CN108310020A - 一种灵芝药质菌丝的制备方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种灵芝药质菌丝的制备方法，包括以下步骤：将药质菌丝培养基装入食用菌袋中，于120‑124℃高压灭菌30‑40分钟；培养灵芝母种；培养灵芝母种接种菌；无菌条件下将灵芝接种菌接入药质菌丝培养基中，培养至菌丝长满菌袋，收集菌棒，将菌棒晒干、粉碎成粉，即得。本发明将中药下脚料作为灵芝培养基，培养灵芝菌丝，不仅缩短了成本，提高了产品品质，而且使中药下脚料得到合理利用，提高了资源利用率。

Description

一种灵芝药质菌丝的制备方法
技术领域
本发明涉及灵芝培育技术领域，尤其是涉及一种灵芝药质菌丝的制备方法。
背景技术
随着我国大中药产业的快速发展和健康服务业的不断推进，以及国际市场对源于自然资源性产品的青睐，促使中药及天然药用生物资源原料的生产规模不断扩大，资源经济产业链得到延伸和拓展。与此同时，在中药资源产业化过程中也产生了大量的中药废弃物，其主要来源于药材栽培(养殖)生产过程产生的非药用部位、药材产地加工及中药饮片生产过程中废弃的组织器官等下脚料。这些中药下脚料一般含水量较高，且含有一定营养成分，极易腐败，易对环境造成严重污染。目前对中药废弃物的处理方法：淤作为废弃物集中堆放或掩埋，这样不仅占用大量土地，产生大量有害发酵气体，而且易污染地下水；于将中药废弃物干燥后焚烧，但焚烧后产生大量烟尘、二氧化碳等排放物，造成环境污染和资源的极大浪费。
灵芝又名仙草，是我国医学宝库中一种名贵中药，集保健和药用为一身。具有止咳平喘、补气安神、延年益寿的功效。古今药理与临床研究均证明，灵芝确有防病治病、延年益寿之功效。东汉时期的《神农本草经》、明代著名医药学家李时珍的《本草纲目》，都对灵芝的功效有详细的极为肯定的记载。现在灵芝作为药物已正式被国家药典收载，同时它又是国家批准的新资源食品，无毒副作用，可以药食两用。虽然灵芝的药理成分非常丰富，其中有效成份可分为十大类，包括灵芝多糖、灵芝多肽、三萜类、16种氨基酸(其中含有七种人体必需氨基酸)、蛋白质、甾类、甘露醇、香豆精苷、生物碱、有机酸(主含延胡索酸)，以及微量元素Ge、P、Fe、Ca、Mn、Zn等。
基于上述研究，本发明旨在将中药下脚料作为灵芝培养基，使得培养出的灵芝菌丝具有更广泛的药理作用，同时推动了中药下脚料的资源化利用，促进了中药资源产业走循环经济、绿色产业的发展之路。
发明内容
本发明的目的在于提供一种灵芝药质菌丝的制备方法，该方法将中药下脚料作为灵芝培养基，培养灵芝菌丝，不仅缩短了成本，提高了产品品质，而且使中药下脚料得到合理利用，提高了资源利用率。
为实现上述目的，本发明提供如下技术方案：
一种灵芝药质菌丝的制备方法，包括以下步骤：
(1)将药质菌丝培养基装入食用菌袋中，于120-124℃高压灭菌30-40分钟；
(2)培养灵芝母种：选择柄短、肉厚、褐黑色、有光泽的灵芝作为菌种，先用清水洗净，然后移入接种箱内；用75％的酒精冲洗，再用蒸馏水冲洗三次，滤纸吸干，切成2-3mm薄片，放入24-28℃的恒温箱中培养5-7天，待白色菌丝长满时，即为灵芝母种；
(3)培养灵芝母种接种菌：将步骤(2)所得灵芝母种接种到液体发酵培养基中，于28-32℃培养箱中培养5天(优选于30℃培养箱中培养5天)，获得灵芝接种菌；
(4)无菌条件下将步骤(3)所得灵芝接种菌接入到步骤(1)所得药质菌丝培养基中，于温度26℃、湿度60％条件下培养至菌丝长满菌袋，收集菌棒，将菌棒晒干、粉碎成粉，即得。
上述一种灵芝药质菌丝的制备方法，优选的方案是，步骤(1)所述药质菌丝培养基由以下重量份的原料制成：中药下脚料85-105份、麸皮5-10份、棉籽饼10-12份、南瓜子4-7份、猪胆粉3-5份、石膏1-2份、葡萄糖1-2份、水110-130份。
优选地，所述药质菌丝培养基的制备步骤如下：
(1)取麻油置锅内，加热至60℃-70℃(优选加热至65℃)，投入南瓜子，炸至金黄色时，立即取出，沥去油，放凉，备用；
(2)将步骤(1)处理后的南瓜子和麸皮、棉籽饼、猪胆粉、石膏、葡萄糖和中药下脚料粉碎，加水搅拌均匀，即得。
上述一种灵芝药质菌丝的制备方法，优选的方案是，步骤(3)所述液体发酵培养基由蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水按照质量比1:5:3:0.3:0.1:100配制而成；制备步骤为：将蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水置于三角瓶中，浸泡12-15小时(优选浸泡14小时)，然后将三角瓶放入摇床中，调整振荡频率为220-260r/min，于30℃下发酵100小时，过滤，收集，即得。
上述一种灵芝药质菌丝的制备方法，优选的方案是，步骤(1)于122℃高压灭菌35分钟。
上述一种灵芝药质菌丝的制备方法，优选的方案是，步骤(2)放入26℃的恒温箱中培养6天。
上述一种灵芝药质菌丝的制备方法，优选的方案是，所述中药下脚料为五味子、茜草、枳壳、玉米须、橘络中的任意两种或者多种的混合物。
上述一种灵芝药质菌丝的制备方法，优选的方案是，调整振荡频率为240r/min。
本发明的有益效果体现在：本发明通过合理设计培养基配方和培养方法，使得灵芝菌丝能最大效率的吸收并富集中药下脚料中的活性成分，从而扩展了灵芝菌丝的药理作用，提高了灵芝菌丝的品质。
具体实施方式
下面结合具体实施例对本发明进行详细说明。以下实施例将有助于本领域的技术人员进一步理解本发明，但不以任何形式限制本发明。应当指出的是，对本领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明构思的前提下，还可以做出若干变形和改进。这些都属于本发明的保护范围。
实施例1一种灵芝药质菌丝的制备方法，包括以下步骤：
(1)将药质菌丝培养基装入食用菌袋中，于120℃高压灭菌30分钟；
(2)培养灵芝母种：选择柄短、肉厚、褐黑色、有光泽的灵芝作为菌种，先用清水洗净，然后移入接种箱内；用75％的酒精冲洗，再用蒸馏水冲洗三次，滤纸吸干，切成2-3mm薄片，放入24℃的恒温箱中培养5天，待白色菌丝长满时，即为灵芝母种；
(3)培养灵芝母种接种菌：将步骤(2)所得灵芝母种接种到液体发酵培养基中，于28℃培养箱中培养5天，获得灵芝接种菌；
(4)无菌条件下将步骤(3)所得灵芝接种菌接入到步骤(1)所得药质菌丝培养基中，于温度26℃、湿度60％条件下培养至菌丝长满菌袋，收集菌棒，将菌棒晒干、粉碎成粉，即得。
其中，所述药质菌丝培养基由以下重量份的原料制成(15g/份)：中药下脚料85份、麸皮5份、棉籽饼10份、南瓜子4份、猪胆粉3份、石膏1份、葡萄糖1份、水110份。
所述药质菌丝培养基的制备步骤如下：
(1)取麻油置锅内，加热至60℃，投入南瓜子，炸至金黄色时，立即取出，沥去油，放凉，备用；
(2)将步骤(1)处理后的南瓜子和麸皮、棉籽饼、猪胆粉、石膏、葡萄糖和中药下脚料粉碎，加水搅拌均匀，即得。
其中，所述中药下脚料为五味子和茜草的混合物。
所述液体发酵培养基由蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水按照质量比 1:5:3:0.3:0.1:100配制而成；制备步骤为：将蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水置于三角瓶中，浸泡12小时，然后将三角瓶放入摇床中，调整振荡频率为220r/min，于 30℃下发酵100小时，过滤，收集，即得。
实施例2一种灵芝药质菌丝的制备方法，包括以下步骤：
(1)将药质菌丝培养基装入食用菌袋中，于124℃高压灭菌40分钟；
(2)培养灵芝母种：选择柄短、肉厚、褐黑色、有光泽的灵芝作为菌种，先用清水洗净，然后移入接种箱内；用75％的酒精冲洗，再用蒸馏水冲洗三次，滤纸吸干，切成2-3mm薄片，放入28℃的恒温箱中培养7天，待白色菌丝长满时，即为灵芝母种；
(3)培养灵芝母种接种菌：将步骤(2)所得灵芝母种接种到液体发酵培养基中，于32℃培养箱中培养5天，获得灵芝接种菌；
(4)无菌条件下将步骤(3)所得灵芝接种菌接入到步骤(1)所得药质菌丝培养基中，于温度26℃、湿度60％条件下培养至菌丝长满菌袋，收集菌棒，将菌棒晒干、粉碎成粉，即得。
上述一种灵芝药质菌丝的制备方法，优选的方案是，步骤(1)所述药质菌丝培养基由以下重量份的原料制成(35g/份)：中药下脚料105份、麸皮10份、棉籽饼12份、南瓜子7份、猪胆粉5份、石膏2份、葡萄糖2份、水130份。
所述药质菌丝培养基的制备步骤如下：
(1)取麻油置锅内，加热至70℃，投入南瓜子，炸至金黄色时，立即取出，沥去油，放凉，备用；
(2)将步骤(1)处理后的南瓜子和麸皮、棉籽饼、猪胆粉、石膏、葡萄糖和中药下脚料粉碎，加水搅拌均匀，即得。
所述中药下脚料为五味子和枳壳的混合物。
所述液体发酵培养基由蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水按照质量比 1:5:3:0.3:0.1:100配制而成；制备步骤为：将蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水置于三角瓶中，浸泡15小时，然后将三角瓶放入摇床中，调整振荡频率为260r/min，于 30℃下发酵100小时，过滤，收集，即得。
实施例3一种灵芝药质菌丝的制备方法，包括以下步骤：
(1)将药质菌丝培养基装入食用菌袋中，于121℃高压灭菌32分钟；
(2)培养灵芝母种：选择柄短、肉厚、褐黑色、有光泽的灵芝作为菌种，先用清水洗净，然后移入接种箱内；用75％的酒精冲洗，再用蒸馏水冲洗三次，滤纸吸干，切成2-3mm薄片，放入25℃的恒温箱中培养5天，待白色菌丝长满时，即为灵芝母种；
(3)培养灵芝母种接种菌：将步骤(2)所得灵芝母种接种到液体发酵培养基中，于28℃培养箱中培养5天，获得灵芝接种菌；
(4)无菌条件下将步骤(3)所得灵芝接种菌接入到步骤(1)所得药质菌丝培养基中，于温度26℃、湿度60％条件下培养至菌丝长满菌袋，收集菌棒，将菌棒晒干、粉碎成粉，即得。
所述药质菌丝培养基由以下重量份的原料制成(20g/份)：中药下脚料90份、麸皮6.5 份、棉籽饼10.5份、南瓜子5份、猪胆粉3.5份、石膏1份、葡萄糖1份、水115份；药质菌丝培养基的制备步骤如下：
(1)取麻油置锅内，加热至60℃，投入南瓜子，炸至金黄色时，立即取出，沥去油，放凉，备用；
(2)将步骤(1)处理后的南瓜子和麸皮、棉籽饼、猪胆粉、石膏、葡萄糖和中药下脚料粉碎，加水搅拌均匀，即得。
所述中药下脚料为枳壳和玉米须的混合物。
所述液体发酵培养基由蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水按照质量比 1:5:3:0.3:0.1:100配制而成；制备步骤为：将蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水置于三角瓶中，浸泡12小时，然后将三角瓶放入摇床中，调整振荡频率为230r/min，于 30℃下发酵100小时，过滤，收集，即得。
实施例4一种灵芝药质菌丝的制备方法，包括以下步骤：
(1)将药质菌丝培养基装入食用菌袋中，于123℃高压灭菌38分钟；
(2)培养灵芝母种：选择柄短、肉厚、褐黑色、有光泽的灵芝作为菌种，先用清水洗净，然后移入接种箱内；用75％的酒精冲洗，再用蒸馏水冲洗三次，滤纸吸干，切成2-3mm薄片，放入28℃的恒温箱中培养7天，待白色菌丝长满时，即为灵芝母种；
(3)培养灵芝母种接种菌：将步骤(2)所得灵芝母种接种到液体发酵培养基中，于32℃培养箱中培养5天，获得灵芝接种菌；
(4)无菌条件下将步骤(3)所得灵芝接种菌接入到步骤(1)所得药质菌丝培养基中，于温度26℃、湿度60％条件下培养至菌丝长满菌袋，收集菌棒，将菌棒晒干、粉碎成粉，即得。
所述药质菌丝培养基由以下重量份的原料制成(30g/份)：中药下脚料100份、麸皮8 份、棉籽饼11.5份、南瓜子6份、猪胆粉4.5份、石膏2份、葡萄糖2份、水125份；药质菌丝培养基的制备步骤如下：
(1)取麻油置锅内，加热至70℃，投入南瓜子，炸至金黄色时，立即取出，沥去油，放凉，备用；
(2)将步骤(1)处理后的南瓜子和麸皮、棉籽饼、猪胆粉、石膏、葡萄糖和中药下脚料粉碎，加水搅拌均匀，即得。
所述中药下脚料为五味子和橘络的混合物。
所述液体发酵培养基由蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水按照质量比 1:5:3:0.3:0.1:100配制而成；制备步骤为：将蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水置于三角瓶中，浸泡15小时，然后将三角瓶放入摇床中，调整振荡频率为250r/min，于 30℃下发酵100小时，过滤，收集，即得。
实施例5一种灵芝药质菌丝的制备方法，包括以下步骤：
(1)将药质菌丝培养基装入食用菌袋中，于12℃高压灭菌35分钟；
(2)培养灵芝母种：选择柄短、肉厚、褐黑色、有光泽的灵芝作为菌种，先用清水洗净，然后移入接种箱内；用75％的酒精冲洗，再用蒸馏水冲洗三次，滤纸吸干，切成2-3mm薄片，放入26℃的恒温箱中培养6天，待白色菌丝长满时，即为灵芝母种；
(3)培养灵芝母种接种菌：将步骤(2)所得灵芝母种接种到液体发酵培养基中，于30℃培养箱中培养5天，获得灵芝接种菌；
(4)无菌条件下将步骤(3)所得灵芝接种菌接入到步骤(1)所得药质菌丝培养基中，于温度26℃、湿度60％条件下培养至菌丝长满菌袋，收集菌棒，将菌棒晒干、粉碎成粉，即得。
上述一种灵芝药质菌丝的制备方法，优选的方案是，步骤(1)所述药质菌丝培养基由以下重量份的原料制成(25g/份)：中药下脚料95份、麸皮7.5份、棉籽饼11份、南瓜子5.5份、猪胆粉4份、石膏1.5份、葡萄糖1.5份、水120份；药质菌丝培养基的制备步骤如下：
(1)取麻油置锅内，加热至65℃，投入南瓜子，炸至金黄色时，立即取出，沥去油，放凉，备用；
(2)将步骤(1)处理后的南瓜子和麸皮、棉籽饼、猪胆粉、石膏、葡萄糖和中药下脚料粉碎，加水搅拌均匀，即得。
所述中药下脚料为五味子和枳壳的混合物。
所述液体发酵培养基由蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水按照质量比 1:5:3:0.3:0.1:100配制而成；制备步骤为：将蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水置于三角瓶中，浸泡14小时，然后将三角瓶放入摇床中，调整振荡频率为240r/min，于 30℃下发酵100小时，过滤，收集，即得。
试验例本发明所得灵芝药质菌丝的试验研究：
试验对象：本发明实施例1-5所得灵芝药质菌丝为实验组；
对照组为将本发明中药质菌丝培养基替换为市场上普通菌丝培养基后培养所得灵芝菌丝；其中，对照组的其它培养条件与本发明完全相同。
试验方法：(1)测量菌丝干重：实验组和对照组分别取同等重量的菌棒，烘干、粉碎成细粉后，比较各组菌丝干重大小。
(2)测量菌棒的直径：实验组和对照组分别随机采摘50只菌棒，测量菌棒的直径，求平均值。
试验结果：实验组各实施例所得菌丝重量明显高于对照组所得菌丝重量，差值在22.1％-25.6％，差异具有显著性(P＞0.01)；实施例1-5所得菌丝重量比较，没有显著差异(P＞0.05)。实验组中所得菌棒直径在25mm-28mm之间，而对照组所得菌棒直径为20mm；以上数据表明，本发明所得菌丝因为富集了中药有益成分，使得重量明显增加，也间接表明本发明所得菌丝具有保健成分更多，药用价值更广；同时本发明菌棒直径明显大于对照组，说明中药培养基的配方合理，促进了灵芝菌丝的生长，提高了菌丝质量。
应当指出的是，具体实施方式只是本发明比较由代表性的例子，显然本发明的技术方案不限于上述实施例，还可以有很多变形。本领域的普通技术人员，以本发明所明确公开的或根据文件的书面描述毫无异议的得到的，均应认为是本专利所要保护的范围。

Claims (8)

1.一种灵芝药质菌丝的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
（1）将药质菌丝培养基装入食用菌袋中，于120-124℃高压灭菌30-40分钟；
（2）培养灵芝母种：选择柄短、肉厚、褐黑色、有光泽的灵芝作为菌种，先用清水洗净，然后移入接种箱内；用75%的酒精冲洗，再用蒸馏水冲洗三次，滤纸吸干，切成2-3mm薄片，放入24-28℃的恒温箱中培养5-7天，待白色菌丝长满时，即为灵芝母种；
（3）培养灵芝母种接种菌：将步骤（2）所得灵芝母种接种到液体发酵培养基中，于28-32℃培养箱中培养5天（优选于30℃培养箱中培养5天），获得灵芝接种菌；
（4）无菌条件下将步骤（3）所得灵芝接种菌接入到步骤（1）所得药质菌丝培养基中，于温度26℃、湿度60%条件下培养至菌丝长满菌袋，收集菌棒，将菌棒晒干、粉碎成粉，即得。
2.根据权利要求1所述的一种灵芝药质菌丝的制备方法，其特征在于，步骤（1）所述药质菌丝培养基由以下重量份的原料制成：中药下脚料85-105份、麸皮5-10份、棉籽饼10-12份、南瓜子4-7份、猪胆粉3-5份、石膏1-2份、葡萄糖1-2份、水110-130份。
3.根据权利要求2所述的一种灵芝药质菌丝的制备方法，其特征在于，所述药质菌丝培养基的制备步骤如下：
（1）取麻油置锅内，加热至60℃-70℃（优选加热至65℃），投入南瓜子，炸至金黄色时，立即取出，沥去油，放凉，备用；
（2）将步骤（1）处理后的南瓜子和麸皮、棉籽饼、猪胆粉、石膏、葡萄糖和中药下脚料粉碎，加水搅拌均匀，即得。
4.根据权利要求1所述的一种灵芝药质菌丝的制备方法，其特征在于，步骤（3）所述液体发酵培养基由蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水按照质量比1:5:3:0.3:0.1:100配制而成；制备步骤为：将蔗糖、蚕蛹粉、麦麸、硫酸镁、磷酸氢钠和水置于三角瓶中，浸泡12-15小时（优选浸泡14小时），然后将三角瓶放入摇床中，调整振荡频率为220-260r/min，于30℃下发酵100小时，过滤，收集，即得。
5.根据权利要求1所述的一种灵芝药质菌丝的制备方法，其特征在于，步骤（1）于122℃高压灭菌35分钟。
6.根据权利要求1所述的一种灵芝药质菌丝的制备方法，其特征在于，步骤（2）放入26℃的恒温箱中培养6天。
7.根据权利要求2所述的一种灵芝药质菌丝的制备方法，其特征在于，所述中药下脚料为五味子、茜草、枳壳、玉米须、橘络中的任意两种或者多种的混合物。
8.根据权利要求4所述的一种灵芝药质菌丝的制备方法，其特征在于，调整振荡频率为240r/min。
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