CN1090130A

CN1090130A - 用地衣芽孢杆菌生产生物农药的方法

Info

Publication number: CN1090130A
Application number: CN 93100172
Authority: CN
Inventors: 杨惠芳; 程素琴; 王天纵; 寇平原
Original assignee: CHINA HUANENG TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co; HUANENG SCIENCE AND TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co HENAN PROV
Current assignee: CHINA HUANENG TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co; HUANENG SCIENCE AND TECHNOLOGY DEVELOPMENT Co HENAN PROV
Priority date: 1993-01-20
Filing date: 1993-01-20
Publication date: 1994-08-03
Anticipated expiration: 2013-01-20
Also published as: CN1032570C

Abstract

本发明属于微生物发酵生产生物农药的新方法。用本发明的地衣芽孢杆菌为生产菌，通过微生物发酵的方法制得菌体发酵液对植物病害菌，如水稻白叶枯病、黄瓜枯萎病、黄瓜霜霉病、马铃薯瘟病和棉花枯萎病等有明显防治效果，并对有害的蚜虫、红蜘蛛和螨虫有杀灭作用。该菌使用的培养基主要成分有玉米粉，黄豆粉，硫酸铵，硫酸镁和硫酸锰等无机盐。最适pH值6.5—7.2，最适温度28—30℃，最适发酵周期为18—24小时。

Description

本发明是关于微生物发酵法生产农药的新方法，特别是关于利用筛选分离到的一株独特的地衣芽孢杆菌进行微生物发酵获得的菌体发酵液，命名为"华能201"的生物农药的生产方法。

植物病虫害对农业生产会造成严重的经济损失，所以防治农作物的病虫害是一项十分有意义的课题。而目前国内外对农业作物病虫害的防治办法多数都采用化学合成农药进行防治。虽然病虫害一时可以得到防治和控制，但是化学农药毒性大，残留农药对生态环境造成危害，因此，目前世界各国都在关注高效、无毒、无公害的生物农药，本发明正是针对目前化学农药存在的问题，利用特殊分离到的一株地衣芽孢杆菌，采取微生物发酵的方法，获取具有生物活性的发酵液，这种发酵液能够有效的防治农用作物病害，同时还证明这种发液能够刺激植物生长，促进种子萌发，对蚜虫，红蜘蛛和螨虫也有较强的杀灭作用。通过实验证明"华能201"生物农药对马铃薯瘟病、花生青枯病、黄瓜枯萎病、棉花立枯病、白菜软腐病、白菜黑腐病、荔枝霜霉病有较好的防治效果。本发明"华能201"生物农药经***预防医学科学院毒理研究室实验证明，也是一种安全可靠的生物农药，对人、畜无毒害作用。"华能201"施药后，在自然界不会残留积累，可以由自然因素降解。而化学农药对人畜毒性较大，农民常有施药不当产生中毒现象发生。化学农药对原菌易产生耐药性，所以使用剂量有愈来愈大的趋势，为此给环境带来的危害日趋严重。本发明克服了化学农药缺欠，是目前理想的生物农药。从现有检索中，至今还末发现采用地衣芽孢杆菌生产本发明生物农药的报导。本发明生产"华能201"的方法是，将新活化的菌种接入三角瓶中，使菌体扩大培养后，接入发酵罐中进行发酵培养。其过程中主要的关键是发酵温度可以控制在15-55℃之间，最适生长温度是28-30℃，发酵的PH值可以在5至8之间，最适PH范围在6.5-7.2之间，发酵可控制在16-30小时，发酵最适时间应在20-24小时。发酵过程所设计的培养基碳源可以是含淀粉的物质含量为0.1-3%，糖蜜1.5-2.5%，葡萄糖0.5-1.5%，蔗糖0.5-1.5%。氮源可以是含蛋白质的物质，如黄豆粉0.5-1.0%，棉饼粉或无机氮源如硫酸铵（NH₄）₂SO₄等。发酵培养基中还需添加磷酸氢二钾、硫酸镁、硫酸锰和酵母粉。本发明所设计的培养基配方有以下几种：

1、玉米粉 3.0% (NH₄)₂SO₄0.5%

黄豆粉 1.0% K₂HPO₄0.05%

棉饼粉 1.0% MgSO₄.7H₂O 0.02%

胰蛋白胨 0.1% MnSO₄0.001%

酵母粉 0.1% PH 6.5-7.2

2、50%糖蜜 2% (NH₄)₂SO₄0.2%

黄豆粉 0.5% K₂HPO₄0.2%

酵母粉 0.1% PH 6.5-7.2

3、20%糖蜜 2% (NH₄)₂SO₄0.2%

玉米粉 0.1% K₂HPO₄0.2%

牛肉膏 0.1% PH 6.5-7.2

4、葡萄糖 1% (NH₄)₂SO₄0.5%

K₂HPO₄0.5%

蛋白胨 0.5% MnSO₄.H₂O 0.5%

牛肉膏 0.3% MgSO₄.7H₂O 0.02%

PH 6.5-7.2

实施例1∶500立升发酵罐生产"华能201"及抑菌结果

采用本发明分离到的地衣芽孢杆菌为生产菌株，发酵培养的组成，玉米粉3.0%，黄豆粉1.0%，棉饼粉1.0%，胰蛋白胨0.1%，酵母粉0.1%，MnSO₄0.001%，（NH₄）₂SO₄0.5%，K₂HPO₄0.05%，MgSO₄.7H₂O 0.02%。PH调节在6.5-7.2的范围内。发酵罐容积为500立升，发酵最适温度范围为28-30℃，搅拌速度为200rpm-300rpm转/分，空气流量比为1∶0.75，罐压保持在0.6-1Kg/cm²，罐发酵最适周期为20-24小时，一般可以测定菌体数，若每毫升发酵液菌体数达到100亿个菌体时，发酵可视为到达终点，一般采用上述方法，发酵周期控制在18-24小时之间，发酵即可达到理想的结果，发酵液都具有较高的生物活性。以此，发酵液对部分植物病菌进行抑菌试验，其结果如下：

"华能201"的抗菌谱结果

试验菌（植物病原菌）抑菌圈（mm）

马铃薯瘟病 17

马铃薯青枯病 19

水稻白叶枯病 65

稻瘟病 20

水稻恶菌病 20

花生青枯病 20

黄瓜枯萎病 26

黄瓜炭疽病 26

黄瓜角斑病 14

黄瓜霜霉病 +++

棉花枯萎病 28

棉花立枯病 37

白菜软腐病 21

白菜黑腐病 70

注：+++对孢子萌发的抑制能力。

一般测定抑菌圈超过23mm的发酵液，可以列为高效产品。抑菌圈在18-23mm之间，的产品为合格产品。

实施例2："华能201"防治水稻白叶枯病试验结果

一、材料方法：

1、"华能201"生物农药。

2、20%的叶青双可湿粉剂（又名噻枯唑，川化-018，浙江温州龙湾化工厂生产）化学农药作对照药剂。

3、试验共有四个处理：

（1）、"华能201"50倍液（2）、"华能201"100倍液

（3）、20%叶青双 2两/亩（4）、空白对照喷等量清水

各处理重复三，隋机组排列，每小区面积20平方米。

4、试验田选在信阳县五里店乡丰台村，常年发病重的田块。水稻品种"灿优63"。由于干旱，白叶枯病较常年发生偏晚。8月15日喷第一次药，一周后喷第二次药，每亩喷液量50Kg。

各施药区防治白叶枯病效果见表一：

二、结果：

从上表中可以看出"华能201"生物农药对水稻白叶枯病有明显的防治效果，是取代化学农药叶青双防治水稻白叶枯病的优良药剂。

实施例3："华能201"防治黄瓜霜霉病试验结果

一、材料方法：

1、"华能201"生物农药

2、25%甲霜灵WP

3、实验设计：共设五个处理，每个处理重复三次，共十五个小区，隋机排列，每个小区面积为15平方米，处理浓度为：

（1）、"华能201"25倍液 50倍液 100倍液

（2）、25%的甲霜灵WP 1000倍液

（3）、空白对照

防效试验见表二：

二、结果：

201杀菌剂能有效地抑制黄瓜霜霉病的发展，在防治中应采用两次或者视病情发展情况进行至少两次的喷药，每次喷药间隔期为七天，并尽早喷药，以发病初期喷药为宜。

实施例4："华能201"防治蚜虫初步试验结果

一、材料方法：

1、"华能201"生物农药

2、空白对照为清水

3、试验处理：

（1）、"华能201"50倍稀释（2）、"华能201"100倍稀释

（3）、空白对照等量清水

各处理重复二次，隋机排列，每小区面积30平方米。

结果见下表：

竹子蚜虫试验结果

处理 7小时死亡率 24小时死亡率

"华能201"50倍液 10% 95%

"华能201"100倍液 8% 92%

CK(空白水时照) 0% 0%

实施例5：201防治荔枝霜霉病结果

一、材料方法

1、华能201生物农药。

2、瑞毒霉600倍稀释，化学农药作为对照药剂。

3、试验共四个处理

①华能"201"，50倍稀释液; ②华能"201"，100倍稀释液;

③瑞毒霉，600倍稀释; ④空白对照喷等量清水。

防治荔枝霜霉病结果如下

处理调查果数健果% 病果% 发病率% 防治效果%

"201"50倍稀释 197 180 17 8.63 73.13

"201"100倍稀释 63 32 31 49.21 53.21

瑞毒霉600稀释 123 110 13 10.57 67.09

对照清水 165 112 53 32.12 无

4、结果分析

华能"201"50倍稀释，防治荔枝霜霉病药效比目前生产上用的50%的瑞毒霉-锰舒效果更好。

从初步试验结果，"201"100倍稀释对防治菜蚜和其它蚜虫和2.5%敌杀死效果差不多，但"201"对人畜无害，对周围环境无污染，无残留，虽然防治不能立即看出，但24小时的防治结果和其它化学农药效果相比更好。故为很有前途的微生物农药。

Claims

1、用地衣芽孢杆菌生产生物农药的方法，其特征在于使用的生产菌是特殊分离到的一株地衣芽孢杆菌，它的发酵液对植物病、虫害有明显的防治作用，尤其对革兰氏阴性菌和植物病原真菌有较强的颉抗作用，如说明书中所述，该菌在本发明中所设计的含有碳、氮源培养基中发酵生产可以获得具有较高生物活性的发酵液，在本发明中命名为“华能201”。

2、如权利要求1所述的方法，其特征在于使用地衣芽孢杆菌生产"华能201"的温度范围是15-55℃之间，最佳温度是28-30℃。

3、如权利要求1所述的方法，其特征在于本发明设计的培养基是：碳源采用含淀粉的物质或糖或糖蜜和氮源是含蛋白质的物质或无机氮，以及无机盐类，用磷酸氢二钾，硫酸镁，硫酸锰。

4、如权利要求3所述的方法所说的培养基碳源，其特征在于含淀粉的物质是用玉米粉，含量为0.1-3%或糖蜜在1.5-2.5%，最佳为2%，或糖可以用葡萄糖含量可在0.5-1.5%范围，最佳1%，或者蔗糖可在0.5-1.5%范围，最佳含量1%。

5、如权利要求3所述的方法所说的培养基中氮源其特征在于可以用黄豆粉，含量为0.5-1.0%，硫酸铵0.2-0.5%。

6、如权利要求3所述的方法所说的培养基无机盐其特征在于磷酸氢二钾含量0.05-0.5%，硫酸镁含量为0.02%，硫酸锰含量0.001-0.5%。

7、如权利要求1所述的方法，其特征在于使用地衣芽孢杆菌生产"华能201"发酵时间在16-30小时之间，最适时间应控制在20-24小时之内。

8、如权利要求1所述的方法，其特征在于使用地衣芽孢杆菌生产"华能201"的PH范围可以控制在5-8之间，最适PH是在6.5-7.2之间。