CN108530550A - 一种抑制血液凝固的油茶桑寄生多糖及其提取方法 - Google Patents

一种抑制血液凝固的油茶桑寄生多糖及其提取方法 Download PDF

Info

Publication number
CN108530550A
CN108530550A CN201810369702.5A CN201810369702A CN108530550A CN 108530550 A CN108530550 A CN 108530550A CN 201810369702 A CN201810369702 A CN 201810369702A CN 108530550 A CN108530550 A CN 108530550A
Authority
CN
China
Prior art keywords
acid
oil tea
soluble polysaccharide
polysaccharides
water
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201810369702.5A
Other languages
English (en)
Inventor
邹晓青
梁琴
彭圣明
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Xiangtan University
Original Assignee
Xiangtan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Xiangtan University filed Critical Xiangtan University
Priority to CN201810369702.5A priority Critical patent/CN108530550A/zh
Publication of CN108530550A publication Critical patent/CN108530550A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
    • A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Materials Engineering (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Sustainable Development (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Hematology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Medicines Containing Plant Substances (AREA)

Abstract

本发明涉及一种具有抑制血液凝固功能的油茶桑寄生多糖及其提取方法，所述油茶桑寄生多糖是从桑寄生科离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖，它们均能延长凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间（PT）和活化部分凝血酶原时间(APTT)，具有较好的体外抑制血液凝固功能，提取方法简单实用，具开发应用价值。

Description

一种抑制血液凝固的油茶桑寄生多糖及其提取方法
技术领域
本发明涉及一种具有抑制血液凝固功能的油茶桑寄生多糖及其提取方法。
背景技术
血液凝固或称凝血，是指血液由液体状态转变为不流动的凝胶状态的过程，是生理性止血的重要环节。血液凝固是一个复杂的过程，凝血机制内部采用级联机制逐级放大凝血信号，并通过多个正反馈环节加强凝血过程。与此同时，为了防止正常情况下意外形成血栓，或者出血部位形成的血栓不受控制，机体还有抗凝机制和纤溶机制对抗凝血机制。
抗凝药物是一类通过影响凝血过程的不同环节而抑制血液凝固的药物,抗凝药物被广泛用于血栓栓塞性疾病的预防和治疗，预防中风或其它血栓性疾病。传统抗凝药物中最常用的口服抗凝药华法林，已经在临床使用多年，但其存在诸多局限性，如起效延缓、抗凝治疗窗窄、易受饮食影响、用药期间需要频繁监测及调节剂量、与多种药物之间存在相互作用以及大出血等副作用。因此长期以来，人们一直在寻找一种安全、有效和方便的抗凝药物。理想的抗凝药应该具有高的有效安全系数、可预测剂量响应(无需监测)、起效快、药物间相互作用少等特点。从天然植物中寻找安全有效的抗凝活性物质一直是关注的热点。
桑寄生，原名桑上寄生，亦称广寄生。桑寄生是寄生于桑科、茶科、豆科等的一种半寄生植物，对于同一种桑寄生，它的寄主能够达到几十种以上。桑寄生主产于我国的福建、广西、广东等地，在我国的大部分地区皆有存在。桑寄生始记载于《神农本草经》，被《神农本草经》列为上品，其功效有“主腰痛，小儿背强，痈肿，安胎，充肌肤，坚发齿，长须眉。”作为常见中药的临床应用中，桑寄生具有安胎、止咳、强筋骨等主要功效，而现代药理学研究显示，桑寄生对于高血压、中风、炎症、高血脂、流产以及对心律失常等都具有治疗作用。
多糖是一类具有广泛生物活性的天然大分子化合物，广泛分布于自然界高等植物、藻类、微生物(细菌和真菌)及动物体内。多糖类物质是除蛋白质和核酸之外的又一类重要的生物大分子，是很多植物药发挥药效的物质基础。植物多糖具有复杂的、多方面的生物活性和功能，如免疫调节功能、抗感染、抗辐射、抗凝血、降血糖、降血脂、促进核酸与蛋白质的生物合成以及抗衰老等作用。如甘草多糖具有明显的抗病毒和抗肿瘤作用；黑木耳多糖、银杏外种皮多糖和芦荟多糖可抗肿瘤和增强人体免疫功能；柴胡多糖具有抗辐射、增强免疫功能等生物学作用；麦冬多糖具有降血糖及免疫增强作用；爬山虎多糖具有抗病毒和抗衰老作用；茶叶多糖、灵芝多糖、大蒜多糖及黑木耳多糖等植物多糖具有抗凝血作用等。目前已有部分天然多糖类化合物用于临床，显示出良好疗效。多糖已成为天然药物及保健品研发中的重要部分。
发明内容
本发明要解决的技术问题是：一种具有抑制血液凝固功能的油茶桑寄生多糖及其提取方法
本发明的技术方案是：
1.一种抑制血液凝固的油茶桑寄生多糖，其特征在于：
所述的油茶桑寄生多糖是从桑寄生科离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖，它们的主要成分是鼠李糖、***糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖六种单糖和蛋白质，酸溶性多糖还含有18.52％的糖醛酸，水溶性多糖中这六种单糖的质量摩尔比为5.09:21.06:6.49:6.65:10.70:9.19，酸溶性多糖中这六种单糖的质量摩尔比为7.15:1.82:15.36:5.42:61.08:35.35，碱溶性多糖中这六种单糖的质量摩尔比为0.47:0.66:6.81:0.34:0.77:0.73，水溶性多糖是含有α构型吡喃环的蛋白多糖，酸溶性多糖和碱溶性多糖均为β构型的吡喃环蛋白多糖，水溶性多糖重均分子量为3.61E+04，酸溶性多糖重均分子量为4.64E+04，碱溶性多糖重均分子量为1.21E+04；
所述油茶桑寄生多糖具有抑制血液凝固的功能，具体为水溶性多糖能延长活化部分凝血酶原时间(APTT)，具有统计学差异；酸溶性多糖能延长活化部分凝血酶原时间(APTT),剂量依赖地延长凝血酶时间(TT)和凝血酶原时间(PT)，具有统计学差异；碱溶性多糖能延长凝血酶时间(TT)，剂量依赖地延长活化部分凝血酶原时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)，具有统计学差异。
2.根据1所述的油茶桑寄生多糖的提取方法是：
(1)将桑寄生科离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶粉碎后，用5倍体积的含乙醇质量百分数80-85％的乙醇-水溶液在40-60℃浸泡110-130min，抽滤，弃滤液，滤渣a用10倍体积的去离子水在90-100℃浸取2-3次，每次110-130min，溶液冷却到室温后过滤，过滤后的滤渣b供下一步(2)继续提取用，滤液于50-60℃减压蒸馏浓缩，再加入相当于浓缩物三倍体积的无水乙醇，于4℃浸泡静置过夜，离心分离，得到沉淀物a，称重，用丙酮、***、乙醇交替洗涤沉淀物a三次，加去离子水溶解沉淀物a，再加入相当于沉淀物a质量一倍体积的含三氯乙酸质量百分数2-3％的三氯乙酸-水溶液，于4℃浸泡静置90-150min，离心分离，静置，取上清液置于蒸馏水中透析20-30h，每隔8h换一次透析液，透析后的溶液冷冻干燥，即得到所述的水溶性油茶桑寄生多糖；
(2)向(1)中经去离子水提取后的滤渣b中加入10倍体积的0.3mol/L盐酸溶液，80-90℃搅拌110-130min，冷却，抽滤，重复2-3次，抽滤后的滤渣c供下一步(3)继续提取用，滤液用20％的氢氧化钠调pH值为7，于50-60℃减压蒸馏浓缩，加入相当于浓缩物3倍体积的无水乙醇，沉淀，离心分离，得到沉淀物b，称重，沉淀物b用丙酮、***、乙醇交替洗涤3次，加去离子水溶解，再加入相当于沉淀b质量的一倍体积的含三氯乙酸质量百分数2-3％的三氯乙酸-水溶液，于4℃浸泡静置90-150min，离心分离，静置，取上清液置于蒸馏水中透析20-30h，每隔8h换一次透析液，透析后的溶液冷冻干燥，即得到所述的酸溶性油茶桑寄生多糖；
(3)向(2)中经盐酸提取后的滤渣c中加入10倍体积的0.3mol/L NaOH水溶液，于50-60℃在N2流下浸泡静置110-130min，冷却，抽滤，重复2-3次，离心分离，静置，上清液以冰醋酸调pH值为5-6，于50-60℃减压蒸馏浓缩，加入相当于浓缩物3倍体积的无水乙醇，沉淀，离心分离，得到沉淀物c，沉淀物c用丙酮、***、乙醇交替洗涤3次，加去离子水溶解，加入相当于沉淀c质量一倍的含三氯乙酸质量百分数2-3％的三氯乙酸-水溶液，于4℃静置90-150min，离心分离，静置，取上清液置于蒸馏水中透析20-30h，每隔8h换一次透析液，透析后的溶液冷冻干燥，即得到所述的碱溶性油茶桑寄生多糖；
所述的在N2流下是避免在碱性条件下油茶桑寄生多糖的氧化，而(2)水性提取、(3)酸性提取都不需要在N2流下的N2气保护
3.根据1所述的油茶桑寄生多糖的结构特征按照以下(1)-(4)方法检测：
(1)总糖含量、糖醛酸含量、蛋白质含量的检测
采用苯酚-硫酸法测定油茶桑寄生多糖的总糖含量，采用间羟基联苯比色法测定其糖醛酸含量，采用BCA蛋白定量分析法测定其蛋白质含量。
(2)单糖组成的检测
采用气相色谱测定油茶桑寄生多糖的单糖组成。
(3)红外光谱检测
采用红外光谱分析油茶桑寄生多糖的分子结构和化学组成。
(4)平均分子量及分布的检测
通过高效凝胶渗透色谱法测定油茶桑寄生多糖的分子量及其分布。
4.根据1所述的油茶桑寄生多糖具有抑制血液凝固功能的实验方法
通过凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血酶原时间(APTT)的测定来考察油茶桑寄生多糖的抗凝血活性。
本发明的效果：
从桑寄生科离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖均能延长TT、PT以及APTT，其中以油茶桑寄生干燥叶提取的碱溶性多糖作用最强，表现出很强的体外抑制血液凝固的作用。较之于传统抗凝药物如最常用的口服抗凝药华法林，油茶桑寄生多糖则更加安全和方便，具有较高的有效/安全系数等特点；较之于临床最常用的抗凝药肝素，由于肝素口服不吸收，需要注射用药，而油茶桑寄生多糖不仅口服吸收良好，且口感良好，适于长期应用；较之于只能延长APTT的茶多糖，油茶桑寄生多糖既能延长APTT，也能延长TT以及PT，表明油茶桑寄生多糖既能通过影响内源性以及外源性凝血途径而发挥抗凝血作用，也能通过增强纤维蛋白溶解活性而发挥抗凝血作用。油茶桑寄生多糖作为抗凝血剂具有安全、有效、廉价且使用方便等特点，具开发价值，应用前景很好。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的说明。
实施例
1.从离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶提取水溶性多糖、酸溶性多糖和碱溶性多糖的方法是：
(1)将离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶粉碎后，用5倍体积的含乙醇质量百分数80-85％的乙醇-水溶液在40-60℃浸泡110-130min，抽滤，弃滤液，滤渣a用10倍体积的去离子水在90-100℃浸取2-3次，每次110-130min，溶液冷却到室温后过滤，过滤后的滤渣b供下一步(2)继续提取用，滤液于50-60℃减压蒸馏浓缩，再加入相当于浓缩物三倍体积的无水乙醇，于4℃浸泡静置过夜，离心分离，得到沉淀物a，称重，用丙酮、***、乙醇交替洗涤沉淀物a三次，加去离子水溶解沉淀物a，再加入相当于沉淀物a质量一倍体积的含三氯乙酸质量百分数2-3％的三氯乙酸-水溶液，于4℃浸泡静置90-150min，离心分离，静置，取上清液置于蒸馏水中透析20-30h，每隔8h换一次透析液，透析后的溶液冷冻干燥，即得到所述的水溶性油茶桑寄生多糖；
(2)向(1)中经去离子水提取后的滤渣b中加入10倍体积的0.3mol/L盐酸溶液，80-90℃搅拌110-130min，冷却，抽滤，重复2-3次，抽滤后的滤渣c供下一步(3)继续提取用，滤液用20％的氢氧化钠调pH值为7，于50-60℃减压蒸馏浓缩，加入相当于浓缩物3倍体积的无水乙醇，沉淀，离心分离，得到沉淀物b，称重，沉淀物b用丙酮、***、乙醇交替洗涤3次，加去离子水溶解，再加入相当于沉淀b质量的一倍体积的含三氯乙酸质量百分数2-3％的三氯乙酸-水溶液，于4℃浸泡静置90-150min，离心分离，静置，取上清液置于蒸馏水中透析20-30h，每隔8h换一次透析液，透析后的溶液冷冻干燥，即得到所述的酸溶性油茶桑寄生多糖；
(3)向(2)中经盐酸提取后的滤渣c中加入10倍体积的0.3mol/L NaOH水溶液，于50-60℃在N2流下浸泡静置110-130min，冷却，抽滤，重复2-3次，离心分离，静置，上清液以冰醋酸调pH值为5-6，于50-60℃减压蒸馏浓缩，加入相当于浓缩物3倍体积的无水乙醇，沉淀，离心分离，得到沉淀物c，沉淀物c用丙酮、***、乙醇交替洗涤3次，加去离子水溶解，加入相当于沉淀c质量一倍的含三氯乙酸质量百分数2-3％的三氯乙酸-水溶液，于4℃静置90-150min，离心分离，静置，取上清液置于蒸馏水中透析20-30h，每隔8h换一次透析液，透析后的溶液冷冻干燥，即得到所述的碱溶性油茶桑寄生多糖；
2.从离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖，其结构特征按照如下(1)-(4)方法测量：
(1)总糖含量、糖醛酸含量、蛋白质含量
采用苯酚-硫酸法测定离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖的总糖含量，采用间羟基联苯比色法测定其糖醛酸含量，采用BCA蛋白定量分析法测定蛋白质含量，结果见表1。
表1从油茶桑寄生干燥叶提取的多糖的总糖、糖醛酸、蛋白质含量
(2)单糖组成
采用气相色谱测定桑寄生科离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖单糖组成，结果显示所提取的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖主要由鼠李糖、***糖、木糖、甘露糖、葡萄糖和半乳糖6种单糖组成，其中水溶性多糖6种单糖的摩尔比为5.09：21.06：6.49：6.65：10.70：9.19，酸溶性多糖6种单糖的摩尔比为7.15：1.82：15.36：5.42：61.08：35.35，碱溶性多糖6种单糖的摩尔比为0.47：0.66：6.81：0.34：0.77：0.73。
(3)红外光谱
从油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖中较大的吸收峰有3336.12cm-1、2921.40cm-1、2853.68cm-1、1596.99cm-1、1394.65cm-1、1249.16cm-1、1056.02cm-1、852.84cm-1、650.50cm-1，如附图图1所示。3336.12cm-1附近出现强吸收峰是由于糖类的O-H和蛋白质N-H伸缩振动引起的，存在分子内氢键；在3000-2800cm-1之间存在小的吸收峰，是糖类C-H伸缩振动(-CH2-)引起的吸收峰；1596.99cm-1附近的吸收峰属于氨基变形振动峰；1394.65cm-1、1249.16cm-1附近的吸收峰是由C-C-H或H-C-O产生的，1056.02cm-1附近为两种C-O伸缩振动引起的吸收峰；在852.84cm-1处的特征吸收峰，表明该多糖具有α-糖苷键；650.50cm-1处出现吸收峰，表明该多糖结构中存在酰氨基，由红外光谱分析可推测油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖是含有α构型吡喃环的蛋白多糖。
从油茶桑寄生干燥叶提取的酸溶性多糖中较大吸收峰有3337.02cm-1、2921.36cm-1、1752.38cm-1、1613.55cm-1、1406.14cm-1、1326.44cm-1、1227.88cm-1、1148.18cm-1、1089.05cm-1、1019.62cm-1、891.07cm-1、623.68cm-1，如附图图2所示。3337.02cm-1出现强吸收峰是由于糖类的O-H和蛋白质N-H伸缩振动引起的，存在分子内氢键；2921.36cm-1处出现小的吸收峰，是糖类C-H伸缩振动(-CH2-)引起的吸收峰；1752.38cm-1、1613.55cm-1是氨基酸的C＝O和N-H的变角振动引起的强吸收峰，证明有蛋白质的存在；1406.14cm-1、1326.44cm-1、1227.88cm-1这几组峰是糖类的O-H内面弯曲振动、-CH2-的摇摆和扭曲振动；1148.18cm-1、1089.05cm-1、1019.62cm-1附近的三个强吸收峰说明甜叶悬钩子提取草酸盐溶果胶类多糖为吡喃糖；1089.05cm-1附近为糖醛酸的特征吸收峰；891.07cm-1附近的吸收峰表明该多糖是β-D-吡喃糖C-H的变角振动所引起的，表明该组分含有β-D-吡喃葡萄糖环，分子以β-糖苷键连接；623.68cm-1处出现吸收峰，表明该多糖结构中存在酰氨基，由红外光谱图可以推断从油茶桑寄生干燥叶提取的酸溶性多糖是β-D-吡喃环蛋白多糖。
从油茶桑寄生干燥叶提取的碱溶性多糖中较大的吸收峰有3311.56cm-1、2923.08cm-1、1544.73cm-1、1375.73cm-1、1036.99cm-1、902.38cm-1、639.77cm-1，如附图图3所示。在3311.56cm-1出现的吸收峰，是糖类分子内或分子间O-H键的伸缩振动，2923.08cm-1处出现一个弱吸收峰，是糖类不对称C-H的伸缩振动，1544.73cm-1处的吸收峰，是氨基变形振动吸收峰，1375.73cm-1处的吸收峰属于C-H的变角振动吸收峰；1036.99cm-1处的吸收峰是C-O-C基团振动所致或六元环C-H面内弯曲振动，902.38cm-1处的特征吸收峰，是β-D-吡喃糖C-H的变角振动所引起的，表明该组分含有β-D-吡喃葡萄糖环，分子以β-糖苷键连接，639.77cm-1处出现吸收峰，表明结构中存在酰氨基，由此可推断油茶桑寄生干燥叶提取的碱溶性多糖是一种含有β构型的吡喃环蛋白多糖。
(4)平均分子量及分布
通过高效凝胶渗透色谱法测定从桑寄生科离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖的分子量，结果如附图图4-6及表2所示。
表2从油茶桑寄生干燥叶提取的多糖分子量及分布
注：Mw为重量平均分子量，Mn为数均分子量，Mz为质均分子量
3.从桑寄生科离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖具有抑制血液凝固的功能
(1)制备贫血小板血浆
20周龄雄性家兔，麻醉，静脉取血，置于枸橼酸钠抗凝血试管中，抗凝剂枸橼酸钠与血液的比例为1:9，充分混匀，2800-3200rpm离心8-12min，分离血浆，分装至离心管内，制得贫血小板血浆(PPP)，-20℃保存，备用。
(2)抑制血液凝固
1)样品制备：取油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖，分别溶于生理盐水，配制成0.5、2.0、8.0g/L的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖各溶液为待测样品，进行体外血液凝固抑制活性测定，待测样品与贫血小板血浆(PPP)以1：4的体积比混匀，此为待测血浆，0.03g/L浓度的肝素作为阳性对照，等量生理盐水作为溶剂对照。
2)凝血酶时间(Thrombin time，TT)的测定：取37℃预温3min的待测血浆0.2mL，加入37℃预温的TT试剂0.2mL，混匀，开动秒表计时，不断地倾斜试管至液体流动缓慢趋于停止时，终止计时，记录所需时间，重复测定3次以上。
3)凝血酶原时间(Prothrombin time，PT)的测定：取37℃预温3min的待测血浆0.1mL，加入37℃预温的PT试剂0.2mL，混匀，开动秒表计时。不断地倾斜试管至液体流动缓慢趋于停止时，终止计时，记录所需时间，重复测定3次以上。
4)活化部分凝血酶原时间(Aetived partial thromboplastin time，APTT)的测定：取37℃预温3min的待测血浆0.1mL，加入37℃预温的APTT试剂0.1mL，37℃孵育5min，再加入37℃预温的0.025mol/L CaCl2溶液0.1mL，混匀，开动秒表计时，不断地倾斜试管至液体流动缓慢趋于停止时，终止计时，记录所需时间，重复测定3次以上。
5)统计学处理：数据以均数±标准差表示，用SPSS8.0统计学软件进行方差分析，组间比较采用Dunett’s检验，P<0.05具有统计学意义。
6)通过凝血酶时间(TT)、凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血酶原时间(APTT)的测定结果表明：油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖在较高剂量(8.0g/L)时能延长APTT，且具有统计学差异(P≤0.05)，表现出一定的体外抑制血液凝固的作用，结果如表3所示；油茶桑寄生干燥叶提取的酸溶性多糖在较高剂量时(8.0g/L)能延长APTT,在实验所使用的剂量范围(0.5-8.0g/L)能剂量依赖地延长PT,且均具有统计学差异(P≤0.05),在2.0、8.0g/L两个剂量均能延长TT，量效关系明显，且均具有统计学差异(P≤0.05)，表现出较强的体外抑制血液凝固的作用，结果如表4所示；油茶桑寄生干燥叶提取的碱溶性多糖，在2.0、8.0g/L两个剂量均能明显延长APTT,在8.0g/L剂量组接近肝素的水平，均具有统计学差异(P≤0.05)，在实验所使用的剂量范围(0.5-8.0g/L)均能延长PT，量效关系明显，在8.0g/L剂量组接近肝素的水平，均具有统计学差异(P≤0.05),在较高剂量(8.0g/L)时能延长TT，具有统计学差异(P≤0.05)，表现出很强的体外抑制血液凝固的作用，结果如表5所示。
表3不同浓度油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖体外抑制凝血活性(*与生理盐水比较P≤0.05)
表4不同浓度油茶桑寄生干燥叶提取的酸溶性多糖体外抑制凝血活性(*与生理盐水比较P≤0.05)
表5不同浓度油茶桑寄生干燥叶提取的碱溶性多糖体外抑制凝血活性(*与生理盐水比较P≤0.05)
附图说明
图1是油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖红外光谱图。
图2是油茶桑寄生干燥叶提取的酸溶性多糖红外光谱图。
图3是油茶桑寄生干燥叶提取的碱溶性多糖红外光谱图。
图4是油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖高效凝胶渗透色谱图，M为水溶性多糖分子量,W代表水溶性多糖样品质量，可见dW/d(logM)主要分布在logM＝3到logM＝3.7范围内。
图5是油茶桑寄生干燥叶提取的酸溶性多糖高效凝胶渗透色谱图，M为酸溶性多糖分子量,W代表酸溶性多糖样品质量，可见dW/d(logM)主要分布在logM＝3到logM＝5.5范围内。
图6是油茶桑寄生干燥叶提取的碱溶性多糖高效凝胶渗透色谱图，M为碱溶性多糖分子量,W代表碱溶性多糖样品质量，可见dW/d(logM)主要分布在logM＝3到logM＝4.3范围内。

Claims (2)

1.一种抑制血液凝固的油茶桑寄生多糖，其特征在于：
所述的油茶桑寄生多糖是从桑寄生科离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶提取的水溶性多糖、酸溶性多糖、碱溶性多糖，它们的主要成分是鼠李糖、***糖、木糖、甘露糖、葡萄糖、半乳糖六种单糖和蛋白质，酸溶性多糖还含有18.52%的糖醛酸，水溶性多糖中这六种单糖的质量摩尔比为5.09:21.06:6.49:6.65:10.70:9.19，酸溶性多糖中这六种单糖的质量摩尔比为7.15:1.82:15.36:5.42:61.08:35.35，碱溶性多糖中这六种单糖的质量摩尔比为0.47:0.66:6.81:0.34:0.77:0.73，水溶性多糖是含有α构型吡喃环的蛋白多糖，酸溶性多糖和碱溶性多糖均为β构型的吡喃环蛋白多糖，水溶性多糖重均分子量为3.61E+04，酸溶性多糖重均分子量为4.64E+04，碱溶性多糖重均分子量为1.21E+04；
所述油茶桑寄生多糖具有抑制血液凝固的功能，具体为水溶性多糖能延长活化部分凝血酶原时间(APTT)，具有统计学差异；酸溶性多糖能延长活化部分凝血酶原时间(APTT),剂量依赖地延长凝血酶时间(TT)和凝血酶原时间(PT)，具有统计学差异；碱溶性多糖能延长凝血酶时间(TT)，剂量依赖地延长活化部分凝血酶原时间(APTT)和凝血酶原时间(PT)，具有统计学差异。
2.根据权利要求1所述的油茶桑寄生多糖的提取方法是：
（1）将桑寄生科离瓣寄生属植物油茶桑寄生干燥叶粉碎后，用5倍体积的含乙醇质量百分数80-85%的乙醇-水溶液在40-60℃浸泡110-130 min，抽滤，弃滤液，滤渣a用10倍体积的去离子水在90-100℃浸取2-3次，每次110-130 min，溶液冷却到室温后过滤，过滤后的滤渣b供下一步（2）继续提取用，滤液于50-60℃减压蒸馏浓缩，再加入相当于浓缩物三倍体积的无水乙醇，于4℃浸泡静置过夜，离心分离，得到沉淀物a，称重，用丙酮、***、乙醇交替洗涤沉淀物a三次，加去离子水溶解沉淀物a，再加入相当于沉淀物a质量一倍体积的含三氯乙酸质量百分数2-3%的三氯乙酸-水溶液，于4℃浸泡静置90-150 min，离心分离，静置，取上清液置于蒸馏水中透析20-30h，每隔8h换一次透析液，透析后的溶液冷冻干燥，即得到所述的水溶性油茶桑寄生多糖；
（2）向（1）中经去离子水提取后的滤渣b中加入10倍体积的0.3mol/L盐酸溶液，80-90℃搅拌110-130 min，冷却，抽滤，重复2-3次，抽滤后的滤渣c供下一步（3）继续提取用，滤液用20%的氢氧化钠调pH值为7，于50-60℃减压蒸馏浓缩，加入相当于浓缩物3倍体积的无水乙醇，沉淀，离心分离，得到沉淀物b，称重，沉淀物b用丙酮、***、乙醇交替洗涤3次，加去离子水溶解，再加入相当于沉淀b质量的一倍体积的含三氯乙酸质量百分数2-3%的三氯乙酸-水溶液，于4℃浸泡静置90-150 min，离心分离，静置，取上清液置于蒸馏水中透析20-30h，每隔8h换一次透析液，透析后的溶液冷冻干燥，即得到所述的酸溶性油茶桑寄生多糖；
（3）向（2）中经盐酸提取后的滤渣c中加入10倍体积的0.3 mol/L NaOH水溶液，于50-60℃在N2流下浸泡静置110-130 min，冷却，抽滤，重复2-3次，离心分离，静置，上清液以冰醋酸调pH值为5-6，于50-60℃减压蒸馏浓缩，加入相当于浓缩物3倍体积的无水乙醇，沉淀，离心分离，得到沉淀物c，沉淀物c用丙酮、***、乙醇交替洗涤3次，加去离子水溶解，加入相当于沉淀c质量一倍的含三氯乙酸质量百分数2-3%的三氯乙酸-水溶液，于4℃静置90-150min，离心分离，静置，取上清液置于蒸馏水中透析20-30h，每隔8h换一次透析液，透析后的溶液冷冻干燥，即得到所述的碱溶性油茶桑寄生多糖；
所述的在N2流下是避免在碱性条件下油茶桑寄生多糖的氧化，而（2）水性提取、（3）酸性提取都不需要在N2流下的N2气保护。
CN201810369702.5A 2018-04-23 2018-04-23 一种抑制血液凝固的油茶桑寄生多糖及其提取方法 Pending CN108530550A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810369702.5A CN108530550A (zh) 2018-04-23 2018-04-23 一种抑制血液凝固的油茶桑寄生多糖及其提取方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810369702.5A CN108530550A (zh) 2018-04-23 2018-04-23 一种抑制血液凝固的油茶桑寄生多糖及其提取方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN108530550A true CN108530550A (zh) 2018-09-14

Family

ID=63477504

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810369702.5A Pending CN108530550A (zh) 2018-04-23 2018-04-23 一种抑制血液凝固的油茶桑寄生多糖及其提取方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108530550A (zh)

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3267090A (en) * 1960-09-09 1966-08-16 Ciba Geigy Corp Viscumic acid and salts thereof
CN101250233A (zh) * 2008-03-27 2008-08-27 福建师范大学 红花桑寄生多糖的提取方法
CN101486772A (zh) * 2009-02-13 2009-07-22 南京师范大学 一种槲寄生多糖及其制备方法和用途
CN102417545A (zh) * 2011-11-03 2012-04-18 沈阳科思高科技有限公司 一种高等植物或食药用真菌类中活性多糖的提取方法
CN105030810A (zh) * 2015-06-05 2015-11-11 湘潭大学 一种甜叶悬钩子多糖用于抑制血液的凝固

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US3267090A (en) * 1960-09-09 1966-08-16 Ciba Geigy Corp Viscumic acid and salts thereof
CN101250233A (zh) * 2008-03-27 2008-08-27 福建师范大学 红花桑寄生多糖的提取方法
CN101486772A (zh) * 2009-02-13 2009-07-22 南京师范大学 一种槲寄生多糖及其制备方法和用途
CN102417545A (zh) * 2011-11-03 2012-04-18 沈阳科思高科技有限公司 一种高等植物或食药用真菌类中活性多糖的提取方法
CN105030810A (zh) * 2015-06-05 2015-11-11 湘潭大学 一种甜叶悬钩子多糖用于抑制血液的凝固

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
YANGYANG CHAI, MIN ZHAO∗: "Purification, characterization and anti-proliferation activities of polysaccharides extracted from Viscum coloratum (Kom.) Nakai", 《CARBOHYDRATE POLYMERS》 *
梁琴: "油茶桑寄生多糖提取工艺优化及体外抗凝抗氧化活性研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 工程科技Ⅰ辑》 *
范延丽: "花桑寄生多糖分离、纯化及抗肿瘤活性的研究", 《中国优秀硕士学位论文全文数据库 医药卫生科技辑》 *

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN110437288B (zh) 一种海参岩藻多糖及其制备方法和应用
US4692435A (en) Mucopolysaccharide composition having a regulatory action on coagulation, medicament containing same and process of preparation
DD296937A5 (de) Neue sulfatisierte polysaccharide
CN101340921A (zh) 一种预防或治疗血栓性疾病的提取物
CN101580554B (zh) 金线莲多糖及其在制药中的应用和金线莲多糖的制备方法
CN105037577B (zh) 一种促凝血黑莓籽多糖及其提取分离方法、应用
AU2011303081B2 (en) High purity heparin and production method therefor
CN105030810B (zh) 一种甜叶悬钩子多糖用于抑制血液的凝固
CN103285031B (zh) 解聚海参糖胺聚糖在制备防治血栓栓塞疾病药物中的应用
JP4149545B2 (ja) 低分子量のフカン類とその医薬組成物
CN105641004A (zh) 一种由银杏叶提取物形成的中药组合物及其在制备舒血宁注射液中的应用
CN108530550A (zh) 一种抑制血液凝固的油茶桑寄生多糖及其提取方法
EP0475383B1 (en) Polysaccharide composition or polysaccharide having heparinoid activity, process for producing the same, and anticoagulant containing the same as active ingredient
EP4360638A1 (en) Application of sulfate gluco-galacto-oligosaccharide in preparation of anticoagulant and/or antithrombotic drug
CN100509856C (zh) 一种隐孔菌多糖及其制备与应用
CN106727951B (zh) 一种用于保护动静脉内瘘的药物及其制备方法
JP2838862B2 (ja) 血糖降下剤
CN1068790C (zh) 含有西洋参茎叶总皂甙的药物组合物
CN1961912B (zh) 一种具有镇痛止血作用的中药组合物
JP2838863B2 (ja) 血糖上昇抑制剤
CN105902643A (zh) 一种预防血栓形成、治疗血栓的药物及其制备方法
CN108948223A (zh) 桃金娘多糖p1及其分离方法和在制备降血脂药物中的应用
CN115990178B (zh) 一种化合物在制备抗凝药物中的用途
KR20010037499A (ko) 정향으로부터 분리한 항응고 활성제 및 그 정제방법
CN115594654B (zh) 7-去甲基银杏双黄酮和银杏酮酯的提取方法及其应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20180914