CN108721281A

CN108721281A - 新的抗病毒药物及其应用

Info

Publication number: CN108721281A
Application number: CN201710261806.XA
Authority: CN
Inventors: 李洪林; 徐可; 赵振江; 熊芮
Original assignee: East China University of Science and Technology
Current assignee: East China University of Science and Technology
Priority date: 2017-04-20
Filing date: 2017-04-20
Publication date: 2018-11-02

Abstract

本发明公开了来氟米特、特立氟胺、布喹那及其衍生物在治疗病毒，特别是RNA病毒感染的药物中的应用。所述RNA病毒包括但不限于：流感病毒、呼吸道合胞体病毒、手足口病毒(EV71)、登革热病毒(2型登革热病毒)、寨卡病毒、日本脑炎病毒。这些药物具备广谱且优异的抗病毒活性的并且对正常细胞的毒性较低。

Description

新的抗病毒药物及其应用

技术领域

本发明涉及药物化学领域；具体地说，本发明来氟米特、特立氟胺、布喹那及其衍生物在制备治疗病毒，例如RNA病毒感染的药物以及在治疗病毒，例如RNA病毒感染中的应用。

背景技术

急性病毒感染引起的疾病是公共卫生安全的重要威胁，这些病毒不仅包括熟知的流感病毒(禽流感病毒)、手足口病毒、登革热病毒，还包括一些新发突发的新型烈性病毒如埃博拉病毒、冠状病毒等多种RNA病毒。急性病毒感染引起的疾病都具有一些共同特点：1)病程短(1-2周)，发展快(发病后几天内迅速发展)；2)在高危人群中很容易引发重症乃至死亡；3)容易引起人群传播；4)病毒快速复制通常会引起过度炎症反应。

以流感病毒为例，根据美国CDC统计的数据，因感染流感病毒而住院的成年人死亡率在5％-10％，每年约有2万人死于流感病毒感染。这还不包括几次著名的流感大流行造成的数以百万计的死亡，以及诸如H7N9、H5N1、H5N6甚至H1N1在内的禽流感病毒引发的疫情。流感病毒感染的病程在14天左右，重症病人在发病后的几天内病情迅速恶化直至死亡，虽然也给与了特异性抗病毒药物如达菲等进行治疗，但由于发病后期病毒浓度过高，抑制效果有限，无法挽救生命。

目前，抗病毒药物以靶向病毒的功能性蛋白为主，即，针对每一个病毒需要研发针对性的药物。这种抗病毒药物虽然可以达到很高的特异性和选择性，但长期大量使用往往会出现耐药性。针对不同的病毒开发不同的药物，研发周期长，成本也高。

病毒作为寄生生活的生物体，必须依赖宿主细胞的资源进行繁殖。因此，本领域急需针对病毒赖以生存的宿主细胞设计的小分子药物以便得到广谱抗病毒药物。

发明内容

本发明的目的在于提供具备广谱且优异的抗病毒活性的药物；这些药物对正常细胞的毒性较低；从而为研开发新一代抗病毒药物奠定了物质基础。

在第一方面，本发明提供选自下组的化合物、其衍生物，或其药学上可接受的盐在制备抗病毒感染的药物中的用途：

在具体的实施方式中，所述病毒是RNA病毒。

在具体的实施方式中，所述RNA病毒包括但不限于：流感病毒、呼吸道合胞体病毒、手足口病毒(EV71)、登革热病毒(2型登革热病毒)、寨卡病毒、日本脑炎病毒。

在第二方面，本发明提供一种药物组合物，所述药物组合物包含选自下组的化合物、其衍生物，或其药学上可接受的盐和其它抗病毒药物：

在具体的实施方式中，所述其它抗病毒药物是奥司他韦、利巴韦林、扎那米韦、达菲、拉尼米韦和帕拉米韦中的一种或多种；优选奥司他韦。

在具体的实施方式中，所述药物组合物中还包含药学上可接受的载体或赋形剂。

在第三方面，本发明提供一种治疗病毒感染的方法，所述方法包括将选自下组的化合物、其衍生物，或其药学上可接受的盐或本发明第二方面所述的药物组合物给予需要治疗病毒感染的对象：

在具体的实施方式中，所述病毒是RNA病毒；优选地，所述RNA病毒包括但不限于：流感病毒、呼吸道合胞体病毒、手足口病毒(EV71)、登革热病毒(2型登革热病毒)、寨卡病毒、日本脑炎病毒。

应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。

具体实施方式

发明人经过广泛而深入的研究，出乎意料地发现现有药物来氟米特、特立氟胺、布喹那具备广谱且优异的抗病毒活性，同时这些化合物具有较低的毒性。在此基础上完成了本发明。

来氟米特、特立氟胺和布喹那

现有药物来氟米特(leflunomide)，特立氟胺(teriflunomide，A771726)及布奎那(brequinar)在临床上用于治疗类风湿性关节炎、红斑狼疮、多种原发性和继发性肾小球疾病，防治移植物排异反应。特立氟胺是来氟米特的有效代谢物，因此，来氟米特可以视作特立氟胺的前药。布奎那也已进入II期临床试验阶段，但受限于其治疗窗口窄。这些已有药物在抑制病毒方面尚未见报道。

本发明人出乎意料地发现了来氟米特、特立氟胺、布喹那在动物实验中表现出优异的抗病毒活性，因此这些已有药物在已知的活性之外，进一步具备广谱且优异的抗病毒活性。

病毒

本文所述的病毒可以是RNA病毒(RNA virus)。RNA病毒是生物病毒的一种，它们的遗传物质由核糖核酸组成(RNA ribonucleic acid)，通常核酸是单链的(ssRNA single-stranded RNA)，也有双链的(dsRNA double-stranded RNA)。

在具体的实施方式中，本文所述的RNA病毒包括但不限于：流感病毒、呼吸道合胞体病毒、手足口病毒(EV71)、登革热病毒(2型登革热病毒)、寨卡病毒、日本脑炎病毒。在优选的实施方式中，所述流感病毒包括但不限于：H3N2流感病毒、H1N1流感病毒、H7N9流感病毒。

在上述化合物的基础上，本发明进一步提供一种用于治疗病毒，特别是RNA病毒感染的药物组合物，该组合物含有治疗有效量的本发明化合物或其药学上可接受的盐，以及药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明化合物的药学上可接受的盐的例子包括但不限于无机和有机酸盐，例如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、富马酸盐、扁桃酸盐和草酸盐；以及与碱例如钠羟基、三(羟基甲基)胺基甲烷(TRIS，胺丁三醇)和N-甲基葡糖胺形成的无机和有机碱盐。

虽然每个人的需求各不相同，本领域技术人员可确定本发明药物组合物中每种活性成分的最佳剂量。一般情况下，本发明的化合物或其药学上可接受的盐，对哺乳动物每天口服给药，药量按照约0.0025到50毫克/公斤体重。但最好是每公斤口服给药约0.01到10毫克。例如，单位口服剂量可以包括约0.01到50毫克，最好是约0.1到10毫克的本发明化合物。单位剂量可给予一次或多次，每天为一片或多片，每片含有约0.1到50毫克，合宜地约0.25到10毫克的本发明化合物或其溶剂化物。

本发明的药物组合物可被配制成适合各种给药途径的制剂形式，包括但不限于被配制成用于肠外，皮下，静脉，肌肉，腹腔内，透皮，口腔，鞘内，颅内，鼻腔或外用途径给药的形式，用于***和其他疾病。给药量是有效地改善或消除一个或多个病症的药量。对于特定疾病的治疗，有效量是足以改善或以某些方式减轻与疾病有关的症状的药量。这样的药量可作为单一剂量施用，或者可依据有效的治疗方案给药。给药量也许可治愈疾病，但是给药通常是为了改善疾病的症状。一般需要反复给药来实现所需的症状改善。药的剂量将根据病人的年龄，健康与体重，并行治疗的种类，治疗的频率，以及所需治疗效益来决定。

本发明的药物制剂可以给予任何哺乳动物，只要他们能获得本发明化合物的治疗效果。在这些哺乳动物中最为重要的是人类。本发明的化合物或其药物组合物可用于治疗溃疡性结肠炎。

本发明的药物制剂可用已知的方式制造。例如，由传统的混合，制粒，制锭，溶解，或冷冻干燥过程制造。制造口服制剂时，可结合固体辅料和活性化合物，选择性研磨混合物。如果需要或必要时加入适量助剂后，加工颗粒混合物，获得片剂或锭剂芯。

合适的辅料特别是填料，例如糖类如乳糖或蔗糖，甘露醇或山梨醇；纤维素制剂或钙磷酸盐，例如磷酸三钙或磷酸氢钙；以及粘结剂，例如淀粉糊，包括玉米淀粉，小麦淀粉，大米淀粉，马铃薯淀粉，明胶，黄芪胶，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，羧甲基纤维素钠，或聚乙烯吡咯烷酮。如果需要，可增加崩解剂，比如上面提到的淀粉，以及羧甲基淀粉，交联聚乙烯吡咯烷酮，琼脂，或褐藻酸或其盐，如海藻酸钠。辅助剂特别是流动调节剂和润滑剂，例如，硅石，滑石，硬脂酸盐类，如镁硬脂酸钙，硬脂酸或聚乙二醇。如果需要，可以給锭剂核芯提供可以抵抗胃液的合适包衣。为此，可以应用浓缩糖类溶液。此类溶液可以含有***树胶，滑石，聚乙烯吡咯烷酮，聚乙二醇和/或二氧化钛，漆溶液和合适的有机溶剂或溶剂混合物。为了制备耐胃液的包衣，可使用适当的纤维素溶液，例如醋酸纤维素邻苯二甲酸或羟丙基甲基纤维素邻苯二甲酸。可向药片或锭剂核芯的包衣加入染料或色素。例如，用于识别或为了表征活性成分剂量的组合。

在进一步的研究中，本发明人出乎意料地发现，来氟米特、特立氟胺或布喹那与其它抗病毒药物，例如奥司他韦联用可以产生更佳的治疗效果。因此，本发明还提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含来氟米特、特立氟胺或布喹那、或它们的衍生物或药学上可接受的盐与其它抗病毒药物，例如奥司他韦、利巴韦林、扎那米韦、达菲、拉尼米韦或帕拉米韦中的一种或多种的组合，以及药学上可接受的载体或赋形剂。在优选的实施方式中，所述药物组合物包含来氟米特、特立氟胺或布喹那、或它们的衍生物或药学上可接受的盐与奥司他韦的组合。

因此，本发明还提供一种治疗病毒，特别是RNA病毒感染的方法，该方法包括给予需要治疗病毒感染的对象以治疗有效量的来氟米特、特立氟胺或布喹那、或它们的衍生物或药学上可接受的盐或本发明的药物组合物。

给药方法包括但不限于本领域周知的各种给药方法，可根据患者的实际情况加以确定。这些方法包括但不限于肠外、皮下、静脉、肌肉、腹腔内、透皮、口腔、鞘内、颅内、鼻腔或外用途径给药。

本发明也包括来氟米特、特立氟胺或布喹那、或它们的衍生物或药学上可接受的盐在制备治疗病毒，特别是RNA病毒感染的药物中的用途。

此外，本领域技术人员基于本领域的公知常识和本发明的内容可以知晓，本发明涉及的药物因其中所含的羧基而能形成盐或酯，进而可以形成前药。

本发明的优点

1.本发明首次发现了一系列具备广谱且优异的抗病毒活性的药物；

2.这些药物对正常细胞的毒性较低；

3.这些药物为研究和开发新一代抗病毒药物奠定了物质基础，从而具备很重要的学术价值与现实意义。

以下结合具体实施案例对本发明的技术方案进一步描述，但以下实施例不构成对本发明的限制，所有依据本发明的原理和技术手段采用的各种施用方法，均属于本发明范围。

下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。

材料与方法

材料：

来氟米特、特立氟胺、布喹那均为市售可得，纯度98％以上。

方法：

药物IC₅₀(half inhibitory concentration)的测定：MDCK细胞或者Vero细胞或者RD细胞铺至96孔板，培养12h后生长至90％以上备用。药物用2倍系列梯度稀释(1×10^-1至1×10^-10)。单层MDCK细胞吸去培液，PBS洗一遍，每孔加入相应稀释度药物溶液50μl，同时每孔加入含有100倍TCID50的病毒液50ul，每个稀释度做四个复孔。37℃，5％CO₂培养3-5天后，观察CPE(细胞病变)的产生，记录四个复孔中可保护细胞不产生CPE的阳性孔和不能保护细胞产生CPE的阴性孔的数目，找出能可抑制半数细胞产生病变的药物稀释倍数，根据按Reed和Muench公式计算出该药物的IC₅₀。

药物TC₅₀(half toxicity concentration)的测定：MDCK细胞或者Vero细胞或者RD细胞铺至96孔板，培养12h后生长至90％以上备用。药物用2倍系列梯度稀释(1×10-1至1×10-10)。单层MDCK细胞吸去培液，PBS洗一遍，每孔加入相应稀释度药物溶液100μl，每个稀释度做四个复孔。37℃，5％CO2培养3-5天后，观察药物毒性导致的细胞死亡，记录四个复孔中发生细胞死亡的阳性孔和不发生细胞死亡的阴性孔的数目，找出导致半数细胞死亡的药物稀释倍数，根据按Reed和Muench公式计算出该药物的TC₅₀。

本发明人在哺乳动物细胞上检测了本发明化合物对病毒感染引起的细胞病变(cytopathic effect,CPE)的抑制效果。

实施例1.活性评价

细胞水平抑制病毒复制的活性试验

本发明人如以上“材料与方法”部分所述测试本发明化合物在细胞水平抑制各病毒复制的活性。

本发明化合物对H3N2(流感病毒)在宿主细胞MDCK中的半数抑制浓度IC₅₀和药物半数有毒浓度TC₅₀

化合物	IC₅₀(uM)	TC₅₀(uM)	SI(TC₅₀/IC₅₀)
				来氟米特	18	>50	>2.8
特立氟胺	2.5	>50	>25
				布喹那	1	>50	>50

化合物对RSV(人呼吸道合胞病毒)在宿主细胞Vero(非洲绿猴肾细胞)中的半数抑制浓度IC₅₀和药物半数有毒浓度TC₅₀

化合物	IC₅₀(uM)	TC₅₀(uM)	SI(TC₅₀/IC₅₀)
				来氟米特	>25	46	<1.84
特立氟胺	8.25	39	4.73
				布喹那	5.36	31	5.78

化合物对EV71(人手足口病毒)在宿主细胞RD(人恶性胚胎横纹肌瘤细胞)的半数抑制浓度IC₅₀和药物半数有毒浓度TC₅₀

化合物	IC₅₀(uM)	TC₅₀(uM)	SI(TC₅₀/IC₅₀)
				来氟米特	>25	35	<1.4
特立氟胺	9.23	29	3.14
				布喹那	4.28	29	6.78

化合物对Dengue Virus 2(登革病毒2型)在宿主细胞Vero(非洲绿猴肾细胞)的半数抑制浓度IC₅₀和药物半数有毒浓度TC₅₀

化合物	IC₅₀(uM)	TC₅₀(uM)	SI(TC₅₀/IC₅₀)
				来氟米特	20	46	2.3
特立氟胺	8.26	39	4.72
				布喹那	5.36	31	5.78

化合物对Zika Vrius(寨卡病毒)在宿主细胞Vero(非洲绿猴肾细胞)的半数抑制浓度IC₅₀和药物半数有毒浓度TC₅₀

化合物	IC₅₀(uM)	TC₅₀(uM)	SI(TC₅₀/IC₅₀)
				来氟米特	20	46	2.3
特立氟胺	2.36	39	16.5
				布喹那	0.35	31	88.6

化合物对JEV(日本脑炎病毒)在宿主细胞Vero(非洲绿猴肾细胞)的半数抑制浓度IC₅₀和药物半数有毒浓度TC₅₀

化合物编号	IC₅₀(uM)	TC₅₀(uM)	SI(TC₅₀/IC₅₀)
				来氟米特	23	46	2
特立氟胺	3.35	39	11.6
				布喹那	1.12	31	27.7

实施例2.与其它抗病毒药物的联用

本发明人进一步测试了来氟米特、特立氟胺、布喹那与现有技术的其它抗病毒药物，奥司他韦、利巴韦林、扎那米韦、达菲、拉尼米韦或帕拉米韦的联用情况。

结果发现，来氟米特、特立氟胺、布喹那与这些抗病毒药物联用可以产生更佳的治疗效果；其中与奥司他韦联用的治疗效果相对较佳。

讨论：

通过体外细胞实验和体内的小鼠攻毒实验验证，本发明的化合物具有较好的抗流感病毒、抗手足口病毒、抗登革热病毒等急性感染病毒的能力，在与现有的抗病毒药物，例如奥司他韦联用后能将H7N9重度感染小鼠的存活率提高25％。具有开发成广谱抗病毒药物的前景。

在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。

Claims

1.选自下组的化合物、其衍生物，或其药学上可接受的盐在制备抗病毒感染的药物中的用途：

2.如权利要求1所述的用途，其特征在于，所述病毒是RNA病毒。

3.如权利要求2所述的用途，其特征在于，所述RNA病毒包括但不限于：流感病毒、呼吸道合胞体病毒、手足口病毒(EV71)、登革热病毒(2型登革热病毒)、寨卡病毒、日本脑炎病毒。

4.一种药物组合物，所述药物组合物包含选自下组的化合物、其衍生物，或其药学上可接受的盐和其它抗病毒药物：

5.如权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述其它抗病毒药物是奥司他韦、利巴韦林、扎那米韦、达菲、拉尼米韦和帕拉米韦中的一种或多种；优选奥司他韦。

6.如权利要求4或5所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物中还包含药学上可接受的载体或赋形剂。

7.一种治疗病毒感染的方法，所述方法包括将选自下组的化合物、其衍生物，或其药学上可接受的盐或权利要求4-6中任一项所述的药物组合物给予需要治疗病毒感染的对象：

8.如权利要求7所述的方法，其特征在于，所述病毒是RNA病毒；优选地，所述RNA病毒包括但不限于：流感病毒、呼吸道合胞体病毒、手足口病毒(EV71)、登革热病毒(2型登革热病毒)、寨卡病毒、日本脑炎病毒。