CN109480067A - 一种含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料，包括以下重量份数的组分：次粉20～30份、麦麸20～30份、豆粕20～30份、棉仔粕8～15份、鱼粉10～20份、Ca(H2PO4)21～5份、氯化胆碱0.2～1份、食盐0.2～1份、大豆油1～5份、预混料0.5～2份、果寡糖0.3～1份、枯草芽孢杆菌0.2～1份、胆木叶粉0.2～1份、椰肉渣粉5～10份、鸡屎藤叶粉0.5～5份；本发明罗非鱼饲料添加使用果寡糖、益生素(枯草芽孢杆菌)的复合物对罗非鱼生长性能、某些生理生化和免疫指标、肠道菌群等方面具有较大的影响，增强罗非鱼机体免疫力，提高罗非鱼健康水平和罗非鱼产品品质，降低环境污染，其经济效益、社会效益和环境生态效益明显。对促进罗非鱼等水产健康养殖和动物性食品安全生产和水产养殖科技进步等具有重大意义。

Description

一种含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料
技术领域
本发明属于水产养殖领域，涉及一种罗非鱼养殖领域，具体涉及一种含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料。
背景技术
我国大力发展畜牧水产养殖业以满足国民对动物性食品量的需求，多年来广泛采用了集约化饲养、使用各种饲料添加剂等措施，以促进动物生长，提高产量。但这样使动物本身的免疫力、抗病力降低，正常的生理机能和代谢过程受到影响而产生了严重问题，动物产品安全受到质疑。违规使用激素、滥用抗生素和药物等饲料添加剂的问题屡屡发生，造成动物产品中药物、抗生素和金属元素残留严重超标，不仅严重威胁消费者的身体健康和生命安全，而且严重危害我们赖以生存的生态环境；动物产品品质和风味下降；动物健康状况不佳，疾病多发常发；规模化、集约化养殖使动物在生产过程中处于严重的应激状态，动物福利恶化，直接影响动物产品的品质。同时规模化、集约化生产还造成病菌滋生、用药量加大，耐药性病严重，养殖业环境恶化。
畜牧水产健康养殖是以安全、优质、高产、高效、生态为主要内涵的可持续发展的养殖业，是在以主要追求数量增长为主的传统养殖业基础上，通过健康高效养殖技术、卫生防控技术、养殖场污染防控技术、无抗(生素)安全动物饲养与营养调控关键技术等先进技术体系的应用，实现数量、质量和生态效益并重的现代养殖业。因此，我国作为畜牧水产养殖大国，健康养殖势在必行。
饲料的营养与安全贯穿在整个动物养殖过程中，是健康养殖各环节的重中之重，在限制和禁止抗生素饲用已是大势所趋的背景下，实行健康养殖，防止“用药-耐药-大剂量-多残留”的恶性循环。
动物的消化道内存在数目庞大、种类繁多的微生物，这些微生物与其宿主在长期的进化过程中保持着正常生理范围内的良好平衡，构成一个统一的整体。肠道微生态平衡的打破往往导致肠道病原菌大量增殖，造成肠壁损伤，引起腹泻甚至诱发全身败血症，严重危及动物的健康。消化道有益微生物群落具有营养作用、抗病作用、抗肠毒素作用、免疫作用、屏障作用和抗肿瘤作用等多方面功效。动物肠道内微生物稳定存在是协助动物免受感染，保持动物健康生长所必需。
近年来，国内外高度重视研究开发新型的安全、绿色饲料添加剂方面的工作，相继研究开发了一些新型的安全环保的绿色饲料添加剂产品。如酶制剂、益生素(微生态制剂)、功能性寡糖、有机酸、中草药提取物等等，用以调控动物消化道菌群，改善动物生产性能和健康状况。然而这些产品的应用也还存在一些问题，如酶制剂和益生素在加工和应用过程中的稳定性、针对性等问题；寡糖和酸化剂的应用条件及剂量问题，中草药提取物的成本、工艺和效价问题等。
我国罗非鱼在养殖主要集中在广东、广西和海南等地区、其中海南地区约占全国总产量的20％。海南省年平均气温22-25.5℃，雨量充沛，光照充足，罗非鱼全年都可以生长，并可自然越冬。水质条件和养殖环境相对良好。2003年以来，海南罗非鱼产业发展迅猛，全省拥有几十家罗非鱼优质苗种场，近年，罗非鱼养殖面积达50万多亩，产量30多万吨。罗非鱼已成为海南第一大出口农产品。海南省罗非鱼养殖模式主要有池塘养殖、网箱养殖、水库网箱养殖和水库放养等。随着养殖量增加，罗非鱼养殖病害也越来越多，养殖水质环境也在恶化。饲料是养殖业的物质基础，占养殖成本的50-70％，使用优质、安全无公害的罗非鱼饲料，不仅可以降低病害发生率和死亡率，增加鱼体生长速度，还可以降低养殖成本，且能够减少水体污染，符合生态高效养殖理念。
为确保动物源性食品的安全优质，寻找提高动物本身特异性和非特异性抗病能力、促进饲料营养物质消化吸收、保证动物饲料营养与安全、提高动物的饲料效率和养殖效益的抗生素类替代物已刻不容缓。
发明内容
本发明的目的是提供了一种安全、可靠、替代大部分饲用抗生素，促进罗非鱼健康、生态养殖的含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料。
为了实现上述目的，本发明的技术方案为：提供一种含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料，包括以下重量份数的组分：次粉20～30份、麦麸20～30份、豆粕20～30份、棉仔粕8～15份、鱼粉10～20份、Ca(H2PO4)2 1～5份、氯化胆碱0.2～1份、食盐0.2～1份、大豆油1～5份、预混料0.5～2份、果寡糖0.3～1份、枯草芽孢杆菌0.2～1份、胆木叶粉0.2～1份、椰肉渣粉5～10份、鸡屎藤叶粉0.5～5份；
所述预混料为每千克饲料提供：VA 9000IU、VD 3000IU、VK 6mg、VE 80mg、VB135mg、VB2 35mg、VB6 36mg、VB12 0.05mg、烟酸300mg、叶酸14mg、泛酸130mg、生物素0.6mg、VC600mg、肌醇300mg、Mg 300mg、Cu 1.5、Fe 60mg、Zn 70mg、Mn 28mg、I 0.2mg、Co 0.25mg、Se0.25mg、丙酸钙1200mg、抗氧化剂400mg；
所述果寡糖为浆状液体，浓度为35～40％；
所述枯草芽孢杆菌为粉剂，有效菌数3.0×1010～5.0×1010cfu/g；
本发明含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料的制备方法，包括以下步骤：
(1)将固体状态的原料经过粉碎机粉碎，获得粉末状组分；
(2)胆木叶粉的制备：
a、将采摘新鲜的胆木叶清洗后，加入其重量1～3倍、水温70～80℃浸泡4～7分钟后，去除滤液，重复浸泡2～3次；
b、将浸泡后的胆木叶于40～60℃低温烘干至含水率为5～8％，干燥后进行粉碎，过100～200目筛，得到胆木叶粉；
(3)椰肉渣粉的制备：
a、取老椰子的椰肉清洗干净；
b、将清洗干净的椰肉进行刨蓉压榨，加入其重量1～3倍的冷水压榨，重复压榨2～4次，获得椰肉渣；
(c)将椰肉渣于40～60℃真空低温干燥至含水率为5～8％，干燥后进行粉碎，过100～200目筛，得到椰肉渣粉；
(4)鸡屎藤叶粉的制备：
a、将采摘新鲜的鸡屎藤叶清洗后，于蒸锅内隔水蒸煮5～15分钟；
b、将蒸煮后的鸡屎藤叶于40～60℃低温烘干至含水率为5～8％，干燥后进行粉碎，过100～200目筛，得到鸡屎藤粉；
(5)按上述配比，将次粉、麦麸、豆粕、棉仔粕、鱼粉、Ca(H2PO4)2、氯化胆碱、食盐、大豆油、预混料、果寡糖、枯草芽孢杆菌、胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉均匀混合后获得混合料，将混合料采用常规造粒工艺制成颗粒状的罗非鱼饲料。
该罗非鱼饲料用于奥尼罗非鱼养殖过程。
功能性寡糖之一，果寡糖(FOS，推广又称低聚果糖)是近年研究开发的最具替代抗生素潜力的新产品之一，因此，充分研究开发及其在畜牧水产养殖业推广应用，具有重理论意义和应用价值。我国在功能性寡糖的研究应用方面起步较晚，近10多年来，在畜禽水产养殖上，FOS作为饲料添加剂用以替代饲用抗生素受到极大的关注，国内外研究报道逐渐增多。营养理论上认为，
FOS不能被动物本身所消化吸收，是一种功能性寡糖。作为饲料添加剂，主要是促进动物自身肠道有益微生物生长繁殖而改善消化道微生态环境，从而发挥提高动物免疫力，增强动物机体健康而产生有益影响的作用。
FOS是一种“益生元”或称为“化学益生素”，具有选择性地促进肠道双歧杆菌及乳酸杆菌等有益菌增殖、产生短链脂肪酸、降低肠道PH值，抑制大肠杆菌和沙门氏等有害菌群的生长等功效；降低肝脏中脂肪酸的合成，进而降低血清甘油三酯水平。寡糖可结合外源性抗原，作为辅助剂增强动物非特异性免疫，提高血清免疫球蛋白(Ig)及动物免疫力，提高饲料养分消化吸收、增进动物机体健康、提高生产性能。
益生菌中的枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)，属于芽孢杆菌属，革兰氏阳性，单细胞形态大小约为0.7×2um；
无荚膜，周生鞭毛，可以运动，广泛分布在土壤及腐败的有机物中，易在枯草浸汁中繁殖，故因此得名。在生长繁殖过程中可以产生一系列的活性物质，如枯草菌素、短杆菌肽、多粘菌素、制霉菌素等，对致病菌的活动有明显抑制作用；同时，它可以消耗动物肠道内的氧气，降低PH值，使好氧细菌(大肠杆菌、沙门氏菌等)大量死亡，厌氧菌(双歧杆菌等)比例增长。研究表明，枯草芽孢杆菌可以刺激动物免疫器官的增长，提高抗体和免疫球蛋白水平，增强细胞和体液免疫机能，提高群体免疫力；枯草芽孢杆菌菌体自身也可以合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等，可以弥补动物内源性消化酶分泌的不足，促进动物对营养物质的吸收利用；除此之外，枯草芽孢杆菌还可以合成多种B族维生素，保障动物的健康。
胆木，又名药乌檀，山熊胆、熊胆树、细叶黄棵木、黄羊木等。胆木性味苦、寒，具有抗菌消炎、清热解毒、消肿止痛之功效。胆木及其枝叶中主要含有数十种吲哚类生物碱和生物碱糖苷，甾醇、萜烯、还原糖、黄酮类物质、单宁、脂肪、维生素C、多糖等营养和活性物质。
鸡屎藤又名臭藤、鸡矢藤、雀儿藤，为茜草科植物鸡屎藤的全草及根所含的总生物碱，对金黄色葡萄球菌和褔氏痢疾杆菌有抑制作用，能抑制肠肌收缩，叶子含有多种成分挥发油。
椰子属棕榈科椰子属，是热带地区主要的木本油料作物之一，椰肉中含有高蛋白、碳水化合物，老椰肉含有十分丰富的椰油，油中的主要成分为月桂酸、棕榈酸、油酸、癸酸、脂肪酸、游离脂肪酸等多种物质，椰肉渣是将椰肉压榨后去除椰浆剩下的高纤维、高蛋白物质。
本发明含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料具有以下的有益效果：
1、本发明罗非鱼饲料添加使用果寡糖、益生素(枯草芽孢杆菌)的复合物对罗非鱼生长性能、某些生理生化和免疫指标、肠道菌群等方面具有较大的影响，增强罗非鱼机体免疫力，提高罗非鱼健康水平和罗非鱼产品品质，降低环境污染，其经济效益、社会效益和环境生态效益明显。对促进罗非鱼等水产健康养殖和动物性食品安全生产和水产养殖科技进步等具有重大意义。
2、本发明罗非鱼饲料组分中添加胆木叶粉、鸡屎藤粉、椰肉渣粉，使其饲料中含有全方位天然营养元素，替代大部分饲用抗生素，罗非鱼生长增重提高10％以上，饵料降低8％以上、饲料利用率效益提高8％以上，促进罗非鱼健康、生态养殖。
3、本发明饲粮中添加果寡糖、枯草芽孢杆菌和金霉素均能提高奥尼罗非鱼的生长性能，提高鱼体的非特异性免疫，降低血清甘油三酯和总胆固醇含量，改善血清生化指标，有效维持肠道菌群平衡。
4、本发明饲粮中单一添加果寡糖或枯草芽孢杆菌还达不到抗生素的应用效果；果寡糖和枯草芽孢杆菌具有协同作用，两者联用(合生元)则能达到抗生素的效果，再加上胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉的营业成分及功效，可在水产养殖中完全用于替代饲用抗生素。
具体实施方式
实施例1
本发明含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料，包括以下重量份数的原料：次粉20份、麦麸25份、豆粕25份、棉仔粕10份、鱼粉10份、Ca(H2PO4)2 1份、氯化胆碱0.2份、食盐0.2份、大豆油1份、预混料0.5份、果寡糖0.3份、枯草芽孢杆菌0.2份、胆木叶粉0.2份、椰肉渣粉5份、鸡屎藤叶粉1.4份；
所述预混料为每千克饲料提供：VA 9000IU、VD 3000IU、VK 6mg、VE 80mg、VB135mg、VB2 35mg、VB6 36mg、VB12 0.05mg、烟酸300mg、叶酸14mg、泛酸130mg、生物素0.6mg、VC600mg、肌醇300mg、Mg 300mg、Cu 1.5、Fe 60mg、Zn 70mg、Mn 28mg、I 0.2mg、Co 0.25mg、Se0.25mg、丙酸钙1200mg、抗氧化剂400mg；
所述果寡糖为浆状液体，浓度为35.8％；
所述枯草芽孢杆菌为粉剂，有效菌数3.0×1010cfu/g；
本发明含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料的制备方法，包括以下步骤：
(1)将固体状态的原料经过粉碎机粉碎，获得粉末状组分；
(2)胆木叶粉的制备：
a、将采摘新鲜的胆木叶清洗后，加入其重量2倍、水温70℃浸泡6分钟后，去除滤液，重复浸泡3次；
b、将浸泡后的胆木叶于60℃低温烘干至含水率为5％，干燥后进行粉碎，过100目筛，得到胆木叶粉；
(3)椰肉渣粉的制备：
a、取老椰子的椰肉清洗干净；
b、将清洗干净的椰肉进行刨蓉压榨，加入其重量1倍的冷水压榨，重复压榨3次，获得椰肉渣；
(c)将椰肉渣于40℃真空低温干燥至含水率为5％，干燥后进行粉碎，过100目筛，得到椰肉渣粉；
(4)鸡屎藤叶粉的制备：
a、将采摘新鲜的鸡屎藤叶清洗后，于蒸锅内隔水蒸煮5分钟；
b、将蒸煮后的鸡屎藤叶于40℃低温烘干至含水率为5％，干燥后进行粉碎，过100目筛，得到鸡屎藤粉；
(5)按上述配比，将次粉、麦麸、豆粕、棉仔粕、鱼粉、Ca(H2PO4)2、氯化胆碱、食盐、大豆油、预混料、果寡糖、枯草芽孢杆菌、胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉均匀混合后获得混合料，将混合料采用常规造粒工艺制成颗粒状的罗非鱼饲料。
实施例2
本发明含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料，包括以下重量份数的原料：次粉20份、麦麸20份、豆粕20份、棉仔粕8份、鱼粉15份、Ca(H2PO4)2 2份、氯化胆碱0.2份、食盐0.2份、大豆油1份、预混料1份、果寡糖1份、枯草芽孢杆菌0.5份、胆木叶粉1份、椰肉渣粉8份、鸡屎藤叶粉2.1份；
所述预混料为每千克饲料提供：VA 9000IU、VD 3000IU、VK 6mg、VE 80mg、VB135mg、VB2 35mg、VB6 36mg、VB12 0.05mg、烟酸300mg、叶酸14mg、泛酸130mg、生物素0.6mg、VC600mg、肌醇300mg、Mg 300mg、Cu 1.5、Fe 60mg、Zn 70mg、Mn 28mg、I 0.2mg、Co 0.25mg、Se0.25mg、丙酸钙1200mg、抗氧化剂400mg；
所述果寡糖为浆状液体，浓度为35.8％；
所述枯草芽孢杆菌为粉剂，有效菌数5.0×1010cfu/g；
本发明含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料的制备方法，包括以下步骤：
(1)将固体状态的原料经过粉碎机粉碎，获得粉末状组分；
(2)胆木叶粉的制备：
a、将采摘新鲜的胆木叶清洗后，加入其重量2倍、水温75℃浸泡7分钟后，去除滤液，重复浸泡2次；
b、将浸泡后的胆木叶于50℃低温烘干至含水率为8％，干燥后进行粉碎，过150目筛，得到胆木叶粉；
(3)椰肉渣粉的制备：
a、取老椰子的椰肉清洗干净；
b、将清洗干净的椰肉进行刨蓉压榨，加入其重量2倍的冷水压榨，重复压榨4次，获得椰肉渣；
(c)将椰肉渣于50℃真空低温干燥至含水率为8％，干燥后进行粉碎，过150目筛，得到椰肉渣粉；
(4)鸡屎藤叶粉的制备：
a、将采摘新鲜的鸡屎藤叶清洗后，于蒸锅内隔水蒸煮15分钟；
b、将蒸煮后的鸡屎藤叶于50℃低温烘干至含水率为8％，干燥后进行粉碎，过150目筛，得到鸡屎藤粉；
(5)按上述配比，将次粉、麦麸、豆粕、棉仔粕、鱼粉、Ca(H2PO4)2、氯化胆碱、食盐、大豆油、预混料、果寡糖、枯草芽孢杆菌、胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉均匀混合后获得混合料，将混合料采用常规造粒工艺制成颗粒状的罗非鱼饲料。
实施例3
本发明含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料，包括以下重量份数的原料：次粉20份、麦麸20份、豆粕20份、棉仔粕9份、鱼粉10份、Ca(H2PO4)2 1份、氯化胆碱0.5份、食盐0.2份、大豆油1份、预混料0.5份、果寡糖0.8份、枯草芽孢杆菌1份、胆木叶粉1份、椰肉渣粉10份、鸡屎藤叶粉5份；
所述预混料为每千克饲料提供：VA 9000IU、VD 3000IU、VK 6mg、VE 80mg、VB135mg、VB2 35mg、VB6 36mg、VB12 0.05mg、烟酸300mg、叶酸14mg、泛酸130mg、生物素0.6mg、VC600mg、肌醇300mg、Mg 300mg、Cu 1.5、Fe 60mg、Zn 70mg、Mn 28mg、I 0.2mg、Co 0.25mg、Se0.25mg、丙酸钙1200mg、抗氧化剂400mg；
所述果寡糖为浆状液体，浓度为35.8％；
所述枯草芽孢杆菌为粉剂，有效菌数4.0×1010cfu/g；
本发明含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料的制备方法，包括以下步骤：
(1)将固体状态的原料经过粉碎机粉碎，获得粉末状组分；
(2)胆木叶粉的制备：
a、将采摘新鲜的胆木叶清洗后，加入其重量2倍、水温80℃浸泡6分钟后，去除滤液，重复浸泡3次；
b、将浸泡后的胆木叶于60℃低温烘干至含水率为6％，干燥后进行粉碎，过200目筛，得到胆木叶粉；
(3)椰肉渣粉的制备：
a、取老椰子的椰肉清洗干净；
b、将清洗干净的椰肉进行刨蓉压榨，加入其重量2倍的冷水压榨，重复压榨3次，获得椰肉渣；
(c)将椰肉渣于60℃真空低温干燥至含水率为8％，干燥后进行粉碎，过200目筛，得到椰肉渣粉；
(4)鸡屎藤叶粉的制备：
a、将采摘新鲜的鸡屎藤叶清洗后，于蒸锅内隔水蒸煮10分钟；
b、将蒸煮后的鸡屎藤叶于60℃低温烘干至含水率为8％，干燥后进行粉碎，过200目筛，得到鸡屎藤粉；
(5)按上述配比，将次粉、麦麸、豆粕、棉仔粕、鱼粉、Ca(H2PO4)2、氯化胆碱、食盐、大豆油、预混料、果寡糖、枯草芽孢杆菌、胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉均匀混合后获得混合料，将混合料采用常规造粒工艺制成颗粒状的罗非鱼饲料。
试验过程：
1.1试验材料
试验用鱼购自广西水产研究所，为当年产奥尼罗非鱼。用3％的食盐水对鱼体消毒，在水泥池中用基础饲粮暂养3周后使用。果寡糖(Fructo-
oligosaccharide，FOS)系由广西南宁某公司提供的FOS浆状液体。试验用枯草芽孢杆菌(bacillus subtilis,BS)购自湖北绿天地生物科技有限公司，粉剂，有效菌数3.0×1010cfu/g。金霉素(Aureomycin，AM)预混剂购于南宁饲料兽药市场，含金霉素10％。
1.2试验分组
选取体格健壮、规格整齐、平均体重20g左右的奥尼罗非鱼450尾，随机分为6个组，1组为对照组，饲喂基础饲粮(次粉、麦麸、豆粕、棉仔粕、鱼粉、Ca(H2PO4)2、氯化胆碱、食盐、大豆油、预混料)、2组为对照组，饲喂基础饲粮+FOS；3组为对照组，饲喂基础饲粮+BS；4组为对照组，饲喂基础饲粮+FOS+BS；5组为对照组，饲喂基础饲粮+AM；6组为本发明实施例，饲喂基础饲粮+FOS+BS+胆木叶粉+椰肉渣粉+鸡屎藤叶粉；每组设3个重复，每个重复30尾鱼养于1个悬挂于水泥池的网箱中，池水深约0.8m，网箱规格为(100cm×100cm×80cm)，共15个网箱。各组鱼初始体重无显著差异(P>0.05)，喂养试验为期8周。
1.3饲养管理
试验在广西大学水产养殖基地进行，采用网箱流水养殖模式，各组饲粮为直径2mm的颗粒料。每天根据摄食情况，分2次(10:00、16:30)投喂约为体重的3％-6％的饲料。每天记录水温、投喂量、鱼的死亡数并观察鱼的健康状况，每15d称取各组鱼体重1次，统计成活率，调整投喂量。称重前停喂12h。每15d清理水池、清洗网箱换水一次。试验期间水温27-32℃，溶氧>5mg/L，pH约为7，氨氮<0.2mg/L，亚硝酸盐<0.01mg/L。
1.4测定指标及方法
1.4.1生长性能指标测定
试验开始和结束时停喂24h，以重复组为单位，空腹称取各组鱼总重。试验结束后24h，各组每个重复取6尾鱼称鱼体重，测定肥满度，取内脏、肝脏称重，有关指标计算公式如下：
成活率(SR)＝(试验结束尾数/试验开始尾数)×100％
相对增重率(WGR)＝(最终体重－初始体重)/初始体重×100％
饲料系数(FCR)＝总投喂量/(最终体重－初始体重)
肝体比(HIS)＝(肝脏重/鱼体重)×100％
脏体比(VIS)＝(内脏团重/鱼体重)×100％
特定生长率(SGR)＝100×(㏑最终平均体重－㏑初始平均体重)/试验天数
肥满度(CF)＝(鱼体重/鱼体长3)×100％
1.4.2血清生化指标测定
试验结束后24h，各组每个重复取6尾鱼，用1.0ml的无菌注射器自尾静脉抽取血液置于10ml无菌离心管中，4℃静置2小时，3000r/min离心10min，取上清液分成两份，一份用于检测血清生化指标，另一份用于血清酶活的测定。由广西医科大学第二附属医院分析测定各项指标。总蛋白(TP)采用双缩脲法，白蛋白(ALB)采用溴钾酚绿法，球蛋白(GLO)换算得出，总胆固醇(T-CHO)和甘油三酯(TG)采用酶终点比色
法测定，葡萄糖(GLU)采用GOD-PAP终点法，尿素氮(BUN)采用IFCC动力法，碱性磷酸酶(ALP)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)和乳酸脱氢酶(LDH)等采用比色法。检测设备为日本日立7600全自动生化分析仪及相关配套试剂。
1.4.4血清非特异性免疫指标测定
血清非特异性免疫指标，根据试剂盒(南京建成生物工程研究所)的说明，化学比色法测定血清溶菌酶(LSZ)、酸性磷酸酶(ACP)，黄嘌呤氧化酶法测定超氧化物歧化酶(SOD)等酶的活力。检测设备为日本日立7600全自动生化分析仪。
1.4.5肠道菌群指标分析
采用平板菌落计数法计算固体培养基上肠道菌落形成单位(Colony formingunit，CFU)。饲养试验结束后，各组每个重复取6尾鱼于酒精消毒后的瓷盘上迅速解剖，取其肠道，在超净工作台上，分别取出各组鱼肠，剔除脂肪，各个样品取0.5g肠道内容物加上4.5ml无菌水并装入10ml的离心管中，混匀，在震荡器上震荡20min后制成浓度为10-1的样品，再依次稀释至10-8。用微量移液器吸取各个样品合适的稀释度0.1ml涂布到各个菌的选择性培养基上。37℃培养24h，用来检验是否有杂菌，检验无杂菌方可使用。由高浓度向低浓度滴加，每个梯度三个平行。培养结束后进行活菌计数，取其平均值(1g cfu·g-1)。各类细菌培养基与培养条件见表1。
表1.菌落计数培养基与培养条件
注：干粉培养基EMB由广东环凯微生物科技有限公司提供、Bs和LBS由北京陆桥技术有限公司提供，BS由青岛高科园海博技术有限公司提供；分别按产品说明在实验室制备用于试验。
1.5数据分析
试验采用单因素方差分析，用Excel进行数据的计算，用SPSS17.0软件对全部数据进行分析和统计，结果用平均值±标准误(M±SE)表示，Duncan法进行多重比较，显著性水平为0.05。
2结果与分析
2.1生长性能
本发明3个实施例中各组的生长性能分析结果见表2、表3、表4。由表2、表3和表4可以看出，与对照组相比，本发明的3个实施例在无论是末重、相对增重率、特定生长率、肥满度、饵料系数、肝体比、脏体比都比对照组1-5效果更好，其中对照组4优于对照组1、对照组2、对照组3和对照组5。
本试验在饲粮中分别添加FOS、BS、FOS+BS、AM、FOS+BS+胆木叶粉+椰肉渣粉+鸡屎藤叶粉，每种都有显著提高了罗非鱼肥满度，但添加FOS+BS+胆木叶粉+椰肉渣粉+鸡屎藤叶粉的饲料更能显著提高罗非鱼肥满度，进而达到促进鱼体生长增重的效果。肝体比和脏体比是衡量鱼体健康的重要指标，一定范围内肝体比较大，鱼体免疫能力较强。本试验添加FOS或BS组提高了肝体比，说明增强了鱼体免疫功能；脏体比较大，说明鱼体内脏蓄积的脂肪多，本发明3个实施例与对照组比较，显著降低了脏体比，说明添加FOS+BS+胆木叶粉+椰肉渣粉+鸡屎藤叶粉更大程度可降低鱼内脏脂肪的积蓄，有利于鱼类的健康。
表2.FOS、BS、AM、胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉对奥尼罗非鱼生长性能的影响
组别 对照组1 对照组2 对照组3 对照组4 对照组5 实施例1
初重/g 19.66±0.15 19.48±0.41 19.58±0.37 19.47±0.21 19.69±0.21 19.85±0.21
末重/g 52.41±1.72<sup>b</sup> 56.29±1.46<sup>b</sup> 56.32±0.19<sup>b</sup> 61.40±1.87<sup>a</sup> 61.35±0.87<sup>a</sup> 62.30±1.87<sup>a</sup>
相对增重率/％ 166.51±8.14<sup>b</sup> 189.21±9.26<sup>ab</sup> 187.76±5.20<sup>ab</sup> 215.51±12.69<sup>a</sup> 211.76±7.67<sup>a</sup> 223.51±12.69<sup>a</sup>
成活率/％ 100 100 100 100 100 100
特定生长率/％ 3.26±0.10<sup>b</sup> 3.53±0.10<sup>ab</sup> 3.52±0.06<sup>ab</sup> 3.82±0.13<sup>a</sup> 3.78±0.08<sup>a</sup> 3.94±0.13<sup>a</sup>
饵料系数 1.39±0.07<sup>a</sup> 1.24±0.05<sup>ab</sup> 1.23±0.01<sup>ab</sup> 1.09±0.05<sup>b</sup> 1.09±0.02<sup>b</sup> 1.01±0.05<sup>b</sup>
肥满度/％ 3.07±0.05<sup>d</sup> 3.35±0.08<sup>cd</sup> 3.53±0.01<sup>bc</sup> 3.82±0.17<sup>ab</sup> 3.90±0.10<sup>a</sup> 4.12±0.17<sup>ab</sup>
肝体比/％ 1.94±0.15<sup>b</sup> 2.27±0.15<sup>a</sup> 2.32±0.02<sup>a</sup> 1.93±0.09<sup>b</sup> 1.74±0.06<sup>b</sup> 1.82±0.09<sup>b</sup>
脏体比/％ 6.25±0.13<sup>a</sup> 5.22±0.05<sup>b</sup> 5.12±0.03<sup>b</sup> 4.18±0.13<sup>c</sup> 3.79±0.13<sup>d</sup> 3.69±0.13<sup>c</sup>
表3.FOS、BS、AM、胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉对奥尼罗非鱼生长性能的影响
组别 对照组1 对照组2 对照组3 对照组4 对照组5 实施例2
初重/g 19.61±0.15 19.45±0.41 19.38±0.37 19.48±0.21 19.65±0.21 19.91±0.21
末重/g 51.39±1.72<sup>b</sup> 55.21±1.46<sup>b</sup> 56.42±0.19<sup>b</sup> 62.26±1.87<sup>a</sup> 60.37±0.87<sup>a</sup> 62.35±1.87<sup>a</sup>
相对增重率/％ 166.58±8.14<sup>b</sup> 188.25±9.26<sup>ab</sup> 186.78±5.20<sup>ab</sup> 215.61±12.69<sup>a</sup> 211.89±7.67<sup>a</sup> 223.61±12.69<sup>a</sup>
成活率/％ 100 100 100 100 100 100
特定生长率/％ 3.36±0.10<sup>b</sup> 3.51±0.10<sup>ab</sup> 3.42±0.06<sup>ab</sup> 3.83±0.13<sup>a</sup> 3.68±0.08<sup>a</sup> 3.96±0.13<sup>a</sup>
饵料系数 1.38±0.07<sup>a</sup> 1.25±0.05<sup>ab</sup> 1.24±0.01<sup>ab</sup> 1.08±0.05<sup>b</sup> 1.06±0.02<sup>b</sup> 1.02±0.05<sup>b</sup>
肥满度/％ 3.06±0.05<sup>d</sup> 3.36±0.08<sup>cd</sup> 3.57±0.01<sup>bc</sup> 3.86±0.17<sup>ab</sup> 3.91±0.10<sup>a</sup> 4.22±0.17<sup>ab</sup>
肝体比/％ 1.95±0.15<sup>b</sup> 2.28±0.15<sup>a</sup> 2.33±0.02<sup>a</sup> 1.94±0.09<sup>b</sup> 1.73±0.06<sup>b</sup> 1.81±0.09<sup>b</sup>
脏体比/％ 6.24±0.13<sup>a</sup> 5.21±0.05<sup>b</sup> 5.17±0.03<sup>b</sup> 4.15±0.13<sup>c</sup> 3.72±0.13<sup>d</sup> 3.65±0.13<sup>c</sup>
表4.FOS、BS、AM、胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉对奥尼罗非鱼生长性能的影响
组别 对照组1 对照组2 对照组3 对照组4 对照组5 实施例3
初重/g 19.23±0.15 19.49±0.41 19.51±0.37 19.47±0.21 19.62±0.21 19.81±0.21
末重/g 52.31±1.72<sup>b</sup> 56.25±1.46<sup>b</sup> 56.31±0.19<sup>b</sup> 61.42±1.87<sup>a</sup> 61.34±0.87<sup>a</sup> 62.31±1.87<sup>a</sup>
相对增重率/％ 166.52±8.14<sup>b</sup> 189.31±9.26<sup>ab</sup> 187.86±5.20<sup>ab</sup> 215.41±12.69<sup>a</sup> 211.66±7.67<sup>a</sup> 223.62±12.69<sup>a</sup>
成活率/％ 100 100 100 100 100 100
特定生长率/％ 3.25±0.10<sup>b</sup> 3.56±0.10<sup>ab</sup> 3.53±0.06<sup>ab</sup> 3.85±0.13<sup>a</sup> 3.79±0.08<sup>a</sup> 3.99±0.13<sup>a</sup>
饵料系数 1.32±0.07<sup>a</sup> 1.25±0.05<sup>ab</sup> 1.26±0.01<sup>ab</sup> 1.08±0.05<sup>b</sup> 1.09±0.02<sup>b</sup> 1.04±0.05<sup>b</sup>
肥满度/％ 3.06±0.05<sup>d</sup> 3.34±0.08<sup>cd</sup> 3.52±0.01<sup>bc</sup> 3.83±0.17<sup>ab</sup> 3.91±0.10<sup>a</sup> 4.19±0.17<sup>ab</sup>
肝体比/％ 1.95±0.15<sup>b</sup> 2.26±0.15<sup>a</sup> 2.31±0.02<sup>a</sup> 1.94±0.09<sup>b</sup> 1.74±0.06<sup>b</sup> 1.75±0.09<sup>b</sup>
脏体比/％ 6.23±0.13<sup>a</sup> 5.24±0.05<sup>b</sup> 5.13±0.03<sup>b</sup> 4.19±0.13<sup>c</sup> 3.77±0.13<sup>d</sup> 3.74±0.13<sup>c</sup>
注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同字母或无字母标注表示差异不显著(P>0.05)；下同。
2.2肠道菌群指标
各组的肠道菌群分析结果见表5、表6、表7。由表5-7可知，对照组2-5相对于对照组1在肠道双歧杆菌和乳酸杆菌的数量均有增加的趋势，但本发明3个实施例相对于所有对照组在肠道双歧杆菌和乳酸杆菌的数量均有更大的增加。对照组2-5和本发明实施例均能较对照组1减少奥尼罗非鱼肠道大肠杆菌和沙门氏菌的数量。其中本发明3个实施例相对于对照组均减少奥尼罗非鱼肠道大肠杆菌和沙门氏菌的数量。
研究表明，FOS作为一种不可消化的碳水化合物而不能被鱼体利用，直接进入鱼体肠道而作为肠道有益菌群的发酵底物，增殖有益菌，抑制有害菌，竞争性结合有害菌肠壁结合位点，进而促进肠道菌群平衡和肠道健康。由此可见，FOS、BS、AM对动物肠道微生物均能产生有益影响。AM作为一种抗生素能够显著降低罗非鱼肠道的大肠杆菌和沙门氏菌，而FOS和BS能够作为肠道微生态调节因子，两者相互协同，加上胆木叶粉和鸡屎藤粉的药用功效，更能促进肠道双歧杆菌和乳酸菌等有益菌的增殖，降低大肠杆菌和沙门氏菌数等有害菌，从而改善肠道微生态平衡，有利于鱼类健康生长，其效果比AM更好，可见在奥尼罗非鱼养殖中FOS+BS组合(合生元)+胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉可完全替代饲用抗生素。
表5.FOS、BS、AM、胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉对奥尼罗非鱼肠道菌群的影响
组别 对照组1 对照组2 对照组3 对照组4 对照组5 实施例1
大肠杆菌 7.82±0.18<sup>a</sup> 7.64±0.09<sup>ab</sup> 7.57±0.03<sup>b</sup> 7.48±0.06<sup>b</sup> 7.24±0.04<sup>c</sup> 7.21±0.06<sup>b</sup>
沙门氏菌 6.53±0.11<sup>a</sup> 6.48±0.02<sup>ab</sup> 6.30±0.04<sup>bc</sup> 6.16±0.02<sup>c</sup> 6.18±0.03<sup>c</sup> 6.10±0.02<sup>c</sup>
乳酸杆菌 5.31±0.10<sup>c</sup> 5.50±0.18<sup>bc</sup> 5.56±0.11<sup>bc</sup> 5.73±0.07<sup>ab</sup> 5.89±0.02<sup>a</sup> 5.81±0.07<sup>ab</sup>
双歧杆菌 7.72±0.07<sup>b</sup> 7.81±0.10<sup>ab</sup> 7.79±0.04<sup>ab</sup> 7.96±0.07<sup>ab</sup> 8.04±0.07<sup>a</sup> 7.98±0.07<sup>ab</sup>
表6.FOS、BS、AM、胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉对奥尼罗非鱼肠道菌群的影响
组别 对照组1 对照组2 对照组3 对照组4 对照组5 实施例2
大肠杆菌 7.81±0.18<sup>a</sup> 7.63±0.09<sup>ab</sup> 7.59±0.03<sup>b</sup> 7.42±0.06<sup>b</sup> 7.25±0.04<sup>c</sup> 7.20±0.06<sup>b</sup>
沙门氏菌 6.48±0.11<sup>a</sup> 6.45±0.02<sup>ab</sup> 6.31±0.04<sup>bc</sup> 6.12±0.02<sup>c</sup> 6.17±0.03<sup>c</sup> 6.09±0.02<sup>c</sup>
乳酸杆菌 5.32±0.10<sup>c</sup> 5.52±0.18<sup>bc</sup> 5.57±0.11<sup>bc</sup> 5.75±0.07<sup>ab</sup> 5.88±0.02<sup>a</sup> 5.83±0.07<sup>ab</sup>
双歧杆菌 7.70±0.07<sup>b</sup> 7.81±0.10<sup>ab</sup> 7.78±0.04<sup>ab</sup> 7.98±0.07<sup>ab</sup> 8.01±0.07<sup>a</sup> 8.03±0.07<sup>ab</sup>
表7.FOS、BS、AM、胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉对奥尼罗非鱼肠道菌群的影响
组别 对照组1 对照组2 对照组3 对照组4 对照组5 实施例3
大肠杆菌 7.87±0.18<sup>a</sup> 7.67±0.09<sup>ab</sup> 7.51±0.03<sup>b</sup> 7.42±0.06<sup>b</sup> 7.23±0.04<sup>c</sup> 7.20±0.06<sup>b</sup>
沙门氏菌 6.50±0.11<sup>a</sup> 6.40±0.02<sup>ab</sup> 6.31±0.04<sup>bc</sup> 6.12±0.02<sup>c</sup> 6.15±0.03<sup>c</sup> 6.11±0.02<sup>c</sup>
乳酸杆菌 5.33±0.10<sup>c</sup> 5.50±0.18<sup>bc</sup> 5.57±0.11<sup>bc</sup> 5.74±0.07<sup>ab</sup> 5.89±0.02<sup>a</sup> 5.93±0.07<sup>ab</sup>
双歧杆菌 7.72±0.07<sup>b</sup> 7.82±0.10<sup>ab</sup> 7.77±0.04<sup>ab</sup> 7.97±0.07<sup>ab</sup> 8.01±0.07<sup>a</sup> 8.30±0.07<sup>ab</sup>
注：同行数据肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)，相同字母或无字母标注表示差异不显著(P>0.05)。
以上所揭露的仅为本发明的较佳实施例而已，当然不能以此来限定本发明之权利范围，因此依本发明权利要求所作的等同变化，仍属于本发明所涵盖的范围。

Claims (3)

1.一种含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料，其特征在于：包括以下重量份数的组分：次粉20～30份、麦麸20～30份、豆粕20～30份、棉仔粕8～15份、鱼粉10～20份、Ca(H2PO4)2 1～5份、氯化胆碱0.2～1份、食盐0.2～1份、大豆油1～5份、预混料0.5～2份、果寡糖0.3～1份、枯草芽孢杆菌0.2～1份、胆木叶粉0.2～1份、椰肉渣粉5～10份、鸡屎藤叶粉0.5～5份；
所述预混料为每千克饲料提供：VA 9000IU、VD 3000IU、VK 6mg、VE 80mg、VB1 35mg、VB235mg、VB6 36mg、VB12 0.05mg、烟酸300mg、叶酸14mg、泛酸130mg、生物素0.6mg、VC 600mg、肌醇300mg、Mg 300mg、Cu 1.5、Fe 60mg、Zn 70mg、Mn 28mg、I 0.2mg、Co 0.25mg、Se 0.25mg、丙酸钙1200mg、抗氧化剂400mg；
所述果寡糖为浆状液体，浓度为35～40％；
所述枯草芽孢杆菌为粉剂，有效菌数3.0×1010～5.0×1010cfu/g。
2.如权利要求1所述的含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料的制备方法，其特征在于包括以下步骤：
(1)将固体状态的原料经过粉碎机粉碎，获得粉末状组分；
(2)胆木叶粉的制备：
a、将采摘新鲜的胆木叶清洗后，加入其重量1～3倍、水温70～80℃浸泡4～7分钟后，去除滤液，重复浸泡2～3次；
b、将浸泡后的胆木叶于40～60℃低温烘干至含水率为5～8％，干燥后进行粉碎，过100～200目筛，得到胆木叶粉；
(3)椰肉渣粉的制备：
a、取老椰子的椰肉清洗干净；
b、将清洗干净的椰肉进行刨蓉压榨，加入其重量1～3倍的冷水压榨，重复压榨2～4次，获得椰肉渣；
(c)将椰肉渣于40～60℃真空低温干燥至含水率为5～8％，干燥后进行粉碎，过100～200目筛，得到椰肉渣粉；
(4)鸡屎藤叶粉的制备：
a、将采摘新鲜的鸡屎藤叶清洗后，于蒸锅内隔水蒸煮5～15分钟；
b、将蒸煮后的鸡屎藤叶于40～60℃低温烘干至含水率为5～8％，干燥后进行粉碎，过100～200目筛，得到鸡屎藤粉；
(5)按上述配比，将次粉、麦麸、豆粕、棉仔粕、鱼粉、Ca(H2PO4)2、氯化胆碱、食盐、大豆油、预混料、果寡糖、枯草芽孢杆菌、胆木叶粉、椰肉渣粉、鸡屎藤叶粉均匀混合后获得混合料，将混合料采用常规造粒工艺制成颗粒状的罗非鱼饲料。
3.如权利要求1所述的含有果寡糖和益生菌的罗非鱼饲料，其特征在于：该罗非鱼饲料用于奥尼罗非鱼养殖过程。
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