CN109232191A - 一种提取工业***叶中***二酚的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供一种提取工业***叶中***二酚的方法,属于细胞生物学技术领域,该方法的步骤包括:取工业***叶片,干燥粉碎,加入细胞壁分解酶纤维素酶和果胶酶混合液后,水解,然后加入萃取溶剂搅拌萃取;将萃取上清液进行旋蒸得到油状物;在油状物中加入甲醇,低温离心获取上清液,对上清液活性炭脱色,脱色后过滤所得的滤液再次进行旋蒸;然后在旋蒸产物中加入氯仿溶解后通过有机膜膜过滤,即可获得工业***二酚溶液。本发明的方法可以大大提高***二酚的提取率,可以解决现有技术中存在的工业***叶片中***二酚提取率低的问题。具有快速,高回收率的特性。其方法设计合理、工艺安全可靠,具有良好的推广使用价值。
Description
技术领域
本发明涉及细胞生物学技术领域,具体地说是一种提取工业***叶中***二酚的方法。
背景技术
工业***(Stevia rebaudiana Bertoni)为***科***属一年生雌雄异株的草本植物,广泛分布于世界各地。世界上***属植物主要有野生***(Cannabis ruderalisJanisch)、印度***(Cannabis indica Lam)和栽培***(Cannabis sativaL)3个种,在长期的生物进化过程中又产生了许多***变种和亚种。由于***中含有一种致幻成瘾的次生代谢产物—四氢***酚(tetrahydrocannabinol,THC),因而成为公众熟知的毒品原植物之一。为了方便监管和合理使用,国际上将***中THC含量<0.3%的***品种定义不具备毒品利用价值的工业***。目前世界上种植工业***的国家已达27个,培育出的符合THC含量<0.3%的工业***品种26个。工业***植株高大,枝杈少,纤维含量高,其经济价值涉及造纸、纺织、建材、食品、医药等多个方面。
已有研究表明,工业***中非成瘾性成分***二酚(cannabidiol,CBD)具有抗炎、杀菌、镇痛、抗焦虑、抗精神病、抗氧化、改善学习记忆、神经保护和减少肠蠕动等作用,可用于治疗多发性动脉硬化与帕金森病、预防心肌梗死、阻断乳腺癌转移、抑制神经胶质瘤细胞转移和抑制性激素分泌等,也可用于治疗青光眼、截瘫与多发性硬化症病人的痉挛状态及运动障碍、癌痛、神经痛、偏头痛、癫痫等作用。因此,大力开发和利用工业***是一项利国利民和保护自然生态环境的绿色工程,其多样化制品具有广阔的国际市场。
目前,许多国家通过品种选育与改良、杂交与基因工程育种手段,已经选育出了很多优良工业***的新品种。我国也对工业***的种植和育种方面进行了不断的探索。如云南省农业科学院率先选育出云麻1号、云麻2号、云麻3号、云麻4号和云麻5号、云麻6号、云麻7号等多个云麻系列的工业***品种,这些品种在国内已有推广种植,如在内蒙古、黑龙江、安徽等地都有栽培应用。
但是,目前虽然对于工业***的药用成分***二酚的提取方法和分析已有较多研究报道,但这些提取方法不够完善,大多未采用细胞壁分解酶直接提取,导致***二酚提取的含量较低,而且虽然使用细胞壁分解酶也基本上单独用纤维素酶或者果胶酶,其结果虽然比不使用细胞壁分解酶对***二酚的得率有所提高,但毕竟工业***叶片细胞壁中含有大量纤维素和果胶质,所以利用纤维素酶和果胶酶同时作为提取溶剂,则***二酚含量的得率将有所提高。
因此,我们利用纤维素酶和果胶酶的混合液作为细胞壁分解酶,对工业***叶中***二酚的提取方法进行了优化和完善,旨在为更好地为工业***产业发展提供技术支撑。
发明内容
本发明的技术任务是解决现有技术的不足,提供一种提取工业***叶中***二酚的方法,该方法具有提高***二酚提取率的特点,可以解决现有技术中存在的工业***叶片中***二酚提取率低的问题。
本发明的技术方案是按以下方式实现的,一种提取工业***叶中***二酚的方法的步骤包括:取工业***叶片,干燥粉碎,加入细胞壁分解酶纤维素酶和果胶酶混合液后,水解,然后加入萃取溶剂搅拌萃取;将萃取上清液进行旋蒸得到油状物;在油状物中加入甲醇,低温离心获取上清液,对上清液活性炭脱色,脱色后过滤所得的滤液再次进行旋蒸;然后在旋蒸产物中加入氯仿溶解后通过有机膜膜过滤,即可获得工业***二酚溶液。
工业***叶片选用云麻7号品种的工业***叶片。
细胞壁分解酶采用纤维素酶和果胶酶的混合液。
细胞壁分解酶的添加量为按工业***叶片重和酶液量1:10g:mL加入含有相对于工业***叶片质量浓度为0.5%的酶液量。
萃取溶剂采用正己烷。
甲醇的加入剂量按油状物与甲醇为1:5的质量比例加入甲醇。
上清液活性炭脱色采用在上清液中加入相对于油状物10%质量的活性炭脱色30min。
旋蒸过程采用旋转蒸发仪进行旋蒸。
一种提取工业***叶中***二酚的方法的优选工艺步骤是:称取干燥粉碎的工业***品种为云麻7号的叶片10g,按1g:10mL的比例加入含有相对于工业***叶片质量浓度为0.5%的酶量的纤维素酶和果胶酶混合液后,在摇床内水解1h,然后加入400mL萃取溶剂正己烷,置于转速为1000r/min的搅拌器中快速搅拌3.0h;将上清液在旋转蒸发仪上进行旋蒸得到油状物;按油状物与甲醇为1:5的质量比例加入甲醇,置于-40℃的低温条件下静置1h后,同等低温条件下离心获取上清液,在上清液中加入相对于油状物10%质量的活性炭脱色30min;脱色后过滤所得的滤液再次进行旋蒸;然后称取旋蒸产物,加入氯仿溶解5min后过0.22μm有机膜,即可获得工业***二酚溶液。利用高效液相色谱仪进行检测。
细胞壁分解酶在提取工业***叶中***二酚中的应用,细胞壁分解酶采用纤维素酶和果胶酶的混合液。
本发明与现有技术相比所产生的有益效果是:
本发明的一种提取工业***叶中***二酚的方法可以大大提高***二酚的提取率,可以解决现有技术中存在的工业***叶片中***二酚提取率低的问题。
本发明的方法具有快速,高回收率的特性。
本发明的一种提取工业***叶中***二酚的方法设计合理、工艺安全可靠,具有良好的推广使用价值。
附图说明
附图1:为工业***品种‘云麻7号’植株;
附图2:为利用细胞壁分解酶提取后的CBD高效液相色谱图;
附图3:为对照的CBD高效液相色谱图;
附图4:CBD标样的高效液相色谱图。
具体实施方式
下面结合附图对本发明的一种提取工业***叶中***二酚的方法作以下详细说明。
如附图所示,本发明的一种提取工业***叶中***二酚的方法,利用国内优良工业***品种,通过高效液相色谱仪检测后,选取了CBD含量较高的工业***品种云麻7号,采取干燥粉碎的叶片作为原材料,利用细胞壁分解酶提取工业***叶片中***二酚,其方法具体如下:包括以下步骤:
(1)称取工业***叶片样品放入试管中,然后向试管中加入纤维素酶和果胶酶混合溶剂。
工业***叶片样品为干燥粉碎重量10.0g,试管中加入含有相对于工业***叶片0.5%的酶量的纤维素酶和果胶酶混合液体积为100ml,料液比为1:10(g:mL),在摇床上摇动水解1h。
(2)将上述混合溶液在摇床上充分水解,并静置一段时间后,加入正己烷,并置于搅拌器中快速搅拌后,利用旋转蒸发仪旋蒸,其旋蒸产物中加入甲醇后离心获得上清液。
正己烷的体积为400mL,并在转速为1000r/min的搅拌器中快速搅拌3.0h。
旋蒸产物与甲醇为1:5的比例加入甲醇,置于-40℃的冰箱内静置1h后,低温条件下离心获取上清液,在上清液中加入相对于油状物10%的活性炭脱色30min。过滤所得的滤液再次进行旋蒸。
(3)将上述上清液中加入活性炭脱色后,过滤所得的滤液再次进行旋蒸。然后在旋蒸产物中,加入氯仿溶解后用有机膜过滤。即可获得工业***二酚溶液。利用高效液相色谱仪进行检测。得到样品中***二酚CBD组分的色谱峰面积,按照外标法以峰面积定量计算***二酚CBD的含量。
按1:50比例加入氯仿溶解5min后,过0.22μm有机膜。
实施例:
本发明的一种提取工业***叶中***二酚的方法的步骤是:称取干燥粉碎的工业***‘云麻7号’叶片10g,按1:10(g:mL)加入含有相对于工业***叶片0.5%质量的酶量的纤维素酶和果胶酶混合液后,在摇床内水解1h,然后加入400mL萃取溶剂正己烷,置于转速为1000r/min的搅拌器中快速搅拌3.0h。将上清液在旋转蒸发仪上进行旋蒸得到油状物。按油状物与甲醇为1:5质量比的比例加入甲醇,置于-40℃的冰箱内静置1h后,低温条件下离心获取上清液,在上清液中加入相对于油状物10%质量的活性炭脱色30min。过滤所得的滤液再次进行旋蒸。然后称取0.1g旋蒸产物,加入5mL氯仿溶解5min后过0.22μm有机膜,即可获得工业***二酚溶液。利用高效液相色谱仪进行检测。本发明具有快速,高回收率的特性。
此方法提取的结果表明,利用细胞壁分解酶提取的***二酚得率与未加细胞壁分解酶的对照得率显著提高。本发明的方法具有快速,高回收率的特性。
本发明提供的利用细胞壁分解酶提取工业***叶片中***二酚得率(0.23%)与未加细胞壁分解酶的对照得率(0.18%)相比,提高了1.28倍,由此提高了***二酚的提取效果。
Claims (10)
1.一种提取工业***叶中***二酚的方法,其特征在于该方法的步骤包括:取工业***叶片,干燥粉碎,加入细胞壁分解酶纤维素酶和果胶酶混合液后,水解,然后加入萃取溶剂搅拌萃取;将萃取上清液进行旋蒸得到油状物;在油状物中加入甲醇,低温离心获取上清液,对上清液活性炭脱色,脱色后过滤所得的滤液再次进行旋蒸;然后在旋蒸产物中加入氯仿溶解后通过有机膜膜过滤,即可获得工业***二酚溶液。
2.根据权利要求1所述的一种提取工业***叶中***二酚的方法,其特征在于:工业***叶片选用云麻7号品种的工业***叶片。
3.根据权利要求1所述的一种提取工业***叶中***二酚的方法,其特征在于:细胞壁分解酶采用纤维素酶和果胶酶的混合液。
4.根据权利要求1所述的一种提取工业***叶中***二酚的方法,其特征在于:细胞壁分解酶的添加量为按工业***叶片重和酶液量1:10g:mL加入含有相对于工业***叶片质量浓度为0.5%的酶液量。
5.根据权利要求1所述的一种提取工业***叶中***二酚的方法,其特征在于:萃取溶剂采用正己烷。
6.根据权利要求1所述的一种提取工业***叶中***二酚的方法,其特征在于:甲醇的加入剂量按油状物与甲醇为1:5的质量比例加入甲醇。
7.根据权利要求1所述的一种提取工业***叶中***二酚的方法,其特征在于:上清液活性炭脱色采用在上清液中加入相对于油状物10%质量的活性炭脱色30min。
8.根据权利要求1所述的一种提取工业***叶中***二酚的方法,其特征在于:旋蒸过程采用旋转蒸发仪进行旋蒸。
9.一种提取工业***叶中***二酚的方法,其特征在于该方法的步骤包括:称取干燥粉碎的工业***品种为云麻7号的叶片10g,按1g:10mL的比例加入含有相对于工业***叶片质量浓度为0.5%的酶量的纤维素酶和果胶酶混合液后,在摇床内水解1h,然后加入400mL萃取溶剂正己烷,置于转速为1000r/min的搅拌器中快速搅拌3.0h;将上清液在旋转蒸发仪上进行旋蒸得到油状物;按油状物与甲醇为1:5的质量比例加入甲醇,置于-40℃的低温条件下静置1h后,同等低温条件下离心获取上清液,在上清液中加入相对于油状物10%质量的活性炭脱色30min;脱色后过滤所得的滤液再次进行旋蒸;然后称取旋蒸产物,加入氯仿溶解5min后过0.22μm有机膜,即可获得工业***二酚溶液。
10.细胞壁分解酶在提取工业***叶中***二酚中的应用,其特征在于:细胞壁分解酶采用纤维素酶和果胶酶的混合液。
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CN (1) | CN109232191A (zh) |
Cited By (15)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN109809969A (zh) * | 2019-03-15 | 2019-05-28 | 黑龙江阳光工业***研究院 | 一种酶法结合膜法提取***二酚的方法 |
CN110041172A (zh) * | 2019-06-05 | 2019-07-23 | 云南绿新生物药业有限公司 | 一种利用微生物处理***花叶提高***二酚提取率的工艺 |
CN110156567A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-08-23 | 大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司 | 从工业***中提取***二酚(cbd)的新方法 |
CN110386860A (zh) * | 2019-07-17 | 2019-10-29 | 李卫 | 一种***二酚的高效提取方法 |
CN110407669A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-11-05 | 大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司 | 一种利用超高压藕联亚临界水提取***二酚的方法 |
CN110683938A (zh) * | 2019-08-27 | 2020-01-14 | 桂林莱茵生物科技股份有限公司 | 一种***二酚的制备方法 |
CN111518610A (zh) * | 2020-04-20 | 2020-08-11 | 周宇平 | 一种***油的水提取工艺 |
US11040932B2 (en) | 2018-10-10 | 2021-06-22 | Treehouse Biotech, Inc. | Synthesis of cannabigerol |
US11084770B2 (en) | 2016-12-07 | 2021-08-10 | Treehouse Biotech, Inc. | Cannabis extracts |
CN113511958A (zh) * | 2021-07-29 | 2021-10-19 | 云南巨漳生物科技有限公司 | 一种从工业***叶子中提取***二酚的方法 |
US11202771B2 (en) | 2018-01-31 | 2021-12-21 | Treehouse Biotech, Inc. | Hemp powder |
CN114057552A (zh) * | 2021-11-22 | 2022-02-18 | 黑龙江冠卓检测科技有限公司 | 一种检测用***二酚标准物质的制备的方法 |
CN114181185A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-03-15 | 冯良山 | 一种利用油莎草提取天然维生素e的方法 |
CN114380666A (zh) * | 2020-10-19 | 2022-04-22 | 腾冲晨光云麻生物科技有限公司 | 一种***二酚的工业化提取方法 |
CN115407000A (zh) * | 2022-10-17 | 2022-11-29 | 中国计量大学 | 一种工业***中***二酚和四氢***酚的检测方法 |
Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107344908A (zh) * | 2017-07-28 | 2017-11-14 | 云南汉木森生物科技有限责任公司 | ***二酚的萃取方法及其***二酚产品 |
CN108314608A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-07-24 | 昆明医科大学第附属医院 | 一种***二酚的提取分离方法 |
-
2018
- 2018-08-20 CN CN201810949509.9A patent/CN109232191A/zh active Pending
Patent Citations (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN107344908A (zh) * | 2017-07-28 | 2017-11-14 | 云南汉木森生物科技有限责任公司 | ***二酚的萃取方法及其***二酚产品 |
CN108314608A (zh) * | 2018-02-05 | 2018-07-24 | 昆明医科大学第附属医院 | 一种***二酚的提取分离方法 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
吴俊锋等: "酶辅助溶剂法提取火麻叶中***二酚工艺条件的优化", 《中国酿造》 * |
Cited By (18)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
US11084770B2 (en) | 2016-12-07 | 2021-08-10 | Treehouse Biotech, Inc. | Cannabis extracts |
US11202771B2 (en) | 2018-01-31 | 2021-12-21 | Treehouse Biotech, Inc. | Hemp powder |
US11040932B2 (en) | 2018-10-10 | 2021-06-22 | Treehouse Biotech, Inc. | Synthesis of cannabigerol |
CN109809969A (zh) * | 2019-03-15 | 2019-05-28 | 黑龙江阳光工业***研究院 | 一种酶法结合膜法提取***二酚的方法 |
CN110156567A (zh) * | 2019-04-22 | 2019-08-23 | 大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司 | 从工业***中提取***二酚(cbd)的新方法 |
CN110041172A (zh) * | 2019-06-05 | 2019-07-23 | 云南绿新生物药业有限公司 | 一种利用微生物处理***花叶提高***二酚提取率的工艺 |
CN110407669A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-11-05 | 大兴安岭林格贝寒带生物科技股份有限公司 | 一种利用超高压藕联亚临界水提取***二酚的方法 |
CN110386860A (zh) * | 2019-07-17 | 2019-10-29 | 李卫 | 一种***二酚的高效提取方法 |
CN110386860B (zh) * | 2019-07-17 | 2022-08-02 | 李卫 | 一种***二酚的高效提取方法 |
CN110683938A (zh) * | 2019-08-27 | 2020-01-14 | 桂林莱茵生物科技股份有限公司 | 一种***二酚的制备方法 |
CN110683938B (zh) * | 2019-08-27 | 2022-11-15 | 桂林莱茵生物科技股份有限公司 | 一种***二酚的制备方法 |
CN111518610A (zh) * | 2020-04-20 | 2020-08-11 | 周宇平 | 一种***油的水提取工艺 |
CN114380666A (zh) * | 2020-10-19 | 2022-04-22 | 腾冲晨光云麻生物科技有限公司 | 一种***二酚的工业化提取方法 |
CN114380666B (zh) * | 2020-10-19 | 2024-01-26 | 腾冲晨光云麻生物科技有限公司 | 一种***二酚的工业化提取方法 |
CN113511958A (zh) * | 2021-07-29 | 2021-10-19 | 云南巨漳生物科技有限公司 | 一种从工业***叶子中提取***二酚的方法 |
CN114057552A (zh) * | 2021-11-22 | 2022-02-18 | 黑龙江冠卓检测科技有限公司 | 一种检测用***二酚标准物质的制备的方法 |
CN114181185A (zh) * | 2021-12-28 | 2022-03-15 | 冯良山 | 一种利用油莎草提取天然维生素e的方法 |
CN115407000A (zh) * | 2022-10-17 | 2022-11-29 | 中国计量大学 | 一种工业***中***二酚和四氢***酚的检测方法 |
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