CN108250191B - 一种3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物及其制备工艺与应用 - Google Patents

一种3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物及其制备工艺与应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了3,5‑二取代的2‑氨基‑吡嗪化合物，所述化合物具有式Ⅰ结构：式Ⅰ中：NR1R2为正丙胺基、环丙胺基、环戊胺基、环己胺基、吗啉基、4‑甲基哌嗪基、苯胺基、4‑氯苯胺基或3‑氯苯胺基；Ar为3,5‑二甲基异噁唑基‑4或1‑甲基‑1H‑吡唑基‑4；并提供了其制备工艺和应用。该类化合物对人***细胞HeLa、人脑胶质瘤细胞U87、人肝癌细胞HepG2和人结肠癌细胞LoVo四种癌细胞生长有显著的抑制作用，其中绝大部分化合物对这些癌细胞增殖的抑制作用明显强于阳性对照VX‑680，尤其化合物Ⅰh和Ⅰi对这四种癌细胞都有较强的活性，并且对极光激酶A和极光激酶B显示明显的抑制活性，因此本发明的化合物可用于制备抗癌药物。

Description

一种3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物及其制备工艺与应用
技术领域
本发明涉及一种3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物及其制备工艺与应用。
背景技术
激光激酶(Aurora kinases)是一类新型的苏氨酸/丝氨酸蛋白激酶，在中心体复制、两极纺锤体形成、染色体重排和染色体检查点监测等重要的有丝***过程中发挥着至关重要的作用(Cancer Metastasis Rev.2003,22,451)。Aurora激酶家族有三种结构和功能高度相关的亚群:即Aurora-A、Aurora-B和Aurora-C。它们的蛋白质一级结构均含有一个N-端调控区和一个C-端催化区，且酶结构域序列相似度达71％，ATP腺嘌呤环结合位点的残基也相同；但在细胞***中它们具有完全不同且互不重叠的功能。Aurora A从有丝***的S期末至下一个***周期的G期开始，影响中心体的分离、成熟以及两极纺锤体的形成(Nat.Rev.Cancer 2005,5,42)。Aurora B在有丝***早期位于染色体的着丝粒区域，***后期则从着丝粒移动到微管。目前对Aurora C功能的研究相对较少。1998年，美国学者Bischoff等首次发现Aurora激酶在多种癌细胞中过度表达，且与染色体的不稳定性、癌变、肿瘤增殖和化学抗性等过程密切相关(EMBO J.1998,17,3052)。由于Aurora激酶独特的药理作用机制，以Aurora激酶为靶点的药物开发已成为抗癌药物研究的热点之一(Expert.Opin.Drug Discovery 2011,6,291)。目前有多个Aurora激酶抑制剂在进行临床试验，如VX-680、PHA-739358、AZD-1152、MLN8054、SNS-314、ENMD-2076、AMG900等(药学进展2008,32,337；中国抗生素杂志2010,35,641)，但迄今为止还没有Aurora激酶抑制剂用于临床治疗。
氨基吡嗪是一类重要的药物骨架，研究发现该类化合物对多种肿瘤相关激酶具有显著的抑制活性，如中心体相关蛋白激酶Nek2(J.Med.Chem.2010,53,7682；J.Med.Chem.2012,55,3228)、细胞周期检测点激酶1(CHK1)(J.Med.Chem.2011,54,8328；J.Med.Chem.2012,55,10229)、磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)(J.Med.Chem.2012,55,5467，Bioorg.Med.Chem.Lett.2017,27,679)、MNK1/2(J.Med.Chem.2016,59,3034)和ATM和Rad3相关激酶ART(Nat.Chem.Biol.,2011,7,428；Oncotarget,2014,5,5674；Bioorg.Med.Chem.Lett.2017,27,2659)等。但目前还没有该类化合物用于极光激酶抑制活性的报道。
发明内容
本发明的第一个目的是为了提供一种3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物，细胞毒性实验发现该化合物对多种癌细胞具有较强的体外抑制作用，同时对极光激酶有较强的抑制作用。
本发明的第二个目的是为了提供上述化合物的制备工艺。
本发明的第三个目的是为了提供上述化合物的应用。
一种3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物，所述化合物具有如下式Ⅰ结构：
Figure GDA0002637231870000031
式Ⅰ中：
NR1R2为正丙胺基、环丙胺基、环戊胺基、环己胺基、吗啉基、4-甲基哌嗪基、苯胺基、4-氯苯胺基或3-氯苯胺基；
Ar为3,5-二甲基异噁唑基-4或1-甲基-1H-吡唑基-4。
上述3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物的制备工艺，所述工艺为4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲酰胺(式Ⅱ)与3,5-二甲基异噁唑-4-硼酸或1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑发生铃木缩合反应。
进一步的，4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲酰胺(式Ⅱ)与3,5-二甲基-异噁唑-4-硼酸或1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑反应的物质量比为1:(1.05-1.20)，反应温度为90–110℃；催化剂为[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯络合物、[1,2-双(二苯基膦)乙烷]二氯化钯络合物或[1,3-双(二苯基膦)丙烷]二氯化钯络合物；反应溶媒为1,4-二氧六环或四氢呋喃。
Figure GDA0002637231870000032
进一步的，4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲酰胺(式Ⅱ)的制备方法是以2-氨基-3,5-二溴-吡嗪(式Ⅲ)为原料，与对羟基苯甲正丙酰胺、对羟基苯甲环丙酰胺、对羟基苯甲环戊酰胺、对羟基苯甲环己酰胺、对羟基苯甲吗啉酰胺、对羟基苯甲4-甲基哌嗪酰胺、对羟基苯甲苯酰胺、对羟基苯甲对氯苯酰胺或对羟基苯甲间氯苯酰胺反应。
进一步的，4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲酰胺(式Ⅱ)的制备方法为3,5-二溴-2-氨基-吡嗪与对羟基苯甲酰胺发生取代反应，3,5-二溴-2-氨基-吡嗪与对羟基苯甲酰胺反应的物质量比为1:(1.05-1.20)，反应温度为60–80℃，催化剂为碳酸钾、碳酸钠、碳酸铯，反应溶媒为N-甲基吡咯烷酮、N-乙基吡咯烷酮、N-环己基吡咯烷酮。
上述3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物作为极光激酶抑制剂的应用。
上述3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物在抗癌药物中的应用。
本发明提供的3,5-二取代的2-氨基-吡嗪类化合物，对极光激酶具有较强的抑制活性，且对多种癌细胞也具有较好的增殖抑制活性，具有开发为新型抗癌药物的潜力；在制备方法上，本发明通过简单方法高效地合成了关键中间体及其目标化合物。
本发明具有以下有益效果：
本发明提供的3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物，对人***细胞HeLa、人脑胶质瘤细胞U87、人肝癌细胞HepG2和人结肠癌细胞LoVo四种癌细胞生长有显著的抑制作用，其中绝大部分化合物对这些癌细胞增殖的抑制作用明显强于阳性对照VX-680，尤其化合物Ⅰh和Ⅰi对这四种癌细胞都有较强的活性，并且对极光激酶A和极光激酶B显示明显的抑制活性，因此本发明的化合物可用于制备抗癌药物。
具体实施方式
以下对本发明的优选实施例进行说明，应当理解，此处所描述的优选实施例仅用于说明和解释本发明，并不用于限定本发明。
实施例1：对羟基苯甲正丙酰胺的制备
将对羟基苯甲酸(690mg，5.0mmol)搅拌溶解在15mL丙酮中，然后加入正丙胺(6.0mmol)，待完全溶解后加入1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐，于70℃回流反应12h。反应结束后将丙酮蒸除，剩余物用乙酸乙酯稀释，然后分别用1mol/L盐酸和10wt％Na2CO3洗涤，有机相干燥后蒸除溶剂，柱层析得到白色粉末。产物检测数据如下：
收率:71％；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.08(s,1H),9.97(s,1H),7.85(d,J＝9.0Hz,2H),7.75(d,J＝7.2Hz,2H),7.32(t,J＝7.8Hz,2H),7.07-7.06(m,1H),6.86(d,J＝9.0Hz,2H)。
用环丙基胺、环戊基胺、环己基胺、吗啉、4-甲基哌嗪、苯胺、对氯苯胺或间氯苯胺代替上述反应中的正丙胺，同法制备相应的中间体。
实施例2：4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺的制备
合成通法：将2-氨基-3,5-二溴-吡嗪(253mg,1.0mmol)溶解在10mL N-甲基吡咯烷酮(或N-乙基吡咯烷酮，或N-环己基吡咯烷酮)中，然后加入上面制备的对羟基苯甲正丙酰胺(1.2mmol)，待完全溶解后加入K2CO3(276mg,2.0mmol)，在N2保护下于100℃反应6h。反应结束后，用30mL乙酸乙酯稀释，有机层用饱和盐水洗涤、干燥，蒸除溶剂后柱层析得中间体4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺。亮棕色液体。产物检测数据如下：
收率:90％；1H NMR(600MHz,DMSO-d6)δ9.94(s,1H),8.20(s,1H),7.70(d,J＝8.4Hz,2H),6.78(d,J＝8.4Hz,2H),3.19-3.15(m,2H),1.52-1.48(m,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)。
用4-羟基苯甲环丙基酰胺、4-羟基苯甲环戊基酰胺、4-羟基苯甲环己基酰胺、4-羟基苯甲吗啉基酰胺、4-羟基苯甲4-甲基哌嗪基酰胺、4-羟基苯甲苯酰胺、4-羟基苯甲对氯苯酰胺、4-羟基苯甲间氯苯酰胺代替上述反应中的对羟基苯甲正丙酰胺，同法制备相应的中间体。
实施例3：4-O-(3-氨基-6-(3,5-二甲基异噁唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺的制备
取上述所得的4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺(0.5mmol)和3,5-二甲基异噁唑-4-硼酸(84.6mg,0.6mmol)溶解在10mL 1,4-二氧六环中，然后加入催化剂Pd(dppf)Cl2·CH2Cl2(40.8mg,0.05mmol)，2mol/L Na2CO3溶液(0.05mL,0.1mmol)，在N2保护下于100℃回流至反应结束，减压蒸除溶剂，剩余物用15mL乙酸乙酯稀释，并用饱和盐水洗涤、干燥，蒸除溶剂后柱层析得白色固体。产物检测数据如下：
收率：72％；Purity:95％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝7.60min)；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.44(t,J＝5.4,1H),7.89(d,J＝7.2Hz,2H),7.79(s,1H),7.31(d,J＝7.2Hz,2H),6.78(s,2H),3.21-3.18(m,2H),2.29(s,3H),2.07(s,3H),1.53-1.49(m,2H),0.87(t,J＝7.2Hz,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ165.4,165.3,158.0,155.1,145.9,145.2,134.6,131.2,128.6(2C),127.8,121.4(2C),112.5,40.9,22.3,11.8,11.4,11.0.ESI-MS:m/z 368.2for[M+H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰa。
实施例4：4-O-(3-氨基-6-(3,5-二甲基异噁唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲环丙基酰胺的制备
操作过程与实施案例3同，只是用4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲环丙基酰胺代替4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺，得白色固体。产物检测数据如下：
收率：74％；Purity:95％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝7.00min)；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.44(d,J＝4.2Hz,1H),7.89(d,J＝8.4Hz,2H),7.81(s,1H),7.32(d,J＝8.4Hz,2H),6.79(s,2H),2.85-2.84(m,1H),2.29(s,3H),2.07(s,3H),0.71-0.68(m,2H),0.59-0.56(m,2H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ166.6,165.3,158.0,155.1,145.9,145.2,134.7,130.9,129.0,128.6(2C),121.3(2C),114.6,23.0,11.8,11.0,5.68(2C).ESI-MS m/z 366.2for[M+H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰb。
实施例5：4-O-(3-氨基-6-(3,5-二甲基异噁唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲环戊基酰胺的制备
操作过程与实施案例3同，只是用4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲环戊基酰胺代替4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺，得白色固体。产物检测数据如下：
收率：66％；Purity:98％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝8.46min)；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.27(d,J＝7.8Hz,1H),7.90(d,J＝8.4Hz,2H),7.78(s,1H),7.30(d,J＝8.4Hz,2H),6.78(s,2H),4.22-4.18(m,1H),2.29(s,3H),2.07(s,3H),1.87-1.85(m,2H),1.67-1.65(m,2H),1.49-1.45(m,4H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ165.3,165.0,158.0,155.0,145.9,145.2,134.6,131.3,128.7(2C),127.7,121.3(2C),112.5,50.9,32.0(2C),23.6(2C),11.8,11.0.ESI-MSm/z 394.2for[M+H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰc。
实施例6：4-O-(3-氨基-6-(3,5-二甲基异噁唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲环己基酰胺的制备
操作过程与实施案例3同，只是用4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲环己基酰胺代替4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺，得白色固体，产物检测数据如下：
收率：58％；Purity:95％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝9.05min)；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ8.18(d,J＝8.4Hz,1H),7.91(d,J＝8.4Hz,2H),7.79(s,1H),7.30(d,J＝9.0Hz,2H),6.77(s,2H),3.74-3.72(m,1H),2.29(s,3H),2.07(s,3H),1.80(s,2H),1.72(s,2H),1.61-1.58(m,1H),1.31-1.28(m,4H),1.13-1.10(m,1H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ165.3,164.5,158.0,155.0,145.9,145.2,134.7,131.3,128.7(2C),127.7,121.3(2C),112.6,48.3,32.4(2C),25.2,24.9(2C),11.8,11.0.ESI-MS m/z 408.2for[M+H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰd。
实施例7：4-O-(3-氨基-6-(3,5-二甲基异噁唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲吗啉酰胺的制备
操作过程与实施案例3同，只是用4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲吗啉基酰胺代替4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺，得浅黄色固体，产物检测数据如下：
收率：48％；Purity:97％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝6.72min)；1HNMR(600MHz,acetone-d6)δ7.82(s,1H),7.54(d,J＝8.4Hz,2H),7.34(d,J＝9.0Hz,2H),6.16(d,J＝6.6Hz,1H),3.67(s,4H),3.58(s,4H),2.34(s,3H),2.14(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.5,165.3,157.9,153.8,146.1,145.1,134.4,132.1,128.6(2C),127.8,121.9(2C),112.4,65.9(2C),46.1(2C),11.8,11.0.ESI-MS m/z 394.2for[M-H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰe。
实施例8：4-O-(3-氨基-6-(3,5-二甲基异噁唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲4-甲基哌嗪酰胺的制备
操作过程与实施案例3同，只是用4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲4-甲基哌嗪酰胺代替4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺，得黄色固体，产物检测数据如下：
收率：55％；Purity:98％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝6.88min)；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ7.79(s,1H),7.43(d,J＝9.0Hz,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,2H),6.77(s,2H),3.32(brs,8H),2.27(s,3H),2.18(s,3H),2.05(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ168.4,165.3,157.9,153.7,146.1,145.2,134.4,132.5,128.4(2C),127.8,121.9(2C),120.9,114.8,112.4,54.4,45.4(2C),11.8,11.0.ESI-MS m/z 409.2for[M+H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰf。
实施例9：4-O-(3-氨基-6-(3,5-二甲基异噁唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲苯酰胺的制备
操作过程与实施案例3同，只是用4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲苯酰胺代替4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺，得白色固体，产物检测数据如下：
收率：72％；Purity:95％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝9.29min)；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.25(s,1H),8.05(d,J＝9.0Hz,2H),7.83(s,1H),7.78(d,J＝7.8Hz,2H),7.41(d,J＝8.4Hz,2H),7.36(d,J＝7.2Hz,2H),7.10(s,1H),6.83(s,2H),2.33(s,3H),2.12(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ165.3,164.5,157.9,155.5,145.8,145.2,139.0,134.8,131.2,129.1(2C),128.4(2C),127.8,123.5,121.3(2C),120.3(2C),92.5,11.7,10.9.ESI-MS m/z 402.2for[M+H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰg。
实施例10：4-O-(3-氨基-6-(3,5-二甲基异噁唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲4-氯苯基酰胺的制备
操作过程与实施案例3同，只是用4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲4-氯苯基酰胺代替4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺，得白色固体，产物检测数据如下：
收率：77％；Purity:95％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝12.40min)；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.35(s,1H),8.05(d,J＝9.0Hz,2H),7.83(s,1H),7.82(d,J＝8.4Hz,2H),7.42(d,J＝8.4Hz,4H),6.80(s,2H),2.33(s,3H),2.11(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ165.4,164.7,158.0,155.7,145.8,145.2,138.1,134.8,131.0,129.2(2C),128.4(2C),127.8,127.2,121.8(2C),121.5(2C),112.5,11.8,11.0.ESI-MS m/z 436.2for[M+H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰh。
实施例11：4-O-(3-氨基-6-(3,5-二甲基异噁唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲3-氯苯基酰胺的制备
操作过程与实施案例3同，只是用4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲3-氯苯基酰胺代替4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲正丙基酰胺，得白色固体，产物检测数据如下：
收率：66％；Purity:96％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝12.63min)；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),8.06(d,J＝8.4Hz,2H),7.98(s,1H),7.84(s,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.43(d,J＝9.0Hz,2H),7.39(t,J＝8.4Hz,1H),7.17(d,J＝8.4Hz,1H),6.82(s,2H),2.33(s,3H),2.12(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ165.4,164.9,158.0,155.8,145.8,145.2,140.6,134.9,132.8,130.8,130.2,129.3(2C),127.8,123.3,121.5(2C),119.7,118.6,112.5,11.8,11.0.ESI-MS m/z 436.2for[M+H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰi。
实施例12：4-O-(3-氨基-6-(1-甲基-1H-吡唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲苯基酰胺的制备
操作过程与实施案例9同，只是用1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑代替3,5-二甲基异噁唑-4-硼酸，得白色固体，产物检测数据如下：
收率：76％；Purity:99％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝7.81min)；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.25(s,1H),8.05(d,J＝9.0Hz,2H),8.04(s,1H),7.84(s,1H),7.79(d,J＝7.2Hz,2H),7.67(s,1H),7.41(d,J＝7.8Hz,2H),7.37(t,J＝7.2Hz,2H),7.10(s,1H),6.54(s,2H),3.79(s,3H)；13C NMR(150MHz,DMSO-d6)δ164.7,156.0,145.0,144.9,139.1,135.5,132.2,131.1,130.6,129.1(2C),128.4(2C),127.3,123.5,120.3(2C),120.2(2C),119.8,38.4.ESI-MS m/z387.2for[M+H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰj。
实施例13：4-O-(3-氨基-6-(1-甲基-1H-吡唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲4-氯苯基酰胺的制备
操作过程与实施案例10同，只是用1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑代替3,5-二甲基异噁唑-4-硼酸，得白色固体，产物检测数据如下：
收率：72％；Purity:95％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝10.58min)；1HNMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.38(s,1H),8.05(d,J＝9.0Hz,2H),8.04(s,1H),7.84(s,1H),7.83(d,J＝9.0Hz,2H),7.67(s,1H),7.42(d,J＝7.8Hz,4H),6.53(s,2H),3.79(s,3H)；13CNMR(150MHz,DMSO-d6)δ164.9,156.2,145.0,138.1,135.5,131.1,130.4,129.7,129.3,128.5(2C),128.4(2C),127.3,121.8(2C),120.3(2C),119.8,114.9,38.5.ESI-MS m/z421.1for[M+H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰk。
实施例14：4-O-(3-氨基-6-(1-甲基-1H-吡唑基-4)吡嗪基-2)-苯甲3-氯苯基酰胺的制备
操作过程与实施案例11同，只是用1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑代替3,5-二甲基异噁唑-4-硼酸，得白色固体。产物检测数据如下：
收率：71％；Purity:99％(HPLC:MeOH:H2O＝70:30,0.5mL/min,tR＝10.05min)；1H-NMR(600MHz,DMSO-d6)δ10.40(s,1H),8.06(d,J＝9.6Hz,2H),8.04(s,1H),7.98(t,J＝1.8Hz,1H),7.84(s,1H),7.72(d,J＝8.4Hz,1H),7.67(s,1H),7.42(d,J＝9.0Hz,2H),7.39(t,J＝8.4Hz,1H),7.38(s,1H),7.17(d,J＝8.4Hz,1H),6.53(s,2H),3.80(s,3H)；13C-NMR(150MHz,DMSO-d6)δ165.0,156.3,145.0,140.6,135.5,132.9,132.3,131.1,130.3,130.2,129.3(2C),127.3,123.2,120.3(2C),119.8,119.6,118.6,114.9,38.5.ESI-MS m/z421.2for[M+H].
进行后述对细胞增殖抑制实验中，本实施例样品编号为Ⅰl。
实施例15：2-氨基-3,5-二取代吡嗪化合物对癌细胞的体外细胞毒活性
为了研究本发明中所合成的目标化合物抑制肿瘤细胞增殖的能力，测定了化合物对四种人类肿瘤细胞(人胶质瘤细胞U87、人***细胞HeLa、人肝癌细胞HepG2和人结肠癌细胞LoVo)的体外细胞毒活性，并以VX-680作为阳性对照。实验采用的检测方法是标准的MTT法。实验方法为：
取对数生长期的细胞，用含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基制成细胞悬液，每孔6000个细胞接种到96孔板中，平板放入37℃，含5％CO2空气及100％湿度的孵育箱培养24h使其贴壁，后置换含有不同浓度药物的含10％胎牛血清的RPMI 1640培养基(200μL/孔)，药物浓度分别为10-4，2×10-5，4×10-6，8×10-7，1.6×10-7,3.2×10-8mol/L，并设调零孔，空白组，阳性对照组VX-680，每组三复孔，孵育培养72小时后取出，每孔加入20μL MTT(5mg/mL)，再孵育培养4h，使MTT还原为甲臢，吸出上清液，每孔加入150μL DMSO，震荡使甲臢晶体溶解，用酶标仪测量细胞液在570nm处的OD值，计算化合物各浓度的抑制率。由抑制率计算GI50值，并取三次试验的平均值。
化合物Ⅰa–l对人胶质瘤细胞U87、人***细胞HeLa、人肝癌细胞HepG2和人结肠癌细胞LoVo四种癌细胞增殖抑制的体外药理试验结果见表1。
表1化合物Ⅰa–l及VX-680的Aurora激酶抑制活性及肿瘤细胞增殖抑制活性
Figure GDA0002637231870000151
Figure GDA0002637231870000161
注：(1)实验结果是三次平行实验的统计结果；(2)作用时间：72小时
体外实验证明，合成的12个化合物对U87、HeLa、HepG2和LoVo都比阳性对照VX-680有较好的体外抑制活性；尤其是化合物Ⅰh和Ⅰi对HeLa和LoVo细胞都表现出最优的抑制活性。
实施例16：化合物Ⅰa–l对激光激酶的抑制活性
为了探究化合物Ⅰa–l抗肿瘤增殖作用的机理，同时确证其是否可以对Aurora激酶的抑制活性，采用Kinase-Glo luminescent kinase assay(Assay Drug Dev.Technol.,2004,2,153-160)对Aurora激酶的体外抑制活性进行了研究。
具体方法：在96孔板的每个小孔中，取10ng待测激酶(Aurora-A、B)、2μg底物Kemptide以及梯度浓度的待测化合物(0.01nmol/L,0.1nmol/L,1nmol/L,10nmol/L,100nmol/L)混合在35μL预先配好的磷酸化反应缓冲液(40mmol/L Tris,10mmol/L MgCl2,1mmol/L DTT,0.1mg/mL BSA,10μmol/L ATP,pH7.4)中，37℃培养0.5h，每组浓度均设置三个副孔。然后加入50μL Kinase-Glo试剂混合均匀，室温下放置10min，通过记录反应物的相对荧光单位值(Relative Luminescence Unit,RLU)来检测剩余的ATP含量。最后采用Origin v7.0软件来计算目标化合物抑制Aurora激酶的IC50值。
实验结果见表1。
由表1可见，化合物Ⅰa–l对Aurora A和Aurora B都有较强的抑制活性，但是对两种激酶没有明显的选择性趋势。
本发明的3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物合成方法简单，原料廉价易得，药理活性显著，有望成为潜在的拥有我国自主知识产权的一类治疗癌症的新型药物。
对比例
疗效对比
与VX-680对比，本发明的化合物对人胶质瘤细胞U87、人***细胞HeLa、人肝癌细胞HepG2和人结肠癌细胞LoVo四种癌细胞增殖抑制活性均强于阳性对照化合物VX-680。其中化合物Ⅰh对U87、HeLa、HepG2和LoVo四种癌细胞的抑制活性分别是VX-680的5.6、19.5、3.9和25.6倍；化合物Ⅰi对U87、HeLa、HepG2和LoVo四种癌细胞的抑制活性分别是VX-680的4.2、32、7.8和14.4倍。且对Aurora B的抑制活性分别为VX 680的57倍和10倍。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，对于本领域的技术人员来说，其依然可以对前述各实施例所记载的技术方案进行修改，或者对其中部分技术特征进行等同替换。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (6)

1.一种3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物，其特征在于，所述化合物具有如下式Ⅰ结构：
Figure DEST_PATH_IMAGE002
式Ⅰ中：
NR1R2为正丙胺基、环丙胺基、环戊胺基、环己胺基、吗啉基、4-甲基哌嗪基、苯胺基、4-氯苯胺基或3-氯苯胺基；
Ar为3,5-二甲基异噁唑基-4或1-甲基-1H-吡唑基-4。
2.权利要求1所述的3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物的制备工艺，其特征在于，所述工艺为4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲酰胺与3,5-二甲基异噁唑-4-硼酸或1-甲基-4-(4,4,5,5-四甲基-1,3,2-二氧杂戊硼烷-2-基)-1H-吡唑发生铃木缩合反应。
3.根据权利要求2所述的3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物的制备工艺，其特征在于，所述工艺中，催化剂为[1,1'-双(二苯基膦)二茂铁]二氯化钯络合物、[1,2-双(二苯基膦)乙烷] 二氯化钯络合物或[1,3-双(二苯基膦)丙烷] 二氯化钯络合物。
4.根据权利要求2所述的3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物的制备工艺，其特征在于，4-O-(3-氨基-6-溴-吡嗪基-2)-苯甲酰胺的制备方法为以2-氨基-3,5-二溴-吡嗪为原料，和对羟基苯甲正丙酰胺、对羟基苯甲环丙酰胺、对羟基苯甲环戊酰胺、对羟基苯甲环己酰胺、对羟基苯甲吗啉酰胺、对羟基苯甲4-甲基哌嗪酰胺、对羟基苯甲苯酰胺、对羟基苯甲对氯苯酰胺或对羟基苯甲间氯苯酰胺反应。
5.根据权利要求4所述的3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物的制备工艺，其特征在于，反应溶媒为N-甲基吡咯烷酮、N-乙基吡咯烷酮或N-环己基吡咯烷酮。
6.权利要求1所述的3,5-二取代的2-氨基-吡嗪化合物在制备用于极光激酶抑制剂的抗癌药物中的应用。
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