CN110156567A - 从工业***中提取***二酚（cbd）的新方法 - Google Patents
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Abstract
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法。具体体现以下几点：1、应用生物酶解技术，使细胞内有效成分充分溶出。2、采用微波预处理，受热时间降低，活性损失少，产品纯度高。3、超高压提取是在常温下进行的，因此避免了因热效应引起的有效成分结构变化、损失以及生理活性降低，同时超高压技术减少杂质成分溶出的同时，提高了有效成分的收率，可使***二酚进一步纯化。本发明利用微波辅助提取与超高压藕联技术，先用乙醇做溶剂经过微波预处理，再用流体静压力大于100的超高压提取，泄压后溶剂可带着有效成分溢出；再经过低温真空干燥，将***二酚提高到90％以上。
Description
技术领域：
本发明属于化工技术领域，涉及一种从工业***中提取***二酚(CBD)的新方法，特别是涉及一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压技术纯化***二酚的新方法。
背景技术：
工业***是指四氢***酚含量低于0.3％的***，我国将工业***称为汉麻(hemp)，是***科(Cannabinaceae)***属(Cannabis)1年生草本植物。获准合法种植的工业***，均是低含毒量的品种，这些工业***(THC＜0.3％)被认为不具备毒品利用价值，但依旧全身是宝，其应用至少包括纺织、造纸、食品、医药、卫生、日化、皮革、汽车、建筑、装饰、包装等领域，是经典的生产资料。
随着美国GWPH(吉瓦制药)公司宣布***二酚治疗癫痫三期临床获得成功，***二酚的药用价值终于得到提现，Epidiolex是目前GW公司研发的主要利用***二酚治疗难治性癫痫候选药物，该口服药物制剂被发展用于治疗一些罕见的儿童期癫痫疾病。***酚是***叶所含的***酚类化合物的一种，是***在贮存过程中，其所含的四氢衍生物被空气氧化而产生的。
自2007年以来，GWPH已进行了广泛的***治疗癫痫的临床前研究，在各种体外和体内模型中，研究结果表明***可显著抗痫和抗惊厥活性；在动物急性癫痫模型中有效减少癫痫发作。迄今为止，GW已经从FDA获得多个针对Epidiolex的孤儿药资格认定，包括Dravet综合征、LGS、结节性硬化症和婴儿痉挛症。此外，GW还获得了FDA的快速通道资格认定，使用Epidiolex治疗Dravet综合征，在本试验中平均年龄16岁，显示了普遍良好耐受性和安全性。
发明内容：
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是：
一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法，其步骤如下：
(1)酶解：将新鲜工业***叶、茎或根切段2-3cm左右，放干燥箱内干燥1.5-2小时，取出粉碎，过20-40目筛，采用一定料液比，加入内、外切葡聚糖酶和纤维素酶，三种酶比例为1∶1∶1，酶浓度为0.5-1.5‰，调节pH值，在40-50℃左右酶解1-2h；
(2)微波预处理：用体积浓度75-95％乙醇做为溶剂，采用微波，在200～500W，加热至一定温度提取5-10min；
(3)过滤：静置、将初提液初步过滤，进行分离，初步浓缩得***二酚粗提物；
(4)高压提取：粗提物放入超高压处理袋内，按1∶3料液比加入乙醇溶液，封口包装，以不同压力，加压20-30min，加压两次；
(5)得膏状物：将提取液抽滤、离心得离心液，回收乙醇，浓缩得膏状物；
(6)柱层析：将所得***二酚膏状物上硅胶层析柱，并以不同溶剂进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集***二酚各阶段洗脱液；
(7)真空干燥：将所收集的***二酚洗脱液，低温真空干燥得***二酚，其含量在90％以上。
本发明优点：应用生物酶解技术，使细胞内有效成分充分溶出，采用微波预处理的***二酚受热时间降低，超高压技术可使***二酚进一步纯化，本发明提取方便快捷，分离效果明显，提取纯度高。
具体实施方式：
实施例1：一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法，其步骤如下：
(1)将鲜工业***叶、茎及根切段至2cm，放置干燥箱内干燥1.5小时，取出粉碎，过40目筛，采用1∶5料液比，加入内、外切葡聚糖酶和纤维素酶，三种酶比例为1∶1∶1，酶浓度为0.5‰，调节pH值至4.5，在40℃左右酶解1h；
(2)微波预处理：用75％乙醇做为溶剂，采用微波提取，在功率400W，加热至55℃提取5min；
(3)过滤：静置、将初提液过滤，分离，初步浓缩得***二酚粗提物；
(4)高压提取：粗提物放入超高压处理袋内，按1∶3料液比加入60％乙醇溶液，封口包装，以400MPa，加压20min，加压两次；
(5)得膏状物：将提取液抽滤、离心得离心液，回收乙醇，浓缩得膏状物；
(6)柱层析：将所得***二酚液上硅胶层析柱，并以乙酸乙酯、氯仿体积比5∶1-7∶1进行沈脱，薄层色谱法跟踪检测，收集***二酚各阶段洗脱液；
(7)真空干燥：将所收集的***二酚洗脱液，于50℃低温真空干煤，得***二酚。
实施案例2：一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法，其步骤如下：
(1)将鲜工业***叶、茎及根切段至2cm，放置干燥箱内干燥2小时，取出粉碎，过20目筛，采用1∶7料液比，加入内、外切葡聚糖酶和纤维素酶，三种酶比例为1∶1∶1，酶浓度为1‰，调节pH值至5.0，在40℃左右酶解1.5h；
(2)微波预处理：用75％乙醇做为溶剂，采用微波提取，在功率300W，加热至60℃提取8min；
(3)过滤：静置、将初提液过滤，分离，初步浓缩得***二酚粗提物；
(4)高压提取：粗提物放入超高压处理袋内，按1∶3料液比加入60％乙醇溶液，封口包装，以600MPa，加压25min，加压两次；
(5)得膏状物：将提取液抽滤、离心得离心液，回收乙醇，浓缩得膏状物；
(6)柱层析：将所得***二酚液上硅胶层析柱，并以乙酸乙酯、氯仿体积比3∶1-5∶1进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集***二酚各阶段沈脱液；
(7)真空干燥：将所收集的***二酚洗脱液，于55℃低温真空干燥，得***二酚。
实施案例3：一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法，其步骤如下：
(1)将鲜工业***叶、茎及根切段至2cm，放置干燥箱内干燥1.5小时，取出粉碎，过40目筛，采用1∶5料液比，加入内、外切葡聚糖酶和纤维素酶，三种酶比例为1∶1∶1，酶浓度为1.5‰，调节pH值至5.5，在40℃左右酶解2h；
(2)微波预处理：用75％乙醇做为溶剂，采用微波提取，在功率500W，加热至50℃提取10min；
(3)过滤：静置、将初提液过滤，分离，初步浓缩得***二酚粗提物；
(4)高压提取：粗提物放入超高压处理袋内，按1∶3料液比加入70％乙醇溶液，封口包装，以500MPa，加压30min，加压两次；
(5)得膏状物：将提取液抽滤、离心得离心液，回收乙醇，浓缩得膏状物；
(6)柱层析：将所得***二酚液上硅胶层析柱，并以乙酸乙酯、氯仿体积比1∶1-3∶1进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集***二酚各阶段沈脱液；
(7)真空干燥：将所收集的***二酚洗脱液，于60℃低温真空干燥，得***二酚。
Claims (6)
1.一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法，其步骤如下：
(1)酶解：将新鲜工业***叶、茎或根切段2-3cm左右，放干燥箱内干燥1.5-2小时，取出粉碎，过20-40目筛，采用一定料液比，加入内、外切葡聚糖酶和纤维素酶，三种酶比例为1∶1∶1，酶浓度为0.5-1.5‰，在40-50℃左右酶解1-2h；
(2)微波预处理：用体积浓度75-95％乙醇做为溶剂，采用微波，在200～500W，加热至一定温度提取5-10min；
(3)过滤：静置、将初提液初步过滤，进行分离，初步浓缩得***二酚粗提物；
(4)高压提取：粗提物放入超高压处理袋内，按1∶3料液比加入乙醇溶液，封口包装，以不同压力，加压20-30min，加压两次；
(5)得膏状物：将提取液抽滤、离心得离心液，回收乙醇，浓缩得膏状物；
(6)柱层析：将所得***二酚膏状物上硅胶层析柱，并以不同溶剂进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集***二酚各阶段洗脱液；
(7)真空干燥：将所收集的***二酚洗脱液，低温真空干燥得***二酚，其含量在90％以上。
2.根据权利要求1所述的一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法，其特征是：在所述的步骤(1)中，酶解时调节pH值在4.5-5.5之间，料液比为1∶5-7。
3.根据权利要求2所述的利用一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法，其特征是：在所述的步骤(2)中，加热温度为50-60℃。
4.根据权利要求3所述的一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法，其特征是：在所述的步骤(4)中，超高压力为400-600MPa，乙醇体积浓度为60-70％。
5.根据权利要求4所述的一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法，其特征是：在所述的步骤(6)中，洗脱时采取的乙醇体积浓度为70％、75％、80％，乙酸乙酯与氯仿的体积为1～7∶1。
6.根据权利要求5所述的一种利用生物酶解、微波辅助提取藕联超高压纯化***二酚的新方法，其特征是：在所述的步骤(7)中，低温干燥温度为50-60℃。
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