CN109010844B - 一种依鲁替尼磷脂复合物及其制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种依鲁替尼磷脂复合物及其制备方法。依鲁替尼磷脂复合物包括依鲁替尼和磷脂，依鲁替尼和磷脂的摩尔比为1：0.5～1：5。所述的磷脂为磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇和心肌磷脂中的一种或几种。本发明能显著的改善药物溶解性能，增加药物吸收，提高药物生物利用度，尤其，以蛋黄磷脂酰甘油制备的摩尔比为1：1的复合物，生物利用度提高了14倍。

Description

一种依鲁替尼磷脂复合物及其制备方法

技术领域

本发明涉及一种依鲁替尼磷脂复合物及其制备方法，还涉及以依鲁替尼磷脂复合物作为活性成分的药物组合物，属于制药技术领域。

背景技术

依鲁替尼(Ibrutinib，IBR，曾用代号PCI-32765)是全球首个上市的布鲁顿酪氨酸激酶(Bruton tyrosine kinase，BTK)选择性和共价抑制剂(Davids MS,BrownJR.Ibrutinib:a first in class covalent inhibitor of Bruton's tyrosine kinase[J].Future Oncology,2014,10(6):957-967.)，最初由美国塞莱拉基因技术公司(CeleraGenomics)开发，后来Pharmacyclics公司以200万美元的首付获得了Celera Genomics公司的BTK研发管线，其中包括IBR。强生旗下杨森生物科技公司(Jassen)与Pharmacyclics于2011年12月签署授权协议联合开发IBR。Jassen拥有IBR在整个欧洲、中东和非洲以及美国以外世界其他地区的商业化权利。生物技术巨头艾伯维(AbbVie)于2015年耗资210亿美元收购Pharmacyclics公司，获得了IBR在美国市场的销售权。自2013年11月13日经FDA批准以来，短短三年时间，全球年销售量突破14亿美元。现已通过突破性药物、优先审评、加速批准、孤儿药资格等多种快速途径获批治疗复发性或难治性套细胞淋巴瘤(Mantle celllymphoma，MCL)、经治慢性淋巴细胞白血病(Chronic lymphocytic leukemia，CLL)和Waldenstrom巨球蛋白血症等(Jerkeman M,Hallek M,Dreyling M,et al.Targeting ofB‐cell receptor signalling in B‐cell malignancies[J].Journal of InternalMedicine,2017.)。

IBR分子骨架由三个片段组成，即苯氧苯基片段，吡唑嘧啶胺片段及光学活性的N-丙烯酰基哌啶环结构，化学名为1-[(3R)-3-[4-氨基-3-(4-苯氧基苯基)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶-1-基]-1-哌啶基]-2-丙烯-1-酮，分子式为C₂₅H₂₄N₆O₂，相对分子质量为440.50，化学结构式如下。外观为非吸湿性的白色或类白色固体，熔点为149-158℃，解离常数(pKa)为3.74，分配系数(Log P)为3.97(正辛醇/pH7.0的缓冲溶液中)，在pH 4.5-8的水溶液中几乎不溶(3μg·mL^-1)，在pH 1.2时微溶于HCl溶液，在非极性溶剂中不溶，例如己烷和庚烷，微溶于乙酸乙酯、乙醇和乙腈，溶于丙酮和甲醇，易溶于N,N-二甲基甲酰胺、四氢呋喃和二氯甲烷(郑小娟,王婧斯,龚莉,et al.依鲁替尼:一种新型布鲁顿酪氨酸激酶抑制剂[J].药物评价研究,2014,37(4):381-384)。BCS分类***中属于第二类药物，即低溶解度，高渗透性类药物。

依鲁替尼已上市剂型为胶囊剂，规格140mg/粒，商品名

辅料包括羧甲基纤维素钠、硬脂酸镁、微晶纤维素、月桂基硫酸钠。口服，1次/d，4粒/次(560mg)用于治疗MCL；口服，1次/天，3粒/次(420mg)用于治疗CLL。不良反应主要包括出血、感染、骨髓抑制、肾毒性、第二原发恶性肿瘤、胚胎-胎儿毒性(张建忠.2014年2月FDA批准新药概况[J].上海医药,2014,(7):60-61)。MCL患者中最常见发生不良反应(≥20％)是血小板减少、腹泻、中性粒细胞减少、贫血、疲乏、肌肉骨骼痛、周边水肿、上呼吸道感染、恶心、瘀伤、呼吸困难、便秘、皮疹、腹痛、呕吐和食欲减低。CLL患者中最常见不良反应(≥20％)是血小板减少、腹泻、瘀伤、中性粒细胞减少、贫血、上呼吸道感染、疲乏、肌肉骨骼痛、皮疹、发热、便秘、周边水肿、关节痛、恶心、口腔炎、窦炎和眩晕。最常见3或4级非血液学不良反应(≥5％)是肺炎、高血压、心房纤颤、窦炎、皮肤感染、脱水、和肌肉骨骼痛(陈本川.治疗套细胞淋巴瘤及慢性淋巴细胞白血病新药--依鲁替尼(ibrutinib)[J].医药导报,2014,33(10):1336-1338.)。

空腹情况下，口服依鲁替尼胶囊剂的绝对生物利用度为2.9％，服用食物的绝对生物利用度是空腹的2倍。健康人口服单剂量放射性¹⁴C标记的IBR后，约90％的放射性药物在168小时被体内清除，其中80％从粪便排出，近10％从尿液排出。在标记的粪便***物中，近1％是原形药，而尿液***物中无原形药，这也提示IBR大部分都被体内代谢(Scheers E,Leclercq L,De JJ,et al.Absorption,metabolism,and excretion of oral 14Cradiolabeled ibrutinib:an open-label,phase I,single-dose study in healthy men[J].Drug Metabolism&Disposition the Biological Fate of Chemicals,2015,43(2):289-297.)。

磷脂是一种含磷的类脂物质，分为甘油磷脂(骨架为甘油)和鞘磷脂(骨架为鞘氨醇)两大类，每一类又分为天然、半合成磷脂与全合成磷脂。天然磷脂主要来源于大豆类植物或动物的皮、脑和肝脏。根据极性头部基团的不同区分为磷脂酰胆碱(Phosphatidylcholines，PC)、磷脂酰乙醇胺(Phosphatidylethanolamines，PE)、磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserines，PS)、磷脂酰肌醇(Phosphatidylinositols，PI)、磷脂酰甘油(phosphatidylglycerol，PG)、磷脂酸(phosphatidicacid，PA)等(Li J,Wang X,Zhang T,et al.A review on phospholipids and their main applications in drug deliverysystems[J].Asian Journal of Pharmaceutical Sciences,2015,10(2):81-98.)。天然磷脂的典型代表是大豆卵磷脂和蛋黄卵磷脂，半合成磷脂的代表是氢化大豆卵磷脂，全合成磷脂的代表是二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)、二硬脂酰磷脂酰甘油(DSPG)。研究者们普遍采用PC、PE和PS制备磷脂复合物，其中PC应用和研究的最为广泛。值得注意的是，MikkoJ.Parry首次将西拉美新与磷脂酸(PA)成功制备成高亲和性小分子磷脂复合物(Parry MJ,Alakoskela JMI,Khandelia H,et al.High-Affinity Small Molecule-PhospholipidComplex Formation:Binding of Siramesine to Phosphatidic Acid[J].Journal ofthe American Chemical Society,2008,130(39):12953-12960.)。迄今为止，尚未见报道使用磷脂酰甘油制备磷脂复合物。

蛋黄磷脂酰甘油(EPG)结构式：

磷脂复合物(Phytosomes or phospholipid complexes)是指在合适溶剂中药物与磷脂以一定化学计量比关系结合而形成的复合物。1984年加拿大的Venkataram最早报道关于磷脂复合物研究，他们发现将药物灰黄霉素与磷脂共同溶于氯仿中蒸去溶剂所得的固体共沉淀物即磷脂固体分散物对药物的溶出有明显的促进作用。1989年意大利学者Bombardelli等也发现某些天然活性成分与磷脂结合形成的复合物表现出与原化合物显著不同的理化性质和生物学特性。目前，磷脂复合物的形成机理尚不明确，Bombardelli曾认为磷脂复合物的作用机制是药物分子能够与磷脂分子产生化学键形成新化合物，但多数研究者们认为磷脂复合物之间的相互作用力为分子间作用力，主要为氢键和范德华力。Yiqiong Pu通过计算机软件模拟20(S)-原人参二醇与磷脂的三维构象并进行药物与磷脂摩尔比为1∶1时的分子对接实验，发现20(S)-原人参二醇分子的疏水部分被磷脂分子的两条疏水链包围，药物分子的某一个-OH能够与磷脂分子-P＝O形成氢键，对接自由能为-3.3kcal·mol^-1(Pu Y,Zhang X,Zhang Q,et al.20(S)-Protopanaxadiol PhospholipidComplex:Process Optimization,Characterization,In Vitro Dissolution andMolecular Docking Studies[J].Molecules,2016,21(10):1396.)。Yu.G.Afanas'eva借助量子化学和¹³C NMR同时研究了山奈酚、槲皮素和杨梅素与磷脂酰胆碱形成复合物的作用力，发现形成稳定复合物最可能的原因是它们能够与胆碱发生π电子络合的同时与磷酸盐形成稳定的氢键(Afanas’eva YG,Fakhretdinova ER,Spirikhin LV,et al.Mechanism ofinteraction of certain flavonoids with phosphatidylcholine of cellularmembranes[J].Pharmaceutical Chemistry Journal,2007,41(7):354-356.)。药物与磷脂形成复合物后，能增加药物在胃肠道中的吸收，提高生物利用度，提高疗效。

发明内容

本发明的目的在于，提供一种依鲁替尼磷脂复合物及其制备方法。针对IBR不溶于水(3μg·mL^-1)，胶囊剂绝对生物利用度仅有2.9％，以及临床给药剂量大的问题，将其制成磷脂复合物，以增加IBR的水溶性，增加药物吸收，提高药物生物利用度，并能够提高一种可以注射的产品，用于危重患者。

为解决上述技术问题，本发明提供的技术方案如下：一种依鲁替尼磷脂复合物，包括依鲁替尼和磷脂，依鲁替尼和磷脂的摩尔比为1：0.5～1：5。磷脂包括磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰肌醇和心肌磷脂。可以是天然、半合成与全合成，如蛋黄磷脂酰甘油(EPG)、氢化蛋黄脂磷脂酰甘油(HEPG)、二油酰磷脂酰甘油(DOPG)。可采用一种或者两种以上磷脂的组合物。

上述的依鲁替尼磷脂复合物中，依鲁替尼和磷脂的摩尔比为1:0.5～1:3。

上述的依鲁替尼磷脂复合物中，优选地，依鲁替尼和磷脂的摩尔比为1:1～1:2。

本发明还提供了依鲁替尼磷脂复合物的制备方法，其通过如下方法制备：

将依鲁替尼和磷脂溶于适量的有机溶剂中，在一定温度下搅拌反应一定时间后，除去有机溶剂，得到依鲁替尼磷脂复合物。可以进一步采用冷冻干燥或者喷雾干燥技术。

其中，所述的有机溶剂为：甲醇、乙醇、叔丁醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃和丙酮中的一种或者两种以上的组合。

所述的反应温度为：20～60℃。

本发明还提供了含有如上磷脂复合物的药物组合物，所述的药物组合物与药学上可接受的赋形剂可以制备临床上可接受的片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、软膏剂、口服液剂、输液剂、注射剂等制剂。所述的药学上可接受的赋形剂可以为药学上可接受的加入抗氧剂、稀释剂、粘合剂等。

本发明首次采用磷脂中的磷脂酰甘油，意外发现，所制备的磷脂复合物，可以提高依鲁替尼溶解度超过100倍，所得溶液为澄清透明，这是以往的磷脂复合物没有报道的现象；相对生物利用度为1468％，大鼠绝对生物利用度为109％，口服抗肿瘤S180的抑瘤率达到静脉注射的效果。

附图说明

图1为依鲁替尼(a)、EPG(b)、物理混合物(c)与磷脂复合物(d)的紫外光谱；

图2为依鲁替尼(a)、EPG(b)、物理混合物(c)与磷脂复合物(d)的红外光谱图；

图3为依鲁替尼(a)、EPG(b)、物理混合物(c)与磷脂复合物(d)的DSC图；

图4为依鲁替尼(a)、EPG(b)、物理混合物(c)与磷脂复合物(d)的X射线衍射分析图；

图5为IBR(a),EPG(b),物理混合物(c)与磷脂复合物(d)¹H NMR图

图6为IBR(a),EPG(b),物理混合物(c)与磷脂复合物(d)¹³C NMR图

图7是冻干产品与复溶后的外观

图8为电镜照片

图9是依鲁替尼混悬剂灌胃(susp i.g.)、摩尔比1:1磷脂复合物灌胃(1-1 i.g.)和摩尔比1:1磷脂复合物静脉注射(1-1 i.v.)药时曲线图。

具体实施方式

下面结合实施例对本发明作进一步的说明。

仪器：BS124s电子分析天平(德国赛多利斯公司)；DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器(巩义市英峪予华仪器厂)；PB-10型pH计(德国赛多利斯公司)；Anke TDL80-2B离心机(上海安亭科学仪器厂)；UV1801型紫外-可见分光光度计(北京瑞利分析仪器有限公司)；UV5100型紫外-可见分光光度计(安徽皖仪科技股份有限公司)；P230高压恒流泵(大连依利特分析仪器有限公司)；UV200II紫外可变波长检测器(大连依利特分析仪器有限公司)；HW-2000色谱数据处理工作站(大连依利特分析仪器有限公司)；AT-130柱温箱(天津市金洲科学仪器有限公司)；高精度全自动交流稳压器(中川电气科技有限公司)；0.45μm聚偏乙烯微孔滤膜(上海摩速科学器材有限公司)；试药：依鲁替尼原料药(IBR，南京熙泽生物科技有限公司，纯度≥99％)；蛋黄磷脂酰甘油(EPG，上海艾韦特医药科技有限公司，纯度≥97％)；无水乙醇(分析纯，天津科密欧化学试剂开发中心)；正己烷(分析纯，天津市富宇精细化工有限公司)；正辛醇(分析纯，天津市恒兴化学化学试剂制造有限公司)；乙腈(色谱纯，山东禹王实业有限公司化工分公司)；甲醇(色谱纯，山东禹王实业有限公司化工分公司)；磷酸氢二钠(分析纯，西陇化工股份有限公司)；磷酸二氢钠(分析纯，西陇化工股份有限公司)；磷酸(分析纯，辽宁嘉城精细化学品有限公司)

实施例1 IBR溶解度测定

取IBR适量，分别加入适量的重蒸水、5％乙醇(v/v)、10％乙醇(v/v)、20％乙醇(v/v)、正己烷、正辛醇、乙腈、无水乙醇、甲醇，于25℃下恒温搅拌24h，制备过饱和溶液。分别取上述IBR混悬液适量，10000rpm离心10min，上清液过0.45μm微孔滤膜，取续滤液用甲醇稀释制得待测样品，于260nm波长下测定其吸光度，计算各溶剂中IBR的溶解度，结果见表1。

表1IBR溶解度

由表1可知，IBR溶于正辛醇和甲醇，微溶于无水乙醇、乙腈，而其在重蒸水、5％乙醇、10％乙醇、20％乙醇和环己烷中不溶，乙醇作为潜溶剂在一定程度上能够增加IBR在水中的溶解度，但增加程度较小，20％乙醇溶解度只有0.025mg·mL^-1，仍然属于不溶于水范畴。

实施例2 pH对IBR水中溶解度的影响

以0.2mol·L^-1的Na₂HPO4、0.2mol·L^-1的NaH₂PO4和0.2mol·L^-1的H₃PO₄溶液为母液，分别配制pH为2.0、3.0、4.0、5.0、6.0、7.0、8.0和9.0的磷酸缓冲液备用。

取IBR适量，分别加入不同pH磷酸缓冲溶液中，于25℃密闭搅拌24h，制备过饱和溶液。分别取上述IBR混悬液适量，10000rpm离心10min，取上清液过0.45μm微孔滤膜，取续滤液用甲醇适度稀释制得待测样品，于260nm波长下测定其吸光度，计算各溶剂中IBR的溶解度，结果见表2。

表2不同pH溶液中的溶解度.

由表2可知，随着pH值降低，IBR溶解度呈现增加趋势，提示可能是IBR的伯胺基能够结合水中的H⁺，但即使pH为2.0，IBR水中溶解度仍然较小，只有0.22mg·mL-1。

备注：色谱条件色谱柱：Betasil C18柱(200mm×4.6mm，5μm，依利特公司)；流动相：乙腈-水(55∶45，v/v，水相中加入0.5％v/v三乙胺，醋酸调节pH＝3.20)；检测波长：256nm；流速：1.0mL·min^-1；进样量：20μL；柱温：25℃

实施例3磷脂种类的影响

选用无水乙醇作为反应溶剂，药物与磷脂的投料摩尔比设为1∶1，药物在乙醇中的质量浓度为10mg·mL^-1，反应时间为1.0h，反应温度设为60℃，挥除乙醇，加入预热至60℃的重蒸水，考察EPG、SPG、E80、S100、大豆PI、天然PA、DOPA、PS90、DLPS10不同的磷脂对制剂外观的影响，结果见表3。

表3磷脂种类的影响

备注：EPG---蛋黄磷脂酰甘油、HEPG---氢化蛋黄磷脂酰甘油、SPG---大豆磷脂酰甘油、DSPG---二硬脂酰磷脂酰甘油、DPPG---二棕榈酰磷脂酰甘油、DLPG---二月桂酰磷脂酰甘油、S100-大豆卵磷脂、E80---蛋黄卵磷脂、大豆PI---大豆来源的磷脂酰肌醇、DOPA---二油酰磷脂酸、PS90---磷脂酰丝氨酸、DLPS---二月桂酰磷脂酰丝氨酸。

将表中的液体过滤0.45μm，测定依鲁替尼浓度。结果表明，除S100和E80约为0.5mg·mL^-1之外，其它磷脂均可以达到5mg·mL^-1，特别是EPG、HEPG、SPG、DSPG、DPPG和DLPG的磷脂复合物在水中的浓度超过5mg·mL^-1。由于IBR原料在水中的浓度小于5μg·mL^-1，很显然，磷脂提高药物溶解度1000倍，而中性磷脂PC约为100倍。

由于EPG价格较为便宜，因此选择EPG作为制备复合物的磷脂，进行***研究。

实施例4反应时间的影响

选用无水乙醇为反应溶剂，药物与磷脂EPG的投料摩尔比设为1∶1，药物在乙醇中的质量浓度及反应温度同上，考察反应时间为0.5、1.0、1.5、2.0h对药物复合率和制剂外观的影响，结果见表4。

表4反应时间的影响

备注：复合率(％)＝M₂/M₁×100％。M₁---IBR的投药量，M₂---已复合IBR的质量

由表4可知，药物与磷脂的复合率受反应时间影响较小，药物与磷脂EPG的投料摩尔比为1∶1时，复合率均在90％左右，且外观均为无色澄清透明液体。

实施例5反应温度的影响

选用无水乙醇为反应溶剂，药物与磷脂EPG的投料摩尔比设为1∶1，药物在乙醇中的质量浓度及反应时间同“实施例3”，考察反应温度为40、50、60℃时对药物复合率和制剂外观的影响，结果见表5。

表5反应温度的影响

由表5可知，药物与磷脂的复合率受温度影响较小，药物与磷脂EPG的投料摩尔比为1∶1时，复合率均在90％左右，且外观均为无色澄清透明液体。

实施例6反应物浓度的影响

选用无水乙醇为反应溶剂，药物与磷脂EPG的投料摩尔比设为1∶1，反应温度及反应时间同“实施例3”，考察IBR在乙醇中的质量浓度为5、10、15、20mg·mL^-1时对药物复合率和制剂外观的影响，结果见表6。

表6反应物浓度的影响

由表6可知，当药物浓度在5和10mg·mL^-1时，药物与磷脂的复合率变化较小，复合率均在90％左右，且外观为无色澄清透明液体；当药物浓度为20mg·mL^-1时，复合率降低，外观为白色浑浊液体，故药物在乙醇中的质量浓度应控制在10mg·mL^-1以下。

实施例7依鲁替尼与磷脂投料摩尔比的影响

选用无水乙醇为反应溶剂，药物在乙醇中的质量浓度、反应温度和反应时间同“实施例3”，考察药物与磷脂投料摩尔比分别为2∶1、1∶1、1∶2、1∶3时对药物的复合率和制剂外观的影响，结果见表7。

表7依鲁替尼与磷脂摩尔比

由表7可知，摩尔比为1:0.3时，制剂外观为白色浑浊状，复合率小于50％，瓶底部有沉淀；摩尔比为1:0.5时，复合率大于50％；当摩尔比大于等于1∶1时，复合率大于90％；当药物与磷脂的摩尔比处于1:1～1:2之间时，外观为无色澄清透明液体。摩尔比大于2时，由于EPG过多，余下的EPG分散在水中，表现出EPG自身的分散性质，即乳状。摩尔比大于5时，为黏稠流体，无法顺利过滤。因此，药物与磷脂的摩尔比应该控制在小于等于1：5。

另外，将EPG与DSPG按照2:1混合，制备磷脂复合物，也可得到类似结果。

实施例8优化工艺的验证

根据以上结果，拟定优化工艺为：以无水乙醇为反应溶剂，药物与磷脂EPG的投料摩尔比1∶1，药物质量浓度为10mg·mL-1，反应时间0.5h，反应温度设为40℃，挥除乙醇，加入预热至40℃的重蒸水，磁力搅拌2min，0.45μm微孔滤膜过滤除去未复合的药物，即得磷脂复合物水分散液。测定了三批依鲁替尼磷脂复合物的复合率大于90％，外观为无色澄清透明液体。

采用此优化工艺，以甲醇、乙醇、叔丁醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃、丙酮、二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、乙酸乙酯和氯仿作为溶剂，考察不同溶剂制备复合物的情况，结果表明，甲醇、乙醇、叔丁醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃和丙酮可以制备得到复合物，二甲基亚砜、二甲基甲酰胺、乙酸乙酯和氯仿不易获得复合物。

采用甲醇、乙醇、叔丁醇、异丙醇、乙腈、四氢呋喃和丙酮任意两种或者两种以上的不同比例混合溶剂，也能够制备得到复合物。

另外，可以采用叔丁醇—水体系进行冻干，也可加入乳糖、甘露醇、山梨醇、海藻糖、右旋糖酐等辅料进行喷雾干燥。

实施例9紫外吸收光谱(UV)

取少量IBR、EPG、IBR与EPG的物理混合物以及磷脂复合物分别溶于甲醇溶液，以甲醇为空白，在200～400nm范围内进行紫外扫描，见附图1。

由图可知，IBR在207nm和260nm处有吸收峰，物理混合物在206nm和260nm处有吸收峰，磷脂复合物在207nm和260nm处有两个有吸收峰，IBR、物理混合物与磷脂复合物三者在200～400nm处紫外吸收图谱相似，三者没有显著性差异。表明复合物中IBR的发色基团结构未发生改变，并未形成新化合物。

实施例10红外光谱特征(IR)

分别取IBR、EPG、处方比例物理混合物、磷脂复合物适量，以KBr压片法进行IR分析，波长范围400～4000cm^-1，IR扫描图谱见附图2。

由图可知，物理混合物的红外光谱图为IBR与EPG峰的叠加，IBR伯胺的伸缩振动双峰(3469.3，3636.3)和EPG磷脂结构中羟基的伸缩振动峰(3428.9)、长脂肪链的碳氢伸缩振动峰(2921.8，2853.4)、脂肪酸酯中羰基的伸缩振动峰(1742.7)，磷氧双键的伸缩振动峰(1256.0)以及磷氧单键的伸缩振动峰(1115.2)均可找到，说明IBR与EPG物理混合物中二者之间没有相互作用，IBR仍以晶体形式存在。与物理混合物的图谱相比，磷脂复合物的图谱发生细微变化，IBR伯胺的伸缩振动双峰消失，只显示单峰3418.0，脂肪酸酯中羰基的伸缩振动峰强度(1739.1)明显减弱，磷氧单键的伸缩振动峰强度减弱(1114.6)，长脂肪链的碳氢伸缩振动峰强度和峰位没有发生变化。因此复合物中IBR与EPG并非简单的物理混合，长脂肪链没有参与复合作用，推测磷脂复合物中IBR的伯胺基上的氢原子与磷脂分子脂肪酸酯羰基上的氧原子或磷原子上的氧原子形成氢键。

实施例11差示扫描量热法(DSC)

以空铝坩埚为参比，另一铝坩埚内放入适量待测样品，待测样品分别为IBR、EPG、处方比例物理混合物和磷脂复合物，在氮气保护下，升温速率：10℃·min^-1，温程：30～200℃进行差示扫描量热分析，绘制DSC曲线图见附图3。

由图可知，IBR有一个单独吸热峰为159.17℃，为IBR的熔点峰；磷脂EPG也有一个单独吸热峰为91.66℃；物理混合物含有两个吸热峰，分别是91.04℃和158.23℃，与各自单独的吸热峰误差不超过1℃；而复合物的DSC图谱发生明显的变化，IBR的典型吸热峰消失，EPG吸热峰从91.66℃降低到83.80℃。表明IBR与EPG成功制备形成磷脂复合物，且药物IBR高度分散于磷脂分子中而检测不到，可能由于IBR与磷脂氢键的相互作用力存在使EPG脂肪链的有序性降低，吸热峰降低变为83.80℃。

实施例12 X-射线衍射分析(XRD)

分别取IBR、EPG、处方比例物理混合物、磷脂复合物适量进行X-射线衍射测定，设置检测条件：Cu-Kα靶，测定管压40kV，管流30mA，衍射范围为5°<2θ<50°，结果见附图4。

由图可知，IBR和EPG存在晶体衍射尖峰，均具有晶体性质，二者的物理混合物为各自衍射峰的叠加，没有生成新峰，表明二者之间无相互作用。磷脂复合物中IBR和EPG的晶体衍射峰完全消失，表明IBR与EPG的相互作用使二者处于高度分散状态，而使各自的晶体特征被抑制，整体表现出无定型特征。

实施例13核磁共振谱图(1H NMR和13C NMR)

以CD₃OD为溶剂对IBR、EPG、处方比例物理混合物和磷脂复合物进行了¹H NMR和¹³CNMR测定，结果见附图5和附图6。

由附图5和附图6可知，无论是¹H NMR还是¹³C NMR，磷脂复合物与物理混合物的峰位和峰形几乎不变，没有新的化学位移的产生，复合物没有形成新的化学键。

综合之，通过紫外、红外、X-射线衍射、差示扫描量热和核磁共振波谱等多个方面证明，依鲁替尼与磷脂形成了复合物。

实施例14磷脂复合物冻干保护剂的筛选

为提高磷脂复合物长期放置稳定性，可以制备冻干产品，所用的冻干赋形剂为甘露醇、海藻糖、蔗糖、乳糖、山梨醇等。以5％(m/v)甘露醇为例，经以下冻干程序：-80℃(10h)，-25℃(2h)，-10℃(10h)，0℃(8h)，10℃(6h)，25℃(6h)，可以得到外观饱满的磷脂复合物冻干品。以重蒸水在室温下复溶，外观见附图7。磷脂复合物水分散液透射电镜图见附图8，磷脂复合物为大小均一的球状粒子。

采用叔丁醇-水体系进行冻干可以得到类似产品。

实施例15稀释稳定性

注射给药时，往往需要将IBR-EPG水分散液进行稀释，选择5％葡萄糖注射液作为稀释介质，考察IBR-EPG水分散液的稀释稳定性。

精密移取水分散液0.5mL至5.0mL无色容量瓶内，以5％葡萄糖注射液稀释至刻度，混匀并避光放置。于稀释后0、3、6、12、24h取上述各溶液测定其粒径和IBR含量，结果表明，经5％葡萄糖注射液稀释后24h内，磷脂复合物水分散液的粒径和含量无显著性变化。

实施例16不同制剂在健康大鼠体内的药动学行为

大鼠血浆样品的处理

精密移取大鼠血浆样品200μL于1.5mL离心管中，加入100μL浓度为10μg·mL^-1的甲苯磺丁脲甲醇溶液作为内标，再加入甲醇600μL，涡旋10min混匀后于10000rpm离心10min，移取上清液600μL，室温氮气挥干。挥干的物质以流动相100μL复溶，涡旋5min混匀，于10000rpm离心10min，取上清液20μL进行HPLC分析。

色谱条件色谱柱：Betasil C18柱(200mm×4.6mm，5μm，依利特公司)；流动相：乙腈∶水(48∶52，v/v，水相中加入0.5％三乙胺后加入冰醋酸调节pH＝3.20)；检测波长：256nm；流速：1.0mL·min^-1；进样量：20μL；柱温：25℃；内标：甲苯磺丁脲

IBR口服混悬液的制备：称取IBR原料药10.0mg，加入交联羧甲基纤维素钠10mg，硬脂酸镁1.2mg，微晶纤维素18mg，十二烷基硫酸钠0.8mg，再加入5％葡萄糖注射液混合搅拌，得IBR浓度为2.0mg·mL^-1的口服混悬液(模拟上市胶囊剂的处方组成)。

磷脂复合物的制备：称取处方量IBR和EPG(摩尔比1∶1)，以无水乙醇为反应溶剂，药物质量浓度为10mg·mL^-1，反应时间0.5h，反应温度设为40℃，挥除乙醇，加入预热至40℃的重蒸水，磁力搅拌2min，过0.45μm的微孔滤膜，除去未复合的药物，即得磷脂复合物水分散液。

将15只体重在180～220g的健康雄性Wistar大鼠随机分为5组，每组3只，分别为口服IBR混悬液组(Susp i.g.)、口服摩尔比1∶1组(1-1i.g.)、静脉注射摩尔比1∶1组(1-1i.v.)。给药剂量以IBR计为20mg·kg^-1。分别于给药后的1、5、15、30、60、120、240、480、720min经眼眶静脉丛取血并置于肝素化管中，4500rpm离心10min分离血浆。处理血浆并进行HPLC分析计算药物浓度并绘制药动学曲线，结果见附图9，药动学参数见表8。

表8药动学参数

混悬剂组(Susp i.g.)，灌胃30min即出现最大血药浓度，与Sridhar等的报道一致(Veeraraghavan S,Viswanadha S,Thappali S,et al.Simultaneous quantification oflenalidomide,ibrutinib and its active metabolite PCI-45227in rat plasma byLC-MS/MS:Application to a pharmacokinetic study[J].Journal of Pharmaceutical&Biomedical Analysis,2015,107(3):151)；而复合物组5min达到最大血药浓度，远远快于混悬剂，复合物的AUC_1-720min是Susp i.g.组的14.68倍，其绝对生物利用度达到109.7％(备注：混悬剂的绝对生物利用度7.5％)。

实施例17抗肿瘤S180

将25只荷S180瘤小鼠随机分为5组，即口服对照组(0.3mL/只)、静注对照组(0.2mL/只)、口服IBR混悬液组(55.2mg·kg-1)、口服摩尔比1∶1组(55.2mg·kg^-1)、静脉注射摩尔比1∶1组(55.2mg·kg^-1)，每组5只。各组小鼠均于肿瘤体积到达62.5mm³后(约接种后第3天)开始灌胃或静注给药，每3天1次，共给药4次(接种后第3、6、9和12天)，第13天处死动物。完整剥离皮下肿瘤，称重，计算重量抑瘤率，结果见表9。复合物口服组达到静脉注射的效果。

表9抑瘤率结果(n＝5)

Claims (4)

1.一种依鲁替尼磷脂复合物，其特征在于，由依鲁替尼和磷脂组成，其中，依鲁替尼与磷脂的摩尔比为1∶1，所述磷脂为蛋黄磷脂酰甘油，并通过如下方法制备：

(1)取处方量的依鲁替尼与磷脂溶于有机溶剂中；

(2)于40℃条件下搅拌0.5小时；

(3)于40℃条件下除去有机溶剂，即得依鲁替尼磷脂复合物；

步骤(1)中所述有机溶剂的用量应使依鲁替尼的反应浓度为10mg/ml，所述溶剂选自无水乙醇。

2.如权利要求1所述的依鲁替尼磷脂复合物，其特征在于，所述的磷脂复合物加入水分散或者加入冻干保护剂冻干或采用叔丁醇-水体系进行冻干，所述的冻干保护剂为甘露醇、海藻糖、蔗糖中的一种。

3.如权利要求1所述的依鲁替尼磷脂复合物，其特征在于，所述的磷脂复合物加入水分散或者加入甘露醇、海藻糖、乳糖、蔗糖、山梨醇、右旋糖酐中的一种进行喷雾干燥。

4.如权利要求1所述的依鲁替尼磷脂复合物，其特征在于，所述的依鲁替尼磷脂复合物与药学上可接受的赋形剂制成临床上可接受的片剂、胶囊剂、颗粒剂、丸剂、散剂、软膏剂、口服液剂、输液剂、注射剂。

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