CN108813106A - 一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料及其使用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料及其使用方法，所述饲料原料组分按重量比例包括如下：玉米28~31，豆粕25~27，DDGS 4~6，玉米麸质饲料9~12，玉米胚芽粕9~11，米糠粕17~19，石粉1.5~2.5，番泻叶0.3~1，好氧发酵剂0.1~0.3，厌氧发酵剂0.1~0.3。使该饲料产品满足母猪所需营养物质种类以及微生物生长所需的碳氮比、pH、水分、可发酵碳水化合物、渗透压等，针对便秘母猪生理特点，筛选适宜的微生物对配合饲料进行发酵，使之具有改善饲料原料成分和便秘母猪肠道的生物屏障、防治母猪便秘、提高母猪的繁殖性能的作用。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域，具体是涉及一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料及其使用方法，即采用微生物协同干料混合饲料防治母猪便秘的发酵饲料的制备方法及使用方法。
背景技术
母猪是一个猪场发展的根本和核心，左右着猪场的效益。因此母猪饲养的好坏决定了猪场未来的发展。但是，在母猪饲养过程中出现一些疾病会影响母猪生产性能的发挥。母猪便秘是一种比较容易发生的疾病，尤其是在妊娠后期以及产前产后更容易发生，有时发病率能够高达60%。母猪长时间发生便秘，会造成机体新陈代谢失调，且内分泌紊乱，病猪表现出精神沉郁，食欲不振，严重时食欲完全废绝，排粪困难，腹痛不安等。妊娠母猪发病后，因长期无法排出机体新陈代谢形成的粪便，导致体内毒素增加，毒素侵入胚胎，影响其发育，出现流产或分娩时间增长甚至难产现象，或生出畸形或者产出弱小仔猪，甚至还会产出死胎。而哺乳期间感染，将影响泌乳，发生泌乳障碍，影响仔猪的存活和生产性能，严重损害养猪业的经济效益。
母猪获取充足和平衡的营养是发挥自身繁殖潜力的基础。限饲、运动不足、缺乏青绿饲料、饮水不足等均是导致母猪便秘的原因，严重制约繁殖潜力发挥。然而传统预防和治疗母猪便秘的方式存在诸多弊端：提高饲粮中纤维含量会降低饲粮有效能水平，这与现代基因型母猪高浓度营养需要矛盾；长期饲喂矿物盐类缓泻剂会破坏体内电解质平衡，引起代谢紊乱；饲喂青绿饲料的方式在规模化猪场难以实施。
从20 世纪 50 年代起，发酵饲料走进人们的视野，研究人员提出将不易消化的粗饲料发酵处理为猪能更好消化的粗饲料，经过在仔猪、母猪和育肥猪的试验研究表明，发酵饲料有很好的饲喂效果。微生物发酵饲料是在人为控制条件下，应用微生物对一种或多种饲料原料或者配合饲料进行好氧或厌氧发酵，消除抗营养因子，通过发酵可使发酵原料的粗纤维含量降低，且发酵过程中对底物进行降解，提高营养物质的利用效率，同时富集大量活性益生菌和功能性初级/次级代谢产物，而获得的一种新型生物饲料。微生物发酵饲料兼顾动物营养和肠道微生态平衡，同时具有免疫保健功能。经过发酵的饲料产品具有酸香味，改善饲料适口性，刺激猪的采食量。
虽然发酵饲料取得了良好的应用效果，然而在实际生产中，菌种来源不明，导致菌种退化严重，生理活性降低。同时菌种单调，缺乏不同菌种配合，影响发酵效果。
现在消费者对健康食品的呼吁越来越高，对绿色健康养殖越来越受重视。因此，研究具有促进动物生长、改善健康状况、有益于环境等作用的安全、绿色、高效的新型微生物发酵饲料产品成为畜牧业发展的新出路。
发明内容
为了克服传统防治母猪便秘发酵技术的不足，本发明的目的是提供一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料及其使用方法，选择适宜的饲料原料配制成干料混合饲料，使该饲料产品满足母猪所需营养物质种类以及微生物生长所需的碳氮比、pH、水分、可发酵碳水化合物、渗透压等，针对便秘母猪生理特点，筛选适宜的微生物对配合饲料进行发酵，使之具有改善饲料原料成分和便秘母猪肠道的生物屏障的作用，最终达到防治母猪便秘，提高母猪的繁殖性能的目的。
本发明的目的是通过以下技术方案实现的：一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料，其技术要点是：所述预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料的原料组分按重量比例包括如下：玉米28~31，豆粕25~27，DDGS 4~6，玉米麸质饲料9~12，玉米胚芽粕9~11，米糠粕17~19，石粉1.5~2.5，番泻叶0.3~1，好氧发酵剂0.1~0.3，厌氧发酵剂0.1~0.3；
所述好氧发酵剂包括枯草芽孢杆菌、茶树菇真菌、草菇真菌，三者的重量比为1：1：1；
所述茶树菇真菌的保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏时间为2018年7月12日，保藏编号为CGMCC No.16085，分类命名为茶树菇Agrocybe aegerita；
茶树菇真菌微生物学特征为在PDA培养基上，23~28℃条件下，孢子经24小时萌发，48小时后肉眼可见到微细的菌丝。菌环白色，膜质，上位着生。孢子卵形至椭圆形。菌丝生长的温度范围：10℃~35℃，适宜温度为22℃~26℃，生长适宜pH为：5~7.5；
所述草菇真菌的保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京是朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏时间为2018年7月12日，保藏编号为CGMCC No.16086，分类命名为草菇Volvariella volvacea；
草菇真菌微生物学特征为菌丝无色透明，草菇细胞长度46~400 μm，宽6~18 μm，被隔膜分隔为多细胞菌丝，不断分枝蔓延，互相交织形成疏松网状菌丝体，培养温度10℃~40℃，适宜温度为28℃~33℃，培养pH为4.0~10.3，菌丝和子实体阶段适宜pH为4.7~6.5。空气相对湿度75%~85%。
所述厌氧发酵剂包括粪肠球菌与酿酒酵母，二者用量比为2:1。
作为优选方案，所述预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料的原料组分按重量比例包括如下：玉米30，豆粕25，DDGS 5，玉米麸质饲料10，玉米胚芽粕9.4，米糠粕18，石粉2，番泻叶0.6，好氧发酵剂0.2，厌氧发酵剂0.2。
一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料具体的制备方法，包括如下步骤：
1）按组分份数称取质量合格的玉米、豆粕、米糠粕、DDGS、玉米胚芽粕、玉米皮、石粉、番泻叶进行粉碎，得到粒径为2.0mm的原料，将上述原料投入搅拌罐中搅拌，搅拌转速30-50r/m，混合10-20分钟，制得干料，变异系数小于7%；
2）制备好氧发酵剂
枯草芽孢杆菌的制备：在无菌实验室中，将活化的枯草芽孢杆菌接种于装有50 mL普通肉汤培养基的100 mL锥形瓶中，在35～38℃条件下培养8~14h，制得液体芽孢杆菌菌液，菌液中活菌数≥109cfu/mL；
茶树菇真菌的制备：在无菌条件下，将活化的茶树菇菌种移接到PAD斜面培养基（pH5.5～6.5）上，置于20℃~27℃恒温箱培养，菌种培养条件：菌丝生长阶段发菌室要间断通气，每天通风1-2次，相对湿度65%~70%为宜；菌丝长满斜面即为茶树菇真菌菌种；
草菇真菌的制备：在无菌条件下，将活化的草菇菌种接种到玻璃试管PAD培养基上，在10℃~40℃培养，3-5天菌丝长满培养基，存放温度15-20℃；
将枯草芽孢杆菌、茶树菇真菌、草菇真菌按重量比为1：1：1混合；
3）将上述好氧发酵剂100-250倍稀释到洁净水中搅拌均匀，将好氧发酵剂泵入步骤1）的原料搅拌罐中混合5-10分钟使菌液和原料成分均匀分布，制得湿料Ⅰ，将湿料Ⅰ装入饲料袋中入库静置进行通风发酵，库房环境温度23~28℃，发酵时间：冬季发酵3-5天，其它季节发酵2-3天；
4）制备厌氧发酵剂
粪肠球菌的制备：在无菌条件下，将活化的粪肠球菌接种在MRS培养基中，厌氧培养箱中35℃-37℃培养13-16 h，菌液中活菌数≥1010cfu/mL；
酿酒酵母的制备：在无菌条件下，将活化的酿酒酵母接种在PAD液体培养基中，厌氧培养箱中28℃-32℃培养10-16 h，菌液中活菌数≥1010cfu/mL；
将粪肠球菌与酿酒酵母的按重量比为2：1混合。
5）将上述厌氧发酵剂30-100倍稀释到洁净水中搅拌均匀，将发酵后的湿料Ⅰ投入搅拌罐中搅拌，搅拌转速30-40 r/m，混合10-20分钟，将厌氧发酵剂泵入发酵后的湿料Ⅰ中，并再次混合5-10分钟使厌氧发酵剂菌液和发酵后的湿料Ⅰ均匀混合，得到湿料Ⅱ，将湿料Ⅱ装入带排气孔呼吸袋中，密封袋口后入库静置发酵，码放层数≤5，库房环境温度≥25℃，发酵时间：冬季发酵2-3天，其它季节发酵1-2。
所述微生物发酵饲料质量技术指标：发酵后饲料的pH值：5.5-6；发酵后饲料的水分30%±2%；发酵后饲料的浓郁的酵香味，可以促进母猪食欲；发酵饲料卫生指标符合饲料卫生标准要求；所述微生物发酵饲料原料和生产各环节均不得含有任何抗生素。
预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料使用方法，其技术要点是：
（1）上述微生物发酵饲料与常规饲料均匀混合，微生物发酵饲料与常规饲料比例为1~3：20，可在母猪饲养的各阶段饲喂；
（2）预防便秘按照5~10%比例与常规配合料均匀混合后饲喂，治疗母猪便秘按照10%-15%比例与常规饲料均匀，连续饲喂3-5天，如缓解，可把用量降低到10%以内；
（3）发酵饲料也可采取额外添加的方式饲喂，每头母猪每天补饲100克-250克。
本发明提供一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料，与现有技术相比，具有以下显著优势：
1、本发明所用的饲料原料均为常规原料，制备过程清晰，不需特殊设备，易于接受和采用。
2、本发明根据母猪营养生理特点，针对便秘母猪对日粮的营养需求，优选多种饲料原料组成母猪干料混合饲料。其中玉米含糖类物质70%以上，含有蛋白质、脂肪、钙磷铁等矿物质，还含有胡萝卜素、维生素B族等多种维生素和氨基酸等，是本发明中母猪干料混合饲料中重要的能量饲料。豆粕是大豆采油后的残渣经适度加热、干燥、粉碎的饲料，其粗蛋白含量在45%以上，其消化率高达85%-92%，是母猪良好的蛋白质源。DDGS是酒糟蛋白饲料，即含有可溶物的干酒糟，它是玉米为原料发酵乙醇后的酒糟产品，其中蛋白质、B族维生素及氨基酸含量均比玉米有所增加，并含有发酵中生成的未知促生长因子。玉米麸质是优质玉米提取淀粉后的副产品，粗纤维含量较高，生产高Ｆ值寡肽的优良天然资源。番泻叶是豆科植物狭叶番泻或尖叶番泻的小叶，它可以通过肠粘膜和神经从刺激肠蠕动，有利于排便。本发明的配制成既满足母猪对日粮蛋白、能量和粗纤维的特殊需求，又有利于促进母猪肠道蠕动，提高消化功能的干料混合饲料，从根源上防止了便秘的发生。
3、本发明采用细菌和真菌联合使用。粪肠球菌、枯草芽孢杆菌均为常用的发酵细菌，酿酒酵母为单细胞真菌，茶树菇和草菇为多细胞真菌。
粪肠球菌是革兰氏阳性、过氧化氢阴性球菌，是动物肠道中仅次于大肠杆菌的菌群。粪肠球菌能产生天然抗生素，提高机体免疫力，还能分泌抑菌物质，抑制大肠杆菌和沙门氏菌等病原菌的生长，改善肠道微环境；同时还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖，减少肠道和血液中尿素酶和内毒素的含量，有利于机体健康。枯草芽孢杆菌是芽孢杆菌属的一种革兰氏阳性菌。枯草芽孢杆菌菌体生长过程中可产生抑制致病菌的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质；同时菌体生长迅速消耗的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，间接抑制其它致病菌生长；枯草芽孢杆菌能刺激动物免疫器官的生长发育，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高机体免疫力。
酿酒酵母属于酵母菌科，是一种单细胞真菌，成卵圆型或球型，形态虽然简单，但生理却比较复杂。无氧发酵时，酿酒酵母将饲料中的单糖吸入细胞内，在胞内酶的作用下把单糖分解为二氧化碳和酒精。茶树菇是一种食药用真菌，因野生于油茶树的枯干上而得名。茶树菇真菌本身营养丰富，蛋白质含量高，脂肪含量低。茶树菇真菌性平甘温，有清热、健脾，提高免疫功能的效果。而草菇真菌中必需氨基酸含量高，高达40.47-44.47%，还含有磷、钾、钙等多种矿质元素。
4、本发明的发酵饲料的制备方法利用混合菌有氧和厌氧二步发酵法。好氧菌枯草芽孢杆菌、茶树菇真菌和草菇真菌进行有氧发酵，提高饲料干料中蛋白、碳水化合物、维生素和矿物质等营养物质的含量，还会在发酵液中产生多糖、多肽、生物碱、萜类化合物、甾醇、酶、核酸、氨基酸、维生素、植物激素及具有抗生素作用的各种化合物等多种具有生理活性的物质，为后期厌氧发酵提供营养丰富的基料物质。再利用粪肠球菌、酿酒酵母进行厌氧发酵，细菌菌体本身除了可以合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类外，也能提取核酸类衍生物、辅酶A、细胞色素C、谷胱甘肽和多种氨基酸的原料，还可以合成多种B族维生素，促进机体的消化和免疫活性，同时也会降低饲粮中抗营养因子和木质素，使饲料具有更高的营养价值。
此外，多菌混合发酵产生的酸性产物和醇香物质，不仅有利于提高饲料的酸度，提高饲料适口性，保障母猪的繁殖性能的营养供应，还有利于改善母猪肠道微生态环境，迅速改善母猪的便秘。
5、本发明复合酸化剂所需发酵剂用量少，效率高，与干料混合饲料的配比仅为700~900：1，且发酵饲料再按照5~15%的比例与常规饲料混合，不会对动物本身产生毒副作用。
6、本发明的发酵饲料预防便秘的效果好，治愈率达到95%，连续饲喂3-5天基本消除便秘。
附图说明
图1 试验开始时便秘母猪的粪便性状；
图2 饲喂微生物发酵饲料后母猪的粪便性状变化。
具体实施方式
实施例1
（1）预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料的原料组分按重量比例包括如下：玉米28~31，豆粕25~27，DDGS 4~6，玉米麸质饲料9~12，玉米胚芽粕9~11，米糠粕17~19，石粉1.5~2.5，番泻叶0.3~1，好氧发酵剂0.1~0.3，厌氧发酵剂0.1~0.3。
所述好氧发酵剂包括枯草芽孢杆菌、茶树菇真菌、草菇真菌，三者的重量比为1：1：1。
所述茶树菇真菌的保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京是朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏时间为2018年7月12日，保藏编号为CGMCC No.16085，分类命名为茶树菇Agrocybe aegerita。
茶树菇真菌微生物学特征为在PDA培养基上，23~28℃条件下，孢子经24小时萌发，48小时后肉眼可见到微细的菌丝。菌环白色，膜质，上位着生。孢子卵形至椭圆形。菌丝生长的温度范围:10℃~35℃，适宜温度为22℃~26℃，生长适宜pH为：5~7.5。
所述草菇真菌的保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京是朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏时间为2018年7月12日，保藏编号为CGMCC No.16086，分类命名为草菇Volvariella volvacea。
草菇真菌微生物学特征为菌丝无色透明，草菇细胞长度46~400 μm，宽6~18 μm，被隔膜分隔为多细胞菌丝，不断分枝蔓延，互相交织形成疏松网状菌丝体。培养温度10℃~40℃，适宜温度为28℃~33℃，培养pH为4.0~10.3，菌丝和子实体阶段适宜pH为4.7~6.5。空气相对湿度75%~85%。
所述厌氧发酵剂包括粪肠球菌与酿酒酵母，二者用量比为2:1。
（2）预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料具体制备方法包括如下步骤：
1）按组分份数称取质量合格的玉米、豆粕、米糠粕、DDGS、玉米胚芽粕、玉米皮、石粉、番泻叶进行粉碎，得到粒径为2.0mm的原料，将上述原料投入搅拌罐中搅拌，搅拌转速30-50r/m，混合10-20分钟，制得干料，变异系数小于7%。
2）制备好氧发酵剂：
枯草芽孢杆菌的制备：在无菌实验室中，将活化的枯草芽孢杆菌接种于装有50 mL普通肉汤培养基的100 mL锥形瓶中，在35～38℃条件下培养8~14h，制得液体芽孢杆菌菌液，菌液中活菌数≥109cfu/mL；
茶树菇真菌的制备：在无菌条件下，将活化的茶树菇菌种移接到PAD斜面培养基（pH5.5～6.5）上，置于20℃~27℃恒温箱培养，菌种培养条件：菌丝生长阶段发菌室要间断通气，每天通风1-2次，相对湿度65%~70%为宜；菌丝长满斜面即为茶树菇真菌菌种。
草菇真菌的制备：在无菌条件下，将活化的草菇菌种接种到玻璃试管PAD培养基上，在10℃~40℃培养，3-5天菌丝长满培养基，存放温度15-20℃。
将枯草芽孢杆菌、茶树菇真菌、草菇真菌按重量比为1：1：1混合。
3）将上述好氧发酵剂100-250倍稀释到洁净水中搅拌均匀，将好氧发酵剂泵入步骤1）的原料搅拌罐中混合5-10分钟使菌液和原料成分均匀分布，制得湿料Ⅰ，将湿料Ⅰ装入饲料袋中入库静置进行通风发酵，库房环境温度23~28℃，发酵时间：冬季发酵3-5天，其它季节发酵2-3天。
4）厌氧发酵剂的制备方法：
粪肠球菌的制备：在无菌条件下，将活化的粪肠球菌接种在MRS培养基中，厌氧培养箱中35℃-37℃培养13-16 h，菌液中活菌数≥1010cfu/mL。
酿酒酵母的制备：在无菌条件下，将活化的酿酒酵母接种在PAD液体培养基中，厌氧培养箱中28℃-32℃培养10-16 h，菌液中活菌数≥1010cfu/mL。
所述粪肠球菌与酿酒酵母的按重量比为2：1混合。
5）将上述厌氧发酵剂30-100倍稀释到洁净水中搅拌均匀，将发酵后的湿料Ⅰ投入搅拌罐中搅拌，搅拌转速30-40 r/m，混合10-20分钟，将厌氧发酵剂泵入发酵后的湿料Ⅰ中，并再次混合5-10分钟使厌氧发酵剂菌液和发酵后的湿料Ⅰ均匀混合，得到湿料Ⅱ，将湿料Ⅱ装入带排气孔呼吸袋中，密封袋口后入库静置发酵，码放层数≤5，库房环境温度≥25℃，发酵时间：冬季发酵2-3天，其它季节发酵1-2。
所述微生物发酵饲料质量技术指标：发酵后饲料的pH值：5.5-6；发酵后饲料的水分30%±2%；发酵后饲料的浓郁的酵香味，可以促进母猪食欲；发酵饲料卫生指标符合饲料卫生标准要求；所述微生物发酵饲料原料和生产各环节均不得含有任何抗生素。
实施例2：
预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料及制作方法
（1）配置干料：原料组分按重量比例包括如下：为玉米30，豆粕25，DDGS 5，玉米麸质饲料10，玉米胚芽粕9.5，米糠粕18，石粉2，番泻叶0.5。将上述干料混合饲料用锤片式粉碎机筛孔粉碎，混合均匀，锤片式粉碎机筛孔直径为2.0mm。
（2）将1.5kg好氧发酵剂（枯草芽孢杆菌：茶树菇真菌：草菇真菌=1：1：1）加入到200kg洁净水中并搅拌使菌液组分能够均匀分散开，其制备方法见实施例1。
（3）称量800kg干料混合料投入搅拌罐中搅拌中，搅拌转速40 r/m，混合20分钟。将好氧发酵剂泵入干料中并再次混合8分钟使菌液和干料各成分能均匀分布。
（4）将混合后的湿料装入饲料袋中。饲料袋入库静置发酵,通风发酵3天。
（5）将1.5kg厌氧发酵剂（粪肠球菌：酿酒酵母=2：1），其制备方法见实施例1加入到50洁净水中并搅拌，将其泵入步骤（4）所得的发酵湿料中，在搅拌罐中搅拌，搅拌转速30 r/m，混合20分钟。
（6）将上述混合湿料装入带排气孔呼吸袋中，密封袋口。放入库房静置发酵2天。
发酵饲料的使用方法：微生物发酵饲料与常规饲料均匀混合，微生物发酵饲料所占比例为1~3：20，可在母猪饲养的各阶段饲喂。预防便秘按照5%-10%比例与常规配合料均匀混合后饲喂；治疗母猪便秘按照10%-15%比例与常规饲料均匀。连续饲喂3-5天，如缓解，之后把用量降低到10%以内。也可采取额外添加的方式饲喂，每头母猪每天补饲100克-250克发酵饲料。
实施例3：
预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料制作方法
（1）配置干料：原料组分按重量比例包括如下：其成分和质量百分比为玉米28，豆粕26，DDGS 5，玉米麸质饲料10，玉米胚芽粕11，米糠粕17，石粉2，番泻叶1。将上述干料混合饲料用锤片式粉碎机筛孔粉碎，混合均匀，锤片式粉碎机筛孔直径为2.0mm。
（2）将1.5kg好氧发酵剂（枯草芽孢杆菌：茶树菇真菌：草菇真菌=1：1：1，其制备方法见实施例1）加入到250kg洁净水中并搅拌使菌液组分能够均匀分散开。
（3）称量850干料混合料投入搅拌罐中搅拌中。搅拌转速40 r/m，混合20分钟。将好氧发酵剂泵入干料中并再次混合10分钟使菌液和干料各成分能均匀分布。
（4）将混合后的湿料装入饲料袋中。饲料袋入库静置发酵。通风发酵2天。
（5）将2kg厌氧发酵剂（粪肠球菌：酿酒酵母=2：1，其制备方法见实施例1）加入到80kg洁净水中并搅拌，将其泵入上述发酵饲料中，与搅拌罐中搅拌，搅拌转速30 r/m，混合15分钟。
（6）将上述混合湿料装入带排气孔呼吸袋中，密封袋口。放入库房静置发酵2天。
发酵饲料的使用方法：同实施例1。
实施例4：
预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料方法
（1）配置干料：原料组分按重量比例包括如下：其成分和质量百分比为玉米30，豆粕25，DDGS 4，玉米麸质饲料10，玉米胚芽粕9，米糠粕19.5，石粉2，番泻叶0.5。将上述干料混合饲料用锤片式粉碎机筛孔粉碎，混合均匀。锤片式粉碎机筛孔直径为2.0mm。
（2）将1.5kg好氧发酵剂（枯草芽孢杆菌：茶树菇真菌：草菇真菌=1：1：1，其制备方法见实施例1）加入到200kg洁净水中并搅拌使菌液组分能够均匀分散开。
（3）称量750干料混合料投入搅拌罐中搅拌中。搅拌转速40 r/m，混合20分钟。将好氧发酵剂泵入干料中并再次混合5分钟使菌液和干料各成分能均匀分布。
（4）将混合后的湿料装入饲料袋中。饲料袋入库静置发酵。通风发酵3天。
（5）将1.5kg厌氧发酵剂（粪肠球菌：酿酒酵母=2：1，其制备方法见实施例1）加入到80洁净水中并搅拌，将其泵入上述发酵饲料中，与搅拌罐中搅拌，搅拌转速30 r/m，混合15分钟。
（6）将上述混合湿料装入带排气孔呼吸袋中，密封袋口。放入库房静置发酵2天。
发酵饲料的使用方法：同实施例1。
实施例5
下面结合饲养试验和临床应用表明，对本发明作进一步的描述：
本实施例历时6个月，通过体外发酵饲料质量检测和和母猪便秘情况分析，评定本发明的微生物发酵饲料的使用效果。
（一）微生物发酵饲料质量检测
1.1试验材料和方法
1.1.1 试验饲料的选取
采用实施例1的微生物发酵饲料制备过程，经过4~5天发酵，从饲料袋中不同部位随机取10kg发酵饲料。
1.1.2测定指标
1.1.2.1感官评定对微生物发酵饲料的外观和颜色进行观测，查看饲料霉变情况。通过对饲料气味的测定，分析饲料的发酵情况。触摸饲料，观测饲料的软硬。
1.1.2.2微生物发酵饲料水分的测定
用四分法将原始样品缩至500g，风干后粉碎至40目，再用四分法缩至200g，装入密封容器，放阴凉干燥处保存。将发酵饲料在105℃烘箱中烘3小时，于干燥器冷却30分钟，称重，再105℃烘箱中烘1小时，称至恒重。每个试样，应取两个平行样进行测定，以其算术平均值为结果。两个平行样测定值相差不得超过0.002g即为恒重。计算公式如下：
水分（％）＝〔（W1－W2）/（W1－W0）〕×100
式中：W1── 105℃烘干前试样及称样皿重，g；
W2── 105℃烘干后试样及称样皿重，g；
W0──已恒重的称样皿重，g。
1.1.2.3微生物发酵饲料pH的测定
将按比例混合好酦酵解的饲料样品过40目筛，用电子天平准确称量100.0g置于500mL烧杯中，加入200mL去离子水，用磁力搅拌器均匀搅拌，用酸度计测量溶液pH，待pH恒定后记录数据为饲料pH。
1.1.2.4 饲料酸结合力的测定
将实施例1的微生物发酵饲料，按照0%（对照组）、5%、10%、15%的比例添加到常规饲料中均匀混合。用四分法取样，粉碎过60目筛，用电子天平准确称量100.0g置于500mL烧杯中，加入200mL去离子水，用磁力搅拌器均匀搅拌，让试样充分浸泡（室温20-30分钟），用浓度1mol/L盐酸进行滴定，充分搅拌，静止10分钟，用酸度计测量溶液pH值，待pH恒定到4时记录消耗标准1.00moL/L 盐酸溶液的体积即为饲料酸结合力。
1.2 结果与分析
1.2.1感官评定结果
本发明的微生物发酵饲料颜色比较接近原来的颜色，带有浓郁的酵香味，抓微饲料有松散、柔软、略带湿润的感觉，说明本发明的微生物发酵饲料没有出现霉变，气味适宜，水分适中。符合微生物发酵饲料的发酵要求。
1.2.2 微生物发酵饲料的水分含量结果
本发明的微生物发酵饲料的水分含量为31%。
1.2.3发酵后饲料的pH值
本发明的微生物发酵饲料的pH为4.4，说明本发明的微生物发酵饲料的酸性菌成为优势菌群。这是最适宜母猪摄入的酸度，对母猪的消化和吸收，以及肠道的微生态环境改善有重要意义。
1.2.4饲料酸结合力测定结果
表1 添加微生物发酵饲料的酸结合力（mmoLHCL/100g）
| 0.0%（对照组） | 5% | 10% | 15% | |
| 酸结合力 | 34.0±0.26 | 31.8±0.32 | 30.0±0.18 | 26.2±0.26 |
随着微生物发酵饲料添加量的增加，饲料酸结合力越小。饲料酸结合力就是饲料吸附胃内游离酸程度的指标。饲料的酸结合力主要取决于饲料组成成分的配比和含量。微生物发酵饲料呈酸性，在饲料中添加微生物发酵饲料，会有效的降低饲料pH，从而减小饲料酸结合力，减小对猪消化道酸度的影响，提供适宜的消化内环境，维持胃蛋白酶最适pH。
（二）微生物发酵饲料改善母猪便秘和采食量试验
2.1 材料与方法
2.1.1 饲料和动物
随机选取便秘母猪20头，饲喂含15%的微生物发酵饲料（即在基础日粮中添加15%的实施例2发酵饲料）。
另随机选取预产期接近（七天内）的妊娠110天左右的同胎次的健康母猪30头，随机分为两组，第一组为对照组，饲喂基础日粮，第二组为发酵饲料组，在基础日粮中添加8%的微生物发酵饲料（选取实施例3所示的微生物发酵饲料）。
2.1.2 指标测定
2.1.2.1 母猪便秘情况
观察母猪粪便的性状每天早晚各观察一次粪便性状。根据粪便性状的等级（ 0：为不排粪；Ⅰ：为秘结(粒状)；Ⅱ：为坚实；Ⅲ：为轻度坚实；Ⅳ：松软；Ⅴ：腹泻）记录母猪的便秘情况。
2.1.2.2 母猪生产性能的测定
记录30头母猪在分娩后期、哺乳期采食量，计算平均日采食量。
测定出生仔猪的成活率、断奶仔猪平均日增重、断奶成活率。
2.2 结果与分析
2.2.1微生物发酵饲料对母猪便秘的影响
试验开始时，便秘母猪的粪便等级为Ⅰ级和Ⅱ级（图1），粪便秘结，坚实。通过饲喂微生物发酵饲料，经3~5天，粪便的性状有所改善（图2）。粪便逐渐软化，松软。20头母猪的便秘全部缓解或治愈，且没有腹泻的发生。说明本发明的微生物发酵饲料改善了便秘母猪肠道的内部微生态环境，防治了便秘的发生。
2.2.2微生物发酵饲料对母猪采食量的影响
从表2中数据可以看出，与对照组比较，无论在妊娠后期，还是脯乳期，饲喂微生物发酵饲料的母猪采食量均显著增加（P<0.05）。本发明的微生物发酵饲料发酵后产生的酸性产物，并有醇香味，提高饲料适口性，不仅提高了母猪的采食量，还有利于改善母猪肠道微生态环境。
表2 母猪生产性能测定
| 指标 | 对照组 | 发酵饲料组 |
| 妊娠后期日采食量（kg） | 3.26±0.28b | 3.89±0.31a |
| 哺乳期日采食量（kg） | 5.91±0.47b | 6.24±0.48a |
| 出生仔猪成活率（%） | 95.28±2.45 b | 100±0.00 a |
| 断奶仔猪平均日增重（kg） | 8.96±0.56 b | 9.89±0.78 a |
| 断奶成活率（%） | 90.25±0.78 b | 98.26±0.85 a |
注：同行数值肩注不同字母表示差异显著（P<0.05），相同字母表示差异不显著（P>0.05）。
本试验结果表明，发酵饲料组的出生仔猪的成活率显著高于对照组（P<0.05）。本发明的微生物发酵饲料含有微生物发酵后的醇香味，可以促进母猪的食欲，同时饲料经过发酵后，饲料中的成分发生变化，饲料原料和经过发酵后产生大量的代谢产物使原料和微生物本身的维生素、氨基酸的营养价值，保障母猪的繁殖性能的营养供应和支持。此外，发酵饲料组的断奶仔猪成活率和断奶仔猪平均日增重也显著高于对照组（P<0.05），分别比对照组高出10.4%和8.9%。本发明的微生物发酵饲料可以增加有益菌在猪体内的生存，调整了母猪肠道与环境中微生态的平衡，有益菌占优势，减少仔猪接触大肠杆菌等致病菌机会，从而减少了仔猪发病死亡，提高了仔猪成活率。同时发酵饲料当中含有大量的生物益生菌代谢产物（氨基酸、维生素、活性肤等益生素），母猪吃了发酵饲料后，仔猪通过***提高乳猪非特异性抵抗力，仔猪的抗病力以及对营养的吸收率都得到了明显的改善，因此，发酵饲料组断奶仔猪的成活率和体重都较对照组高。
前述实施例对本发明制备和应用进行的详细的说明，仅用于说明本发明的技术方案，而非限制本发明的专利范围；对于本领域的普通技术人员，对前述实施例所记载的技术方案进行修改，或对其中部分技术特征进行等同替换，或直接或间接运用在其他相关的技术领域，均包括在本发明所要求保护的技术方案的范围内。
Claims (5)
1.一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料，其特征是：所述预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料的原料组分按重量比例包括如下：玉米28~31，豆粕25~27，DDGS 4~6，玉米麸质饲料9~12，玉米胚芽粕9~11，米糠粕17~19，石粉1.5~2.5，番泻叶0.3~1，好氧发酵剂0.1~0.3，厌氧发酵剂0.1~0.3；
所述好氧发酵剂包括枯草芽孢杆菌、茶树菇真菌、草菇真菌，三者的重量比为1：1：1；
所述茶树菇真菌的保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏时间为2018年7月12日，保藏编号为CGMCC No.16085，分类命名为茶树菇Agrocybe aegerita；
茶树菇真菌微生物学特征为在PDA培养基上，23~28℃条件下，孢子经24小时萌发，48小时后肉眼可见到微细的菌丝；菌环白色，膜质，上位着生；
孢子卵形至椭圆形；菌丝生长的温度范围：10℃~35℃，适宜温度为22℃~26℃，生长适宜pH为：5~7.5；
所述草菇真菌的保藏单位为中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏地址为北京是朝阳区北辰西路1号院3号中国科学院微生物研究所，保藏时间为2018年7月12日，保藏编号为CGMCC No.16086，分类命名为草菇Volvariella volvacea；
草菇真菌微生物学特征为菌丝无色透明，草菇细胞长度46~400 μm，宽6~18 μm，被隔膜分隔为多细胞菌丝，不断分枝蔓延，互相交织形成疏松网状菌丝体，培养温度10℃~40℃，适宜温度为28℃~33℃，培养pH为4.0~10.3，菌丝和子实体阶段适宜pH为4.7~6.5；空气相对湿度75%~85%；
所述厌氧发酵剂包括粪肠球菌与酿酒酵母，二者用量比为2:1。
2.一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料的制备方法，包括如下步骤：
1）按组分份数称取质量合格的玉米、豆粕、米糠粕、DDGS、玉米胚芽粕、玉米皮、石粉、番泻叶进行粉碎，得到粒径为2.0mm的原料，将上述原料投入搅拌罐中搅拌，搅拌转速30-50r/m，混合10-20分钟，制得干料，变异系数小于7%；
2）制备好氧发酵剂
枯草芽孢杆菌的制备：在无菌实验室中，将活化的枯草芽孢杆菌接种于装有50 mL普通肉汤培养基的100 mL锥形瓶中，在35～38℃条件下培养8~14h，制得液体芽孢杆菌菌液，菌液中活菌数≥109cfu/mL；
茶树菇真菌的制备：在无菌条件下，将活化的茶树菇菌种移接到PAD斜面培养基（pH5.5～6.5）上，置于20℃~27℃恒温箱培养，菌种培养条件：菌丝生长阶段发菌室要间断通气，每天通风1-2次，相对湿度65%~70%为宜；菌丝长满斜面即为茶树菇真菌菌种；
草菇真菌的制备：在无菌条件下，将活化的草菇菌种接种到玻璃试管PAD培养基上，在10℃~40℃培养，3-5天菌丝长满培养基，存放温度15-20℃；
将枯草芽孢杆菌、茶树菇真菌、草菇真菌按重量比为1：1：1混合；
3）将上述好氧发酵剂100-250倍稀释到洁净水中搅拌均匀，将好氧发酵剂泵入步骤1）的原料搅拌罐中混合5-10分钟使菌液和原料成分均匀分布，制得湿料Ⅰ，将湿料Ⅰ装入饲料袋中入库静置进行通风发酵，库房环境温度23~28℃，发酵时间：冬季发酵3-5天，其它季节发酵2-3天；
4）制备厌氧发酵剂
粪肠球菌的制备：在无菌条件下，将活化的粪肠球菌接种在MRS培养基中，厌氧培养箱中35℃-37℃培养13-16 h，菌液中活菌数≥1010cfu/mL；
酿酒酵母的制备：在无菌条件下，将活化的酿酒酵母接种在PAD液体培养基中，厌氧培养箱中28℃-32℃培养10-16 h，菌液中活菌数≥1010cfu/mL；
将粪肠球菌与酿酒酵母的按重量比为2：1混合；
5）将上述厌氧发酵剂30-100倍稀释到洁净水中搅拌均匀，将发酵后的湿料Ⅰ投入搅拌罐中搅拌，搅拌转速30-40 r/m，混合10-20分钟，将厌氧发酵剂泵入发酵后的湿料Ⅰ中，并再次混合5-10分钟使厌氧发酵剂菌液和发酵后的湿料Ⅰ均匀混合，得到湿料Ⅱ，将湿料Ⅱ装入带排气孔呼吸袋中，密封袋口后入库静置发酵，码放层数≤5，库房环境温度≥25℃，发酵时间：冬季发酵2-3天，其它季节发酵1-2。
3.一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料的使用方法，其特征是：
（1）所述微生物发酵饲料与常规饲料均匀混合，微生物发酵饲料与常规饲料比例为1~3：20，可在母猪饲养的各阶段饲喂；
（2）预防便秘按照5~10%比例与常规配合料均匀混合后饲喂，治疗母猪便秘按照10%-15%比例与常规饲料均匀，连续饲喂3-5天，如缓解，可把用量降低到10%以内；
（3）发酵饲料也可采取额外添加的方式饲喂，每头母猪每天补饲100克-250克。
4.根据权利要求1所述的一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料，其特征是；所述预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料的原料组分按重量比例包括如下：玉米30，豆粕25，DDGS 5，玉米麸质饲料10，玉米胚芽粕9.4，米糠粕18，石粉2，番泻叶0.6，好氧发酵剂0.2，厌氧发酵剂0.2。
5.根据权利要求1所述的一种预防和治疗母猪便秘的微生物发酵饲料，其特征是：所述微生物发酵饲料质量技术指标：发酵后饲料的pH值：5.5-6；发酵后饲料的水分30%±2%；发酵后饲料的浓郁的酵香味，可以促进母猪食欲；发酵饲料卫生指标符合饲料卫生标准要求；所述微生物发酵饲料原料和生产各环节均不得含有任何抗生素。
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