CN109856287A

CN109856287A - 牙膏中生物碱含量的检测方法

Info

Publication number: CN109856287A
Application number: CN201910229317.5A
Authority: CN
Inventors: 缪剑华; 宋志军; 闫炳雄; 刘喜慧; 王硕; 姚彩云
Original assignee: Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Current assignee: Guangxi Botanical Garden of Medicinal Plants
Priority date: 2019-03-25
Filing date: 2019-03-25
Publication date: 2019-06-07

Abstract

本发明公开了一种牙膏中生物碱含量的检测方法，包括：对牙膏进行前处理，得牙膏样品溶液；用苦参碱标准品和无水乙醇配制苦参碱对照品溶液；将所述牙膏样品溶液和所述苦参碱对照品溶液按照相同条件进行液相色谱检测，计算牙膏中生物碱的含量；其中，所述液相色谱检测的条件为：色谱柱：以氨基键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：体积比为80‑85:6‑10:8‑12的乙腈‑无水乙醇‑3％磷酸溶液，等度洗脱；检测波长：210‑220nm；进样量：10‑15ul；流速：1.0‑1.5ml/min；柱温：32‑38℃。本发明具有操作简便、易行，成本低，检测结果准确，实用性强等优点。

Description

牙膏中生物碱含量的检测方法

技术领域

本发明涉及生物碱检测技术领域。更具体地说，本发明涉及一种牙膏中生物碱含量的检测方法。

背景技术

现有的检测药材原料或制剂中生物碱含量的方法有薄层扫描法、毛细管电泳法、高效液相色谱法等多种方法，其中以高效液相色谱法最为常用。但是，与药材原料或制剂不同，牙膏中的生物碱含量低且牙膏基体对生物碱检测的干扰大，且现有的有关生物碱含量测定方法的样品前处理手段过于简单，不能完全排除对测定结果的干扰，采用现有的液相色谱检测条件得到的色谱峰不明显或不出峰，不能获得准确的检测结果。

发明内容

本发明的一个目的是提供一种牙膏中生物碱含量的检测方法，其操作简便、易行，成本低，检测结果准确，实用性强。

为了实现根据本发明的目的和其它优点，提供了一种牙膏中生物碱含量的检测方法，包括：对牙膏进行前处理，得牙膏样品溶液；用苦参碱标准品和无水乙醇配制苦参碱对照品溶液；将所述牙膏样品溶液和所述苦参碱对照品溶液按照相同条件进行液相色谱检测，计算牙膏中生物碱的含量；其中，所述液相色谱检测的条件为：色谱柱：以氨基键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：体积比为80-85:6-10:8-12的乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液，等度洗脱；检测波长：210-220nm；进样量：10-15ul；流速：1.0-1.5ml/min；柱温：32-38℃。

优选的是，所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，所述液相色谱检测的条件为：色谱柱：以氨基键合硅胶为填充剂的色谱柱，所述氨基键合硅胶的直径为4.6μm，所述色谱柱的尺寸为250×4.6mm；流动相：体积比为82:8:10的乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液，等度洗脱；检测波长：210nm；进样量：10ul；流速：1.0ml/min；柱温：35℃。

优选的是，所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，所述前处理具体为：精密称取牙膏和占所述牙膏的0.5重量倍量的硅胶，研磨均匀后，烘干，得粗样；将所述粗样加入硅胶柱中，用三氯甲烷-甲醇-氨水溶液洗脱，收集洗脱液，减压旋蒸至蒸干后，加无水乙醇超声溶解，定容，摇匀，过微孔滤膜，取滤液。

优选的是，所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，所述硅胶的粒度为200-300目。

优选的是，所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，所述烘干为40-60℃水浴烘干。

优选的是，所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，其特征在于，所述硅胶柱的制备方法为：称取10g粒度为200-300目的硅胶，加入三氯甲烷-甲醇-氨水溶液，搅拌均匀后，倒入柱子中，所述柱子的内径为1.8-2.5cm，静置15-30min，即得。

优选的是，所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，所述三氯甲烷-甲醇-氨水溶液中三氯甲烷、甲醇和氨水的体积比为40:10:1。

优选的是，所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，所述微孔滤膜的孔径为0.22μm。

优选的是，所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，所述苦参碱对照品溶液的浓度为0.05mg/ml。

本发明至少包括以下有益效果：

第一、本发明提供的检测方法经过专属性试验、线性关系试验、精密度试验、稳定性试验、重复性试验和加样回收率试验的验证，检测准确可靠，能够有效消除牙膏中其他杂质的干扰，获得满意的检测效果；

第二、本发明提供的检测方法操作简便，易行，成本低，实用性强，非常适合产品质量的检测。

本发明的其它优点、目标和特征将部分通过下面的说明体现，部分还将通过对本发明的研究和实践而为本领域的技术人员所理解。

附图说明

图1是根据本发明一个实施例中所述苦参碱对照品溶液的高效液相色谱图；

图2是根据本发明一个实施例中所述牙膏样品溶液的高效液相色谱图；

图3是根据本发明一个实施例中所述阴性对照溶液的高效液相色谱图；

图4是根据本发明一个实施例中苦参碱标准品的标准曲线图。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。

需要说明的是，下述实施方案中所述实验方法，如无特殊说明，均为常规方法，所述试剂和材料，如无特殊说明，均可从商业途径获得。

以下实施例中所用牙膏由广西田七日化有限公司和广西药用植物园联合研制，其具体的制备方法为：(1)制备山豆根生物碱提取物：向200kg的山豆根干药材中加入1700kg的水，于98±2℃(沸腾)下回流提取两次，每次2h，过滤，合并两次滤液，并将滤液于60℃下浓缩至呈浸膏；将所得浸膏用2.5重量倍量的体积浓度为20-30％的乙醇溶解，过滤，将所得滤液加入大孔树脂(型号：D101)中，用水洗脱3个柱体积，收集第2个和第3个柱体积水，合并后将其于60℃下浓缩至呈浸膏，即得。(2)制备田七总皂苷：向100kg的田七粗粉中加入700L的体积浓度为80％的乙醇，于80℃下回流提取两次，每次2h，过滤，合并两次滤液，并将滤液用膜分离***精滤后，取滤下物，于60℃下浓缩至呈浸膏，即得。(3)取田七总皂苷0.1g、山豆根生物碱提取物0.5g，碳酸钙40g、山梨糖醇15g、水合硅石10g、甘油8g、聚乙二醇-80.3g、月桂醇硫酸酯钠1g、香精3g、纤维素胶2g、氨甲环酸0.1g、皱波角叉菜0.5g、糖精钠0.5g、羟苯甲酯0.5g、羟苯丙酯0.5g、双(羟甲基)咪唑烷基脲0.04g，牙膏按100g重量计，剩余加去离子水至100g，进行搅拌与研磨60min，在搅拌过程中抽真空(压力为-0.096Mpa)，最后进行陈化150min，使物料自然冷却至常温，进行分装，即得。

实施例1：

牙膏中生物碱含量检测及专属性试验

(1)制备牙膏样品溶液：精密称取5g牙膏和占2.5g硅胶(200-300目)，置蒸发皿中，研磨均匀后，40-60℃水浴烘干，得粗样；称取10g硅胶(200-300目)，加入三氯甲烷-甲醇-氨水(40:10:1)溶液，搅拌均匀后，倒入柱子中，所述柱子的内径为1.8-2.5cm，静置15-30min，得硅胶柱；将所述粗样加入所述硅胶柱中，用三氯甲烷-甲醇-氨水(40:10:1)溶液洗脱，收集洗脱液，减压旋蒸至蒸干后，加无水乙醇超声溶解，然后转移至5mL容量瓶中，加无水乙醇至刻度，摇匀，过微孔滤膜(0.22μm)，取滤液，即得。

(2)制备苦参碱对照品溶液：称取苦参碱对照品适量，精密称定，加无水乙醇制成浓度为0.05mg/ml的溶液，即得。

(3)分别吸取上述牙膏样品溶液、苦参碱对照品溶液和阴性对照溶液(无水乙醇)10μL注入液相色谱仪进行检测，液相色谱检测条件为：色谱柱：以氨基键合硅胶为填充剂的色谱柱，如Agilent ZORBAX Polaris 5NH2(4.6mm×250mm，4.6μm)色谱柱；流动相：体积比为82:8:10的乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液，等度洗脱；检测波长：210nm；流速：1.0ml/min；柱温：35℃，结果见表1，高效液相色谱图见图1-3。

表1牙膏样品溶液、苦参碱对照品溶液和无水乙醇检测结果

色谱仪	苦参碱对照品溶液	牙膏样品溶液	阴性对照溶液
				峰面积	808224	1112281	0
理论板数	10665	33939	0
				分离度	0.0	6.9	0.0
保留时间	7.509	7.415	0.00
				拖尾因子	0.84	0.99	0.00

根据下述公式计算牙膏中生物碱的含量；

式中，X为所述牙膏中生物碱的质量百分含量；V为所述牙膏样品溶液的体积，单位为ml；A_s为所述牙膏样品溶液中苦参碱的峰面积；A_sd为所述苦参碱对照品溶液中苦参碱的峰面积；c为所述苦参碱对照品溶液的浓度，单位为mg/ml；m为所述牙膏的质量，单位为g，得到牙膏中生物碱的含量为0.0069％，同时，由表1可知，本发明的检测方法的专属性强。

实施例2

线性关系试验

称取苦参碱标准品适量，加无水乙醇配制成溶度分别为0.005mg/ml、0.01mg/ml、0.025mg/ml、0.05mg/ml、0.1mg/ml、0.25mg/ml的标准品溶液，并按照实施例1的液相色谱检测条件对这些不同浓度的标准品溶液进行液相色谱检测，检测结果见表2，标准曲线图如图4所示，标准曲线图中的纵坐标为色谱峰面积，横坐标为浓度，单位为mg/ml，标准曲线线性方程为y＝13692699X+15770，R²＝1。结果表明(见表2、图4)，苦参碱标准品溶液的质量在5～250μg之间时，质量与峰面积之间有良好线性关系。

表2苦参碱标准品溶液检测结果

实施例3

精密度试验

分别吸取0.05mg/ml的苦参碱标准品溶液及所述牙膏样品溶液，采用与实施例1相同的液相色谱检测条件分别重复进样6次，记录每次获得的苦参碱标准品溶液及牙膏样品溶液的液相色谱图，分析比较各个液相色谱图的峰面积，算得苦参碱标准品溶液及牙膏样品溶液的液相色谱图的峰面积的相对标准偏差分别为0.37％、1.61％，表明本发明提供的方法精密度良好。

实施例4

稳定性试验

分别吸取6份0.05mg/ml的苦参碱标准品溶液及牙膏样品溶液，每份2ml，6份苦参碱标准品溶液分别放置0、1、2、4、8、12h，同理，6份牙膏样品溶液分别放置0、1、2、4、8、12h，采用与实施例1相同的液相色谱检测条件测定，分别记录6份苦参碱标准品溶液和6份中药牙膏样品溶液的液相色谱图，分析比较各个色谱图的峰面积，分别得到相对标准偏差为0.52％、1.60％，表明苦参碱标准品溶液及牙膏样品溶液在12h内稳定。

实施例5

重复性试验

称取同一批牙膏样品6份，每份5g，采用与实施例1相同的方法检测每份样品中生物碱的含量，并进行分析比较，得到相对偏差值为1.62％，表明本发明提供的方法重复性良好。

实施例6

加样回收试验

称取6份牙膏样品，每份5g，分别加入浓度为0.05mg/ml的苦参碱标准品溶液1.14ml，采用与实施例1相同的方法检测每份样品中生物碱的含量，计算回收率，得到平均回收率为101.7％，相对标准偏差为1.84％，表明本发明提供的方法加样回收率较好。

尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节和这里示出与描述的图例。

Claims

1.牙膏中生物碱含量的检测方法，其特征在于，包括：

对牙膏进行前处理，得牙膏样品溶液；

用苦参碱标准品和无水乙醇配制苦参碱对照品溶液；

将所述牙膏样品溶液和所述苦参碱对照品溶液按照相同条件进行液相色谱检测，其中，

所述液相色谱检测的条件为：色谱柱：以氨基键合硅胶为填充剂的色谱柱；流动相：体积比为80-85:6-10:8-12的乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液，等度洗脱；检测波长：210-220nm；进样量：10-15ul；流速：1.0-1.5ml/min；柱温：32-38℃。

2.如权利要求1所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，其特征在于，所述液相色谱检测的条件为：色谱柱：以氨基键合硅胶为填充剂的色谱柱，所述氨基键合硅胶的直径为4.6μm，所述色谱柱的尺寸为250×4.6mm；流动相：体积比为82:8:10的乙腈-无水乙醇-3％磷酸溶液，等度洗脱；检测波长：210nm；进样量：10ul；流速：1.0ml/min；柱温：35℃。

3.如权利要求1所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，其特征在于，所述前处理具体为：精密称取牙膏和占所述牙膏的0.5重量倍量的硅胶，研磨均匀后，烘干，得粗样；将所述粗样加入硅胶柱中，用三氯甲烷-甲醇-氨水溶液洗脱，收集洗脱液，减压旋蒸至蒸干后，加无水乙醇超声溶解，定容，摇匀，过微孔滤膜，取滤液。

4.如权利要求3所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，其特征在于，所述硅胶的粒度为200-300目。

5.如权利要求3所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，其特征在于，所述烘干为40-60℃水浴烘干。

6.如权利要求3所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，其特征在于，所述硅胶柱的制备方法为：称取10g粒度为200-300目的硅胶，加入三氯甲烷-甲醇-氨水溶液，搅拌均匀后，倒入柱子中，所述柱子的内径为1.8-2.5cm，静置15-30min，即得。

7.如权利要求3或6所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，其特征在于，所述三氯甲烷-甲醇-氨水溶液中三氯甲烷、甲醇和氨水的体积比为40:10:1。

8.如权利要求3所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，其特征在于，所述微孔滤膜的孔径为0.22μm。

9.如权利要求1所述的牙膏中生物碱含量的检测方法，其特征在于，所述苦参碱对照品溶液的浓度为0.05mg/ml。