CN109085255A - 一种hplc法分析及制备3-(n-对甲苯磺酰基-l-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯及其对映异构体的方法 - Google Patents
一种hplc法分析及制备3-(n-对甲苯磺酰基-l-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯及其对映异构体的方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN109085255A CN109085255A CN201810561742.XA CN201810561742A CN109085255A CN 109085255 A CN109085255 A CN 109085255A CN 201810561742 A CN201810561742 A CN 201810561742A CN 109085255 A CN109085255 A CN 109085255A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- pyrrole esters
- esters
- pyrrole
- hexane
- enantiomter
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N30/04—Preparation or injection of sample to be analysed
- G01N30/06—Preparation
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N30/00—Investigating or analysing materials by separation into components using adsorption, absorption or similar phenomena or using ion-exchange, e.g. chromatography or field flow fractionation
- G01N30/02—Column chromatography
- G01N2030/022—Column chromatography characterised by the kind of separation mechanism
- G01N2030/027—Liquid chromatography
Abstract
本发明公开了一种HPLC法分析及制备(‑)‑吡咯酯及其对映异构体的方法,以多糖衍生物涂覆型填料为手性固定相,以正己烷‑异丙醇混合溶剂或正己烷‑乙醇混合溶剂为流动相,采用正相色谱法分析分离。该方法能够简单、准确、高效的分析及制备单一旋光性的(‑)‑吡咯酯及其对映异构体,进而实现对其质量控制。
Description
技术领域
本发明涉及一种色谱分析分离方法,尤其是一种分析及制备3-(N-对甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯及其对映异构体的高效液相色谱法,属于化学原料制备的技术领域。
背景技术
尿白细胞是尿常规检测的一项重要指标,吡咯酯是干化法测定尿白细胞的试剂带模块中的重要底物,其测定原理为:白细胞中的中性粒细胞胞浆内含有酯酶,酯酶作用于试纸模块中的吡咯酯,使其发生水解反应并且进一步与重氮盐偶联,形成紫色络合物,其颜色的深浅与中性粒细胞的多少成正比例关系。吡咯酯具体分为(-)-吡咯酯,化学名为3-(N-对甲苯磺酰基-L-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯和(+)-吡咯酯,化学名为3-(N-对甲苯磺酰基-D-丙氨酰氧基)-5- 苯基吡咯,其结构如式(1)所示:
式1中,A:(-)-吡咯酯;B:(+)-吡咯酯;
酯酶对吡咯酯两种对映异构体的立体选择性有所差异,对(-)-吡咯酯选择性水解较强,而对于另一种对映异构体(+)-吡咯酯选择性水解相对较弱,因此,尿白细胞试纸中使用的吡咯酯通常为(-)-吡咯酯。因此,如何分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体,控制(+)-吡咯酯杂质含量,进而确保尿白细胞试纸质量显得尤为重要。然而,对于吡咯酯两种对映异构体分析分离方法未见相关报道。
因此,如何建立一种能够简单、快速、高效的分析分离吡咯酯两种对映异构体的方法,进而实现对其质量的控制,是目前需要解决的技术问题。
发明内容
本发明的目的是为了克服现有技术的不足,提供了一种应用手性固定相的液相色谱方法对吡咯酯两种对映异构体进行分析分离,进而实现对其进行质量控制及单一对映体的制备。
本发明提供了一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,采用手性色谱柱并使用正相色谱法进行分析分离;所述的手性色谱柱为多糖衍生物涂覆型手性色谱柱,具体为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)、直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]、纤维素-三(3,5-二甲基苯基甲酸酯)、直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)或纤维素-三(3氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)中的一种;所述的正相色谱法所用的流动相为正己烷-异丙醇混合溶剂或正己烷-乙醇混合溶剂;
所述的分析方法包括以下步骤:
(1).(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品分别用乙醇溶解,配置成浓度为0.1mg/mL的对照品溶液;
(2).(±)-吡咯酯供试品用乙醇溶解,配制成浓度为0.1~1mg/mL的供试品溶液;进样量为 5~10μL;
(3).设置正己烷-异丙醇混合溶剂或正己烷-乙醇混合溶剂的比例为90:10~0:100;设置流速为0.4~1.0mL/min;设置液相色谱柱温箱温度为20~40℃;检测波长为210nm;
(4).精密吸取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品分别注入液相色谱柱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析;
所述的制备方法包括以下步骤:
(1).(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品分别用乙醇溶解,配置成浓度为1mg/mL的对照品溶液;
(2).(±)-吡咯酯供试品用乙醇溶解,配制成浓度为5~10mg/mL的供试品溶液;进样量为 1~10mL;
(3).设置正己烷-异丙醇混合溶剂或正己烷-乙醇混合溶剂的比例为90:10~0:100;设置流速为5~50mL/min;检测波长为210nm;
(4).取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品分别注入液相色谱柱,参照(+)- 吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,分别接收对应主峰,浓缩,干燥,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的制备;
进一步地,所述的一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,所述分析方法所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯),所用的流动相为正己烷-异丙醇(70:30~0:100)或正己烷-乙醇(70:30~0:100),所设置的流速为 0.4~1.0mL/min。
实验结果表明:采用硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱,采用正己烷-异丙醇(70:30)混合溶剂或正己烷-乙醇(70:30)混合溶剂为流动相,选用较优的进样量,选用较优的波长,能够确保吡咯酯的稳定性,提高色谱峰的对称性,取得较好的分离效果,分离度大于16。
进一步地,所述的一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,所述的分析方法所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯],所用的流动相为正己烷-异丙醇(75:25~30:70)或正己烷-乙醇(85:15~40:60),所设置的流速为 0.5~1.0mL/min。
实验结果表明:采用硅胶表面涂覆有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]的手性色谱柱,采用正己烷-异丙醇(75:25)混合溶剂或正己烷-乙醇(85:15)混合溶剂为流动相,选用较优的进样量,选用较优的波长,能够确保吡咯酯的稳定性,提高色谱峰的对称性,取得较好的分离效果,分离度大于6。
进一步地,所述的一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,所述的分析方法所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有纤维素-三(3,5-二甲基苯基甲酸酯),所用的流动相为正己烷-异丙醇(90:10~70:30)或正己烷-乙醇(90:10~70:30),所设置的流速为0.8~1.0 mL/min。
实验结果表明:采用硅胶表面涂覆有纤维素-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱,采用正己烷-异丙醇(90:10)混合溶剂或正己烷-乙醇(90:10)混合溶剂为流动相,选用较优的进样量,选用较优的波长,能够确保吡咯酯的稳定性,提高色谱峰的对称性,取得较好的分离效果,分离度大于3。
进一步地,所述的一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,所述的分析方法所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯),所用的流动相为正己烷-异丙醇(80:20~71:29)或正己烷-乙醇(80:20~71:29),所设置的流速为0.8~1.0mL/min。
实验结果表明:采用硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱,采用正己烷-异丙醇(75:25)混合溶剂或正己烷-乙醇(75:25)混合溶剂为流动相,选用较优的进样量,选用较优的波长,能够确保吡咯酯的稳定性,提高色谱峰的对称性,取得较好的分离效果,分离度大于2.0。
进一步地,所述的一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,所述的分析方法所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有纤维素-三(3氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯),所用的流动相为正己烷-异丙醇(85:15~73:27)或正己烷-乙醇(85:15~73:27),所设置的的流速为0.8~1.0mL/min。
实验结果表明:采用硅胶表面涂覆有纤维素-三(3氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)的手性色谱柱,采用正己烷-异丙醇(80:20)混合溶剂或正己烷-乙醇(80:20)混合溶剂为流动相,选用较优的进样量,选用较优的波长,能够确保吡咯酯的稳定性,提高色谱峰的对称性,取得较好的分离效果,分离度大于1.5。
与以往技术相比,本发明的有益效果如下:
(1)本发明采用手性固定相的液相色谱法对吡咯酯对映异构体进行分析分离,其方法操作简单,准确和高效,能够有效控制吡咯酯的质量;
(2)采用较优选的手性色谱柱,采用较优选的流动相,选用较优的进样量,选用较优的波长,从而确保吡咯酯的稳定性,提高了色谱峰的对称性,具有较好的分离效果。
(3)本发明使用多糖衍生物涂覆型手性色谱柱与其它类手性固定相的液相色谱法相比,分离度更高,具有更好的分离效果。
可见,本发明克服了现有技术的不足,解决了吡咯酯对映异构体的分析分离问题,能够快速、准确和高效分析分离吡咯酯对映异构体,有效控制其质量,进而确保吡咯酯的质量。
因此,本发明开发的一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法是十分必要的。
附图说明
图1:HPLC图,色谱条件:色谱柱:AD-H(250mm×4.6mm,5.0μm);流动相:正己烷-乙醇(50:50);柱温:30℃。
图2:HPLC图,色谱条件:色谱柱:AD-H(250mm×4.6mm,5.0μm);流动相:正己烷-异丙醇(0:100);柱温:20℃。
图3:HPLC图,色谱条件:色谱柱:AS-H(250mm×4.6mm,5.0μm);流动相:正己烷-乙醇(70:30);柱温:30℃。
图4:HPLC图,色谱条件:色谱柱:AS-H(250mm×4.6mm,5.0μm);流动相:正己烷-异丙醇(50:50);柱温:30℃。
图5:HPLC图,色谱条件:色谱柱:OD-H(250×4.6mm,5.0μm);流动相:正己烷-乙醇(75:25);柱温:30℃。
图6:HPLC图,色谱条件:色谱柱:OD-H(250×4.6mm,5.0μm);流动相:正己烷-异丙醇(75:25);柱温:40℃
图7:HPLC图,色谱条件:色谱柱:Amylose-2(250×4.6mm,5.0μm);流动相:正己烷-异丙醇(80:20);柱温:40℃
图8:HPLC图,色谱条件:色谱柱:Cellulose-2(250×4.6mm,5.0μm);流动相:正己烷-异丙醇(80:20);柱温:40℃
具体实施方式
以下通过具体实施方式的描述并参照附图对本发明作进一步说明,但本发明的保护范围并不局限于具体实施例。
实施例1:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:AD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(70:30)
柱温:40℃
流速:1.0mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为17.0,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例2:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:AD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(0:100)
柱温:20℃
流速:0.4mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为6.8,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例3:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:AD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(50:50)
柱温:30℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为11.7,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。见附图1。
实施例4:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
色谱柱:AD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(70:30)
柱温:40℃
流速:1.0mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为16.1,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例5:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:AD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(0:100)
柱温:20℃
流速:0.4mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为4.3,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。见附图2。
实施例6:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:AD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(50:50)
柱温:20℃
流速:0.4mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为7.3,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例7:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:AS-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(85:15)
柱温:40℃
流速:1.0mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为6.1,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例8:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:AS-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(40:60)
柱温:20℃
流速:0.5mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.7,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例9:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:AS-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(70:30)
柱温:30℃
流速:0.8mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为3.6,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。见附图3。
实施例10:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:AS-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(75:25)
柱温:40℃
流速:1.0mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为6.3,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例11:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:AS-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(30:70)
柱温:20℃
流速:0.5mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.8,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例12:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:AS-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(50:50)
柱温:30℃
流速:0.5mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为3.9,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。见附图4。
实施例13:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:OD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(90:10)
柱温:40℃
流速:1.0mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为3.4,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例14:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:OD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(70:30)
柱温:20℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.6,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例15:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:OD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(75:25)
柱温:30℃
流速:0.8mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.8,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。见附图5
实施例16:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:OD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(90:10)
柱温:40℃
流速:1.0mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为3.0,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例17:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:OD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(70:30)
柱温:20℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.6,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例18:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:OD-H(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(75:25)
柱温:40℃
流速:0.8mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.9,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。见附图6
实施例19:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:Amylose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(80:20)
柱温:40℃
流速:0.8mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为2.1,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。见附图7
实施例20:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:Amylose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(71:29)
柱温:20℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为2.2,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例21:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:Amylose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(75:25)
柱温:20℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为2.0,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例22:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:Amylose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(80:20)
柱温:40℃
流速:0.8mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为2.3,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例23:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:Amylose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(71:29)
柱温:20℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为2.1,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例24:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:Amylose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(75:25)
柱温:20℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为2.0,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例25:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:Cellulose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(85:15)
柱温:40℃
流速:0.8mL/min
进样体积:10μL
样品浓度:0.1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。精密吸取供试品母液1mL,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.6,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。见附图8
实施例26:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:Cellulose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(73:27)
柱温:20℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.7,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例27:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:ellulose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(80:20)
柱温:20℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.7,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例28:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:Cellulose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(85:15)
柱温:20℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.7,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例29:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:Cellulose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(73:27)
柱温:20℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.5,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例30:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的分析分离
仪器与条件
色谱柱:Cellulose-2(250×4.6mm,5.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(80:20)
柱温:20℃
流速:0.8mL/min
进样体积:5μL
样品浓度:1mg/mL
检测波长:210nm
实验步骤
分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各1mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品母液。分别精密吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各5μL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对 (-)-吡咯酯及其对映异构体的分析。
实验结果:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯两个对映异构体的分离度为1.5,(-)-吡咯酯及其对映异构体能够完全分离。
实施例31:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的制备分离
仪器与条件
色谱柱:AD-H(250×30mm,10.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(0:100)
流速:20.0mL/min
进样体积:10mL
样品浓度:10mg/mL
检测波长:210nm
制备步骤:分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯100mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10mL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,分别接收对应主峰,浓缩,干燥,制得(-)-吡咯酯37mg,(+)-吡咯酯42mg。
实施例32:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的制备分离
仪器与条件
色谱柱:AS-H(250×10mm,10.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(70:30)
流速:5.0mL/min
进样体积:1mL
样品浓度:5mg/mL
检测波长:210nm
制备步骤:分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯50mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各1mL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,分别接收对应主峰,浓缩,干燥,制得(-)-吡咯酯2.1mg,(+)-吡咯酯2.5mg。
实施例33:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的制备分离
仪器与条件
色谱柱:OD-H(250×20mm,10.0μm)
流动相:正己烷-乙醇(90:10)
流速:19.0mL/min
进样体积:1mL
样品浓度:10mg/mL
检测波长:210nm
制备步骤:分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯100mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各1mL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,分别接收对应主峰,浓缩,干燥,制得(-)-吡咯酯4.2mg,(+)-吡咯酯3.9mg。
实施例34:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的制备分离
仪器与条件
色谱柱:Amylose-2(250×30mm,10.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(75:25)
流速:50.0mL/min
进样体积:10mL
样品浓度:10mg/mL
检测波长:210nm
制备步骤:分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯100mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液各10mL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,分别接收对应主峰,浓缩,干燥,制得(-)-吡咯酯39mg,(+)-吡咯酯35mg。
实施例35:(-)-吡咯酯和(+)-吡咯酯的制备分离
仪器与条件
色谱柱:Cellulose-2(250×30mm,10.0μm)
流动相:正己烷-异丙醇(80:20)
流速:35.0mL/min
进样体积:10mL
样品浓度:5mg/mL
检测波长:210nm
制备步骤:分别精密量取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯各10mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为对照品溶液。精密称量(±)-吡咯酯50mg,置于10mL容量瓶中,乙醇溶解并稀释到刻度,摇匀,作为供试品溶液。分别吸取(+)-吡咯酯、(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品母液各10mL进入液相色谱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,分别接收对应主峰,浓缩,干燥,制得(-)-吡咯酯17mg,(+)-吡咯酯24mg。
Claims (6)
1.一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,其特征在于,采用手性色谱柱并使用正相色谱法进行分析分离;所述的手性色谱柱填料为多糖衍生物涂覆型手性色谱柱,具体为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯)、直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯]、纤维素-三(3,5-二甲基苯基甲酸酯)、直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯)或纤维素-三(3氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯)中的一种;所述的正相色谱法所用的流动相为正己烷-异丙醇混合溶剂或正己烷-乙醇混合溶剂;
所述的分析方法包括以下步骤:
(1).(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品分别用乙醇溶解,配置成浓度为0.1mg/mL的对照品溶液;
(2).(±)-吡咯酯供试品用乙醇溶解,配制成浓度为0.1~1mg/mL的供试品溶液,进样量为5~10μL;
(3).设置正己烷-异丙醇混合溶剂或正己烷-乙醇混合溶剂的比例为90:10~0:100;设置流速为0.4~1.0mL/min;设置液相色谱柱温箱温度为20~40℃;检测波长为210nm;
(4).精密吸取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液分别注入液相色谱柱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的分析;
所述的制备方法包括以下步骤:
(1).(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品分别用乙醇溶解,配置成浓度为1mg/mL的对照品溶液;
(2).(±)-吡咯酯供试品用乙醇溶解,配制成浓度为5~10mg/mL的供试品溶液;进样量为1-10mL;
(3).设置正己烷-异丙醇混合溶剂或正己烷-乙醇混合溶剂的比例为90:10~0:100;设置流速为5~50mL/min;检测波长为210nm;
(4).取(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品及(±)-吡咯酯供试品溶液分别注入液相色谱柱,参照(+)-吡咯酯和(-)-吡咯酯对照品保留时间,分别接收对应主峰,浓缩,干燥,完成对(-)-吡咯酯及其对映异构体的制备。
2.根据权利要求1所述的一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,其特征在于,所述的分析方法所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(3,5-二甲基苯基氨基甲酸酯),所用的流动相为正己烷-异丙醇(70:30~0:100)或正己烷-乙醇(70:30~0:100),所设置的流速为0.4~1.0mL/min。
3.根据权利要求1所述的一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,其特征在于,所述的分析方法所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三[(S)-α-甲基苯基氨基甲酸酯],所用的流动相为正己烷-异丙醇(75:25~30:70)或正己烷-乙醇(85:15~40:60),所设置的流速为0.5~1.0mL/min。
4.根据权利要求1所述的一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,其特征在于,所述的分析方法所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有纤维素-三(3,5-二甲基苯基甲酸酯),所用的流动相为正己烷-异丙醇(90:10~70:30)或正己烷-乙醇(90:10~70:30),所设置的流速为0.8~1.0mL/min。
5.根据权利要求1所述的一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,其特征在于,所述的分析方法所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有直链淀粉-三(5-氯-2-甲基苯基氨基甲酸酯),所用的流动相为正己烷-异丙醇(80:20~71:29)或正己烷-乙醇(80:20~71:29),所设置的流速为0.8~1.0mL/min。
6.根据权利要求1所述的一种HPLC法分析及制备(-)-吡咯酯及其对映异构体的方法,其特征在于,所述的分析方法所用的手性色谱柱填料为硅胶表面涂覆有纤维素-三(3氯-4-甲基苯基氨基甲酸酯),所用的流动相为正己烷-异丙醇(85:15~73:27)或正己烷-乙醇(85:15~73:27),所设置的的流速为0.8~1.0mL/min。
Priority Applications (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810561742.XA CN109085255B (zh) | 2018-06-04 | 2018-06-04 | 一种hplc法分析及制备3-(n-对甲苯磺酰基-l-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯及其对映异构体的方法 |
Applications Claiming Priority (1)
Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
---|---|---|---|
CN201810561742.XA CN109085255B (zh) | 2018-06-04 | 2018-06-04 | 一种hplc法分析及制备3-(n-对甲苯磺酰基-l-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯及其对映异构体的方法 |
Publications (2)
Publication Number | Publication Date |
---|---|
CN109085255A true CN109085255A (zh) | 2018-12-25 |
CN109085255B CN109085255B (zh) | 2021-03-12 |
Family
ID=64839281
Family Applications (1)
Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
---|---|---|---|
CN201810561742.XA Active CN109085255B (zh) | 2018-06-04 | 2018-06-04 | 一种hplc法分析及制备3-(n-对甲苯磺酰基-l-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯及其对映异构体的方法 |
Country Status (1)
Country | Link |
---|---|
CN (1) | CN109085255B (zh) |
Cited By (1)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111929392A (zh) * | 2020-06-18 | 2020-11-13 | 吉林医药学院 | 一种柱前衍生化分析n-(对甲苯磺酰基)-l-丙氨酰氯及其对映异构体的方法 |
Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101487041A (zh) * | 2009-02-26 | 2009-07-22 | 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 | 细菌性***病联合检测试剂 |
US20140228321A1 (en) * | 2011-09-27 | 2014-08-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Pyrrolinone carboxamide compounds useful as endothelial lipase inhibitors |
CN107445951A (zh) * | 2017-07-29 | 2017-12-08 | 上海键合医药科技有限公司 | 一种硫酸艾沙康唑鎓非对映异构体杂质的制备方法和用途 |
-
2018
- 2018-06-04 CN CN201810561742.XA patent/CN109085255B/zh active Active
Patent Citations (3)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN101487041A (zh) * | 2009-02-26 | 2009-07-22 | 广州鸿琪光学仪器科技有限公司 | 细菌性***病联合检测试剂 |
US20140228321A1 (en) * | 2011-09-27 | 2014-08-14 | Bristol-Myers Squibb Company | Pyrrolinone carboxamide compounds useful as endothelial lipase inhibitors |
CN107445951A (zh) * | 2017-07-29 | 2017-12-08 | 上海键合医药科技有限公司 | 一种硫酸艾沙康唑鎓非对映异构体杂质的制备方法和用途 |
Non-Patent Citations (1)
Title |
---|
JAKUB SIRC等: "Morphological and chromatographic characterization of molecularly imprinted monolithic columns", 《E-POLYMERS》 * |
Cited By (2)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN111929392A (zh) * | 2020-06-18 | 2020-11-13 | 吉林医药学院 | 一种柱前衍生化分析n-(对甲苯磺酰基)-l-丙氨酰氯及其对映异构体的方法 |
CN111929392B (zh) * | 2020-06-18 | 2023-11-14 | 吉林医药学院 | 一种柱前衍生化分析n-(对甲苯磺酰基)-l-丙氨酰氯及其对映异构体的方法 |
Also Published As
Publication number | Publication date |
---|---|
CN109085255B (zh) | 2021-03-12 |
Similar Documents
Publication | Publication Date | Title |
---|---|---|
Yan et al. | Molecularly imprinted matrix solid-phase dispersion combined with dispersive liquid–liquid microextraction for the determination of four Sudan dyes in egg yolk | |
CN104965041B (zh) | 一种帕瑞昔布钠异构体的高效液相色谱检测方法 | |
Vlčková et al. | Microextraction by packed sorbent as sample preparation step for atorvastatin and its metabolites in biological samples—critical evaluation | |
CN103207246B (zh) | 一种用液相色谱法分离测定鲁拉西酮及其光学异构体的方法 | |
CN104407067B (zh) | 依鲁替尼及其异构体的检测方法 | |
Ji et al. | Preparation of the high purity gingerols from ginger by dummy molecularly imprinted polymers | |
CN106053658B (zh) | 一种烫骨碎补配方颗粒特征图谱及其建立方法 | |
CN106610405A (zh) | 人尿液中儿茶酚胺类物质和其甲氧基代谢物含量的检测方法 | |
Douša et al. | Fundamental study of enantioselective HPLC separation of tapentadol enantiomers using cellulose-based chiral stationary phase in normal phase mode | |
CN101701942A (zh) | 一种用液相色谱法分离测定恩替卡韦及其光学异构体的方法 | |
CN104777243A (zh) | 一种同时测定半夏中有机酸、核苷和麻黄碱的hplc方法 | |
CN110849980A (zh) | 一种l-丙氨酸异丙酯中对映异构体含量的检测方法 | |
CN105954447A (zh) | 一种通过hplc分析分离苯甲酰科立内酯对映异构体的方法 | |
CN108956827A (zh) | 一种hplc法分析及制备3-(n-对甲苯磺酰基-l-丙氨酰氧基)吲哚及其对映异构体的方法 | |
CN109085255A (zh) | 一种hplc法分析及制备3-(n-对甲苯磺酰基-l-丙氨酰氧基)-5-苯基吡咯及其对映异构体的方法 | |
CN106568877A (zh) | 一种维格列汀中间体‑5对映异构体检测的分析方法 | |
CN103353492A (zh) | 一种用液相色谱法分离测定琥珀酸索非那新原料及其制剂的方法 | |
Zhou et al. | Selective extraction and analysis of catecholamines in rat blood microdialysate by polymeric ionic liquid-diphenylboric acid-packed capillary column and fast separation in high-performance liquid chromatography-electrochemical detector | |
CN106706835B (zh) | 一种金莲花泡腾片的质量检测方法 | |
Asafu-Adjaye et al. | Solid-phase extraction–high-perfomance liquid chromatography determination of verapamil and norverapamil enantiomers in urine | |
CN108693272B (zh) | 一种hplc法分析及制备n-(对甲苯磺酰基)-l-丙氨酸及其对映异构体的方法 | |
CN103207245A (zh) | 一种用液相色谱法分离测定度他雄胺中间体及其光学异构体的方法 | |
CN105136933A (zh) | 一种采用高效液相色谱法分离检测阿普斯特及其对映异构体的方法 | |
CN105628841B (zh) | 一种用液相色谱法分离测定阿普斯特及其对应异构体的方法 | |
CN104133029A (zh) | 一种测定琥珀酸索非那新中间体光学纯度的方法 |
Legal Events
Date | Code | Title | Description |
---|---|---|---|
PB01 | Publication | ||
PB01 | Publication | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
GR01 | Patent grant | ||
GR01 | Patent grant |