CN108828122A - 一种茶氨酸的高效液相检测方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及柱色谱技术领域，尤其涉及一种茶氨酸的高效液相检测方法，其色谱条件为：色谱柱：C18色谱柱；流动相：体积比为9:1的磷酸盐缓冲溶液与甲醇的混合液，其中磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.02‑0.03mol/L，pH值为2.5‑3.5；流动相流速：1.0‑1.3mL/min；检测波长：203nm；色谱柱柱温：20‑30℃；进行高效液相色谱分析，测定含有茶氨酸的溶液中茶氨酸的含量。本发明通过一次高效液相检测，准确测定出转化液中茶氨酸的含量，且与其他杂质峰达到很好的分离效果，节省了人工、时间和溶剂等成本。

Description

一种茶氨酸的高效液相检测方法
技术领域
本发明涉及氨基酸检测技术领域，尤其涉及一种茶氨酸的高效液相检测方法。
背景技术
茶氨酸是茶叶中特有的游离氨基酸，茶氨酸是谷氨酸γ-乙基酰胺，是茶叶中生津润甜的主要成份。茶氨酸含量因茶的品种、部位而不同。茶氨酸在干茶中占重量的1％-2％，其含量随发酵过程减少。茶氨酸可以明显促进脑中枢多巴胺释放，对精神和感情的影响部分是来自对中枢神经递质多巴胺生理活的作用，因此可以作为一种原料药。但是生产前需对原料药进行质量检测，现有技术中茶氨酸含量检测预处理步骤复杂，用时长，且准确度低。
发明内容
针对现有茶氨酸含量检测预处理步骤复杂，用时长，准确度低的问题，本发明提供一种茶氨酸的高效液相检测方法。
为达到上述发明目的，本发明实施例采用了如下的技术方案：
一种茶氨酸的高效液相色谱检测方法，色谱条件为：
色谱柱：C18色谱柱；
流动相：体积比为9:1的磷酸盐缓冲溶液与甲醇的混合液，其中磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.02-0.03mol/L，pH值为2.5-3.5；
流动相流速：1.0-1.3mL/min；
检测波长：203nm；
色谱柱柱温：20-30℃；
进行高效液相色谱分析，测定含有茶氨酸的溶液中茶氨酸的含量。
本发明流动相的选择，茶氨酸溶于水，不溶于甲醇、乙醇等，采用磷酸盐缓冲溶液与甲醇的混合液作为流动相，样品溶解更充分，而且C18色谱柱是亲水性色谱柱，两者结合使检测结果更准确，且保留能力强，保留时间在4min左右，分离效果好。
相对于现有技术，本发明提供的茶氨酸的高效液相色谱检测方法，具有准确度高，稳定性好的特点。在本发明提供的检测条件下，茶氨酸与各杂质以及各杂质之间的分离均较好，出峰时间较为合适，而且本发明提供的方法具有较高的灵敏度，因此本发明提供的方法能够较好地实现对茶氨酸品质的测定，而且有利于指导生产过程中对杂质的控制，得到高品质的茶氨酸。
具体的，优选地，所述流动相为体积比为9:1的磷酸盐缓冲溶液与甲醇的混合液，其中磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.025mol/L，pH值为2.8-3.2。
优选地，所述检测方法至少包括以下步骤：
步骤a、配制不同浓度的茶氨酸标准溶液；
步骤b、采用液相色谱仪对所述茶氨酸标准溶液进行液相色谱分析，记录分析得到的峰面积，并采用外标法绘制茶氨酸含量-峰面积的标准曲线，得出标准曲线回归方程；
步骤c、将含有茶氨酸的溶液稀释，利用液相色谱仪进行液相色谱分析，采用与标准溶液完全相同的色谱条件，并同时记录峰面积，根据步骤b的标准曲线回归方程计算得出所述含有茶氨酸的溶液中茶氨酸的含量。
优选地，所述步骤a中，将茶氨酸对照品溶于流动相中，得到茶氨酸标准储备液，再将所述茶氨酸标准储备液稀释成若干不同质量浓度的茶氨酸标准溶液。
优选地，所述茶氨酸标准溶液的浓度分别为0.6mg/mL、0.8mg/mL、1mg/mL、1.2mg/mL、1.4mg/mL。
优选地，所述茶氨酸标准储备液的浓度为200mg/L。
优选地，所述步骤c中，将含有茶氨酸的溶液采用9倍体积的流动相稀释。
优选地，进样体积为20μL。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1是本发明实施例提供的茶氨酸标准溶液的液相色谱图；
图2是本发明实施例提供的含有茶氨酸的溶液的液相色谱图。
具体实施方式
为了使本发明的目的、技术方案及优点更加清楚明白，以下结合实施例，对本发明进行进一步详细说明。应当理解，此处所描述的具体实施例仅仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1
本发明提供一种茶氨酸的高效液相检测方法，色谱条件为：
色谱柱：C18色谱柱；
流动相：体积比为9:1的磷酸盐缓冲溶液与甲醇的混合液，其中磷酸盐缓冲溶液的制备方法为：取磷酸氢二钾0.025mol，加水1000mL溶解，混合均匀后用磷酸调pH值，磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.025mol/L，pH值为3；
流动相流速：1.2mL/min；
检测波长：203nm；
色谱柱柱温：25℃；
进样体积为20μL；
包括以下步骤：
步骤a、配制流动相，调节pH，过滤，脱气；
步骤b、调节高效液相色谱仪，平衡色谱柱；
步骤c、配制不同浓度的茶氨酸标准溶液：取茶氨酸对照品20.0mg于100mL容量瓶中，用流动相溶解并稀释至刻度，样品吸取0.1mL至10mL容量瓶用流动相溶解并稀释至刻度，得到浓度分别为0.6mg/mL、0.8mg/mL、1mg/mL、1.2mg/mL、1.4mg/mL的茶氨酸标准溶液；
步骤d、调节高效液相色谱仪，平衡色谱柱，采用液相色谱仪对所述茶氨酸标准溶液进行液相色谱分析，记录分析得到的峰面积，每个浓度的标准溶液分别进样两次，色谱图如图1所示，图中保留时间为4.242min处为茶氨酸的峰，其余为杂质峰，峰面积如下表1所示，并采用外标法绘制茶氨酸含量-峰面积的标准曲线，得出标准曲线回归方程，y＝825715x+67168，R2＝0.9998；
表1标准溶液浓度mg/L与峰面积数值记录表
步骤e、将含有茶氨酸的溶液0.1mL，用流动相稀释至10mL，利用液相色谱仪进行液相色谱分析，采用与标准溶液完全相同的色谱条件，并同时记录峰面积，色谱图如图2所示，根据步骤b的标准曲线回归方程计算得出所述含有茶氨酸的溶液中茶氨酸的含量。从图2中可以看出，保留时间4.173min为茶氨酸的峰，其余的为杂峰，主峰的出峰时间适宜、理论塔板数大于5000，且与杂峰分离度良好。
实施例2
为验证上述实施例1的可行性和准确性，进行精密度试验，试验采用浓度为1.2mg/mL配制的茶氨酸标准溶液，连续进样6次，采用与实施例1完全相同的色谱条件，测定结果表2所示。
序号 茶氨酸峰面积
1 921879
2 920389
3 919330
4 920208
5 919002
6 918130
平均值 919823
RSD％ 0.14
由表2可以得出峰面积的RSD小于2％，因此仪器稳定性良好。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内所作的任何修改、等同替换或改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (8)

1.一种茶氨酸的高效液相色谱检测方法，其特征在于：色谱条件为：
色谱柱：C18色谱柱；
流动相：体积比为9:1的磷酸盐缓冲溶液与甲醇的混合液，其中磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.02-0.03mol/L，pH值为2.5-3.5；
流动相流速：1.0-1.3mL/min；
检测波长：203nm；
色谱柱柱温：20-30℃；
进行高效液相色谱分析，测定含有茶氨酸的溶液中茶氨酸的含量。
2.如权利要求1所述的茶氨酸的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述流动相为体积比为9:1的磷酸盐缓冲溶液与甲醇的混合液，其中磷酸盐缓冲溶液的浓度为0.025mol/L，pH值为2.8-3.2。
3.如权利要求1-2任一项所述的茶氨酸的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述检测方法至少包括以下步骤：
步骤a、配制不同浓度的茶氨酸标准溶液；
步骤b、采用液相色谱仪对所述茶氨酸标准溶液进行液相色谱分析，记录分析得到的峰面积，并采用外标法绘制茶氨酸含量-峰面积的标准曲线，得出标准曲线回归方程；
步骤c、将含有茶氨酸的溶液稀释，利用液相色谱仪进行液相色谱分析，采用与标准溶液完全相同的色谱条件，并同时记录峰面积，根据步骤b的标准曲线回归方程计算得出所述含有茶氨酸的溶液中茶氨酸的含量。
4.如权利要求3所述的茶氨酸的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述步骤a中，将茶氨酸对照品溶于流动相中，得到茶氨酸标准储备液，再将所述茶氨酸标准储备液稀释成若干不同质量浓度的茶氨酸标准溶液。
5.如权利要求4所述的茶氨酸的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述茶氨酸标准溶液的浓度分别为0.6mg/mL、0.8mg/mL、1mg/mL、1.2mg/mL、1.4mg/mL。
6.如权利要求4所述的茶氨酸的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述茶氨酸标准储备液的浓度为200mg/L。
7.如权利要求3所述的茶氨酸的高效液相色谱检测方法，其特征在于：所述步骤c中，将含有茶氨酸的溶液采用9倍体积的流动相稀释。
8.如权利要求3所述的茶氨酸的高效液相色谱检测方法，其特征在于：进样体积为20μL。
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