CN108403728A - 桑黄醇提物及其在制备抗肿瘤药物、保健品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种桑黄醇提物及其在制备抗肿瘤药物、保健品中的应用，该桑黄醇提物通过下述方法制备：将桑黄子实体粉碎并溶于乙醇溶液，通过超声波辅助和超速离心方法提取活性成分；通过低温真空冻干方式得到桑黄醇提物干粉。通过实验发现，本发明的桑黄醇提物能显著抑制BXPC‑3细胞及SGC‑7901细胞的存活，特别是对SGC‑7901产生了明显的抑制效果，并能促使SGC‑7901细胞发生凋亡，可应用于制备抗SGC‑7901人胃癌细胞、抗BXPC‑3人胰腺癌细胞细胞的药物或保健品。
Description
技术领域
本发明属于医药技术领域，涉及一种桑黄子实体醇提混合物及其在抗肿瘤药品或保健品方面的应用。
背景技术
癌症作为导致患者死亡的常见病症，一直困扰着人类生命与健康。根据国家癌症中心发布的中国最新癌症数据显示，中国癌症发病率呈逐年上升趋势，仅2013年，中国癌症新发病368万例，占世界癌症新发病例的1/4。我国每天约有1万人确诊癌症，相当于平均每7分钟就有一个人被确诊。如何有效的抗癌防癌已成为大家关注的重点。
目前***的方法主要有放疗、化疗、手术、免疫治疗、靶向治疗等手段，但因毒副作用大、恢复期长、费用成本高、易复发等缺点，一直无法做到彻底治愈癌症。中医药治疗以中医整体辩证理论为基础，是一种抗癌、保命与治本相结合的治疗方法，从而越来越受到大家的重视。与西药靶点单一、作用强度高相比，中药具有多靶点、多环节调节疾病的特点。纵观现今抗肿瘤药物的发展，将低毒副作用的天然产物作为抗癌新药运用到临床治疗上的比例逐年增高。我国中药资源丰富，种类繁多，疗效广泛，从中药材中提取有效成分用以抗击癌症潜力巨大。
桑黄作为一种传统名贵中药材，在我国的应用已经有相当长的历史，早在秦汉时期，《神农本草经》便记载：“桑耳，黑者，主女子漏下赤白汁，血病症瘕积聚，阴痛，阴阳寒热无子。五木耳，名檽，益气不饥，轻身强志。生山谷。”随着学术界对桑黄的认识逐渐深入，除治疗妇人急症外，其抗肿瘤、增强免疫力、抗氧化等功效不断被发掘。我国幅员辽阔，气候地理环境多变，造就了众多名贵中药材产区，然而由于中药产品及保健品开发不够充分，尤其是以桑黄为原料的抗肿瘤药物及保健产品的开发相对滞后，导致我国大部分中药材以原料的方式被出口到日韩等国家地区，造成了极大的浪费。我国对桑黄有效成分的提取，大多数以水直接提取或采取水提醇沉的方式提取桑黄中所含多糖，对桑黄的有机溶剂提取及混合物活性成分的研究相对较少，市面上相关产品及已申请的专利也并不多见。如何将桑黄水提物中物质充分保留又尽可能多的将溶于有机溶剂中的活性成分提取出来，以相对简单的条件与工艺将抗肿瘤活性成分提取并利用，成为亟待解决的问题。
发明内容
本发明要解决的第一个技术问题是提供一种桑黄醇提物，该醇提物提取工艺简单、成本低、操作方便，对人胃癌细胞SGC-7901和人胰腺癌细胞BXPC-3的增殖均具有显著的抑制作用。
为了解决上述技术问题，本发明的桑黄醇提物主要包含质荷比为999.1006、1015.0673、977.1388的三种物质，质荷比为999.1006的物质质谱检测谱峰强度大于87％，质荷比为1015.0673、977.1388的两种物质质谱检测谱峰强度均为100％；该桑黄醇提物制备方法如下：
步骤一、选取生长于长白山地区的桑黄子实体为原料，经高速破碎机打碎，得桑黄子实体粉末；
步骤二、按1：30～1:50的比例将桑黄子实体粉末与30％-40％乙醇混合并充分搅拌；
步骤三、待桑黄子实体粉末被乙醇溶液完全浸泡后，采取超声波辅助提取的方法对桑黄子实体中所含的活性物质进行提取得混合液；
步骤四、将步骤三所得的混合液超速离心1-2次后取上清液；
步骤五、将步骤四所得上清液通过抽滤方法过滤1-3次，得到桑黄醇提液；
步骤六、通过低温真空冻干方法将步骤五得到的桑黄醇提液冻干，得到桑黄醇提物。
所述步骤三中，采取超声波辅助提取的方法，是将步骤二中所得的桑黄子实体粉末—乙醇混合液置于恒温超声波清洗仪中，在20～40°下超声提取20～40min。
所述步骤四中，是将步骤三所得的混合液以10000～15000rpm在0～40℃下超速离心10～20min后取上清液。
本发明的有益效果：
本发明通过对提取条件的筛选确定了最适提取条件，从桑黄子实体中分离提取得到桑黄醇提物，对人胃癌细胞SGC-7901和人胰腺癌细胞BXPC-3的增殖均表现出显著的抑制作用，其中对SGC-7901的增值抑制效果最为显著，且一定浓度的桑黄醇提物溶液能使人胃癌细胞SGC-7901产生凋亡与S期阻滞，能明显降低SGC-7901人胃癌细胞的增殖、迁移及侵袭能力。本桑黄醇提物可用于制备抗胃癌等多种肿瘤药物或保健品，提取工艺简单，成本低，操作方便，抗肿瘤效果明显，提取率高且质量稳定，对桑黄的充分利用与抗肿瘤相关药品或保健品的开发具有重大意义。本发明提取物中所含的有效物质种类相对较多，并且从提取成本考虑，采用40％浓度乙醇，以液料比40:1进行桑黄提取，成本低，适合进行工业化大规模提取工作。
本发明要解决的第二个技术问题是提供一种上述桑黄醇提物在制备抗SGC-7901人胃癌细胞药物中的应用。
本发明要解决的第三个技术问题是提供一种上述桑黄醇提物在制备抗SGC-7901人胃癌细胞保健品中的应用。
本发明要解决的第四个技术问题是提供一种上述桑黄醇提物在制备抗人胰腺癌细胞BXPC-3药物中的应用。
本发明要解决的第五个技术问题是提供一种上述桑黄醇提物在制备抗人胰腺癌细胞BXPC-3保健品中的应用。
本发明的桑黄醇提物可以采用中药制剂或保健品制备的常规方法制成任何可药用的制剂或可食用的保健品。
附图说明
下面结合附图和具体实施方式对本发明作进一步详细说明。
图1是桑黄子实体超纯水提取物飞行时间质谱检测结果。
图2是桑黄子实体20％乙醇提取物飞行时间质谱检测结果。
图3是桑黄子实体30％乙醇提取物飞行时间质谱检测结果。
图4是桑黄子实体40％乙醇提取物飞行时间质谱检测结果。
图5是桑黄子实体50％乙醇提取物飞行时间质谱检测结果。
图6是分别用0.01、0.1、1.0、2.0mg/mL浓度的桑黄醇提物处理A549、SGC-7901、TE-1、BXPC-3、7721五种细胞，作用时间24h时的细胞的存活率对比图。
图7a是分别用0.125、0.25、0.5、1.0、2.0mg/mL浓度的桑黄醇提物处理SGC-7901细胞，作用时间24h时，桑黄醇提物诱导SGC-7901细胞产生凋亡的散点图；
图7b是分别用1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mg/mL浓度的桑黄醇提物处理SGC-7901细胞，作用时间24h时，桑黄醇提物诱导SGC-7901细胞产生凋亡的散点图；
具体实施方式
实施例1桑黄醇提液及醇提物粉末的制备
步骤一、选取生长于长白山地区的桑黄子实体为原料，经高速破碎机打碎，得桑黄子实体粉末；
步骤二、按液料比40:1的比例分别将1份桑黄子实体粉末加入事先配置好的20％、30％、40％、50％乙醇溶液，室温下搅拌1h，此时桑黄子实体粉末被乙醇溶液完全浸泡；
步骤三、采取超声波辅助提取的方法，将步骤二中所得混合液置于恒温超声波清洗仪中，37℃下超声提取30min；
步骤四、将上述步骤三中所得混合液以12000rpm在4℃下离心15min，收取上清，相同条件下重复离心一次，得上清液；
步骤五、将上述步骤四中所得上清液通过抽滤方式过滤2次，得黄褐色清澈液体即为桑黄醇提液；
步骤六、通过低温真空冻干方法将上述桑黄醇提液冻干，得黄褐色粉末即为桑黄醇提物干粉。
将上述桑黄醇提物干粉小心收集并称量，计算产率，当采用20％、30％、40％、50％乙醇溶液时，产率分别为9％、10.3％、12％、11.2％。
产率计算公式为：
醇提物干粉产率＝桑黄醇提物干粉质量/桑黄子实体粉末质量×100％
所述步骤一中，液料比不限于40:1的比例，可以是1：30～1:50内的任何比例，目的是使桑黄子实体粉末被乙醇溶液完全浸泡。
检测时，将(步骤五得到的桑黄醇提液)加入质谱检测仪，通过MALDI-TOF飞行时间质谱检测桑黄醇提液中所含物质种类及含量，检测结果见图1-4和表1。
表1
| 乙醇浓度 | 20％ | 30％ | 40％ | 50％ |
| 所含可检测活性物质数量 | 30 | 30 | 30 | 27 |
由图1-4和表1可知，当提取剂为40％乙醇溶液时，质荷比为977.1388、999.1006、1015.0673的三种物质含量相对较高，质荷比为999.1006的物质质谱检测谱峰强度为87％，质荷比为1015.0673、977.1388的两种物质质谱检测谱峰强度均为100％，为桑黄醇提混合物的主要成分，此时收率较高，且提取物中所含的有效物质种类相对较多，达到30种。从提取成本考虑40％乙醇浓度适中，适合进行工业化大规模提取工作。
实施例2
为了验证桑黄醇提物对胃癌等癌症的治疗效果，申请人进行了多种细胞试验，各种试验情况如下：
1)MTT细胞存活实验
我们选取了细胞实验中检测抗癌能力常用的五种细胞系，分别是：A549非小细胞肺癌细胞系、SGC-7901人胃癌细胞系、TE-1人食管癌细胞系、BXPC-3人胰腺癌细胞系、7721人肝癌细胞系，将桑黄醇提物干粉溶解于含血清DMEM完全培养基中配置成不同浓度药品，以50％浓度的九谷酵汁上清作为阳性对照组，利用MTT实验检测不同浓度药品对五种细胞存活能力的影响。结果如图6所示，桑黄醇提物对五种细胞的存活均产生了不同程度的影响，随着药品浓度的增加，BXPC-3细胞及SGC-7901细胞的存活率逐渐降低，且在药品浓度为1.0mg/mL时对SGC-7901人癌细胞系的抑制效果最明显。因此我们选取SGC-7901人胃癌细胞系作为敏感细胞系进行后续实验。
2)细胞凋亡检测实验
为了进一步探究桑黄醇提物的抗肿瘤能力，我们通过流式细胞术检测了不同浓度药品作用24h后，对SGC-7901细胞的促凋亡效果。分别对0.125mg/mL-2.0mg/mL和1.0mg/mL-5.0mg/mL两个浓度范围药品的作用效果进行检测，结果如图7a、图7b所示，随着药品浓度的逐渐增高，促SGC-7901细胞凋亡效果逐渐增强，且在药物浓度达到1.0mg/mL后，促凋亡效果开始显著增强。
综上实施实例，本发明以综合利用桑黄这一传统名贵中药材为出发点，将桑黄中所含有效成分以有机溶剂为提取剂，并采取超声波辅助提取的方法将桑黄中所含的有效成分从种类和含量上尽可能多的提取并保留，并对混合物综合、多靶点的抗肿瘤效果进行了实验，通过实验结果我们了解到运用本发明中方法提取的桑黄醇提物表现出了良好的抗肿瘤活性，能显著抑制BXPC-3细胞及SGC-7901细胞的存活，特别是对SGC-7901产生了明显的抑制效果，并能促使SGC-7901细胞发生凋亡。
Claims (5)
1.一种桑黄醇提物，其特征在于主要包含质荷比为999.1006、1015.0673、977.1388的三种物质，质荷比为999.1006的物质质谱检测谱峰强度大于87％，质荷比为1015.0673、977.1388的两种物质质谱检测谱峰强度均为100％；该桑黄醇提物制备方法如下：
步骤一、选取生长于长白山地区的桑黄子实体为原料，经高速破碎机打碎，得桑黄子实体粉末；
步骤二、按1：30～1:50的比例将桑黄子实体粉末与30％-40％乙醇混合并充分搅拌；
步骤三、待桑黄子实体粉末被乙醇溶液完全浸泡后，采取超声波辅助提取的方法对桑黄子实体中所含的活性物质进行提取得混合液；
步骤四、将步骤三所得的混合液超速离心1-2次后取上清液；
步骤五、将步骤四所得上清液通过抽滤方法过滤1-3次，得到桑黄醇提液；
步骤六、通过低温真空冻干方法将步骤五得到的桑黄醇提液冻干，得到桑黄醇提物。
2.一种如权利要求1所述的桑黄醇提物在制备抗SGC-7901人胃癌细胞药物中的应用。
3.一种如权利要求1所述的桑黄醇提物在制备抗SGC-7901人胃癌细胞保健品中的应用。
4.一种如权利要求1所述的桑黄醇提物在制备抗人胰腺癌细胞BXPC-3药物中的应用。
5.一种如权利要求1所述的桑黄醇提物在制备抗人胰腺癌细胞BXPC-3保健品中的应用。
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