CN110521785A - 益生菌发酵功能性食品及其制备 - Google Patents

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Abstract

本发明属于微生物发酵应用领域，涉及一种益生菌发酵食品及其制备。是采用益生菌对大豆、杏仁，火麻仁，郁李仁进行混菌分段发酵获得的，具有降燥、润肠、通便等保健功效，所述的益生菌为枯草芽孢杆菌、动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、长双歧杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、凝结芽孢杆菌、乳酸片球菌。

Description

益生菌发酵功能性食品及其制备
技术领域：
本发明属于微生物发酵应用领域，涉及利用益生菌发酵大豆、杏仁、火麻仁、郁李仁等生产的功能性食品，以及功能性食品的制备方法及应用。
背景技术：
近几十年来，我国科学科技发展迅速，社会风貌和人民的生活水平都大幅提高，人们对均衡全面的摄入营养有了越来越清晰的认识，对食物的需求早已远远超出满足生存和味蕾的范畴，保健养生的概念深入人心，且渐渐成为了一种潮流和习惯。豆类制品作为一种历史悠久的高蛋白食物，其中所含有的植物性蛋白相比于肉类奶类中的动物性蛋白更适合于中国人的肠道，利于吸收，温和养胃且营养全面。健康人体肠道中的乳酸杆菌和双歧杆菌数量占比都较高。益生菌能够刺激肠道蠕动，延长粪便在肠道的通过时间，从而有利于清除胃肠道中的毒素，维持肠道的正常功能。稳定的益生菌饮食可以在几周内缓解顽固性便秘。系列研究表明，益生菌在治疗多种类型的腹泻，如成人因抗生素引起的腹泻、婴儿感染性腹泻等均有良好的疗效。这可能是由于摄入益生菌后，刺激肠道免疫***产生了抗体，增强了肠道的屏障功能。
大豆的营养价值很高，被称为“豆中之王”，是数百种天然食物中最受营养学家推崇的食物。大豆发酵食品不仅含有大豆中原有的丰富营养素，而且通过微生物发酵作用，又产生很多种对人体有保健作用的功能性物大豆发酵食品的生产中，因参与发酵的主要微生物的种类不同，产品各具风味特色。其中细菌存在于空气、土壤、水等环境中，广泛的参与传统食品的发酵，通过自然选择，特定的菌株成为重要功能微生物，这些微生物含有丰富的淀粉酶、蛋白酶及脂肪酶等酶系，使大豆的各种成分在发酵过程中发生变化，形成了形状、风味、食用方法及保健功能都比较理想的产品。
本专利设计的发酵方法为分段式混菌发酵，由于多菌种的相互促进作用，可以使最终产物获得更高的益生菌数量与菌体活性，其产生的有益物质也高于单菌发酵的食品，而且混菌发酵具有不易染杂菌、稳定性高的特征，使得发酵生产在工艺控制上更简便易行。
发明内容：
本发明旨在针对肠道功能紊乱的人群提供一种益生菌发酵功能性食品，并为相关产品的生产提供研究思路。
为了实现上述目的，本发明提供一种固态发酵食品，是采用益生菌对大豆、杏仁，火麻仁，郁李仁进行混菌分段发酵获得的，具体制备步骤如下：
(1)选取大豆粉、杏仁粉、火麻仁粉、郁李仁粉，每6-10g的大豆粉，添加杏仁粉、火麻仁粉、郁李仁粉各0-5g，得到混合原料，将混合料：水＝1：1.25-2(质量体积比)混合制得固态发酵培养基；
(2)对固态发酵培养基进行灭菌，条件为，121℃，20min；
(3)菌种活化：将枯草芽孢杆菌、动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、长双歧杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、凝结芽孢杆菌、乳酸片球菌的甘油管分别按1％(v/v活化培养基的体积比)接种于活化培养基进行活化，pH＝7.2-7.4，控制温度为37℃；分别活化20h后，按10％(v/v)的接菌量再次转接活化培养基进行二次活化，37℃再活化24h后得二级种子液；
(4)混菌固态发酵：第一阶段将步骤(3)中的枯草芽孢杆菌种子液按照接种量1×105～5×107CFU/g接入固态发酵罐进行有氧静置发酵，36-38℃下固态发酵12-24h后，第二阶段接种凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、动物双歧杆菌、副干酪乳杆菌、青春双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、长双歧杆菌、乳酸片球菌八种菌种的混合菌(混合比例为等量，每个单菌的接入量为106-107CFU/g)接入发酵罐中，36-38℃下无氧静置固态发酵12-24h即得益生菌发酵豆类固态食品；
发酵结束后可直接包装食用，也可真空冷冻干燥，制成口感更佳的保健食品。
所述大豆、杏仁麻、火麻仁、郁李仁均为市售；
优选的，所述混合料：水＝1：1.5；
优选的，所述固态发酵中枯草芽孢杆菌的接种量为5×107CFU/g；
优选的，所述固态发酵中凝结芽孢杆菌的接种量为5×107CFU/g；
优选的，所述固态发酵中动物双歧杆菌的接种量为5×107CFU/g；
优选的，所述固态发酵中青春双歧杆菌的接种量为5×107CFU/g；
优选的，所述固态发酵中长双歧杆菌的接种量为5×107CFU/g；
优选的，所述固态发酵中植物乳杆菌的接种量为5×107CFU/g；
优选的，所述固态发酵中副干酪乳杆菌的接种量为5×107CFU/g；
优选的，所述固态发酵中乳酸片球菌的接种量为5×107CFU/g；
优选的，所述固态发酵中罗伊士乳杆菌的接种量为5×107CFU/g；
优选的，所述固态发酵真空冷冻干燥条件真空冷冻干燥24h-26h，至含水量不大于10％；
优选的，所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)IOB602，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.16021；
优选的，所述动物双歧杆菌为动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)IOB402，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.16028；
优选的，所述副干酪乳杆菌为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)IOB413，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCCNo.16022；
优选的，所述青春双歧杆菌为青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)IOB506，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCC No.16026；
优选的，所述凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)IOB502，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为：CGMCCNo.16025；
优选的，所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)IOB430，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCCNo.16024；
优选的，所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)IOB423，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCCNo.16023；
优选的，所述长双歧杆菌为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)IOB515，已于2018年6月29日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCCNo.16027；
优选的，所述乳酸片球菌为乳酸片球菌(pediococcus acidilactici)IOB701，已于2018年7月10日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号，中国科学院微生物研究所，邮编100101，保藏编号为CGMCCNo.16077。
有益效果：
随着饮食结构的改变、生活节奏的加快，以及社会价值观的迁移，对于现代人来说，便秘密作为常见问题究其原因可以概括为3点：一是缺水；二是胃动力不足；三是胃肠道中有阻碍物。本发明正是针对以上三种情况，从三种不同的方面解决以上问题。
首先，我们选择了具有保水性的菌株凝结芽孢杆菌作为主要发酵菌株之一，凝结芽孢杆菌表层蛋白具有保水性，能够通过电荷作用吸引水分子，锁住水分，润肠通便，是唯一具有保水润肠作用的益生菌。除此之外凝结芽孢杆菌能分泌抗菌凝固素，抑制有害菌的繁殖，促进有益菌协同增殖，快速恢复肠道菌群平衡，消除肠毒素，解除肠麻痹，恢复肠动力。
其次，本发明选择大豆作为发酵基质的主要材料，同时选择具有降燥、润肠、通便的郁李仁、火麻仁和杏仁作为辅料。发酵基质的选择标准是采用药食同源的物质。
最后，采用发酵的手段，并且采用自主原创的多种益生菌分段固态发酵技术。
本发明综合了大豆、杏仁、火麻仁、郁李仁的各物质特性，经多菌种分段发酵后产生苯甲酸、细菌素等物质，并且有机酸、β-半乳糖苷、低聚糖等成分显著增加，对于抑制荚膜杆菌和大肠杆菌等有害菌的生长，促进肠道的蠕动，润肠通便，防止便秘起到了重要作用。
具体实施方式：
下面结合实施例和实验例详细说明本发明的技术方案，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，但本发明并不限于以下具体实施例且保护范围不限于此。
实施例中涉及到的百分号“％”，若未特别说明，指质量百分比，溶液的百分比指100mL中含有溶质的克数，液体之间的百分比，是指在25℃时溶液的体积比例。
以下实施例将以植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)IOB602，保藏编号为CGMCC No.16021；动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)IOB402，保藏编号为CGMCCNo.16028；副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)IOB413，保藏编号为CGMCCNo.16022；青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)IOB506，保藏编号为CGMCCNo.16026；凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)IOB502，保藏编号为：CGMCC No.16025；枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)IOB430，保藏编号为CGMCC No.16024；罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)IOB423，保藏编号为CGMCC No.16023；长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)IOB515，保藏编号为CGMCC No.16027；乳酸片球菌(pediococcus acidilactici)IOB1010，保藏编号为CGMCC No.16077为例对本发明进行解释说明。
以下实施例所采用的菌种活化方式如未特别说明，均如下：
(1)配制活化培养基：每100ml水中添加10g大豆粉，得活化培养基；对活化培养基进行灭菌，条件为，121℃，25min；
(2)菌种活化：罗伊氏乳杆菌、长双歧杆菌、乳酸片球菌、植物乳杆菌、动物双歧杆菌、副干酪乳杆菌、青春双歧杆菌、凝结芽孢杆菌和枯草芽孢杆菌的甘油管分别按1％(v/v活化培养基的体积比)接种于活化培养基进行活化，pH自然，控制温度为37℃；分别活化20h后，按10％(v/v)的接菌量再次转接活化培养基进行二次活化，再活化24h后得二级种子液。
实施例1九种益生菌菌混合固态发酵豆类食品工艺
1、原料中大豆与其它辅料配比的确定
(1)将大豆、杏仁、火麻仁、郁李仁分别清洗后晾干，磨粉后过筛；
(2)配制活化培养基：每100ml水中添加10g大豆粉；对活化培养基进行灭菌，条件为，121℃，20min；
(3)配制发酵培养基：每6-10g的大豆粉，添加杏仁粉、火麻仁粉、郁李仁粉添加0-5g；料水比为1：1.5；
(4)菌种活化：枯草芽孢杆菌、动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、长双歧杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、凝结芽孢杆菌、乳酸片球菌的甘油管分别按1％接种于活化培养基进行活化，pH＝7.2-7.4，控制温度为37℃；分别活化20h后，按10％(v/v)的接菌量再次转接活化培养基进行二次活化，再活化24h后得二级种子液；
(5)益生菌固态发酵：将二级枯草芽孢杆菌种子液按照1×106CFU/g的接种量接入6T固态发酵罐中进行有氧发酵，37℃下发酵24h后按照接种量为1×106CFU/g分别接入动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、长双歧杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、凝结芽孢杆菌、乳酸片球菌的二级混合种子液进行二次接种，37℃下无氧发酵24h，分别对发酵液中的益生菌活菌数进行检测，结果如表1：
菌种标号：1号为枯草芽孢杆菌单菌，2号为动物双歧杆菌、3号为青春双歧杆菌、4号为长双歧杆菌、5号为植物乳杆菌、6号为副干酪乳杆菌、7号为罗伊氏乳杆菌、8号为凝结芽孢杆菌、9号为乳酸片球菌。
以标号表示各个组别：
组合一：8g大豆粉+3g杏仁粉+1g郁李仁粉；
组合二：8g大豆粉+3g杏仁粉+5g火麻仁粉；
组合三：8g大豆粉+5g火麻仁粉+1g郁李仁粉；
组合四：8g大豆粉+3g杏仁粉+5g火麻仁粉+1g郁李仁粉。
然后将不同配料得出的最优的配比进行混合发酵，优选出大豆与三种辅料之间的最优配比。结果见表1。
表1大豆粉与多种辅料混合发酵(CFU/g)
由表1可知，固态发酵大豆粉和杏仁粉、火麻仁粉、郁李仁粉之间最优的配比为大豆粉：杏仁粉：火麻仁粉：郁李仁粉＝8:3:5:1，得出的最高的活菌数为8.96×109CFU/g。
2、各菌种接种量的确定
发酵培养基的配置：大豆粉：杏仁粉：火麻仁粉：郁李仁粉＝8:3:5:1，发酵基质：水＝1:1.5。
除接菌量不同外，其他条件同实施例1-1。
接菌量分别为：
组合一.枯草芽孢杆菌1×106CFU/g，八种菌的混菌分别1×106CFU/g；
组合二.枯草芽孢杆菌1×106CFU/g，八种菌的混菌分别5×106CFU/g；
组合三.枯草芽孢杆菌5×106CFU/g，八种菌的混菌分别1×106CFU/g；
组合四.枯草芽孢杆菌5×106CFU/g，八种菌的混菌分别5×106CFU/g；
组合五.枯草芽孢杆菌1×107CFU/g，八种菌的混菌分别1×107CFU/g；
组合六.枯草芽孢杆菌1×107CFU/g，八种菌的混菌分别5×107CFU/g；
组合七.枯草芽孢杆菌5×107CFU/g，八种菌的混菌分别1×107CFU/g；
组合八.枯草芽孢杆菌5×107CFU/g，八种菌的混菌分别5×107CFU/g；
发酵后，对所得益生菌固态食品中的益生菌菌总活菌数进行检测。
表2不同接种量下的活菌数(CFU/g)
枯草芽孢杆菌活菌数 八种菌的混菌的总活菌数 总菌数
组合一 3.47×10<sup>8</sup> 5.45×10<sup>8</sup> 8.92×10<sup>8</sup>
组合二 3.47×10<sup>8</sup> 6.67×10<sup>8</sup> 1.01×10<sup>9</sup>
组合三 7.68×10<sup>8</sup> 7.87×10<sup>8</sup> 1.56×10<sup>9</sup>
组合四 7.68×10<sup>8</sup> 8.79×10<sup>8</sup> 1.65×10<sup>9</sup>
组合五 8.65×10<sup>8</sup> 9.16×10<sup>8</sup> 1.78×10<sup>9</sup>
组合六 8.65×10<sup>8</sup> 9.54×10<sup>8</sup> 1.82×10<sup>9</sup>
组合七 9.89×10<sup>8</sup> 1.02×10<sup>9</sup> 2.0×10<sup>9</sup>
组合八 9.89×10<sup>8</sup> 2.12×10<sup>9</sup> 3.11×10<sup>9</sup>
结果如表2所示，大豆和其辅料发酵的固态食品中，几种不同组合进行发酵，菌体接种量为枯草芽孢杆菌5×107CFU/g，八种菌的混和接种量均为5×107CFU/g时，活菌数达到最高，且虽然各组合活菌数有小幅度差异但都达到了较高的9次方，其中组合八活菌数枯草芽孢杆菌达到了9.89×108CFU/g，八种菌的混菌2.12×109CFU/g。
3、料水比的确定
6T发酵罐中培养基的配置：大豆粉：杏仁粉：火麻仁粉：郁李仁粉＝8:3:5:1。
菌体接菌量为：枯草芽孢杆菌5×107CFU/g，八种菌的混菌的接种量均分别为5×107CFU/g。
大豆及其辅料固态发酵培养基：大豆及其辅料和水的比例(质量体积比)分别为1：1.25，1：1.5，1：1.75，1：2。
除以上条件外，其他条件同实施例1-1。
对发酵后培养基中的益生菌活菌数进行检测，结果如表3可见：
表3大豆及其辅料与水的配比为1：1.25-2时，益生菌活菌数(CFU/g)
枯草芽孢杆菌单菌活菌数 其它八种乳酸菌活菌总数 总活菌数
1：1.25 5.41×10<sup>8</sup> 4.87×10<sup>8</sup> 1.03×10<sup>9</sup>
1：1.5 5.79×10<sup>8</sup> 4.99×10<sup>8</sup> 1.08×10<sup>9</sup>
1：1.75 5.71×10<sup>8</sup> 4.76×10<sup>8</sup> 1.05×10<sup>9</sup>
1：2 3.87×10<sup>8</sup> 3.97×10<sup>8</sup> 7.84×10<sup>8</sup>
由表3可知，当料水比为1：1.5时，枯草芽孢杆菌的活菌数为5.79×108CFU/g，其它八种混菌的活菌数为4.99×108CFU/g，总菌数达到了最高，1.08×109CFU/g。
4、培养时间的确定
6T发酵罐培养基为：大豆粉：杏仁粉：火麻仁粉：郁李仁粉＝8:3:5:1；将混合料与水比例为1：1.5(质量体积比)进行混合，121℃灭菌20min。
枯草芽孢杆菌和其它八种混菌从甘油管出发，按接种量1％分别接入活化培养基进行活化，pH自然，培养温度为37℃，培养时间20h，按10％的接种量再次转接入活化培养基进行二次活化，活化时间24h后得二级种子液；
将二级纳豆芽孢杆菌种子液按5×107CFU/g接入6T固体发酵罐中进行有氧发酵，37℃下发酵后，按5×107CFU/g接入动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、长双歧杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、凝结芽孢杆菌、乳酸片球菌八种菌的混菌(八种混菌之间的接种量均为5×107CFU/g)的二级种子液进入固态发酵罐，37℃下无氧发酵。发酵结束后，即获得活菌型发酵豆类食品。
发酵时间为1.枯草芽孢杆菌12h，其它八种菌的发酵时间12h；
2.枯草芽孢杆菌12h，其它八种菌的发酵时间24h；
3.枯草芽孢杆菌24h，其它八种菌的发酵时间12h；
4.枯草芽孢杆菌24h，其它八种菌的发酵时间24h。
发酵结束后，分别对固态发酵后的产物进行活菌计数。
表4固态发酵豆类食品中乳酸菌的活菌数
1 2 3 4
枯草芽孢杆菌 5.45×10<sup>8</sup> 6.69×10<sup>8</sup> 5.73×10<sup>8</sup> 6.24×10<sup>8</sup>
八种混菌 4.49×10<sup>8</sup> 4.1×10<sup>8</sup> 4.36×10<sup>8</sup> 5.24×10<sup>8</sup>
总菌数 5.16×10<sup>9</sup> 6.26×10<sup>9</sup> 5.54×10<sup>9</sup> 5.01×10<sup>9</sup>
发酵结果显示，当枯草芽孢杆菌12h，其它八种菌的发酵时间24h的时候，发酵结果达到最好，总菌数达到了6.26×109CFU/g。
5、发酵后成分的测定
其他条件同实施例1-1，纳豆芽孢杆菌、动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、长双歧杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、凝结芽孢杆菌、乳酸片球菌发酵时接种量为5×107CFU/g，按大豆粉：杏仁粉：火麻仁粉：郁李仁粉＝8:3:5:1配置发酵培养基，发酵培养基的料水比为1：1.5；发酵时间为枯草芽孢杆菌12h，其它八种菌的发酵时间24h。
脂肪酶的检测方法采用国家标准GB/T 5523-2008粮油检验粮食、油料的脂肪酶活动度的测定；蛋白酶的检测方法采用国家现行标准GB 5009.5-2010食品安全国家标准食品中蛋白质的测定；淀粉酶的检测方法为国家现行标准GB/T 24401-2009α-淀粉酶制剂；脂肪油脂和苯甲酸的测定方法采用气相色谱法-质谱法分析发酵前后的变化；链脂肪酸的测定方法采用饮料中(食品中)低聚肽、短链脂肪酸和γ-氨基丁酸的测定方法；乳酸的测定方法采用国家标准GB 4789.35-2010食品安全国家标准食品微生物学检验乳酸菌检验；β-半乳糖苷酶的检测方法采用国家现行标准GB/T 33409-2016β-半乳糖苷酶活性检测方法分光光度法；有机酸的测定方法采用GB 5009.157-2016食品安全国家标准食品有机酸的测定；刘倩在《一株乳酸菌细菌素的检测及其产生的最佳条件的研究》中提到的层析方法测定；低聚糖的测定方法采用GB/T 22491-2008大豆低聚糖；膳食纤维的检测方法采用国家标GB5009.88-2014食品安全国家标准食品中膳食纤维的测定准。
表5大豆固态发酵前后活性成分变化
检测成分 发酵前 发酵后
淀粉酶(U/g) 124.6 424.3
蛋白酶(U/g) 174.4 524.4
脂肪酶(U/g) 113.2 437.6
苯甲酸(％) 0 0.073
脂肪油脂(％) 42％ 48％
短链脂肪酸(mg/L) 153.23 205.12
乳酸(mg/100g) 52.32 145.23
β-半乳糖苷酶(U/mL) 0.68 1.53
有机酸(mg/100g) 163.31 465.92
细菌素(Da) 0 2300
低聚糖(％) 9％ 45％
膳食纤维(g/100g) 2.43 6.41
便秘是大肠机械运动造成的，表现为排便困难、不适、直肠澎胀和不完全排空，排空时间延长。影响排便过程而发生便秘的因素有很多，其中最重要的原因之一是饮食因素，增加到大肠的非淀粉性多糖、恢复肠道的正常菌群有助于缓解便秘，大量摄入发酵后的乳酸菌能够促进肠道蠕动，缓解便秘。
肠道中的乳酸杆菌和双歧杆菌等益生菌可以分解产生呈结合态的有机酸(如乳酸等)，使肠道内形成低pH值环境，抑制肠道病原菌生长与繁殖，促进有益菌生长繁殖，增加有益菌的数量，使有益菌优势占位，从而建立良好的微生物区系。另外，有机酸可增加肠的蠕动频率，加强肠道的分泌，同时增进肠道对营养物质的消化吸收。经过发酵后的产品，脂肪油脂的含量有微量的提高，能有效的提高肠内容物对肠黏膜的润滑作用，同时固态产品在消化道内经过酶的作用生成了苯甲酸，可以抑制胃蛋白酶的活性，所以产品具有润肠通便作用。
乳酸不耐受症是由于小肠粘膜缺乏β-半乳糖苷酶造成乳酸消化不充分，进入大肠的乳酸被细菌酶降解，导致肠管内气体增多，胃肠胀气、腹痛和渗透性腹泻等为主的一系列临床症状。本发明中的原料经过发酵后β-半乳糖苷酶显著增加，能够有效缓解胃肠胀气等症状。
此外，上述数据说明经过本发明的多菌种分段混合发酵，产品中的低聚糖含量变化显著。低聚糖是双歧杆菌生长所必须的营养物质，双歧杆菌利用低聚糖产生醋酸和乳酸等代谢产物，可抑制产气荚膜杆菌和大肠杆菌等有害菌的生长，促进肠道的蠕动，防止便秘。膳食纤维在人体口腔、胃、小肠、不被消化吸收，从而增大了肠内容物的体积，维持肠道内的内压，使大便蓬松化，肠道较易推动食物残渣，有效清除肠道褶皱里的废物和垃圾，将营养吸收后的废物移走，从而起到促进常带蠕动。
综上可以看出，经多种益生菌混合发酵后的豆类固态食品，综合了各种物质的特性。经益生菌种发酵后的产品含有各种消化酶，改善消化道生理，产生肌酸，降低肠道pH等。某些微生物还能与一些矿物元素形成易于吸收利用的螯合物，促进其吸收，提高动物对微量元素的利用效率。
实施例2发酵大豆及辅料对小鼠润肠通便保健功能的研究
准备洁净级小鼠12只，作为空白对照组；具有便秘模型的小鼠60只，随机分成5组，即便秘模型空白组、便秘模型对照组、便秘模型实验组分别喂食大豆食品高、中、低剂量组。小鼠禁食12h后，空白对照组、便秘模型组给予等容积生理盐水，便秘模型对照组给予麦金利牌益生菌粉，每日一次，每次一袋(1.5g)；其余各组动物分别灌胃给予实施例1-5制备的大豆发酵食品(先将实施例1-5获得的产品经真空冷冻干燥至含水量12％)15g/次、10g/次、5g/次，每日两次。灌胃后将小鼠单笼饲养，正常饮食进水，记录观察每只小鼠首粒排便时间、6h内排便粒数及6h内排便重量。
表6大豆食品对便秘小鼠的影响
剂量 动物数/只 首便时间(min) 粪便粒数(粒) 粪便重量(g)
15g/只/次 12 75±25.5 28.2±5.76 0.58±0.32
10g/只/次 12 110±20 24.6±9.87 0.43±0.16
5g/只/次 12 185±35 23.5±5.87 0.38±0.32
便秘模型对照组 12 204±32 20.8±12.2 0.32±0.156
便秘模型空白组 12 265±19 15.2±8.37 0.25±0.21
空白对照组 12 42±38 32.8±3.87 0.62±0.26
由表6可知，在给便秘小鼠食用产品后，首便时间明显缩短，粪便粒数显著增加，粪便重量明显增加。低剂量组就有较为明显的症状，中、高剂量的产品具有明显的效果。如果粪便在肠道里停留的时间过长，就会导致粪便中的水分被肠道过于吸收，粪便就会变得过于干硬，所以缩短排便时间会改善这种状况。研究指出凡是能够提高粪便持水能力的物质(各种水溶性膳食纤维)或促进肠道蠕动的物质(各种水不溶性膳食纤维)均能起到润肠通便的作用。
实施例3大豆发酵产品治疗便秘效果分析
选取58例具有便秘方面疾病患者作为研究对象。将其均分成两组，每组各29例。对照组每日服用3次马来酸曲美布汀分散片，每次服用1粒。观察组采用实施例1-5的大豆发酵产品，每日3次，每次5g。疗程均为4周。
在便秘型患者的治疗中，西药治疗是最为常见的治疗方案，马来酸曲美布汀分散片可以有效抑制及兴奋患者的胃肠道功能，这样就会出现双向调节的效果，改善患者胃肠道的微生态环境，对于患者相关症状的改善较为有利。MOT是一种孤立多肽类的肠胃激素，对胃肠道分解电解质、水转运起到促进作用，加快胃肠道的运动。VIP则是碱基多肽，不仅能调节神经元分泌，还能促进肠道的蠕动收缩。SS可抑制胃酸的合成以及胃肠道的运动、胃肠道激素的分泌，达到缓解便秘的作用。从研究数据中也可以看出，观察组的治疗效果优于对照组，VIP、SS指标水平明显下降，MOT指标水平明显上升，组间对比，差异具有统计学意义。详见表7。
表7两组患者血浆胃肠激素水平比较(x±s，pg/ml)
由此可见，发酵大豆食品对于治疗便秘型患者有提高治疗效果，缓解便秘症状，调节血浆胃肠激素水平，治疗过程安全有效，该治疗方式可被采纳。

Claims (5)

1.一种益生菌发酵功能性食品，其特征在于，是采用益生菌对大豆、杏仁，火麻仁，郁李仁进行混菌分段发酵获得的，所述的益生菌为枯草芽孢杆菌、动物双歧杆菌、青春双歧杆菌、长双歧杆菌、植物乳杆菌、副干酪乳杆菌、罗伊氏乳杆菌、凝结芽孢杆菌、乳酸片球菌。
2.如权利要求1所述的一种益生菌发酵功能性食品，其特征在于，所述混菌分段发酵具体如下：第一阶段将枯草芽孢杆菌种子液按照接种量1×105～5×107CFU/g接入固态发酵培养基进行有氧静置发酵，36-38℃下固态发酵12-24h后，第二阶段接种凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、动物双歧杆菌、副干酪乳杆菌、青春双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、长双歧杆菌、乳酸片球菌八种菌种的混合菌，混合比例为等量，每个单菌的接入量为106-107CFU/g，36-38℃下无氧静置固态发酵12-24h即得益生菌发酵豆类固态食品。
3.如权利要求2所述的一种益生菌发酵功能性食品，其特征在于，所述固态发酵培养基是在每6-10g的大豆粉中，添加杏仁粉、火麻仁粉、郁李仁粉各0-5g，得到混合原料，将混合料：水＝1：1.25-2混合制得固态发酵培养基；121℃，20min灭菌获得。
4.如权利要求1或2所述的一种益生菌发酵功能性食品，其特征在于，
所述植物乳杆菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)IOB602，保藏编号为CGMCCNo.16021；
所述动物双歧杆菌为动物双歧杆菌(Bifidobacterium animalis)IOB402，保藏编号为CGMCC No.16028；
所述副干酪乳杆菌为副干酪乳杆菌(Lactobacillus paracasei)IOB413，保藏编号为CGMCC No.16022；
所述青春双歧杆菌为青春双歧杆菌(Bifidobacterium adolescentis)IOB506，保藏编号为CGMCC No.16026；
所述凝结芽孢杆菌为凝结芽孢杆菌(Bacillus coagulans)IOB502，保藏编号为：CGMCCNo.16025；
所述枯草芽孢杆菌为枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)IOB430，保藏编号为CGMCCNo.16024；
所述罗伊氏乳杆菌为罗伊氏乳杆菌(Lactobacillus reuteri)IOB423，保藏编号为CGMCC No.16023；
所述长双歧杆菌为长双歧杆菌(Bifidobacterium longum)IOB515，保藏编号为CGMCCNo.16027；
所述乳酸片球菌为乳酸片球菌(Pediococcus acidilactici)IOB701，保藏编号为CGMCC No.16077。
5.如权利要求1或2所述的一种益生菌发酵功能性食品，其特征在于，制备方法如下：
(1)选取大豆粉、杏仁粉、火麻仁粉、郁李仁粉，大豆粉：杏仁粉：火麻仁粉：郁李仁粉＝8:3：5:1，得到混合原料，将混合料：水＝1：1.5混合制得固态发酵培养基；121℃，灭菌20min；
(2)混菌固态发酵：第一阶段将枯草芽孢杆菌种子液按照接种量5×107CFU/g接入固态发酵罐进行有氧静置发酵，37℃下固态发酵12h后，第二阶段接种凝结芽孢杆菌、植物乳杆菌、动物双歧杆菌、副干酪乳杆菌、青春双歧杆菌、罗伊氏乳杆菌、长双歧杆菌、乳酸片球菌八种菌种的混合菌，每个单菌的接入量为5×107CFU/g，37℃下无氧静置固态发酵24h即得益生菌发酵豆类固态食品；
发酵结束后直接包装食用，或真空冷冻干燥，制成保健食品。
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