于10.0％，符合验证要求的规定。证实了该方法具有良好的准确度。

实施例3

参照照实施例1的3.1的样品及操作方法进行实验，不同之处在于流动相为甲醇：乙腈＝5:95(向混合液中加入50mmol甲酸和25mmol二乙胺，占流动相体积的0.45％)。得到高效色谱图，结果如下：

实施例4

参照照实施例1的3.1的样品及操作方法进行实验，不同之处在于柱温为20℃。得到高效色谱图，结果如下：

实施例5

参照照实施例1的3.1的样品及操作方法进行实验，不同之处在于柱温为30℃。得到高效色谱图，结果如下：

实施例6

参照照实施例1的3.1的样品及操作方法进行实验，不同之处在于流速为0.4ml/min。得到高效色谱图，结果如下：

实施例7

参照照实施例1的3.1的样品及操作方法进行实验，不同之处在于流速为0.3ml/min。得到高效色谱图，结果如下：

实施例8

参照照实施例1的3.1的样品及操作方法进行实验，不同之处在于流速为0.6ml/min。得到高效色谱图，结果如下：

实施例9

参照照实施例1的3.1的样品及操作方法进行实验，不同之处在于向甲醇：乙腈＝10:90混合液中加入50mmol甲酸和12.5mmol二乙胺，占流动相体积的0.32％。得到高效色谱图，结果如下：

实施例10

参照照实施例1的3.1的样品及操作方法进行实验，不同之处在于向甲醇：乙腈＝10:90混合液中加入25mmol甲酸和25mmol二乙胺，占流动相体积的0.36％。得到高效色谱图，结果如下：

对比实施例1

二乙胺：异丙醇：正己烷(2:40:960)为流动相检测***适应性溶液的试验

1、仪器同实施例1；

2、色谱条件：

流动相：二乙胺：异丙醇：正己烷(2:40:960)；

色谱柱

OD-H 250×4.6mm，5μm；

检测波长为297nm；

柱温为25℃；

流速1.0ml/min。

3、测定方法：取S-马来酸噻吗洛尔(厂家EP，批号：Batch3.0)10mg和1mg R-噻吗洛尔置于10ml量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，5μl注入液相色谱仪，按上述色谱条件进行检测，得到高效液相色谱图，结果如下：

其中，峰号3为R-噻吗洛尔；峰号4为S-噻吗洛尔。

马来酸噻吗洛尔：称取马来酸噻吗洛尔S-马来酸噻吗洛尔(厂家EP，批号：Batch3.0)3mg置于10ml量瓶中，加少量甲醇溶解，再用乙醇稀释至刻度。

其中，峰号3为R-噻吗洛尔；峰号4为S-噻吗洛尔。

结果表明该色谱***能够虽然能有效分离噻吗洛尔S型和R型，但是峰较宽，且灵敏度较低。

Claims

1.一种马来酸噻吗洛尔有关杂质和/或噻吗洛尔类化合物的分离方法，其特征在于，包含以下步骤：采用高效液相色谱法对样品进行分离，即可；

所述噻吗洛尔类化合物为包含任意比例的R-噻吗洛尔和S-噻吗洛尔；

所述杂质B为(R)-3-(叔丁氨基)-2-[(4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-基)氧代]-1-丙醇，和/或(S)-3-(叔丁氨基)-2-[(4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-基)氧代]-1-丙醇；

所述杂质D为4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-醇；

所述杂质G为4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3(二氢)-酮-1-氧化物；

所述杂质I为(2R)-1-(乙基氨基)-3-[(4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-基)氧代]-2-丙醇，和/或(2S)-1-(乙基氨基)-3-[(4-(吗啉基)-1，2，5-噻二唑-3-基)氧代]-2-丙醇；

所述杂质F为3-氯-4-***基-1,2,5-噻二唑；

所述的高效液相色谱法中的色谱柱为填料为硅胶表面共价键合-奎宁(8S,9R)-(1S,2S)-环己基氨基磺酸衍生物的硅胶色谱柱。

2.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述色谱柱为

ZWIX(+)。

3.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，

所述噻吗洛尔类化合物为R-噻吗洛尔和/或S-噻吗洛尔；

和/或，所述马来酸噻吗洛尔有关杂质为马来酸、杂质B、杂质C、杂质D、杂质E、杂质I、杂质G和杂质F中的一种或多种；

和/或，所述样品为所述马来酸噻吗洛尔有关杂质、所述马来酸噻吗洛尔类化合物和所述噻吗洛尔类化合物中的任意两种或两种以上化合物组成的混合物。

4.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述样品为R-噻吗洛尔和S-噻吗洛尔的混合物时，所述R-噻吗洛尔和S-噻吗洛尔的比例为0.01:0.99～0.99:0.01；

和/或，所述样品为R-噻吗洛尔和S-马来酸噻吗洛尔的混合物时，所述R-噻吗洛尔和S-马来酸噻吗洛尔的比例为0.01:0.99～0.99:0.01；

和/或，所述样品中含有马来酸时，所述马来酸在所述样品中的含量为1％～10％。

5.如权利要求4所述的分离方法，其特征在于，所述样品为R-噻吗洛尔和S-噻吗洛尔的混合物时，所述R-噻吗洛尔和S-噻吗洛尔的比例为1:9；

和/或，所述样品为R-噻吗洛尔和S-马来酸噻吗洛尔的混合物时，所述R-噻吗洛尔和S-马来酸噻吗洛尔的比例为1:9；

和/或，所述样品中含有马来酸时，所述马来酸在所述样品中的含量为1.37％。

6.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中的流动相溶剂采用醇类溶剂和/或腈类溶剂。

7.如权利要求6所述的分离方法，其特征在于，所述醇类溶剂选自甲醇、乙醇和异丙醇中的一种或多种；所述腈类溶剂为乙腈。

8.如权利要求6所述的分离方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中的流动相溶剂为甲醇和乙腈。

9.如权利要求6～8任一项所述分离方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用梯度或等度洗脱的方式；当采用等度洗脱时，所述醇类溶剂和所述腈类溶剂的体积比为(15:85)～(5:95)。

10.如权利要求9所述分离方法，其特征在于，所述高效液相色谱法采用等度洗脱时，所述醇类溶剂和所述腈类溶剂的体积比为10:90。

11.如权利要求6～8任一项所述分离方法，其特征在于，所述流动相溶剂中含有添加剂，所述添加剂为酸和/或碱。

12.如权利要求11所述分离方法，其特征在于，所述酸选自甲酸、乙酸和三氟乙酸中的一种或多种；或者，所述碱为三乙胺和/或二乙胺。

13.如权利要求11所述分离方法，其特征在于，所述添加剂的添加量为所述流动相溶剂体积的0.1％～0.5％；

和/或，所述添加剂为酸和碱，所述酸和碱的摩尔用量比为1:2～6:1。

14.如权利要求13所述分离方法，其特征在于，所述添加剂的添加量为所述流动相溶剂体积的0.32％～0.45％；

和/或，所述添加剂为酸和碱，所述酸和碱的摩尔用量比为1:1～4:1。

15.如权利要求13所述分离方法，其特征在于，所述添加剂的添加量为所述流动相溶剂体积的0.36％～0.37％；

和/或，所述添加剂为酸和碱，所述酸和碱的摩尔用量比为2:1～4:1。

16.如权利要求1所述的分离方法，其特征在于，所述色谱柱的长度为100mm～250mm；

和/或，所述色谱柱的填料的粒径为3～5μm；

和/或，所述色谱柱的内径为4～6mm；

和/或，所述高效液相色谱法中色谱柱的温度为5～45℃；

所述高效液相色谱法中流速为0.2～1ml/min。

17.如权利要求16所述的分离方法，其特征在于，所述色谱柱的长度为150mm；

和/或，所述色谱柱的填料的粒径为5μm；

和/或，所述色谱柱的内径为4.0mm；

和/或，所述高效液相色谱法中色谱柱的温度为20～30℃；

所述高效液相色谱法中流速为0.3～0.6ml/min。

18.如权利要求16所述的分离方法，其特征在于，所述高效液相色谱法中色谱柱的温度为20～25℃。

19.一种分析检测方法，其特征在于，包含以下步骤：

步骤(1)、分别配置一定浓度的对照品溶液和样品溶液；

步骤(2)、将如权利要求1～18任一项中所述的分离方法中的高效液相色谱法中的高效液相色谱仪配合紫外或二极管阵列检测器，测得所述对照品溶液和所述样品中各组分的峰面积；所述高效液相色谱仪包含色谱柱；

所述样品为马来酸噻吗洛尔有关杂质、噻吗洛尔类化合物和马来酸噻吗洛尔中的任意一种或多种，所述马来酸噻吗洛尔有关杂质、所述噻吗洛尔类化合物和所述马来酸噻吗洛尔类化合物如权利要求1～5任一项中所述。