CN108392486B - 羟基红花黄色素b在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用 - Google Patents
羟基红花黄色素b在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN108392486B CN108392486B CN201810061748.0A CN201810061748A CN108392486B CN 108392486 B CN108392486 B CN 108392486B CN 201810061748 A CN201810061748 A CN 201810061748A CN 108392486 B CN108392486 B CN 108392486B
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- hydroxysafflor yellow
- myocardial
- reperfusion injury
- group
- ischemia
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Active
Links
- 229930195259 hydroxysafflor yellow Natural products 0.000 title claims abstract description 60
- 206010063837 Reperfusion injury Diseases 0.000 title claims abstract description 28
- 208000031225 myocardial ischemia Diseases 0.000 title claims abstract description 24
- 239000003814 drug Substances 0.000 title claims abstract description 18
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 208000012947 ischemia reperfusion injury Diseases 0.000 abstract description 6
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 abstract description 5
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 abstract description 5
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 abstract description 4
- 230000002265 prevention Effects 0.000 abstract description 3
- 230000006909 anti-apoptosis Effects 0.000 abstract description 2
- 230000003110 anti-inflammatory effect Effects 0.000 abstract description 2
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 32
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 28
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 27
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 21
- 230000010412 perfusion Effects 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 12
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 11
- 208000028867 ischemia Diseases 0.000 description 11
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 10
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 10
- 102100040247 Tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 10
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 10
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 10
- 108010053070 Glutathione Disulfide Proteins 0.000 description 9
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 9
- 238000000034 method Methods 0.000 description 9
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 9
- YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N glutathione disulfide Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@H](C(=O)NCC(O)=O)CSSC[C@@H](C(=O)NCC(O)=O)NC(=O)CC[C@H](N)C(O)=O YPZRWBKMTBYPTK-BJDJZHNGSA-N 0.000 description 8
- 208000010125 myocardial infarction Diseases 0.000 description 8
- 239000001993 wax Substances 0.000 description 8
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 7
- 230000010410 reperfusion Effects 0.000 description 7
- 238000011160 research Methods 0.000 description 7
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 7
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 6
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 5
- 230000000747 cardiac effect Effects 0.000 description 5
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 5
- 210000005240 left ventricle Anatomy 0.000 description 5
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 5
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 5
- 208000024172 Cardiovascular disease Diseases 0.000 description 4
- 206010061216 Infarction Diseases 0.000 description 4
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000007574 infarction Effects 0.000 description 4
- 230000002757 inflammatory effect Effects 0.000 description 4
- 230000000302 ischemic effect Effects 0.000 description 4
- 230000036722 left ventricular developed pressure Effects 0.000 description 4
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 4
- 230000002861 ventricular Effects 0.000 description 4
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N Toluene Chemical compound CC1=CC=CC=C1 YXFVVABEGXRONW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 description 3
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 3
- 230000001640 apoptogenic effect Effects 0.000 description 3
- 210000001367 artery Anatomy 0.000 description 3
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 3
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 229930003935 flavonoid Natural products 0.000 description 3
- -1 flavonoid compound Chemical class 0.000 description 3
- 235000017173 flavonoids Nutrition 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000000004 hemodynamic effect Effects 0.000 description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 3
- 208000014674 injury Diseases 0.000 description 3
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 3
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000020518 Carthamus tinctorius Species 0.000 description 2
- 235000003255 Carthamus tinctorius Nutrition 0.000 description 2
- 208000013875 Heart injury Diseases 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 2
- 210000000709 aorta Anatomy 0.000 description 2
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000003855 cell nucleus Anatomy 0.000 description 2
- RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N chloral hydrate Chemical compound OC(O)C(Cl)(Cl)Cl RNFNDJAIBTYOQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229960002327 chloral hydrate Drugs 0.000 description 2
- 230000034994 death Effects 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 2
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 230000004217 heart function Effects 0.000 description 2
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 2
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 description 2
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 2
- 230000003680 myocardial damage Effects 0.000 description 2
- 210000004165 myocardium Anatomy 0.000 description 2
- 210000001087 myotubule Anatomy 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 230000036542 oxidative stress Effects 0.000 description 2
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 210000005077 saccule Anatomy 0.000 description 2
- 238000010008 shearing Methods 0.000 description 2
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 2
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 2
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 2
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 2
- IAVUBSCVWHLRGE-UXEKTNMQSA-N (6e)-2,5-dihydroxy-6-[(e)-1-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-enylidene]-2,4-bis[(2s,3r,4r,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]cyclohex-4-ene-1,3-dione Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1C(C(C(O)([C@H]1[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1)O)C1=O)=O)=C(O)\C1=C(/O)\C=C\C1=CC=C(O)C=C1 IAVUBSCVWHLRGE-UXEKTNMQSA-N 0.000 description 1
- 125000004203 4-hydroxyphenyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(*)C([H])=C1[H] 0.000 description 1
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 102000004420 Creatine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010042126 Creatine kinase Proteins 0.000 description 1
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- 235000006200 Glycyrrhiza glabra Nutrition 0.000 description 1
- 244000303040 Glycyrrhiza glabra Species 0.000 description 1
- 206010018833 Haematocoele Diseases 0.000 description 1
- 208000005873 Hematocele Diseases 0.000 description 1
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 1
- 208000007201 Myocardial reperfusion injury Diseases 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 240000004534 Scutellaria baicalensis Species 0.000 description 1
- 235000017089 Scutellaria baicalensis Nutrition 0.000 description 1
- 102000019197 Superoxide Dismutase Human genes 0.000 description 1
- 108010012715 Superoxide dismutase Proteins 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 108091008698 baroreceptors Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000001964 calcium overload Effects 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 1
- 208000029078 coronary artery disease Diseases 0.000 description 1
- WGHKKEJHRMUKDK-UHFFFAOYSA-N cyclohexa-2,5-dien-1-one Chemical compound O=C1C=CCC=C1 WGHKKEJHRMUKDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000035487 diastolic blood pressure Effects 0.000 description 1
- 230000003205 diastolic effect Effects 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000004043 dyeing Methods 0.000 description 1
- 230000037149 energy metabolism Effects 0.000 description 1
- YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N eosin Chemical compound [Na+].OC(=O)C1=CC=CC=C1C1=C2C=C(Br)C(=O)C(Br)=C2OC2=C(Br)C(O)=C(Br)C=C21 YQGOJNYOYNNSMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N glycyrrhizinic acid Chemical compound O([C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O[C@@H]1O[C@@H]1C([C@H]2[C@]([C@@H]3[C@@]([C@@]4(CC[C@@]5(C)CC[C@@](C)(C[C@H]5C4=CC3=O)C(O)=O)C)(C)CC2)(C)CC1)(C)C)C(O)=O)[C@@H]1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O LPLVUJXQOOQHMX-QWBHMCJMSA-N 0.000 description 1
- 201000004920 hematocele of tunica vaginalis testis Diseases 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 description 1
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 1
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- ZZMASNSDVDSYKO-UHFFFAOYSA-N hydroxysafflor yellow A Natural products OCC1OC(C(O)C(O)C1O)C2=C(O)C(O)(C3OC(CO)C(O)C(O)C3O)C(=O)C(=C2O)C(=O)C=Cc4ccc(O)cc4 ZZMASNSDVDSYKO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 210000004969 inflammatory cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 235000011477 liquorice Nutrition 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004660 morphological change Effects 0.000 description 1
- 230000008065 myocardial cell damage Effects 0.000 description 1
- 210000004940 nucleus Anatomy 0.000 description 1
- 238000001543 one-way ANOVA Methods 0.000 description 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 1
- 230000008506 pathogenesis Effects 0.000 description 1
- 239000008055 phosphate buffer solution Substances 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 210000001774 pressoreceptor Anatomy 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 description 1
- 230000021419 recognition of apoptotic cell Effects 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 230000035488 systolic blood pressure Effects 0.000 description 1
- 238000010257 thawing Methods 0.000 description 1
- 229940126585 therapeutic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 1
- 230000002537 thrombolytic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011277 treatment modality Methods 0.000 description 1
- 238000009966 trimming Methods 0.000 description 1
- 238000013042 tunel staining Methods 0.000 description 1
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/7042—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings
- A61K31/7048—Compounds having saccharide radicals and heterocyclic rings having oxygen as a ring hetero atom, e.g. leucoglucosan, hesperidin, erythromycin, nystatin, digitoxin or digoxin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
- A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Heart & Thoracic Surgery (AREA)
- Cardiology (AREA)
- Vascular Medicine (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种羟基红花黄色素B在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用，实验结果提示羟基红花黄色素B对离体缺血再灌注损伤模型具有预防保护作用，且该作用成剂量依赖性，这与羟基红花黄色素B的抗炎、抗氧化和抗凋亡作用有关。
Description
技术领域
本发明属于医学技术领域，涉及一种羟基红花黄色素B在制备防治缺血再灌注损伤的药物中的应用。
背景技术
随着社会发展及生活质量的提高，心血管疾病逐渐成为多发病。目前，我国心肌梗死的发病率呈上升趋势，它是冠心病等心血管疾病中引起死亡的主要原因之一。临床治疗的方法包括：药物溶栓、经皮冠状动脉再通、心脏旁路移植及心脏移植等，均可明显降低心肌梗死患者死亡率和致残率。然而，进一步的研究发现，在上述治疗过程中，缺血再灌注会导致缺血心肌损伤的加重，因此心肌缺血再灌注损伤成为影响治疗效果的重要因素。近年来，研究发现心肌缺血再灌注损伤的发生机制是多方面的，涉及自由基损伤、氧化应激、钙超载、能量代谢障碍及凋亡等机制。基于心肌缺血再灌注损伤的发病机制，临床上出现的治疗方式主要包括：药物的缺血预处理、药物的缺血后处理、以及机械性缺血预处理等，均可降低心肌缺血再灌注所引起的损伤。但是，心血管病的不可预测性和现有药物的弊端也为心肌缺血再灌注损伤的预防和治疗带来了新的挑战，因此，急需开发一种新的治疗药物。
研究发现黄酮类化合物在心血管疾病方面有显著优势。我们课题组对中药中多种黄酮类化合物进行大规模、多成分的药理学研究，特别是甘草，黄芩等药物成分对心肌缺血再灌注损伤的相关药理作用，阐述了其相关的作用机制。羟基红花黄色素B是从中药红花(拉丁学名：Carthamus tinctorius L.)发现的一种新的黄酮类化合物，该化合物是羟基红花黄色素A的同分异构体，然而它们有着不同的结构式，羟基红花黄色素B的结构式如图1所示。然而，现有研究中，关于羟基红花黄色素B是否可以作为一种药物应用于心肌缺血再灌注损伤的防治，还没有相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种羟基红花黄色素B在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用，该方法研究了羟基红花黄色素B对离体缺血再灌注损伤模型的保护作用，且探讨了羟基红花黄色素B可能的作用机制。
其具体技术方案为：
一种羟基红花黄色素B在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用。
与现有技术相比，本发明的有益效果：
经过实验证明：羟基红花黄色素B对离体缺血再灌注损伤模型具有预防保护作用，且该作用成剂量依赖性，作用机制可能与羟基红花黄色素B的抗炎、抗氧化、抗凋亡作用有关。这为中药化学成分羟基红花黄色素B在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用方面提供了基础理论依据。
附图说明
图1是羟基红花黄色素B的结构式。
图2是羟基红花黄色素B对大鼠心肌缺血再灌注损伤模型中心肌梗死面积的影响，(n＝8)，与正常组相比，##P<0.01；与模型组相比，**P<0.01。
图3是羟基红花黄色素B对大鼠心肌缺血再灌注损伤模型中心肌组织形态变化(×400)。
图4是羟基红花黄色素B对心肌细胞凋亡的影响(×400)，与正常组相比，##P<0.01；与模型组相比，**P<0.01，*P<0.05。
具体实施方式
下面结合附图和具体实施方案对本发明的技术方案作进一步详细地说明。
本发明提供的一种羟基红花黄色素B在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用，羟基红花黄色素B化学式为：2,5-环己二烯-1-酮,4-β-D-吡喃葡萄糖基-6-α-D-果糖基-3,4,5-三羟基-2-[(2E)-3-(4-羟苯基)-1-氧代-2-丙烯基]-(9CI)，结构式如图1所示。
1实验材料
1.1实验动物：SPF级雄性SD大鼠32只，体重260-280g，济南朋悦实验动物繁育有限公司(许可证号：SCXK(鲁)2014-0006)。实验开始前分笼饲养，适应性饲养3天，12h光照/12h黑暗，湿度40-50％，温度20-23℃，自由进食水，清洁级饲料购买于医药研究中心。
1.2实验试剂：羟基红花黄色素B(Solarbio，SF8050-20)，水合氯醛(成都科龙化工试剂厂，2015090601)，苏木素伊红染试剂盒(Solarbio，批号：2016030601)，TTC购自Sigma公司,超氧化物歧化酶SOD、还原型谷胱甘肽GSH、氧化型谷胱甘肽GSSG、肌酸激酶、IL-6、TNF-a和In Situ Cell Death Detection Kit POD试剂盒购自Tsz公司，4-0线，其它试剂均为国产分析纯。
1.3实验仪器：Langendorff离体心脏灌流***(成都泰盟软件有限公司)，BL420S生物机能实验***(成都泰盟软件有限公司)，恒温水浴器(成都泰盟软件有限公司)，超低温冰箱(海尔有限公司)，数码相机(佳能公司)，电子天平(sartorius)，多功能酶标仪(Thermo)，石蜡切片机(德国Leica)，光学显微镜(德国Leica)，高速冷冻离心机(德国Leica)，恒温箱(上海***实业有限公司)。
2实验方法
2.1实验分组及心肌缺血再灌注损伤模型
实验分组：将动物随机分为4组，每组8只，其中包括：正常组、模型组、低剂量羟基红花黄色素B组(0.5μmol/L)、高剂量羟基红花黄色素B组(2μmol/L)。
心肌缺血再灌注损伤模型：采用Langendorff灌流装置来构建，详细的实验操作如下：称量动物体重，10％水合氯醛麻醉(剂量：3mL/kg)，舌下静脉注射肝素钠(浓度：6250U/100mL，剂量：0.9mL/kg)，固定，消毒，剪断肋骨，开胸取心，保留约1cm主动脉，眼科剪掉其它动脉、静脉等组织，迅速放入预冷的K-H缓冲液中，轻柔洗净心脏积血，迅速行灌流装置逆行***主动脉约0.4cm，固定，眼科剪于左心耳剪口将压力球囊置左心室，另一端借传感器，固定球囊，调整球囊体积设置左心室舒张末期压成5～10mmHg。灌注充分氧饱和的K-H缓冲液，灌流***设37±0.5℃，***混合气体设95％氧气/5％二氧化碳，进行90cm H2O的恒压恒温灌流。启用生物信号采集***，压力感受器将压力信号转换电信号，测量灌流心脏的心功能指标：左室收缩压(left ventricular systolic pressure，LVSP)，左室舒张末压(leftventricular end-diastolic pressure，LVEDP)，左室压力最大升高/降低速率(±Dp/dtmax)，计算左室的发展压(left ventricular developed pressure，LVDP)，计滴器测量冠脉流流量(coronary flow，CF)。
各组动物模型灌注情况设置如下：正常对照组：持续灌注K-H缓冲液95min；模型组：K-H缓冲液平衡灌流30min，停灌20min，再灌注K-H缓冲液45min；羟基红花黄色素B组(低剂量和高剂量)：K-H缓冲液平衡灌流20min，分别灌注含羟基红花黄色素B 0.5μmol/L或2μmol/L的K-H缓冲液10min，再灌注K-H缓冲液45min。
2.2各组灌流液CK-MB检测
各组心脏灌流过程中，分别收集不同时间点的灌流液，放于4或-80℃冰箱保存，避免反复冻融从而影响酶活性。然后，按照商业化的CK-MB检测试剂盒说明操作，检测不同灌流液中CK-MB的活性。
2.3心脏梗死面积的检测
灌流操作结束后，去掉动脉夹和测压球囊，将实验后的心脏放入常温PBS中冲洗。然后，置于-80℃超低温冰箱中冷冻10min，冷冻后刀片垂直心脏纵轴均匀横切为1mm厚度5-6片，放入PBS缓冲液配置1％TTC染液，将其在37℃水浴锅中孵育25min。反应完毕后，把心肌切片置于10％甲醛固定24h，并对标本进行标记。固定后，把心肌切片置于蓝色塑料板上，用数码相机拍照，心脏切片梗死区域呈灰白色，切片非梗死区域呈红色，用Image-Pro Plus软件检测梗死，非梗死面积及心肌梗死率＝梗死区面积/心肌切片区总面积×100％。
2.4缺血部位的心肌组织中SOD、MDA、GSH、GSSG、TNF-a和IL-6检测
剪取实验后的心脏左心室心尖心肌组织50mg，倒入预冷的0.5ml磷酸缓冲液制成10％组织匀浆，在4℃下，3000rpm离心15min后，收集上清液。按照商业化的SOD、MDA、GSH、GSSG、TNF-a和IL-6检测试剂盒说明操作，分别对上清液中相关酶的活性或含量进行检测。
2.5缺血部位的心肌组织、细胞形态检测
心脏进行灌流操作后，去掉测压球囊和动脉夹，实验心脏放入常温液PBS液中，冲洗干净，剪取心肌左心室缺血区采集组织标本，10％甲醛固定24h，自来水冲洗24h，然后依次放于50％、60％、70％、80％的乙醇浸润各1h，95％乙醇45min，100％乙醇Ⅰ30min，100％乙醇Ⅱ20min脱水，乙醇二甲苯1:1浸泡30min，二甲苯液Ⅰ和Ⅱ各20min，观察至充分透明；标本再依次浸入62℃恒温箱软蜡杯甲苯混合杯Ⅰ、软蜡硬蜡Ⅱ、软蜡硬蜡III、硬蜡杯IV各1h浸蜡，整修蜡块至上下蜡面两边平行切片6-8μm，使用多聚赖氨酸处理的载玻片捞片，将烤箱设置62℃对载玻片进行烘烤12-15h，将烤箱设置62℃，烘烤心脏切片30min，依次放入二甲苯液Ⅰ(脱蜡10min)，100％乙醇Ⅰ和100％乙醇Ⅱ中各脱苯5min，95％乙醇5min，85％、75％、60％、50％乙醇各5min，水中20-30s水化；苏木素液染色5min，水洗染液2s，盐酸乙醇分化，0.5％伊红3min，自来水洗1-2s，50％、60％、70％、80％的乙醇各5min，95％乙醇2min，100％乙醇Ⅰ中1min，100％乙醇Ⅱ中1min进行梯度脱水，二甲苯Ⅰ10min，二甲苯Ⅱ10min透化，封片，观察且拍照。
2.6心肌组织中细胞凋亡的检测
利用TUNEL染色检测试剂盒对心肌组织中凋亡细胞进行检测，具体的操作步骤请参照In Situ Cell Death Detection Kit POD试剂盒的说明书。心肌组织切片制作方法同苏木素-伊红染色标本制作方法：脱蜡，水化，DAB显色后，采用苏木素染色标记正常的细胞核，10mM蛋白酶K将标本切片处理15min，避光置恒温水浴锅37℃下TUNEL液中温育1h，水浴锅37℃POD液中30min，将处理的标本载玻片用光学显微镜观察，正常细胞核显示蓝色，染色中凋亡呈棕黄色。每个标本中8个区域，计数凋亡细胞，心肌细胞凋亡指数＝阳性细胞总数/总细胞数×100％，计算凋亡指数平均值。
2.7统计学分析实验数据
实验数据以均数±标准差
表示，用SPSS13.0软件进行统计。采用单因素方差分析，P<0.05认为具有显著性差异，具有统计学意义。
3结果
3.1羟基红花黄色素B对缺血再灌注损伤心脏血流动力系数的影响
如表1所示，与正常组比较，模型组心脏血流变参数LVDP、+Dp/dtmax、-Dp/dtmax和CF均降低(P<0.05)；与模型组比较，羟基红花黄色素B处理组的心脏血流变参数LVDP、+Dp/dtmax、-Dp/dtmax、CF(P<0.05)均明显升高，表明心脏左心室发展压、舒张功能和冠脉灌流量均显著性改善；与羟基红花黄色素B低剂量组比较，高剂量组心脏血流动力参数均进一步升高(P<0.05)。这些结果表明羟基红花黄色素B对缺血再灌注引发的离体大鼠心脏损伤有保护作用，并呈现剂量依赖性。
表1羟基红花黄色素B对心脏血流动力学参数的影响。(
n＝8)
注：与正常组相比，##P<0.01，#P<0.01；与模型组相比，**P<0.01，*P<0.05。
3.2羟基红花黄色素B对心脏冠脉灌流液中CK-MB含量的影响
实验结果表明：与正常组相比，模型组心脏灌流液中CK-MB含量升高(P<0.05)；而与模型组相比，羟基红花黄色素B处理组CK-MB的含量均降低(P<0.05)。与羟基红花黄色素B低剂量组比，高剂量组CK-MB含量明显降低(P<0.05)。上述这些结果表明羟基红花黄色素B可显著降低缺血再灌注引发的离体大鼠心脏冠脉流液中CK-MB含量，并呈现出剂量依赖性，提示羟基红花黄色素B对缺血再灌注引发的心脏损伤有保护作用。
表2羟基红花黄色素B对大鼠心肌缺血再灌注冠脉液CK-MB的影响(n＝8，ng/ml)
注：与正常组相比，*P<0.05；与模型组相比，##P<0.01，#P<0.05；与低剂量组比，&&P<0.01，&P<0.05。
3.3羟基红花黄色素B对缺血再灌注损伤引发的心脏梗死面积的影响
实验结果表明：与正常组比较，模型组心脏的梗死率显著升高；与模型组相比，羟基红花黄色素B处理组心脏的梗死面积均显著性降低(P<0.01)；并且羟基红花黄色素B高剂量组心肌梗死面积明显低于低剂量组心肌梗死面积(P<0.01)(图2)。这些结果表明羟基红花黄色素B对缺血再灌注心肌损伤有保护作用，可降低缺血再灌注所引发的心脏梗死面积，并呈现出剂量依赖性。
注：与正常组相比，##P<0.01，与模型组相比，**P<0.01。
3.4ELISA法检测羟基红花黄色素B对心肌组织中MDA、SOD、GSH、GSSG、IL-6和TNF-a水平的影响
实验结果表明，与正常组比较，模型组心肌组织中抗氧化酶SOD、GSH水平降低、而GSSG、MDA、炎症因子IL-6和TNF-a的水平均明显升高(P<0.05)；与模型组比较，羟基红花黄色素B治疗组心肌组织中抗氧化酶SOD、GSH水平是升高的，而GSSG、MDA、炎症因子IL-6和TNF-a的水平是明显降低的(P<0.05)。与羟基红花黄色素B低剂量相比，高剂量组心肌组织中抗氧化酶SOD、GSH水平是升高的，GSSG、MDA、炎症因子IL-6和TNF-a的水平是明显降低的(P<0.05)(表3和4)。这些结果提示羟基红花黄色素B可通过提高抗氧化酶SOD和GSH的水平和降低GSSG、MDA、炎症因子IL-6和TNF-a的水平，从而发挥了对心肌缺血再灌注损伤的保护作用，并具有剂量依赖性。
表3羟基红花黄色素B对心肌组织中SOD、GSH和GSSG水平的影响(
n＝8)
表4羟基红花黄色素B对心肌组织中MDA、IL-6和TNF-a水平的影响(
n＝8)
注：与正常组相比，**P<0.01，*P<0.05；与模型组相比，##P<0.01，#P<0.05；与低剂量组比，&&P<0.01，&P<0.05。
3.5 HE染色法检测羟基红花黄色素B对心肌组织细胞形态的影响
实验结果显示：与正常组比较，模型组心肌组织染色不均匀，细胞肿胀，肌纤维排列紊乱，断裂明显，可见有炎症细胞；与模型组比较，羟基红花黄色素B处理组的心肌组织染色均匀，细胞肿胀不明显，肌纤维排列较规则，断裂情况降低；与羟基红花黄色素B低剂量相比，高剂量组形态损伤也有所降低(图3)。这些结果也提示羟基红花黄色素B可以减轻心肌再灌注所引发的损伤，且表现出剂量依赖性。
3.6 TUNEL法检测羟基红花黄色素B对心肌组织细胞凋亡的影响
实验结果显示：与正常组比较，模型组心肌细胞凋亡率显著性升高(P<0.01)；与模型组比较，羟基红花黄色素B处理组的心肌细胞凋亡率均明显降低(P<0.05)；并且羟基红花黄色素B高剂量组心肌细胞凋亡率明显低于低剂量组心肌细胞凋亡率(P<0.05)(图4)。上述结果提示羟基红花黄色素B可以显著降低心肌再灌注损伤引发的心肌细胞凋亡率，且呈剂量依赖性。
综上实验，羟基红花黄色素B可明显升高离体大鼠心脏左室压力升降速率及灌流量，降低了心肌细胞损伤中心肌酶CK-MB含量，从而降低了缺血再灌注引发的心肌梗死率。考虑到氧化应激反应、炎症反应和心肌细胞凋亡等是造成心肌缺血再灌注损伤的重要因素，我们进一步研究了羟基红花黄色素B对这些指标的影响。研究结果表明羟基红花黄色素B不仅可以提高SOD、GSH表达量，还降低了MDA、IL-6和TNF-a的含量，从而降低了心肌细胞核损伤及心肌细胞的凋亡率。
本实验为中药成分羟基红花黄色素B对心肌缺血再灌注损伤的保护作用提供了理论依据。实验研究证明，羟基红花黄色素B对缺血再灌注损伤心肌有恢复心功能、抑制氧化反应、降低炎症反应及抗凋亡作用，具有开发为保护心肌缺血再灌注损伤药物的药理基础。
以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，本发明的保护范围不限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明披露的技术范围内，可显而易见地得到的技术方案的简单变化或等效替换均落入本发明的保护范围内。
Claims (1)
1.一种羟基红花黄色素B在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810061748.0A CN108392486B (zh) | 2018-01-23 | 2018-01-23 | 羟基红花黄色素b在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201810061748.0A CN108392486B (zh) | 2018-01-23 | 2018-01-23 | 羟基红花黄色素b在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN108392486A CN108392486A (zh) | 2018-08-14 |
| CN108392486B true CN108392486B (zh) | 2020-01-03 |
Family
ID=63094153
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201810061748.0A Active CN108392486B (zh) | 2018-01-23 | 2018-01-23 | 羟基红花黄色素b在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN108392486B (zh) |
Families Citing this family (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108743602B (zh) * | 2018-08-27 | 2021-02-26 | 滨州医学院 | 羟基红花黄色素b在制备治疗乳腺癌药物中的应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1765357A (zh) * | 2004-10-25 | 2006-05-03 | 山东绿叶天然药物研究开发有限公司 | 红花黄色素b在制备治疗心脑血管疾病的药物中的应用 |
| CN101190906B (zh) * | 2007-06-22 | 2011-01-12 | 北京星昊医药股份有限公司 | 红花黄色素b的制备方法及其应用 |
| CN103830221A (zh) * | 2012-11-21 | 2014-06-04 | 青岛百草汇中草药研究所 | 羟基红花黄色素a在制备治疗心血管疾病的药物中的应用 |
| CN104230864A (zh) * | 2013-06-08 | 2014-12-24 | 浙江永宁药业股份有限公司 | 新的羟基红花黄色素a二价药用盐及其制备方法和用途 |
| CN103980239B (zh) * | 2013-02-07 | 2016-04-13 | 浙江永宁药业股份有限公司 | 羟基红花黄色素a钠及其生产方法和用途 |
-
2018
- 2018-01-23 CN CN201810061748.0A patent/CN108392486B/zh active Active
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Two New Quinochalcone C-Glycosides from the Florets of Carthamus tinctorius;Shijun Yue 等;《International Journal of Molecular Sciences》;20141231;第15卷;第16760-16771页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108392486A (zh) | 2018-08-14 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN104173365B (zh) | N6-(2-羟乙基)腺苷在抗肾衰竭中的用途 | |
| CN108392486B (zh) | 羟基红花黄色素b在制备防治心肌缺血再灌注损伤的药物中的应用 | |
| CN111562394B (zh) | 热休克因子2结合蛋白在肝脏缺血再灌注损伤、药物性肝损伤中的应用 | |
| El-Beltagy et al. | Therapeutic role of Azadirachta indica leaves ethanolic extract against diabetic nephropathy in rats neonatally induced by streptozotocin | |
| Liu et al. | Antioxidative natural product protect against econazole-induced liver injuries | |
| CN109091488B (zh) | 紫云英苷治疗糖尿病性睾丸功能损伤的制药用途 | |
| Zhang et al. | Liensinine pretreatment reduces inflammation, oxidative stress, apoptosis, and autophagy to alleviate sepsis acute kidney injury | |
| Teoh et al. | A histological study of the structural changes in the liver of streptozotocin-induced diabetic rats treated with or without Momordica charantia (bitter gourd) | |
| KR101668443B1 (ko) | 아모디아퀸을 유효성분으로 함유하는 대사성 질환의 예방, 개선, 또는 치료용 조성물 | |
| CN105560265B (zh) | 柴胡多糖在制备防治糖尿病肾病的药物中的用途 | |
| CN103284993A (zh) | 汉黄芩素在制备治疗慢性肾病的药物中的用途 | |
| KR101938056B1 (ko) | 개꼬시래기 추출물 또는 분획물을 유효성분으로 함유하는 당뇨병의 예방 및 치료용 약학 조성물 | |
| Wei et al. | Polyphenols from Sorbus aucuparia ameliorate insulin resistance and metabolic disorders in diabetic mice. | |
| Ulla et al. | Supplementation of Citrus maxima fruits peel powder improves glucose intolerance and prevents oxidative stress in liver of alloxan-induced diabetic rats | |
| Mulyani et al. | In vivo test of rhizophora mucronata mangrove extract from pangandaran coast towards Nile Tilapia Oreochromis niloticus infected by Vibrio harveyi | |
| CN107593685B (zh) | 马尾松树皮提取物在制备移植器官保存液中的应用 | |
| CN108524485A (zh) | 一种猴睾酮缺乏模型的建立方法 | |
| Kintoko et al. | Hypoglycaemic activity of 2-dodecyl-6-methoxycyclohexa-2, 5-diene-1, 4-dione in streptozotocin-induced diabetic mice through ameliorating metabolic function and regulating peroxisome proliferator-activated receptor γ | |
| Agbor et al. | Auricularia polytricha restores altered reproductive parameters in streptozotocin-induced diabetic Wistar rat | |
| Jankyova et al. | The Evaluation of Efficacy of Pycnogenol? Fractions on Endothelial Dysfunction | |
| CN115478105B (zh) | Sirt4在肝缺血疾病治疗中的应用 | |
| CN115569134B (zh) | 1，4-[二(1，2-苯并异硒唑-3(2h)-酮)]丁烷及其组合物的医药用途 | |
| CN104352593B (zh) | 一种治疗糖尿病的药物组合物 | |
| NAJI et al. | Treatment of burns associated with diabetes with tannins extracted from Haloxylon salicornium and Zygophilium coccinium | |
| CN117462547B (zh) | Nsc668394在制备铁死亡抑制剂及预防缺血再灌注损伤药物中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right |
Denomination of invention: Application of hydroxysafflower yellow B in the preparation of drugs for the prevention and treatment of myocardial ischemia-reperfusion injury Effective date of registration: 20211214 Granted publication date: 20200103 Pledgee: Yantai financing guarantee Group Co.,Ltd. Pledgor: BINZHOU MEDICAL University Registration number: Y2021980014859 |
|
| PE01 | Entry into force of the registration of the contract for pledge of patent right | ||
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |
Granted publication date: 20200103 Pledgee: Yantai financing guarantee Group Co.,Ltd. Pledgor: BINZHOU MEDICAL University Registration number: Y2021980014859 |
|
| PC01 | Cancellation of the registration of the contract for pledge of patent right |