CN109568430B - 一种免疫增强剂的制备方法和应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种免疫增强剂的制备方法和应用,包括以下步骤:(1)按处方将黄柏、大黄、黄芩、板蓝根和黄连加水煎煮,得到煎液,过滤得到滤液,滤液浓缩得到浸膏;(2)加入95%乙醇使含醇量为30~60%,搅拌,静置,滤过,并回收乙醇,浓缩得到稠膏;(3)在稠膏中加入辅料,混匀,干燥得到所述免疫增强制剂。本发明基于现有炎可宁片的制备工艺,将现有工艺中水煎煮后的浓缩液,进行二次工艺创新和提升,保留的有效成分重量变小,提高了提取成分的转移率,减少了药品每日服用量,更有利于各种制剂的制备,可以整体提升该品种的质量。另外,本发明的免疫增强剂可作为一种新的免疫增强剂,可开发应用。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域,具体涉及一种免疫增强剂的制备方法和应用。
背景技术
炎可宁片拼音名:YanKeNingPian,出自中华人民共和国***药品标准中药成方制剂第七册(书页号:Z7-104,标准编号:WS3-B-1368-93)。炎可宁片由五味中药黄柏、黄芩、黄连、板蓝根、大黄组成,具有清热泻火,消炎止痢的作用。现代用于治疗急性扁桃体炎,细菌性肺炎,急性结膜炎,中耳炎,疖痈瘰疬,急性乳腺炎,肠炎,细菌性痢疾及急性尿道感染。
免疫是人体的一种生理功能,人体依靠这种功能识别“自己”和“非己”成分,从而破坏和排斥进入人体的抗原物质(如病菌等),或人体本身所产生的损伤细胞和肿瘤细胞等,以维持人体的健康。
免疫增强剂是通过不同方式,达到增强机体免疫力的一类免疫治疗药物。免疫增强剂主要用于增强机体的抗肿瘤作用、抗感染能力,纠正免疫缺陷,此类药物能激活一种或多种免疫活性细胞,增强机体特异性和非特异性免疫功能,使低下的免疫功能恢复正常。对于免疫力低下的人群或畜禽,服用免疫增强剂可以提高其免疫力,从而预防疾病的发生。因此,寻求一种能增强机体抵抗病原体感染能力的免疫增强剂,显得尤为重要。
发明内容
为了解决上述问题,本发明提供了一种免疫增强剂的制备方法。
本发明的技术方案为:一种免疫增强剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将黄柏、大黄、黄芩、板蓝根和黄连加水煎煮,煎液过滤得到滤液,滤液浓缩得到浸膏;
(2)加入95%医用乙醇使含醇量为30~60%,搅拌,静置,滤过,并回收乙醇,浓缩得到稠膏;
(3)在稠膏中加入辅料,混匀,干燥得到所述免疫增强制剂。
配方中:黄柏清热燥湿、泻火解毒;黄芩有清热燥湿、泻火、解毒、凉血止血的功效;黄连具有清热燥湿,泻火解毒的功效;板蓝根具有清热解毒,凉血利咽的功效;大黄具有泻下攻积,清热泻火,凉血解毒,逐瘀通经,利湿退黄的功效。
本发明基于现有炎可宁片的制备工艺,将现有工艺中水煎煮后的浓缩液,再进行二次工艺提升,本发明中采用95%医用乙醇处理浓缩液,使含醇量达到30~60%,回收乙醇,得到醇浓缩液稠膏,该稠膏的重量可为原来水煎煮后稠膏的15%,因弃掉了大量的醇沉淀,保留的有效成分重量变小,提高了提取成分的转移率,减少了药品每日服用量,更有利于各种制剂的制备,可以整体提升免疫增强剂的质量。
作为优选,所述步骤(1)中将黄柏、大黄、黄芩、板蓝根和黄连加水煎煮三次,每次2小时,合并每次的煎液。
作为优选,所述浸膏的密度为1~1.3g/cm-3(温度为60℃)。
作为优选,所述浸膏的密度为1.2g/cm-3(温度为60℃)。
作为优选,所述免疫增强制剂为咀嚼片、胶囊剂、颗粒剂或片剂。
本发明还提供了一种由上述的制备方法制备得到的免疫增强剂。
胸腺和脾脏是机体重要的中枢和外周免疫器官,胸腺是T淋巴细胞发育成熟的主要场所,而脾脏是B淋巴细胞发育成熟的主要场所。胸腺指数和脾指数可直接反映免疫器官的发育状态和机体的免疫水平。通过动物分组及其免疫方法,以胸腺指数和脾指数为指标,证实了本发明的免疫增强制剂具有免疫增强作用,能恢复经盐酸***致免疫缺陷小鼠的胸腺和脾脏,显著提高小鼠脾指数和胸腺指数。
巨噬细胞能够吞没、破坏受损伤组织,有助于人体的康复过程。虽然它们在损伤位点发挥关键作用,但一旦任务完成,就需要尽快撤离,结束炎症反应,为再生过程开路。继续存在的巨噬细胞不利于组织恢复。本发明通过酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测巨噬细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌表达,其体外巨噬细胞(RAW264.7)活化抑制实验结果表明,这种免疫增强制剂对巨噬细胞活化有较好的抑制作用,可以抑制小鼠巨噬细胞过度释放肿瘤坏死因子(TNF-α),为慢性气道炎症等病症的治疗带来了新的希望。因此本发明的免疫增强剂可作为一种新的免疫增强剂,应用于增强人体免疫力。
与现有技术相比,本发明的有益效果体现在:
本发明基于现有炎可宁片的制备工艺,再进行二次工艺创新和提升,保留的有效成分重量变小,提高了提取成分的转移率,减少了药品每日服用量,更有利于各种制剂的制备,可以整体提升该品种的质量。另外,本发明中的免疫增强剂可作为一种新的免疫增强剂,可开发应用。
具体实施方式
下面通过实验例和实施例进一步说明本发明的有益效果。
实验例1
将免疫增强剂制剂进行小鼠免疫增强作用,具体实验如下:
选用小鼠实验为药理基础,免疫器官重量试验法:临床上用盐酸***致小鼠免疫缺陷,摘取脾脏及胸腺,称重,计算脾指数及胸腺指数;采用Microsoft Office Excel2003统计软件,SPSS for windows 12.0统计***,实验数据以均数+标准差表示,采用成组t检验进行数理学统计。
小鼠免疫实验:
给药剂量:
正常对照组(生理盐水):浓度为9mg/mL;
模型组(***磷酸钠注射液):4支溶于20mL水中(每支含5mg***),浓度为1mg/mL,每只注射0.3mL;
阳性对照组(左旋咪唑):68mg溶于20ml水中,浓度为3.4mg/mL;
免疫增强剂高剂量组:3.2g溶于20ml水中,浓度为0.16g/mL;
免疫增强剂低剂量组:1.6g溶于20ml水中,浓度为0.08g/mL。
动物分组,造模及给药:
将50只6~8周龄清洁级昆明小鼠随机分成5组,每组10只(雌雄各半),每只均重30g,分为5组:正常对照组(生理盐水9mg/mL),模型组(***1mg/mL),阳性对照组(左旋咪唑3.4mg/mL),免疫制剂样品高剂量组(160mg/mL),免疫制剂样品低剂量组(80mg/mL)。
灌胃给药:连续给药8天,对照组和模型组均给生理盐水,其余给药相应试剂。第1天开始,每天下午灌胃给药0.2mL。到第3天,除正常对照组以外,其余组早上采用腹腔注射***(10mg/Kg·d-1)0.3mL,下午灌胃给药0.2mL。第8天,在末次灌胃给药24h后,先称取小鼠重量,然后颈椎脱臼处死小鼠,摘取脾脏及胸腺,吸干表面血迹,用电子天平称取湿重量。计算脾指数和胸腺指数。
胸腺指数和脾指数K值:K(mg/g)=器官重量/小鼠体重。
表1小鼠胸腺指数和脾指数
与正常组比较:△△P<0.01,△P<0.05;与模型组比较:**P<0.01,*P<0.05。
试验结果显示:免疫增强剂对盐酸***致免疫缺陷小鼠胸腺有增殖作用,与模型组比较:高低剂量组均有极显著差异(P<0.01);免疫增强剂对盐酸***致免疫缺陷小鼠脾脏有增殖作用,与模型组比较:高低剂量组均有极显著差异(P<0.01)。
通过以上实验证明,免疫增强剂具有增强小鼠免疫功能的作用。造模后小鼠胸腺严重萎缩,而阳性药及免疫制剂样品均能使小鼠胸腺恢复正常;造模后小鼠脾脏严重萎缩,而阳性药及免疫制剂样品均能使小鼠脾脏恢复正常,有很好的应用前景。
实验例2
酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测巨噬细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌表达。TNF-α是一种能够直接杀伤肿瘤细胞而对正常细胞无明显毒性的细胞因子,是迄今为止所发现的直接杀伤肿瘤作用最强的生物活性因子之一,但过度分泌TNF-α会引起慢性气道炎症等病症。具体实验如下:
筛选模型:巨噬细胞(RAW264.7)活化抑制模型。
筛选方法:酶联免疫吸附测定法(ELISA法)检测巨噬细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)的分泌表达。
筛选样品:免疫增强剂。
模型原理:巨噬细胞在相关因素刺激下会活化,并分泌表达TNF-α。将脂多糖(LPS)加入巨噬细胞中培养一定时间后,再加入待测样品,孵育培养一定时间后,取细胞上清液测定TNF-α的含量,判断样品对细胞的活化抑制作用。(注:TNF-α在体内、外均可对一些肿瘤细胞或细胞系起杀伤作用,而体外培养的多种正常细胞则无细胞毒效应。根据这一特点,可利用TNF-α敏感靶细胞测定TNF-α活性)
计算公式:活化指数=样品组TNF-α的含量/正常组TNF-α的含量
活化抑制率(%)=[(LPS活化指数-样品活化指数)/LPS活化指数]*100
筛选结果:见表2。
表2巨噬细胞(RAW264.7)活化抑制结果
实验结果表明:样品在低浓度0.2μg/mL的活化抑制率也有28.82±2.17,说明免疫增强剂对巨噬细胞活化有较好的抑制作用,可有效抑制巨噬细胞肿瘤坏死因子(TNF-α)的过度分泌表达。
计量取决于所要达到的效果,治疗时间及给药方式;以人用原制剂炎可宁片的计量及有效剂量为参考,这些剂量相当于成人每天口服量中含免疫制剂样品活性成分65mg。
实施例3
一种免疫增强剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将部颁标准中炎可宁片处方中黄柏413.8g、大黄82.8g、黄芩310.3g、板蓝根310.3g和黄连20.7g加水煎煮三次,每次2小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成浸膏,浸膏密度为1.2g/cm-3(温度为60℃),冷却,收率为53%;
(2)加入95%医用乙醇使含醇量为50%,搅拌,静置,滤过,回收乙醇,醇液浓缩成稠膏,收率为7.6%;
(3)以含活性化合物65mg的颗粒剂计,取步骤(2)中的稠膏65mg,分别加入糊精1835mg、蔗糖8100mg,按常规技术制成颗粒剂。
实施例4
一种免疫增强剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将部颁标准中炎可宁片处方中黄柏413.8g、大黄82.8g、黄芩310.3g、板蓝根310.3g和黄连20.7g加水煎煮三次,每次2小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成浸膏,浸膏密度为1.2g/cm-3(温度为60℃),冷却,收率为47%;
(2)加入95%医用乙醇使含醇量为60%,搅拌,静置,滤过,回收乙醇,醇液浓缩成稠膏,收率为8.1%;
(3)以含活性化合物65mg的胶囊剂计,取步骤(2)中的稠膏65mg分别加入玉米淀粉230mg、滑石粉3mg和磷酸氢钙2mg,按常规技术制成胶囊剂。
实施例5
一种免疫增强剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将部颁标准中炎可宁片处方中黄柏413.8g、大黄82.8g、黄芩310.3g、板蓝根310.3g和黄连20.7g加水煎煮三次,每次2小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成浸膏,浸膏密度为1.2g/cm-3(温度为60℃),冷却,收率为49%;
(2)加入95%医用乙醇使含醇量为55%,搅拌,静置,滤过,回收乙醇,醇液浓缩成稠膏,收率为7.3%;
(3)以含活性化合物65mg的片剂计,取步骤(2)中的稠膏65mg分别加入淀粉213mg、硬脂酸镁2mg和羧甲基淀粉钠20mg,按常规技术制成片剂。
实施例6
一种免疫增强剂的制备方法,包括以下步骤:
(1)将部颁标准中炎可宁片处方中黄柏413.8g、大黄82.8g、黄芩310.3g、板蓝根310.3g和黄连20.7g加水煎煮三次,每次2小时,合并煎液,滤过,滤液浓缩成浸膏,浸膏密度为1.2g/cm-3(温度为60℃),冷却,收率为46%;
(2)加入95%医用乙醇使含醇量为45%,搅拌,静置,滤过,回收乙醇,醇液浓缩成稠膏,收率为6.9%;
(3)以含活性化合物65mg的咀嚼片计,取步骤(2)中的稠膏65mg分别加入糊精100mg、淀粉200mg、甘露醇65mg、山梨醇65mg、硬脂酸镁5mg,按常规技术制成咀嚼片。
以上所述,仅是本发明的较佳实施例而已,并非对本发明作任何形式上的限制,任何未脱离本发明技术方案内容,依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与修饰,均仍属于本发明技术方案的范围内。
Claims (5)
1.一种免疫增强剂在制备免疫增强药物中的应用,其特征在于,免疫增强剂的制备方法包括以下步骤:
(1)将黄柏413.8g、大黄82.8g、黄芩310.3g、板蓝根310.3g和黄连20.7g加水适量煎煮,得到煎液,过滤得到滤液,滤液浓缩得到浸膏;
(2)加入95%医用乙醇使含醇量为30~60%,搅拌,静置,滤过,并回收乙醇,将醇液浓缩得到稠膏;
(3)在稠膏中加入辅料,混匀,干燥得到所述免疫增强剂。
2.如权利要求1所述一种免疫增强剂在制备免疫增强药物中的应用,其特征在于,所述步骤(1)中将黄柏、大黄、黄芩、板蓝根和黄连加水煎煮三次,每次2小时,合并每次的煎液。
3.如权利要求1所述一种免疫增强剂在制备免疫增强药物中的应用,其特征在于,在温度为60℃下,所述浸膏的密度为1~1.3g/cm-3。
4.如权利要求3所述一种免疫增强剂在制备免疫增强药物中的应用,其特征在于,在温度为60℃下,所述浸膏的密度为1.2g/cm-3。
5.如权利要求1所述一种免疫增强剂在制备免疫增强药物中的应用,其特征在于,所述免疫增强剂为胶囊剂、颗粒剂或片剂。
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