CN108794650A - 一种石斛多糖提取方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种活性石斛多糖提取方法，其提取步骤如下:（1）新鲜石斛放入低温箱，并充入液氮保护，将温度降至‑45℃～‑55℃，并保温15～60 min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:5～10的固液比加入45℃～65℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）滤液采用Savg法去除蛋白质，离心分离，收集分离液；（5）分离液中加入浓度为85～97%的乙醇，沉淀得到石斛多糖；（6）将沉淀出的石斛多糖加入至石斛多糖溶解剂中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液冷冻干燥，即得高活性石斛多糖。采用本发明公开方法提取石斛多糖，成本低、得率高、生物活性物质含量高。
Description
技术领域
本发明涉及石斛，尤其是一种石斛多糖提取方法。
背景技术
石斛（学名：Dendrobium nobile Lindl），又名仙斛兰韵、不死草、还魂草、紫萦仙株、吊兰、林兰、禁生、金钗花等。茎直立，肉质状肥厚，稍扁的圆柱形，长10~60厘米，粗达1.3厘米。石斛作为一种名贵常用中草药，具有“阴伤津亏，口干烦渴，，食少干沤，病后虚热，目暗不明”之功效，被誉为中华九大仙草之首，《本草衍义》、《本草纲目拾遗》及《本草从新》等历代本草都倍加推崇，素有“千金草”之称，驰名中外。石斛中含有多种多糖、生物碱、氨基酸及淀粉等。其中石斛多糖、生物碱以及酚类等化合物的药理作用既相互联系又有一定的差别，生物碱的药理作用主要表现在抗肿瘤、对心血管疾病、胃肠道疾病的抑制作用及止痛退热等作用；酚类化合物主要表现在抗衰老等方面作用；而石斛多糖的药理作用主要表现在免疫、降血糖以及防癌、抗癌、抗衰老等方面。
据报道石斛功效的强弱与多糖含量的高低密切相关。李满飞等对25种石解属植物36个样品进行研究，发现不同品种多糖含量差别很大。达到传统标准一一“嚼之粘牙，口甜者为优”的石斛样品中多糖含量均较高。目前，多糖的提取方法主要有加热浸提法、酶解法、超声提取法等，这些提取方法各有优劣，如罗傲雪等采用超声波辅助热回流技术提取马鞭石斛多糖,尚喜雨等采用水提法-酶法提取铁皮石斛多糖，中国发明专利ZL201610479404.2采用超声波辅助负压空化法提取铁皮石斛。
但上述方法多采用水提取法，为了保证提取率都需要加热至80℃以上，温度升高虽有利于多糖的溶出，但也破坏了石斛多糖的生物活性。
发明内容
本发明目的在于，解决现有石斛多糖生物活性低的问题，提供一种得率高、成本低、生物活性高的石斛多糖提取方法。
本发明公开的活性石斛多糖提取方法提取方法包括以下步骤：（1）新鲜石斛放入低温箱，并充入液氮保护，将温度降至-45℃～-55℃，并保温15～60 min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:5～10的固液比加入45℃～65℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）滤液采用Savg法去除蛋白质，离心分离，收集液体；（5）液体加入浓度为85～97%的乙醇沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入至石斛多糖溶解剂中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液冷冻干燥，即得石斛多糖。
冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎时，破碎至粒径为50～150目。
Savg法去除蛋白质时，Sevage试剂由三氯甲烷与一元醇组成，三氯甲烷与一元醇的体积比为：3.5～5.5 : 1，其中一元醇为戊醇、正丁醇中的一种或两者的组合物。
Savg法去除蛋白离心分离时，转速为4500～5000rpm，时间为10～20min；Savg法去除蛋白质离心分离后所得分离液进行乙醇沉淀时，分离液与乙醇的体积比为1: 0.1～0.3。所述石斛多糖溶解剂由单糖、葡萄糖、环糊精、右旋糖酐、透明质酸、抗坏血酸、抗坏血酸钠中的一种或几种的组合物溶于去离子水中而得，溶质百分比浓度为0.1～15%。
石斛多糖溶液进行冷冻干燥时，充入气态或液态的二氧化碳、氮气中的一种或两者的组合物进行保护，以防止石斛多糖氧化变质。
采用本发明公开的方法提取石斛多糖，成本低、得率高、生物活性物质含量高。
具体实施方式
下面结合具体实施事例，进一步阐述本发明。应理解为，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。此外应理解为，在阅读了本发明讲授的内容之后，本领域技术人员可以对本发明做出的各种改动或修改，这些等价形式仍属于本发明申请所附权利要求书限定的范围。
实施例1:
一种石斛多糖提取方法包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，充入液氮保护，将温度降至-50℃，并保温30 min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，粉碎至粒径为60目；
（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:6的固液比加入50℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）选用三氯甲烷与戊醇体积比为4 : 1的混合溶剂为Sevage试剂，采用采用Savg法去除蛋白质，并在转速为4500rpm、时间为15min条件下离心分离，收集分离液；（5）分离液中按分离液与乙醇的体积比为1: 0.15，加入浓度为90%的乙醇，沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入百分比浓度为5%的葡萄糖去离子水溶液中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液在二氧化碳保护下冷冻干燥，即得石斛多糖。
采用本方法提取石斛多糖，得率可达33.35%，所得石斛多糖ABTS自由基的半数清除率达3.98mg/mL。
实施例2:
一种石斛多糖提取方法包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，充入液氮保护，将温度降至-55℃，并保温20 min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，粉碎至粒径为80目；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:10的固液比加入60℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）选用三氯甲烷与正丁醇体积比为4.5 : 1的混合溶剂为Sevage试剂，采用采用Savg法去除蛋白质，并在转速为5000 rpm、时间为10min条件下离心分离，收集分离液；（5）分离液中按分离液与乙醇的体积比为1: 0.2，加入浓度为93%的乙醇，沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入百分比浓度为1%的右旋糖酐去离子水溶液中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液在氮气保护下冷冻干燥，即得石斛多糖。
采用本方法提取石斛多糖，得率可达32.95%，所得石斛多糖ABTS自由基的半数清除率达3.95mg/mL。
实施例3:
一种石斛多糖提取方法，包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，充入液氮保护，将温度降-55℃，并保温15 min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，粉碎至粒径为150目；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:9的固液比加入65℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）选用三氯甲烷：戊醇：正丁醇体积比为8 : 1 :1的混合溶剂为Sevage试剂，采用采用Savg法去除蛋白质，并在转速为5000rpm、时间为15min条件下离心分离，收集分离液；（5）分离液中按分离液与乙醇的体积比为1: 0.25，加入浓度为95%的乙醇，沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入百分比浓度为3%的透明质酸去离子水溶液中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液在氮气保护下冷冻干燥，即得石斛多糖。
采用本方法提取石斛多糖，得率可达33.45%，所得石斛多糖ABTS自由基的半数清除率达4.01mg/mL。
实施例4:
一种活性石斛多糖提取方法，其特征在于：活性石斛多糖提取方法包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，充入液氮保护，将温度降至-45℃，并保温60 min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，粉碎至粒径为120目；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:8的固液比加入60℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）选用三氯甲烷与戊醇体积比为3.6: 1的混合溶剂为Sevage试剂，采用采用Savg法去除蛋白质，并在转速为45000rpm、时间为15分钟条件下离心分离，收集分离液。（5）分离液中按分离液与乙醇的体积比为1: 0.2，加入浓度为94%的乙醇，沉淀得到石斛多糖；（6）将沉淀出的石斛多糖加入百分比浓度为4%的抗坏血酸去离子水溶液中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液在摩尔比为1:1的二氧化碳与氮气组合物保护下冷冻干燥，即得石斛多糖。
采用本方法提取石斛多糖，得率可达32.95%，所得石斛多糖ABTS自由基的半数清除率达3.80mg/mL。
实施例5:
一种活性石斛多糖提取方法，其特征在于：活性石斛多糖提取方法包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，充入液氮保护，将温度降至-50℃，并保温45分钟；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，粉碎至粒径为150目；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1: 10的固液比加入50℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）选用三氯甲烷与正丁醇体积比为5 : 1的混合溶剂为Sevage试剂，采用采用Savg法去除蛋白质，并在转速为5000rpm、时间为20min条件下离心分离，收集分离液；（5）分离液中按分离液与乙醇的体积比为1:0.25，加入浓度为95%的乙醇，沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入葡萄糖及坏血酸钠百分比浓度均为6%的去离子水溶液中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液在氮气保护下冷冻干燥，即得石斛多糖。
采用本方法提取石斛多糖，得率可达33.43%，所得石斛多糖ABTS自由基的半数清除率达3.71mg/mL。
实施例6:
一种活性石斛多糖提取方法，其特征在于：活性石斛多糖提取方法包含以下步骤:（1）新鲜石斛放入低温箱，充入液氮保护，将温度降至-53℃，并保温40 min；（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，粉碎至粒径为150目；（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1: 10的固液比加入60℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；（4）选用三氯甲烷与戊醇体积比为5 : 1的混合溶剂为Sevage试剂，采用采用Savg法去除蛋白质，并在转速为5000rpm、时间为20min条件下离心分离，收集分离液；（5）分离液中按分离液与乙醇的体积比为1: 0.19，加入浓度为95%的乙醇，沉淀得到粗品石斛多糖；（6）将将沉淀出的粗品石斛多糖加入右旋糖酐百分比浓度为2%、透明质酸百分比浓度为1%的去离子水溶液中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；（7）将石斛多糖溶液在摩尔比为1:2的二氧化碳与氮气组合物保护下冷冻干燥，即得石斛多糖。
采用本方法提取石斛多糖，得率可达33.15%，所得石斛多糖ABTS自由基的半数清除率达3.70mg/mL。
采用本发明公开方法提取石斛多糖，成本低、得率高、生物活性物质含量高，清除自由基能力强。
Claims (9)
1.一种石斛多糖提取方法，其特征在于：活性石斛多糖提取方法包含以下步骤:
（1）新鲜石斛放入低温箱，并充入液氮保护，将温度降至-45℃～-55℃，并保温15～60min；
（2）将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎；
（3）将粉碎好的石斛粉装入渗虑皿内，按1:5～10的固液比加入45℃～65℃的热水，进行流动相萃取，并收集滤液；
（4）滤液采用Savg法去除蛋白质，离心分离，收集分离液；
（5）分离液中加入浓度为85～97%的乙醇，沉淀得到粗品石斛多糖；
（6）将沉淀出的粗品石斛多糖加入至石斛多糖溶解剂中溶解，过滤去除杂质，得石斛多糖溶液；
（7）将石斛多糖溶液冷冻干燥，即得石斛多糖。
2.如权利要求1所述的石斛多糖提取方法，其特征在于：将冷冻的石斛倒入破碎机进行破碎，破碎至粒径为50～150目。
3.如权利要求1所述的石斛多糖提取方法，其特征在于：Savg法去除蛋白质时，Sevage试剂由三氯甲烷与一元醇组成，三氯甲烷与一元醇的体积比为：3.5～5.5 : 1。
4.如权利要求如权利要求3所述的一元醇，其特征在于：一元醇为戊醇、正丁醇中的一种或两者的组合物。
5.如权利要求如权利要求1所述的石斛多糖提取方法，其特征在于：Savg法去除蛋白离心分离时，转速为4500～5000rpm，时间为10～20min。
6.如权利要求如权利要求1所述的石斛多糖提取方法，其特征在于：Savg法去除蛋白质离心分离后所得分离液进行乙醇沉淀时，分离液与乙醇的体积比为1: 0.1～0.3。
7.如权利要求如权利要求1所述的石斛多糖提取方法，其特征在于：石斛多糖溶解剂由单糖、葡萄糖、环糊精、右旋糖酐、透明质酸、抗坏血酸、抗坏血酸钠中的一种或几种的组合物溶于去离子水中而得，溶质百分比浓度为0.1～15%。
8. 如权利要求如权利要求1所述的石斛多糖提取方法，其特征在于：石斛多糖溶液进行冷冻干燥时，充入 惰性物质进行保护。
9.如权利要求如权利要求7所述的惰性气体，其特征在于：惰性物质为二氧化碳、氮气、中的一种或两者的组合物。
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|---|---|---|---|---|
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| CN115975060A (zh) * | 2021-10-14 | 2023-04-18 | 中国中医科学院中药研究所 | 一种霍山石斛多糖及其提取方法 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103772521A (zh) * | 2014-01-09 | 2014-05-07 | 云南云尚生物技术有限公司 | 一种铁皮石斛多糖的提取方法 |
| CN107602722A (zh) * | 2017-10-31 | 2018-01-19 | 广东逸丰生态实业有限公司 | 一种石斛提取工艺 |
| CN108084291A (zh) * | 2018-01-19 | 2018-05-29 | 贵州独秀峰药业有限公司 | 铁皮石斛中提取多糖的方法 |
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Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103772521A (zh) * | 2014-01-09 | 2014-05-07 | 云南云尚生物技术有限公司 | 一种铁皮石斛多糖的提取方法 |
| CN107602722A (zh) * | 2017-10-31 | 2018-01-19 | 广东逸丰生态实业有限公司 | 一种石斛提取工艺 |
| CN108219025A (zh) * | 2018-01-18 | 2018-06-29 | 贵州独秀峰药业有限公司 | 一种提取率高的铁皮石斛的提取方法 |
| CN108084291A (zh) * | 2018-01-19 | 2018-05-29 | 贵州独秀峰药业有限公司 | 铁皮石斛中提取多糖的方法 |
Non-Patent Citations (8)
| Title |
|---|
| 任玉杰主编: "《有机化学》", 31 March 2010, 华东理工大学出版社 * |
| 姜锡瑞等主编: "《生物发酵产业技术》", 31 May 2016, 中国轻工业出版社 * |
| 孟胜男等: "《药剂学》", 31 January 2016, 中国医药科技出版社 * |
| 张力田等主编: "《碳水化合物化学》", 31 July 2013, 中国轻工业出版社 * |
| 张寿山: "《制药厂生产车间新技术新工艺流程与操作技能应用、质量控制及设备运行维护实用全书》", 31 October 2005, 中国医药科技电子出版社 * |
| 李宁等: "《全民健康安全知识丛书 保健食品安全知识读本》", 31 March 2017, 中国医药科技出版社 * |
| 李建颖主编: "《食品添加剂速查手册》", 30 November 2017, 南开大学出版社 * |
| 查学强等: ""石斛多糖体外抗氧化活性的研究"", 《食品科学》 * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110250519A (zh) * | 2019-06-27 | 2019-09-20 | 上海应用技术大学 | 一种石斛多糖预拌粉及其制备和应用 |
| CN115975060A (zh) * | 2021-10-14 | 2023-04-18 | 中国中医科学院中药研究所 | 一种霍山石斛多糖及其提取方法 |
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