CN109477082A - 3-甲基巴豆酸脱羧酶(mdc)变体 - Google Patents

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Abstract

本文描述了3‑甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)变体，其在将3‑甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示出改进的活性；以及使用这种酶变体产生异丁烯的方法。

Description

3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)变体
本文描述了在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)变体，以及使用这样的酶变体生产异丁烯的方法。
目前许多化学化合物源自石油化学品。烯类(如乙烯、丙烯、不同的丁烯或例如其他戊烯)在例如用于产生聚丙烯或聚乙烯的塑料工业、化学工业其他领域和燃料领域中使用。
丁烯以四种形式存在，其中之一，异丁烯(isobutene，也称为异丁烯(isobutylene))，进入甲基叔丁基醚(MTBE)(汽车燃料用抗爆添加剂)组合物中。异丁烯也可以用来产生异辛烯(isooctene)，而异辛烯转可以被还原成异辛烷(2,2,4-三甲基戊烷)；异辛烷的极高辛烷值使其成为所谓“汽油”发动机的最佳燃料。烯类如异丁烯目前通过催化性裂解石油产物(或在己烯的情况下从煤炭或天然气中通过Fischer-Tropsch法的衍生物)产生。生产成本因此与油价紧密相关。另外，催化性裂解时常伴随着相当大的技术难题，这增加了工艺复杂性和生产成本。
在与地球化学循环和谐相处的可持续工业运营背景下，需要通过生物途径生产烯类如异丁烯。由于发酵和蒸馏过程已经在食品加工产业中存在，第一代生物燃料由乙醇的发酵生产组成。第二代生物燃料的生产处于探索期，其尤其包括生产长链醇(丁醇和戊醇)、萜烯、链烷烃和脂肪酸。两份最新综述提供了这个领域中研究的总体概述：Ladygina等(Process Bioc hemistry 41(2006),1001)和Wackett(Current Opinions in Chemical Biology 21(2008),187)。
先前已经描述了用于酶促产生异丁烯的不同途径；参见，例如，Fujii等(Appl.Environ.Microbiol.54(1988),583)；Gogerty等(Appl.Envir onm.Microbiol.76(2010),8004-8010)，van Leeuwen等(Appl.Microbi ol.Biotechnol.93(2012),1377-1387)和WO2010/001078。
除了这些途径之外，还存在提供异丁烯的替代途径，其利用通过脱羧反应将3-甲基巴豆酸酶促转化为异丁烯。脱羧是一种化学反应，可以去除羧基并释放二氧化碳(CO2)。
US-A1-2009/0092975中已经提出了3-甲基巴豆酸的脱羧，但没有关于该转化的实验证据。在US-A1-2009/0092975中，描述了来自酿酒酵母(Sac charomyces cerevisiae)的称为PAD1的核酸序列，并且公开其编码脱羧酶。该酶被认为可用作重组生物中的选择性标记，而它被描述为可使用“弱酸”作为选择剂。3-甲基巴豆酸等许多其他酸被称为潜在的“弱酸。”
然而，后来才发现上述PAD1实际上不提供脱羧酶活性。
事实上，细菌ubiD和ubiX或同源真核生物fdc1和pad1基因已经涉及非氧化性可逆脱羧。苯基丙烯酸脱羧酶(PAD)和阿魏酸脱羧酶(FDC)的联合作用被认为对于酿酒酵母中苯基丙烯酸的脱羧是必需的(J.Biosci.Bioe ng.109,(2010),564-569；AMB Express,5:12(2015)1-5；ACS Chem.Biol.10(2015),1137-1144)。
最近，被描述为苯基丙烯酸脱羧酶(PAD)的上述酶家族被表征为FMN异戊烯基转移酶并且不再是脱羧酶。已经表明，Fdc1(但不是PAD)完全负责可逆的脱羧酶活性，并且它需要新型辅因子，即由相关的UbiX(或Pad1)蛋白合成的异戊烯化黄素(prenylated flavin)。因此，该PAD酶的真正酶活性已被鉴定为具有异戊二烯部分(来自二甲基烯丙基磷酸或焦磷酸，称为DMAP或DMAPP)的黄素单核苷酸(FMN)辅因子的转化。该反应如图1A所示。
因此，与现有技术的观点相反，真正的脱羧酶是与修饰的FMN(异戊二烯化的FMN)结合的阿魏酸脱羧酶(FDC)。该反应如图1B所示。最近描述了阿魏酸脱羧酶(FDC)与修饰的FMN(异戊二烯化-FMN)(后者由PAD酶提供)相关的这种机制，并涉及令人惊讶的酶促机制，即通过1,3-偶极环加成进行α，β-不饱和酸脱羧。此外，最近阐明了该FDC脱羧酶的结构(Nature 522(2015)，497-501；Nature，522(2015)，502-505；Appl.Environ.Microbiol.81(2015)，4216-4223)。
尽管上述手段和方法允许由2-甲基巴豆酸生产异丁烯，但仍需要改进，特别是关于进一步提高该方法的效率以使其更适合于工业目的的改进。
本申请通过提供权利要求中限定的实施方案来满足这种需要。
在第一方面，本发明提供了3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)的变体，其相对于其所源自的相应MDC，显示在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面改进的活性。
改进的酶变体或能够以增加的活性催化反应的酶变体被定义为以下的酶变体，其不同于野生型酶并且催化3-甲基巴豆酸转化为异丁烯，从而就至少一种给定浓度的3-甲基巴豆酸(优选大于0M至1M的任何3-甲基巴豆酸)而言，酶变体的比活高于野生型酶的比活。比活定义为转化成产物摩尔的底物摩尔数除以单位时间除以酶摩尔数。Kcat(转换数)是底物饱和浓度下的比活。
特别地，根据该第一方面，本发明提供能够以至少1×10-3s-1的3-甲基巴豆酸至异丁烯的转化率，将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的酶。可以通过在3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)中的特定位置进行突变来提供这样的酶，并且通过进行这种突变获得的变体在催化3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示出改进的活性。在优选的实施方案中，该酶能够以至少2×10-3s-1的3-甲基巴豆酸至异丁烯的转化率，将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯，在特别优选的实施方案中转化率为至少4×10-3s-1。在最优选的实施方案中，酶具有至少10×10-3s-1或至少1s-1，或至少10s-1，甚至更优选至少100s-1的3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的转换率。相应的野生型酶具有约1×10-3s-1的3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的转换率。
在本发明的上下文中，“改进的活性”是指所讨论的酶的活性至少10％，优选至少20％，更优选至少30％或50％，甚至更优选至少70％或80％，特别优选至少90％或100％高于变体所源自的酶，优选高于SEQ ID NO：1所示的酶。在甚至更优选的实施方案中，改进的活性可以比变体所源自的相应酶(优选比SEQ ID NO：1所示的酶)的活性高至少150％、至少200％、至少300％、至少750％或至少1000％。在特别优选的实施方案中，如下所述，通过使用纯化的酶和化学合成的底物的测定来测量活性。与亲本酶相比，变体的改进活性可以在给定条件下在给定时间内测量为更多的异丁烯产生。这种改进的活性可以由更高的转换数量产生，例如更高的kcat值。也可以由较低的Km值产生。也可以由更高的kcat/Km值产生。最后，它可以由更高的溶解度或酶的稳定性产生。改进程度可以作为异丁烯生产的改进来测量。就可溶性蛋白质产生或蛋白质稳定性而言，还可以根据kcat改进、kcat/Km改进或Km降低来测量改进程度。
在另一个实施方案中，本发明提供的酶变体能够将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯，其活性至少比具有如SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的相应野生型酶的转换率高1.25倍。在更优选的实施方案中，能够将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的酶变体与具有如SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的相应野生型酶的转换率相比，具有高至少2倍、高至少3倍、高至少5倍或甚至高至少10倍的转换率(即，kcat值)。在甚至更优选的实施方案中，与具有如SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的相应野生型酶相比，该转换率为高至少100倍或甚至高至少500倍。
通过在MDC的氨基酸序列中的特定位置进行突变，获得此类酶变体，并且通过进行这种突变而获得的变体在催化3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示出改进的活性。可以通过本领域技术人员已知的方法确定能够将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的酶的活性。在一个实施方案中，该活性如本文所附的实施例中所述那样确定。在具体实施方案中，可以通过在体外孵育该酶、优选体外孵育含有过量表达的重组蛋白的细胞裂解物，测量该活性。或者，可以使用纯化的酶或在体内测定中使用纯化的酶。
更具体地，可以通过基于纯化蛋白质的酶促体外测定和通过气相色谱检测异丁烯来评估MDC变体将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的活性。待评估的酶的转换率可以如下所述进行检查：可以使用以下方案测定3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的反应的Michaelis-Mentenkcat和Km稳态动力学常数：
用于定量3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的酶促试验在50mM磷酸钾pH 7.5缓冲液、20mM NaCl、3mM MgCl2、5mM DTT、0.5mg/ml待测MDC变体的纯化酶、100μl含有FMN异戊烯基转移酶(即，来自大肠杆菌(E.coli)表达的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白和如下文进一步概述的那样制备)的裂解物，以及不同浓度(范围为0-128mM)的底物3-甲基巴豆酸，在2ml玻璃小瓶中，30℃下进行。没有MDC酶的对照平行进行。60分钟后，通过在80℃下孵育2分钟来终止反应。异丁烯生产速率通过气相色谱如下定量。
通过配备有火焰离子化检测器(FID)的气相色谱(GC)分析在反应顶空中形成的异丁烯。对于GC顶空分析，在配备有GS-氧化铝柱(30m×0.53mm)(Agilent)的Bruker GC-450***中使用130℃的等温模式分离1ml顶空气体。氮气用作载气，流速为6毫升/分钟。通过与异丁烯标准比较鉴定酶促反应产物。在这些GC条件下，异丁烯的保留时间为2.42分钟。从异丁烯生产速率和使用Michaelis-Menten近似值，可以计算酶催化效率。将异丁烯的生产速率(PV摩尔数/摩尔酶/秒)作为3-甲基巴豆酸浓度的函数作图，并使用Michaelis Menten方程(V＝(Vmax*(底物))/(Km+(底物)))拟合该曲线，以推导出kcat值(s-1)和Km值(mM)。
可以根据以下方案提供待测试的MDC变体：将待测试的MDC亚克隆到pETDuetTM-1共表达载体中。载体在阿魏酸脱羧酶的甲硫氨酸起始密码子后含有一段6个组氨酸密码子，以提供纯化的亲和标签。
根据标准热休克方案，用该载体转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)细胞(Novagen)，并铺板到补充有适当抗生素的LB琼脂板上。细胞在30℃下生长过夜，直到各个菌落达到所需大小。然后挑取单个菌落并分别转移到5ml补充有适当抗生素的液体LB培养基中。30℃下，细胞生长振荡进行16小时。使用ZYM-5052自诱导培养基(Studier FW，Prot.Exp.Pur.41，(2005)，207-234)将转化细胞的LB培养物接种培养物，并在30℃下，使培养物振荡生长(160转/分钟)24小时。通过在4℃，10,000转/分钟离心20分钟收集细胞，将沉淀冷冻并储存在-80℃。将含有500ml培养细胞的过表达蛋白质的沉淀在冰上融化，并重悬于15ml含有200mM NaCl、10mM MgCl2、10mM咪唑和1mM DTT的50mM磷酸钾缓冲液中。加入20微升的裂解酶(Novagen)，将细胞在室温下温育10分钟，然后回到冰上20分钟。然后通过2×15秒超声处理完成细胞裂解。
然后通过在4℃，4000转/分钟离心40分钟澄清细菌提取物。将澄清的细菌裂解物上样到PROTINO-2000Ni-TED柱(Macherey-Nagel)上，允许吸附6-His标签的蛋白质。洗涤柱并用6ml含有250mM咪唑的50mM磷酸钾缓冲液洗脱目的酶。然后将洗脱液浓缩，在AmiconUltra-4 10kD a过滤装置(Millipore)上脱盐，并将酶重悬于含有1mM DTT和20mM N aCl的50mM磷酸钾缓冲液中。通过在NanoDrop 1000分光光度计(Ther mo Scientific)上的直接UV 280nm测量或通过Bradford测定(BioRad)测定蛋白质浓度。
相应地，克隆并重组表达、纯化和定量来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白的cDNA。
如上所述用于测定本发明MDC变体活性的酶促体外试验中，UbiX不一定必须以重组表达和随后纯化的方式提供。因此，UbiX也可以以含有U biX的细胞裂解物的形式提供，而不用进行如下所述的纯化。
将来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白克隆到载体pCAN中。来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白购自NAIST(Nara In stitute of Science andTechnology，日本，ASKA collection)。
根据标准热休克方案，用该载体转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)细胞(Novagen)，并铺板到补充有适当抗生素的LB琼脂板上。细胞在30℃下生长过夜，直到各个菌落达到所需大小。然后挑取单个菌落并分别转移到5ml补充有适当抗生素的液体LB培养基中。细胞在30℃下振荡生长16小时。转化细胞的LB培养物接种ZYM-5052自诱导培养基(Studier FW，Prot.Exp.Pur.41，(2005)，207-234)，培养物在30℃下振荡生长(160转/分钟)24小时。通过在4℃，10,000转/分钟离心20分钟收集细胞，将沉淀储存在-80℃。将500ml培养细胞的沉淀在冰上融化，并重悬于15ml含有200mM NaCl、10mM MgCl2、10mM咪唑和1mM DTT的50mM磷酸钾缓冲液中。加入20微升的裂解酶(Novagen)。将细胞在室温下温育10分钟，然后回到冰上20分钟。通过2×15秒超声处理完成细胞裂解。将含有Ub iX蛋白的细胞裂解物保持在冰上。
作为上述体外测定的替代，可以通过体内测试评估MDC变体对3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的活性。该偶联的体内试验基于使用表达载体转化的细菌菌株的使用，该表达载体含有导致产生MDC变体的编码序列和来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白(SEQID NO：2)。因此，除了来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白的cDNA之外，将待测试的MDC变体亚克隆到pETDuet TM-1共表达载体(Novagen)中。
待测试的本发明的MDC变体用于催化3-甲基巴豆酸到异丁烯的脱羧反应，而来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白提供修饰的黄素辅因子。因此，在偶联的体内测定中，使用细菌菌株，其用上述表达载体转化。
首先将转化的菌株铺板到补充有适当抗生素的LB琼脂板上。然后使细胞在30℃下生长过夜，直至各个菌落达到所需大小。然后挑取单菌落并单独转移到50或500μL补充有适当抗生素的液体LB培养基中。细胞在30℃下振荡生长20小时。LB培养物用于在384孔深孔微量培养板中接种300μL补充适当抗生素的自诱导培养基或在96孔深孔微量培养板中接种1mL(Studier FW，Prat.Exp.Pur.41，(2005)，207-234)补充适当抗生素的自诱导培养基，并在设置为700转/分钟和85％湿度的振荡培养箱中，30℃下生长24小时，以产生两种类型的重组酶。然后将含有这些过表达的重组酶的细胞沉淀重悬于384深孔微量培养板的40μL基本培养基(pH 7.5，磷酸盐100mM、葡萄糖10g.L-1、MgSO41mM)中，补充10mM 3-甲基巴豆酸；或在96深孔微量培养板的400μL基本培养基(pH 7.5，磷酸盐100mM、葡萄糖10g.L-1、MgSO41mM)中，补充10mM 3-甲基巴豆酸，并在振荡培养箱中于37℃，700转/分钟再孵育2或4小时转。在该步骤中，MDC变体催化3-甲基巴豆酸脱羧成异丁烯。在80℃下灭活5分钟后，通过气相色谱如下定量产生的异丁烯。将来自每个酶促反应的100μL顶空气体注入配备有火焰离子化检测器(FID)的Brucker GC-450***中。样品中存在的化合物通过色谱法，使用RTX-1柱，在100℃下以1mL/min恒定流量的氮气作为载气分离。注入后，计算异丁烯的峰面积。
通过提供上述酶变体，本发明允许显着提高异丁烯从3-甲基巴豆酸的生产效率。
术语“3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)”是指可以催化3-甲基巴豆酸脱羧成异丁烯的酶。脱羧是一种化学反应，可以去除羧基并释放二氧化碳。该活性可以通过本领域已知的方法测量并如上所述。在优选的实施方案中，MDC是阿魏酸脱羧酶(FDC)或源自这种酶。FDC属于酶类EC4.1.1.-。如上所述，最初描述了与修饰的FMN(异戊烯化-FNN)结合的FDC能够通过1,3-偶极环加成催化α,β-不饱和脱羧，更具体地说，能够催化3-甲基巴豆酸脱羧成异丁烯。因此，在本发明的上下文中，术语FDC涉及能够催化3-甲基巴豆酸脱羧成异丁烯的酶，优选当提供有异戊烯化的FMN时。
例如，已描述在酿酒酵母、肠杆菌属物种(Enterobacter sp.)、短小芽孢杆菌(Bacillus pumilus)、黑曲霉(Aspergillus niger)或杜氏假丝酵母(Ca ndidadubliniensis)中的FDC酶。因此，在优选的实施方案中，FDC源自酿酒酵母(Uniprot登录号Q03034)、肠杆菌属物种(Uniprot登录号V3P7 U0)、短小芽孢杆菌(Uniprot登录号Q45361)、黑曲霉(Uniprot登录号A2 R0P7)或杜氏假丝酵母(Uniprot登录号B9WJ66)。在更优选的实施方案中，FDC是3-聚异戊烯基-4-羟基苯甲酸脱羧酶(UbiD)。3-聚异戊烯基-4-羟基苯甲酸脱羧酶例如已经描述于Hypocrea atroviridis、Sphaerulina musiva、Penecillinumrequeforti、Fusariumoxysporum f.sp.Lycopersici、库德里酵母(Saccharomyceskudriavzevii)、酿酒酵母、寄生曲霉(Aspergillus par asiticus)、白假丝酵母(Candidaalbicans)、Grosmannia clavigera、大肠杆菌(Escherichia coli)、巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)、Methanother mobacter sp.CaT2或龟亚科分枝杆菌(Mycobacterium chelonae)1518。因此，在更优选的实施方案中，能够催化3-甲基巴豆酸脱羧成异丁烯的FDC酶变体源自来自Hypocrea atroviridis(UniProt Accession登录号G9NLP8)、Sphaerulina musiva(UniProt登录号M3DF95)、Penecillinum reque forti(UniProt登录号W6QKP7)、Fusariumoxysporum f.sp.Lycopersici(UniProt登录号W9LTH3)、库德里酵母(UniProt登录号J8TRN5)、酿酒酵母、寄生曲霉、白假丝酵母、Grosmannia clavigera、大肠杆菌(Uniprot登录号P0AAB4)、巨大芽孢杆菌(Uniprot登录号D5DTL4)、Methanothermobacter sp.CaT2(Uniprot登录号T2GKK5)或龟亚科分枝杆菌(Mycoba cteriumchelonae)1518(Uniprot登录号X8EX86)的3-聚异戊烯基-4-羟基苯甲酸脱羧酶(UbiD)。优选地，MDC是与FMN异戊烯基转移酶结合和/或依赖于FMN异戊烯基转移酶的酶。如上所述，利用FMN依赖性脱羧酶将3-甲基巴豆酸酶促转化为异丁烯优选与FMN异戊烯基转移酶相关，并依赖于由两种酶催化的两个连续步骤的反应，这两种酶即FMN依赖性脱羧酶(催化3-甲基巴豆酸实际脱羧成异丁烯)与相关的FMN异戊烯基转移酶，其提供修饰的黄素辅因子。黄素辅因子可以优选为FMN或FAD。FMN(黄素单核苷酸；也称为核黄素-5'-磷酸)是由酶，核黄素激酶，从核黄素(维生素B2)产生的生物分子，并且作为各种反应的辅基基团起作用。FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸)是氧化还原辅因子，更具体地是修复基团，参与代谢中的几个重要反应。可以与本发明的MDC变体相关的FMN异戊烯基转移酶在下面进一步详细描述。
本发明现在提供了能够将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的酶的改进变体。本发明人使用SEQ ID NO：1所示的Hypocrea atroviridis的FDC作为模型酶，并且可以显示可能可以提供该酶的变体，其显示出相对于3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的活性增加。
本发明人使用的模型酶，即Hypocrea atroviridis的FDC具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列。
在一个优选的实施方案中，本发明的变体的特征在于它们源自MDC，更优选源自具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的MDC或高度相关的序列(至少60％)，其中在一个或多个上述位置进行突变，其特征在于它们显示出将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的能力，并且它们可以以改进的活性实现这一点。在一个优选的实施方案中，本发明的变体源自与SEQ IDNO：1显示至少70％，更优选至少80％序列同一性的序列，并且其中在文中指出的位置已进行一个或多个取代和/或缺失和/或***。
然而，本发明的教导不限于已被用作模型酶的SEQ ID NO：1所示的Hypocreaatroviridis的MDC酶，其可扩展至来自其他生物的MDC酶或与SEQ ID NO：1结构相关的酶，例如，酶的截短变体。因此，本发明还涉及MDC的变体，其在结构上与Hypocrea atroviridis序列(SEQ ID NO：1)相关并且在对应于如本文所示任何位置的位置处显示一个或多个取代和/或缺失和/或***。术语“结构上相关的”是指MDC，其显示与SEQ ID NO：1所示序列至少n％的序列同一性，其中n为60-100之间的整数，优选是60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99。在优选的实施方案中，结构相关的MDC来自真菌，更优选来自子囊菌门(Ascomyceta)的生物，甚至更优选来自粪壳菌纲(Sordariomycetes)的生物，来自肉座菌目(Hypocreales)的生物，来自肉座菌科(Hypocreaceae)的生物或来自肉座菌属(Hypocrea)的生物，最优选来自肉座菌属的生物。
因此，在一个实施方案中，本发明的MDC变体具有或优选源自与SEQ ID NO：1至少n％相同并且在如本文所示的位置具有一个或多个取代和/或一个或多个缺失和/或一个或多个***的序列，其中n为60-100之间的整数，优选是60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99。当比较的序列不具有相同的长度时，同一性程度指较短序列中与较长序列内氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分数，或指较长序列中与较短序列内氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分数。优选地，它指较短序列中与较长序列内氨基酸残基相同的氨基酸残基的百分数。可以根据本领域熟知的方法，优选使用合适的计算机算法(如CLUSTAL)确定序列同一性程度。
当使用Clustal分析方法来确定特定序列是否与参考序列例如至少60％相同时，对于氨基酸序列的比较，可以使用默认设置或者设置优选如下：矩阵：blosum 30；开放空位罚分：10.0；延伸空位罚分：0.05；延迟趋异：40；空位分隔距离：8。对于核苷酸序列比较，延伸空位罚分优选设置至5.0。
在优选实施方案中，ClustalW2用于氨基酸序列的比较。在配对比较/比对的情况下，优选选择以下设置：蛋白质权重矩阵：BLOSUM 62；空位开放：10；空位延伸：0.1。在多重比较/比对的情况下，优选选择以下设置：蛋白质权重矩阵：BLOSUM 62；空位开放：10；空位延伸：0.2；空位距离：5；无末端空位。优选地，在序列的整个长度上计算同一性的程度。
可以由本领域技术人员，通过本领域已知的方法鉴定位于与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列中如本文所示的位置相对应的位置处的氨基酸残基。例如，可以通过将所讨论的序列与SEQ ID NO:1所示的序列比对并且通过确定与SEQ ID NO:1的上述或下述位置对应的位置，鉴定这类氨基酸残基。比对可以用本领域技术人员已知的手段和方法进行，例如通过使用已知的计算机算法如Lipman-Pearson方法(Science 227(1985),1435)或CLUSTAL算法。优选在这种比对中，将最大同源性指定为氨基酸序列中存在的保守氨基酸残基。
在优选实施方案中，ClustalW2用于氨基酸序列的比较。在配对比较/比对的情况下，优选选择以下设置：蛋白质权重矩阵：BLOSUM 62；空位开放：10；空位延伸：0.1。在多重比较/比对的情况下，优选选择以下设置：蛋白质权重矩阵：BLOSUM 62；空位开放：10；空位延伸：0.2；空位距离：5；无末端空位。
当通过这种方法比对MDC的氨基酸序列时，无论氨基酸序列中存在的***或缺失，均可以在每个MDC中确定相应氨基酸残基的位置。
在本发明的上下文中，“用另一个氨基酸残基取代”意指所示位置处的相应氨基酸残基可以用任何其他可能的氨基酸残基取代，例如，天然存在的氨基酸或非天然存在的氨基酸(Brustad和Arnold,Curr.Opin.Chem.Biol.15(2011),201-210)，优选用选自丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酰胺、谷氨酸、甘氨酸、组氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、赖氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、丝氨酸、苏氨酸、色氨酸、酪氨酸和缬氨酸的氨基酸残基。下文进一步指出某些位置的优选取代。另外，术语“取代的”或“取代”还意指在所示位置处的相应氨基酸残基被修饰。
这类修饰包括天然发生的修饰和非天然发生的修饰。天然发生的修饰包括但不限于真核翻译后修饰，如连接官能团(例如乙酸酯、磷酸酯、羟基、脂质(甘氨酸残基的肉豆蔻酰化)和糖类(例如精氨酸、天冬酰胺等的糖基化)。天然发生的修饰还涵盖由瓜氨酸化、氨甲酰化和半胱氨酸残基之间二硫键形成所致的化学结构变化；连接辅因子(可以共价连接的FMN或FAD)或连接肽(例如泛素化或SUMO化)。
非天然发生的修饰例如包括体外修饰如赖氨酸残基的生物素化或包含非规范氨基酸(参见Liu和Schultz,Annu.Rev.Biochem.79(2010),413-44和Wang等人,Chem.Bio.2009March 27；16(3),323-336；doi:101 016/jchembiol.2009.03.001)。
在本发明的上下文中，“缺失的”或“缺失”意指相应位置处的氨基酸缺失。
在本发明的上下文中，“***的”或“***”意指在相应位置处***一个或两个，优选地一个氨基酸残基，优选地在所示位置前方***。
在第二方面，本发明提供了3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)的变体，其相对于其源自的相应MDC，显示出将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的改进的活性，其中MDC变体的特征在于与其源自的相应序列相比，它显示一个或多个取代、缺失和/或***，且其中这些取代、缺失和/或***在一个或多个与SEQ ID NO:1所示氨基酸序列的位置405、2、12、13、29、31、33、35、89、114、195、197、221、293、337、351、376、381、388、420、422、435、436、439、441、447、449、500、506和511相对应的位置处出现。
本发明优选实施方案涉及具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的MDC变体，或具有与SEQ ID NO：1具有至少60％序列同一性的氨基酸序列，其中在选自SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中的405、2、12、13、29、31、33、35、89、114、195、197、221、293、337、351、376、381、388、420、422、435、436、439、441、447、449、500、506和511位置上，或在这些位置中任意个对应的位置上的一个或多个氨基酸残基被另一氨基酸残基取代或缺失，或者已在这些位置中的一个或多个处进行了***，并且其中所述MDC变体在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面具有改进的活性。
根据一个实施方案，本发明涉及任意上述MDC变体，其具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，或具有与SEQ ID NO：1具有至少60％序列同一性的氨基酸序列，其中
(1)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第2位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺或缬氨酸取代；和/或
(2)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第12位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸、丙氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(3)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第13位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、缬氨酸或酪氨酸取代；和/或
(4)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第29位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺、组氨酸或丝氨酸取代；和/或
(5)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第31位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸或甘氨酸取代；和/或
(6)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第33位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(7)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第35位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸、丝氨酸或苏氨酸取代；和/或
(8)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第89位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或苯丙氨酸取代；和/或
(9)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第114位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(10)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第195位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸取代；和/或
(11)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第197位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(12)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第221位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(13)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第293位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(14)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第337位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸或亮氨酸取代；和/或
(15)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第351位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸、天冬酰胺、丙氨酸、缬氨酸或甘氨酸取代；和/或
(16)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第376位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(17)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第381位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(18)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第388位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸取代；和/或
(19)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第405位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸或谷氨酰胺取代；和/或
(20)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第420位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(21)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第422位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸取代；和/或
(22)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第435位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸取代；和/或
(23)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第436位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(24)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第439位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(25)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第441位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸取代；和/或
(26)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第447位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被色氨酸、甲硫氨酸或酪氨酸取代；和/或
(27)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第449位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸取代；和/或
(28)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第500位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(29)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第506位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或酪氨酸取代；和/或
(30)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第511位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸或异亮氨酸取代。
本发明还涉及如上文(1)至(30)中所定义的变体，其所示取代SEQ ID NO：1中位置处氨基酸残基的氨基酸残基不是特定的氨基酸残基，而是相对于所示的取代氨基酸的保守氨基酸残基。
某一氨基酸对于另一种氨基酸是否是保守的可以根据本领域已知和如上所述的手段和方法来判断。一种可能的手段和方法是PAM 250矩阵；或者可以使用Blosum FamilyMatrices。
本发明还涉及如上所述的MDC变体，其具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；或具有与SEQ ID NO：1具有至少60％序列同一性的氨基酸序列，其中在选自SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中的405、2、12、13、29、31、33、35、89、114、195、197、221、293、337、351、376、381、388、420、422、435、436、439、441、447、449、500、506和511位置上，或在这些位置中任意个对应的位置上的一个或多个氨基酸残基被另一氨基酸残基取代或缺失，或者已在这些位置中的一个或多个处进行了***，并且还在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中选自3、4、5、6、7、8、9、10、11、14、15、25、30、34、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、206、211、213、214、215、216、222、228、232、244、247、264、278、284、285、303、305、306、326、338、341、342、345、349、352、375、377、384、386、392、395、399、402、404、406、414、429、440、442、443、445、448、454、460、461、462、484、488、493、494、496、501、502、509和512的位置处显示至少一个修饰。
根据一个实施方案，如上所述还在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中选自3、4、5、6、7、8、9、10、11、14、15、25、30、34、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、206、211、213、214、215、216、222、228、232、244、247、264、278、284、285、303、305、306、326、338、341、342、345、349、352、375、377、384、386、392、395、399、402、404、406、414、429、440、442、443、445、448、454、460、461、462、484、488、493、494、496、501、502、509和512的位置处显示至少一个修饰的MDC变体是如下MDC变体，其中
(1)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第3位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、脯氨酸、色氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸或酪氨酸取代；和/或
(2)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第4位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、丝氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(3)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第5位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(4)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第6位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸取代；和/或
(5)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第7位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(6)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第8位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(7)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第9位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、脯氨酸或酪氨酸取代；和/或
(8)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第10位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸、苏氨酸或亮氨酸取代；和/或
(9)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第11位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸、酪氨酸或脯氨酸取代；和/或
(10)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第14位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(11)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第15位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(12)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第25位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺、丝氨酸或色氨酸取代；和/或
(13)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第30位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸、组氨酸或精氨酸取代；和/或
(14)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第34位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或异亮氨酸取代；和/或
(15)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第40位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(16)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第43位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(17)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第57位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(18)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第60位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(19)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第65位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸或色氨酸取代；和/或
(20)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第67位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸或缬氨酸取代；和/或
(21)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第69位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(22)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第70位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或亮氨酸取代；和/或
(23)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第71位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(24)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第72位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(25)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第80位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(26)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第84位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(27)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第85位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或苏氨酸取代；和/或
(28)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第86位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺或异亮氨酸取代；和/或
(29)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第87位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸或色氨酸取代；和/或
(30)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第90位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(31)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第91位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(32)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第99位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺或脯氨酸取代；和/或
(33)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第101位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或亮氨酸取代；和/或
(34)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第102位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(35)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第103位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(36)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第105位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、亮氨酸或色氨酸取代；和/或
(37)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第106位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(38)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第108位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被赖氨酸、精氨酸或色氨酸取代；和/或
(39)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第111位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(40)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第117位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(41)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第120位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或赖氨酸取代；和/或
(42)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第119位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(43)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第126位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸取代；和/或
(44)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第132位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(45)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第141位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(46)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第146位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(47)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第149位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸或丝氨酸取代；和/或
(48)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第154位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被赖氨酸取代；和/或
(49)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第159位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(50)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第160位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(51)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第162位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸、组氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(52)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第175位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸或色氨酸取代；和/或
(53)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第176位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(54)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第187位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(55)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第189位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(56)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第193位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代；和/或
(57)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第206位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(58)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第211位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸取代；和/或
(59)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第213位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸或亮氨酸取代；和/或
(60)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第214位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、苏氨酸或缬氨酸、组氨酸、谷氨酸、精氨酸或苯丙氨酸取代；和/或
(61)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第215位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(62)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第216位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(63)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第222位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(64)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第228位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代；和/或
(65)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第232位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(66)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第244位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(67)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第247位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(68)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第264位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(69)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第278位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(70)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第284位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸或亮氨酸取代；和/或
(71)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第285位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(72)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第303位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或脯氨酸取代；和/或
(73)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第305位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或天冬氨酸取代；和/或
(74)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第306位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、精氨酸或丝氨酸取代；和/或
(75)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第326位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或脯氨酸取代；和/或
(76)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第338位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸、丙氨酸或丝氨酸取代；和/或
(77)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第341位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(78)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第342位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(79)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第345位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(80)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第349位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(81)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第352位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸或亮氨酸取代；和/或
(82)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第375位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(83)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第377位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸取代；和/或
(84)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第384位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸取代；和/或
(85)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第386位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(86)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第392位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸或丙氨酸取代；和/或
(87)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第395位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(88)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第399位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(89)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第402位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸或组氨酸取代；和/或
(90)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第404位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸或色氨酸取代；和/或
(91)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第406位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酰胺取代；和/或
(92)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第414位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(93)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第440位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(94)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第443位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(95)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第448位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸、苯丙氨酸或色氨酸(tryp ophan)取代；和/或
(96)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第454位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(97)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第460位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸或脯氨酸取代；和/或
(98)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第461位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸、天冬酰胺或甲硫氨酸取代；和/或
(99)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第462位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(100)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第484位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或甘氨酸取代；和/或
(101)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第488位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(102)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第493位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(103)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第494位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(104)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第496位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或苯丙氨酸(phenylalai ne)取代；和/或
(105)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第429位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或丝氨酸取代；和/或
(106)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第442位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(107)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第445位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸或脯氨酸取代；和/或
(108)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第501位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸或赖氨酸取代；和/或
(109)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第502位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(110)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第509位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(111)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第512位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、组氨酸或丝氨酸取代。
本发明还涉及下述MDC变体，其具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；或具有与SEQID NO：1具有至少60％序列同一性的氨基酸序列，其中在选自SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中选自3、4、5、6、7、8、9、10、11、14、15、30、34、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、117、119、120、126、132、146、154、159、160、162、175、176、187、189、193、206、211、213、214、215、216、222、228、232、244、247、264、278、284、285、303、305、306、326、338、341、342、345、349、352、375、377、384、386、392、395、399、402、404、406、414、429、440、442、443、445、448、454、460、461、462、484、488、493、494、496、501、502、509和512的位置上，或在这些位置中任意个对应的位置上的一个或多个氨基酸残基被另一氨基酸残基取代或缺失，其中该MDC变体在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面具有改进的活性，且其中
(1)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第3位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、脯氨酸、色氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸或酪氨酸取代；和/或
(2)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第4位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、丝氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(3)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第5位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(4)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第6位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸取代；和/或
(5)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第7位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(6)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第8位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(7)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第9位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、脯氨酸或酪氨酸取代；和/或
(8)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第10位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸、苏氨酸或亮氨酸取代；和/或
(9)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第11位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸、酪氨酸或脯氨酸取代；和/或
(10)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第14位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(11)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第15位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(12)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第30位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸、组氨酸或精氨酸取代；和/或
(13)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第34位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或异亮氨酸取代；和/或
(14)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第40位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(15)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第43位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(16)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第57位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(17)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第60位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(18)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第65位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸或色氨酸取代；和/或
(19)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第67位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸或缬氨酸取代；和/或
(20)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第69位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(21)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第70位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或亮氨酸取代；和/或
(22)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第71位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(23)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第72位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(24)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第80位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(25)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第84位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(26)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第85位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或苏氨酸取代；和/或
(27)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第86位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺或异亮氨酸取代；和/或
(28)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第87位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸或色氨酸取代；和/或
(29)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第90位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(30)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第91位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(31)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第99位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺或脯氨酸取代；和/或
(31)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第101位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或亮氨酸取代；和/或
(33)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第102位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(34)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第103位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(35)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第105位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、亮氨酸或色氨酸取代；和/或
(36)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第106位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(37)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第108位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被赖氨酸、精氨酸或色氨酸取代；和/或
(38)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第111位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(39)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第117位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(40)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第120位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或赖氨酸取代；和/或
(41)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第119位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(42)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第126位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸取代；和/或
(43)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第132位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(44)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第146位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(45)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第154位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被赖氨酸取代；和/或
(46)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第159位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(47)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第160位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(48)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第162位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸、组氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(49)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第175位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸或色氨酸取代；和/或
(50)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第176位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(51)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第187位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(52)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第189位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(53)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第193位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代；和/或
(54)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第206位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(55)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第211位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸取代；和/或
(56)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第213位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸或亮氨酸取代；和/或
(57)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第214位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、苏氨酸或缬氨酸、组氨酸、谷氨酸、精氨酸或苯丙氨酸取代；和/或
(58)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第215位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(59)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第216位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(60)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第222位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(61)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第228位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代；和/或
(62)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第232位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(63)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第244位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(64)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第247位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(65)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第264位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(66)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第278位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(67)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第284位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸或亮氨酸取代；和/或
(68)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第285位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(69)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第303位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或脯氨酸取代；和/或
(70)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第305位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或天冬氨酸取代；和/或
(71)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第306位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、精氨酸或丝氨酸取代；和/或
(72)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第326位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或脯氨酸取代；和/或
(73)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第338位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸、丙氨酸或丝氨酸取代；和/或
(74)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第341位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(75)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第342位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(76)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第345位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(77)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第349位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(78)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第352位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸或亮氨酸取代；和/或
(79)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第375位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(80)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第377位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸取代；和/或
(81)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第384位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸取代；和/或
(82)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第386位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(83)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第392位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸或丙氨酸取代；和/或
(84)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第395位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(85)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第399位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(86)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第402位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸或组氨酸取代；和/或
(87)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第404位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸或色氨酸取代；和/或
(88)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第406位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酰胺取代；和/或
(89)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第414位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(90)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第440位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(91)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第443位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(92)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第448位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸、苯丙氨酸或色氨酸取代；和/或
(93)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第454位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(94)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第460位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸或脯氨酸取代；和/或
(95)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第461位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸、天冬酰胺或甲硫氨酸取代；和/或
(96)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第462位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(97)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第484位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或甘氨酸取代；和/或
(98)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第488位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(99)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第493位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(100)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第494位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(101)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第496位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或苯并氨酸取代；和/或
(102)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第429位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或丝氨酸取代；和/或
(103)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第442位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(104)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第445位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸或脯氨酸取代；和/或
(105)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第501位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸或赖氨酸取代；和/或
(106)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第502位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(107)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第509位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(108)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第512位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、组氨酸或丝氨酸取代。
本发明还涉及下述MDC变体，其具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；或具有与SEQID NO：1具有至少83％、至少85％、或至少87％，优选至少90％或至少95％，甚至更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列，其中在选自SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中的2、3、4、7、8、10、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、111、114、117、119、120、126、141、146、154、159、160、162、176、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、381、384、386、388、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、447、449、460、462、488、493、494、496、500、501、502、506、509和511位置上，或在这些位置中任意个对应的位置上的一个或多个氨基酸残基被另一氨基酸残基取代或缺失，或者已在这些位置中的一个或多个处进行了***，其中该MDC变体在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面具有改进的活性。
根据一个实施方案，本发明涉及任意下述这些MDC变体，其具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，或具有与SEQ ID NO：1具有至少83％、至少85％、或至少87％，优选至少90％或至少95％，甚至更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列，其中
(1)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第2位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸或缬氨酸取代；和/或
(2)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第3位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、脯氨酸、色氨酸、天冬氨酸或酪氨酸取代；和/或
(3)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第4位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、丝氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(4)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第7位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(5)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第8位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(6)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第10位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸、苏氨酸或亮氨酸取代；和/或
(7)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第12位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或天冬酰胺或丙氨酸取代；和/或
(8)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第13位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、缬氨酸或酪氨酸取代；和/或
(9)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第14位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(10)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第15位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(11)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第25位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺、丝氨酸或色氨酸取代；和/或
(12)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第29位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺、组氨酸或丝氨酸取代；和/或
(13)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第30位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸、组氨酸或精氨酸取代；和/或
(14)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第31位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸或甘氨酸或赖氨酸取代；和/或
(15)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第33位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(16)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第34位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或异亮氨酸取代；和/或
(17)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第35位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸、丝氨酸或苏氨酸取代；和/或
(18)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第40位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(19)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第43位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(20)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第57位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(21)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第60位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(22)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第65位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸或色氨酸取代；和/或
(23)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第67位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸或缬氨酸取代；和/或
(24)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第69位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(25)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第70位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或亮氨酸取代；和/或
(26)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第71位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(27)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第72位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(28)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第80位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(29)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第84位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(30)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第85位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或苏氨酸取代；和/或
(31)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第86位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺或异亮氨酸取代；和/或
(32)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第87位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸或色氨酸取代；和/或
(33)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第89位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或苯丙氨酸取代；和/或
(34)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第90位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(35)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第91位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(36)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第99位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺或脯氨酸取代；和/或
(37)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第101位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或亮氨酸取代；和/或
(38)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第102位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(39)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第103位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(40)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第105位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、亮氨酸或色氨酸取代；和/或
(41)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第111位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(42)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第117位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(43)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第114位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(44)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第119位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(45)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第120位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(46)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第126位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸取代；和/或
(47)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第141位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(48)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第146位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(49)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第159位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(50)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第160位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(51)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第162位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸、组氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(52)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第176位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(53)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第189位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(54)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第193位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代；和/或
(55)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第195位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸取代；和/或
(56)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第197位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(57)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第206位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(58)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第211位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸取代；和/或
(59)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第213位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸或亮氨酸取代；和/或
(60)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第214位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、苏氨酸、组氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、精氨酸或缬氨酸取代；和/或
(61)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第215位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(62)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第216位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(63)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第221位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(64)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第222位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(65)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第228位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代；和/或
(66)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第232位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(67)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第244位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(68)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第247位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(69)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第264位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(70)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第278位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(71)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第284位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸或亮氨酸取代；和/或
(72)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第285位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(73)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第293位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(74)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第303位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或脯氨酸取代；和/或
(75)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第305位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或天冬氨酸取代；和/或
(76)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第306位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、精氨酸或丝氨酸取代；和/或
(77)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第326位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或脯氨酸取代；和/或
(78)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第337位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸或亮氨酸取代；和/或
(79)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第338位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸、丙氨酸或丝氨酸取代；和/或
(80)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第341位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(81)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第342位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(82)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第345位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(83)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第349位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(84)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第352位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸或亮氨酸取代；和/或
(85)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第351位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸、天冬酰胺、丙氨酸(alaine)或缬氨酸或甘氨酸取代；和/或
(86)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第375位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(88)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第376位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(89)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第381位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(90)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第384位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸取代；和/或
(91)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第386位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(92)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第388位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸取代；和/或
(93)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第395位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(94)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第399位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(95)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第402位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸或组氨酸取代；和/或
(96)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第404位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸或色氨酸取代；和/或
(97)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第405位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸或谷氨酰胺取代；和/或
(98)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第406位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酰胺取代；和/或
(99)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第414位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(100)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第420位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(101)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第422位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸取代；和/或
(102)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第429位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或丝氨酸取代；和/或
(103)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第435位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸取代；和/或
(104)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第436位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(105)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第439位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(106)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第440位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(107)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第441位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸取代；和/或
(108)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第442位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(109)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第443位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(110)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第447位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被色氨酸、甲硫氨酸或酪氨酸取代；和/或
(111)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第449位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸取代；和/或
(112)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第460位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸或脯氨酸取代；和/或
(113)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第462位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(114)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第488位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(115)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第493位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(116)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第494位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(117)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第496位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或苯并氨酸取代；和/或
(118)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第500位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(119)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第501位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、甘氨酸或甲硫氨酸或赖氨酸取代；和/或
(120)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第502位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(121)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第506位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或酪氨酸取代；和/或
(122)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第509位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(123)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第511位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸或异亮氨酸取代。
本发明还涉及如上文(1)至(123)中所定义的变体，其所示取代SEQ ID NO：1中位置处氨基酸残基的氨基酸残基不是特定的氨基酸残基，而是相对于所示的取代氨基酸的保守氨基酸残基。
某一氨基酸对于另一种氨基酸是否是保守的可以根据本领域已知和如上所述的手段和方法来判断。一种可能的手段和方法是PAM 250矩阵；或者可以使用Blosum FamilyMatrices。
本发明还涉及下述MDC变体，其具有SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列；或具有与SEQID NO：1具有至少95％，优选至少97％，甚至更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列，其中在选自SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中的2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512位置上，或在这些位置中任意个对应的位置上的一个或多个氨基酸残基被另一氨基酸残基取代或缺失，或者已在这些位置中的一个或多个处进行了***，其中该MDC变体在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面具有改进的活性。
根据一个实施方案，本发明涉及任意下述这些MDC变体，其具有如SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列，或具有与SEQ ID NO：1具有至少95％，优选至少97％，甚至更优选至少98％序列同一性的氨基酸序列，其中
(1)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第2位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺、半胱氨酸或缬氨酸取代；和/或
(2)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第3位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、脯氨酸、色氨酸、天冬氨酸或酪氨酸取代；和/或
(3)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第4位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、丝氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(4)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第5位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(5)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第6位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸取代；和/或
(6)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第7位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(7)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第8位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(8)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第9位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、脯氨酸或酪氨酸取代；和/或
(9)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第10位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸、苏氨酸或亮氨酸取代；和/或
(10)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第11位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸、酪氨酸或脯氨酸取代；和/或
(11)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第12位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或天冬酰胺或丙氨酸取代；和/或
(12)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第13位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、缬氨酸或酪氨酸取代；和/或
(13)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第14位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(14)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第15位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(15)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第25位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺、丝氨酸或色氨酸取代；和/或
(16)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第29位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺、组氨酸或丝氨酸取代；和/或
(17)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第30位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸、组氨酸或精氨酸取代；和/或
(18)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第31位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸或甘氨酸或赖氨酸取代；和/或
(19)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第33位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(20)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第34位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或异亮氨酸取代；和/或
(21)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第35位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸、丝氨酸或苏氨酸取代；和/或
(22)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第40位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(23)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第43位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(24)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第57位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(25)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第60位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(26)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第65位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸或色氨酸取代；和/或
(27)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第67位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸或缬氨酸取代；和/或
(28)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第69位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(29)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第70位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或亮氨酸取代；和/或
(30)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第71位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(31)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第72位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(32)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第80位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(33)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第84位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(34)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第85位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或苏氨酸取代；和/或
(35)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第86位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺或异亮氨酸取代；和/或
(36)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第87位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸或色氨酸取代；和/或
(37)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第89位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或苯丙氨酸取代；和/或
(38)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第90位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(39)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第91位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(40)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第99位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺或脯氨酸取代；和/或
(41)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第101位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或亮氨酸取代；和/或
(42)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第102位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(43)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第103位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(44)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第105位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、亮氨酸或色氨酸取代；和/或
(45)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第106位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(46)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第108位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被赖氨酸、精氨酸或色氨酸取代；和/或
(47)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第111位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(48)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第117位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(49)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第114位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(50)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第119位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(51)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第120位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(52)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第126位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸取代；和/或
(53)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第132位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(54)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第141位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(55)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第146位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(56)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第149位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸或丝氨酸取代；和/或
(57)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第159位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(58)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第160位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(59)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第162位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸、组氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(60)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第175位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸或色氨酸取代；和/或
(61)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第176位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(62)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第187位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(63)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第189位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(64)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第193位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代；和/或
(65)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第195位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸取代；和/或
(66)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第197位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(67)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第206位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(68)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第211位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸取代；和/或
(69)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第213位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸或亮氨酸取代；和/或
(70)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第214位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、苏氨酸、组氨酸、谷氨酸、苯丙氨酸、精氨酸或缬氨酸取代；和/或
(71)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第215位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(72)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第216位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(73)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第221位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(74)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第222位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(75)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第228位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代；和/或
(76)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第232位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(77)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第244位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(78)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第247位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(79)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第264位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(80)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第278位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(81)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第284位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸或亮氨酸取代；和/或
(82)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第285位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(83)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第293位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(84)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第303位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或脯氨酸取代；和/或
(85)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第305位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或天冬氨酸取代；和/或
(86)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第306位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、精氨酸或丝氨酸取代；和/或
(87)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第326位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或脯氨酸取代；和/或
(88)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第337位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸或亮氨酸取代；和/或
(89)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第338位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸、丙氨酸或丝氨酸取代；和/或
(90)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第341位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(91)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第342位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(92)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第345位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(93)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第349位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(94)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第352位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸或亮氨酸取代；和/或
(95)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第351位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸、天冬酰胺、丙氨酸或缬氨酸或甘氨酸取代；和/或
(96)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第375位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(97)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第377位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸取代；和/或
(98)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第376位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(99)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第381位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(100)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第384位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸取代；和/或
(101)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第386位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(102)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第388位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸取代；和/或
(103)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第392位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸或丙氨酸取代；和/或
(104)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第395位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(105)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第399位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(106)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第402位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸或组氨酸取代；和/或
(107)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第404位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸或色氨酸取代；和/或
(108)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第405位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸或谷氨酰胺取代；和/或
(109)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第406位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酰胺取代；和/或
(110)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第414位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(111)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第420位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(112)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第422位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸取代；和/或
(113)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第429位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或丝氨酸取代；和/或
(114)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第435位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸取代；和/或
(115)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第436位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(116)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第439位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(117)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第440位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(118)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第441位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸取代；和/或
(119)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第442位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(120)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第443位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(121)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第445位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸或脯氨酸取代；和/或
(122)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第447位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被色氨酸、甲硫氨酸或酪氨酸取代；和/或
(123)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第448位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸、苯丙氨酸或色氨酸取代；和/或
(124)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第449位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸取代；和/或
(125)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第454位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(126)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第460位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸或脯氨酸取代；和/或
(127)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第461位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸、天冬酰胺或甲硫氨酸取代；和/或
(128)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第462位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(129)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第484位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或甘氨酸取代；和/或
(130)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第488位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(131)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第493位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(132)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第494位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(133)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第496位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或苯并氨酸取代；和/或
(134)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第500位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(135)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第501位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、甘氨酸或甲硫氨酸或赖氨酸取代；和/或
(136)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第502位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(137)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第506位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或酪氨酸取代；和/或
(138)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第509位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(139)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第511位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸或异亮氨酸取代；和/或
(140)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第512位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸、组氨酸或丝氨酸取代。
本发明还涉及如上文(1)至(140)中所定义的变体，其所示取代SEQ ID NO：1中位置处氨基酸残基的氨基酸残基不是特定的氨基酸残基，而是相对于所示的取代氨基酸的保守氨基酸残基。
某一氨基酸对于另一种氨基酸是否是保守的可以根据本领域已知和如上所述的手段和方法来判断。一种可能的手段和方法是PAM 250矩阵；或者可以使用Blosum FamilyMatrices。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：T405M、T405F、T405L、T405Q或T405P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第2位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：S2Q、S2A、S2K、S2L、S2V、S2F或S2N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第195位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：L195M、L195C、L195I、L195W、L195Y、L195V或L195F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第3位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：S3A、S3Y、S3W、S3G、S3P或S3E。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第449位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：L449I、L449M或L449V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第4位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：T4E、T4M或T4L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第293位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：M293L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第40位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：V40M或V40I。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第35位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：D35M、D35T或D35S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第422位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：K422M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第285位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：A285L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第448位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q448W或Q448S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第34位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：V34A或V34I。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第12位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：D12S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第500位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：L500A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第351位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：D351R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第214位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q214T、Q214A或Q214V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第9位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E9Y、E9H或E9P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第447位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：F447W或F447Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第114位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：L114S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第13位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：P13N、P13I、P13Y、P13S或P13H。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第11位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：F11P或F11L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第43位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：D43R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第420位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：D420L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第439位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：V439L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第337位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：I337M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第506位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：L506I。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第120位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：P120S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第429位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：T429S或T429A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第436位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：T436N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第435位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：G435M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第149位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：A149V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第29位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N或Q29S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第10位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：A10H。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第31位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：N31G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第25位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第501位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：N501K。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第197位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：I197F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第146位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：A146S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第442位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：D442T。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第445位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：V445P或V445E。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第33位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：L33I。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第381位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：A381R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第221位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：L221C。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第141位或位于与该位置对应的位置上，并且其中这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：N141D。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少一个缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第441位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：F441Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第3位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第511位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：S3K-L511M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第4位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第91位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：T4N-F91L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第3位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第284位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：S3K-M284Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第2位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第89位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：S2D-E89S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第31位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第501位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：N31E-N501E。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第376位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第388位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、377、381、384、386、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：T376I-A388E。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第29位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第351位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-D351N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第29位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第448位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第420位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：T405M-D420L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第351位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：D351N-T405M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第29位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-T405M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少两个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第448位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：T405M-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少三个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第351位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上，再一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第445位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：D351R-T405M-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少三个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第351位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上，再一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第448位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：D351R-T405M-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少三个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第25位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第31位或位于与该位置对应的位置上，再一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、29、30、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-T405M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少三个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第29位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上，再一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第429位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-T405M-T429A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少三个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第29位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上，再一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第448位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-T405M-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少三个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第31位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上，再一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第445位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：N31G-T405M-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少三个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第25位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上，再一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第429位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-T405M-T429A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含至少三个缺失、取代和/或***，其中一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第31位或位于与该位置对应的位置上，另一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第405位或位于与该位置对应的位置上，再一个缺失/***/取代位于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的第448位或位于与该位置对应的位置上。优选地，这种变体与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：N31G-T405M-Q448W。
在其他优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含多个突变。如在下面的实施例中进一步举例说明，已发现具有多个突变的变体，其表现出3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的反应速率增加。具有多个突变的这些变体总结如下：
因此，在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQID NO：1所示的氨基酸序列的第351、405、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：D351R-T405M-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第29、351、405、429、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、29、405、435和445位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-Q29N-T405M-G435M-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、29、31、405、435和445位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-Q29N-N31G-T405M-G435M-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第29、31、405和429位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29H-N31G-T405M-T429A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、29、31、351、405和445位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-Q29N-N31G-D351R-T405M-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第29、351、405和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-D351N-T405M-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第31、351、405、429和445位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：N31G-D351R-T405M-T429A-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、29、31、405和429位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-Q29N-N31G-T405M-T429A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第29、31、351、405和429位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-N31G-D351R-T405M-T429A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第31、405、420、429、445位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：N31G-T405M-D420L-T429A-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、29、351、405、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-Q29H-D351R-T405M-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、351、405、435、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-D351R-T405M-G435M-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第86、405、429、435、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：S86N-T405M-T429A-G435M-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、29、31、351、405和429位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-Q29N-N31G-D351R-T405M-T429A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第29、351、405、414、429、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-D351R-T405M-D414N-T429A-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第31、351、405、429、435和445位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：N31G-D351R-T405M-T429A-G435M-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、405、429和445位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-T405M-T429A-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、351、405、429和445位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-D351R-T405M-T429A-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、405、429和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-T405M-T429A-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、405和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-T405M-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、29、405、429和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-Q29N-T405M-T429A-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第29、31、351、405、429、435和445位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-N31G-D351R-T405M-T429A-G435M-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第31、405、420、429、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：N31G-T405M-D420L-T429A-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第29、31、351、405、429和445位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-N31G-D351G-T405M-T429A-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第29、405、429、435、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-T405M-T429A-G435M-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第29、31、405、429和445位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-N31G-T405M-T429A-V445P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、435、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-G435M-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第31、351、405、429和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：N31G-D351R-T405M-T429A-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第12、29、31、405、429、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：D12N-Q29N-N31G-T405M-T429A-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第29、31、405、429和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：Q29N-N31G-T405M-T429A-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、405、429、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-T405M-T429A-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、405、429、435、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-T405M-T429A-G435M-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、29、31、405、429、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-Q29N-N31G-T405M-T429A-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、405、429、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-T405M-T429A-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和120位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-P120K。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和303位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-H303S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351G-T405M-T429A-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和264位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-N264D。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和392位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-R392L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和221位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-L221C。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和305位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-G305A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、44、448和85位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S85A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和214位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q214V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和402位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-P402V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和228位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-T228L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和119位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-I119T。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和10位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-A10L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和484位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S484A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和214位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q214E。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和214位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q214A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和211位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-A211E。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和501位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-N501M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和214位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q214F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和228位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-T228V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和57位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-D57N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和512位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-D512E。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和484位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S484G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和149位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-A149V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、3、86、162、384和392位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S3C-S86I-Q162P-T384Y-R392A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、162、228和392位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q162N-T228L-R392A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、162和392位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q162N-R392A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、162、228、392、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q162N-T228L-R392A-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、85、162、214、228、338和461位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S85A-Q162N-Q214H-T228L-G338P-I461V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、175、228、392、399和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-C175G-T228L-R392A-T399R-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、85、162、175、228、338、399和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-T399R-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、85、162、228、338和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S85A-Q162N-T228L-G338P-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、85、162、175、228、338、399、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-T399R-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、85、162、228、338、392、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S85A-Q162N-T228L-G338P-R392A-I461M-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、162、228、338、392和461位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q162N-T228L-G338P-R392A-I461V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、162、175、228、338、392、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q162N-C175G-T228L-G338P-R392A-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、85、175、228、338、392、399、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S85A-C175G-T228L-G338P-R392A-T399R-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、85、162、175、228、338、392、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-R392A-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、228、338、392、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-T228L-G338P-R392A-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、305和402位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-G305A-P402V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、305和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-G305A-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、305、402和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-G305A-P402V-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和8位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S8N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和10位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-A10H。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和117位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-N117A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和132位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-V132C。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和175位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-C175G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和175位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-C175K。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和175位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-C175S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和187位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S187T。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和193位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-A193T。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和197位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-I197M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和222位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-A222C。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和228位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-T228A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和247位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-V247A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和342位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-A342G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和399位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-T399N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和440位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-F440V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和460位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-A460P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和488位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-K488A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和501位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-N501G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和502位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S502N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448和506位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-L506Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和15位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P15T。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和30位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-D30G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和30位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-D30H。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和30位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-D30R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、65位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-N65W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和65位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-N65L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和70位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-K70L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和72位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-G72R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和80位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P80L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和87位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P87V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和87位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P87I。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和90位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-R90L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、103位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-T103L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和105位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-S105W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和105位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-S105F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和108位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-D108R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和108位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-D108W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和126位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-I126P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175P-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和176位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-W176F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和213位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-G213L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和213位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-G213P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和305位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-G305D。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和306位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P306R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和306位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P306S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和326P位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-C326P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338S-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、351、392、405、429、445、448、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和341位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-A341I。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351V-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和402位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P402H。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和406位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-I406Q。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461N-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、103和111位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-T103I
-D111C。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、14和87位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-E14D-P87A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、176和511位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-W176F-L511I。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和352位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25W-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-A352L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和352位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25S-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-A352G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、278和326位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-T278I-C326P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、341、386和395位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-A341I-G386N-D395C。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和349位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351A-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-C349S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、7和176位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-K7R-W176F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、84和493位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ I D NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P–D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-R84C-K493R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、87和159位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P87W-K159C。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、87、488和496位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P87C-K488N-Q496A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、89和496位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-E89F-Q496F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、377、402、404、405、429、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-K377H-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、305、377和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-G305A-K377H-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、305、306和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-G305A-P306F-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、377和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-K377H-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、306和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P306F-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、306和377位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P306F-K377H。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、338、351、392、405、429、445、448、461、494、306、377和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G338P-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P306F-K377H-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和12位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-D12A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和35位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-D35T。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和60位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A60V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和70位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-K70I。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和70位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-K70L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和87位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-P87F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和87位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-P87L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和87位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-P87M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和87位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-P87V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和87位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-P87W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和99位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A99P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和101位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-P101I。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和101位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-P101L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和102位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-P102L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和103位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-T103L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和105位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-S105L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和108位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-D108R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和189位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-K189I。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和193位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A193I。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和215位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-E215C。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和244位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A244F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和326位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-C326A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和375位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-D375L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和443位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-D443N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和460位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A460F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448、102和484位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-P102L-S484A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448、108和160位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-D108K-Y160F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448、11和512位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-F11Y-D512S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、351、405、429、445、448、85、103、162、175、228、338、392和461位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-D351R-T405M-T429A-V445P-Q448W-S85T-T103M-Q162H-C175W-T228P-G338A-R392A-I461M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、445、448和87位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-V445P-Q448W-P87F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第E25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和3位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-S3G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448、和4位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-T4A。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和5位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-T5S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和10位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A10F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和10位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A10P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和10位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A10T。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和67位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I67R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和67位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I67V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和71位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-D71G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和99位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A99N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和149位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A149S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和154位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q154K。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和193位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A193T。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和193位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A193V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和206位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q206F。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和214位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-Q214R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和232位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-A232V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和284位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-M284L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、40、404、405、429、445、448和303位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-H303P。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、402、404、405、429、445、448和462N位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-K462N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、351、392、405、429、445、448、494、305、402和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-S494R-G305A-P402V-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、351、392、405、429、445、448、461、494、305、402和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-G305A-P402V-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、351、392、405、429、445、448、494、228、305、402和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-S494R-L228T-G305A-P402V-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、351、392、405、429、445、448、494、305、377、402和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-S494R-G305A-K377H-P402V-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、351、392、405、429、445、448、461、494、228、305和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-L228T-G305A-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、351、392、405、429、445、448、461、494、305、377和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-G305A-K377H-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、351、392、405、429、445、448、461、494、305和404位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-G305A-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、351、392、405、429、445、448、461、494、305、377、402和404Y位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-G305A-K377H-P402V-F404Y。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、351、392、405、429、445、448、461、494、305和377位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-D351R-R392A-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-G305A-K377H。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494和2位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-S2N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、46、494和10位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-A10K。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494和13位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-P13S。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494和69位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-A69N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494和106位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-A106T。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175T-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175K-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175Q-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494和216位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-E216N。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494和345位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-I345L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494和454位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-S454G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494、3和509位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-S3D-K509L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494、4和13位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-T4S-P13V。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494、6和512位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-Y6P-D512H。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405F-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494和454位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405F-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-S454G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494和447位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404W-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-F447M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494和337位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-I461V-S494R-I337L。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461、494和197位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448F-I461V-S494R-I197M。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、85、162、175、228、305、351、377、392、402、404、405、429、445、448、461和494位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-S85A-Q162N-C175G-T228L-G305A-D351R-K377H-R392A-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448F-I461V-S494R。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、377、402、404、405、429、445、448和454位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-K377H-P402V-F404Y-T405M-T429A-V445P-Q448W-S454G。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、377、402、404、405、429、445和448位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-K377H-P402V-F404Y-T405F-T429A-V445P-Q448W。
在优选的实施方案中，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进活性的本发明的MDC变体的特征在于包含缺失、取代和/或***，其中该缺失/***/取代位于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的第25、31、305、351、377、402、404、405、429、445、448和454位或位于与这些位置对应的位置上。优选地，这种变体在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中具有以下取代，或在与下述取代发生的位置对应的位置具有以下取代：E25N-N31G-G305A-D351R-K377H-P402V-F404Y-T405F-T429A-V445P-Q448W-S454G。
优选地，上述具有多个突变的变体中的任意个与其源自的相应序列相比，还具有一个或多个取代、缺失和/或***，并且其中这些取代、缺失和/或***发生在对应于SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的位置2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305、306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414、420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512的一个或多个位置上。
在第三方面，本发明提供了3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)的变体，其相对于其源自的相应MDC，显示出将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的改进的活性，其中MDC变体的特征在于与其源自的相应序列相比，它包含取代、缺失和/或***，且其中该取代、缺失和/或***出现在下述MDC氨基酸基序的第5位：
K-X2-G-x4-X5-X6-H-R-X9-X10-X11-x12-G，
其中第2位的氨基酸X2是选自A、P和V的氨基酸，
其中第4位的氨基酸x4是任意氨基酸，
其中第5位的氨基酸X5是选自A、P和T的氨基酸，
其中第6位的氨基酸X6是选自F、I和M的氨基酸，
其中第9位的氨基酸X9是选自I和L的氨基酸，
其中第10位的氨基酸X10是选自A、I、L和V的氨基酸，
其中第11位的X11氨基酸是选自I、L和V的氨基酸，
其中第12位的氨基酸x12是任意氨基酸，
且其中第5位的取代不产生A、P或T。
在另一优选的实施方案中，上述3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)变体是具有SEQ IDNO：1所示的氨基酸序列的变体；或是源自SEQ ID NO：1的序列；或是与SEQ ID NO：1具有至少60％序列同一性的氨基酸序列；或是源自SEQ ID NO：1的序列，其中SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中的氨基酸基序K-X2-G-x4-X5-X6-H-R-X9-X10-X11-x12-G上第5位的一个氨基酸被取代、缺失和/或***；或是源自SEQ ID NO：1的序列，其中在对应该位点的位置上的一个氨基酸被取代、缺失和/或***，且其中该MDC变体在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面具有改进的活性。
具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)或源自SEQ IDNO：1的序列的上述变体不限于具体序列。源自SEQ ID NO：1的序列可以是具有氨基酸基序K-X2-G-x4-X5-X6-H-R-X9-X10-X11-x12-G且具有将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的活性的任何序列。源自自SEQ ID NO：1，具有氨基酸基序K-X2-G-x4-X5-X6-H-R-X9-X10-X11-x12-G，并具有将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的活性的序列的实例如表5所示。
在优选的实施方案中，上述3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)变体是其中MDC的氨基酸基序K-X2-G-x4-X5-X6-H-R-X9-X10-X11-x12-G上第5位的氨基酸缺失，或被M或F取代的变体。
在另一个优选的实施方案中，上述3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)变体是与下述氨基酸序列具有至少n％序列同一性的变体，所述氨基酸序列如具有选自表5中所示的UniProt登录号的UniProt登录号的蛋白质的氨基酸序列所示，n为n为60-100之间的整数，优选是60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99。关于序列同一性的确定，如上所述同样适用。
本发明还涉及提供MDC变体的方法，其中所述变体显示出在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面改进的活性，所述方法包括在MDC序列中进行一个或多个改变的步骤，其中所述改变在选自对应于SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中的下述氨基酸位置中的一个或多个氨基酸位置上进行：2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12，13、14、15、25、29、30、31、33、34、35、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87，89、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、114、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、195、197、206、211、213、214、215、216、221、222、228、232、244、247、264、278、284、285、293、303、305，306、326、337、338、341、342、345、349、351、352、375、376、377、381、384、386、388、392、395、399、402、404、405、406、414，420、422、429、435、436、439、440、441、442、443、445、447、448、449、454、460、461、462、484、488、493、494、496、500、501、502、506、509、511和512。“对应于”意味着对应于相关序列中的任何这些位置。
关于根据这种方法待突变的MDC的优选实施方案，本文如上所述同样适用。
在一个优选的实施方案中，MDC变体所源自的MDC是下述MDC，其显示如SEQ ID NO：1中所示的氨基酸序列，或与SEQ ID NO：1具有至少60％、70％、80％或90％序列同一性的氨基酸序列，或与SEQ I D NO：1具有本文如上所述的任何优选的序列同一性程度的氨基酸序列。
此外，关于活性改进程度和要进行的改变的优选实施方案，本文如上所述同样适用。
在任何上述一个或多个位置进行的改变是如上文所定义的一个或多个取代、缺失和/或***。
本发明的MDC变体可以与同源或异源多肽或蛋白质、酶、底物或标签融合，以形成融合蛋白。本发明的融合蛋白将具有与本发明MDC变体相同的改进的活性。可以添加至另一种蛋白质的多肽、酶、底物或标签是本领域已知的。它们可以用于纯化或检测本发明的蛋白质。例如，可以用于检测和/或纯化的标签例如是FLAG标签、His6标签或链霉亲和素标签。备选地，本发明的蛋白质可以与酶例如萤光素酶融合，以检测或定位所述蛋白质。其他融合配偶体包括但不限于细菌β-半乳糖苷酶、trpE、A蛋白、β-内酰胺酶、α淀粉酶、醇脱氢酶或酵母α交配因子。还可构思在例如纯化后从本发明的蛋白质移除多肽、酶、底物或标签。融合蛋白一般可以通过现有技术中已知的重组核酸方法或通过合成多肽方法产生
本发明还涉及编码本发明MDC变体的核酸分子并涉及包含所述核酸分子的载体。可以根据本发明使用的载体是本领域已知的。所述载体还可以包含与包含于载体中的本发明核酸分子有效连接的表达控制序列。这些表达控制序列可以适用于确保可翻译性RNA在细菌或真菌中的转录和合成。表达控制序列可以例如是启动子。相对于其来源和/或相对于待表达的基因，用于与本发明核酸分子连接的启动子可以是同源或异源的。合适的启动子是例如自身导致组成型表达的启动子。然而，也可以使用仅在由外部影响所决定的时间点激活的启动子。在这种情况下，可以使用人工和/或化学诱导型启动子。
优选地，本发明的载体是表达载体。已经在文献中广泛描述表达载体。通常，它们不仅含有选择标记基因和确保在选择的宿主中复制的复制起点，还含有细菌启动子或病毒启动子，和在大多数情况下转录终止信号。在启动子和终止信号之间通常存在使得***编码DNA序列成为可能的至少一个限制性位点或多接头。如果在选择的宿主生物中有活性，则天然控制相应基因的转录的DNA序列可以用作启动子序列。然而，这种序列也可以交换为其他启动子序列。可以使用确保基因组成型表达的启动子和允许有意控制基因表达的诱导型启动子。文献中详述了拥有这些特性的细菌启动子和病毒启动子序列。文献中充分描述了用于微生物(例如大肠杆菌、酿酒酵母)中表达的调节序列。允许特别高地表达下游序列的启动子例如是T7启动子(Studier等人,Methods in Enzymology 185(1990),60-89)、lacUV5、trp、trp-lacUV5(DeBoer等人,引自Rodriguez和Chamberlin(编著),Promoters,Structure and Function；Praeger,New York,(1982),462-481；DeBoer等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1983),21-25)、lp1、r ac(Boros等人,Gene 42(1986),97-100)。诱导型启动子优选地用于多肽的合成。这些启动子经常导致比组成型启动子更高的多肽产量。为了获得最佳多肽量，经常使用两阶段方法。首先，将宿主细胞在最佳条件下培养，直至相对高的细胞密度。在第二步骤中，根据使用的启动子的类型，诱导转录。在这个方面，tac启动子是特别合适的，所述tac启动子可以由乳糖或IPTG(＝异丙基-β-D-硫代半乳糖吡喃糖苷)诱导(deBoer等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 80(1983),21-25)。文献中也描述了转录的终止信号。
另外，本发明涉及包含本发明的核酸分子或载体的宿主细胞。
在优选实施方案中，本发明的宿主细胞是微生物，尤其细菌或真菌。在更优选的实施方案中，本发明的宿主细胞是大肠杆菌、梭菌属(Clostridi um)细菌或酵母细胞，如酿酒酵母(S.cerevisiae)。在另一个优选实施方案中，宿主细胞是植物细胞或非人类动物细胞。
可以通过例如Sambrook和Russell(2001),Molecular Cloning:A L aboratoryManual,CSH Press,Cold Spring Harbor,NY,USA；Metho ds in Yeast Genetics,ALaboratory Course Manual,Cold Spring Har bor Laboratory Press,1990中描述的标准方法，实施用本发明的载体转化宿主细胞。宿主细胞在满足所用具体宿主细胞要求(尤其在pH值、温度、盐浓度、通气、抗生素、维生素、微量元素等方面)的营养培养基中培养。
如上所述，利用MDC将3-甲基巴豆酸酶促转化为异丁烯优选与FM N异戊烯基转移酶相关，并依赖于由两种酶催化的两个连续步骤的反应，这两种酶即MDC(催化3-甲基巴豆酸实际脱羧成异丁烯)与FMN异戊烯基转移酶，其提供修饰的黄素辅因子。黄素辅因子可以优选为FMN或FAD。FMN(黄素单核苷酸；也称为核黄素-5'-磷酸)是由酶，核黄素激酶，从核黄素(维生素B2)产生的生物分子，并且作为各种反应的辅基基团起作用。FAD(黄素腺嘌呤二核苷酸)是氧化还原辅因子，更具体地是辅基基团，参与代谢中的几个重要反应。因此，在优选的实施方案中，当从3-甲基巴豆酸产生异丁烯包括将本发明的MDC变体与3-甲基巴豆酸一起温育的步骤时，存在FMN异戊烯基转移酶，其在第一步中修饰黄素辅因子(FMN或FAD)成(修饰的)黄素衍生的辅因子。FMN异戊烯基转移酶将黄素辅因子(FMN或FAD)的黄素环异戊烯基化成(修饰的)异戊烯基化的黄素辅因子。该反应在图1A中示意性地示出。
在第二步中，3-甲基巴豆酸到异丁烯的实际转化由所述MDC变体经由基于1,3-偶极环加成的机理催化，其中所述FMN依赖性脱羧酶使用通过相关的FMN异戊烯基转移酶提供的异戊烯基化黄素辅因子(FMN或FAD)。该反应在图1B中示意性地示出。
因此，优选地，本发明的宿主细胞是表达能够将黄素辅因子(FMN或FAD)修饰成(修饰的)黄素衍生的辅因子的FMN异戊烯基转移酶的细胞。在优选的实施方案中，宿主细胞是天然(内源地)表达FMN异戊烯基转移酶的细胞。在另一个优选的实施方案中，宿主细胞是通过例如引入编码FMN异戊烯基转移酶的核酸分子或包含这种核酸分子的载体重组表达FMN异戊烯基转移酶的细胞。
在优选的实施方案中，将黄素辅因子(FMN或FAD)修饰成(经修饰的)黄素衍生辅因子的所述FMN异戊烯基转移酶是苯基丙烯酸脱羧酶(PAD)型蛋白或紧密相关的原核生物酶UbiX，其是涉及原核生物中的泛醌生物合成的酶。
在大肠杆菌中，UbiX蛋白(也称为3-八异戊烯基-4-羟基苯甲酸羧基裂合酶)已被证明参与泛醌生物合成的第三步。
它催化反应3-八异戊烯基-4-羟基苯甲酸2-八异戊烯基苯酚+CO2。
因此，在优选的实施方案中，将黄素辅因子(FMN或FAD)修饰成相应的(修饰的)黄素衍生辅因子是由含FMN的蛋白质苯基丙烯酸脱羧酶(PAD)催化的。涉及将黄素辅因子(FMN或FAD)修饰成相应的修饰的黄素衍生辅因子的酶最初被注释为脱羧酶(EC4.1.1.-)。一些苯基丙烯酸脱羧酶(PAD)现在被注释为黄素异戊烯基转移酶EC 2.5.1.-。
在更优选的实施方案中，3-甲基巴豆酸转化成异丁烯使用苯基丙烯酸脱羧酶(PAD)型蛋白作为FMN异戊烯基转移酶，其将黄素辅因子(FMN或FAD)修饰成相应的(修饰的)黄素衍生的辅因子，其中所述苯基丙烯酸脱羧酶(PAD)型蛋白质来源于白假丝酵母(Uniprot登录号Q5A8L8)、黑曲霉(Uniprot登录号A3F715)、酿酒酵母(Uniprot登录号P33751)或加特隐球酵母(Cryptococcus gattii)(Uniprot登录号E6R9Z0)。
在一个优选的实施方案中，本发明方法中使用的苯基丙烯酸脱羧酶(PAD)型蛋白质是来源于白假丝酵母(Uniprot登录号Q5A8L8；SEQ ID NO:3)、黑曲霉(Uniprot登录号A3F715；SEQ ID NO:4)、酿酒酵母(Uniprot登录号P33751；SEQ ID NO:5)或加特隐球酵母(Uniprot登录号E6R9Z0；SEQ ID NO:6)的苯基丙烯酸脱羧酶(PAD)型蛋白质，具有如分别如SEQ ID NO:3、SEQ ID NO:4、SEQ ID NO:5和SEQ ID NO:6所示的氨基酸序列。
在本发明的优选实施方案中，苯基丙烯酸脱羧酶(PAD)型蛋白质是包含选自SEQID NO:3-6的氨基酸序列或与SEQ ID NO:3-6任一个具有至少n％同一性的序列的酶，其中n为10-100之间的整数，优选为10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99，其中所述酶具有将黄素辅因子(FMN或FAD)修饰成相应的(修饰的)黄素衍生的辅因子的酶促活性。
关于序列同一性的确定，上述内容同样适用。
在另一个优选的实施方案中，将黄素辅因子(FMN或FAD)修饰成相应的(修饰的)黄素衍生的辅因子由含FMN的蛋白质3-八异戊烯基-4-羟基苯甲酸羧基裂合酶(也称为UbiX(最初注释EC4.1.1.-))催化。如上所述，涉及将黄素辅因子(FMN或FAD)修饰成相应的修饰的黄素衍生辅因子的酶最初被注释为脱羧酶。一些苯基丙烯酸脱羧酶(PAD)现在被注释为黄素异戊烯基转移酶EC 2.5.1.-。
在更优选的实施方案中，3-甲基巴豆酸转化为异丁烯使用3-八异戊烯基-4-羟基苯甲酸羧基裂合酶(也称为UbiX)作为FMN异戊烯基转移酶，其将黄素辅因子(FMN或FAD)修饰为相应的(修饰的)黄素衍生的辅因子，其中所述3-八异戊烯基-4-羟基苯甲酸羧基裂合酶(也称为UbiX)源自大肠杆菌(Uniprot登录号P0AG03)，枯草芽孢杆菌(Uniprot登录号A0A086WXG4)，绿脓假单胞菌(Pseudomonas aeruginosa，Uniprot登录号A0A072ZC W8)或肠杆菌属DC4(Uniprot登录号W7P6B1)。
在甚至更优选的实施方案中，用于本发明方法的3-八异戊烯基-4-羟基苯甲酸羧基裂合酶((也称为UbiX)是来源于大肠杆菌(Uniprot登录号P0AG03；SEQ ID NO:2)、枯草芽孢杆菌(Uniprot登录号A0A086WXG4；SEQ ID NO:7)、绿脓假单胞菌(Uniprot登录号A0A072ZCW8；SEQ ID NO:8)或肠杆菌属DC4(Uniprot登录号W7P6B1；SEQ ID NO:9)的3-八异戊烯基-4-羟基苯甲酸羧基裂合酶(也称为UbiX),具有分别如SEQ ID NO:2、SEQ ID NO:7、SEQ ID NO:8和SEQ ID NO:9所示的氨基酸序列。
在本发明的优选实施方案中，3-八异戊烯基-4-羟基苯甲酸羧基裂合酶是包含选自SEQ ID NO:2和7-9的氨基酸序列或与SEQ ID NO:2和7-9中的任意个有至少n％同一性的序列的酶，其中n为10-100之间的整数，优选10、15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、65、70、75、80、85、90、91、92、93、94、95、96、97、98或99，并且其中所述酶具有将黄素辅因子(FMN或FAD)修饰成相应的(修饰的)黄素衍生的辅因子的酶活性。关于序列同一性的确定，如上所述同样适用。
本发明还涉及由3-甲基巴豆酸生产异丁烯的方法，包括在允许所述转化的条件下(优选进一步在如所述的FMN异戊烯基转移酶的存在下)，将本发明的MDC变体与3-甲基巴豆酸一起温育的步骤。如上所述)，或包括在合适的培养基中培养表达MDC变体(并且优选进一步表达如上所述的FMN异戊烯基转移酶)的本发明的宿主细胞并回收所产生的异丁烯的步骤。
在这种情况下也可以想到，在这种方法中，不仅使用一种本发明的酶，而且使用两种或多种酶的组合。
本发明还涉及如上所述的本发明的MDC变体或宿主细胞用于将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的用途，优选在FMN异戊烯基转移酶存在下或在宿主存在下共表达如上文所述的FMN异戊烯基转移酶。此外，在另一实施方案中，本发明涉及通过使3-甲基巴豆酸与本发明的MDC变体接触，优选在FMN异戊烯基转移酶存在下；或用包含编码本发明MDC变体的核酸分子的宿主细胞，由3-甲基巴豆酸生产异丁烯的方法，其中所述宿主细胞优选表达FMN异戊烯基转移酶。因此，在优选的实施方案中，本发明涉及将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的方法，包括以下步骤：(i)在合适的培养基中培养上述本发明的宿主细胞；(ii)由3-甲基巴豆酸生产异丁烯。
因此，在优选的实施方案中，本发明涉及利用本发明的宿主细胞的方法和用途，该宿主细胞表达本发明的MDC变体，并且优选进一步表达如上所述的FMN异戊烯基转移酶。
在另一优选的实施方案中，这种宿主细胞是能够产生3-甲基巴豆酸的生物。
在另一优选的实施方案中，本发明的方法在培养物中，在生物体，优选微生物的存在下进行，产生本发明的酶变体，并且优选还产生FMN异戊烯基转移酶。在本发明的这种实施方案中，使用产生本发明的酶并且优选还产生FMN异戊烯基转移酶的生物，优选微生物。在一个优选的实施方案中，(微)生物是重组的，因为宿主产生的酶相对于生产宿主是异源的。因此，该方法可以直接在培养基中进行，而不需要分离或纯化酶。以特别有利的方式，使用具有内源性产生3-甲基巴豆酸的天然或人工性质的(微)生物，以便直接从已经存在于溶液培养物中的底物产生异丁烯。
关于上述方法和用途，在合适的培养条件下培养微生物，使得本发明的MDC变体(以及优选地，如上所述的FMN异戊烯基转移酶)发生酶促反应。具体的培养条件取决于所用的特定微生物，但是本领域技术人员是熟知的。通常以这样的方式选择培养条件，即它们允许表达编码本发明的MDC变体的基因(并且，优选地，还包括如上所述的FMN异戊烯基转移酶)。本领域技术人员已知多种方法，以改进和微调某些基因在培养的某些阶段的表达，例如通过化学诱导剂诱导基因表达或通过温度变化。
在另一个实施方案中，本发明的上述方法包括提供生物体，优选细胞培养物形式(优选液体细胞培养物形式)的具有一种或多种相应酶活性的微生物的步骤；在允许表达相应酶的合适条件下培养下述生物体的后续步骤，所述微生物优选是发酵罐(通常也称为生物反应器)中的微生物，并进一步包括进行上文所述的本发明方法的酶促转化的步骤。
合适的发酵罐或生物反应器装置和发酵条件是本领域技术人员已知的。生物反应器或发酵罐指支持生物学活性环境的本领域已知的任何制造或工程化装置或***。因此，生物反应器或发酵罐可以是其中实施化学/生物化学过程(如本发明方法)的容器，所述化学/生物化学过程涉及生物、优选微生物和/或生物化学活性物质，即，从携带上述酶的这类生物或生物衍生的上述酶。在生物反应器或发酵罐中，这种过程可以是需氧的或厌氧的。这些生物反应器常见是圆柱状，并且可以具有从数升至若干立方米的一系列尺寸，并经常由不锈钢制成。在这个方面，不受理论约束，发酵罐或生物反应器可以按照这样的方式设计，从而它适合以分批培养、补料分批培养、灌注培养或恒化培养培养生物，优选地微生物，全部培养方法通常均是本领域已知的。
培养基可以是适于培养相应生物或微生物的任何培养基。
在又一个实施例中，本发明的方法可以在体外进行，例如在分离的酶或包含该酶或包含本发明的MDC变体的部分纯化的酶制备物的细胞裂解物存在下(并且优选地，还包含如上所述的FMN异戊烯基转移酶)，体外进行。体外优选地意指在无细胞***中。
在一个实施方案中，该方法中所用的一种或多种酶以纯化形式使用。然而，这种方法可能昂贵的，因为酶及底物的生产和纯化成本高昂。
因此，在另一优选实施方案中，该方法中所用的酶在反应中作为非纯化的提取物或另外以未裂解的细菌形式存在，从而节省蛋白质纯化成本。然而，与这种方法相关的成本可能仍因产生和纯化底物的成本而相当高昂。
在体外反应中，将天然或重组的纯化或未纯化的酶在底物存在时，在允许酶有活性的物理化学条件下孵育，并且允许所述孵育进行允许生产如上文所述的所需产物的足够时间段。在孵育结束时，任选地通过使用本领域技术人员已知的任何检测***,例如用于测量异丁烯形成的气相色谱或比色测试，测量异丁烯的存在。
在本发明的特别优选的实施方案中，该方法在体外实施并且酶是固定化的。用于将酶固定至不同支持物上的手段和方法是本领域技术人员熟知的。
本发明的方法还包括收集气态产物即异丁烯，从反应中脱气，即例如从培养物中脱气回收产物的步骤。因此，在优选的实施方案中，该方法在用于在反应期间中以气态形式收集异丁烯的***存在下进行。
事实上，异丁烯在室温和大气压下呈气态。此外，异丁烯在37℃的培养条件下也呈气态。因此，本发明的方法不需要从液体培养基中提取异丁烯，这一步骤在工业规模上进行时总是非常昂贵的。可以根据本领域技术人员已知的任何方法进行气体烃的抽取和储存和它们可能的后续物理分离和化学转化。
最后，本发明涉及包含本发明的MDC变体、本发明的核酸分子、本发明的载体或本发明的宿主细胞的组合物。关于MDC的变体，核酸分子、载体或宿主细胞，上述与本发明方法相关的描述同样适用。
在本说明书中，引用了许多文献，包括专利申请。这些文献的公开内容虽然不被认为与本发明的可专利性相关，但在此通过引用整体并入。更具体地，所有参考文献通过引用并入，其程度如同每个单独的文件被具体和单独地指出通过引用并入。
图1A：显示黄素单核苷酸(FMN)的酶促异戊烯基化为相应的修饰的(异戊烯基化的)黄素辅因子的示意性反应。
图1B：3-甲基巴豆酸酶促转化为异丁烯的示意图。
图2：Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1(G9NLP8)的19种蛋白质同源物的多序列比对，聚焦于G9NLP8的K401-G413区段。
图3：在不同温度(30℃、40℃、50℃和60℃)下，从10mM 3-甲基巴豆酸的同源物MDC及其T→M变体的异丁烯(IBN)产生。
现在将参考以下实施例描述本发明，这些实施例仅是说明性的，不应解释为对本发明范围的限制。
实施例
实施例1：定向进化策略
酶，Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1(SEQ ID NO：1)能够催化3-甲基巴豆酸(3MC)脱羧成异丁烯(IBN)以及其他反应。使用定向进化方法来特异性提高该反应的催化效率。该方法包括(1)设计测试酶变体活性的测定***，(2)用于Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1的单点或多点突变体的集合的产生，以及(3)使用筛选突变体集合的活性测定，以鉴定与野生型Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1的活性相比具有改进的活性的变体。
该方法导致鉴定和表征与野生型酶相比，活性增加的突变体集合。
实施例2：构建Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1酶突变体
使用一系列标准分子生物学技术产生在Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1酶的进化过程中鉴定的不同突变体的编码多核苷酸序列。所有这些技术使用密码子优化的多核苷酸序列在大肠杆菌中作为模板表达。Ge neart使用他们的GeneOptimizer软件完成了序列优化。
使用本领域已知的不同的基于PCR的技术构建单点突变体。为了产生携带多个突变(至少两个突变)的酶变体，使用基于PCR的技术或本领域已知的其他方法来引入这些突变。
诱变后，除了来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白的cDN A之外，使用基于标准连接酶的亚克隆技术，通过PCR的全质粒延伸或不依赖连接酶的克隆技术，将突变的多核苷酸序列***到pETDuetTM-1共表达载体(Novagen)中(用于在大肠杆菌中产生重组蛋白质并筛选)。
实施例3：选择具有增加活性的酶突变体
开发了两种不同的筛选方法，并在Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1酶的进化过程中使用。
1.)基于外源性3MC(体内1)的384孔微量培养板的体内试验
该测定基于使用含有上述编码序列的上述表达载体转化的细菌菌株(BL21(DE3)，Novagen)，导致产生涉及将3MC转化为异丁烯的代谢途径的最后两种酶，即Hypocreaatroviridis阿魏酸脱羧酶1变体和来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白。首先将该菌株接种到补充有适当抗生素的LB琼脂平板上。使细胞在30℃下生长过夜，直至各个菌落达到所需大小。然后挑取单菌落并单独转移到50μL补充有适当抗生素的液体LB培养基中。细胞在30℃下振荡生长20小时。LB培养物用于在384孔深孔微量培养板中接种300μL补充有适当抗生素的自诱导培养基(Studier FW，Prat.Exp.Pur.41，(2005)，207-234)，并在设置为700转/分钟和85％湿度的振荡培养箱中，30℃下生长24小时，以产生两种重组酶。然后将含有这两种过表达的重组酶的细胞沉淀重悬于补充有10mM 3MC的40μL基本培养基(pH7.5、磷酸盐100mM、葡萄糖10g.L-1、MgSO41mM)中，在振荡培养箱中30℃，700转/分钟再孵育2或4小时。在该步骤期间，Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1变体催化3MC脱羧成IBN。在80℃下灭活5分钟后，产生的IBN通过气相色谱如下定量。将来自每个酶促反应的100μL顶空气体注入配备有火焰离子化检测器(FID)的Brucker GC-450***中。样品中存在的化合物使用RTX-1柱在100℃下以1mL.min-1恒定流量的氮气作为载气，通过色谱法分离。注射后计算异丁烯的峰面积。
2.)基于外源3MC(体内2)的96孔微量培养板的体内测定
该测定基于使用含有上述编码序列的上述表达载体转化的细菌菌株(BL21(DE3)，Novagen)，导致产生涉及3MC转化为异丁烯的代谢途径的最后两种酶；即Hypocreaatroviridis阿魏酸脱羧酶1变体和来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白。首先将该菌株接种到补充有适当抗生素的LB琼脂平板上。使细胞在30℃下生长过夜，直至各个菌落达到所需大小。然后挑取单菌落并分别转移到500μL补充有适当抗生素的液体LB培养基中。细胞30℃或32℃下振荡生长20小时。LB培养物用于在96孔深孔微量培养板中接种1mL补充有适当抗生素的自诱导培养基(Studier FW，Prat.Exp.Pur.41，(2005)，207-234)，并在设置为700转/分钟和85％湿度的振荡培养箱中，30℃或32℃下生长24小时，以产生两种重组酶。然后将含有这两种过表达的重组酶的细胞沉淀重悬于补充有10mM 3MC的400μL基本培养基(pH 7.5、磷酸盐100mM、葡萄糖10g.L-1、MgSO41mM)中，并在30℃或36℃的振荡培养箱中，700转/分钟再孵育2或4小时。在该步骤期间，Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1变体催化3MC脱羧成IBN。在80℃下灭活5分钟后，产生的IBN通过气相色谱如下定量。将来自每个酶促反应的100μL顶空气体注入配备有火焰离子化检测器(FID)的Brucker GC-450***中。样品中存在的化合物使用RTX-1柱在100℃下以1mL.min-1恒定流量的氮气作为载气，通过色谱法分离。注射后，计算异丁烯的峰面积。
实施例4：鉴定具有进一步提高了3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的反应活性的Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1变体
使用Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1(SEQ ID NO：1)作为模板，通过诱变产生突变体集合。已经通过如上所述的体内筛选测定鉴定了几种具有将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的活性增强的变体。使用上述体内1测定进行了第一轮59508个克隆的筛选。然后使用相同的方案在12个重复中测试最好的927个克隆。分别提取最佳的95种变体的质粒，转化到新鲜的感受态BL21(DE3)细胞中，然后根据上述体内2测定在8次重复测定中进行测试。
改进的变体列在下表1中，展现增加的活性的各个位置列在表2中。下表1中显示的改进因子反映了与野生型酶相比，根据上述体内2测定产生和测量的的8个重复的异丁烯相对量平均值。
表1：Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1变体表现出增加从3-甲基巴豆酸的异丁烯产生
表2：在活性增加的Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1变体中修饰的位置的列表
实施例5：Hypocrea atroviridis阿魏酸1脱羧酶WT和T405M突变体的体外活性
阿魏酸脱羧酶的基因合成、克隆、表达和纯化
根据实施例2和3中描述的方法获得编码Hypocrea atroviridis阿魏酸1脱羧酶WT或T405M变体的pETDuetTM-1共表达载体，以及来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白。
所提供的载体在阿魏酸脱羧酶的甲硫氨酸起始密码子后含有一段6个组氨酸密码子，以特异性纯化阿魏酸脱羧酶。
根据标准热休克方法，用这些载体转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)细胞(Novagen)。转化的细胞使用ZYM-5052自诱导培养基(Studier FW，Prot.Exp.Pur.41，(2005)，207-234)，在30℃下振荡(160转/分钟)生长24小时。4℃，10,000转/分钟离心20分钟收集细胞，并将沉淀储存在-80℃。将来自500ml培养细胞的沉淀在冰上融解并重悬于15ml含有200mM NaCl、10mM MgCl2、10mM咪唑和1mM DTT的50mM磷酸钾缓冲液中。加入20微升的lysonase(Novagen)。将细胞在室温下孵育10分钟，然后回到冰上20分钟。超声2×15秒处理，完成细胞裂解。
然后通过在4℃，4000转/分钟离心40分钟澄清细菌提取物。将澄清的细菌裂解物上样到PROTINO-2000Ni-TED柱(Macherey-Nagel)上，允许吸附6-His标记的蛋白质。洗涤柱并用6ml含有250mM咪唑的50mM磷酸钾缓冲液洗脱目的酶。然后将洗脱液浓缩，在AmiconUltra-4 10kDa过滤装置(Millipore)上脱盐，并将酶重悬于含有1mM DTT和20mM NaCl的50mM磷酸钾缓冲液中。如此纯化的阿魏酸脱羧酶的纯度通过SDS-PAGE分析估计在80％至90％之间变化。通过NanoDrop 1000分光光度计(Thermo Scientific)上的直接UV 280nm测量或通过Bradford测定(BioRad)测定蛋白质浓度。
黄素异戊烯基转移酶的产生
为了进行酶测定，还分别产生来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白。含有编码来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白的基因的载体pCAN购自NAIST(NaraInstitute of Science and Technology，日本，ASKA collection)。
根据标准热休克程序，用该载体转化感受态大肠杆菌BL21(DE3)细胞(Novagen)。转化的细胞使用ZYM-5052自诱导培养基(Studier FW，Prot.Exp.Pur.41，(2005)，207-234)，在30℃下振荡(160转/分钟)生长24小时。4℃，10,000转/分钟离心20分钟收集细胞，并将沉淀储存在-80℃。将来自500ml培养细胞的沉淀在冰上融解并重悬于15ml含有200mMNaCl、10mM MgCl2、10mM咪唑和1mM DTT的50mM磷酸钾缓冲液中。加入20微升的lysonase(Novagen)。将细胞在室温下孵育10分钟，然后回到冰上20分钟。超声2×15秒处理，完成细胞裂解。将含有UbiX蛋白的细胞裂解物保持在冰上。
酶促测定
用补充有含有UbiX蛋白的新鲜细胞裂解物(参见上文)，且如上所述纯化的阿魏酸脱羧酶进行酶促测定。
在水中制备0.5M的3-甲基巴豆酸储液，并用10M NaOH溶液调节至pH7.0。在以下条件下在2ml玻璃小瓶(Interchim)中进行酶促测定：50mM磷酸钾pH 7.5；20mM NaCl；3mMMgCl2；5mM DTT；64mM 3-甲基巴豆酸；0.5mg/ml纯化的阿魏酸脱羧酶(FDC)WT或T405M变体；100μl含有黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白的裂解物；测定的总体积为300μl。
将小瓶密封并在30℃下温育60分钟。没有阿魏酸脱羧酶的对照平行进行。通过在80℃温育2分钟终止测定，并通过配备有火焰离子化检测器(FID)的气相色谱(GC)分析反应顶空中形成的异丁烯。对于GC顶空分析，在配备有GS-氧化铝柱(30m×0.53mm)(Agilent)的Bruker GC-450***中使用等温模式在130℃下分离1ml顶空气体。使用氮气作为载气，流速为6ml/min。通过与异丁烯标准品比较鉴定酶促反应产物。在这些GC条件下，异丁烯的保留时间为2.42分钟。
结果
在这些条件下，将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面，Hypocrea atrovi ridis阿魏酸脱羧酶1的T405M变体比WT相应酶有效约7倍，参见表3。
表3
异丁烯峰面积,任意单位
FDC WT 1680
FDC T405M 11550
没有FDC 2
实施例6：鉴定Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1(SEQ ID NO：1)第405位附近的特征序列
具有最高活性增加的Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1(SEQ ID NO：1)的两种变体在405位具有突变。
Hypocrea atroviridis属于子囊菌门(Ascomycota)的子囊菌亚门(Pezizomycotina)。因此，已将Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶与属于子囊菌亚门的1至19种同源蛋白进行比较(表4)，这些同源蛋白能够催化3-甲基巴豆酸转化为异丁烯。
已经使用T-Coffee软件以“精确”模式在多序列比对中比较了这些序列，其组合了序列、结构和性能比对(Notredame等，JMB 302(2000)，205-217)。从该比对，得到了Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1的T405位周围的保守区域(K401-G413)；(图2)。
该比对序列段用于采用PRATT软件得到模式(Jonassen等，Protein Science 4(8)(1995)，1587-1595)：K-[APV]-G-x-[APT]-[FIM]-H-R-[IL]-[AILV]-[ILV]-x-G，其中x代表任意氨基酸，[XYZ]代表氨基酸X、Y或Z。
然后将该基序送入ScanProsite工具(http://prosite.expasy.org/scanprosite/)，以扫描UniProtKB数据库(Swiss-Prot，包括剪接变体和TrEMBL)。共发现107种不同的蛋白质，包括该基序源自的20种原始蛋白质(表5)。
在这107种蛋白质中，3种注释为3-八异戊二烯(octaprenyl)-4-羟基苯甲酸羧化酶，一种为酚酸脱羧酶，一种为含有UbiD结构域的蛋白质，3种为非特异性蛋白质，99种为阿魏酸脱羧酶1。这些注释代表芳香酸的脱羧，假设该基序代表UbiD家族。
此外，在这107种蛋白质中，105种属于双核菌(Dikarya)亚界，而其中19种属于Agaricomycotina亚门的线状黑粉菌属(Filobasidiella)/隐球菌属(Cryptococcus)复合体，85种属于子囊菌亚门，一种属于Saccharomyco tina亚门，两种属于霜霉目(Peronosporales)疫霉属(Phytophthora)。
因此，假设该基序不仅代表其所源自的子囊菌亚门的UbiD家族，而且还代表不同真菌和真菌样真核微生物的UbiD家族。
表4：呈现3-甲基巴豆酸脱羧酶活性的Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1(G9NLP8)的19种蛋白质同源物的列表
表5：通过ScanProsite在UniProtKB数据库中发现的107种具有K-[APV]-G-x-[APT]-[FIM]-H-R-[IL]-[AILV]-[ILV]-x-G基序的蛋白质的列表。
实施例7：基于外源3MC的96孔微量培养板体内测定，选择具有增加的活性的酶突变体
1.)基于外源性3MC(体内3)的96孔微量培养板体内试验
该试验(体内3)基于使用含有编码序列的上述表达载体转化的细菌菌株(BL21(DE3)，Novagen)，并导致产生将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的代谢途径中涉及的最后两种酶，即Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1变体和来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白。首先将该转化的菌株铺板在补充有适当抗生素的LB琼脂平板上。使细胞在30℃下生长过夜，直至各个菌落达到所需大小。然后挑取单菌落并分别转移到500μL补充有适当抗生素的液体LB培养基中。30℃或32℃下细胞振荡生长20小时。LB培养物用于接种96孔深孔微量培养板中1mL补充有适当抗生素的自诱导培养基(Studier FW，Prat.Exp.Pur.41，(2005)，207-234)，并在设置为700转/分钟和85％湿度的振荡培养箱中，30℃、32℃或36℃下生长24小时，以产生两种类型的重组酶。然后将含有这两种过表达的重组酶的细胞沉淀重悬于补充有0.3或1mM 3MC的400μL基本培养基(MS pH 7.5，磷酸盐100mM、葡萄糖10g.L-1、MgSO4 1mM)中，在振荡培养箱中，34℃或36℃，700转/分钟下再孵育1或2小时。在该步骤中，Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1变体催化3-甲基巴豆酸脱羧成异丁烯。在80℃下灭活5分钟后，产生的异丁烯通过气相色谱如下定量。将来自每个酶促反应的100μL顶空气体注入配备有火焰离子化检测器(FID)的Brucker GC-450***中。样品中存在的化合物使用RTX-1柱在100℃下以1mL.min-1恒定流量的氮气作为载气，通过色谱法分离。注射后，计算异丁烯的峰面积。
2.)基于外源3MC(体内4)的96孔微量培养板的体内测定
该测定基于使用含有编码序列的表达载体pET25b(Novagen)转化的细菌菌株(BL21(DE3)，Novagen)，并导致产生涉及将3MC转化为异丁烯的代谢途径的最后一种酶；即，Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1变体。在另一个变体中，它可以与含有编码序列的表达载体pRSFDuet(Novagen)共转化，并导致从大肠杆菌产生黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白。首先将该菌株接种到补充有适当抗生素的LB琼脂平板上。细胞在32℃生长过夜，直至各个菌落达到所需大小。然后挑取单菌落并分别转移到500μL补充有适当抗生素的液体LB培养基中。细胞在32℃下振荡生长20小时。LB培养物用于在96孔深孔微量培养板中接种1mL补充有适当抗生素的自诱导培养基(Studier FW，Prat.Exp.Pur.41，(2005)，207-234)，并在设置为700转/分钟和85％湿度的振荡培养箱中32℃下生长24小时，以产生两种类型的重组酶。然后将含有这些过表达的重组酶的细胞沉淀重悬于400μL补充有1mM或10mM 3MC的基本培养基(MS pH 7.5、磷酸盐100mM、葡萄糖10g.L-1、MgSO4 1mM)中，在34℃或36℃，700转/分钟的振荡培养箱中并再孵育30分钟或4小时。在该步骤期间，Hypocrea atrovi ridis阿魏酸脱羧酶1变体催化3MC脱羧成IBN。在80℃下灭活5分钟后，产生的IBN通过气相色谱如下定量。将来自每个酶促反应的100μL顶空气体注入配备有火焰离子化检测器(FID)的BruckerGC-450***中。样品中存在的化合物使用RTX-1柱在100℃下以1mL.min-1恒定流量的氮气作为载气，通过色谱法分离。注射后，计算异丁烯的峰面积。
实施例8：鉴定具有进一步提高了3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的反应活性，并具有多个突变的Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1的变体
使用Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1(SEQ ID NO：1)作为模板，通过诱变产生突变体文库。已经通过如上所述的体内筛选测定，使用体内2，体内3或体内4测定，鉴定了几种具有增强的将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的活性的变体。
显示改进变体的列表显示在下表6中。相对于野生型酶描述了活性的增加(“+”表示活性的低增加，“+++++”表示活性的高增加)。
表7总结了具有增加活性的Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1变体中涉及的突变。
表6：表现出从3-甲基巴豆酸产生异丁烯增加的具有多个突变的Hyp ocreaatroviridis阿魏酸脱羧酶1变体的列表。
表7：活性增加的Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1变体中涉及的突变列表
实施例9：在不同温度下的Hypocrea atroviridis阿魏酸1脱羧酶同源物的体外活性(野生型和T->M突变体)
如实施例5中所述，Hypocrea atroviridis阿魏酸1脱羧酶的T405M变体显示出从3-甲基巴豆酸产生异丁烯的极显著增加。为了评估该突变对不同的阿魏酸脱羧酶的一般影响，我们选择了Hypocrea atroviridis阿魏酸1脱羧酶的4个同源物并制备了相应的T->M突变(表8)。
表8：Hypocrea atroviridis阿魏酸脱羧酶1的同源物及其T->M突变列表
生物体 Uniprot登录号 SEQ ID NO T->M突变
Hypocrea atroviridis(Ha) G9NLP8 1 T405M
Cladophialophora psammophila(Cp) W9WWR1 10 T400M
Cladophialophora immunda(Ci) A0A0D2AQI6 11 T400M
Sphaerulina musiva(Sm) M3DF95 12 T405M
Cladophialophora bantiana(Cb) A0A0D2IKD5 13 T400M
如实施例5中所述用10mM 3-甲基巴豆酸进行体外测定，培养时间为120分钟，培养温度在30和60℃之间变化。在所有情况下，T->M突变显示活性和最佳催化温度的增加(图3)。
实施例10：鉴定具有增加的3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的反应活性的Hypocreaatroviridis阿魏酸1脱羧酶同源物的变体
如实施例9中所述，我们显示在Hypocrea atroviridis阿魏酸1脱羧酶的405位发现的T->M突变增加了4种不同同源物的活性(表8和图3)。我们决定进一步进化这些同源物中的两种，即Cladophialophora psammo phila(Uniprot登录号W9WWR1，SEQ ID NO：10)和Cladophialophora bantiana(Uniprot登录号A0A0D2IKD5，SEQ ID NO：13)的阿魏酸脱羧酶1。
该测定基于使用如上所述，含有编码序列的上述表达载体转化的细菌菌株(BL21(DE3)，Novagen)，导致产生涉及3MC转化为异丁烯的代谢途径的最后两种酶；即Cladophialophora psammophila的阿魏酸脱羧酶1(U niprot登录号W9WWR1，SEQ ID NO：10)变体或Cladophialophora b antiana的阿魏酸脱羧酶1(Uniprot登录号A0A0D2IKD5，SEQ ID NO：13)变体，以及来自大肠杆菌的黄素异戊烯基转移酶UbiX蛋白。首先将该菌株接种到补充有适当抗生素的LB琼脂平板上。细胞在32℃生长过夜，直至各个菌落达到所需大小。然后挑取单菌落并分别转移到500μL补充有适当抗生素的液体LB培养基中。细胞在32℃下振荡生长20小时。LB培养物用于在96孔深孔微量培养板中接种1mL补充有适当抗生素的自诱导培养基(Studier FW，Prat.Exp.Pur.41，(2005)，207-234)，并在设置为700转/分钟和85％湿度的振荡培养箱中，32℃下生长24小时，以产生两种重组酶。然后将含有这两种过表达的重组酶的细胞沉淀重悬于补充有10mM 3MC的400μL基本培养基(pH 7.5、磷酸盐100mM、葡萄糖10g/L-1、MgSO4 1mM)中，并在36℃，700转/分的振荡培养箱中再孵育2或4小时。在该步骤期间，阿魏酸脱羧酶1变体催化3MC脱羧成IBN。在80℃下灭活5分钟后，产生的IBN通过气相色谱如下定量。将来自每个酶促反应的100μL顶空气体注入配备有火焰离子化检测器(FID)的Brucker GC-450***中。样品中存在的化合物使用RTX-1柱在100℃下以1mL.min-1恒定流量的氮气作为载气，通过色谱法分离。注射后，计算异丁烯的峰面积。
Clamophialophora psammophila的阿魏酸脱羧酶1(Uniprot登录号W9WWR1，SEQID NO：10)的改进变体列于下表9，Cladophialophora bantiana的阿魏酸脱羧酶1(Uniprot登录号A0A0D2IKD5，SEQ ID NO：13)的改进变体列于下表10中。相对于野生型酶描述了活性的增加(“+”表示活性的低增加，“++”代表活动的高增长)。
表11中描述了具有增加活性的Cladophialophora psammophila阿魏酸脱羧酶1(Uniprot登录号W9WWR1，SEQ ID NO：10)的变体中涉及的突变列表，表12中描述了具有增加活性的Cladophialophora psammophila阿魏酸脱羧酶1(Uniprot登录号A0A0D2IKD5，SEQID NO：13)的变体中涉及的突变列表。
表9：表现出从3-甲基巴豆酸产生异丁烯增加的Cladophialophora psammophila阿魏酸脱羧酶1变体。
突变 相对于WT的活性
T400M +
T400M-Y393F-G394N-Y399F ++
T400M-Y393F ++
T400M-Y393F-G394N ++
T400M-Y393F-Y399F ++
T400M-Y393F-A397V-Y399F ++
T400M-Y393F-A397V ++
表10：表现出从3-甲基巴豆酸产生异丁烯增加的Cladophialophora bantiana阿魏酸脱羧酶1变体。
表11：活性增加的Cladophialophora psammophila阿魏酸脱羧酶1变体中涉及的突变列表。
突变 野生型氨基酸 序列编号 突变
Y393F Y 393 F
G394N G 394 N
A397V A 397 V
Y399F Y 399 F
T400M T 400 M
表12：活性增加的Cladophialophora bantiana阿魏酸脱羧酶1变体中涉及的突变列表。
突变 野生型氨基酸 序列编号 突变
A14T A 14 T
Y393F Y 393 F
G394N G 394 N
H395Q H 395 Q
A397V A 397 V
Y399F Y 399 F
T400M T 400 M

Claims (12)

1.3-甲基巴豆酸脱羧酶(MDC)的变体，其相对于所源自的对应MD C，在将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯方面显示改进的活性，并具有SEQ ID NO：1所示氨基酸序列，或具有与SEQ IDNO：1具有至少73％序列同一性的氨基酸序列，其中在选自SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中的405、2、12、13、29、31、33、35、89、114、195、197、221、293、337、351、376、381、388、420、422、435、436、439、441、447、449、500、506和511位置上，或在这些位置中任意个对应的位置上的一个或多个氨基酸残基被另一氨基酸残基取代或缺失，或者已在这些位置中的一个或多个处进行了***。
2.权利要求的MDC变体，其中
(1)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第2位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、天冬氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、亮氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺或缬氨酸取代；和/或
(2)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第12位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸、丙氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(3)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第13位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、异亮氨酸、天冬酰胺、丝氨酸、缬氨酸或酪氨酸取代；和/或
(4)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第29位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺、组氨酸或丝氨酸取代；和/或
(5)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第31位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸或甘氨酸取代；和/或
(6)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第33位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(7)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第35位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸、丝氨酸或苏氨酸取代；和/或
(8)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第89位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或苯丙氨酸取代；和/或
(9)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第114位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(10)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第195位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、缬氨酸、色氨酸或酪氨酸取代；和/或
(11)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第197位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(12)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第221位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(13)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第293位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(14)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第337位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸或亮氨酸取代；和/或
(15)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第351位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸、天冬酰胺、丙氨酸、缬氨酸或甘氨酸取代；和/或
(16)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第376位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(17)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第381位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(18)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第388位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸取代；和/或
(19)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第405位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、脯氨酸或谷氨酰胺取代；和/或
(20)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第420位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(21)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第422位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸取代；和/或
(22)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第435位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸取代；和/或
(23)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第436位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(24)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第439位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(25)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第441位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸取代；和/或
(26)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第447位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被色氨酸、甲硫氨酸或酪氨酸取代；和/或
(27)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第449位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、甲硫氨酸或缬氨酸取代；和/或
(28)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第500位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(29)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第506位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或酪氨酸取代；和/或
(30)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第511位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甲硫氨酸或异亮氨酸取代。
3.权利要求1或2的MDC变体，其中所述变体还在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中的3、4、5、6、7、8、9、10、11、14、15、25、30、34、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、206、211、213、214、215、216、222、228、232、244、247、264、278、284、285、303、305、306、326、338、341、342、345、349、352、375、377、384、386、392、395、399、402、404、406、414、429、440、442、443、445、448、454、460、461、462、484、488、493、494、496、501、502、509和512位置处显示至少一个修饰。
4.权利要求1-3中任一项的MDC变体，其中还在SEQ ID NO：1所示氨基酸序列中的3、4、5、6、7、8、9、10、11、14、15、25、30、34、40、43、57、60、65、67、69、70、71、72、80、84、85、86、87、90、91、99、101、102、103、105、106、108、111、117、119、120、126、132、141、146、149、154、159、160、162、175、176、187、189、193、206、211、213、214、215、216、222、228、232、244、247、264、278、284、285、303、305、306、326、338、341、342、345、349、352、375、377、384、386、392、395、399、402、404、406、414、429、440、442、443、445、448、454、460、461、462、484、488、493、494、496、501、502、509和512位置处显示至少一个修饰的MDC变体是如下MDC变体，其中
(1)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第3位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、谷氨酸、甘氨酸、赖氨酸、脯氨酸、色氨酸、半胱氨酸、天冬氨酸或酪氨酸取代；和/或
(2)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第4位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、丙氨酸、丝氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(3)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第5位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(4)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第6位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸取代；和/或
(5)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第7位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(6)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第8位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(7)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第9位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、脯氨酸或酪氨酸取代；和/或
(8)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第10位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸、苯丙氨酸、赖氨酸、脯氨酸、苏氨酸或亮氨酸取代；和/或
(9)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第11位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸、酪氨酸或脯氨酸取代；和/或
(10)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第14位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(11)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第15位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(12)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第25位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺、丝氨酸或色氨酸取代；和/或
(13)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第30位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸、组氨酸或精氨酸取代；和/或
(14)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第34位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或异亮氨酸取代；和/或
(15)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第40位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(16)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第43位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(17)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第57位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(18)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第60位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(19)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第65位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸或色氨酸取代；和/或
(20)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第67位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸或缬氨酸取代；和/或
(21)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第69位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(22)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第70位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或亮氨酸取代；和/或(23)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第71位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(24)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第72位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(25)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第80位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(26)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第84位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(27)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第85位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或苏氨酸取代；和/或
(28)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第86位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺或异亮氨酸取代；和/或
(29)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第87位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、半胱氨酸、苯丙氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、甲硫氨酸、缬氨酸或色氨酸取代；和/或
(30)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第90位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(31)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第91位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(32)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第99位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺或脯氨酸取代；和/或
(33)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第101位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸或亮氨酸取代；和/或
(34)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第102位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(35)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第103位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、亮氨酸或甲硫氨酸取代；和/或
(36)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第105位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、亮氨酸或色氨酸取代；和/或
(37)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第106位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(38)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第108位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被赖氨酸、精氨酸或色氨酸取代；和/或
(39)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第111位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(40)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第117位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(41)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第120位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或赖氨酸取代；和/或
(42)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第119位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(43)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第126位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸取代；和/或
(44)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第132位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(45)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第141位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(46)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第146位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(47)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第149位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸或丝氨酸取代；和/或
(48)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第154位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被赖氨酸取代；和/或
(49)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第159位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(50)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第160位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(51)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第162位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸、组氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(52)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第175位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸、赖氨酸、脯氨酸、谷氨酰胺、丝氨酸、苏氨酸或色氨酸取代；和/或
(53)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第176位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(54)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第187位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(55)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第189位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(56)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第193位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代；和/或
(57)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第206位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(58)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第211位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸取代；和/或
(59)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第213位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸或亮氨酸取代；和/或
(60)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第214位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸、苏氨酸或缬氨酸、组氨酸、谷氨酸、精氨酸或苯丙氨酸取代；和/或
(61)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第215位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(62)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第216位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(63)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第222位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(64)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第228位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸、丙氨酸、脯氨酸、苏氨酸或缬氨酸取代；和/或
(65)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第232位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(66)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第244位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸取代；和/或
(67)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第247位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸取代；和/或
(68)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第264位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬氨酸取代；和/或
(69)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第278位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(70)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第284位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸或亮氨酸取代；和/或
(71)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第285位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(72)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第303位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸或脯氨酸取代；和/或
(73)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第305位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或天冬氨酸取代；和/或(74)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第306位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸、精氨酸或丝氨酸取代；和/或
(75)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第326位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或脯氨酸取代；和/或
(76)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第338位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被脯氨酸、丙氨酸或丝氨酸取代；和/或
(77)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第341位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被异亮氨酸取代；和/或
(78)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第342位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(79)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第345位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(80)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第349位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸取代；和/或
(81)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第352位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸或亮氨酸取代；和/或
(82)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第375位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(83)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第377位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被组氨酸取代；和/或
(84)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第384位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸取代；和/或
(85)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第386位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(86)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第392位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸或丙氨酸取代；和/或
(87)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第395位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被半胱氨酸取代；和/或
(88)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第399位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸或天冬酰胺取代；和/或(89)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第402位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸或组氨酸取代；和/或
(90)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第404位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被酪氨酸或色氨酸取代；和/或
(91)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第406位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酰胺取代；和/或
(92)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第414位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(93)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第440位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸取代；和/或
(94)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第443位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(95)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第448位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丝氨酸、苯丙氨酸或色氨酸取代；和/或
(96)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第454位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被甘氨酸取代；和/或
(97)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第460位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苯丙氨酸或脯氨酸取代；和/或
(98)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第461位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被缬氨酸、天冬酰胺或甲硫氨酸取代；和/或
(99)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第462位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(100)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第484位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或甘氨酸取代；和/或
(101)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第488位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或天冬酰胺取代；和/或
(102)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第493位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(103)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第494位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被精氨酸取代；和/或
(104)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第496位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或苯丙氨酸取代；和/或
(105)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第429位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被丙氨酸或丝氨酸取代；和/或
(106)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第442位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被苏氨酸取代；和/或
(107)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第445位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸或脯氨酸取代；和/或
(108)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第501位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、甲硫氨酸、甘氨酸或赖氨酸取代；和/或
(109)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第502位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被天冬酰胺取代；和/或
(110)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第509位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被亮氨酸取代；和/或
(111)SEQ ID NO：1所示氨基酸序列的第512位氨基酸残基或对应于该位置的位置上的氨基酸残基缺失，或被谷氨酸、组氨酸或丝氨酸取代。
5.编码权利要求1至4中任一项的MDC变体的核酸分子。
6.载体，其包含权利要求5的核酸分子。
7.宿主细胞，其包含权利要求5的核酸分子或权利要求6的载体。
8.权利要求1至4中任一项的MDC变体或权利要求7的宿主细胞用于将3-甲基巴豆酸转化为异丁烯的用途。
9.通过将3-甲基巴豆酸与权利要求1至4中任一项的MDC变体一起孵育，从3-甲基巴豆酸产生异丁烯的方法。
10.权利要求9的方法，其中酶促转化在体外进行。
11.组合物，其包含权利要求1至4中任一项的MDC变体、权利要求5的核酸分子、权利要求6的载体或权利要求7的宿主细胞。
12.组合物，其包含权利要求1至4中任一项的MDC变体、权利要求5的核酸分子、权利要求6的载体或权利要求7的宿主细胞，以及3-甲基巴豆酸。
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