CN108495855A - 作为mnk抑制剂的稠合噻唑并嘧啶衍生物 - Google Patents

作为mnk抑制剂的稠合噻唑并嘧啶衍生物 Download PDF

Info

Publication number
CN108495855A
CN108495855A CN201680079581.XA CN201680079581A CN108495855A CN 108495855 A CN108495855 A CN 108495855A CN 201680079581 A CN201680079581 A CN 201680079581A CN 108495855 A CN108495855 A CN 108495855A
Authority
CN
China
Prior art keywords
compound
optionally
heterocyclylalkyl
alkyl
added
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201680079581.XA
Other languages
English (en)
Other versions
CN108495855B (zh
Inventor
乔恩·詹姆斯·温特-霍尔特
爱德华·贾尔斯·麦基弗
马丁·安布勒
史蒂芬·里维斯
乔安妮·奥萨波尼
凯利·韦伯-史密斯
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Life Arc Co
Original Assignee
Life Arc Co
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Life Arc Co filed Critical Life Arc Co
Publication of CN108495855A publication Critical patent/CN108495855A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108495855B publication Critical patent/CN108495855B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D513/00—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00
    • C07D513/02—Heterocyclic compounds containing in the condensed system at least one hetero ring having nitrogen and sulfur atoms as the only ring hetero atoms, not provided for in groups C07D463/00, C07D477/00 or C07D499/00 - C07D507/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D513/04—Ortho-condensed systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/41—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having five-membered rings with two or more ring hetero atoms, at least one of which being nitrogen, e.g. tetrazole
    • A61K31/425—Thiazoles
    • A61K31/429—Thiazoles condensed with heterocyclic ring systems
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/495—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having six-membered rings with two or more nitrogen atoms as the only ring heteroatoms, e.g. piperazine or tetrazines
    • A61K31/505—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim
    • A61K31/519—Pyrimidines; Hydrogenated pyrimidines, e.g. trimethoprim ortho- or peri-condensed with heterocyclic rings
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/04—Antineoplastic agents specific for metastasis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D519/00—Heterocyclic compounds containing more than one system of two or more relevant hetero rings condensed among themselves or condensed with a common carbocyclic ring system not provided for in groups C07D453/00 or C07D455/00

Abstract

本发明涉及由式I和II表示的化合物，或者其可药用的盐或酯，本发明的其他方面涉及所述化合物在治疗以下疾病中的药物组合物和治疗应用：不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答、不适宜的细胞炎症应答或神经变性病症，优选tau蛋白病，甚至更优选阿尔茨海默病。

Description

作为MNK抑制剂的稠合噻唑并嘧啶衍生物
技术领域
本发明涉及稠合噻唑并嘧啶化合物，其能够抑制一种或多种激酶，尤其是MAP激酶相互作用的丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶(MNK)。该化合物在多种病症的治疗中具有潜在的医疗应用，所述病症包括增生性病症和神经变性疾病，如阿尔茨海默病。
背景技术
本发明涉及抑制MAP激酶相互作用的丝氨酸/苏氨酸-蛋白激酶(MNK)的酶活性的化学化合物。MNK蛋白由两个基因MKNK1和MKNK2编码，这两个基因产生MNK1和MNK2。这两种蛋白都有由选择性剪接产生的两种亚型。较短的亚型被称为MNK1b/2b，其缺少导致低基础活性的MAP激酶结合结构域(Buxade等，Front Biosci 2008，5359-5373)。Mnk1a通过ERK和p38来激活，但不是JNK结合，而MNK2a似乎只被ERK激活。
MNK1和MNK 2的催化结构域非常相似。然而，这些结构域与其他激酶非常不同，因为这些结构域在ATP结合位点显示DFD基序而不是典型的DFG基序，这表明确认存在改变的活化环(Jauch等，EMBO J 2006，4020-4032)。MNK1/2普遍用磷酸化真核起始因子4E(eIF4E)、胞质磷脂酶A2(cPLA2)异源核RNA-结合蛋白A1(hnRNP A1)、多聚嘧啶串结合蛋白相关剪接因子(PSF)和Sprouty 2(hSPRY2)来表达(Buxade等，Front Biosci 2008，5359-5373)。
MNK通过eIF4E的磷酸化而与癌症相关联。eIF4E是在癌症中扩增并且单独地由MNK磷酸化的致癌基因(Konicek等，Cell Cycle 2008，2466-2471)。eIF4E过表达诱导动物模型中的肿瘤形成。在许多实体瘤和***转移中已经观察到eIF4E磷酸化的增加，该增加与预后不良有关。eIF4E是帽依赖性翻译中的限速因子，在该翻译过程中，eIF4F将核糖体直接导向游离mRNA的帽结构或作为eIF4F预起始复合物的一部分。几乎所有的蛋白质都需要eIF4E进行翻译。eIF4E的磷酸化导致细胞存活、血管生成和癌症转移中涉及的mRNA的优选翻译，这些mRNA例如为细胞周期蛋白D1、Myc、Mc1-1、Bc1-2和VEGF的mRNA。由于5′UTR是长而复杂的，因此，这些mRNA通常翻译效率较低。eIF4的磷酸化不影响总体翻译速率，但已经表明有助于多核糖体形成，这促进了更有效的翻译。
许多MNK1/MNK2抑制剂是本领域已知的。例如，US 8,754,079和US 8,853,193(均以Boehringer Ingelheim International GMBH的名义)公开了能够抑制MNK1和/或MNK2的噻吩并嘧啶化合物。同样地，WO 2014/135480(Bayer Pharma Aktiengesellschaft)公开了由吲唑基或2-氧代-2，3-二氢-1，3-苯并噻唑基基团取代的噻唑并嘧啶。WO 2014/118226(Bayer Pharma Aktiengesellschaft)公开了能够抑制MNK1和/或MNK2的取代的吡唑基并嘧啶基氨基-吲唑。
本发明旨在提供能够干扰MNK的活性及其途径的替代化合物。此类化合物在多种病症的治疗中具有潜在的医疗应用，这些病症包括增生性病症和神经变性疾病。
发明内容
本发明的第一个方面涉及一种式(I)的化合物，或其可药用的盐或酯，
其中：
R1选自：
-CO-NR12R13，其中R12和R13各自独立地选自H、烷基、环烷基和杂环烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R14基团取代，并且所述杂环烷基任选地被一个或多个R10基团取代；或R12和R13连同它们所连接的氮连接在一起，以形成任选地包含一个或多个其他杂原子并且任选地被一个或多个R10基团取代的杂环烷基；
-羟烷基；
-H；
NH2；
-NH-烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R14基团取代；
-NH-CO-杂环烷基；
-任选地被一个或多个R10基团取代的杂环烷基；和
-任选地被一个或多个R14基团取代的烷氧基；
R2、R3、R4和R5各自独立地选自H、烷基、羟烷基和(CH2)n-R12′；
或者R2和R3连接以形成环烷基或杂环烷基，该环烷基和杂环烷基各自可以任选地进一步被一个或多个R10基团取代；
或者R4和R5连接以形成环烷基或杂环烷基，该环烷基和杂环烷基各自可以任选地进一步被一个或多个R10基团取代；
或者R2和R3中的一者不存在，R4和R5中的一者不存在，并且虚线是双键；
Z1、Z2、Z3和Z4均为C；
R6、R7、R8和R9各自独立地选自H、CN、NO2、OH、烷氧基、NHCO-烷基、卤素和卤代烷基；或
Z1、Z3和Z4均为C，Z2为N，R7不存在，并且R6、R8和R9如上文所定义；或
Z2、Z3和Z4均为C，Z1为N，R6不存在，并且R7、R8和R9如上文所定义；
n为1至10的整数；
各R12′独立地选自NH2、NHR10、NR10R11和杂环烷基，其中所述杂环烷基任选地进一步被一个或多个R10基团取代；各R10和R11独立地为烷基；并且
各R14独立地选自OH、烷氧基、卤代烷基、NH2、NHR10、NR10R11、杂芳基和杂环烷基，其中所述杂环烷基任选地进一步被一个或多个R10基团取代。
本发明的第二个方面涉及一种式(II)的化合物，或其可药用的盐或酯，
其中：
Rb选自烷基、环烷基和杂环烷基，它们各自可以任选地被一个或多个选自卤素和烷氧基的基团取代；
R1a选自：
-CO-NR12aR13a，其中R12a和R13a各自独立地选自H、烷基、环烷基和单环或双环杂环烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个(CH2)mR14a基团取代，并且所述杂环烷基任选地被一个或多个选自R10和(CH2)mR14a的基团取代；或者R12a和R13a连同它们所连接的氮连接在一起形成任选地包含一个或多个其他杂原子并且任选地被一个或多个选自R10和(CH2)mR14a的基团取代的杂环烷基；
-羟烷基；
-COOH；以及
-H；
Z1、Z2、Z3和Z4均为C；
R6、R7、R8和R9各自独立地选自H、CN、NO2、OH、烷氧基、NHCO-烷基、卤素和卤代烷基；或
Z1、Z3和Z4均为C，Z2为N，R7不存在，并且R6、R8和R9如上文所定义；或
Z2、Z3和Z4均为C，Z1为N，R6不存在，并且R7、R8和R9如上文所定义；
m为1至10的整数；
各R10和R11独立地为烷基；
各R14a独立地选自CO2R10、COOH、OH、烷氧基、卤代烷基、NH2、NHR10、NR10R11、杂芳基和杂环烷基，其中所述杂环烷基任选地进一步被一个或多个R10基团取代。
有利地，本发明要求保护的化合物能够抑制MNK1和/或MNK2。此外，在一个实施方案中，与本领域已知的化合物相比，本发明要求保护的化合物有利地显示出与其他激酶相比，对MNK1和/或MNK2更高的选择性。
本发明的第三个方面涉及一种药物组合物，其包含至少一种如上所述的化合物，以及可药用的载体、稀释剂或赋形剂。
本发明的第四个方面涉及一种用于医疗的如上所述的化合物。
本发明的第五个方面涉及一种用于治疗增生性病症的如上所述的化合物。
本发明的第六个方面涉及一种用于治疗诸如阿尔茨海默病之类的神经变性疾病的如上所述的化合物。
本发明的第七个方面涉及如上所述的化合物在制备用于治疗或预防增生性病症或神经变性疾病的药物中的应用。
本发明的第八个方面涉及如上所述的化合物在制备用于预防或治疗病症的药物中的应用，所述病症由任意的异常的激酶活性引发、与任意的异常的激酶活性有关或伴随有任意的异常的激酶活性，其中所述激酶优选为MNK。
本发明的第九个方面涉及一种治疗处于病态的哺乳动物的方法，该病态通过抑制激酶(优选为MNK)而减轻，其中所述方法包括对哺乳动物施用治疗有效量的如上所述的化合物。
本发明的第十个方面涉及如上所述的化合物在检测方面的应用，所述检测用于鉴定其他能够抑制激酶(优选为MNK)的候选化合物。
发明详述
本发明涉及稠合噻唑并嘧啶化合物，其能够抑制一种或多种激酶，尤其是MNK。
“烷基”在本文中定义为直链或支链的烷基，优选C1-20烷基，更优选C1-12烷基，甚至更优选C1-10烷基或C1-6烷基，例如甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基，异丁基、叔丁基、戊基、己基。
“环烷基”在本文中定义为单环烷基环，优选C3-7-环烷基，更优选C3-6-环烷基。优选的例子包括环丙基、环丁基、环戊基、环己基或环庚基；或稠合的双环体系，如降莰烷。
“卤素”在本文中定义为氯、氟、溴或者碘。
如本文所用，术语“芳基”是指C6-12芳香族基团，其可以是苯并缩合的，例如苯基或者萘基。
“杂芳基”在本文中定义为包含一个或多个(可以相同或者不同)杂原子(例如氧、氮或硫)的单环或双环C2-12芳香环。合适的杂芳基的例子包括噻吩基、呋喃基、吡咯基、吡啶基、噁唑基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、异噁唑基、异噻唑基、噁二唑基、***基、噻二唑基等，以及它们的苯并衍生物，如苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、吲哚基、异吲哚基、吲唑基等；或者吡啶基、吡嗪基、嘧啶基、哒嗪基、三嗪基等，以及它们的苯并衍生物，如喹啉基、异喹啉基、噌啉基、酞嗪基、喹唑啉基、喹喔啉基、萘啶基等。
“杂环烷基”是指包含一个或多个选自氮、氧和硫中的杂原子的单环或双环脂肪族基团，它们任选地在环中夹杂有一个或多个-(CO)-基团和/或它们任选地在环中包含一个或多个双键。当杂原子是硫时，其可以是氧化或还原形式，即S、SO或SO2。优选的是，所述杂环烷基基团为C3-7-杂环烷基，更优选为C3-6-杂环烷基。或者，所述杂环烷基基团为C4-7-杂环烷基，更优选为C4-6-杂环烷基。优选的杂环烷基基团包括(但不限于)哌嗪基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、吡咯烷基、四氢呋喃基和四氢吡喃基。
式(I)的化合物
本发明的一个方面涉及如上所述的式(I)的化合物。
在一个方面中，本发明涉及一种式(I)的化合物，或其可药用的盐或酯，
其中：
R1选自：
-CO-NR12R13，其中R12和R13各自独立地选自H、烷基、环烷基和杂环烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R14基团取代，并且所述杂环烷基任选地被一个或多个R10基团取代；或R12和R13连同它们所连接的氮连接在一起，以形成任选地包含一个或多个其他杂原子并且任选地被一个或多个R10基团取代的杂环烷基；
-羟烷基；
-H；
-NH2；
-NH-烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R14基团取代；
-NH-CO-杂环烷基；
-任选地被一个或多个R10基团取代的杂环烷基；和
-任选地被一个或多个R14基团取代的烷氧基；
R2、R3、R4和R5各自独立地选自H、烷基、羟烷基和(CH2)n-R12；
或者R2和R3连接以形成环烷基或杂环烷基，该环烷基和杂环烷基各自可以任选地进一步被一个或多个R10基团取代；
或者R4和R5连接以形成环烷基或杂环烷基，该环烷基和杂环烷基各自可以任选地进一步被一个或多个R10基团取代；
或者R2和R3中的一者不存在，R4和R5中的一者不存在，并且虚线是双键；
Z1、Z2、Z3和Z4均为C；
R6、R7、R8和R9各自独立地选自H、CN、NO2、OH、烷氧基、NHCO-烷基、卤素和卤代烷基；或
Z1、Z3和Z4均为C，Z2为N，R7不存在，并且R6、R8和R9如上文所定义；或
Z2、Z3和Z4均为C，Z1为N，R6不存在，并且R7、R8和R9如上文所定义；
n为1至10的整数；
各R12独立地选自NH2、NHR10、NR10R11和杂环烷基，其中所述杂环烷基任选地进一步被一个或多个R10基团取代；各R10和R11独立地为烷基；并且
各R14独立地选自OH、烷氧基、卤代烷基、NH2、NHR10、NR10R11、杂芳基和杂环烷基，其中所述杂环烷基任选地进一步被一个或多个R10基团取代。
优选地，R1、R2、R3和R4均存在，即，在带有R1/R2的碳和带有R3/R4的碳之间存在单键。
在一个优选实施方案中，Z1、Z2、Z3和Z4均为C。
在一个优选实施方案中，R2、R3、R4和R5各自独立地选自H、烷基和(CH2)n-R12。
在一个优选实施方案中：
R2、R3、R4和R5均为H；或
R2和R3均为H，并且R4和R5均为Me；或
R2和R3均为H，并且R4和R5连接以形成环烷基或杂环烷基。
在一个优选实施方案中，R6、R7、R8和R9各自独立地选自H和卤素。
在一个优选实施方案中：
Z1、Z2、Z3和Z4均为C；
R6、R7、R8和R9均为H；或者
R6、R8和R9均为H，并且R7选自氟、氯、溴、甲基和CF3；并且
R2、R3、R4和R5各自独立地选自H、烷基和(CH2)n-R12。
在一个优选实施方案中：
R2、R3、R4和R5各自独立地选自H、羟烷基、烷基和(CH2)n-R12，其中n为1或2并且R12选自NH2、OH、NMe、NMe2、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基和4-甲基哌嗪-1-基。
在一个优选实施方案中，R1为CO-NR12R13。
在一个优选实施方案中，R1为CO-NR12R13，其中：
R12和R13中的一者为H，另一者选自：
四氢吡喃-4-基；
哌啶-4-基；
环丙基；
四氢呋喃-4-基；
N-甲基哌啶-4-基；
任选地被一个或多个选自NHMe、NH2、NMe2、哌啶-4-基、N-甲基哌啶-4-基、四氢呋喃基、OH、CF3、OMe和吡咯烷-1-基中的基团取代的烷基；或者
R12和R13连同它们所连接的氮连接在一起，以形成任选地被一个或多个R10基团取代的哌嗪基或吗啉基。
式(II)的化合物
本发明的一个方面涉及如上所述的式(II)的化合物。
在一个优选实施方案中，
Z1、Z2、Z3和Z4均为C；
R6、R7、R8和R9均为H；或
R6、R8和R9均为H，并且R7为卤素。
在一个优选实施方案中，Z1、Z2、Z3和Z4均为C，R6、R8和R9均为H，并且R7为氟。
在一个优选实施方案中，Rb为烷基，更优选为异丙基。
在另一实施方案中，Rb可以连接至NH连接基团的氮(NH基团的氢不存在)以形成杂环烷基，优选5元或6元杂环烷基，更优选6元杂环烷基。
在另一实施方案中，Rb可以连接至R6(其中Z1为碳)以形成杂环烷基，优选5元或6元杂环烷基。
在一个优选实施方案中，R1a为CO-NR12aR13a，其中：
R12a和R13a中的一者为H，另一者选自：
任选地被一个或多个选自NR10R11、COOH、OH和杂环烷基的基团取代的烷基；和
任选地被一个或多个选自R10和CO2R10的基团取代的单环或双环杂环烷基；或者
R12a和R13a连同它们所连接的氮连接在一起，以形成任选地被一个或多个选自R10和(CH2)mR14a的基团取代的哌啶基。
在一个优选实施方案中，R1a为任选地被一个或多个选自NR10R11和杂环烷基的基团取代的烷基，该杂环烷基选自哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基和四氢吡喃基，其中所述杂环烷基任选地被一个或多个R10基团取代。
在一个优选实施方案中，R1a为选自哌啶基、奎宁环基、氮杂环丁烷基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基和四氢吡喃基的杂环烷基，它们各自任选地被一个或多个R10基团取代。
在一个实施方案中，本发明的化合物选自以下这些化合物及其可药用的盐：
治疗应用
本发明的另一方面涉及用于医疗的如上所述的化合物。
本发明的另一个方面涉及用于治疗增生性病症的如上所述的化合物。
在一个优选的方面中，本发明的化合物用于治疗不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎症应答的疾病，特别是其中由MKNK-1途径介导的不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎症应答。
在一个优选实施方案中，不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎症应答的疾病为血液肿瘤、实体瘤和/或上述肿瘤的转移。
更优选地，所述化合物用于治疗选自以下的病症：白血病和骨髓增生异常综合征、恶性淋巴瘤、包括脑肿瘤和脑转移瘤的头颈部肿瘤、包括非小细胞肿瘤和小细胞肺肿瘤的胸部肿瘤、胃肠肿瘤、内分泌肿瘤、***和其他妇科肿瘤、包括肾、膀胱和***肿瘤的泌尿系肿瘤、皮肤肿瘤和肉瘤，和/或上述肿瘤的转移。
由于已知MNK是使eIF4E磷酸化的唯一激酶，所以预期通过抑制MNK来抑制eIF4E的磷酸化会负面地影响这些途径，由此干扰癌症和转移瘤的进展。令人惊讶的是，MNK1/2双敲除的小鼠没有表现出明显的表型，这对于eIF4E的核心作用而言是出乎意料的。尽管如此，由于组成型活性MNK1而不是激酶失活型MNK1的过表达已经显示出能够加速小鼠胚胎成纤维细胞中的肿瘤形成，因而认为丝氨酸209上的eIF4E的MNK磷酸化对于eIF4E的致癌活性是重要的(Chrestensen等，Genes Cells 2007，1133-1140)。在造血干细胞的Eμ-Myc转基因模型中，组成型活性MNK1而不是激酶失活型MNK1也显示出能够促进肿瘤生长。反之亦然，发现MNK(双敲除)的缺陷使由PTEN的损失诱发的淋巴瘤模型中的肿瘤的发展延迟(Ueda等，ProcNatl Acad Sci U S A 2010，13984-13990)。这与使用突变型eIF4E得到的结果一致。eIF4ES209D模拟磷酸化变体eIF4E，并且eIF4E S209A不能被磷酸化。用表达S209A突变体的细胞重建的小鼠在促进肿瘤发生方面是有缺陷的。相比之下，用表达模拟磷酸化的S209D突变体的细胞重建的小鼠显示出加速的肿瘤发作(Wendel等，Genes Dev 2007，3232-3237)。
在正常小鼠组织和异种移植肿瘤中，口服施用后30分钟内，使用抗真菌剂尾孢酰胺(cercosporamide)对MNK进行药理学抑制显示出对eIF4E磷酸化的有效阻断，从而减慢了HCT116异种移植模型中的肿瘤生长，并且抑制了B16黑素瘤肺转移的自然发展。总的来说，这些数据证实了这样的观点：阻断Mnk功能和eIF4E磷酸化可能是有吸引力的抗癌策略(Konicek等，Cancer Res 2011，1849-1857)。通过在白血病细胞模型中使用更具体的MNK抑制性化合物，已经使这一观点得到进一步支持，其中MNK抑制剂显示出具有抗增生性的效果(Teo等，Mol Pharmacol 2015，380-389，Teo等，Cancer Lett 2015，612-623)。
除了癌症之外，MNK是抗炎治疗的有希望的靶标。MNK显示出在转录后水平上参与调节TNF-产生。通过其mRNA的3′UTR中的富含AU的元件来控制TNF表达。抑制MNK或敲除MNK1显示出抑制Jurkat细胞中的TNF产生，而TNF的3′UTR的过表达增强了报道构建体的表达(Buxade等，Immunity 2005，177-189)。在用不同的TLR激动剂刺激的巨噬细胞系RAW264.7中，在MNK抑制剂存在下，LPS或CpG DNA减少了TNF的产生，这与TNF mRNA衰减的增加相关(Rowlett等，Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 2008，G452-459)。在从克罗恩病样回肠炎(Crohn’s disease-like ileitis)的自发小鼠模型中分离的BMDM中，用MNK抑制剂的处理抑制了TNF和IL-6的产生。对单核细胞系THP-1的研究表明，由志贺毒素诱导的IL-1β和II-8的释放能够被MNK抑制剂CGP57380阻断73-96％(Cherla等，J Leukoc Biol2006，397-407)。在中性粒细胞中，研究显示MNK在响应LPS和TNF刺激的中性粒细胞的激活中起作用。MNK抑制不仅影响中性粒细胞的细胞因子产生，还抑制TNF和LPS对中性粒细胞的抗凋亡作用。
另一项研究显示，在MNK抑制剂CGP57380的存在下，角质形成细胞中INF-产生减少，同时IL-1β和IL-6表达降低，由此表明MNK调节炎症性皮肤病中的促炎细胞因子的表达(Kjellerup等，Exp Dermatol 2008，498-504)。白细胞介素17是与TNF和IL-1β协同作用的促炎细胞因子。在存在MNK抑制剂的情况下，Th17条件下活化的鼠类CD4 T细胞中，检测到对eIF-4E磷酸化的阻断，从而导致IL-17产生减少而不影响IL-17mRNA(Noubade等，Blood2011，3290-3300)。RANTES是一种参与T细胞终末分化的趋化因子，据发现MNK通过其主要的转录调节因子RFLAT1间接调控RANTES。研究显示对MNK的抑制减少了RFLAT1产生(Nikolcheva等，J Clin Invest 2002，119-126)。
本发明的另一个方面涉及用于治疗神经变性病症，更优选tau蛋白病(tauopathy)的如上所述的化合物。
Tau蛋白病是一类与人脑中tau蛋白的病理聚集有关的神经变性疾病。这些疾病中最有名的是阿尔茨海默病(AD)，其中tau蛋白以神经原纤维缠结(NFTs)的形式沉积在神经元内。通过被称为tau的微管相关蛋白的超磷酸化来形成缠结，使其以不溶形式聚集。这些超磷酸化的tau蛋白的聚集体也被称为PHF或“成对螺旋丝”。
在本发明的一个优选实施方案中，tau蛋白病为阿尔茨海默病。
另一个方面涉及如上所述的化合物在制备用于治疗或预防神经变性病症的药物中的应用。优选地，所述神经变性病症为阿尔茨海默病。
另一个方面涉及如上所述的化合物在制备用于治疗或预防增生性病症，优选癌症或白血病的药物中的应用。
优选地，以足够抑制一种或多种激酶的量施用所述化合物，所述激酶优选为MNK1和/或MNK2。
在一个优选实施方案中，以抑制MNK1的量施用所述化合物。
在一个优选实施方案中，以抑制MNK2的量施用所述化合物。
又一个方面涉及本发明的化合物在制备用于预防或治疗病症的药物中的应用，所述病症由对生物靶标的任何异常活性引起、与对生物靶标的任何异常活性有关或伴随有对生物靶标的任何异常活性，其中所述靶标为激酶，更优选为MNK。
本发明的另一个方面涉及治疗蛋白激酶相关的疾病或病症的方法。如下文所详述，根据本发明这一方面的方法通过对需要治疗的受试者施用治疗有效量的如上文所述的本发明化合物(化合物本身，或者更加优选的是，作为药物组合物的一部分与(例如)可药用载体混合)来实现。
本发明的又一个方面涉及治疗处于病态的哺乳动物的方法，所述病态通过抑制蛋白激酶而减轻，其中所述方法包括对哺乳动物施用治疗有效量的本发明的化合物。
优选地，所述病态通过抑制蛋白激酶MNK而减轻。
优选地，所述哺乳动物为人类。
术语“方法”是指用于完成给定的任务的方式、手段、技术和过程，其包括(但不限于)那些已知的方式、手段、技术和过程，或者易于被化学、药学、生物学、生物化学和医学领域的技术人员由已知的方式、手段、技术和过程开发出的方式、手段、技术和过程。
本文所使用的术语“施用”是指通过以下方式使本发明的化合物与蛋白激酶联系到一起的方法，所述方式为：使所述化合物能够直接影响蛋白激酶的酶活性，即与蛋白激酶本身相互作用；或者间接影响蛋白激酶的酶活性，即与蛋白激酶的催化活性所依赖的另外一种分子相互作用。如本文所使用，可以在体外(即在试管中)完成施药，或者在体内(即在活体细胞或组织中)完成施药。
在本文中，术语“治疗”包括消除、基本抑制、减缓、或者逆转疾病或病症的发展，基本上改善疾病或病症的临床症状，或者基本上预防疾病或病症的临床症状的出现。
在本文中，术语“预防”是指起初防止生物体产生病症或疾病的方法。
术语“治疗有效量”是指所施用的化合物的量在一定程度上减轻所治疗的疾病或病症的一种或多种症状。
对在本发明中所使用的任何化合物而言，治疗有效量在本文中还指有效治疗剂量，其可以通过细胞培养试验来初步估计。例如，可以对动物模型施用一定剂量以达到循环浓度范围，其包括通过细胞培养而确定的IC50或IC100。这些信息可以用来更加准确地确定用于人类的有用剂量。初始剂量还可以通过体内数据来估计。利用这些初步的指导，本领域的普通技术人员就能够确定用于人类的有效剂量。
此外，通过在细胞培养物或者实验动物中所进行的标准药学技术(例如通过确定LD50和ED50)可以确定本文所描述的化合物的毒性和疗效。毒性和疗效之间的剂量比为治疗指数，并且可以表示为LD50与ED50之间的比值。表现出高治疗指数的化合物是优选的。从这些细胞培养试验和动物研究中所获得的数据可以用于确定对于人类中使用不产生毒性的剂量范围。所述化合物的剂量优选在只有少量毒性或者没有毒性的循环浓度(包括ED50)的范围之内。剂量可以根据所使用的剂型和所使用的给药途经而在该范围内变化。准确的剂型、给药途经和剂量可以由各位医生根据患者的情况来选择(见(例如)Eingl et al，1975，In：The Pharmacological Basis of Therapeutics，chapter1，page1(治疗学的药理基础(1975)，第一章，第一页))。
可以单独调整剂量和间隔，从而提供足够保持疗效的活性化合物的血浆水平。用于经口施用的普通患者剂量为大约50-2000mg/kg/天，通常是大约100-1000mg/kg/天，优选为大约150-700mg/kg/天，最优选为大约250-500mg/kg/天。优选的是，通过每天施用多次剂量来达到有效治疗的血清水平。在局部施用或者选择性吸收的情况中，药物的有效局部浓度可能与血浆浓度无关。本领域的技术人员无需进行过度的试验就能够优化治疗有效的局部剂量。
如本文所使用，“激酶相关的疾病或病症”是指，本文所定义的以不适宜的激酶活性或者激酶的活性过度为特征的疾病或病症。不适宜的活性指：(i)在正常情况下不表达所述激酶的细胞中表达了该激酶；(ii)激酶表达的增加导致了不期望的细胞增殖、分化和/或生长；或者(iii)激酶表达的降低导致了不期望的细胞增殖、分化和/或生长的减少。激酶的活性过度指，编码特定激酶的基因的扩增，或者激酶活性水平的产生，它们与细胞增殖、分化和/生长的紊乱有关(即，随着激酶水平的增加，一种或多种细胞紊乱症状的严重性增加)。活性过度也可以是由于突变而导致的非配体依赖性或者组成性激活的结果，所述突变例如为负责结合配体的激酶片段的缺失。
本文所描述的化合物能够有效预防的优选疾病或病症包括诸如阿尔茨海默病之类的神经变性病症和诸如癌症之类的增生性病症。
因此，本发明还提供了本文所定义的化合物在制备用于治疗其中期望抑制MNK的疾病的药物中的应用。如上所述，这样的疾病包括增生性病症和神经变性病症(如阿尔茨海默病)。
药物组合物
关于本发明的应用，可以将本文所描述的化合物，或者其可药用的盐、酯或其他有生理功能的衍生物制备成药物制剂，其包含所述化合物，或者其可药用的盐、酯或其他生理功能的衍生物以及一种或多种可药用载体和任选的其他治疗和/或预防成分。载体必须能够与制剂的其他成分相容，并且对其接受者无害。该药物组合物可以在人类医学和兽医学中用于人类和动物使用。
本文所描述的用于各种不同形式的药物组合物的合适的赋形剂的例子可以参考Handbook of Pharmaceutical Excipients，2nd Edition，(1994)，Edited by A Wade andPJ Weller(由A Wade和PJ Weller编辑的“药物赋形剂手册”，第二版(1994))。
能够用于治疗应用的可接受载体或稀释剂在制药领域中是公知的，并且在(例如)Remington’s Pharmaceutical Sciences，Mack Publishing Co.(A.R.Gennaro edit.1985(雷明顿药物科学，Mack Publishing公司出版，A.R.Gennaro编辑，1985)中进行了描述。
合适的载体的例子包括乳糖、淀粉、葡萄糖、甲基纤维素、硬脂酸镁、甘露醇、山梨醇等。合适的稀释剂的例子包括乙醇、甘油和水。
可以根据所需的给药途经和标准的制药操作来选择药用载体、赋形剂或稀释剂。除载体、赋形剂或稀释剂以外，所述药物组合物可以包含任何合适的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂、增溶剂、缓冲液、增香剂、表面活性剂、增稠剂、防腐剂(包括抗氧化剂)等，以及为了使该制剂与期望接受者的血液等渗而包含的物质。
合适的粘合剂的例子包括淀粉、明胶、天然糖类(例如葡萄糖、无水乳糖、自由流动乳糖、β-乳糖、玉米增味剂)、天然和合成树胶(例如***树胶、黄蓍胶或海藻酸钠)、羧甲基纤维素和聚乙二醇。
合适的润滑剂的例子包括油酸钠、硬脂酸钠、硬脂酸镁、苯甲酸钠、乙酸钠、氯化钠等。
可以将防腐剂、稳定剂、染料、甚至增香剂提供于药物组合物中。防腐剂的例子包括苯甲酸钠、山梨酸和对羟基苯甲酸的酯。还可以使用抗氧化剂和悬浮剂。
药物制剂包括适合经口施用、局部施用(包括经皮肤、口腔和舌下施用)、经直肠或胃肠外施用(包括经皮下、皮内、肌内和静脉施用)、经鼻腔和肺部施用(例如通过吸入施用)的那些。在适当情况下，所述制剂可方便地以离散剂量单位的形式提供，并且可由药学领域中已知的任意技术制备。所有的方法包括将活性化合物与液体载体和/或细碎的固体载体结合的步骤，然后如有必要，将产品成形成为所需制剂。
适合于经口施用的药物制剂(其中载体为固体)最优选以单位剂量制剂的形式(如含预定量活性剂的丸药、胶囊或片剂)提供。片剂可通过任选地与一种或多种附加成分一起压缩或模压制得。压缩片可通过如下方式制备：在合适的机器中将自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性剂可任选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、润滑剂、表面活性剂或分散剂混合后压缩。模压片可通过将活性剂与惰性液体稀释剂模压得到。可以任选地将片剂包衣，并且如果没有包衣的话，可任选地将其刻痕。胶囊可通过下列方法制备：将活性剂单独或与一种或多种附加成分的混合物填入胶囊壳中，然后以通常方式将其密封。扁囊剂类似于胶囊，其中活性剂以及任意附加成分密封在米纸套中。活性剂也可配制为分散性颗粒，其(例如)可在施用前悬浮在水中，或洒在食物中。胶囊可被封装在(例如)小袋中。其中载体为液体的适合于经口施用的制剂可以在水或非水液体中的溶液或悬浮液的形式，或以水包油型乳液的形式提供。
用于经口施用的制剂包括控释剂型(例如片剂)，其中活性化合物被配制在适当的控释基质中，或包被有合适的控释膜。这种制剂可特别便于预防性应用。
适合经直肠施用的药物制剂(其中载体为固体)最优选以单位剂量栓剂的形式提供。合适的载体包括本领域常用的可可脂和其他材料。栓剂可以方便地通过混合活性化合物与软化或熔化的载体，然后冷却并且在模具中成型来制备。适合经胃肠外施用的药物制剂包括活性化合物在水性或油质载体中的无菌溶液或悬浮液。
注射制剂可适合于弹丸注射或连续输注。该类制剂方便地提供于单位剂量或多剂量容器中，该容器在导入制剂后直到使用时均被密封。或者，活性化合物可为粉末形式，其在使用前用合适的载体(如无菌的、无热原水)重构。
活性化合物也可制备为长效储存型制剂(long-acting depot preparation)，其可通过肌内注射或植入(例如经皮下或肌肉植入)来施用。长效制剂可包括(例如)合适的聚合物或疏水性材料、或离子交换树脂。这种长效制剂特别便于预防性使用。
适合于通过颊间隙经肺部施用的制剂被提供为使得包含活性化合物的颗粒(直径为0.5微米至7微米)被递送到接受者的支气管树中。
所述制剂的一种可能是精细磨碎的粉末形式，其可便于提供在用在吸入装置中的可穿孔胶囊(例如，明胶的胶囊)内，或者以自推进(self-propelling)制剂的形式提供，其中所述制剂包含活性化合物、合适的液态或气态推进剂和可选的其他成分(如表面活性剂和/或固体稀释剂)。适当的液体推进剂包括丙烷和含氯氟烃，并且合适的气体推进剂包括二氧化碳。也可采用这样的自推进制剂，其中活性化合物以液滴的形式悬浮在溶液或悬浮液中。
这种自推进制剂类似于本领域已知的那些，并且可通过既定程序制备。合适的是，它们提供于容器中，该容器设置有具有所需的喷雾特性的可手动操作或自动运转的阀门；有利的是，所述阀门为计量型，从而在每次操作后输送固定的体积，例如25微升至100微升。
另一种可能是，活性化合物可为用在喷雾器或雾化器中的溶液或悬浮液形式，由此采用加速气流或超声波搅拌以产生用于吸入的细液滴雾。
适合经鼻腔施用的制剂包括制备大体上类似于上述肺部施用的制剂。当分配所述制剂时，其粒径应当有利地在10微米到200微米的范围内，以使其能够在鼻腔中停留；这可通过适当地采用合适粒径的粉末或合适的阀门选择来实现。其他合适的制剂包括：粒径在20微米至500微米范围内的粗颗粒，以从靠近鼻子的容器通过鼻孔快速吸入施用；以及滴鼻剂，其包含0.2％w/v至5％w/v的在水性或油性溶液或悬浮液中的活性剂。
可药用的载体是本领域技术人员公知的，包括(但不限于)：0.1M、优选0.05M的磷酸盐缓冲液或0.8％生理盐水。此外，可药用的载体可以为水性或非水性溶液、悬浮液和乳液。非水性溶剂的例子为丙二醇、聚乙二醇、植物油(如橄榄油)以及可注射有机酯(如油酸乙酯)。水性载体包括水、醇/水溶液、乳液或悬浮液，包括盐水和缓冲介质。肠胃外载体包括氯化钠溶液、林格氏葡萄糖、葡萄糖和氯化钠、乳酸钠林格氏注射液或固定油。也可存在防腐剂和其它添加剂，例如抗菌剂、抗氧化剂、螯合剂、惰性气体等。
适合局部施用的制剂可以(例如)凝胶、乳膏或软膏的形式提供。上述制剂可施加于(例如)伤口或溃疡，其直接涂抹在伤口或溃疡的表面或承载在合适的支持物(如绷带、纱布、网等)上然后施加覆盖在待处理的区域。
也可提供液体或粉末制剂，其可被直接喷洒或撒到待处理的位置，如伤口或溃疡。或者，可将制剂喷洒或撒在诸如绷带、纱布、网等载体上，然后施加到待处理的位置。
根据本发明的另一方面，提供了制备上述的药物组合物或兽药组合物的方法，所述方法包括将活性化合物与载体结合，例如通过混合来结合。
一般情况下，通过下列方法制备上述制剂：将活性剂与液体载体和/或细碎的固体载体均一且密切的结合，然后如有必要将产品成形。本发明扩展到制备药物组合物的方法，其包括将通式(I)或(II)的化合物与药物可接受或兽药可接受的载体或赋形剂结合。
盐/酯
本发明的化合物可以以盐或酯的形式存在，特别是以可药用或可兽医用的盐或酯的形式存在。
本发明的化合物的可药用盐包括其合适的酸加成盐或碱式盐。对合适的药用盐的综述可以参考Berge et al，J Pharm Sci，66，1-19(1977)。盐是用(例如)下列酸形成的：强无机酸，如矿物酸(mineral acid)：例如氢卤酸(例如氢氯酸、氢溴酸和氢碘酸)、硫酸、磷酸、硫酸盐、硫酸氢盐、半硫酸盐、硫氰酸盐、过硫酸盐和磺酸；强有机羧酸：例如具有1至4个碳原子的未取代或取代(例如被卤素取代)的烷烃羧酸(例如乙酸)；饱和或不饱和二羧酸：例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或四邻苯二甲酸；羟基羧酸：例如抗坏血酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、或柠檬酸；氨基酸：例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有机磺酸：例如未取代或取代(例如被卤素取代)(C1-C4)-烷基-磺酸、或芳基-磺酸(例如甲磺酸或对甲苯磺酸)。非可药用或者非兽医用的盐作为中间体仍然可以是有价值的。
优选的盐包括(例如)乙酸盐、三氟乙酸盐、乳酸盐、葡糖酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、马来酸盐、苹果酸盐、泛酸盐、己二酸盐、藻酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、丁酸盐、二葡糖酸盐、环戊酸盐、葡庚糖酸盐、甘油磷酸盐、草酸盐、庚酸盐、己酸盐、富马酸盐、烟酸盐、扑酸盐(palmoate)、果胶酸盐、3-苯基丙酸盐、苦味酸盐、新戊酸盐、丙酸盐、酒石酸盐、乳糖醛酸盐、特戊酸盐(pivolate)、樟脑酸盐、十一酸盐和琥珀酸盐；有机磺酸盐，例如甲磺酸盐、乙磺酸盐、2-羟乙磺酸盐、樟脑磺酸盐、2-萘磺酸盐、苯磺酸盐、对氯苯磺酸盐、和对甲苯磺酸盐；以及无机酸盐，例如氢氯酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、半硫酸盐、硫氰酸盐、过硫酸盐、磷酸盐和磺酸盐。
基于酯化的官能团，通过使用有机酸或者醇/氢氧化物形成酯。有机酸包括羧酸，例如具有1至12个碳原子的未取代或取代的(例如被卤素取代)烷烃羧酸(例如乙酸)；饱和或不饱和的二羧酸，例如草酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、邻苯二甲酸或四邻苯二甲酸；羟基羧酸，例如抗坏血酸、乙醇酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、或柠檬酸；氨基酸、例如天冬氨酸或谷氨酸；苯甲酸；或者有机磺酸，例如未取代或取代的(例如被卤素取代)(C1-C4)-烷基-磺酸或芳基-磺酸，例如甲磺酸、或对甲苯磺酸。合适的氢氧化物包括无机氢氧化物，例如氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化钙、氢氧化铝。醇包括具有1至12个碳原子的未取代或取代(例如被卤素取代)的烷烃醇。
对映体/互变体
在本发明前面所讨论的所有方面中，本发明(适当地)包括本发明的化合物的所有对映异构体、非对映异构体和互变异构体。本领域的技术人员将会识别具有旋光性(一个或多个手性碳原子)或互变性的化合物。相应的对映体和/互变异构体可以通过本领域已知的方法加以分离/制备。
对映体的特征在于其手性中心的绝对构型，并且按照Cahn、lngold和Prelog的R-和S-排序规则来表示。该惯例在本领域中是公知的(例如，见’Advanced OrganicChemistry’，3rd edition，ed.March，J.，John Wiley and Sons，New York，1985)。
本发明的包含手性中心的化合物可以用作外消旋混合物、富含对映异构体的混合物而使用，或者可以利用公知的技术将外消旋混合物分离，从而可以单独使用单独的对映异构体。
立体异构体和几何异构体
本发明的某些化合物可以立体异构体和/或几何异构体的形式存在，例如，它们可能具有一个或更多个不对称中心和/或几何中心，因此可以两个或更多个立体异构和/或几何异构的形式存在。本发明涵盖那些化合物的所有单独的立体异构体和几何异构体，以及它们的混合物的应用。权利要求中所使用的术语包括这些形式，条件是所述形式保持了合适的功能活性(虽然不必具有相同程度)。
本发明还包括化合物或其可药用盐的所有合适的同位素变型。本发明的化合物或其可药用盐的同位素变型被定义为这样的情况：至少一个原子被具有相同原子序数但原子量与通常在自然界中所发现的原子量不同的原子替代。能够引入药剂及其可药用盐的同位素的例子包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟和氯的同位素，例如它们分别为2H、3H、13C、14C、15N、17O、18O、31P、32P、35S、18F和36Cl。药剂及其可药用盐的某些同位素变型在药物和/或基底组织分布研究中是有用的，例如那些引入放射性同位素(例如3H或14C)的同位素变型。对于容易制备和检测而言，氚(即3H)和碳-14(即14C)同位素是特别优选的。此外，利用同位素(例如氘，即2H)进行置换可以提供一定程度的治疗优势，这归因于其具有更大的代谢稳定性，例如体内半衰期的延长或剂量需求的减少，因此其在某些情况下可能是优选的。例如，本发明包括所有氢原子都被氘原子取代的由通式(I)或(II)表示的化合物。通常，可以通过常规方法采用合适药剂的适当同位素变型来制备本发明药剂和其可药用盐的同位素变型。
前体药物
本发明还包括前体药物形式的本发明化合物，即，在体内释放的由通式(I)/(II)表示的活性母体药物的共价键结合的化合物。这种前体药物通常是其中一个或多个合适的基团被修饰，使得该修饰在施用给人或哺乳动物受试者之后能够被逆转的本发明的化合物。逆转通常是通过天然存在于受试者体内的酶进行的，但也有这样的可能：与这种前体药物一起施用第二试剂，以在体内进行逆转。这种修饰的例子包括酯(例如任何上文所描述的那些酯)，其中，可以通过酯酶等进行逆转。其他这样的体系对本领域的技术人员来说是公知的。
溶剂化物
本发明还包括溶剂化物形式的本发明的化合物。权利要求中所使用的术语包括这些形式。
多晶型体
本发明还涉及多种结晶形式、多晶型形式和(无水)水合形式的本发明的化合物。制药领域中已经很好地建立起这样的方法：通过稍微改变用于合成制备所述化合物的纯化方法和/或溶剂的分离形式，可以分离处于任何所述形式的化合物。
施用方式
本发明的药物组合物可适合于经直肠施用、经鼻施用、经支气管施用、经局部施用(包括经口腔和舌下施用)、经***或胃肠外施用(包括经皮下、肌内、静脉内、动脉内和皮内施用)、经腹腔或鞘内施用。优选的制剂为经口服施用的制剂。制剂可方便地以单位剂型(即包含单位剂量的离散部分的形式)提供，或者以多单位或亚单位的单位剂量提供。作为例子，制剂可为片剂和缓释胶囊的形式，并且可通过药学领域中公知的任意方法制备。
本发明的经口施用的制剂可以下列形式提供：含预定量活性剂的离散单位，如胶囊、药丸(gellule)、滴剂、扁囊剂、丸剂或片剂；粉末或颗粒；活性剂在水性液体或非水性液体中的溶液、乳液或悬浮液；或水包油型乳液或油包水型乳液；或丸药等。优选地，组合物每剂量包含1mg至250mg活性成分，更优选为10mg至100mg活性成分。
对于经口施用的组合物(例如，片剂或胶囊)，术语“可接受的载体”包括赋形剂，如常见赋形剂，例如粘合剂，例如糖浆、***胶、明胶、山梨醇、黄蓍胶、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮)、甲基纤维素、乙基纤维素、羧甲基纤维素钠、羟丙基甲基纤维素、蔗糖和淀粉；填料和载体，例如玉米淀粉、明胶、乳糖、蔗糖、微晶纤维素、高岭土、甘露醇、磷酸二钙、氯化钠和海藻酸；以及润滑剂如硬脂酸镁、硬脂酸钠和其他金属硬脂酸盐、甘油硬脂酸酯硬脂酸、硅酮油，滑石蜡、油和胶体二氧化硅。也可使用调味剂，如薄荷、冬青油、樱桃调味剂等。可能有利的是，添加着色剂使所述剂型易于识别。也可采用本领域已知方法对片剂包衣。
片剂可通过任选地与一种或多种附加成分压缩或模压制得。压缩片可通过如下方式制备：在合适的机器中将自由流动形式(如粉末或颗粒)的活性剂，可选地与粘合剂、润滑剂、惰性稀释剂、防腐剂、表面活性剂或分散剂混合后压缩。模压片可通过在合适的机器中将用惰性液体稀释剂润湿的粉末状化合物的混合物模压制得。片剂可任选地被包衣或刻痕，并且其可被配制为缓释或控释活性剂。
其他适合经口施用的制剂包括：锭剂，其包含在调味基质(通常是蔗糖和***胶或黄蓍胶)中的活性剂；软锭剂，其包含在惰性基质(如明胶和甘油，或蔗糖和***胶)中的活性剂；以及漱口剂，其包含在合适的液体载体中的活性剂。
其他的施用形式包括可经静脉内、动脉内、鞘内、皮下、皮内、腹腔或肌内注射的溶液或乳剂，其由无菌或可消毒溶液制备。注射形式通常每剂量含10mg至1000mg、优选为10mg至250mg的活性成分。
本发明的药物组合物也可为栓剂、***栓剂、混悬剂、乳剂、洗剂、软膏、乳膏、凝胶剂、喷雾剂、溶液或粉剂的形式。
透皮施用的替代方法是通过使用皮肤贴剂。例如，可将活性成分掺入到由聚乙二醇或液体石蜡的水性乳液组成的乳膏中。活性成分也可以1重量％和10重量％之间的浓度掺入由白蜡或白色软石蜡基质组成的软膏中，可根据需要加入稳定剂和防腐剂。
剂量
本领域普通技术人员可以很容易地确定本发明的组合物之一对受试者施用的合适的剂量，而无需过度的试验。通常情况下，医生可确定最适合个别患者的实际用量，而这取决于多种因素，包括采用的具体化合物的活性、所述化合物的代谢稳定性和作用长短、年龄、体重、一般健康状况、性别、饮食、施用方式和时间、***率，药物组合、特定病情的严重程度以及接受治疗的个体。本文所披露的剂量是平均情况的示例。当然可以有个别例子，其中应该使用更高或更低的剂量，这些剂量在本发明的范围中。
根据本发明，可以施用有效剂量的本发明的化合物，以抑制引起特定病情或疾病的激酶。当然，该剂量可进一步根据药剂的施用类型进行调整。例如，为了达到急性治疗的“有效剂量”，肠胃外施用由通式(I)或(II)表示的化合物是优选的。虽然肌内静推注射液是有用的，静脉输注在5％的葡萄糖水或生理盐水中的化合物，或具有合适的赋形剂的类似制剂是最有效的。通常情况下，肠胃外剂量为约0.01mg/kg至约100mg/kg；优选在0.1mg/kg至20mg/kg之间，其方式为维持药物在血浆中的能有效地抑制激酶的浓度。化合物以达到每日总剂量为约0.4mg/kg/天至约400mg/kg/天的水平每日施用1次至4次。本领域普通技术人员可通过比较药剂在血中的水平与具有治疗效果所需的浓度，容易地确定本发明化合物的治疗有效的精确剂量，以及所述化合物的最佳施应用径。
本发明的化合物也可以按照如下方式经口施用给患者，所述方式使得使药物浓度足以达到本文所述的一个或多个治疗指标。通常情况下，包含药剂的药物组合物的施用的口服剂量为约0.1mg/kg至约50mg/kg，施用方式需与患者的病情一致。优选的口服剂量为约0.5mg/kg至约20mg/kg。
当根据本发明施用本发明的化合物时，预期不会产生不可接受的毒性作用。可以利用生物检测技术之一检测可能具有良好生物利用度的本发明的化合物，从而确定需要达到给定药物效果的化合物的浓度。
组合
在特别优选的实施方案中，本发明的一种或多种化合物与一种或多种其他活性剂(例如已经市售可得的药物)进行组合而施用。在这种情况中，可以连续、同时或依序与一种或多种其他活性剂一起施用本发明的化合物。
当组合施用时，药物通常更有效。特别是，为了避免主要毒性、作用机制和耐药机制的重叠，组合治疗是有利的。此外，还期望以其最小的剂量时间间隔，在药物的最大耐受剂量下施用最多的药物。与化疗药物组合的主要优点是，通过生物化学相互作用，其可以促进加合效应或者可能的协同效应，并且还可以降低抗药性的出现。
通过研究所测化合物与已知或怀疑对治疗特定的疾病起重要作用的药剂的抑制活性，可以指示有利的组合。该方法还可以用于确定施用药剂的顺序，即之前、同时、或者之后施用。该时序安排可以是本文所描述的所有活性剂的特征。
在一个优选实施方案中，其他活性剂选自抗糖尿病剂、降脂剂、心血管剂、抗高血压剂、利尿剂、血小板聚集抑制剂、抗肿瘤剂和抗肥胖剂。
在一个优选实施方案中，其他活性剂选自组胺拮抗剂、缓激肽拮抗剂、血清素拮抗剂、白三烯、抗哮喘剂、NSAID、退热剂、皮质类固醇、抗菌剂、止痛剂、促尿酸***剂、化疗剂、抗痛风剂、支气管扩张剂、环加氧酶-2抑制剂、类固醇、5-脂肪氧合酶抑制剂、免疫抑制剂、白三烯拮抗剂、细胞抑制剂、抗肿瘤剂、Tor抑制剂、酪氨酸激酶抑制剂、针对细胞因子和细胞因子受体的可溶部分(片段)的抗体或其片段。
检测
本发明的又一个方面涉及上文所描述的化合物在检测方面的应用，所述检测用于鉴定能够抑制一种或多种激酶、更优选为MNK的其它候选化合物。
优选的是，所述检测为竞争性结合试验。
更优选的是，所述竞争性结合试验包括，使本发明的化合物与激酶(优选为MNK)和候选化合物接触，并且检测本发明的化合物与激酶之间的相互作用的任何改变。
优选的是，候选化合物是通过对本发明的化合物进行常规SAR修饰而产生的。
如本文所使用，术语“常规SAR修饰”是指本领域中公知的通过化学衍生化来改变给定化合物的标准方法。
因此，在一个方面，鉴定出的化合物可以作为开发其他化合物的模型(例如模板)。在这种测试中所使用的化合物可以游离在溶液中、附着于固体支持物上，负载于细胞表面，或者位于细胞内。可以测量化合物与待测试剂之间的活性的消除，或者结合复合体的形成。
本发明的检测可以是筛选，由此能够测试大量的药剂。在一方面中，本发明的检测方法为高通量筛选。
本发明还涵盖竞争性药物筛选试验的应用，其中，能够特异性结合某种化合物的中和抗体与待测化合物竞争结合该化合物。
另一种筛选技术提供了对底物具有合适的结合亲和性的试剂的高通量筛选(HTS)，其基于在WO 84/03564中进行详细描述的方法。
所希望的是，本发明的检测方法适于对待测化合物所进行的小规模和大规模筛选，以及定量检测。
优选的是，竞争性结合试验包括，在存在激酶的已知底物的情况下，使本发明的化合物与所述激酶接触，并且检测所述激酶与所述已知底物之间的相互作用的任何改变。
本发明的又一个方面在于，提供了一种检测配体与激酶的结合情况的方法，所述方法包括以下步骤：
(i)在存在所述激酶的已知底物的情况下，使配体与激酶接触；
(ii)检测所述激酶与所述已知底物之间的相互作用的任何改变；
并且其中，所述配体是本发明的化合物。
本发明的一个方面涉及一种包括以下步骤的方法：
(a)进行上文所描述的检测方法；
(b)鉴定一种或多种能够结合到配体结合结构域的配体；以及
(c)制备一定量的所述的一种或多种配体。
本发明的另一个方面在于，提供了包括以下步骤的方法：
(a)进行上文所描述的检测方法；
(b)鉴定一种或多种能够结合到配体结合结构域的配体；以及
(c)制备包含所述一种或多种配体的药物组合物。
本发明的另一个方面在于提供了包括以下步骤的方法：
(a)进行上文所描述的检测方法；
(b)鉴定一种或多种能够结合到配体结合结构域的配体；
(c)修饰所述一种或多种能够结合到配体结合结构域的配体；
(d)进行上文所描述的检测方法；
(e)可选地制备包含所述一种或多种配体的药物组合物。
本发明还涉及通过上文所描述的方法而鉴定的配体。
本发明的另一个方面涉及包含通过上文所描述的方法而鉴定的配体的药物组合物。
本发明的另一个方面涉及通过上文所描述的方法而鉴定的配体在制备用于治疗一种或多种如上所述的病症的药物细合物中的应用。
上述方法可以用于筛选用作一种或多种激酶的抑制剂的配体。
本发明的化合物无论作为实验室工具还是作为治疗剂都是有效的。在实验室中，本发明的某些化合物在以下方面是有效的：确定已知的或新发现的激酶在疾病状态的确立或者发展过程中是否具有关键或至少是重要的生化功能，该过程通常被称为“靶标确认”
通过以下非限制性的实施例来进一步描述本发明。
实施例
化合物合成的总体程序
色谱
利用Agilent公司制造的仪器进行准备的高压液相色谱。该仪器被构造如下：利用多波长紫外线检测器(G1365B，由Agilent公司制造)和串联的MM-ES+APCI质谱仪(G-1956A，由Agilent公司制造)监测色谱，并且如果达到合适的标准，样品则被自动馏分收集器(G1364B，由Agilent公司制造)收集。收集可以通过UV或者质谱仪的任意组合而启动，或者可以根据时间而启动。分离过程的典型条件如下：层析柱为Xbridge C-18(19x100mm)；以40ml/min的流速进行梯度运行7分钟(起始梯度：10％的甲醇和90％的水，终止梯度：100％的甲醇和0％的水；作为缓冲液：将0.1％的甲酸、0.1％的氢氧化铵加入水中，或者将0.1％的三氟乙酸加入水中)。本领域的技术人员将会理解，可能需要或者有利的是调整各特定化合物的条件，例如，在开始或者结束时改变溶剂组成，调整溶剂或者缓冲液，改变运行时间，改变流速和/或层析柱。急骤层析是指硅胶层析，并且其利用SP4或者lsolara 4 MPLC***(由Biotage公司制造)进行；预包装硅胶柱(由Biotage公司提供)；或者利用常规的玻璃柱层析进行。
分析方法
除非另有说明，在大约室温下，利用ECX400光谱仪(由JEOL公司制造)，在指示溶剂中进行1H核磁共振(NMR)光谱。在所有情况中，NMR数据均与已提出的结构一致。以百万分之一份(parts-per-million)为单位给出特征化学位移(δ)，并且用常规缩写来命名主峰：例如，s：单峰；d：双峰；t：三峰；q：四峰；dd：双峰的双峰；br：宽峰。
通常使用具有C-18Xbridge柱(3.5μm，4.6×30mm，起始梯度：10％的有机相和90％的水，终止梯度：有机和0％的水；作为缓冲液：将0.1％的氢氧化铵加入水中，或者将0.1％的三氟乙酸加入水中)的Agilent HPLC仪器进行分析型LCMS。有机溶剂为乙腈或甲醇。使用3mL/min的流速，在254nm和210nm处进行UV检测。
利用MM-ES+APCI质谱仪(G-1956A，由Agilent公司生产)记录质谱。所使用的薄层色谱(TLC)是指利用硅胶MK6F 60A板的硅胶TLC，Rf为化合物迁移的距离除以溶剂在TLC板上迁移的距离。
化合物的制备
当未对起始物的制备进行说明时，这些起始物则是市售可得的、在文献中已知的、或者是本领域的技术人员通过标准方法容易获得的。当指出采用与前面的实施例或中间体类似的方法制备化合物时，本领域的技术人员将会理解，对各个特定的反应，可以调整反应时间、试剂的当量数、溶剂、浓度和温度，并且可能需要或者有利的是采用不同的系列分离净化试验(work-up)或者纯化技术。
当利用微波辐射进行反应时，所使用的微波为Biotage公司提供的Initiator 60。为了保持恒定的温度，在反应过程中改变所提供的实际功率(actual power)。
使用由ThalesNano制造的连续流动氢化反应器(Continuous-flowHydrogenation Reactor)进行一些氢化反应。催化剂由ThalesNano以“CatCarts”催化柱供应。在实验部分对压力、流速、温度和催化柱进行说明。按照制造商的操作程序使用设备。本领域技术人员将会理解，可能需要或者有利的是对反应混合物进行重复循环，并且在一些情况下，在循环之间更换催化柱以提高反应产率。
缩写
以下示出了一些常用缩写的列表-其中所使用的其他未列出的缩写是本领域技术人员应当理解的。
DCM＝二氯甲烷
DMF＝N，N-二甲基甲酰胺
THF＝四氢呋喃
MeOH＝甲醇
TFA＝三氟乙酸
Xantphos＝4，5-双(二苯基膦)-9，9-二甲基氧杂蒽
HATU＝N，N，N，N′-四甲基-O-(7-氮杂苯并三氮唑-1-基)脲鎓-六氟磷酸酯
EDCI＝1，3-丙烷二胺，N3-(乙基羰基亚氨基)-N1，N1-二甲基盐酸
DCC＝1，3-二环己基碳二亚胺
Pd2(dba)3＝三(二亚苄基丙酮)二钯(O)
TEA＝三乙胺
rm＝反应混合物
rt＝室温
AcOH＝乙酸
IPA＝异丙醇
DIPEA＝N，N-二异丙基乙胺
TBSMSCI＝叔丁基二甲基甲硅烷基氯
MeCN＝乙腈
NH3＝氨
EtOH-乙醇
EtOAc＝乙酸乙酯
LCMS＝高压液相色谱-质谱联用技术
UV＝紫外线
SCX＝强阳离子交换
TPAP＝四丙基过钌酸铵
DMSO＝二甲基亚砜
BINAP＝2，2′-双(二苯基膦)-1，1′-联萘
TPAP＝四丙基过钌酸铵
DIAD＝偶氮二甲酸二异丙酯
NMO＝N-甲基吗啉N-氧化物
中间体1
7-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯
向5-甲基硫烷基噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯(0.5g，1.9mmol)的DCM(20ml)溶液中加入m-CPBA(675mg，3.9mmol)并在室温下搅拌2小时。然后加入4-氟-2-异丙氧基苯胺(331mg，1.9mmol)的二恶烷(20ml)溶液并搅拌1.5小时。用DCM和水稀释混合物，将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(EtOAc/石油醚＝20-80％)纯化化合物，得到橙色固体(706mg，95％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.45(d，J＝5.95Hz，6H)，1.50(t，J＝6.90Hz，3H)，4.52-4.58(m，2H)，4.58-4.67(m，1H)，6.69-6.81(m，2H)，8.55(dd，J＝8.93，6.18Hz，1H)，8.68(s，1H)，8.69-8.73(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)377.1。
中间体2
7-甲基硫烷基噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸
向7-甲基硫烷基噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯(5g，19.6mmol)的THF(100ml)溶液中加入15％NaOH(水溶液)(40ml，98mmol)并搅拌2小时。用2M HCl(水溶液)酸化混合物，收集所得淡黄色固体并经真空过滤进行干燥，得到7-甲基硫烷基噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸(4.45g，100％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 2.70(s，3H)，8.94-9.10(m，1H)。
中间体3
4-[[(7-甲基硫烷基噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-羰基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
将亚硫酰氯(30ml)加入到中间体2(4.45g，19.6mmol)中并将混合物加热回流2.5小时，直至形成橙色溶液。将混合物冷却并浓缩，得到黄色固体，将该黄色固体溶于DCM(30ml)中并冷却至0℃。向混合物中加入三乙胺(8.48ml，58.8mmol)，然后滴加4-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.61g，21.6mmol)并继续搅拌过夜。用DCM和水稀释混合物，将有机相分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过急骤柱层析纯化(用10-50％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)得到桃色固体(5.49g，68％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.19-1.28(m，2H)，1.46(s，9H)，1.73-1.80(m，2H)，1.82-1.91(m，1H)，2.73(m，5H)，3.42(m，2H)，4.10-4.21(m，2H)，7.49(br.t，J＝6.4Hz，1H)，8.89(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+-BOC)324.0。
中间体4
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-甲基硫烷基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
在亚硫酰氯(20ml)中使中间体2(2g，8.81mmol)回流4小时，并将混合物减压浓缩。将残留物溶于DCM(50ml)中，冷却至0℃，加入三乙胺(3.67ml，26.3mmol)，然后加入N′，N′-二甲基丙烷-1，3-二胺(1.67ml，10.6mmol)，将所得混合物在室温下搅拌18小时。用DCM稀释该混合物并用水急冷。将各层分离，用DCM萃取水相，将合并的有机相洗涤(盐水)，干燥(MgSO4)并减压浓缩。通过急骤层析(用0-10％的(2M氨的甲醇溶液)/二氯甲烷进行梯度洗脱)纯化，得到淡黄色固体(1.75g，64％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.72(quin，J＝6.87Hz，2H)，2.22(s，6H)，2.37(t，J＝6.64Hz，2H)，2.71(s，3H)，3.34-3.41(m，2H)，9.01(s，1H)，9.53(t，J＝5.72Hz，1H)；LC-MS(ESD：(MH+)312。
中间体5
1-(4-硝基苯基)-3-[3-(三氟甲基)苯基]脲
向4-硝基苯胺(1g，7.25mmol)和三乙胺(3.14ml，21.7mmol)的THF(20ml)溶液中加入3-(三氟甲基)苯基异硫氰酸酯(1.5g，7.97mmol)并搅拌过夜。用EtOAc和水稀释混合物，将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用20-100％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化化合物，得到黄色固体(1.047g，45％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.25-7.36(m，2H)，7.49(m，2H)，7.54-7.60(m，1H)，7.65-7.71(m，1H)，7.98(s，1H)，8.13-8.21(m，1H)，9.10-9.30(m，1H)，9.51-9.67(m，1H)。
中间体6
1-(4-氨基苯基)-3-[3-(三氟甲基)苯基]脲
使用H-Cube流动反应器(催化柱：10％Pd/C；流速：1ml/min；温度：35℃；H2压力：全H2压力)将中间体5(100mg，0.31mmol)的MeOH(5ml)和EtOAc(5ml)溶液氢化。将最终溶液浓缩，得到白色固体1-(4-氨基苯基)-3-[3-(三氟甲基)苯基]脲(71mg，79％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 4.74(br.s，2H)，6.47(m，2H)，7.03(m，2H)，7.18-7.25(m，1H)，7.40-7.50(m，2H)，7.96(s，1H)，8.20(s，1H)，8.82(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)296.1。
中间体7
7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯
向7-甲基硫烷基噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯(8.25g，32mmol)的DCM(50ml)溶液中加入m-CPBA(11.05g，64mmol)，并将所得混合物搅拌2小时，然后加入5-氟吲哚啉(4.43g，32mmol)的1，4-二恶烷(20ml)溶液并继续搅拌过夜。形成了黄色沉淀，将其收集并通过真空过滤进行干燥，得到黄色固体7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯(8.8g，80％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.34(t，J＝7.3Hz，3H)，3.33(t，2H)，4.43(q，J＝6.9Hz，2H)，4.81(t，J＝7.8Hz，2H)，7.04-7.12(m，1H)，7.18-7.25(m，1H)，8.59-8.70(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)345.0。
中间体8
7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸
向中间体7(5.46g，16mmol)的THF(70ml)溶液中加入2M NaOH(水溶液)(24ml，48mmol)并将混合物搅拌2小时。用2M HCl(水溶液)将混合物酸化，此时形成黄色沉淀物。收集沉淀物并经真空过滤进行干燥，得到黄色固体(3.2g，82％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.20-3.28(m，2H)，4.82(t，J＝8.7Hz，2H)，7.02(td，J＝9.2，2.8Hz，1H)，7.16(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，8.52(s，1H)，8.56(dd，J＝9.2，5.0Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)273.0。
中间体9
N-(7-氯噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基)苯甲酰胺
向4，6-二氯嘧啶-5-胺(250mg，1.5mmol)的丙酮(15ml)溶液中加入异硫氰酸苄酯(300mg，1.8mmol)，并在60℃下将混合物加热4小时。将混合物冷却并浓缩大约一半，此时析出黄色固体。收集该固体并通过真空过滤进行十燥，得到黄色固体(248mg，56％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 7.54-7.63(m，2H)，7.67-7.75(m，1H)，8.12-8.23(m，2H)，8.90(s，1H)。
中间体10
N-[7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基]苯甲酰胺
将中间体9(100mg，0.34mmol)、5-氟吲哚啉(81mg，0.34mmol)、4M HCl的二恶烷(0.1ml)溶液和丙-2-醇(2ml)合并，密封在微波小瓶中并在微波照射下在140℃下加热20分钟。将混合物冷却并通过真空过滤来收集固体，得到黄色固体N-[7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基]苯甲酰胺(135mg，80％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.29(t，J＝8.70Hz，2H)，4.90(t，J＝8.47Hz，2H)，7.06(td，J＝9.04，2.98Hz，1H)，7.19(dd，J＝8.47，2.98Hz，1H)，7.55-7.62(m，2H)，7.66-7.74(m，1H)，8.10-8.17(m，2H)，8.52-8.59(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)392.0。
中间体11
2-溴-7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶
将亚硝酸叔丁酯(72mg，0.697mmol)加入到7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-胺(100mg，30.35mmol)和溴化铜(181mg，0.523mmol)的乙腈(4mL)溶液中，得到棕色悬浮液。在80℃下将混合物加热24小时，得到绿色沉淀物。通过真空过滤来收集沉淀物，用***(2次，每次5mL)洗涤并真空干燥，得到绿色固体(10mg，82％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.75(br.s，1H)，8.52(dd，J＝8.70，5.04Hz，1H)，7.17(dd，J＝9.16，2.75Hz，1H)，7.04(dd，J＝9.16，2.75Hz，1H)，4.68(s，2H)，3.24(t，J＝8.24Hz，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)350.9/352.9。
中间体12
7-氟吲哚啉
向7-氟吲哚(1g，7.4mmol)的DCM(20ml)溶液中加入TFA(5ml)并冷却至0℃。分批加入硼氢化钠(562mg，14.8mmol)并搅拌过夜。用饱和Na2CO3(水溶液)将混合物碱化。将有机层分离、干燥并浓缩，得到7-氟吲哚啉，其为棕色油状物(986mg，97％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 3.07(t，J＝8.50Hz，2H)，3.61(t，J＝8.50Hz，2H)，6.59-6.67(m，1H)，6.89(dd，J＝7.33，0.92Hz，2H)。
中间体13
7-(7-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯
在0℃下，向7-甲基硫烷基噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯(750mg，2.9mmol)的DCM(30ml)溶液中加入m-CPBA(1.38g，6.2mmol)并将混合物搅拌2小时。然后加入中间体12(443mg，3.2mmol)的二恶烷(20ml)溶液并继续搅拌过夜。用DCM和水稀释混合物，将有机层分离、十燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(EtOAc/石油醚＝2-20％)纯化化合物，得到黄色胶状物(260mg，25％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.46(t，J＝7.10Hz，3H)，3.26(t，J＝7.90Hz，2H)，4.51(q，J＝7.40Hz，2H)，4.77(t，J＝7.90Hz，2H)，6.97-7.11(m，3H)，8.67(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)345.0。
中间体14
7-(7-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸
向中间体13(260mg，0.76mmol)的THF(2ml)溶液中加入15％NaOH(水溶液)(2ml)并搅拌3小时。用2M HCl(水溶液)酸化混合物，收集所得沉淀物并经真空过滤进行干燥，得到7-(7-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸(210mg，88％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.25(t，J＝7.80Hz，2H)，4.67(t，J＝7.80Hz，2H)，7.03-7.28(m，3H)，8.67(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)317.0。
中间体15
7-(吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯
在0℃下，向搅拌着的7-(甲硫基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯(2.50g，9.80mmol)的DCM(20mL)溶液中加入m-CPBA(3.37g，19.6mmol)。在0℃下搅拌所得混合物并使其在2小时内升温至室温。加入吲哚啉(1.17g，9.80mmol)的二恶烷(5mL)溶液，并在室温下将溶液搅拌过夜。通过加入DCM和水将混合物急冷，分离有机层并用水(2次，每次10mL)洗涤。将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(EtOAc/石油醚＝10％)纯化粗固体，得到黄色固体(1.94g，61％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.63(m，2H)，7.32(d，J＝7.33Hz，1H)，7.24(t，J＝7.33Hz，1H)，7.07(d，J＝7.79Hz，1H)，4.78(m，2H)，4.44(d，J＝6.87Hz，2H)，3.30(t，J＝6.87Hz，2H)，1.34(t，J＝7.10Hz，3H)；LC-MS(ESI)：(MH+)327.0。
中间体16
7-(吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸
将中间体15(1.94g，5.95mmol)悬浮于THF(25mL)中，并在0℃下加入2M NaOH(水溶液)(12mL)。将混合物酸化至pH1，并通过真空过滤来收集黄色固体。用***(2次，每次10mL)洗涤固体并干燥，得到7-(吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸(1.70g，96％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.66(s，1H)，8.62(d，J＝7.80Hz，1H)，7.32(d，J＝7.33Hz，1H)，7.23(t，J＝8.70Hz，1H)，7.06(t，J＝7.30Hz，1H)，4.78(t，J＝8.20Hz，2H)，3.28(t，J＝8.70Hz，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+-COOH)，255.0。
中间体17
7-甲基硫烷基-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
向中间体2(1.38g，6.1mmol)中加入亚硫酰氯(12ml)，并将混合物加热回流4小时，直至形成橙色溶液。将混合物冷却并浓缩，得到黄色固体，将其溶于DCM(30ml)中。在0℃下加入三乙胺(2.5ml，18mmol)，然后滴加4-氨基四氢吡喃(920mg，9.1mmol)，并将混合物搅拌过夜。用DCM和水稀释混合物，将有机相分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用0-60％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化化合物，得到白色固体(1.28g，68％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.66-1.86(m，4H)，2.70(s，3H)，3.35-3.43(m，2H)，3.84-3.93(m，2H)，3.99-4.11(m，1H)，9.00(s，1H)，9.16(d，J＝8.24Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)311.0。
中间体18
7-氯-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
在0℃下，将硫酰氯(1.95ml，24mmol)的DCM(20ml)溶液缓慢加入到中间体17(1.49g，4.8mmol)的乙腈(40ml)悬浮液中，并将所得混合物搅拌1.5小时。用饱和NaHCO3(水溶液)将混合物碱化，将有机相分离、干燥并浓缩，得到灰白色固体(1.2g，83％)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.67-1.86(m，4H)，3.34-3.44(m，2H)，3.85-3.94(m，2H)，4.01-4.13(m，1H)，9.12(s，1H)，9.36(d，J＝8.20Hz，1H)。
中间体19
1-乙酰基-5-氟-吲哚啉-2-酮
将5-氟吲哚-2-酮(250mg，1.6mmol)加入到乙酸酐(1ml，8.3mmol)中并加热回流2小时。将混合物冷却，倒入冰水中，此时形成沉淀。将固体过滤，用水洗涤并通过真空过滤进行干燥，得到1-乙酰基-5-氟-吲哚啉-2-酮(279mg，87％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm2.54(s，3H)，3.84(s，2H)，7.09-7.18(m，1H)，7.20-7.30(m，1H)，8.08(dd，J＝8.93，4.81Hz，1H)。
中间体20
1-乙酰基-5-氟-3，3-二甲基-吲哚啉-2-酮
向中间体19(279mg，1.4mmol)的DMF(5ml)溶液中加入NaH在矿物油中的60％分散体(127mg，3.2mmol)并将混合物搅拌30分钟，然后加入甲基碘(0.23ml，3.6mmol)并继续搅拌过夜。将混合物浓缩并加入水，收集所得沉淀物并通过真空过滤进行干燥，得到深红色固体(271mg，85％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.38(s，6H)，2.56(s，3H)，7.12-7.19(m，1H)，7.41-7.46(m，1H)，8.09-8.15(m，1H)。
中间体21
5-氟-3，3-二甲基-吲哚啉-2-酮
向中间体20(270mg，1.2mmol)的丙-2-醇(5ml)溶液中加入水(1mL)和12M HCl(1ml)，并将混合物加热回流1.5小时。将混合物冷却，浓缩，加入水，并通过真空过滤来收集所得固体，得到黄色固体(200mg，91％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.24(s，6H)，6.81(dd，J＝8.70，4.58Hz，1H)，6.94-7.02(m，1H)，7.25(dd，J＝8.24，2.75Hz，1H)，10.35(br.s，1H)。
中间体22
5-氟-3，3-二甲基-吲哚啉
向中间体21(200mg，1.1mmol)的THF(5ml)溶液中滴加1.6M氢化铝锂的二***(1.34ml，1.34mmol)溶液，将混合物加热回流1小时。冷却混合物，小心地加入水(2ml)，并过滤固体。浓缩滤液，得到5-氟-3，3-二甲基-吲哚啉，其为深红色油状物(120mg，65％)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.21(s，6H)，3.17(d，J＝2.29Hz，2H)，5.35(br.s，1H)，6.43(dd，J＝8.24，4.58Hz，1H)，6.71(ddd，J＝9.62，8.70，2.75Hz，1H)，6.83-6.87(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)166.1。
中间体23
1′-乙酰基-5′-氟-螺[环丙烷-1，3′-吲哚啉]-2′-酮
向中间体19(250mg，1.3mmol)的DMF(5ml)溶液中加入NaH在矿物油中的60％分散体(110mg，2.8mmol)并搅拌30分钟。加入1，2-二溴乙烷(258mg，1.4mmol)并将混合物搅拌过夜。将EtOAc和水加入到混合物中，将有机层分离，用水(3次)和盐水洗涤。将有机相干燥，浓缩至二氧化硅上，并通过柱层析(用10-100％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化，得到灰白色固体(120mg，42％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.58-1.64(m，2H)1.85-1.91(m，2H)2.70(s，3H)6.56(dd，J＝7.79，2.75Hz，1H)6.96-7.01(m，1H)8.25-8.31(m，1H)。
中间体24
5′-氟螺[环丙烷-1，3′-吲哚啉]
以与中间体22类似的方式，由中间体23制备中间体24，得到1′-乙酰基-5′-氟-螺[环丙烷-1，3′-吲哚啉]-2′-酮；LC-MS(ESI)：(MH+)164.1。
中间体25
螺[吲哚啉-3，4′-四氢吡喃]
向苯肼(500mg，4.6mmol)的乙酸(15ml)溶液中加入四氢吡喃-4-甲醛(528mg，4.6mmol)并在80℃下加热3小时。冷却混合物，加入DCE(15ml)和三乙酰氧基硼氢化钠(1.28g，6.0mmol)并搅拌1小时。另外加入0.5当量的三乙酰氧基硼氢化钠并再搅拌1小时。将混合物浓缩，溶于EtOAc中，用2M Na2CO3(水溶液)洗涤，将有机相分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用5-15％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化化合物，得到黄色固体(151mg，17％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.64-1.71(m，2H)，2.00(ddd，J＝13.62，12.02，4.58Hz，2H)，3.55(s，2H)，3.57-3.62(m，2H)，3.94-4.02(m，2H)，6.67(dt，J＝7.80，0.90Hz，1H)，6.78(td，J＝7.30，0.90Hz，1H)，7.07(td，J＝7.80，1.20Hz，1H)，7.11(d，J＝7.33Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)190.1。
中间体26
O3-甲基吲哚-1，3-二甲酸O1-叔丁基酯(O1-tert-butyl O3-methyl indole-1，3-dicarboxylate)
向甲基-3-吲哚甲酸酯(2g，11.4mmol)的THF(40ml)溶液中加入氢化钠在矿物油中的60％分散体(594mg，14.8mmol)并将混合物搅拌20分钟。加入BOC酸酐(3.22g，14.8mmol)并搅拌过夜。用EtOAc和水稀释混合物，将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用2-5％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化该化合物，得到白色固体(2.3g，74％)；1HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.70(s，9H)，3.96(s，3H)，7.32-7.42(m，2H)，8.14-8.22(m，2H)，8.28(s，1H)。
中间体27
O3-甲基吲哚啉-1，3-二甲酸O1-叔丁基酯(O1-tert-butyl O3-methyl indoline-1，3-dicarboxylate)
在0℃下，向中间体26(1g，3.6mmol)的MeOH(100ml)和DCM(30ml)溶液中加入镁粉(438mg，18.2mmol)并将混合物搅拌3小时。再加入镁粉(250mg，10.4mmol)并继续搅拌过夜。将混合物倒入饱和NH4Cl(水溶液)中并酸化至约pH 4。加入DCM，将有机相分离、干燥并浓缩，得到浅黄色油状物(953mg，95％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.57(br.s.，9H)，3.80(s，3H)，4.06-4.16(m，1H)，4.18-4.26(m，1H)，4.34-4.48(m，1H)，6.93-7.00(m，1H)，7.24(t，J＝8.01Hz，1H)，7.34-7.39(m，1H)，7.70-7.96(m，1H)。
中间体28
吲哚啉-3-甲酸甲酯
向中间体27(953mg，3.45mmol)的DCM(10ml)溶液中加入TFA(3ml)并将混合物搅拌1小时。用饱和的NaHCO3(水溶液)中和混合物并用DCM萃取。将有机相分离、干燥并浓缩，得到棕色油状物(455mg，75％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 3.73-3.78(m，1H)，3.78(s，3H)，3.94-3.98(m，1H)，4.17-4.25(m，1H)，6.68(d，J＝7.79Hz，1H)，6.72-6.80(m，1H)，7.07-7.13(m，1H)，7.29-7.33(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)178.0。
中间体29
吲哚-3-基甲醇
向中间体28(100mg，0.57mmol)的THF(5ml)溶液中逐滴加入1M氢化铝锂的THF(1.1ml，1.1mmol)溶液，并将混合物加热回流45分钟。冷却混合物，加入1ml水并通过过滤除去固体。浓缩滤液，得到吲哚啉-3-基甲醇，其为棕色油状物(65mg，76％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 3.45-3.54(m，2H)，3.66-3.72(m，1H)，3.79-3.83(m，2H)，6.67(d，J＝7.79Hz，1H)，6.75(td，J＝7.30，0.90Hz，1H)，7.08(td，J＝7.79，0.92Hz，1H)，7.16(d，J＝6.87Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)150.2。
中间体30
2-(1H-吲哚-3-基)乙醇
向3-吲哚乙酸(1g，5.7mmol)的THF(30ml)溶液中加入1M氢化锂铝的THF(11.4ml，11.4mmol)溶液，并将混合物回流3小时。冷却混合物，小心地加入0.43ml水，然后加入0.43ml 15％NaOH(水溶液)，最后加入1.5ml水。从混合物中过滤出固体，用EtOAc洗涤并浓缩滤液，得到2-(1H-吲哚-3-基)乙醇(919mg，100％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 3.06(t，J＝6.40Hz，2H)，3.93(t，J＝6.40Hz，2H)，7.10(d，J＝2.29Hz，1H)，7.12-7.18(m，1H)，7.20-7.26(m，1H)，7.36-7.41(m，1H)，7.64(dd，J＝8.01，1.14Hz，1H)，8.10(br.s.，1H)。
中间体31
2-吲哚啉-3-基乙醇
向中间体30(919mg，5.7mmol)的DCM(20ml)溶液中加入TFA(5ml)，然后加入硼氢化钠(434mg，11.4mmol)并搅拌过夜。用DCM稀释混合物并用饱和NaHCO3(水溶液)中和。将有机相分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(EtOAc/石油醚＝10-100％)纯化化合物，得到橙色油状物2-吲哚啉-3-基乙醇(157mg，17％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.82(m，1H)，2.11(m，1H)，3.33(dd，J＝8.70，5.95Hz，1H)，3.43-3.52(m，1H)，3.56-3.64(m，1H)，3.67-3.76(m，2H)，6.70(d，J＝7.79Hz，1H)，6.75-6.81(m，1H)，7.03-7.10(m，1H)，7.12(d，J＝7.60Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)164.1。
中间体32
N-(2-吲哚啉-3-基乙基)氨基甲酸叔丁酯
向色胺(tyrptamine)(1g，6.25mmol)的DCM(10ml)溶液中加入TFA(2ml)，然后加入硼氢化钠(475mg，12.5mmol)并搅拌过夜。用DCM稀释混合物并用饱和NaHCO3(水溶液)中和。将有机相分离、干燥并浓缩，得到黄色油状物2-吲哚啉-3-基乙胺。将该黄色油状物溶于DCM(30ml)中，加入三乙胺(0.90ml，6.2mmol)，然后加入BOC酸酐(1.35g，6.2mmol)并搅拌过夜。用DCM和水稀释该混合物。将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用5-25％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化化合物，得到黄色油状物(684mg，42％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.46(s，9H)，1.72(m，1H)，1.90-2.04(m，1H)，3.15-3.28(m，2H)，3.28-3.41(m，1H)，3.58-3.77(m，1H)，4.06-4.11(m，1H)，4.57(m，1H)，6.90-6.99(m，1H)，7.08-7.22(m，2H)，7.37-8.06(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)263.2。
中间体33
5-(三氟甲基)吲哚啉
向5-(三氟甲基)吲哚(100mg，0.55mmol)和TFA(0.5mL)的DCM(10mL)溶液中加入NaBH4(42mg，1.10mmol)并将混合物搅拌过夜。将反应混合物用DCM(10mL)稀释并用饱和NaHCO3(5mL)急冷。用水(2次，每次10mL)洗涤有机层，干燥并真空浓缩，得到橙色胶状物(126mg，质量回收率为122％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.66(m，1H)，7.61(m，1H)，7.44(m，1H)，3.95(t，J＝7.79Hz，2H)，3.39(t，J＝8.24Hz，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)188.2。未经进一步纯化即使用。
中间体34
7-(2-甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯
类似于中间体15，由7-(甲硫基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯和2-甲基吲哚啉制备中间体34。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.40(d，J＝6.41Hz，3H)，1.47(t，J＝6.90Hz，3H)，2.83(d，J＝15.60Hz，1H)，3.52(dd，J＝15.60，8.70Hz，1H)，4.44-4.57(m，2H)，5.92-6.07(m，1H)，7.08-7.14(m，1H)，7.28-7.33(m，2H)，8.65-8.71(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)341.1。
中间体35
7-(3-甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯
类似于中间体14，由3-甲基吲哚啉和7-(甲硫基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯制备中间体35。LC-MS(ESI)：(MH+)341.1。
中间体36
7-(2-甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸
向中间体34(943mg，2.8mmol)的THF(10ml)溶液中加入15％NaOH(水溶液)(5ml)并搅拌1小时。用2M HCl将混合物酸化至pH1，过滤所得沉淀物并干燥，得到棕色固体(852mg，98％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.28(d，J＝5.95Hz，3H)，2.83(d，J＝16.03Hz，1H)，3.50(dd，J＝15.80，8.93Hz，1H)，5.84-5.98(m，1H)，7.06-7.15(m，1H)，7.28(t，J＝8.01Hz，1H)，7.37(d，J＝7.33Hz，1H)，8.62(d，J＝8.24Hz，1H)，8.67(s，1H)。
中间体37
(S)-吲哚啉-2-基甲醇
在0℃下，将硼烷(38ml，1.0M的THF溶液，38mmol)逐滴加入到(S)-吲哚啉-2-甲酸(2.50g，15.2mmol)的悬浮液中，并在室温下将所得溶液搅拌48小时。向其中加入DCM和水，并用水(2次，每次20ml)洗涤有机相。将有机相分离、干燥并浓缩，得到橙色油状物(856mg，38％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.08(d，J＝7.33Hz，1H)，7.02(d，J＝1.37Hz，1H)，6.72(td，J＝7.44，1.14Hz，1H)，6.64(d，J＝7.79Hz，1H)，4.02(m，1H)，3.70(dd，J＝10.76，3.89Hz，1H)，3.56(dd，J＝10.76，6.64Hz，1H)，3.08(d，J＝9.16Hz，1H)，2.83(d，J＝7.78Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)150。
中间体38
(S)-2-(羟基甲基)吲哚啉-1-甲酸叔丁酯
向中间体37(856mg，5.74mmol)的DCM(5mL)溶液中加入BOC2O(1.38g，6.32mmol)，并在室温下将溶液搅拌48小时。向所得黄色溶液中加入DCM(5mL)和饱和NaHCO3(水溶液)(5mL)。用饱和NaHCO3(水溶液)(2次，每次5mL)洗涤有机层，分离并浓缩，得到黄色油状物(1.40g，89％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.51(br.s，1H)，7.14(m，2H)，6.94(t，J＝7.33Hz，1H)，4.59(br.s，1H)，3.69(s，2H)，3.33(m，1H)，2.79(br.s，1H)，1.58(s，9H)；LC-MS(ESI)：(MH+-BOC)150.1。
中间体39
(S)-2-((甲苯磺酰氧基)甲基)吲哚啉-1-甲酸叔丁酯
将甲苯磺酰氯(2.13g，11.20mmol)和吡啶(12mL)加入到中间体38的DCM(6mL)溶液中，并在室温下将所得混合物搅拌16小时。通过加入DCM和水将混合物急冷，分离有机层并用水(2次，每次10mL)洗涤。将有机层分离、干燥并浓缩，得到粉红色油状物(1.46g，64％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.68(d，J＝8.70Hz，2H)，7.29(d，J＝8.23Hz，2H)，7.11(m，2H)，6.93(t，J＝7.33Hz，1H)，4.59(m，1H)，4.18(m，1H)，3.97(br.s.，1H)，3.27(m，1H)，2.93(dd，J＝16.49，1.83Hz，1H)，2.42(s，3H)，1.47(br.s.，9H)；LC-MS(ESI)：(MH+)400.0。
中间体40
(R)-2-甲基吲哚啉-1-甲酸叔丁酯
将硼氢化钠(335mg，9.06mmol)加入到中间体39(1.46g，3.62mmol)的DMSO(20mL)溶液中，并在100℃下将反应混合物搅拌18小时。向所得黄色溶液中加入DCM和水，分离有机层并用水(2次，每次10mL)洗涤。将有机层分离、干燥并浓缩，得到黄色油状物(547mg，65％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.27(d，J＝6.41Hz，3H)1.56(s，9H)2.57-2.61(m，2H)3.33(dd，J＝16.03，9.62Hz，1H)4.42-4.57(m，1H)6.89-6.95(m，1H)7.10-7.19(m，2H)。
中间体41
(R)-2-甲基吲哚啉
向中间体40(547mg，235mmol)的DCM(5mL)溶液中加入TFA(2mL)，并在室温下将反应混合物搅拌1小时。将溶液浓缩并将所得橙色油状物溶于甲醇中并通过SCX柱。用2M氨的甲醇溶液洗脱产物并浓缩洗脱液，得到橙色油状物(547mg，65％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 7.10(d，J＝7.33Hz，1H)，7.03(t，J＝7.80Hz，1H)，6.70(t，J＝8.70Hz，1H)，6.63(d，J＝7.79Hz，1H)，4.01(m，1H)，3.16(dd，J＝15.11，8.70Hz，1H)，2.66(dd，J＝15.11，7.79Hz，1H)，1.31(d，J＝5.95Hz，3H)。
中间体42
(R)-7-(2-甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯
在0℃下，将m-CPBA(639mg，3.70mmol)加入到搅拌着的7-(甲硫基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯(472mg，1.85mmol)的DCM(10mL)溶液中。在0℃下搅拌所得混合物并在2小时内升温至室温，然后加入中间体41(264mg，1.85mmol)和二恶烷(5mL)以产生深绿色溶液。在室温下将该溶液搅拌16小时。向其中加入DCM和水，分离有机层并用水(2次，每次10mL)洗涤。将有机层分离、干燥并浓缩，得到黄色固体。将该黄色固体溶于甲醇中并通过SCX柱。用2M氨的甲醇溶液洗脱产物并浓缩洗脱液，得到黄色固体(350mg，65％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.38-1.41(d，3H)1.47(t，3H)2.83(d，J＝15.57Hz，1H)3.52(dd，J＝15.57，9.16Hz，1H)4.48-4.55(q，2H)5.95-6.03(m，1H)7.11(td，J＝7.33，0.92Hz，1H)7.31(dt，J＝7.67，3.72Hz，2H)8.65-8.67(m，1H)8.67-8.71(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)341.0。
中间体43
(R)-7-(2-甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸
将中间体42(5.46g，16.2mmol)悬浮于THF(70mL)中，并在0℃下加入2M NaOH(水溶液)(24mL)并搅拌30分钟。将混合物酸化至pH1，并通过真空过滤来收集黄色固体。用醚(2次，每次10mL)洗涤固体并干燥，得到黄色固体(350mg，93％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.65(s，1H)，8.59(d，J＝8.24Hz，1H)，7.35(d，J＝7.33Hz，1H)，7.25(t，J＝7.30Hz，1H)，7.08(t，J＝8.20Hz，1H)，5.87(m，1H)，3.48(dd，J＝15.57，8.70Hz，1H)，2.81(d，J＝15.57Hz，1H)，1.25(d，J＝5.95Hz，3H)。
中间体44
4-[[(7-甲基硫烷基噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-羰基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
将亚硫酰氯(30ml)加入到中间体2(4.45g，19.6mmol)中并加热回流2小时。将混合物冷却，浓缩并将残留物溶于DCM中。向其中加入三乙胺(8.48ml，58.8mmol)，随后加入4-(氨基甲基)哌啶-1-甲酸叔丁酯(4.61g，21.6mmol)的DCM溶液并搅拌过夜。将DCM和水加入到混合物中，将有机相分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用10-50％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)进行纯化，得到桃色固体(5.49g，68％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.23-1.31(m，2H)，1.46(s，9H)，1.72-1.80(m，2H)，1.81-1.90(m，1H)，2.69-2.76(m，5H)，3.43(t，J＝6.64Hz，2H)，4.11-4.21(m，2H)，7.49(br.t，J＝6.00，6.00Hz，1H)，8.90(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+-BOC)324.0。
中间体45
4-[[(7-氯噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-羰基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
在冰/盐浴中，在-10℃下向中间体44(2.5g，5.9mmol)的乙腈(50ml)和DCM(20ml)溶液中逐滴加入磺酰氯(0.96ml，11.8mmol)的DCM(10ml)溶液。在-10℃下将反应物搅拌1小时。将混合物浓缩，得到4-[[(7-氯噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-羰基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯，其为黄色固体(2.51g，质量回收率为112％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.21-1.31(m，2H)，1.46(s，9H)，1.75-1.81(m，2H)，1.85-1.91(m，1H)，2.65-2.76(m，2H)，3.45(t，J＝6.60Hz，2H)，4.14-4.20(m，2H)，7.55(br.t，J＝6.00，6.00Hz，1H)，9.00(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+-BOC)312.0。
中间体46
2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙醇
向5-氟吲哚-3-乙酸(1g，5.2mmol)的THF(20ml)溶液中加入1M氢化铝锂的THF(10.4ml，10.4mmol)溶液，并将混合物回流1.5小时。冷却混合物，加入0.39ml水，然后加入0.39ml 15％NaOH(水溶液)，接着加入1.2ml水。通过真空过滤来收集沉淀物并浓缩滤液，得到2-(5-氟-1H-吲哚-3-基)乙醇，其为橙色油状物(0.927g，100％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 2.98(t，J＝6.41Hz，2H)，3.89(t，J＝6.18Hz，2H)，6.95(td，J＝9.04，2.52Hz，1H)，7.12(s，1H)，7.22-7.30(m，2H)，8.06(br.s.，1H)。
中间体47
2-(5-氟吲哚啉-3-基)乙醇
向中间体46(927mg，5.2mmol)的DCM(20ml)和TFA(5ml)溶液中加入硼氢化钠(393mg，10.4mmol)并搅拌4小时。用DCM稀释混合物并用饱和NaHCO3(水溶液)碱化。将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用20-100％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化化合物，得到黄色油状物(416mg，44％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.74-1.85(m，1H)，2.06-2.14(m，1H)，3.28-3.36(m，1H)，3.40-3.50(m，1H)，3.55-3.63(m，1H)，3.67-3.78(m，2H)，6.59(dd，J＝8.47，4.35Hz，1H)，6.75(td，J＝8.82，2.52Hz，1H)，6.83(dd，J＝8.47，2.52Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)312.0。
中间体48
3-甲基吲哚啉-3-甲酸甲酯
向中间体27(250mg，0.92mmol)的DMF(10ml)溶液中加入氢化钠在矿物油中的60％分散体(41mg，1.0mmol)，然后立即加入甲基碘(0.17ml，2.8mmol)并搅拌2小时。用EtOAc稀释混合物并用水(3次)洗涤。将有机相分离、干燥并浓缩成油状物。将油溶于DCM(5ml)中，加入TFA(1ml)并搅拌1小时。使混合物通过SCX柱，产物用2M NH3的MeOH溶液洗脱，得到3-甲基吲哚啉-3-甲酸甲酯，其为棕色油状物(118mg，67％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.59(s，3H)，3.38(d，J＝9.62Hz，1H)，3.73(s，3H)，4.16(d，J＝9.16Hz，1H)，6.70(d，J＝8.24Hz，1H)，6.80(td，J＝7.50，1.10Hz，1H)，7.11(td，J＝7.50，1.14Hz，1H)，7.27-7.31(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)192.1。
中间体49
(3-甲基吲哚啉-3-基)甲醇
向中间体48(118mg，0.62mmol)的THF(5ml)溶液中逐滴加入1M氢化铝锂的THF(1.24ml，1.2mmol)溶液，并在室温下将反应搅拌2小时。通过加入水和15％NaOH(水溶液)将反应混合物急冷。通过真空过滤除去固体并浓缩滤液，得到黄色油状物(100mg，99％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.34(s，3H)，3.28(d，J＝9.16Hz，1H)，3.54-3.58(m，2H)，3.61(d，J＝8.20Hz，1H)，3.63-3.68(m，1H)，6.63-6.69(m，1H)，6.72-6.79(m，1H)，7.07(m，J＝7.30Hz，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)164.1。
中间体50
(5-氟-3-甲基-吲哚啉-3-基)甲醇
以与中间体49类似的方式，由5-氟-1H-吲哚-3-甲酸甲酯开始制备中间体50；1HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.31(s，3H)，3.28-3.32(m，1H)，3.57-3.63(m，3H)，6.56-6.60(m，1H)，6.78(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)182.1。
中间体51
2-(1H-吲哚-3-基)乙酸甲酯
向3-吲哚乙酸(500mg，2.9mmol)的MeOH(20ml)溶液中加入浓H2SO4(1ml)并将混合物搅拌1小时。用饱和NaHCO3(水溶液)将混合物急冷并用DCM萃取。将有机相分离、干燥并浓缩，得到黄色油状物(531mg，99％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 3.72(s，3H)，3.82(s，2H)，7.13-7.19(m，2H)，7.20-7.25(m，1H)，7.34-7.39(m，1H)，7.61-7.66(m，1H)，8.02-8.23(m，1H)。
中间体52
2-吲哚啉-3-基乙酸甲酯
向中间体51(311mg，1.6mmol)的DCM(10ml)和TFA(2ml)溶液中加入硼氢化钠(125mg，3.2mmol)并搅拌2小时。用DCM稀释混合物并用饱和NaHCO3(水溶液)急冷。将有机相分离、干燥并浓缩，得到黄色油状物(302mg，96％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 2.60(dd，J＝16.50，9.10Hz，1H)，2.80(dd，J＝16.50，5.50Hz，1H)，3.31(dd，J＝8.93，6.18Hz，1H)，3.43-3.60(m，1H)，3.71-3.78(m，4H)，3.79-3.86(m，1H)，6.72(d，J＝7.79Hz，1H)，6.78(td，J＝7.33，0.92Hz，1H)，7.06-7.13(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)192.1。
中间体53
3-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)吲哚啉-1-甲酸叔丁酯
向中间体52(140mg，0.73mmol)的三乙胺(0.21ml，1.4mmol)和DCM(5ml)溶液中加入DMAP(9mg，0.07mmol)，随后加入BOC酸酐(168mg，0.77mmol)。将混合物搅拌过夜。用DCM和水稀释该混合物，将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用5-50％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化化合物，得到黄色油状物(148mg，70％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.55(br.s.，9H)，2.50-2.59(m，1H)，2.69-2.86(m，1H)，3.59-3.69(m，1H)，3.70-3.78(m，4H)，4.15-4.23(m，1H)，6.93(td，J＝7.30，0.90Hz，1H)，7.11(d，J＝7.30Hz，1H)，7.18(t，J＝7.78Hz，1H)，7.34-7.93(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+-BOC)192.1。
中间体54
3-(2-羟基-2-甲基-丙基)吲哚啉-1-甲酸叔丁酯
向中间体53(148mg，0.51mmol)的THF(5ml)溶液中加入3M甲基溴化镁的THF(0.84ml，2.5mmol)溶液并搅拌1小时。用饱和NH4Cl(水溶液)将反应急冷并用DCM萃取。将有机层分离、干燥并浓缩，得到黄色油状物(150mg，99％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.32(s，6H)，1.58(s，9H)，1.76(dd，J＝14.20，10.53Hz，1H)，1.97-2.09(m，1H)，3.41-3.54(m，1H)，3.73(d，J＝6.87Hz，1H)，4.16-4.35(m，1H)，6.94(td，J＝7.33，0.92Hz，1H)，7.07-7.19(m，2H)，7.35-8.01(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+-BOC)192.1。
中间体55
1-吲哚啉-3-基-2-甲基-丙-2-醇
向中间体54(150mg，0.51mmol)的DCM(10ml)溶液中加入TFA(1ml)并搅拌3小时。使混合物通过SCX柱，产物用2M NH3的MeOH溶液洗脱，得到1-吲哚啉-3-基-2-甲基-丙-2-醇，其为黄色油状物(76mg，78％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.32(d，J＝8.24Hz，6H)，1.78(dd，J＝14.43，9.85Hz，1H)，2.12(dd，J＝14.43，2.52Hz，1H)，3.33(t，J＝8.70Hz，1H)，3.42-3.51(m，1H)，3.84(t，J＝8.70Hz，1H)，6.70(d，J＝7.30Hz，1H)，6.78(td，J＝7.30，0.90Hz，1H)，7.03-7.08(m，1H)，7.10(d，J＝7.30Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)192.1。
中间体56
1-(5-氟吲哚啉-3-基)-2-甲基-丙-2-醇
以与中间体55类似的方式，由5-氟-3-吲哚乙酸开始制备中间体56，得到1-(5-氟吲哚啉-3-基)-2-甲基-丙-2-醇；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.30(d，J＝9.16Hz，6H)，1.74-1.82(m，1H)，1.98-2.05(m，1H)，3.46-3.53(m，2H)，3.86-3.94(m，1H)，6.75-6.81(m，2H)，6.83-6.88(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)210.1。
中间体57
O1-叔丁基O3-甲基3-甲基吲哚啉-1，3-二甲酸酯(O1-tert-butyl O3-methyl 3-methylindoline-1，3-dicarboxylate)
向中间体27(1g，3.7mmol)的DMF(25ml)溶液中加入氢化钠在矿物油中的60％分散体(162mg，4.0mmol)，然后立即加入甲基碘(0.68ml，11.0mmol)并搅拌2小时。用EtOAc稀释混合物并用水(3次)洗涤。将有机相分离、干燥并浓缩，得到橙色油状物(1.07g，100％)；1HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.56-1.61(m，12H)，3.67-3.79(m，4H)，4.58(d，J＝11.40Hz，1H)，6.98(td，J-7.30，0.90Hz，1H)，7.20-7.26(m，1H)，7.31(dd，J＝7.80，0.90Hz，1H)，7.38-7.94(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+-BOC)192.1。
中间体58
1-叔丁氧基羰基-3-甲基-吲哚啉-3-甲酸
向中间体57(1.07g，3.7mmol)的THF(20ml)溶液中加入15％NaOH(水溶液)(20ml)，并在50℃下将混合物加热3小时，然后在室温下过夜。用1M HCl(水溶液)酸化混合物并用乙酸乙酯萃取。将有机相分离、干燥并浓缩，得到橙色油状物(1g，100％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.54(br.s，9H)，1.61(s，3H)，3.66-3.77(m，1H)，4.57(d，J＝11.45Hz，1H)，6.98(td，J＝7.80，0.90Hz，1H)，7.23(t，J＝7.80Hz，1H)，7.34(dd，J＝7.30，0.90Hz，1H)，7.40-7.92(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+-BOC)178.1。
中间体59
2-(1-叔丁氧羰基-3-甲基-吲哚啉-3-基)-2-氧代-乙烷重氮鎓
在0℃下，向中间体58(1g，3.6mmol)和三乙胺(1.04ml，7.2mmol)的DCM(20ml)溶液中加入DMF(56μL，0.72mmol)，然后滴加草酰氯(0.45ml，5.4mmol)。将反应搅拌4小时，升温至室温。再加入草酰氯(0.3ml，3.6mmol)并继续搅拌过夜。浓缩混合物，并将残留物溶于THF(20ml)和乙腈(10ml)中。加入2M三甲基硅烷重氮甲烷的***溶液(3.6ml，7.2mmol)并将混合物搅拌2小时。用10％柠檬酸(水溶液)将混合物急冷直至泡腾停止。加入DCM和水，将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用2-10％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化化合物，得到黄色油状物(401mg，37％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.52-1.61(m，12H)，3.72(br.d，J＝11.90Hz，1H)，4.35(d，J＝11.90Hz，1H)，5.12(s，1H)，7.01(td，J＝7.80，0.90Hz，1H)，7.16(dd，J＝7.80，0.90Hz，1H)，7.24-7.30(m，1H)，7.37-8.01(m，1H)。
中间体60
3-(2-甲氧基-2-氧代-乙基)-3-甲基-吲哚啉-1-甲酸叔丁酯
向中间体59(401mg，1.3mmol)和三乙胺(0.58ml，4.0mmol)的甲醇(10ml)溶液中加入苯甲酸银(152mg，0.66mol)。将该混合物搅拌1.5小时。向混合物中加入DCM和水，将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用2-12％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化化合物，得到无色油状物(230mg，57％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.38(s，3H)，1.55(br.s，9H)，2.54-2.72(m，2H)，3.62(s，3H)，3.75(d，J＝11.40Hz，1H)，4.10(d，J＝11.40Hz，1H)，6.95(td，J＝7.30，0.90Hz，1H)，7.08(d，J＝7.30Hz，1H)，7.18(t，J＝7.30Hz，1H)，7.34-8.10(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+-BOC)206.1。
中间体61
2-(3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲酯
向中间体60(230mg，0.75mmol)的DCM(10ml)溶液中加入TFA(2ml)并搅拌15分钟。加入饱和NaHCO3(水溶液)以中和混合物，将有机层分离、干燥并浓缩，得到橙色油状物2-(3-甲基吲哚啉-3-基)乙酸甲酯(140mg，90％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.41(s，3H)2.62(d，J＝1.37Hz，2H)3.36(d，J＝9.16Hz，1H)3.63-3.66(m，3H)3.67-3.70(m，1H)6.65-6.68(m，1H)6.72-6.77(m，1H)7.02-7.08(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)206.1。
中间体62
2-(3-甲基吲哚啉-3-基)乙醇
向中间体61(140mg，0.68mmol)的THF(5ml)溶液中逐滴加入1M氢化铝锂的THF(1.36ml，1.4mmol)溶液并搅拌30分钟。小心地加入52μL水，然后加入52μL 15％NaOH(水溶液)，最后加入0.15ml水。通过真空过滤除去固体并浓缩滤液，得到浅棕色油状物(108mg，90％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.40(s，3H)，1.61-1.70(m，1H)，1.90-2.00(m，1H)，3.16-3.24(m，1H)，3.30(d，J＝8.70Hz，1H)，3.49-3.54(m，2H)，6.72(d，J＝7.78Hz，1H)，6.79-6.86(m，1H)，7.01(d，J＝7.33Hz，1H)，7.07(td，J＝7.80，0.90Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)178.1。
中间体63
7-[5-氟-3-(2-羟基乙基)吲哚啉-1-基]-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将中间体18(200mg，0.67mmol)、中间体47和丙-2-醇合并，密封在小瓶中并在50℃下加热3小时。将混合物冷却并浓缩，得到黄色固体(300mg，100％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.67-1.76(m，2H)，1.90-1.96(m，1H)，1.98-2.04(m，2H)，2.13-2.21(m，1H)，3.50-3.57(m，2H)，3.68-3.76(m，1H)，3.83-3.91(m，1H)，3.92-3.98(m，1H)，3.99-4.04(m，2H)，4.14-4.26(m，1H)，4.79(dd，J＝12.59，6.18Hz，1H)，5.23(dd，J＝12.36，9.16Hz，1H)，6.98-7.06(m，2H)，7.31(d，J＝8.24Hz，1H)，8.59-8.66(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)444.0。
中间体64
7-[3-(2-羟基乙基)吲哚啉-1-基]-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将中间体18(114mg，0.38mmol)、中间体31(62mg，0.38mmol)和丙-2-醇合并，密封在小瓶中并在80℃下加热3小时。将混合物冷却并浓缩到二氧化硅上，并通过柱层析(用0-5％的MeOH/EtOAc进行梯度洗脱)纯化，得到黄色固体(210mg)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.71-1.91(m，4H)3.35-3.46(m，2H)3.59-3.72(m，3H)3.92(dd，J＝11.22，2.98Hz，2H)4.00-4.13(m，1H)4.70(dd，J＝12.59，4.35Hz，1H)4.96(dd，J＝12.59，8.47Hz，1H)7.10(td，J＝7.44，1.14Hz，1H)7.25-7.33(m，1H)7.39-7.48(m，1H)8.62(d，J＝8.24Hz，1H)8.67(s，1H)8.71(d，J＝8.24Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)412.1。
中间体65
7-氯-N-甲基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于中间体18，制备中间体65。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 8.97(s，1H)，7.44(br.s，NH)，3.12(d，J＝5.50Hz，3H)。
中间体66
7-氯噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯
在0℃下，向7-甲基硫烷基噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯(1g，3.9mmol)的DCM(20ml)溶液中逐滴加入磺酰氯(0.63ml，7.8mmol)。将混合物搅拌1小时，然后浓缩，得到黄色固体(952mg，100％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.51(t，J＝7.20Hz，3H)，4.60(q，J＝7.17Hz，2H)，9.02(s，1H)。
中间体67
7-(3，3-二甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯
将中间体66(300mg，1.2mmol)、3，3-二甲基吲哚啉(182mg，1.2mmol)和丙-2-醇(3ml)密封在小瓶中，并在70℃下加热4小时。将混合物冷却，此时形成沉淀物。收集该沉淀物并通过真空过滤进行干燥，得到黄色固体7-(3，3-二甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯(322mg，74％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.48(m，9H)，4.56(q，J＝7.33Hz，2H)，4.80(s，2H)，7.31-7.41(m，3H)，8.65(d，J＝7.78Hz，1H)，8.75(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)355.0。
中间体68
7-(3，3-二甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸
向中间体67(322mg，0.9mmol)的THF(10ml)溶液中加入15％NaOH(水溶液)并搅拌1小时。将混合物酸化，此时形成沉淀物。收集该沉淀物并通过真空过滤进行干燥，得到黄色固体(243mg，82％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.42(s，6H)，4.60(s，2H)，7.10-7.18(m，1H)，7.25-7.32(m，1H)，7.38(dd，J＝7.80，0.90Hz，1H)，8.61(d，J＝7.78Hz，1H)，8.71(s，1H)。
中间体69
(1R，2R)-2-(5-氟-2-硝基-苯氧基)环己醇
在室温下，将LiHMDS(8.6ml，8.6mmol，1M，在THF中)缓慢加入到(1R，2R)-环己烷-1，2-二醇(1g，8.6mmol)的THF(10ml)溶液中。加入另外的(5ml)THF并将混合物搅拌5分钟，然后滴加2，4-二氟-1-硝基-苯(0.943ml，8.6mmol)。在室温下将混合物搅拌过夜。用EtOAc和2M HCl(水溶液)稀释混合物，分离有机层并用2M NaOH(水溶液)洗涤，然后通过相分离器洗脱并浓缩。通过柱层析纯化，用0-15％的EtOAc/石油醚洗脱，得到黄色固体(1.2g，55％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 0.97-1.44(m，4H)，1.48-1.65(m，2H)，1.69-1.85(m，1H)，1.87-2.10(m，1H)，3.41-3.68(m，1H)，4.12-4.41(m，1H)，4.92(br.s，1H)，6.76-7.02(m，1H)，7.39(dd，J＝11.45，2.75Hz，1H)，7.91(dd，J＝9.16，6.41Hz，1H)。
中间体70
(1R，2R)-2-(2-氨基-5-氟-苯氧基)环己醇
使中间体69(1.2g，4.7mmol)的5∶1 EtOH∶EtOAc(120ml)溶液通过H-Cube反应器(柱：10％Pd/C；流速：1ml/min；温度：室温；压力：1巴)。浓缩溶液，得到棕色胶状物(1R，2R)-2-(2-氨基-5-氟-苯氧基)环己醇(1.05mg，99％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.16-1.37(m，4H)，1.51-1.64(m，2H)，1.78-1.88(m，1H)，1.95(s，1H)，3.44-3.56(m，1H)，3.69-3.81(m，1H)，4.66(br.s.，2H)，5.04(d，J＝4.58Hz，1H)，6.47(m，1H)，6.50-6.58(m，1H)，6.65-6.73(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)226.1。
中间体71
4-氟-2-[(1R，2R)-2-甲氧基环己氧基]-1-硝基-苯
在DCM(30ml)中将中间体69(1.36g，5.33mmol)和三甲基氧鎓四氟硼酸盐(2.36g，16mmol)合并并在室温下搅拌过夜。用水稀释混合物，分离有机层，用MgSO4干燥并浓缩。通过柱层析纯化，用2-5％的EtOAc/石油醚洗脱，得到黄色油状物(1g，70％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.16-1.43(m，3H)，1.50-1.65(m，1H)，1.66-1.85(m，2H)，2.01-2.21(m，2H)，3.29-3.41(m，4H)，4.14-4.27(m，1H)，6.62-6.72(m，1H)，6.87-6.94(m，1H)，7.82-7.91(m，1H)。
中间体72
4-氟-2-[(1R，2R)-2-甲氧基环己氧基]苯胺
类似于中间体70，制备中间体72，得到金色油状物(0.84g，95％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.18-1.39(m，3H)，1.42-1.56(m，1H)，1.63-1.79(m，2H)，2.05-2.18(m，2H)，3.28-3.38(m，1H)，3.44(s，3H)，3.94(m，1H)，6.49-6.58(m，1H)，6.63-6.72(m，2H)；(MH+)240.2。
中间体73
(1S，2S)-2-(5-氟-2-硝基-苯氧基)环己醇
类似于中间体69进行制备，得到黄色固体(1.9g，29％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.14-1.41(m，4H)，1.51-1.63(m，2H)，1.75-1.85(m，1H)，1.90-2.01(m，1H)，3.44-3.53(m，1H)，4.26-4.35(m，1H)，4.94(d，J＝5.04Hz，1H)，6.84-6.92(m，1H)，7.39(dd，J＝11.45，2.29Hz，1H)，7.91(dd，J＝9.16，5.95Hz，1H)。
中间体74
(1S，2S)-2-(2-氨基-5-氟-苯氧基)环己醇
类似于中间体70进行制备，得到棕色胶状物(1S，2S)-2-(2-氨基-5-氟-苯氧基)环己醇(0.95g)，将其用于下一步骤而不需要进一步纯化。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.16-1.33(m，4H)，1.48-1.66(m，2H)，1.78-1.87(m，1H)，1.93-2.04(m，1H)，3.45-3.54(m，1H)，3.71-3.80(m，1H)，4.63(s，2H)，5.04(d，J＝4.58Hz，1H)，6.42-6.49(m，1H)，6.50-6.57(m，1H)，6.65-6.72(m，1H)；(MH+)226。
中间体75
4-氟-2-[(1S，2S)-2-甲氧基环己氧基]-1-硝基-苯
类似于中间体71，制备中间体75，得到黄色油状物(0.63g，66％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.22-1.41(m，3H)，1.55(m，1H)，1.66-1.81(m，2H)，2.02-2.18(m，2H)，3.29-3.41(m，4H)，4.13-4.25(m，1H)，6.62-6.72(m，1H)，6.91(dd，J＝10.53，2.75Hz，1H)，7.82-7.91(m，1H)。
中间体76
4-氟-2-[(1S，2S)-2-甲氧基环己氧基]苯胺
类似于中间体70进行制备，得到棕色油状物4-氟-2-[(1S，2S)-2-甲氧基环己氧基]苯胺(0.54g，97％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.21-1.39(m，3H)，1.42-1.54(m，1H)，1.63-1.81(m，2H)，2.03-2.17(m，2H)，3.28-3.36(m，1H)，3.44(s，3H)，3.88-3.99(m，1H)，6.50-6.58(m，1H)，6.65-6.72(m，2H)；(MH+)240.2。
中间体77
7-(5-硝基-2，3-二氢-1H-吲哚-1-基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸乙酯
搅拌中间体66(50mg，0.205mmol)和5-硝基吲哚啉(34mg，0.205mmmol)的混合物的IPA(2ml)溶液并在80℃下加热5小时。将混合物冷却至室温，并通过过滤分离出黄色固体(44mg，58％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.50(t，J＝7.33Hz，3H)，3.44(t，J＝8.70Hz，2H)，4.56(q，J＝7.33Hz，2H)，5，03-5.12(m，2H)，8.14-8.18(m，1H)，8.23(dd，J＝8.93，2.52Hz，1H)，8.81(s，1H)，8.86(d，J＝8.70Hz，1H)。
中间体78
7-(5-硝基-2，3-二氢-1H-吲哚-1-基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸
在室温下，将中间体77(651mg，1.75mmol)和1N NaOH(水溶液)的混合物的1∶1EtOH∶THF(30ml)溶液搅拌3小时。将反应混合物浓缩至小体积，然后用水稀释。加入1M HCl至pH＝3-4。通过过滤分离出黄色固体。用MeOH稀释该固体并将混合物浓缩至于(660mg，110％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.41(t，J＝8.47Hz，2H)，4.92(t，J＝8.47Hz，2H)，8.16-8.25(m，2H)，8.74-8.80(m，1H)，8.83(s，1H)。
中间体79
7-(5-氨基-2，3-二氢-1H-吲哚-1-基)-N-(1-甲基哌啶-4-基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
搅拌实施例45(210mg，0.478mmol)、氯化铵(127mg，2.39mmol)和锌粉(155mg，2.39mmol)的混合物的1∶1∶1 MeOH∶THF∶水(30ml)溶液并在60℃下加热5小时。将混合物冷却至室温并浓缩至干燥。将固体残留物预吸附到硅胶上，然后通过硅胶急骤柱层析纯化，用10∶1 DCM∶2M NH3的MeOH溶液洗脱，得到黄色固体(62mg，32％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.71-1.85(m，4H)，1.89-2.03(m，2H)，2.18(s，3H)，2.82(d，J＝11.45Hz，2H)，3.15-3.26(m，2H)，3.71-3.87(m，1H)，4.81(t，J＝8.24Hz，2H)，5.07(s，2H)，6.46(dd，J＝8.70，2.29Hz，1H)，6.58(d，J＝2.29Hz，1H)，8.37(d，J＝8.70Hz，1H)，8.53(s，1H)，8.66(d，J＝8.24Hz，1H)。(ES+APCI)+：410[M+H]+。
中间体80
4-[[(7-氯噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-羰基)氨基]甲基]哌啶-1-甲酸叔丁酯
在冰冷却下，向搅拌着的中间体3(1.02g，2.4mmol)的乙腈(40ml)溶液中滴加SO2Cl2(0.39ml，4.8mmol)溶液。所得混合物在0℃下搅拌2小时，然后用饱和NaHCO3(水溶液)急冷。分离各层，用DCM萃取水相并将合并的有机萃取物洗涤(盐水)，干燥(MgSO4)并减压浓缩，得到灰白色固体(1g)，将其用于下一步骤而无需进一步纯化。
实施例1
7-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸
向中间体1(326mg，0.87mmol)的THF(6ml)溶液中加入2M NaOH(水溶液)(2ml)，并将混合物搅拌1小时。用2M HCl(水溶液)使反应物酸化并浓缩以除去THF，收集所得棕色沉淀物并经真空过滤进行干燥，得到深黄色固体(285mg，95％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.23(d，J＝5.95Hz，6H)，4.69(spt，J＝6.00Hz，1H)，6.82(td，J＝8.59，2.52Hz，1H)，7.04-7.12(m，1H)，7.86-7.95(m，1H)，8.55(s，1H)，9.42(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)349.0。
实施例2
7-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-N-甲基[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
在室温下，将实施例1(100mg，0.287mmol)、甲胺盐酸盐(20mg，0.287mmol)、EDC盐酸盐(55mg，0.287mmol)和HOBt(39mg，0.287mmol)的混合物的DCM(5ml)溶液搅拌过夜。再加入47mg甲胺盐酸盐并在室温下将反应混合物搅拌过夜。用DCM稀释反应混合物并预吸附到硅胶上，然后通过硅胶急骤柱层析纯化，用1∶1汽油∶EtOAc洗脱，得到黄色固体(17mg，16％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.30(d，J＝6.41Hz，6H)，2.90(d，J＝5.04Hz，3H)，4.73(dt，J＝12.25，6.01Hz，1H)，6.85(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.12(dd，J＝11.45，2.75Hz，1H)，8.15(dd，J＝9.16，6.41Hz，1H)，8.59(s，1H)，8.76-8.99(m，2H)。m/z(ES+APCI)+：362[M+H]+。
实施例3
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将实施例1(100mg，0.29mmol)、N，N-二甲基氨基丙胺(35μL，0.27mmol)、HATU(153mg，0.40mmol)、DIPEA(0.32ml，1.7mmol)和DMF(5ml)合并并搅拌过夜。用EtOAc稀释混合物并用水(3次)洗涤。将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(0-30％MeOH的DCM溶液)纯化化合物，得到产物(6mg，5％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.47(d，J＝6.41Hz，6H)，2.15(quin，J＝6.64Hz，2H)，2.67(s，6H)，2.94(t，J＝6.87Hz，2H)，3.70(q，J＝6.30Hz，2H)，4.62(spt，J＝6.00Hz，1H)，6.64-6.81(m，2H)，8.33(br.t，J＝5.50，5.50Hz，1H)，8.43(br.s，1H)，8.48(dd，J＝8.70，6.41Hz，1H)，8.64(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)433.1。
实施例4
7-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)-N-(吗啉-2-基甲基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将实施例1(75mg，0.22mmol)、2-(氨基甲基)吗啉-4-甲酸叔丁酯(46mg，0.22mmol)、HATU(115mg，0.30mmol)、DIPEA(0.2ml，1.1mmol)和DMF(1ml)合并并搅拌过夜。用EtOAc稀释混合物并用水(3次)洗涤。将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用40-100％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化化合物。将纯化的BOC保护的化合物溶于DCM(1ml)中，加入TFA(1ml)并搅拌30分钟。使混合物通过氨基丙基柱，用2M NH3的MeOH溶液洗脱，得到产物(28.9mg，30％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.48(d，J＝6.00Hz，6H)，2.68-2.78(m，1H)，2.90-2.97(m，2H)，3.05(d，J＝11.45Hz，1H)，3.36-3.46(m，1H)，3.69-3.85(m，3H)，3.94(dt，J＝11.00，2.30Hz，1H)，4.64(quin，J＝6.18Hz，1H)，6.69-6.82(m，2H)，7.59(br.t，J＝6.90，6.90Hz，1H)，8.60(s，1H)，8.67-8.72(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)447.1。
实施例5-14
类似于实施例3和实施例4，由7-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸和适当的任选被BOC保护的胺制备下表中的实施例5-14。
实施例15
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-[4-氟-2-[(1R，2R)-2-羟基环己氧基]苯胺基]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
在密封的微波反应器小瓶中将中间体70(36mg，0.16mmol)、中间体4(50mg，0.16mmol)、TFA(50μl)和IPA(750μl)合并并在Biotage微波反应器中在170℃下加热45分钟。将混合物蒸发并通过制备的LCMS纯化，得到黄色固体(20mg，26％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.12-1.42(m，4H)，1.51-1.60(m，2H)，1.63-1.73(m，2H)，1.77-1.86(m，1H)，1.98-2.07(m，1H)，2.12(s，6H)，2.27(t，J＝7.10Hz，2H)，332-3.43(m，2H)，3.53-3.61(m，1H)，3.97-4.05(m，1H)，5.15-5.22(m，1H)，6.81-6.88(m，1H)，7.14(dd，J＝10.53，2.75Hz，1H)，8.16(dd，J＝8.70，6.41Hz，1H)，8.56(s，1H)，8.68-8.77(m，1H)，9.27(s，1H)；(MH+)489.20。
实施例16
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-[4-氟-2-[(3R)-四氢吡喃-3-基]氧基-苯胺]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例15，由中间体4(75mg，0.241mmol)和4-氟-2-[(3R)-四氢吡喃-3-基]氧基-苯胺(101mg，0.721mmol)进行制备，得到黄色固体产物(18mg，21％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.38-1.52(m，1H)，1.64-1.73(m，2H)，1.75-1.88(m，2H)，1.90-2.02(m，1H)，2.10-2.17(m，6H)，2.28(t，J＝6.87Hz，2H)，3.34-3.43(m，2H)，3.50-3.60(m，3H)，3.69(dd，J＝11.91，2.29Hz，1H)，4.47-4.59(m，1H)，6.91(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.22(dd，J＝10.53，2.75Hz，1H)，8.17(dd，J＝9.16，6.41Hz，1H)，8.57-8.62(m，1H)，8.62-8.72(m，1H)，9.15(s，1H)；m/z(ES+APCI)+：475[M+H]+。
实施例17
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-[4-氟-2-[(3S)-四氢吡喃-3-基]氧基-苯胺]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例15，由中间体4(75mg，0.241mmol)和4-氟-2-[(3S)-四氢吡喃-3-基]氧基-苯胺(101mg，0.721mmol)进行制备，得到黄色固体产物(18mg，21％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.39-1.52(m，1H)，1.64-1.74(m，2H)，1.74-1.89(m，2H)，1.91-2.01(m，1H)，2.10-2.17(m，6H)，2.28(t，J＝6.87Hz，2H)，3.34-3.43(m，2H)，3.50-3.60(m，3H)，3.69(dd，J＝11.91，2.29Hz，1H)，4.50-4.57(m，1H)，6.90(td，J＝8.47，2.75Hz，1H)，7.21(dd，J＝10.53，2.75Hz，1H)，8.17(dd，J＝9.16，6.41Hz，1H)，8.60(s，1H)，8.62-8.70(m，1H)，9.15(s，1H)。m/z(ES+APCI)+：475[M+H]+。
实施例18
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-(3-氟-2-异丙氧基-苯胺基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例15，由中间体4(75mg，0.241mmol)和3-氟-2-异丙氧基-苯胺(122mg，0.721mmol)进行制备，得到黄色固体产物(18mg，21％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.28(d，J＝5.95Hz，6H)，1.65-1.75(m，2H)，2.14(s，6H)，2.29(t，J＝6.87Hz，2H)，3.38(q，J＝6.56Hz，2H)，4.71(spt，J＝6.11Hz，1H)，6.85(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.12(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.10(dd，J＝8.93，6.64Hz，1H)，8.56-8.59(m，1H)，8.89(br.s.，1H)，8.96(s，1H)。m/z(ES+APCI)+：433[M+H]+。
实施例19
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-[4-氟-2-[(1S，2S)-2-羟基环己氧基]苯胺基]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
在密封的微波反应器小瓶中将中间体74(54mg，0.24mmol)、N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-甲基硫烷基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺(75mg，0.24mmol)、TFA(50ul)和NMP(500μl)合并，并在Biotage微波反应器中在170℃下加热15分钟，然后在190℃下加热30分钟。将混合物蒸发并通过制备的LCMS纯化，得到黄色固体(14mg，12％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.12-1.42(m，4H)，1.50-1.61(m，2H)，1.63-1.73(m，2H)，1.78-1.85(m，1H)，1.99-2.07(m，1H)，2.12(s，6H)，2.27(t，J＝7.10Hz，2H)，3.32-3.41(m，2H)，3.53-3.61(m，1H)，3.98-4.05(m，1H)，5.18(d，J＝4.12Hz，1H)，6.82-6.88(m，1H)，7.14(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.13-8.19(m，1H)，8.56(s，1H)，8.72(t，J＝5.72Hz，1H)，9.27(s，1H)；m/z(ES+APCI)+：(MH+)489.2。
实施例20
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-[4-氟-2-[(1R，2R)-2-甲氧基环己氧基]苯胺基]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
在密封的微波反应器小瓶中将中间体72(115mg，0.48mmol)、中间体4(75mg，0.24mmol)、TFA(101μl，1.32mmol)和IPA(700μl)合并，并在Biotage微波反应器中在170℃下加热30分钟。将混合物蒸发并通过制备的LCMS纯化，得到黄色固体(57mg，47％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.10-1.35(m，3H)，1.37-1.48(m，1H)，1.49-1.60(m，2H)，1.63-1.72(m，2H)，1.88-1.97(m，1H)，1.97-2.06(m，1H)，2.13(s，6H)，2.27(t，J＝6.87Hz，2H)，3.19(s，3H)，3.33-3.44(m，3H)，4.20-4.27(m，1H)，6.81-6.88(m，1H)，7.11-7.17(m，1H)，8.17-8.23(m，1H)，8.58(s，1H)，8.79-8.86(m，1H)，8.99(s，1H)；m/z(ES+APCI)+：(MH+)503.3。
实施例21
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-[2-[(1S，2S)-1-乙基-2-甲氧基-丙氧基]-4-氟-苯胺基]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例19，由中间体76和中间体4制备实施例21，得到胶状固体(55mg，45％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.11-1.36(m，3H)，1.36-1.48(m，1H)，1.49-1.61(m，2H)，1.63-1.71(m，2H)，1.88-1.97(m，1H)，1.97-2.06(m，1H)，2.12(s，6H)，2.24-2.31(m，2H)，3.19(s，3H)，3.33-3.45(m，3H)，4.19-4.29(m，1H)，6.80-6.88(m，1H)，7.10-7.17(m，1H)，8.17-8.24(m，1H)，8.58(s，1H)，8.79-8.86(m，1H)，8.99(s，1H)；m/z(ES+APCI)+：(MH+)503.3。
实施例22
7-[2-(环戊氧基)-4-氟-苯胺基]-N-[3-(二甲氨基)丙基]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例19，由中间体4(68mg，0.22mmol)和2-环戊氧基-4-氟-苯胺(170mg，0.87mmol)进行制备，得到黄色固体(16mg，16％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.45-1.60(m，4H)，1.63-1.78(m，4H)，1.79-1.95(m，2H)，2.11-2.19(m，6H)，2.24-2.35(m，2H)，3.34-3.43(m，2H)，4.74-5.04(m，1H)，6.84(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.07(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.00(dd，J＝8.70，6.41Hz，1H)，8.56(s，1H)，8.75(br.s.，1H)，9.06(s，1H)；m/z(ES+APCI)+：(MH+)459。
实施例23
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-(2-异丙氧基苯胺基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例19，由中间体4(68mg，0.22mmol)和2-异丙氧基-苯胺(130μl，0.87mmol)进行制备，得到黄色固体(12mg，13％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.33(d，J＝6.41Hz，6H)，1.72(quin，J＝6.98Hz，2H)，2.16(s，6H)，2.31(t，J＝7.10Hz，2H)，3.36-3.42(m，2H)，4.68(quin，J＝6.07Hz，1H)，7.03(td，J＝7.56，1.83Hz，1H)，7.10-7.21(m，2H)，8.35(dd，J＝7.78，1.37Hz，1H)，8.64(s，1H)，8.95(s，1H)，8.99(t，J＝5.72Hz，1H)；m/z(ES+APCI)+：(MH+)415。
实施例24
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-(2-乙氧基-4-氟-苯胺基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例19，由中间体4(68mg，0.22mmol)和2-乙氧基-4-氟-苯胺(170mg，0.87mmol)进行制备，得到黄色固体(18mg，20％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.31(t，J＝6.87Hz，3H)，1.71(quin，J＝6.98Hz，2H)，2.10-2.18(m，6H)，2.29(t，J＝7.10Hz，2H)，3.38(q，J＝6.56Hz，2H)，4.18(q，J＝6.87Hz，2H)，6.86(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.10(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.08(dd，J＝8.70，6.41Hz，1H)，8.58(s，1H)，8.97(s，2H)；m/z(ES+APCI)+：(MH+)419。
实施例25
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-(3，3-二甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例19，由中间体4(50mg，0.16mmol)和3，3-二甲基吲哚啉(71mg，0.49mmol)进行制备，得到黄色固体(25mg，38％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.41(s，6H)，1.74(quin，J＝6.87Hz，2H)，2.18(s，6H)，2.33(t，J＝6.87Hz，2H)，3.42(q，J＝6.56Hz，2H)，4.62(s，2H)，7.13(td，J＝7.33，0.92Hz，1H)，7.28(ddd，J＝8.36，7.21，1.37Hz，1H)，7.37(dd，J＝7.33，0.92Hz，1H)，8.59(d，J＝7.78Hz，1H)，8.65-8.71(m，1H)，9.02(t，J＝5.95Hz，1H)；m/z(ES+APCI)+：(MH+)411.2。
实施例26
7-(2，3-二氢苯并呋喃-7-基氨基)-N-[3-(二甲氨基)丙基]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例19，由中间体4(70mg，0.23mmol)和2，3-二氢苯并呋喃-7-胺(91mg，0.65mmol)进行制备，得到黄色固体(25mg，27％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.71(quin，J＝6.98Hz，2H)，2.11-2.21(m，6H)，2.31(t，J＝6.87Hz，2H)，3.28(t，J＝8.93Hz，2H)，3.39(q，J＝6.87Hz，2H)，4.62(t，J＝8.70Hz，2H)，6.85-6.95(m，1H)，7.10(dd，J＝7.33，0.92Hz，1H)，7.88(d，J＝8.24Hz，1H)，8.60(s，1H)，8.82(br.s.，1H)，9.14(t，J＝5.50Hz，1H)；m/z(ES+APCI)+：(MH+)399。
实施例27
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-吲哚啉-1-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例19，由中间体4(60mg，0.19mmol)和吲哚啉(65μl，0.57mmol)进行制备，得到灰白色固体(35mg，48％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.58-1.79(m，2H)，2.16(s，6H)，2.26-2.36(m，2H)，3.30-3.43(m，4H)，4.82-4.94(m，2H)，7.03-7.13(m，1H)，7.23-7.31(m，1H)，7.36(d，J＝7.33Hz，1H)，8.62-8.70(m，2H)，9.15(t，J＝5.95Hz，1H)。m/z(ES+APCI)+：(MH+)383。
实施例28
N-(氮杂环丁烷-3-基)-7-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
步骤1：
3-{[(7-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基)羰基]氨基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯
在室温下，将实施例1(400mg，1.15mmol)、3-氨基-1-N-Boc-氮杂环丁烷(197mg，1.15mmol)和DIPEA(1.0ml，5.75mmol)的混合物的DMF(10ml)溶液搅拌10分钟。加入HATU(611mg，1.61mmol)并在室温下将混合物搅拌过夜。然后用EtOAc和水稀释反应混合物。用水(3次)和盐水(1次)洗涤有机相，干燥并浓缩。通过硅胶急骤柱层析纯化粗产物，用1∶1汽油∶EtOAc洗脱，得到黄色固体(280mg，49％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.29(d，J＝5.95Hz，6H)，1.39(s，9H)，3.90-4.01(m，2H)，4.09-4.21(m，2H)，4.63-4.77(m，2H)，6.85(td，J＝8.47，2.75Hz，1H)，7.12(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.10(dd，J＝8.70，6.41Hz，1H)，8.59(s，1H)，9.01(s，1H)，9.54(d，J＝7.78Hz，1H)。m/z(ES+APCI)+：503[M+H]+。
步骤2：
在室温下，将3-{[(7-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基)羰基]氨基}氮杂环丁烷-1-甲酸叔丁酯(278mg，0.554mmol)的3∶1 DCM∶TFA(20ml)溶液搅拌2小时。将反应浓缩至干燥。将甲苯加入到残留物中并将混合物再次浓缩至干燥。将残留物溶于MeOH中并使溶液通过SCX柱。用2M NH3的MeOH溶液洗脱产物。浓缩洗脱液并通过硅胶急骤柱层析纯化残留物，用20∶1 DCM∶2M NH3的MeOH溶液洗脱，得到黄色固体(176mg，79％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.28(d，J＝5.95Hz，6H)，3.52-3.72(m，4H)，4.62-4.82(m，2H)，6.85(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.12(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.04(dd，J＝8.93，6.64Hz，1H)，8.57(s，1H)，9.21(br.s.，1H)。m/z(ES+APCI)+：403[M+H]+。
实施例29-31
类似于实施例28，通过将实施例1偶合到适当的N-BOC保护的二胺上，接着去保护来制备以下所示通式的实施例29-31。
实施例29
7-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-N-[3-(甲氨基)丙基][1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
所使用的胺起始物质：N-(3-氨基丙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.28(d，J＝6.41Hz，6H)，1.71(quin，J＝6.87Hz，2H)，2.30(s，3H)，2.54-2.62(m，2H)，3.40(t，J＝6.87Hz，3H)，4.60-4.78(m，1H)，6.85(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.12(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.10(dd，J＝8.93，6.64Hz，1H)，8.57(s，1H)，8.95(br.s.，1H)；m/z(ES+APCI)+：419[M+H]+。
实施例30
7-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-N-[2-(甲基氨基)乙基][1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
所使用的胺起始物质：N-(2-氨基乙基)-N-甲基-氨基甲酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.20-1.34(m，6H)，2.33(s，3H)，2.72(t，J＝6.18Hz，2H)，3.40-3.54(m，2H)，4.61-4.79(m，1H)，6.84(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.10(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，8.07(dd，J＝9.16，6.41Hz，1H)，8.52-8.62(m，2H)，9.13(br.s.，1H)；m/z(ES+APCI)+：405[M+H]+。
实施例31
7-{[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基]氨基}-N-(哌啶-4-基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
所使用的胺起始物质：4-氨基哌啶-1-甲酸叔丁酯。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.18-1.32(m，6H)，1.38-1.55(m，2H)，1.80(d，J＝9.16Hz，2H)，2.52-2.60(m，2H)，2.90-3.01(m，2H)，3.16(br.s.，1H)，3.76-3.93(m，1H)，4.70(spt，J＝6.03Hz，1H)，6.84(td，J＝8.70，2.75Hz，1H)，7.11(dd，J＝10.99，2.75Hz，1H)，7.96-8.04(m，1H)，8.46(br.s.，1H)，8.56(s，1H)，9.19(br.s.，1H)；m/z(ES+APCI)+：431[M+H]+。
实施例32-39
类似于实施例3，通过实施例1与适当的胺的酰胺偶联来制备以下所示通式的实施例32-39。
*具有Xbridge C18柱(3.5μm粒度和4.6×30mm)和二极管阵列UV检测器的Agilent6120四极LC-MS。流速：3ml/min；
方法A pH 1；运行时间：3.2分钟：溶剂A：0.1％的三氟乙酸水溶液，溶剂B：甲醇；梯度-10％-100％甲醇；梯度时间：2.35分钟。
方法B pH 10；运行时间：3.2分钟：溶剂A：0.1％的氢氧化铵水溶液，溶剂B：甲醇；梯度-10％-100％甲醇；梯度时间：2.35分钟。
方法C pH 1；运行时间：3.2分钟：溶剂A：0.1％的三氟乙酸水溶液，溶剂B：乙腈；梯度-10％-100％乙腈；梯度时间：2.35分钟。
方法D pH 10；运行时间：3.2分钟：溶剂A：0.1％的氢氧化铵水溶液，溶剂B：乙腈；梯度-10％-100％乙腈；梯度时间：2.35分钟。
实施例40
7-(1′-甲基螺[吲哚-3，4′-哌啶]-1(2H)-基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
搅拌中间体18(78mg，0.262mmol)和1′-甲基-1，2-二氢螺-[吲哚-3，4′-哌啶](53mg，0.262mmol)的混合物的IPA(3ml)溶液并在80℃下加热4小时。使混合物冷却至室温，用MeOH稀释并将所得溶液通过SCX柱。用2M NH3的MeOH溶液洗脱，浓缩洗脱液。通过硅胶进行急骤柱层析纯化残留物，用50∶1至25∶1的DCM∶2M NH3的MeOH溶液洗脱。用EtOAc从层析材料中重结晶，得到淡黄色固体(10mg，8％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.61-1.77(m，4H)，1.82-2.03(m，4H)，2.07-2.28(m，5H)，2.75-2.87(m，2H)，3.46(td，J＝11.33，2.06Hz，2H)，3.85-3.95(m，2H)，4.00-4.15(m，1H)，4.79(s，2H)，7.09-7.17(m，1H)，7.27-7.35(m，1H)，7.38(d，J＝7.33Hz，1H)，8.55(d，J＝8.24Hz，1H)，8.62-8.74(m，2H)。m/z(ES+APCI)+：465[M+H]+。
实施例41
7-(螺[环戊烷-1，3′-吲哚]-1′(2′H)-基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
以类似于实施例40的方式制备实施例41。通过过滤反应混合物来分离产物，得到不需要进一步纯化的黄色固体(产率70％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.59-2.07(m，12H)，3.43(td，J＝11.45，2.29Hz，2H)，3.84-4.12(m，4H)，4.70(s，2H)，7.13(td，J＝7.33，0.92Hz，1H)，7.25-7.32(m，1H)，7.37(dd，J＝7.33，0.92Hz，1H)，8.61(dd，J＝11.22，8.01Hz，2H)，8.69(s，1H)。m/z(ES+APCI)+：436[M+H]+。
实施例42
7-(5-氰基-2，3-二氢-1H-吲哚-1-基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
以类似于实施例40的方式制备实施例42。通过过滤反应混合物来分离产物，得到不需要进一步纯化的灰白色固体(产率68％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.69-1.88(m，4H)，3.31-3.46(m，4H)，3.87-3.97(m，2H)，4.01-4.18(m，1H)，4.95(t，J＝8.70Hz，2H)，7.69-7.81(m，2H)，8.70-8.86(m，3H)。m/z(ES+APCI)+：407[M+H]+。
实施例43
7-(2，3-二氢-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶-1-基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将中间体18(100mg，0.334mmol)、2，3-二氢-1H-吡咯并[3，2-c]吡啶(52mg，0.435mmol)、binap(10.4mg，0.017mmol)、叔丁醇钠(96mg，1.00mmol)和乙酸钯(II)(3.7mg，0.017mmol)的混合物的甲苯(2ml)溶液脱气，置于氮气下并搅拌并在100℃下加热过夜。然后将反应混合物浓缩至干燥。用EtOAc和水稀释残留物。用水和盐水洗涤有机相。用DCM再萃取水相。将有机萃取物合并，干燥并浓缩。通过硅胶急骤柱层析纯化粗产物，用20∶1 DCM∶MeOH洗脱，得到黄色固体(34mg，27％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.71-1.88(m，4H)，3.34-3.48(m，4H)，3.87-3.97(m，2H)，4.02-4.18(m，1H)，4.89-4.99(m，2H)，8.41(d，J＝5.50Hz，1H)，8.46-8.51(m，2H)，8.74-8.86(m，2H)；m/z(ES+APCI)+：383[M+H]+。
实施例44
7-(2，3-二氢-1H-吡咯并[3，2-b]吡啶-1-基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
以类似于实施例43的方式制备实施例44。将粗产物溶于MeOH/DCM中，并通过SCX柱，用2M NH3的甲醇溶液洗脱产物。将洗脱液浓缩至干燥，并将残留物与Et2O一起研磨，得到橙色/棕色固体(产率27％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.68-1.92(m，4H)，3.34-3.51(m，4H)，3.84-3.99(m，2H)，4.00-4.19(m，1H)，4.94(t，J＝8.47Hz，2H)，7.27(dd，J＝8.01，4.81Hz，1H)，8.19(dd，J＝4.81，1.14Hz，1H)，8.71(s，1H)，8.76-8.90(m，2H)；m/z(ES+APCI)+：383[M+H]+。
实施例45
N-(1-甲基哌啶-4-基)-7-(5-硝基-2，3-二氢-1H-吲哚-1-基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将中间体78(320mg，0.933mmol)的亚硫酰氯(4ml)溶液加热回流3小时。然后将反应混合物浓缩至干燥。将粗酰基氯溶于DCM(8ml)中并加入TEA(0.919ml，2.80mmol)。在冰冷却下滴加1-甲基哌啶-4-胺(160mg，1.40mmol)的DCM(2ml)溶液。使混合物温热至室温并搅拌过夜。用DCM和水稀释混合物，并将有机相干燥并浓缩。在硅胶上预吸附粗产物，然后通过硅胶急骤柱层析纯化，用20∶1 DCM∶2M NH3的甲醇溶液洗脱，得到黄色固体(268mg，65％)。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.73-1.86(m，4H)，1.96(br.s.，2H)，2.19(s，3H)，2.76-2.90(m，2H)，3.38-3.50(m，2H)，3.74-3.86(m，1H)，5.02(t，J＝8.70Hz，2H)，8.19-8.26(m，2H)，8.73-8.86(m，3H)；m/z(ES+APCI)+：440[M+H]+。
实施例46
7-[5-(乙酰氨基)-2，3-二氢-1H-吲哚-1-基]-N-(1-甲基哌啶-4-基)[1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将乙酰氯(16μl，0.216mmol)加入到中间体79(59mg，0.144mmol)和TEA(40μl，0.289mmol)的混合物的DCM(4ml)溶液中。在室温下将反应混合物搅拌4小时，然后浓缩至干燥。将残留物预吸附到硅胶上，然后通过硅胶急骤柱层析纯化，用10∶1 DCM∶2M NH3的甲醇溶液洗脱，得到黄色固体。通过用EtOAc研磨来进一步纯化经层析的固体，得到黄色固体(30mg，46％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.71-1.93(m，4H)，1.97-2.42(m，8H)，2.78-3.05(m，2H)，3.25-3.42(m，2H)，3.75-3.97(m，1H)，4.89(t，J＝8.24Hz，2H)，7.34(d，J＝8.70Hz，1H)，7.74(s，1H)，8.51-8.66(m，2H)，8.76(d，J＝8.24Hz，1H)，9.99(s，1H)；m/z(ES+APCI)+：452[M+H]+。
实施例47
N-[4-氟-2-(丙-2-基氧基)苯基][1，3]噻唑并[5，4-d]嘧啶-7-胺
将7-氯噻唑[5，4-d]嘧啶(50mg，0.292mmol)、甲苯-4-磺酸(6mg，0.032mmol)、4-氟异丙氧基苯胺(49mg，0.290mmol)和IPA(2ml)密封在微波反应器小瓶中并在Biotage I-60微波反应器中在170℃下照射15分钟。将反应混合物浓缩并将残留物溶于20％MeOH的DCM溶液中并通过氨丙基柱。通过用20％MeOH的DCM溶液洗涤来回收产物。浓缩溶液，通过急骤柱层析纯化粗产物，用10-20％的EtOAc/石油醚进行洗脱，得到淡粉红色固体(52mg，58％)。1HNMR(400MHz，氯仿-d)δ1.44(d，J＝5.95Hz，6H)，4.56-4.64(m，1H)，6.69-6.77(m，2H)，8.58-8.62(m，1H)，8.64-8.65(m，1H)，8.67-8.72(m，1H)，8.88(s，1H)；m/z(ES+APCI)+：304[M+H]+。
实施例48
[7-(4-氟-2-异丙氧基-苯胺基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基]甲醇
向中间体1(50mg，0.13mmol)的THF(10ml)溶液中滴加1M氢化铝锂溶液(0.26ml，0.26mmol)并搅拌2小时。小心地加入水(10μL)，随后加入10μL 15％NaOH(水溶液)，最后加入0.5ml水。加入DCM，将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用10-50％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化化合物，得到浅黄色固体(18mg，41％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.44(d，J＝6.00Hz，6H)，4.61(spt，J＝6.03Hz，1H)，5.09(s，2H)，6.67-6.79(m，2H)，8.49(s，1H)，8.62(s，1H)，8.66(dd，J＝8.93，6.18Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)335.1。
实施例49
N-(4-哌啶基甲基)-7-[4-[[3-(三氟甲基)苯基]氨基甲酰基氨基]苯胺基]噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
向中间体3(75mg，0.18mmol)的DCM(10ml)溶液中加入m-CPBA(79mg，0.36mmol)并将混合物搅拌2小时。加入1-(4-氨基苯基)-3-[3-(三氟甲基)-苯基]脲(52mg，0.18mmol)的二恶烷(5ml)溶液并在60℃下加热过夜。将混合物冷却，加入DCM和水，将有机层分离、干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析(用30-100％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)纯化化合物，得到黄色固体。将固体溶于DCM(5ml)中，加入TFA(0.75ml)并搅拌15分钟。浓缩混合物并通过HPLC纯化，得到黄色固体；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.08-1.22(m，2H)，1.62-1.76(m，2H)，1.73(s，1H)，2.51-2.60(m，2H)，3.01(d，J＝11.5Hz，2H)，3.25(t，J＝6.2Hz，2H)，7.29(d，J＝7.8Hz，1H)，7.45-7.54(m，3H)，7.55-7.62(m，1H)，7.78(d，J＝8.7Hz，2H)，8.04(s，1H)，8.57(s，1H)，8.66(br.t，1H)，9.01(br.s.，1H)，9.23(br.s.，1H)，9.84(br.s.，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)571.1。
实施例50
7-(1H-吲唑-5-基氨基)-N-(4-哌啶基甲基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例49，由中间体3和5-氨基吲唑制备实施例50。1H NMR(400MHz，MeOD)δppm 1.25-1.39(m，2H)1.79-1.93(m，3H)2.68(td，J＝12.48，2.52Hz，2H)3.09-3.19(m，2H)3.38(d，J＝6.41Hz，2H)7.57-7.63(m，1H)7.66-7.73(m，1H)8.08(d，J＝0.92Hz，1H)8.28(d，J＝1.83Hz，1H)8.51(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)409.2。
实施例51-54
向中间体3(400mg，0.90mmol)的DCM(20ml)溶液中加入m-CPBA(317mg，1.8mmol)，并将所得混合物搅拌2.5小时，然后减压浓缩。将残留物溶解于1，4-二恶烷(16ml)中，将其分成四等份，在合适的胺(0.45mmol)存在下在密封管中加热至90℃，过夜。将溶剂蒸发并将残留物悬浮于4M HCl的二恶烷(4ml)溶液中，并在室温下搅拌3小时。对溶剂进行减压浓缩并通过制备的LCMS纯化残留物，得到期望的化合物。
实施例55
7-[(2-异丙氧基-3-吡啶基)氨基]-N-(4-哌啶基甲基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例51-54来制备。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.02-1.16(m，2H)，1.32(d，J＝6.41Hz，6H)，1.58-1.72(m，3H)，2.38-2.48(m，2H)，2.89-2.98(m，2H)，3.20-3.27(m，2H)，5.33(quin，J＝6.18Hz，1H)，7.02-7.10(m，1H)，7.94-8.00(m，1H)，8.50(dd，J＝7.79，1.37Hz，1H)，8.65(s，1H)，8.71-8.81(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)428。
实施例56-63
类似于实施例51，使用合适的胺类进行制备。
*具有Xbridge C 18柱(3.5μm粒度和4.6×30mm)和二极管阵列UV检测器的Agilent 6120四极LC-MS。流速：3ml/min；
方法A pH 1；运行时间：3.2分钟：溶剂A：0.1％的三氟乙酸水溶液，溶剂B：甲醇；梯度-10％-100％甲醇；梯度时间：2.35分钟。
方法B pH 10；运行时间：3.2分钟：溶剂A：0.1％的氢氧化铵水溶液，溶剂B：甲醇；梯度-10％-100％甲醇；梯度时间：2.35分钟。
方法C pH 1；运行时间：3.2分钟：溶剂A：0.1％的三氟乙酸水溶液，溶剂B：乙腈；梯度-10％-100％乙腈；梯度时间：2.35分钟。
方法D pH 10；运行时间：3.2分钟：溶剂A：0.1％的氢氧化铵水溶液，溶剂B：乙腈；梯度-10％-100％乙腈；梯度时间：2.35分钟。
实施例64
N-[3-(二甲氨基)丙基]-7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将中间体8(50mg，0.16mmol)和亚硫酰氯(2ml)加热回流4小时。将混合物冷却并浓缩，得到橙色固体，将该橙色固体溶于DCM(3ml)中。加入三乙胺(65μL，2.3mmol)，随后加入N，N-二甲氨基丙胺(24mg，0.32mmol)并将所得混合物搅拌过夜。浓缩混合物并通过HPLC纯化，得到产物(7.5mg，6％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.68(quin，J＝7.3Hz，2H)，2.13(s，6H)，2.28(t，J＝6.9Hz，2H)，3.30-3.39(m，4H)，4.87(t，J＝8.2Hz，2H)，7.07(td，J＝9.7，2.8Hz，1H)，7.19(dd，J＝8.2，2.8Hz，1H)，8.60-8.66(m，2H)，9.11(t，J＝5.7Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)401.1。
类似于实施例64，由中间体8和合适的任选被BOC保护的胺来制备下表中的实施例65-80。
实施例81
[7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基]甲醇
向中间体7(250mg，7.3mmol)的THF(25ml)溶液中滴加1M氢化铝锂的THF(0.15ml，0.15mmol)溶液并搅拌2.5小时。向混合物中小心地加入0.15ml水，然后加入0.15ml 15％NaOH(水溶液)，最后加入3ml水。过滤混合物以除去固体。用EtOAc和水稀释滤液，将有机层分离、干燥并浓缩，得到黄色固体。将其与最少量的EtOAc一起研磨，得到黄色固体(60mg，27％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.23(t，J＝8.47Hz，2H)，4.76(t，J＝8.47Hz，2H)，4.82(d，J＝5.95Hz，2H)，6.37(t，J＝6.00Hz，1H)，7.03(td，J＝9.20，2.80Hz，1H)，7.16(dt，J＝8.20，1.40Hz，1H)，8.50-8.59(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)303.0。
实施例82
2-[7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基]丙-2-醇
向中间体7(250mg，7.3mmol)的THF(5ml)溶液中滴加3M甲基氯化镁的THF(0.74ml，2.2mmol)溶液并搅拌30分钟。然后加入饱和氯化铵，然后加入EtOAc。将有机层分离、干燥并浓缩，得到黄色固体。将其与最小量的EtOAc一起研磨并滤出固体，得到灰白色固体2-[7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基]丙-2-醇(138mg，58％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.57(s，6H)，3.27(t，J＝8.40Hz，2H)，4.80(t，J＝8.50Hz，2H)，6.34(s，1H)，7.05(td，J＝9.16，2.75Hz，1H)，7.14-7.24(m，1H)，8.49-8.61(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)331.0。
实施例83
7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-胺
向中间体10(100mg，0.20mmol)的MeOH(20ml)悬浮液中加入NaOMe(110mg，2.0mmol)并将混合物回流过夜。将反应混合物冷却，形成沉淀，将其收集并经真空过滤进行干燥，得到浅粉色固体7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-胺(36mg，46％)；1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.13-3.20(m，2H)，4.71(t，J＝8.70Hz，2H)，6.99(td，J＝9.04，2.98Hz，1H)，7.13(dd，J＝8.47，2.98Hz，1H)，7.72(s，2H)，8.30(s，1H)，8.34(dd，J＝8.70，5.04Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)288.0。
实施例84
N-(7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基)四氢呋喃-3-甲酰胺
在室温下，将四氢-3-糠酸(30mg，0.250mmol)加入到搅拌着的实施例83(75mg，0.248mmol)、HATU(141mg，0.366mol)、DIPEA(0.29mL，1.57mmol)和DMF(4mL)的悬浮液中。在室温下将所得悬浮液搅拌24小时，得到橙色悬浮液。滤出固体并通过HPLC纯化滤液，得到黄色固体(12mg，13％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.50(s，2H)，7.15(dd，J＝9.16，2.75Hz，1H)，7.02(dd，J＝9.16，2.75Hz，1H)，4.80(t，J＝9.16Hz，2H)，4.58(d，J＝2.75Hz，1H)，3.94(m，1H)，3.81(m，1H)，3.23(t，J＝8.24Hz，2H)，2.20(m，1H)，1.97(m，1H)，1.86(m，2H)，1.71(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)386.0。
实施例85
N1-(7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基)-N3，N3-二甲基丙烷-1，3-二胺
在室温下，将3-二甲基氨基-1-丙基氯盐酸盐(33mg，0.209mmol)加入到搅拌着的中间体11(50mg，0.174mmol)和碳酸钾(47mg，0.348mmol)的DMF(2mL)悬浮液中。在80℃下将所得悬浮液搅拌24小时，得到橙色悬浮液。滤出固体并通过HPLC纯化滤液，得到黄色固体(15mg，24％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.27(m，3H)，7.08(dd，J＝8.70，2.75Hz，1H)，6.95(d，J＝3.21Hz，1H)，4.70(t，J＝8.70Hz，2H)，3.36(m，2H)，3.16(t，J＝8.24Hz，2H)，2.28(t，J＝6.87，2H)，2.12(s，6H)，1.71(t，J＝7.10Hz，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)373.2。
类似于实施例85，由中间体11和合适的胺制备下表中的实施例86-88。
实施例89
3-((7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-基)氧基)-N，N-二甲基丙-1-胺
将NaH在矿物油中的60％分散体(6mg，0.149mmol)加入到3-二甲氨基-1-丙醇(16mg，0.157mmol)的THF(10mL)溶液中，并在室温下搅拌1小时。然后将其用中间体11(50mg，0.142mmol)处理，并在室温下搅拌过夜。收集绿色沉淀物并通过真空过滤进行干燥，然后通过HPLC纯化。获得的产物为白色固体(5mg，9％)；1H NMR(400MHz，1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.97-2.05(m，2H)2.23-2.27(m，6H)2.45(t，J＝7.10Hz，2H)3.18-3.26(m，2H)4.58(t，J＝6.41Hz，2H)4.73-4.79(m，2H)6.87-6.96(m，2H)8.41-8.49(m，2H)；LCMS：(MH+)374.1。
实施例90
7-(7-氟吲哚啉-1-基)-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将亚硫酰氯(2ml)加入到中间体14(75mg，0.24mmol)中并在80℃下加热3小时。将混合物冷却并浓缩，得到橙色胶状物。将该橙色胶状物溶于DCM中，加入4-氨基四氢吡喃(48mg，048mmol)并搅拌过夜。用DCM和水稀释混合物，将有机层分离、干燥并浓缩，得到黄色固体。通过HPLC纯化将其纯化，得到黄色固体(26mg，28％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.55-1.67(m，2H)，1.96-2.09(m，2H)，3.30(t，J＝7.79Hz，2H)，3.56(td，J＝11.56，2.06Hz，2H)，3.94-4.07(m，2H)，4.12-4.28(m，1H)，4.67(t，J＝7.80Hz，2H)，6.92-7.05(m，2H)，7.06-7.17(m，2H)，8.68(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)400.0。
实施例91
7-(5-氯-7-氟-吲哚啉-1-基)-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
实施例91在形成实施例90的期间作为副产物分离(7.1mg)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.59-1.70(m，2H)，2.04(dd，J＝12.59，2.52Hz，2H)，3.29(t，J＝7.79Hz，2H)，3.57(td，J＝11.56，2.06Hz，2H)，3.97-4.07(m，2H)，4.14-4.28(m，1H)，4.69(t，J＝8.01Hz，2H)，6.99(d，J＝7.80Hz，1H)，7.05(dd，J＝10.08，1.83Hz，1H)，7.13(d，J＝1.40Hz，1H)，8.69(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)434/436。
类似于实施例90，由中间体14和适当的胺制备下表中的实施例92和93。
实施例94
7-吲哚啉-1-基-N-(4-哌啶基甲基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将亚硫酰氯(5ml)加入到中间体16(50mg，0.17mmol)中并将悬浮液加热回流1小时。将所得溶液浓缩，得到深橙色固体。将酰基氯溶于DCM(2mL)中，加入三乙胺(51mg，0.50mmol)，然后加入4-(氨基甲基)-1-BOC-哌啶。在室温下将该混合物搅拌30分钟。将TFA(1ml)加入到混合物中并搅拌30分钟。浓缩混合物，并通过HPLC纯化，得到黄色固体(4.7mg，8％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 8.68(s，1H)，8.66(d，J＝8.70Hz，1H)，7.32(d，J＝7.79Hz，2H)，7.24(t，J＝6.41Hz，1H)，7.11(td，J＝7.79，1.83Hz，1H)，4.84(t，J＝8.24Hz，2H)，3.43(t，J＝6.87Hz，2H)，3.37(t，J＝8.70Hz，2H)，3.14(dt，J＝11.90，4.10Hz，2H)，2.64(td，J＝12.36，2.75Hz，2H)，1.85(m，1H)，1.78(m，2H)，1.28(qd，J＝11.91，3.66Hz，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)395.1。
实施例95-104
类似于实施例94，由中间体16和合适的任选被BOC保护的胺来制备下表中的实施例95-104。
一般方法：将亚硫酰氯(30ml)加入到中间体16(650mg，2.18mmol)中并将悬浮液加热回流30分钟。将所得溶液浓缩，得到深橙色固体。将酰基氯溶于DCM(32mL)中并加入三乙胺(0.13mL，0.94mmol)。将等分试样加入到11个含有所需的胺(0.24mmol)的DCM(0.2mL)溶液的反应小瓶中。在室温下将混合物搅拌过夜。
除了实施例97和98之外的所有后处理：通过真空过滤来收集固体，并通过柱层析或制备的LCMS纯化。
实施例97和98的后处理：向混合物中加入TFA(1ml)并搅拌30分钟。将混合物浓缩并通过制备的LCMS进行纯化。
实施例105
7-(5-氟-3，3-二甲基-吲哚啉-1-基)-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将5-氟-3，3-二甲基-吲哚啉(28mg，0.17mmol)、中间体18(50mg，0.17mmol)和丙-2-醇(2ml)合并，密封在微波管中，并在加热块中在80℃下加热4小时。将混合物冷却，此时形成了黄色沉淀物。通过真空过滤来收集该沉淀物，载于二氧化硅上，并通过柱层析(用0-5％MeOH的DCM溶液进行梯度洗脱)纯化，得到黄色固体(24mg，33％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.39(s，6H)，1.76-1.85(m，4H)，3.36-3.45(m，2H)，3.85-3.96(m，2H)，3.97-4.14(m，1H)，4.65(s，2H)，7.11(td，J＝9.16，2.75Hz，1H)，7.29(dd，J＝8.70，2.75Hz，1H)，8.57(dd，J＝8.93，4.81Hz，1H)，8.62(d，J＝8.24Hz，1H)，8.67(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)428.1。
实施例106
7-吲哚啉-1-基-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-D]嘧啶-2-甲酰胺
将中间体18(50mg，0.17mmol)、吲哚啉(20mg，0.17mmol)和丙-2-醇(2ml)合并，密封在微波管中，在80℃下热加热1.5小时。将混合物冷却，此时形成了黄色沉淀物。收集该沉淀物并通过真空过滤进行干燥，得到黄色固体(45mg，70％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.71-1.86(m，4H)，3.34-3.37(m，2H)，3.37-3.45(m，2H)，3.87-3.96(m，2H)，4.02-4.19(m，1H)，4.91(t，J＝8.40Hz，2H)，7.09(td，J＝7.33，0.92Hz，1H)，7.28(t，J＝7.33Hz，1H)，7.37(d，J＝7.33Hz，1H)，8.62-8.71(m，2H)，8.77(d，J＝8.70Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)382.0。
类似于实施例105，由中间体18和合适的吲哚啉来制备下表中的实施例107-113。
实施例115
7-[3-[2-(甲氨基)乙基]吲哚啉-1-基]-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
向实施例110(23mg，0.05mmol)的DCM(1ml)溶液中加入三乙胺(15μL，0.1mmol)和甲烷磺酰氯(6mg，0.05mmol)，并搅拌45分钟。加入33％甲胺的EtOH(1ml)溶液并搅拌过夜。将该混合物浓缩并通过HPLC进行纯化。得到7-[3-[2-(甲氨基)乙基]吲哚啉-1-基]-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺(8.8mg，37％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm1.62-1.74(m，2H)，1.85-1.91(m，1H)，2.01-2.05(m，2H)，2.11-2.16(m，1H)，2.53(s，3H)，2.77-2.94(m，2H)，3.50-3.66(m，3H)，3.97-4.08(m，2H)，4.15-4.29(m，1H)，4.52(dd，J＝11.91，5.50Hz，1H)，4.92(dd，J＝11.91，9.16Hz，1H)，7.04-7.13(m，1H)，7.22-7.25(m，1H)，7.27-7.32(m，2H)，8.61(d，J＝8.24Hz，1H)，8.67(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)439.1。
实施例116
7-(5-异丙氧基吲哚啉-1-基)-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
在室温下，将实施例114(26mg，0.06mmol)、K2CO3(18mg，0.13mmol)和2-溴丙烷(9μl，0.09mmol)在DMF(1ml)中搅拌18小时。另外添加2当量的2-溴丙烷和1当量的K2CO3并继续搅拌另外4小时。用水急冷混合物并用DCM萃取。用水洗涤有机相并浓缩。通过急骤层析来纯化，得到黄色固体(25mg，94％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.22-1.31(m，6H)，1.70-1.87(m，4H)，3.24-3.47(m，4H)，3.84-3.99(m，2H)，4.08(d，J＝7.78Hz，1H)，4.50-4.67(m，1H)，4.88(t，J＝8.24Hz，2H)，6.82(dd，J＝8.93，2.52Hz，1H)，6.95(d，J＝2.29Hz，1H)，8.57(d，J＝9.16Hz，1H)，8.60(s，1H)，8.74(d，J＝8.70Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)440。
实施例117
7-吲哚-1-基-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
向中间体18(50mg，0.17mmol)的二恶烷(3ml)溶液中加入吲哚(20mg，0.17mmol)、Cs2CO3(109mg，0.34mmol)和Xantphos(9.7mg，0.017mmol)。对混合物进行脱气，然后加入Pd(OAc)2(7.7mg，0.0085mmol)。用氮气吹扫反应混合物，然后在90℃下加热18小时。使混合物冷却至室温，浓缩到硅胶上并进行急骤层析(用0至50％的乙酸乙酯/石油醚进行梯度洗脱)，得到棕色固体，将其与甲醇一起研磨并干燥，得到灰白色固体(25mg，39％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.65-1.85(m，2H)，2.09(dd，J＝12.59，2.06Hz，2H)，3.59(td，J＝11.91，2.29Hz，2H)，4.07(dd，J＝9.85，2.06Hz，2H)，4.19-4.37(m，1H)，6.91(d，J＝3.66Hz，1H)，7.14(d，J＝8.24Hz，1H)，7.31-7.39(m，1H)，7.39-7.47(m，1H)，7.69(d，J＝6.87Hz，1H)，8.90(d，J＝3.66Hz，1H)，8.94-9.00(m，1H)，9.05(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)380。
实施例118
7-[3-甲基-3-[2-(甲氨基)乙基]吲哚啉-1-基]-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
以与实施例115类似的方式，由实施例113制备实施例118。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.45(s，3H)，1.62-1.74(m，2H)，1.86-2.00(m，2H)，2.00-2.10(m，2H)，2.34(s，3H)，2.43-2.53(m，1H)，2.57-2.67(m，1H)，3.55(td，J＝11.68，1.83Hz，2H)，4.02(d，J＝11.45Hz，2H)，4.16-4.30(m，1H)，4.42(d，J＝11.45Hz，1H)，4.76(d，J＝11.45Hz，1H)，7.05-7.16(m，2H)，7.18-7.23(m，1H)，7.27-7.33(m，1H)，8.55(d，J＝8.24Hz，1H)，8.62-8.67(m，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)453.1。
实施例119
7-[3-(氨基甲基)吲哚啉-1-基]-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
向实施例109(50mg，0.12mmol)的THF(3ml)溶液中加入三乙胺(35μL，2.4mmol)和甲烷磺酰氯(10μL，0.12mmol)并搅拌1小时。将混合物浓缩，溶于DMF中，加入邻苯二甲酰亚胺化钾(27mg，0.15mmol)，并在80℃下将反应过夜加热。将混合物冷却，加入EtOAc和水，将有机相分离、干燥和浓缩。将残留物溶于EtOH中，加入2当量的肼并加热回流3小时。将混合物冷却，通过过滤除去沉淀的固体并浓缩滤液。通过LCMS纯化，得到所需产物(2.3mg，5％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.64-1.76(m，2H)，1.99-2.07(m，2H)，2.94-3.06(m，1H)，3.09-3.20(m，1H)，3.51-3.64(m，3H)，4.03(m，J＝10.50Hz，2H)，4.19-4.29(m，1H)，4.76(dd，J＝11.90，4.60Hz，1H)，4.89(dd，J＝11.90，9.20Hz，1H)，7.08-7.15(m，1H)，7.26(d，J＝5.04Hz，1H)，7.30-7.36(m，2H)，8.63-8.70(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)411.1。
实施例120
7-[3-(甲氨基甲基)吲哚啉-1-基]-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
向实施例109(50mg，0.12mmol)的THF(3ml)溶液中加入三乙胺(35μL，2.4mmol)和甲烷磺酰氯(10μL，0.12mmol)并搅拌1小时。向混合物中加入过量的33％甲胺的乙醇溶液，小瓶密封并在50℃下加热过夜。将混合物浓缩后进行HPLC纯化，得到7-[3-(甲氨基甲基)吲哚啉-1-基]-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺(12.6mg，24％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.72(dd，J＝12.82，3.66Hz，2H)，1.96-2.08(m，2H)，2.50(s，3H)，2.82(dd，J＝11.91，8.70Hz，1H)，3.03(dd，J＝11.68，4.81Hz，1H)，3.56(td，J＝11.68，2.29Hz，2H)，3.63-3.72(m，1H)，3.99-4.06(m，2H)，4.19-4.32(m，1H)，4.76(dd，J＝11.91，5.50Hz，1H)，4.91(dd，J＝11.90，9.20Hz，1H)，7.11(td，J＝7.30，1.40Hz，1H)，7.28-7.35(m，2H)，7.47-7.54(m，1H)，8.63-8.70(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)425.0。
实施例121
7-[3-[(二甲氨基)甲基]吲哚-1-基]-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
在0℃下，向实施例109(100mg，0.24mmol)的THF(5ml)溶液中加入Dess-MartinPeriodinane(113mg，0.27mmol)并搅拌过夜。将反应混合物浓缩并在下一步骤中使用而无需进一步纯化。将残留物溶于DCM(5ml)中，加入二甲胺(40mg，0.48mmol)、三乙酰氧基硼氢化钠(78mg，0.37mmol)和乙酸(15mg，0.25mmol)并搅拌过夜。分析表明吲哚啉被氧化为吲哚。用DCM和水稀释混合物，将有机层分离、干燥和浓缩。对残留物进行HPLC纯化，得到7-[3-[(二甲氨基)甲基]吲哚-1-基]-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺(1.7mg，2％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.74-1.83(m，2H)，1.98-2.07(m，2H)，2.40(s，6H)，3.52-3.61(m，2H)，3.71(s，2H)，3.99-4.11(m，2H)，4.21-4.34(m，1H)，7.30-7.36(m，1H)，7.38-7.45(m，1H)，7.64-7.70(m，1H)，7.94-8.03(m，1H)，8.97(d，J＝8.70Hz，1H)，9.00-9.02(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)437.1。
实施例122
7-(2-甲基吲哚啉-1-基)-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将亚硫酰氯(5ml)加入到中间体36(200mg，0.64mmol)并将反应混合物加热回流1小时。将混合物冷却，浓缩并溶于DCM中。向溶液中加入三乙胺(0.18ml，1.3mmol)和4-氨基四氢吡喃(194ml，1.9mmol)并搅拌2小时。用DCM和水稀释混合物，将有机相分离、干燥并浓缩至二氧化硅上。通过柱层析(用15-45％的EtOAc/石油醚进行梯度洗脱)来纯化化合物，得到淡黄色固体(56mg，22％)；1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.22(d，J＝6.41Hz，3H)，1.68-1.84(m，4H)，2.85(d，J＝15.57Hz，1H)，3.32-3.43(m，2H)，3.50(dd，J＝15.80，8.93Hz，1H)，3.80-3.92(m，2H)，4.00-4.11(m，1H)，6.01-6.11(m，1H)，7.03-7.12(m，1H)，7.20-7.30(m，1H)，7.33-7.40(m，1H)，8.55-8.66(m，3H)；LC-MS(ESI)：(MH+)396.1。
实施例123
7-(2-甲基吲哚啉-1-基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
以与实施例122类似的方式，由中间体36和1-甲基哌啶-4-胺制备实施例123。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 1.26(d，J＝6.41Hz，3H)，1.71-1.89(m，4H)，1.92-2.04(m，2H)，2.19(s，3H)，2.75-2.85(m，2H)，2.89(d，J＝15.57Hz，1H)，3.54(dd，J＝15.57，8.70Hz，1H)，3.73-3.91(m，1H)，6.04-6.19(m，1H)，7.12(td，J＝7.33，0.92Hz，1H)，7.30(t，J＝7.56Hz，1H)，7.40(d，J＝7.33Hz，1H)，8.59(d，J＝8.24Hz，1H)，8.66(d，J＝8.20Hz，1H)，8.68(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)409.2。
实施例124
以与实施例122类似的方式，由中间体36和N，N-二甲基-3-丙胺制备实施例124。1HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.40(d，J＝6.41Hz，3H)，1.91(br.s.，3H)，2.39(br.s.，6H)，2.63(br.s.，2H)，2.82-2.91(m，1H)，3.51-3.62(m，3H)，3.66-3.78(m，1H)，5.92-6.02(m，1H)，7.06-7.13(m，1H)，7.28-7.34(m，2H)，8.42(br.s.，1H)，8.62-8.72(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)397.1。
实施例125
7-(3-甲基吲哚啉-1-基)-N-四氢吡喃-4-基-噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
以与实施例122类似的方式，由中间体35和4-氨基四氢吡喃制备实施例125。1HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.47(d，J＝6.90Hz，2H)，1.63-1.77(m，2H)，2.07(m，J＝12.40，2.30Hz，2H)，2.08(s，1H)，3.58(td，J＝11.68，2.29Hz，2H)，3.61-3.71(m，1H)，3.99-4.11(m，2H)，4.20-4.28(m，1H)，4.31(dd，J＝11.45，6.41Hz，1H)，5.01(dd，J＝11.91，9.16Hz，1H)，6.99(d，J＝8.20Hz，1H)，7.14(td，J＝7.30，1.00Hz，1H)，7.28-7.35(m，2H)，8.59(d，J＝7.80Hz，1H)，8.68(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)396.1。
实施例126
7-(3-甲基吲哚啉-1-基)-N-(1-甲基-4-哌啶基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
以与实施例122类似的方式，由中间体35和1-甲基哌啶-4-胺制备实施例126。1HNMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.45(d，J＝6.90Hz，3H)，1.62-1.70(m，2H)，2.10(dd，J＝12.82，4.12Hz，2H)，2.21(t，J＝11.22Hz，2H)，2.34(s，3H)，2.77-2.92(m，2H)，3.59-3.70(m，1H)，3.98-4.11(m，1H)，4.30(dd，J＝11.40，6.90Hz，1H)，5.01(dd，J＝11.68，9.39Hz，1H)，6.95-7.07(m，1H)，7.13(td，J＝7.33，0.92Hz，1H)，7.28-7.34(m，2H)，8.60(d，J＝7.78Hz，1H)，8.67(s，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)409.2。
实施例127
(R)-7-(2-甲基吲哚啉-1-基)-N-(哌啶-4-基甲基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将中间体43(350mg，1.08mmol)和SOCl2(10ml)加热回流3小时。将所得溶液浓缩，得到深橙色胶状物。将酰基氯溶于DCM(10ml)中并将所得溶液的1.4ml等分试样加入到反应小瓶中，该反应小瓶含有三乙胺(0.2ml，1.57mmol)和4-氨基甲基-1-BOC-哌啶(168mg，7.87mmol)的溶液。将混合物搅拌过夜，得到绿色溶液。用TFA(1ml)处理该绿色溶液，并搅拌30分钟。向所得溶液中加入饱和NaHCO3(水溶液)(5mL)，直到达到pH 7。将有机层分离并浓缩，然后进行HPLC纯化。纯化后得到产物(R)-7-(2-甲基吲哚啉-1-基)-N-(哌啶-4-基甲基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺，其为黄色固体(30.2mg，14％)。1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm8.64(s，1H)，8.59(d，J＝7.78Hz，1H)，7.31(d，J＝7.79Hz，1H)，7.25(t，J＝8.70Hz，1H)，7.11(t，J＝8.20Hz，1H)，5.75(m，1H)，3.54(dd，J＝15.11，8.70Hz，1H)，3.42(dd，J＝13.74，6.87Hz，2H)，3.27(m，2H)，2.84(d，J＝15.57Hz，1H)，2.75(t，J＝13.30Hz，2H)，1.89(m，3H)，1.47(m，2H)，1.42(d，J＝5.95Hz，4H)；LC-MS(ESI)：(MH+)409.1。
以与实施例127类似的方式，由中间体43和合适的BOC保护的胺来制备实施例128-129。类似于实施例122，由中间体43和4-氨基四氢吡喃来制备实施例130。
以与实施例127类似的方式，由(S)-7-(2-甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸和合适的胺来制备实施例131-134，其中以与中间体43类似的方式来制备(S)-7-(2-甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酸。
实施例135
7-[3-(羟甲基)吲哚啉-1-基]-N-(4-哌啶基甲基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将中间体45(50mg，0.12mmol)、中间体29(18mg，0.12mmol)和丙-2-醇(2ml)密封在小瓶中，并在80℃下加热3小时。将混合物冷却、浓缩并使用TFA(1ml)的DCM(5ml)溶液来除去BOC基团。用饱和NaHCO3(水溶液)中和混合物，将有机层分离、干燥并浓缩。通过制备的LCMS纯化残留物，得到黄色固体(19mg，36％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 1.28-1.44(m，2H)，1.69-1.78(m，2H)，1.79-1.88(m，1H)，2.59-2.69(m，2H)，3.12(td，J＝8.01，4.12Hz，2H)，3.38(dt，J＝13.51，5.84Hz，1H)，3.47-3.54(m，1H)，3.70-3.81(m，2H)，3.94-4.02(m，1H)，4.81-4.95(m，2H)，7.09(td，J＝7.30，0.90Hz，1H)，7.26-7.35(m，2H)，7.40(br.t，J＝6.00，6.00Hz，1H)，8.62-8.69(m，2H)；LC-MS(ESI)：(MH+)425.1。
实施例136-146
类似于实施例135，由中间体45和合适的吲哚啉来制备下表中的实施例136-146。
实施例147-151
向中间体63(250mg，0.68mmol)和三乙胺(0.2ml，1.35mmol)的DCM(5ml)溶液中滴加甲烷磺酰氯(55μL，.074mmol)，并搅拌2小时。用DCM稀释混合物，用水洗涤，将有机相分离、干燥并浓缩。将残留物溶于DMF(10ml)中，并将溶液分配到五个单独的小瓶中。向每个小瓶中加入K2CO3(4mg，0.11mmol)和所需的胺(0.23mmol)。将小瓶密封并在80℃下加热过夜。将混合物冷却，进行水相处理，将有机层分离、干燥并浓缩。通过HPLC纯化样品，得到所需的黄色固体产物。
实施例152-155
向中间体64(210mg，0.49mmol)的DCM(5ml)溶液中机入三乙胺(0.14mL，0.99mmol)和甲烷磺酰氯(0.04mL，0.49mmol)。将混合物搅拌1小时。用DCM(5mL)稀释混合物并用水(10mL)分层。用水(2次，每次10mL)洗涤有机相。将合并的有机层干燥并浓缩，得到橙色固体。将该橙色固体溶于DMF(9mL)中并将等分试样加入至含有所需胺(0.14mmol)和K2CO3(19mg，0.14mmol)的小瓶。在80℃下将所得混合物加热4小时。在用EtOAc(5mL)冷却后，加入水(5mL)并将有机相分离。用水(2次，每次10mL)洗涤有机相，干燥并浓缩。通过HPLC纯化样品，得到所需的黄色固体产物。
实施例156
N-甲基-7-(3-甲基吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
向3-甲基吲哚啉(54mg，0.41mmol)的IPA(2mL)溶液中加入中间体65(93mg，0.41mmol)，并在70℃下将混合物搅拌16小时。通过制备的LCMS浓缩混合物，得到所需产物(23mg，17％)；1H NMR(400MHz，氯仿-d)δppm 8.67(s，1H)，8.62(d，J＝7.79Hz，1H)，7.32(m，2H)，7.16(td，J＝8.24，0.92Hz，1H)，7.11(br.s，NH)，5.07(dd，J＝9.16，6.41Hz，1H)，4.35(t，J＝6.41Hz，1H)，3.65(sxt，J＝7.33Hz，1H)，3.12(d，J＝5.04Hz，3H)，1.47(d，J＝6.87Hz，3H)；LC-MS(ESI)：(MH+)326.0。
实施例157-158
类似于实施例156，由中间体65和合适的吲哚啉来制备下表中的实施例157-158。
＊LC-MS(pH10，MeCN)保留时间：1.90分钟
实施例159-163
类似于实施例127，由中间体68和合适的BOC-保护的胺制备实施例159、161和162。类似于实施例122，由中间体68和适当的胺制备实施例160和163。
实施例164-167
总体步骤(阵列的一部分)
步骤1
在85℃下在SOCl2(10mL)中使中间体2(640mg，2.80mmol)回流3小时，得到黄色溶液。冷却后，浓缩溶液以得到黄色固体。将酰基氯溶于DCM(12mL)中并加入三乙胺(0.77mL，5.60mmol)。在N2下将2ml等分试样加入到含有合适的胺(0.47mmol)的小瓶中。在室温下将反应混合物搅拌4小时，然后用DCM稀释并用水分层。将有机相用水(2次，每次10mL)洗涤，干燥并浓缩到二氧化硅上。通过柱层析纯化化合物并将该化合物用于步骤2。
步骤2
向步骤1(0.10mmol)的IPA(2mL)溶液中加入中间体32(27mg，0.10mmol)并在80℃下将混合物加热7小时。冷却后，将溶液真空浓缩，并溶于DCM(2mL)中，加入TFA(1mL)，并在室温下将溶液搅拌1小时。然后将溶液真空浓缩并通过制备的LCMS纯化所得残留物。
实施例168
7-(5-氯吲哚啉-1-基)-N-(4-哌啶基甲基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
将中间体80(29mg，0.07mmol)和5-氯吲哚啉(11mg，0.07mmol)在异丙醇(2ml)中合并，并在室温下搅拌21小时。将混合物溶于DCM中并浓缩到SiO2上并进行急骤层析，得到N-BOC中间体(黄色固体)。在室温下，将该固体溶于DCM(5ml)中，并用4M HCl的二恶烷(0.5ml)溶液处理2h。减压除去溶剂，将残留物溶于1∶1 DCM-MeOH中并装载到SCX柱上，用DCM-MeOH1∶1洗脱，然后用2M氨的甲醇溶液洗脱。将氨溶液浓缩并将残留物与MeOH一起研磨，得到浅黄色固体产物(15mg，50％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 0.98-1.15(m，2H)，1.60(d，J＝10.99Hz，2H)，1.70(br.s.，1H)，2.35-2.47(m，2H)，2.93(d，J＝11.45Hz，2H)，3.13-3.26(m，3H)，4.91(t，J＝8.47Hz，2H)，7.32(dd，J＝8.70，2.29Hz，1H)，7.42(d，J＝1.83Hz，1H)，8.65(d，J＝8.70Hz，1H)，8.68(s，1H)，9.03(t，J＝6.18Hz，1H)；LC-MS(ESI)：(MH+)429/431。
实施例169
7-(5-溴吲哚啉-1-基)-N-(4-哌啶基甲基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例168，由中间体80(100mg，0.24mmol)和5-溴吲哚啉(48mg，0.24mmol)进行制备，得到黄色固体产物(20mg，17％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 0.96-1.11(m，2H)，1.57(d，J＝12.36Hz，2H)，1.67(br.s.，1H)，2.34-2.43(m，2H)，2.49-2.65(m，1H)，2.90(d，J＝12.36Hz，2H)，3.18(t，J＝6.64Hz，2H)，4.87(t，J＝8.47Hz，2H)，7.42(dd，J＝8.70，2.29Hz，1H)，7.51(d，J＝2.29Hz，1H)，8.56(d，J＝8.70Hz，1H)，8.65(s，1H)，8.99(t，J＝5.95Hz，1H)。LC-MS(ESI)：(MH+)473/475。
实施例170
7-(5-甲基吲哚啉-1-基)-N-(4-哌啶基甲基)噻唑并[5，4-d]嘧啶-2-甲酰胺
类似于实施例168，由中间体80(100mg，0.24mmol)和5-甲基吲哚啉(32mg，0.24mmol)进行制备，得到黄色固体产物(50mg，50％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm1.11-1.27(m，3H)，1.68(d，J＝11.91Hz，2H)，1.78(br.s.，1H)，2.31(s，3H)，2.52-2.60(m，2H)，2.98-3.07(m，2H)，3.22-3.33(m，4H)，4.83-4.91(m，2H)，7.06(d，J＝8.70Hz，1H)，7.16(s，1H)，8.52(d，J＝8.24Hz，1H)，8.62(s，1H)，8.76-8.84(m，1H)。LC-MS(ESI)：(MH+)409。
实施例171
7-(5-氟吲哚啉-1-基)噻唑并[5，4-d]嘧啶
将7-氯噻唑并[5，4-d]嘧啶(50mg，0.29mmol)、5-氟吲哚啉(42mg，0.31mmol)和4MHCl(0.075ml)的二恶烷(0.075ml)溶液溶解于IPA(0.7ml)中，将所得溶液在100℃下在微波中照射30分钟。过滤沉淀物并用甲醇洗涤。通过氨基丙基柱过滤来纯化残留物，用DCM∶MeOH(10∶1)洗脱，得到绿色固体(23mg，27％)。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 3.29(t，J＝8.47Hz，2H)，4.74-4.92(m，2H)，7.08(td，J＝9.16，2.75Hz，1H)，7.15-7.26(m，1H)，8.61(dd，J＝8.93，4.81Hz，1H)，8.64(s，1H)，9.34(s，1H)。
MNK1和MNK 2生物化学IC50试验
通过监测丝氨酸/苏氨酸激酶肽5FAM-RRRLSSLRA-NH2的磷酸化，从而在生物化学试验中测定化合物对MNK1和MNK2活性的作用。使用Caliper LabChip EZ Reader II利用Caliper迁移率变动试验(Caliper Mobility Shift Assay)来检测磷酸化的肽产物和未磷酸化的肽底物。
Caliper迁移率变动试验技术基于利用微流控芯片，从而通过电泳分离底物和产物并通过激光诱导荧光进行检测，来测量荧光性非磷酸化肽底物向磷酸化产物的转化。LabChip EZ Reader软件计算底物峰和产物峰的相对高度，并记录峰比率(产物峰(P)除以产物峰(P)和底物峰(S)之和)。以100×[(P/(P+S)]计算转化百分比。将所有试验均设定为以线性相运行，其中最大底物转化率为10％。
试剂
用于所有筛选活性的酶MNK1和酶MNK2来源于Carna Biosciences(产品编号分别为02-145和02-146)。这些酶是在杆状病毒表达***中表达并通过谷胱甘肽琼脂糖亲和层析纯化的N端GST融合蛋白。具体而言，这些构建体由全长人MNK1[1-424(末端)氨基酸和登录号为BAA 19885.1的T344D]和全长人MNK2[1-465(末端)氨基酸和登录号为NP_951009.1的T379D]组成。FAM标记的通用丝氨酸/苏氨酸激酶肽底物5-FAM-RRRLSSLRA-NH2购自Anaspec。用于Caliper-Labchip EZ reader 12-sipper(cat No.760404)的检测试剂、分离缓冲液和涂布试剂-8(CR-8)购自Perkin Elmer。所有其他试验试剂均来自Sigma。
MNK1试验
在试验中，使化合物在DMSO中连续稀释以产生最终最高浓度为100μM的10-点半对数稀释曲线。在聚丙烯-384孔U形底板(Thermo Scientific 4340)中以30μL的总体积进行反应。将化合物与酶和肽在反应缓冲液中预培养30分钟，然后加入ATP以引发反应。最终试验浓度为3nM MNK1、2μM肽底物、50μM ATP、50mM Hepes pH7.0、0.01％BSA、10mM MgCl2、1mM二硫苏糖醇。将底板在室温下培养，并通过在已经实现大约10％底物转化的时间点下加入2体积(60μl)的50mM EDTA来停止反应。
根据所用的ATP的浓度调整试验培养时间。在低ATP(50μM)和高ATP(1mM)下进行试验。在标准试验的Km条件下选择低ATP值运行，从而允许在其他激酶之间比较相对效力。选定高ATP浓度作为细胞ATP浓度的代表，并且将其用于指示ATP竞争性，其中与Km条件相比，可以预期明显效力的显著变化(大于半对数)。所记录的所有IC50值均为至少两次独立实验的平均值。
MNK2试验
在试验中，使用10nM MNK2如上所述进行反应。标准试验包含50μM ATP，而高浓度ATP试验包含1mM ATP。改变了实现10％转化的时间。所有其他条件均相同。
MNK细胞活性磷酸化-eIF4E(Phospho-eIF4E)检测试验
通过监测细胞裂解物中ser209(已知的MNK1/2的内源性底物)上的eIF4E的磷酸化来测量细胞中的MNK活性。使用放大发光邻近均相试验(Alphascreen Surefire p-eIF4E试剂盒，Perkin Elmer)，从而能够在384格式细胞试验中定量剂量依赖性响应。试验检测基于与供体珠和受体珠偶联的夹心抗体复合物的形成。当供体珠和受体珠通过与分析物(p-eIF4a-ser209)结合而紧密靠近时，在680nm处的激发引起供体珠和受体珠粒之间的单线态氧物质的转移，其导致在520nm至620nm处的光的发射。
研究了许多癌细胞系，并选择MV4.11细胞系(ATCC、CRL-9591)用于化合物的常规分析，该MV4.11细胞系为双表型B骨髓单核细胞性白血病细胞系。在IMDM-10％FBS培养基中制备化合物稀释液以产生从30μM的测试中的最终最高浓度开始的10点半对数系列稀释。使冷冻细胞以1.2×106/ml的浓度悬浮于IMDM-10％FBS培养基中。将4μl(4800个细胞/孔)分配到384-组织培养Proxiplate板(Perkin Elmer 6008238)的各孔中，并将4μl化合物培养基稀释液加入至细胞中，并在37℃，5％CO2下培养1.5小时。然后，根据制造商的建议将细胞裂解并进行Aphascreen Surefire方案。将8μl受体珠(在试剂盒活化缓冲液中以1∶50稀释)加入到裂解物中，以150rmp振荡2分钟并在室温下培养1.5小时。然后加入3μl供体珠(在试剂盒稀释缓冲液中以1∶20稀释)，以150rpm振荡2分钟并在室温下再培养1.5小时，然后用Alphascreen光学组件在Pherastar FS上读取板。
相对于未处理的仅有DMSO的对照组，对数据进行标准化，并且在实验中一式两份重复曲线。所记录的数据均为至少2次独立实验的平均值。
激酶选择性筛选
通过第三方激酶分析服务，如Eurofins KinaseProfilerTM(参见www.eurofins.com/pharmadiscovery)或类似的此类服务的提供商，使用市售试剂和方案进行激酶筛选。
表2示出了实施例10、58和64的激酶选择性筛选结果。数据表示为在1μM化合物存在下，各特定激酶的抑制％。
在不背离本发明的范围和精神的情况下，本发明所描述的各个方面的多种修改和改变对本领域的技术人员来说是显而易见的。虽然结合具体的优选实施方案对本发明进行了描述，但应理解，所要求保护的本发明不应被过度地限制于这些具体的实施方案。实际上，期望所描述的实施本发明的方式对于本领域的技术人员而言显而易见的各种更改也包含在以下权利要求的范围之内。
参考文献
Buxade，M.，et al.(2008).″The MNK：MAP kinase-interacting kinases(MAPkinase signal-integrating kinases).″Front Biosci 13：5359-5373.
Buxade，M.，et al.(2005).″The MNK are novel components in the controlof TNF alpha biosynthesis and phosphorylate and regulate hnRNP A1.″Immunity23(2)：177-189.
Cherla，R.P.，et al.(2006).″Shiga toxin 1-induced cytokine productionis mediated by MAP kinase pathways and translation initiation factor eIF4E inthe macrophage-like THP-1 cell line.″J Leukoc Biol 79(2)：397-407.
Chrestensen，C.A.，et al.(2007).″Loss of MNK function sensitizesfibroblasts to serum-withdrawal induced apoptosis.″Genes Cells 12(10)：1133-1140.
Jauch，R.，et al.(2006).″Mitogen-activated protein kinases interactingkinases are autoinhibited by a reprogrammed activation segment.″EMBO J 25(17)：4020-4032.
Kjellerup，R.B.，et al.(2008).″Pro-inflamnatory cytokine release inkeratinocytes is mediated through the MAPK signal-integrating kinases.″Exp Dermatol 17(6)：498-504.
Konicek，B.W.，et al.(2008).″Targeting the eIF4F translation initiationcomplex for cancer therapy.″Cell Cycle 7(16)：2466-2471.
Konicek，B.W.，et al.(2011).″Therapeutic inhibition of MAP kinaseinteracting kinase blocks eukaryotic initiation factor 4E phosphorylation andsuppresses outgrowth of experimental lung metastases.″Cancer Res 71(5)：1849-1857.
Nikolcheva，T.，et al.(2002).″A translational rheostat for RFLAT-1regulates RANTES expression in T lymphocytes.″J Clin Invest 110(1)：119-126.
Noubade，R.，et al.(2011).″Activation of p38 MAPK in CD4 T cellscontrols IL-17 production and autoimmune encephalomyelitis.″Blood 118(12)：3290-3300.
Rowlett，R.M.，et al.(2008).″MNK kinases regulate multiple TLR pathwaysand innate proinflammatory cytokines in macrophages.″Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol 294(2)：G452-459.
Teo，T.，et al.(2015).″Pharmacologic Inhibition of MNK in Acute MyeloidLeukemia.″Mol Pharmacol 88(2)：380-389.
Teo，T.，et al.(2015).″Pharmacologic co-inhibition of MNK and mTORC 1synergistically suppresses proliferation and perturbs cell cycle progressionin blast crisis-chronic myeloid leukemia cells.″Cancer Lett 357(2)：612-623.
Ueda，T.，et al.(2010).″Combined deficiency for MAP kinase-interactingkinase 1 and 2(Mnk1 and Mnk2)delays tumor development.″Proc Natl Acad Sci USA107(32)：13984-13990.
Wendel，H.G.，et al.(2007).″Dissecting eIF4E action in tumorigenesis.″Genes Dev 21(24)：3232-3237.
表1：本发明所选择的化合物
表2：实施例10、58和64的激酶选择性数据。

Claims (29)

1.一种由式(I)表示的化合物，或其可药用的盐或酯，
其中：
R1选自：
-CO-NR12R13，其中R12和R13各自独立地选自H、烷基、环烷基和杂环烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R14基团取代，并且所述杂环烷基任选地被一个或多个R10基团取代；或R12和R13连同它们所连接的氮连接在一起形成任选地包含一个或多个其他杂原子并且任选地被一个或多个R10基团取代的杂环烷基；
-羟烷基；
-H；
-NH2；
-NH-烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个R14基团取代；
-NH-CO-杂环烷基；
-任选地被一个或多个R10基团取代的杂环烷基；和
-任选地被一个或多个R14基团取代的烷氧基；
R2、R3、R4和R5各自独立地选自H、烷基、羟烷基和(CH2)n-R12′；
或者R2和R3连接以形成环烷基或杂环烷基，该环烷基和杂环烷基各自可以任选地进一步被一个或多个R10基团取代；
或者R4和R5连接以形成环烷基或杂环烷基，该环烷基和杂环烷基各自可以任选地进一步被一个或多个R10基团取代；
或者R2和R3中的一者不存在，R4和R5中的一者不存在，并且虚线是双键；
Z1、Z2、Z3和Z4均为C；
R6、R7、R8和R9各自独立地选自H、CN、NO2、OH、烷氧基、NHCO-烷基、卤素和卤代烷基；或
Z1、Z3和Z4均为C，Z2为N，R7不存在，并且R6、R8和R9如上文所定义；或
Z2、Z3和Z4均为C，Z1为N，R6不存在，并且R7、R8和R9如上文所定义；
n为1至10的整数；
各R12′独立地选自NH2、NHR10、NR10R11和杂环烷基，其中所述杂环烷基任选地进一步被一个或多个R10基团取代；
各R10和R11独立地为烷基；并且
各R14独立地选自OH、烷氧基、卤代烷基、NH2、NHR10、NR10R11、杂芳基和杂环烷基，其中所述杂环烷基任选地进一步被一个或多个R10基团取代。
2.根据权利要求1所述的化合物，其中Z1、Z2、Z3和Z4均为C。
3.根据权利要求1或2所述的化合物，其中R2、R3、R4和R5各自独立地选自H、烷基和(CH2)n-R12′。
4.根据权利要求1或2所述的化合物，其中：
R2、R3、R4和R5均为H；或者
R2和R3都为H，并且R4和R5都为Me；或者
R2和R3都为H，并且R4和R5连接以形成环烷基或杂环烷基。
5.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R6、R7、R8和R9各自独立地选自H和卤素。
6.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中：
Z1、Z2、Z3和Z4均为C；
R6、R7、R8和R9均为H；或者
R6、R8和R9均为H，并且R7选自氟、氯、溴、甲基和CF3；并且
R2、R3、R4和R5各自独立地选自H、烷基和(CH2)n-R12′。
7.根据权利要求1所述的化合物，其中：
R2、R3、R4和R5各自独立地选自H、羟烷基、烷基和(CH2)n-R12′，其中n是1或2并且R12′选自NH2、OH、NMe、NMe2、吡咯烷-1-基、哌啶-1-基和4-甲基哌嗪-1-基。
8.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1为CO-NR12R13。
9.根据前述权利要求中任一项所述的化合物，其中R1为CO-NR12R13，其中：
R12和R13中的一者为H，另一者选自：
四氢吡喃-4-基；
哌啶-4-基；
环丙基；
四氢呋喃-4-基；
N-甲基哌啶-4-基；
任选地被一个或多个选自NHMe、NH2、NMe2、哌啶-4-基、N-甲基哌啶-4-基、四氢呋喃基、OH、CF3、OMe和吡咯烷-1-基的基团取代的烷基；或者
R12和R13连同它们所连接的氮连接在一起形成任选地被一个或多个R10基团取代的哌嗪基或吗啉基。
10.一种由式(II)表示的化合物，或其可药用的盐或酯，
其中：
Rb选自烷基、环烷基和杂环烷基，它们各自可以任选地被一个或多个选自卤素和烷氧基的基团取代；
R1a选自：
-CO-NR12aR13a，其中R12a和R13a各自独立地选自H、烷基、环烷基和单环或双环杂环烷基，其中所述烷基任选地被一个或多个(CH2)mR14a基团取代，并且所述杂环烷基任选地被一个或多个选自R10和(CH2)mR14a的基团取代；或者R12a和R13a连同它们所连接的氮连接在一起形成任选地包含一个或多个其他杂原子并且任选地被一个或多个选自R10和(CH2)mR14a的基团取代的杂环烷基；
-羟烷基；
-COOH；以及
-H；
Z1、Z2、Z3和Z4均为C；
R6、R7、R8和R9各自独立地选自H、CN、NO2、OH、烷氧基、NHCO-烷基、卤素和卤代烷基；或
Z1、Z3和Z4均为C，Z2为N，R7不存在，并且R6、R8和R9如上文所定义；或
Z2、Z3和Z4均为C，Z1为N，R6不存在，并且R7、R8和R9如上文所定义；
m为1至10的整数；
各R10和R11独立地为烷基；
各R14a独立地选自CO2R10、COOH、OH、烷氧基、卤代烷基、NH2、NHR10、NR10R11、杂芳基和杂环烷基，其中所述杂环烷基任选地进一步被一个或多个R10基团取代。
11.根据权利要求10所述的化合物，其中：
Z1、Z2、Z3和Z4均为C；
R6、R7、R8和R9均为H；或
R6、R8和R9均为H，并且R7为卤素。
12.根据权利要求10或11所述的化合物，其中Z1、Z2、Z3和Z4均为C，R6、R8和R9均为H，并且R7为氟。
13.根据权利要求10至12中任一项所述的化合物，其中Rb为烷基，更优选为异丙基。
14.根据权利要求10至13中任一项所述的化合物，其中R1a为CO-NR12aR13a，其中：
R12a和R13a中的一者为H，另一者选自：
任选地被一个或多个选自NR10R11、COOH、OH和杂环烷基的基团取代的烷基；和
任选地被一个或多个选自R10和CO2R10的基团取代的单环或双环杂环烷基；或者
R12a和R13a连同它们所连接的氮连接在一起以形成任选地被一个或多个选自R10和(CH2)mR14a的基团取代的哌啶基。
15.根据权利要求10至14中任一项所述的化合物，其中R1a为任选地被一个或多个选自NR10R11和杂环烷基的基团取代的烷基，该杂环烷基选自哌啶基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基和四氢吡喃基，其中所述杂环烷基任选地被一个或多个R10基团取代。
16.根据权利要求10至14中任一项所述的化合物，其中R1a为选自哌啶基、奎宁环基、氮杂环丁烷基、吗啉基、哌嗪基、吡咯烷基和四氢吡喃基的杂环烷基，它们各自任选地被一个或多个R10基团取代。
17.一种化合物，其选自以下物质以及它们的可药用的盐或酯：
18.一种药物组合物，其包含根据权利要求1至17中任一项所述的化合物，以及可药用的载体、稀释剂或赋形剂。
19.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物，该化合物用于医疗。
20.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物，该化合物用于治疗以下疾病：不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎症应答。
21.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物，该化合物用于治疗选自血液肿瘤、实体瘤利/或其转移的增生性病症，更优选用于治疗选自以下的增生性病症：白血病和骨髓增生异常综合征、恶性淋巴瘤、头颈部肿瘤、腩肿瘤和腩转移瘤、胸部肿瘤、非小细胞肿瘤和小细胞肺肿瘤、胃肠肿瘤、内分泌肿瘤、***和其他妇科肿瘤、泌尿系肿瘤、肾、膀胱和***肿瘤、皮肤肿瘤和肉瘤，和/或上述肿瘤的转移。
22.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物，该化合物用于治疗或预防神经变性病症，优选tau蛋白病，甚至更优选阿尔茨海默病。
23.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物，该化合物用于治疗由异常的MNK活性引起的、与异常的MNK活性有关或伴随有异常的MNK活性的病症。
24.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物在制备药物中的应用，所述药物用于治疗不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎性应答，或用于治疗或预防神经变性病症，优选tau蛋白病，甚至更优选阿尔茨海默病。
25.一种治疗在哺乳动物中的疾病的方法，所述疾病为不受控制的细胞生长、增殖和/或存活、不适宜的细胞免疫应答或不适宜的细胞炎性应答，或为神经变性病症，优选tau蛋白病，甚至更优选阿尔茨海默病，所述方法包括对哺乳动物施用治疗有效量的根据权利要求1至17中任一项所述的化合物。
26.一种治疗处于病态的哺乳动物的方法，所述病态通过抑制MNK而减轻，其中所述方法包括对哺乳动物施用治疗有效量的根据权利要求1至17中任一项所述的化合物。
27.根据权利要求1至17中任一项所述的化合物在检测方面的应用，所述检测用于鉴定其他能够抑制MNK的候选化合物。
28.一种组合，其包含根据权利要求1至17中任一项所述的化合物和其他治疗剂。
29.根据权利要求18所述的药物组合物，其还包含第二治疗剂。
CN201680079581.XA 2015-11-20 2016-11-16 作为mnk抑制剂的稠合噻唑并嘧啶衍生物 Active CN108495855B (zh)

Applications Claiming Priority (3)

Application Number Priority Date Filing Date Title
GB1520500.8 2015-11-20
GBGB1520500.8A GB201520500D0 (en) 2015-11-20 2015-11-20 Compounds
PCT/GB2016/053580 WO2017085484A1 (en) 2015-11-20 2016-11-16 Fused thiazolopyrimidine derivatives as mnks inhibitors

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108495855A true CN108495855A (zh) 2018-09-04
CN108495855B CN108495855B (zh) 2022-05-31

Family

ID=55133106

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201680079581.XA Active CN108495855B (zh) 2015-11-20 2016-11-16 作为mnk抑制剂的稠合噻唑并嘧啶衍生物

Country Status (10)

Country Link
US (2) US10669284B2 (zh)
EP (2) EP3377501B1 (zh)
JP (2) JP6928605B2 (zh)
CN (1) CN108495855B (zh)
AU (1) AU2016355104B2 (zh)
CA (1) CA3003559A1 (zh)
ES (1) ES2893154T3 (zh)
GB (1) GB201520500D0 (zh)
HK (1) HK1253575A1 (zh)
WO (1) WO2017085484A1 (zh)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110903286A (zh) * 2019-12-16 2020-03-24 沈阳药科大学 4,6-双取代吡啶[3,2-d]嘧啶类化合物及其制备和应用
CN116194112A (zh) * 2020-06-30 2023-05-30 4E治疗公司 表现出mnk抑制作用的吡啶-1,5-二酮及其使用方法

Families Citing this family (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
TWI713455B (zh) 2014-06-25 2020-12-21 美商伊凡克特治療公司 ＭｎＫ抑制劑及其相關方法
BR112019016707A2 (pt) 2017-02-14 2020-04-07 Effector Therapeutics Inc inibidores de mnk substituídos por piperidina e métodos relacionados aos mesmos
CN109020957B (zh) * 2017-06-12 2023-01-13 南京天印健华医药科技有限公司 作为mnk抑制剂的杂环化合物
BR112021007745A2 (pt) 2018-10-24 2021-07-27 Effector Therapeutics, Inc. formas cristalinas de inibidores de mnk

Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005067546A2 (en) * 2004-01-13 2005-07-28 Ambit Biosciences Corporation Pyrrolopyrimidine derivatives and analogs and their use in the treatment and prevention of diseases
WO2008057402A2 (en) * 2006-11-02 2008-05-15 Cytovia, Inc. N-aryl-isoxazolopyrimidin-4-amines and related compounds as activators of caspases and inducers of apoptosis and the use thereof
WO2009065596A2 (en) * 2007-11-22 2009-05-28 Develogen Aktiengesellschaft Use of mnk inhibitors for the treatment of alzheimer's disease
CN102002044A (zh) * 2010-09-29 2011-04-06 中国药科大学 嘌呤-8-酮类及噻唑并嘧啶类衍生物及其制备方法和医药用途
CN102858783A (zh) * 2010-02-26 2013-01-02 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 用于药物组合物的含取代的烷基的噻吩并嘧啶
WO2014135480A1 (en) * 2013-03-06 2014-09-12 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted thiazolopyrimidines

Family Cites Families (11)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ207394A (en) 1983-03-08 1987-03-06 Commw Serum Lab Commission Detecting or determining sequence of amino acids
TW200538120A (en) 2004-02-20 2005-12-01 Kirin Brewery Compound having TGF-beta inhibitory activity and pharmaceutical composition containing same
JPWO2005095419A1 (ja) 2004-04-01 2008-02-21 武田薬品工業株式会社 チアゾロピリミジン誘導体
JP5368701B2 (ja) 2004-07-02 2013-12-18 エクセリクシス、インコーポレイテッド ｃ−Ｍｅｔモジュレーター及び使用方法
WO2007115822A1 (en) * 2006-04-07 2007-10-18 Develogen Aktiengesellschaft Thienopyrimidines having mnkl /mnk2 inhibiting activity for pharmaceutical compositions
EP1889847A1 (en) * 2006-07-10 2008-02-20 DeveloGen Aktiengesellschaft Pyrrolopyrimidines for pharmaceutical compositions
BRPI0918971A2 (pt) * 2008-08-26 2015-12-01 Boehringer Ingelheim Int tienopirimidinas para composições farmacêuticas
UY33241A (es) * 2010-02-26 2011-09-30 Boehringer Ingelheim Int ?Tienopirimidinas que contienen heterocicloalquilo para composiciones farmacéuticas?.
BR112012021364A2 (pt) 2010-02-26 2016-10-25 Boehringer Ingelheim Int "compostos cicloalquila contendo tienopirimidinas e composições farmacêuticas".
EP2951175B1 (en) 2013-02-01 2017-10-04 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted pyrazolopyrimidinylamino-indazoles
US20160159789A1 (en) * 2013-07-08 2016-06-09 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted pyrazolopyridines

Patent Citations (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2005067546A2 (en) * 2004-01-13 2005-07-28 Ambit Biosciences Corporation Pyrrolopyrimidine derivatives and analogs and their use in the treatment and prevention of diseases
WO2008057402A2 (en) * 2006-11-02 2008-05-15 Cytovia, Inc. N-aryl-isoxazolopyrimidin-4-amines and related compounds as activators of caspases and inducers of apoptosis and the use thereof
WO2009065596A2 (en) * 2007-11-22 2009-05-28 Develogen Aktiengesellschaft Use of mnk inhibitors for the treatment of alzheimer's disease
CN102858783A (zh) * 2010-02-26 2013-01-02 贝林格尔.英格海姆国际有限公司 用于药物组合物的含取代的烷基的噻吩并嘧啶
CN102002044A (zh) * 2010-09-29 2011-04-06 中国药科大学 嘌呤-8-酮类及噻唑并嘧啶类衍生物及其制备方法和医药用途
WO2014135480A1 (en) * 2013-03-06 2014-09-12 Bayer Pharma Aktiengesellschaft Substituted thiazolopyrimidines

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
中村良一: "《临床家禽内科治疗学》", 30 June 1987, 黑龙江人民出版社出版 *
湖南省中等卫校教材编写组: "《药剂学》", 31 March 1977 *

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN110903286A (zh) * 2019-12-16 2020-03-24 沈阳药科大学 4,6-双取代吡啶[3,2-d]嘧啶类化合物及其制备和应用
CN110903286B (zh) * 2019-12-16 2021-09-24 沈阳药科大学 4,6-双取代吡啶[3,2-d]嘧啶类化合物及其制备和应用
CN116194112A (zh) * 2020-06-30 2023-05-30 4E治疗公司 表现出mnk抑制作用的吡啶-1,5-二酮及其使用方法

Also Published As

Publication number Publication date
GB201520500D0 (en) 2016-01-06
CN108495855B (zh) 2022-05-31
HK1253575A1 (zh) 2019-06-21
EP3377501B1 (en) 2021-08-18
JP7181647B2 (ja) 2022-12-01
AU2016355104A1 (en) 2018-05-24
JP2021073306A (ja) 2021-05-13
US20200247822A1 (en) 2020-08-06
EP3939981A1 (en) 2022-01-19
ES2893154T3 (es) 2022-02-08
WO2017085484A1 (en) 2017-05-26
US10669284B2 (en) 2020-06-02
JP2018534314A (ja) 2018-11-22
AU2016355104B2 (en) 2021-01-28
EP3939981B1 (en) 2024-04-03
CA3003559A1 (en) 2017-05-26
JP6928605B2 (ja) 2021-09-01
US20180346483A1 (en) 2018-12-06
US11136338B2 (en) 2021-10-05
EP3377501A1 (en) 2018-09-26

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN111278815B (zh) 戊二酰亚胺
CN112204029B (zh) 治疗性化合物
CN108495855A (zh) 作为mnk抑制剂的稠合噻唑并嘧啶衍生物
CN106458934B (zh) 喹喔啉化合物及其用途
CN105209468B (zh) 取代的7‑氮杂二环化合物以及它们作为食欲素受体调节剂的用途
JP6035423B2 (ja) 新規な縮合ピリミジン化合物又はその塩
CN110382499A (zh) Fgfr抑制剂及其应用
WO2021143701A1 (zh) 嘧啶-4(3h)-酮类杂环化合物、其制备方法及其在医药学上的应用
AU2016355103B2 (en) Pyrropyrimidine compounds as MNKs inhibitors
CN107438598A (zh) 喹唑啉和喹啉化合物及其用途
WO2023280237A1 (zh) 一种磷酸酶降解剂的合成和应用
CN102083831A (zh) 用作aurora激酶抑制剂的萘啶酮
CN101189243A (zh) 取代的杂环及其作为chk1、pdk1和pak抑制剂的应用
WO2023072301A1 (zh) 吡唑[3,4-d]嘧啶-3-酮类化合物及其医药用途
EP2373657A1 (en) 5, 7-dihydro- 6h-pyrimido ý 5, 4-d¨ý 1¨benzazepin-6-thiones as plk inhibitors
WO2022028556A1 (zh) Cdk9抑制剂及其用途
WO2021259049A1 (zh) 吲哚类衍生物及其制备方法和应用
CN117730083A (zh) 用作map4k1抑制剂的嘧啶化合物
JP2022553284A (ja) Ｔｒｅｋ（ｔｗｉｋ関連ｋ＋チャネル）チャネル機能の阻害剤
Webb-Smith 2) Patent Application Publication o Pub. No.: US 2020/0247822 A1

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant