CN108142441B - 一种虎耳草提取物及其作为植物抗菌物的应用 - Google Patents
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Abstract
一种虎耳草提取物，所述的虎耳草提取物为醇提物，其中醇提物提取方法为：是称取粉碎样品800g，用5倍量的乙醇浸泡植物干粉，室温下静置12h；超声提取2h；减压抽滤，连续提取3次，合并滤液，在45℃下用旋转蒸发仪浓缩，干燥后，4℃中保存、备用；还包括虎耳草提取物作为植物抗菌物的应用。本发明涉及的虎耳草提取物是一种植物源生物农药，其具有抗菌活性高、抑菌谱广、不易产生抗性、对人和动物无毒的特点，可以提高葡萄果实食品安全性。
Description
技术领域
本发明涉及生物农药领域，具体涉及植物源生物农药，更具体涉及一种虎耳草提取物及其作为植物抗菌物的应用。
背景技术
中国是葡萄属植物资源分布最为丰富的国家之一，东亚种群已知种类有42个种中国都有，还有1个亚种、12个变种。种植的葡萄品种约有500种，葡萄种植面积位居全球第二，仅次于西班牙。2016年，我国葡萄面积已超过800千公顷(1240万亩)，鲜食葡萄产量自2000年之后一直稳居世界首位。
葡萄与其它园艺作物一样，病虫害的严重危害是产业健康发展的限制因子，常见的、危害严重的葡萄病害如葡萄灰霉病、白腐病、炭疽病和葡萄霜霉病；这些病害的为害严重影响葡萄质量和产量，不但是我国葡萄生产上必须解决的困难，而且也是世界性葡萄生产上的难题。所以，生产健康、优质、安全的葡萄及葡萄产品，必须克服这些困难、解决这些技术难题，否则就有可能影响葡萄产业的健康发展、带来巨大的经济损失。
农业生产中，常用防控方法为使用化学农药的化学防治法，但是化学防治存在引起葡萄病原菌的抗药性、残留污染、再猖獗等风险。使用多种方法交替配合综合防控是病虫害防控及防止真菌毒素污染的发展方向和避免风险的途径。因此寻找非化学农药的其它途径和方法，是产业发展的重要任务，也是科学研究的重要课题。从植物中挖掘植物源方法，包括开发植物源农药、从植物源化合物中寻找先导化合物、甚至植物浸提液的直接利用，是这个发展方向的重要内容。
虎耳草(Saxifraga stolonifera Curt.)是虎耳草科(Saxifragaceae)虎耳草属(Saxifraga)植物，产河北(小五台山)、陕西、甘肃东南部、江苏、安徽、浙江、江西、福建、台湾、河南、湖北、湖南、广东、广西、四川东部、贵州、云南东部和西南部。生于海拔400-4500米的林下、灌丛、草甸和荫湿岩隙。朝鲜、日本也有。全草入药；微苦、辛，寒，有小毒；祛风清热，凉血解毒。但未见将其作为生物农药应用到葡萄病害防治的报道和研究。
发明内容
本发明的目的是提供一种虎耳草提取物及其作为植物抗菌物的应用，其可防治葡萄重要病害，提高葡萄食品安全性。
一种虎耳草提取物，所述的虎耳草提取物为醇提物，所述的醇提物提取方法为：是称取粉碎样品800g，用5倍量的乙醇浸泡植物干粉，室温下静置12h；超声提取2h；减压抽滤，连续提取3次，合并滤液，在45℃下用旋转蒸发仪浓缩，干燥后，4℃中保存、备用。
还涉及一种虎耳草提取物作为植物抗菌物的应用，所述的虎耳草提取物对以下病害病原菌有显著的抑菌活性，主要包括葡萄灰霉病菌、葡萄白腐病菌、葡萄炭疽病菌和炭黑曲霉病菌。
进一步，其中所述的葡萄炭疽病菌包括对多菌灵高抗炭疽病菌菌株，所述的灰霉病菌包括对多菌灵高抗灰霉病菌菌株。
进一步，所述的醇提物浓度为0.3125mg/mL-5mg/mL。
进一步，当醇提物浓度为5mg/mL时，对白腐病菌、炭疽病菌、炭黑曲霉病菌和灰霉病菌抑制率分别为93.61％、78.63、26.23％和11.97％；当醇提物浓度为5mg/mL时，对多菌灵敏感炭疽病菌菌株FJZZ-62、coll-9、coll-20抑制率分别为48.15％、35.69％和44.27％，对多菌灵高抗炭疽病菌菌株FJND-9、FJND-40和GZSD-89抑制率分别为50.45％、49.19％和44.12％，对多菌灵敏感灰霉病菌菌株GXGL-7、GXNN-6和GXNN-7抑制率分别为30.38％、21.45％和30.10％，对多菌灵高抗灰霉病菌菌株HBLF-10、GXZY-4和GXZY-7抑制率分别为31.32％、45.63％和31.19％。
本发明具有以下优点：
本发明涉及的虎耳草提取物作为有效成分的杀菌药物是一种植物源生物农药，属于生物药物的一种，符合现代社会对新农药的要求。其次，虎耳草提取物具有抗菌活性高、抑菌谱广、不易产生抗性、对人和动物无毒的特点。另外，其对葡萄果实常见病原菌有抑制效果，可以提高葡萄果实食品安全性。
具体实施方式
下面结合具体实施方式对本发明进行详细的说明。
实施例1：
一、醇提物的制备
本发明的虎耳草购自安徽亳州药材市场。将备用材料晒干，粉碎，放在通风干燥处保存备用。虎耳草醇提物醇提步骤为：是称取粉碎样品800g，用5倍量的乙醇浸泡植物干粉，室温下静置12h；超声提取2h；减压抽滤，连续提取3次，合并滤液，在45℃下用旋转蒸发仪浓缩，干燥后，4℃中保存、备用。
二、醇提物的抑菌作用
采用菌丝生长速率法测定虎耳草醇提物对葡萄灰霉病菌(Botrytis cinerea)、葡萄白腐病菌(Coniothyrium diplodiella)、葡萄炭疽病菌(Glomerella cingulata)和炭黑曲霉(Aspergillus carbonarius)的抑菌活性，具体步骤如下：
称取一定量的提取物，用无菌水将醇提物分别配制成50mg/mL、25mg/mL、12.5mg/mL、6.25mg/mL、3.125mg/mL的溶液。无菌水作为空白对照，5μg/mL的多菌灵作为阳性对照。在无菌洁净工作台中，将配制好药液分别与PDA培养基按照1:9的比例混合制带药培养基，使药物的浓度为5mg/mL、2.5mg/mL、1.25mg/mL、0.625mg/mL、0.3125mg/mL，倒入直径为90mm的培养皿，放置待其凝固。
将菌种活化后，用无菌打孔器(Ф＝5mm)在菌丝生长旺盛处均匀打孔，制得菌饼，接种到培养基上，每个培养皿中央接一个菌饼，在温度为25-28℃，湿度为73％的培养箱中倒置培养2-7d后，用十字交叉法测菌落直径，计算抑制率。每个处理设3个重复。
结果表明：醇提物对4种葡萄病原真菌表现出不同程度的抑菌效果，对白腐病菌和炭疽病菌抑制作用较好，对灰霉病菌和炭黑曲霉病菌的抑制效果较差。当醇提物浓度为5mg/mL时，对白腐病菌、炭疽病菌、炭黑曲霉病菌和灰霉病菌抑制率分别为93.61％、78.63、26.23％和11.97％。
三、醇提物对多菌灵敏感炭疽病菌菌株的抑制作用
当虎耳草醇提物浓度为5mg/mL时，对多菌灵敏感炭疽病菌菌株FJZZ-62、coll-9、coll-20抑制率分别为48.15％、35.69％和44.27％，其EC50分别为4.39、5.64和5.01mg/mL。
四、醇提物对多菌灵高抗炭疽病菌菌株的抑制作用
100μg/mL多菌灵对高抗菌株FJND-9、FJND-40和GZSD-89的抑制率分别为9.80％、21.50％和10.01％。虎耳草醇提物对多菌灵高抗炭疽病菌菌株有较强的抑制作用。当醇提物浓度为5mg/mL时，对多菌灵高抗炭疽病菌菌株FJND-9、FJND-40和GZSD-89抑制率分别为50.45％、49.19％和44.12％，其EC50分别为4.53、4.50和4.84mg/mL，明显优于100μg/mL多菌灵。1.25mg/mL虎耳草醇提物对高抗菌株的抑制作用与100μg/mL多菌灵相当。
五、醇提物对多菌灵敏感灰霉病菌菌株的抑制作用
虎耳草醇提物浓度为5mg/mL时，对多菌灵敏感灰霉病菌菌株GXGL-7、GXNN-6和GXNN-7抑制率分别为30.38％、21.45％和30.10％，其EC50分别为6.20、6.55和6.34mg/mL。
六、醇提物对多菌灵高抗灰霉病菌菌株的抑制作用
100μg/mL多菌灵对菌株HBLF-10、GXZY-4和GXZY-7的抑制率分别为53.45％、55.11％和14.76％。虎耳草醇提物对多菌灵高抗灰霉病菌菌株具有一定的抑制作用。当其浓度为5mg/mL时，对多菌灵高抗灰霉病菌菌株HBLF-10、GXZY-4和GXZY-7抑制率分别为31.32％、45.63％和31.19％，其EC50分别为6.41、4.92和7.32mg/mL。虎耳草醇提物对高抗菌株GXZY-7抑制作用优于100μg/mL多菌灵。
通过上述实验验证虎耳草醇提物4种葡萄病原真菌表现出不同程度的抑菌效果，且对不同抗性的葡萄灰霉病菌、葡萄炭疽病菌有抑制作用。该结果为代替化学农药防控抗性菌株提供了有效的理论依据，也说明其可作为植物源杀菌剂用于病害防治。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。
Claims (2)
1.一种虎耳草提取物作为葡萄抗菌物的应用，其特征在于：所述的虎耳草提取物为醇提物，所述的醇提物提取方法为：称取粉碎样品800g，用5倍量的乙醇浸泡植物干粉，室温下静置12h；超声提取2h；减压抽滤，连续提取3次，合并滤液，在45℃下用旋转蒸发仪浓缩，干燥后，4℃中保存、备用，病害病原菌为葡萄灰霉病菌、葡萄白腐病菌、葡萄炭疽病菌和炭黑曲霉病菌，所述的醇提物浓度为0.3125mg/mL-5mg/mL。
2.如权利要求1所述的应用，其特征在于，当醇提物浓度为5mg/mL时，对白腐病菌、炭疽病菌、炭黑曲霉病菌和灰霉病菌抑制率分别为93.61％、78.63、26.23％和11.97％；当醇提物浓度为5mg/mL时，对多菌灵敏感炭疽病菌菌株FJZZ-62、coll-9、coll-20抑制率分别为48.15％、35.69％和44.27％，对多菌灵高抗炭疽病菌菌株FJND-9、FJND-40和GZSD-89抑制率分别为50.45％、49.19％和44.12％，对多菌灵敏感灰霉病菌菌株GXGL-7、GXNN-6和GXNN-7抑制率分别为30.38％、21.45％和30.10％，对多菌灵高抗灰霉病菌菌株HBLF-10、GXZY-4和GXZY-7抑制率分别为31.32％、45.63％和31.19％。
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2017
- 2017-12-13 CN CN201711324877.6A patent/CN108142441B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104381348A (zh) * | 2014-11-28 | 2015-03-04 | 李晓枫 | 一种防治桃树流胶病的植物源杀菌剂及其制备方法 |
| CN106963676A (zh) * | 2017-03-24 | 2017-07-21 | 福建师范大学 | 一种虎耳草抗菌组合物及其制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 虎耳草乙醇提取物抑菌作用的研究;刘世旺 等;《资源开发与市场》;20070210;第23卷(第6期);第481-482、489页 * |
| 虎耳草科植物杀菌活性的初步研究;钮绪燕 等;《西北农业学报》;19960612;第5卷(第2期);第61-65页 * |
| 虎耳草精油化学成分及其抑菌活性;张知侠;《西北农业学报》;20161020;第25卷(第10期);第1536-1540页 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN108142441A (zh) | 2018-06-12 |
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