CN103923078A - 3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物及其用途 - Google Patents

3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物及其用途 Download PDF

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CN103923078A CN201310013356.4A CN201310013356A CN103923078A CN 103923078 A CN103923078 A CN 103923078A CN 201310013356 A CN201310013356 A CN 201310013356A CN 103923078 A CN103923078 A CN 103923078A
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陈玉龙
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车鹏
楼江平
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East China University of Science and Technology
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East China University of Science and Technology
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    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D471/00—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00
    • C07D471/02—Heterocyclic compounds containing nitrogen atoms as the only ring hetero atoms in the condensed system, at least one ring being a six-membered ring with one nitrogen atom, not provided for by groups C07D451/00 - C07D463/00 in which the condensed system contains two hetero rings
    • C07D471/04—Ortho-condensed systems

Abstract

本发明主要涉及3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物及其用途。所述3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物为式I所示化合物，或其在药学上可接受的盐（详见说明书或权利要求书）。本发明所提供的化合物对四种肿瘤发生、发展相关的酪氨酸激酶（包括c-Kit，PDGFRα，VEGFR2和FGFR1）都表现出较强的抑制活性。这表明本发明化合物可以作为多靶点激酶抑制剂，针对急性粒细胞白血病以及实体瘤开发成靶向抗肿瘤药物。

Description

3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物及其用途
技术领域
本发明涉及药物化学和药物治疗学领域，具体涉及3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物及其制备方法和用途（即该类化合物在制备多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药中应用）。
背景技术
癌症（恶性肿瘤）是严重威胁人类健康最主要的疾病之一。近年来，随着分子肿瘤学的发展，抗肿瘤药物的研究也从传统的细胞毒药物转移到作用于分子靶点的新型药物。
经过研究发现，癌变主要是由于调控细胞的分子信号从细胞表面向核内传导的过程中某些环节发生病变，而膜外信号及膜的信号传导是信号传导过程中的关键步骤，最典型的就是生长因子与其受体结合。蛋白酪氨酸激酶（protein tyrosine kinase，PTK）是多数肿瘤最常见的生长因子受体，通过抑制其活性可破坏肿瘤细胞的信号传递，选择性抑制肿瘤细胞而对正常细胞并无影响。
c-Kit是1987年发现的属于III型酪氨酸激酶受体家族成员，是一个跨膜蛋白，确切表达部位主要在细胞膜上。它存在着30多种功能获得性（gain-of-function，GOF）突变形式，是干细胞因子（stem cell factor，SCF）的受体，c-Kit与其受体SCF结合后，可激发酪氨酸残基磷酸化，从而实现其功能，在肿瘤的发生及进展中起着非常重要的调节作用。研究表明，c-Kit受体与多种肿瘤的发生、发展、预后密切相关，在胃肠道间质瘤（gastrointestinal stromal tumor，GIST）、急性粒细胞白血病（AML）、肺癌等多种肿瘤组织中均存在c-Kit受体的异常表达。
此外肿瘤的生长和转移必须依赖丰富的营养供给，组织中血管的生成为营养物质和氧气进入肿瘤组织、把代谢产物运出组织细胞外和为肿瘤细胞迁移至靶器官奠定了重要的基础条件。如果无血管生成，体外培养的肿瘤组织生长体积不超过4mm3，体内肿瘤不超过1-2mm3。目前，研究发现与肿瘤血管生成有关的因子有30余种，如血小板衍生生长因子（PDGF），血管内皮生长因子（VEGF）、血管抑素、内皮抑素、纤维蛋白生长因子等，其中PDGF主要通过募集周细胞刺激肿瘤血管生成，且周细胞的募集有利于肿瘤血管的成熟稳定和存活，在肿瘤新生血管生成过程中起着至关重要的作用。进一步的研究表明，成纤维细胞生长因子（FGF）及其受体FGFR组成的信号通路在肿瘤新生血管生成、肿瘤的侵袭与转移等过程中也发挥重要作用。
因此，开发多靶点（c-Kit、PDGFR、VEGFR和FGFR）靶向肿瘤发生、发展相关信号通路的治疗药物预期可以产生优良的抗肿瘤效果。
发明内容
本发明所涉及的化合物具有全新的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类结构，并选取四种肿瘤组织生成密切相关的受体蛋白激酶（包括c-Kit，PDGFR-α，VEGFR-2和FGFR-1），进行的激酶抑制活性测试，活性结果显示，本发明部分化合物对四种激酶都具有较强的抑制活性，其中对c-Kit和PDGFR-α受体的抑制活性尤其明显，为今后进一步设计开发新型多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物奠定了基础。
本发明的一个目的是，提供一种3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物，其为式I所示化合物、或其在药学上可接受的盐：
式I中：R1为C1～C4直链或支链烷基或由羟基（-OH）取代的C1～C4直链或支链烷基；R2为六元芳环基或取代六元芳环基，X为O或S；
其中，所述取代六元芳环基的取代基选自：C1～C6直链或支链烷基，C1～C6直链或支链全氟烷基，卤素（F、Cl、Br或I），氰基（-CN），羟基（-OH），硝基（-NO2），（R3为C1～C4直链或支链烷基），或（Y为O或S、R4为C1～C4直链或支链烷基或由苯基取代的C1～C4直链或支链烷基）中一种或二种以上（含二种），取代基的个数为1～4的整数。
本发明另一个目的在于，揭示了上述3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物（式I所示化合物、或其在药学上可接受的盐）的一种用途，即式I所示化合物或其在药学上可接受的盐在制备多靶点受体酪氨酸激酶（包括c-Kit，PDGFRα，VEGFR2和FGFR1）抑制剂类抗肿瘤药中应用（如其在制备治疗急性粒细胞白血病（AML）以及实体瘤（体积>2-3mm3）的药物中应用）。
具体实施方式
在本发明一个优选的技术方案中，R1为C1～C2烷基或由羟基（-OH）取代的C1～C2烷基；
进一步优选的技术方案是：R1为甲基或由羟基（-OH）取代的甲基。
在本发明另一个优选的技术方案中，R2为苯基或取代苯基，
所述取代苯基的取代基选自：C1～C6直链或支链烷基，C1～C6直链或支链全氟烷基，卤素（F、Cl、Br或I），氰基（-CN），羟基（-OH），硝基（-NO2），（R3为C1～C4直链或支链烷基），或（Y为O或S、R3为C1～C4直链或支链烷基或由苯基取代的C1～C4直链或支链烷基）中一种或二种以上（含二种），取代基的个数为1～4的整数；
进一步优选的技术方案是：R2为取代苯基，所述取代苯基的取代基选自：C1～C3直链或支链烷基，C1～C3直链或支链全氟烷基，卤素（F、Cl、Br或I），氰基（-CN），（R3为C1～C2烷基），或（Y为O或S、R4为C1～C2烷基或由苯基取代的C1～C2烷基）中一种或二种以上（含二种），取代基的个数为1～3的整数；
更进一步优选的技术方案是：R2为取代苯基，所述取代苯基的取代基选自：甲基，乙基，三氟甲基，卤素（F、Cl、Br或I），氰基（-CN），甲氧基，甲硫基（CH3S-）,乙酰基或苄氧基中一种或二种，取代基的个数为1或2；
本发明推荐的R2是：邻甲基苯基、间甲基苯基、对甲基苯基、间乙基苯基、邻氟苯基、间氟苯基、间氯苯基、间溴苯基、间碘苯基、间三氟甲基苯基、间氰基苯基、间甲氧基苯基、3,4-二甲氧基苯基、2,5-二甲氧基苯基、间苄氧基苯基、间甲硫基苯基、间乙酰基苯基、5-氯-2-甲基苯基或2-氟-5-甲基苯基。
此外，本发明还提供通式I结构的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物IA~IC及其中间体II～VIII的制备方法，具体合成策略分别如下。
IA的合成：
式中，R1a为C1～C4直链或支链烷基，R2的含义与前文所述相同。
具体包括如下步骤：
1）将3-R1a-5-氨基-1H-吡唑，对硝基苯甲醛和2,2-二甲基-1,3-二氧六环-4,6-二酮加入圆底烧瓶中，用N,N-二甲基甲酰胺溶解后在其沸点温度下加热直到没有CO2放出为止。溶液中有固体沉淀析出，冷却至室温后加入适量的异丙醇稀释。抽滤，固体用N,N-二甲基甲酰胺溶解后超声15分钟，再抽滤后得中间体3-R1-4-(4-硝基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮（中间体II）。
2）将中间体II溶于二氧六环中，加入2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌和N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺，回流过夜。反应结束后将反应液倒入适量的水中，用饱和NaHCO3溶液调成碱性，大量固体从溶液中析出。抽滤，滤饼用N,N-二甲基甲酰胺溶解，超声15分钟后继续抽滤，用乙酸乙酯洗滤饼，滤饼烘干得中间体3-R1a-4-(4-硝基苯基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮（中间体III）。
3）将中间体III溶于适量的苯磷酰二氯中，在110℃下反应过夜。反应结束后将体系倒入到适量冰水中，搅拌半个小时后，抽滤，滤饼加水搅拌均匀后用饱和碳酸氢钠溶液调节成弱碱性。抽滤，滤饼烘干得到中间体6-氯-3-R1a-4-(4-硝基苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶（中间体IV）
4）把锌粉，水合肼，四氢呋喃混与三口烧瓶中，在氮气保护下，将溶有中间体IV的四氢呋喃溶液匀速滴加到反应体系中，加毕后回流反应4小时。反应结束后抽滤，滤液用四氢呋喃萃取三次，减压蒸馏萃液，残余物经柱层析分离，得到中间体4-(3-R1a-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺（中间体V）。
5）将中间体V溶于适量的二甲亚砜中，加入异氰酸酯类化合物（R2-NCO），再加入三乙胺后室温反应8小时。反应结束后，用乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，残余物经柱层析分离，得到化合物N-R2-N’-[4-(3-R1a-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA）。
IB的合成：
式中，R1a为C1～C4直链或支链烷基，R2的含义与前文所述相同。
具体包括如下步骤：
1)将中间体V溶于适量的二甲亚砜中，加入异硫氰酸酯类化合物（R2-NCS），再加入三乙胺后室温反应8小时。反应结束后，向体系中加水，用乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，残余物经柱层析分离，得到化合物N-R2-N’-[4-(3-R1a-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB）。
IC的合成：
式中，R1a为C1～C4直链或支链烷基，R1b为C1～C3直链或支链烷基，R1c为由羟基（-OH）取代的C1～C4直链或支链烷基，R2的含义与前文所述相同。
1)将中间体V和4-二甲基吡啶溶于四氢呋喃中，在0℃下滴加二碳酸二叔丁酯和四氢呋喃的混合溶液，加完后在室温下反应1小时。反应结束后抽滤，滤液减压蒸馏，残余物经过柱层析分离，得到中间体VI；
2)将中间体VI溶于适量的四氯化碳中，加入N-溴代丁二酰亚胺和过氧化苯甲酰，在氮气环境下回流反应20小时。反应结束后抽滤，滤液浓缩后进行柱层析分离得到中间体VII；
3)将中间体VII溶于二氧六环和水的混合溶液，回流反应10小时，反应结束后体系减压蒸馏，残余物经过柱层析分离，得到中间体VIII；
4)将中间体VIII溶于适量的二甲亚砜中，加入异氰酸酯类化合物（R2-NCO），再加入三乙胺后室温反应8小时。反应结束后，向体系中加水析出固体，抽滤，滤饼用乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂重结晶，得到化合物IC。
根据上述制备方法的教导，本领域普通技术人员无需创造性劳动，即可获得式I所包含的所有化合物。
在以下的实施例中将进一步举例说明本发明。这些实施例仅用于说明本发明，但不以任何方式限制本发明的保护范围。实施例中的所有参数以及其余的说明，除另有说明外，都是以质量(克)为单位。
实施例1
3-甲基-4-(4-硝基苯基)-4,5-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体II)的制备
将4.85克3-甲基-5-氨基-1H-吡唑，7.55克对硝基苯甲醛和7.2克2,2-二甲基-1,3-二氧六环-4,6-二酮投入100毫升圆底烧瓶中，用20毫升的N，N-二甲基甲酰胺溶解后，在110℃下加热反应至没有CO2放出为止。反应30分钟后溶液中有固体沉淀析出，冷却至室温后加入50毫升的异丙醇稀释。抽滤，固体用N，N-二甲基甲酰胺超声15分钟，结束后继续抽滤，固体干燥后得标题化合物，9.8克白色固体(中间体II)，收率72%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:11.92(s,1H),10.41(s,1H),8.20(d,J=8.7Hz,2H),7.45(d,J=8.7Hz,2H),4.37(t,J=6.3Hz,1H),2.88(dd,J=15.9,7.3Hz,1H),2.58(dd,J=16.0,5.6Hz,1H),1.86(s,3H).
实施例2
3-甲基-4-(4-硝基苯基)-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-6(7H)-酮(中间体III)的制备
将14.9克中间体II投入到250毫升烧瓶中，加入100毫升二氧六环溶解，然后加入66毫升N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺，再加入15克2,3-二氯-5,6-二氰基-1,4-苯醌，回流过夜。反应结束后将反应液倒入适量水中并用饱和NaHCO3溶液调成碱性，固体从溶液中析出。抽滤，滤饼先后用N，N-二甲基甲酰胺和乙酸乙酯洗涤，滤饼40℃下烘干得11.3克淡黄色固体(中间体III)，收率76%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.00(s,1H),11.78(s,1H),8.33(d,J=8.6Hz,2H),7.80(d,J=8.6Hz,2H),6.00(s,1H),2.01(s,3H).
实施例3
6-氯-3-甲基-4-(4-硝基苯基)-6,7-二氢-1H-吡唑[3,4-b]吡啶（中间体IV）的制备
将5克中间体III投入100毫升烧瓶中，加入15毫升苯磷酰二氯溶解，在110℃下反应过夜。反应结束后，待体系冷却倒入适量冰水中，搅拌1小时，有大量固体析出。抽滤，滤饼用饱和碳酸氢钠溶液调成弱碱性后二次抽滤，用大量水淋洗滤饼，在40℃下烘干得3.1克灰黄色固体(中间体IV)，收率是58%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.71(s,1H),8.39(d,J=8.7Hz,2H),7.90(d,J=8.7Hz,2H),7.25(s,1H),2.16(s,3H).
实施例4
4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺（中间体V）的制备
将25克锌粉，70毫升一水合肼，10毫升四氢呋喃混与250毫升三口烧瓶中，在氮气保护下，将70毫升溶有7克中间体IV的四氢呋喃溶液匀速滴加到反应体系中，加毕后回流反应4小时。反应结束后抽滤，滤液用四氢呋喃萃取三次，减压蒸馏萃液，残余物用洗脱剂（四氢呋喃：二氯甲烷=1:3，v/v）经柱层析分离，得到白色固体（中间体V）3.1克，收率为57%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.20(s,1H),8.38(d,J=4.7Hz,1H),7.24(d,J=7.7Hz,2H),6.93(d,J=4.7Hz,1H),6.69(d,J=7.7Hz,2H),5.45(s,2H),2.27(s,3H).
实施例5
4-(4-(双(叔丁氧羰基)氨基)苯基)-3-甲基-1-叔丁氧羰基-吡唑[3,4-b]吡啶(中间体VI)的制备
将1克中间体V和96毫克4-二甲基吡啶溶于10毫升四氢呋喃中，在0℃下滴加混有9毫升二碳酸二叔丁酯和10毫升四氢呋喃的混合溶液，加完后在室温下反应1小时。反应结束后抽滤，滤液减压蒸馏，残余物用洗脱剂（乙酸乙酯：石油醚=1:6，v/v）经柱层析分离，得到无色晶体130毫克（中间体VI），收率是6%。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.66(d,J=4.4Hz,1H),7.34(d,J=7.9Hz,2H),7.22(d,J=7.8Hz,2H),7.11(d,J=4.3Hz,1H),2.14(s,3H),1.67(s,9H),1.38(s,18H).
实施例6
4-(4-(双(叔丁氧羰基)氨基)苯基)-3-溴甲基-1-叔丁氧羰基-吡唑[3,4-b]吡啶（中间体VII）的制备
将640毫克中间体VI溶于10毫升四氯化碳中，加入239毫克N-溴代丁二酰亚胺和89毫克过氧化苯甲酰，在氮气环境下回流反应20小时。反应结束后抽滤，滤液浓缩后用洗脱剂（乙酸乙酯:石油醚=1:6，v/v）进行柱层析分离得到无色晶体360毫克（中间体VII）。收率是49%。
1H-NMR(400MHz,CDCl3)δ:8.70(d,J=4.7Hz,1H),7.44(d,J=8.0Hz,2H),7.26(d,J=8.0Hz,2H),7.16(d,J=4.7Hz,1H),4.35(s,2H),1.67(s,9H),1.39(s,18H).
实施例7
4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺（中间体VIII）的制备
将430毫克中间体VII溶于4毫升二氧六环和2毫升水的混合溶液，回流过夜，反应结束后体系减压蒸馏，残余物用洗脱剂（甲醇:二氯甲烷=1:30，v/v）柱层析分离，得到白色固体40毫克（中间体VIII），收率是23%。
1HNMR(400MHz,MeOD)δ:8.33(d,J=4.8Hz,1H),7.33(d,J=8.4Hz,2H),6.98(d,J=4.8Hz,1H),6.74(d,J=8.4Hz,2H),4.58(s,2H).
实施例8
N-(3-溴苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-1）的制备
将80毫克4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺（中间体V）溶于1毫升二甲基亚砜中，加入54微升3-溴苯异氰酸酯和15微升三乙胺，室温反应过夜。反应结束后，向体系中加入适量的水，用乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，残余物经柱层析分离（甲醇:二氯甲烷=1:30，v/v），得到标题化合物，130毫克白色固体，收率是86%。
1HNMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.34(s,1H),9.19(s,2H),8.47(d,J=4.3Hz,1H),7.89(s,1H),7.65(d,J=8.0Hz,2H),7.51(d,J=7.9Hz,2H),7.36(d,J=7.8Hz,1H),7.26(t,J=7.9Hz,1H),7.17(d,J=7.6Hz,1H),7.03(d,J=4.2Hz,1H),2.25(s,3H).MS(EI)m/z421.0[M]+。
实施例9
N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-2）的制备
除了将3-溴甲基苯异氰酸酯替换成3-乙基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例8，得标题化合物，白色固体63毫克，收率为48%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.34(s,1H),9.07(s,1H),8.86(s,1H),8.47(d,J=4.6Hz,1H),7.65(d,J=8.5Hz,2H),7.50(d,J=8.5Hz,2H),7.36(s,1H),7.30(d,J=8.0Hz,1H),7.20(t,J=7.8Hz,1H),7.03(d,J=4.6Hz,1H),6.84(d,J=7.4Hz,1H),2.59(q,J=7.5Hz,2H),2.26(s,3H),1.19(s,3H);MS(EI)m/z371.1[M]+。
实施例10
N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-3）的制备
除了将3-乙基苯异氰酸酯替换成3-三氟甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例8，得标题化合物，白色固体120毫克，收率82%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.35(s,1H),9.41(d,J=50.8Hz,2H),8.47(d,J=4.7Hz,1H),8.06(s,1H),7.65(dd,J=16.5,8.5Hz,3H),7.53(dd,J=13.4,8.3Hz,3H),7.33(d,J=7.6Hz,1H),7.03(d,J=4.7Hz,1H),2.25(s,3H);MS(EI)m/z411.1[M]+。
实施例11
N-(邻甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-4）的制备
除了将3-三氟甲基苯异氰酸酯替换成邻甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例8，得标题化合物，白色固体57毫克，收率45%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.34(s,1H),9.54(s,1H),8.47(d,J=4.7Hz,1H),8.20(s,1H),7.85(d,J=8.0Hz,1H),7.67(d,J=8.6Hz,2H),7.50(d,J=8.6Hz,2H),7.18(dd,J=15.0,7.5Hz,2H),7.03(d,J=4.7Hz,1H),6.97(dd,J=10.6,4.1Hz,1H),2.27(d,J=11.0Hz,6H);MS(EI)m/z357.1[M]+。
实施例12
N-(间甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-5）的制备
除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成间甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例8，得标题化合物，白色固体66毫克，收率52%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.34(s,1H),9.16(s,1H),8.92(s,1H),8.47(d,J=4.6Hz,1H),7.65(d,J=8.5Hz,2H),7.49(d,J=8.4Hz,2H),7.34(s,1H),7.29(d,J=7.9Hz,1H),7.18(t,J=7.7Hz,1H),7.03(d,J=4.6Hz,1H),6.81(d,J=7.2Hz,1H),2.28(d,J=13.5Hz,6H);MS(EI)m/z357.1[M]+。
实施例13
N-(间氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-6）的制备
除了将间甲基苯异氰酸酯替换成3-氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例8，得标题化合物，白色固体84毫克，收率65%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.34(s,1H),9.26(d,J=11.4Hz,2H),8.47(d,J=4.7Hz,1H),7.66(d,J=8.6Hz,2H),7.60–7.46(m,3H),7.32(dd,J=15.2,8.1Hz,1H),7.22–7.11(m,1H),7.03(d,J=4.7Hz,1H),6.80(td,J=8.4,2.0Hz,1H),2.26(s,3H);MS(EI)m/z361.1[M]+。
实施例14
N-(对甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-7）的制备
除了将3-氟苯异氰酸酯替换成对甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例8，得标题化合物，白色固体32毫克，收率25%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.33(s,1H),9.30(s,1H),9.05(s,1H),8.47(d,J=4.7Hz,1H),7.64(d,J=8.6Hz,2H),7.49(d,J=8.6Hz,2H),7.38(d,J=8.4Hz,1H),7.10(d,J=8.2Hz,2H),7.03(d,J=4.7Hz,1H),2.26(s,6H);MS(EI)m/z357.1[M]+。
实施例15
N-(2-氟-5-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-8）的制备
除了将对甲基苯异氰酸酯替换成2-氟-5-甲基苯基异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例8，得标题化合物，白色固体82毫克，收率62%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.34(s,1H),9.41(s,1H),8.64(s,1H),8.47(d,J=4.7Hz,1H),8.09–7.94(m,1H),7.65(d,J=8.6Hz,2H),7.51(d,J=8.5Hz,2H),7.12(dd,J=11.3,8.4Hz,1H),7.03(d,J=4.7Hz,1H),6.82(s,1H),2.27(d,J=13.8Hz,6H);MS(EI)m/z375.1[M]+。
实施例16
N-(2-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-9）的制备
除了将2-氟-5-甲基苯异氰酸酯替换成2-氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例8，得标题化合物，白色固体90毫克，收率70%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.35(s,1H),9.85(s,1H),8.91(s,1H),8.47(d,J=4.7Hz,1H),8.16(td,J=8.2,1.5Hz,2H),7.67(d,J=8.6Hz,2H),7.51(d,J=8.6Hz,1H),7.25(ddd,J=11.5,8.2,1.3Hz,1H),7.16(t,J=7.7Hz,1H),7.04(d,J=4.6Hz,1H),2.25(s,3H);MS(EI)m/z361.1[M]+。
实施例17
N-(3-氯苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-10）的制备
除了将2-氟苯异氰酸酯替换成3-氯苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例8，得标题化合物，白色固体112毫克，收率84%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.34(s,1H),9.56(d,J=7.9Hz,2H),8.47(d,J=4.7Hz,1H),7.75(d,J=0.9Hz,1H),7.66(d,J=8.6Hz,1H),7.51(d,J=8.6Hz,2H),7.33(d,J=1.0Hz,2H),7.17-6.89(m,2H),2.25(s,3H);MS(EI)m/z377.1[M]+。
实施例18
N-(3-氰基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-11）的制备
除了将3-氯苯异氰酸酯替换成3-氰基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例8，得标题化合物，白色固体70毫克，收率53%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.35(s,1H),9.54(d,J=37.3Hz,2H),8.47(d,J=4.7Hz,1H),8.02(s,1H),7.72(d,J=8.1Hz,1H),7.66(d,J=8.5Hz,1H),7.58-7.48(m,2H),7.44(d,J=7.6Hz,1H),7.04(d,J=4.7Hz,1H),2.25(s,3H);MS(EI)m/z368.1[M]+。
实施例19
N-(2,5-二甲氧基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲（IA-12）的制备
除了将3-氰基苯异氰酸酯替换成2,5-二甲氧基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例8，得标题化合物，白色固体20毫克，收率14%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.34(s,1H),9.61(s,1H),8.47(d,J=4.7Hz,1H),8.36(s,1H),7.90(d,J=3.0Hz,1H),7.65(d,J=8.6Hz,2H),7.51(d,J=8.6Hz,2H),7.03(d,J=4.7Hz,1H),6.95(d,J=8.9Hz,1H),6.52(dd,J=8.9,3.0Hz,1H),3.85(s,3H),3.71(s,3H),2.26(s,3H);MS(EI)m/z403.1[M]+。
实施例20
N-(3-溴苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-1）的制备
将50毫克4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯胺（中间体V）溶于1毫升二甲基亚砜中，加入39微升3-溴苯异硫氰酸酯和10微升三乙胺，室温反应过夜。反应结束后，向体系中加入适量的水，用乙酸乙酯萃取三次，饱和食盐水洗，无水硫酸镁干燥，过滤，浓缩，残余物经柱层析分离（甲醇:二氯甲烷=1:20，v/v），得到标题化合物，58毫克淡黄色固体，收率是60%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.36(s,1H),10.17(s,1H),10.06(s,1H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),7.83(s,1H),7.67(d,J=8.5Hz,2H),7.54(d,J=8.5Hz,2H),7.46(d,J=6.7Hz,1H),7.32(s,2H),7.05(d,J=4.7Hz,1H),2.23(s,3H);MS(ESI)m/z438.0[M+1]+。
实施例21
N-(3-碘苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-2）的制备
除了将3-溴苯异硫氰酸酯替换成3-碘苯异硫氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例20，得标题化合物，淡黄色固体72毫克，收率67%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.36(s,1H),10.15(s,1H),10.01(s,1H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),7.95(s,1H),7.67(d,J=8.5Hz,2H),7.54(d,J=8.5Hz,2H),7.49(dd,J=8.0,1.6Hz,2H),7.14(t,J=8.0Hz,1H),7.04(d,J=4.7Hz,1H),2.24(s,3H);MS(ESI)m/z486.0[M+1]+。
实施例22
N-(3-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-3）的制备
除了将3-碘苯异硫氰酸酯替换成3-氟苯异硫氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例20，得标题化合物，淡黄色固体43毫克，收率51%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.36(s,1H),10.13(d,J=16.0Hz,2H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),7.69(d,J=8.5Hz,2H),7.54(d,J=8.5Hz,3H),7.38(dd,J=15.0,8.1Hz,1H),7.28(d,J=8.9Hz,1H),7.05(d,J=4.7Hz,1H),6.96(td,J=8.4,2.3Hz,1H),2.24(s,3H);MS(ESI)m/z378.1[M+1]+。
实施例23
N-(3-苄氧基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-4）的制备
除了将3-氟苯异硫氰酸酯替换成3-苄氧基苯异硫氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例20，得标题化合物，淡黄色固体79毫克，收率77%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.36(s,1H),9.99(d,J=17.2Hz,2H),8.48(d,J=4.7Hz,1H),7.69(d,J=8.5Hz,2H),7.53(d,J=8.5Hz,2H),7.46(d,J=7.1Hz,2H),7.39(t,J=7.4Hz,2H),7.34(d,J=7.1Hz,1H),7.30–7.21(m,2H),7.05(t,J=6.1Hz,2H),6.80(dd,J=8.2,2.2Hz,1H),5.09(s,2H),2.29–2.16(m,3H);MS(ESI)m/z466.1[M+1]+。
实施例24
N-(3,4-二甲氧基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-5）的制备
除了将3-苄氧基苯异硫氰酸酯替换成3,4-二甲氧基苯异硫氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例20，得标题化合物，淡黄色固体56毫克，收率60%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.35(s,1H),9.81(d,J=5.6Hz,2H),8.48(d,J=4.7Hz,1H),7.67(d,J=8.5Hz,2H),7.51(d,J=8.5Hz,2H),7.12(s,1H),7.04(d,J=4.7Hz,1H),6.94(s,2H),3.75(d,J=3.5Hz,6H),2.23(s,3H);MS(ESI)m/z420.1[M+1]+。
实施例25
N-(3-甲氧基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-6）的制备
除了将3,4-二甲氧基苯异硫氰酸酯替换成3-甲氧基苯异硫氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例20，得标题化合物，淡黄色固体60毫克，收率69%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.36(s,1H),9.99(d,J=17.7Hz,2H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),7.69(d,J=8.5Hz,2H),7.53(d,J=8.5Hz,2H),7.25(t,J=8.1Hz,1H),7.19(t,J=2.1Hz,1H),7.107.00(m,2H),6.73(dd,J=8.2,2.4Hz,1H),3.75(s,3H),2.24(s,3H);MS(ESI)m/z390.1[M+1]+。
实施例26
N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-7）的制备
除了将3-甲氧基苯异硫氰酸酯替换成3-三氟甲基苯异硫氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例20，得标题化合物，淡黄色固体61毫克，收率64%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.37(s,1H),10.25(s,1H),10.18(s,1H),8.50(dd,J=9.1,4.7Hz,1H),7.97(s,1H),7.78(d,J=8.2Hz,1H),7.68(d,J=8.5Hz,2H),7.63–7.52(m,3H),7.48(d,J=7.8Hz,1H),7.05(d,J=4.7Hz,1H),2.24(s,3H);MS(ESI)m/z428.1[M+1]+。
实施例27
N-(3-乙酰基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-8）的制备
除了将3-三氟甲基苯异硫氰酸酯替换成3-乙酰基苯异硫氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例20，得标题化合物，淡黄色固体50毫克，收率56%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.36(s,1H),10.13(d,J=15.6Hz,2H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),8.08(s,1H),7.81–7.65(m,4H),7.61–7.45(m,3H),7.05(d,J=4.7Hz,1H),2.58(s,3H),2.23(s,3H);MS(ESI)m/z424.1[M+23]+。
实施例28
N-(5-氯-2-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-9）的制备
除了将3-乙酰基苯异硫氰酸酯替换成5-氯-2-甲基苯异硫氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例20，得标题化合物，淡黄色固体55毫克，收率61%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.36(s,1H),10.07(s,1H),9.55(s,1H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),7.71(d,J=8.5Hz,2H),7.54(d,J=8.4Hz,2H),7.41(d,J=1.9Hz,1H),7.26(dt,J=8.2,5.1Hz,2H),7.04(d,J=4.7Hz,1H),2.25(d,J=6.5Hz,6H);MS(ESI)m/z408.1[M+1]+。
实施例29
N-(3-氯苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-10）的制备
除了将5-氯-2-甲基苯异硫氰酸酯替换成3-氯苯异硫氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例20，得标题化合物，淡黄色固体63毫克，收率71%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.36(s,1H),10.17(s,1H),10.08(s,1H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),7.69(dd,J=9.4,5.2Hz,3H),7.54(d,J=8.5Hz,2H),7.46–7.32(m,2H),7.19(d,J=7.8Hz,1H),7.05(d,J=4.7Hz,1H),2.24(s,3H);MS(ESI)m/z394.0[M+1]+。
实施例30
N-(3-氰基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-11）的制备
除了将3-氯苯异硫氰酸酯替换成3-氰基苯异硫氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例20，得标题化合物，淡黄色固体44毫克，收率51%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.37(s,1H),10.27(s,1H),10.17(s,1H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),8.02(s,1H),7.80(d,J=8.0Hz,1H),7.68(d,J=8.5Hz,2H),7.64-7.50(m,4H),7.05(d,J=4.7Hz,1H),2.23(s,3H);MS(ESI)m/z385.1[M+1]+。
实施例31
N-(3-甲硫基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲（IB-12）的制备
除了将3-氰基苯异硫氰酸酯替换成3-甲硫基苯异硫氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例20，得标题化合物，淡黄色固体22毫克，收率24%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.37(s,1H),10.07(s,1H),9.98(s,1H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),7.69(d,J=8.5Hz,2H),7.54(d,J=8.5Hz,2H),7.47(s,1H),7.28(d,J=7.0Hz,2H),7.05(d,J=4.4Hz,2H),2.47(s,3H),2.24(s,3H);MS(ESI)m/z4.1[M+1]+。
实施例32
N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物IC-1)的制备
将12毫克中间体VIII溶于1毫升二甲亚砜中，加入8微升3-乙基苯异氰酸酯，再加入3微升三乙胺后室温反应过夜。反应结束后，向体系中加水析出固体，抽滤，滤饼用乙酸乙酯和石油醚的混合溶剂（乙酸乙酯：石油醚=1:3，v/v）重结晶，得到标题化合物，白色固体6毫克，收率为34%。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.40(d,J=4.8Hz,1H),8.33(d,J=4.8Hz,1H),7.33(d,J=8.4Hz,2H),7.22(s,1H),7.19–7.08(m,2H),7.05(d,J=4.8Hz,1H),6.98(d,J=4.8Hz,1H),6.80(d,J=7.3Hz,1H),6.75(d,J=8.4Hz,2H),4.58(s,2H),2.54(q,J=7.6Hz,2H),1.15(t,J=7.6Hz,3H);MS(ESI)m/z410.1[M+23]+。
实施例33
N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物IC-2)的制备
除了将3-乙基苯异氰酸酯替换成3-三氟甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例32，得标题化合物，白色固体10毫克，收率51%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.65(s,1H),9.33(s,1H),9.21(s,1H),8.56(d,J=4.7Hz,1H),8.12(s,1H),7.84-7.64(m,5H),7.60(t,J=7.9Hz,1H),7.39(d,J=7.5Hz,1H),7.15(d,J=4.7Hz,1H),4.56(d,J=5.3Hz,2H);MS(ESI)m/z428.1[M+1]+。
实施例34
N-(3-溴苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物IC-3)的制备
除了将3-三氟甲基苯异氰酸酯替换成3-溴苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例32，得标题化合物，白色固体13毫克，收率65%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.58(s,1H),9.04(d,J=5.9Hz,2H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),7.89(s,1H),7.64(q,J=8.8Hz,4H),7.35(d,J=8.6Hz,1H),7.26(t,J=8.0Hz,1H),7.17(d,J=7.8Hz,1H),7.09(d,J=4.7Hz,1H),4.50(d,J=5.3Hz,2H);MS(ESI)m/z438.0[M+1]+。
实施例35
N-(2-氟-5-甲基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物IC-4)的制备
除了将3-溴苯异氰酸酯替换成2-氟-5甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例32，得标题化合物，白色固体9毫克，收率50%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.58(s,1H),9.33(s,1H),8.62(s,1H),8.50(d,J=4.7Hz,1H),8.01(d,J=6.1Hz,1H),7.64(dd,J=18.0,8.7Hz,4H),7.09(d,J=4.7Hz,2H),6.82(s,1H),4.50(d,J=4.1Hz,2H);MS(ESI)m/z414.1[M+23]+。
实施例36
N-(3-甲基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物IC-5)的制备
除了将2-氟-5甲基苯异氰酸酯替换成3-甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例32，得标题化合物，白色固体10毫克，收率59%。
1H NMR(400MHz,MeOD)δ:8.52(d,J=4.7Hz,1H),8.45(d,J=4.9Hz,1H),7.46(d,J=8.4Hz,2H),7.31(s,1H),7.27(d,J=8.2Hz,1H),7.19(dd,J=16.4,6.2Hz,2H),7.10(d,J=4.9Hz,1H),6.88(t,J=9.5Hz,3H),4.70(s,2H),2.36(s,3H);MS(ESI)m/z396.1[M+23]+。
实施例37
N-(3-氟苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物IC-6)的制备
除了将3-甲基苯异氰酸酯替换成3-氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例32，得标题化合物，白色固体7毫克，收率41%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.58(s,1H),9.05(d,J=11.4Hz,2H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),7.64(q,J=8.7Hz,4H),7.53(d,J=11.9Hz,1H),7.32(dd,J=15.2,8.0Hz,1H),7.17(s,1H),7.09(d,J=4.7Hz,1H),6.80(td,J=8.5,2.4Hz,1H),4.50(d,J=5.4Hz,2H);MS(ESI)m/z400.1[M+23]+。
实施例38
N-(3-氯苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物IC-7)的制备
除了将3-氟苯异氰酸酯替换成3-氯苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例32，得标题化合物，白色固体6毫克，收率33%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.57(s,1H),9.11(s,2H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),7.75(s,1H),7.64(q,J=8.9Hz,4H),7.32(d,J=5.0Hz,2H),7.08(d,J=4.7Hz,1H),7.06–7.01(m,1H),4.50(d,J=5.4Hz,2H);MS(ESI)m/z416.0[M+23]+。
实施例39
N-(对甲基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物IC-8)的制备
除了将3-氯苯异氰酸酯替换成对甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例32，得标题化合物，白色固体4毫克，收率24%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.57(s,1H),8.86(s,1H),8.66(s,1H),8.49(d,J=4.7Hz,1H),7.63(q,J=8.7Hz,4H),7.37(d,J=8.3Hz,2H),7.15–7.04(m,3H),4.50(d,J=5.3Hz,2H),2.25(s,3H);MS(ESI)m/z396.1[M+23]+。
实施例40
N-(邻甲基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物IC-9)的制备
除了将对甲基苯异氰酸酯替换成邻甲基苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例32，得标题化合物，白色固体4毫克，收率24%。
1HNMR(400MHz,MeOD)δ:8.40(d,J=4.8Hz,1H),7.59-7.50(m,4H),7.08(dd,J=21.1,6.3Hz,4H),6.98-6.92(m,1H),4.56(s,2H),2.23(s,3H);MS(ESI)m/z396.1[M+23]+。
实施例41
N-(邻氟苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲(化合物IC-10)的制备
除了将邻甲基苯异氰酸酯替换成邻氟苯异氰酸酯之外，其余所需原料、试剂及制备方法同实施例32，得标题化合物，白色固体4毫克，收率23%。
1H-NMR(400MHz,DMSO-d6)δ:13.58(s,1H),9.31(s,1H),8.66(s,1H),8.50(d,J=4.7Hz,1H),8.18(t,J=8.0Hz,1H),7.64(dd,J=18.8,8.6Hz,4H),7.32-7.22(m,1H),7.17(t,J=7.6Hz,1H),7.09(d,J=4.7Hz,1H),7.06-6.97(m,1H),4.50(d,J=5.6Hz,2H);MS(ESI)m/z400.1[M+23]+。
实施例8～41所制备化合物的结构见表1：
表1
续表1
实施例42
本发明的化合物抑制四种受体酪氨酸激酶的实验及活性结果
对合成的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物，选取4种酪氨酸受体激酶（包括c-Kit，PDGFRα，VEGFR2和FGFR1），进行的抑制活性测试。活性数据如表1所示，共发现了10个本发明化合物对c-Kit有很强的抑制活性，半数有效抑制浓度IC50<1μM，其中4个本发明化合物对c-Kit有非常好的抑制活性，半数有效抑制浓度IC50<10nM；共发现了27个本发明化合物对PDGFRα有较强的抑制活性，半数有效抑制浓度IC50<1μM，其中7个本发明化合物对PDGFRα有很强的抑制活性，半数有效抑制浓度IC50<0.1μM；共发现了27个本发明化合物对VEGFR2有一定的抑制活性，半数有效抑制浓度1μM<IC50<10μM。详见表2（3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物对四种激酶的抑制活性数据（IC50，nM））
在表2中，c-Kit代表III型酪氨酸激酶受体，PDGFRa代表血小板衍生生长因子受体α，VEGFR2代表血管内皮生长因子受体2，FGFR1代表成纤维细胞生长因子受体1。Linifanib为阳性对照药，是美国雅培公司推出的抗肿瘤候选药物，当前处于临床三期研究阶段。Staurosporine为阳性对照药，是一种天然产物类抗生素，通常作为工具化合物。
表2.
续表2
续表2
由表2可以看出，本发明的具有结构通式I的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物大部分具有较强的c-Kit和PDGFRα抑制活性以及一定的VEGFR2和FGFR1抑制活性，其中个别本发明化合物对c-Kit的抑制活性尤为明显，说明本发明的化合物为多靶点受体酪氨酸激酶的抑制剂类抗肿瘤药。
本发明提供的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物分子结构较为简单，制备工艺简洁，生产成本低，在四种和肿瘤发生、发展密切相关的受体酪氨酸激酶抑制实验中均显示出较强的抑制活性，因此有望开发成针对急性粒细胞白血病以及实体瘤的多靶点、靶向抗肿瘤药物。

Claims (10)

1.一种3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物，其为式I所示化合物、或其在药学上可接受的盐：
式I中：R1为C1～C4直链或支链烷基或由羟基取代的C1～C4直链或支链烷基；R2为六元芳环基或取代六元芳环基，X为O或S；
所述取代六元芳环基的取代基选自：C1～C6直链或支链烷基，C1～C6直链或支链全氟烷基，卤素，氰基，羟基，硝基，或中一种或二种以上，取代基的个数为1～4的整数；
其中，R3为C1～C4直链或支链烷基，Y为O或S，R4为C1～C4直链或支链烷基或由苯基取代的C1～C4直链或支链烷基。
2.如权利要求1所述的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物，其特征在于，其中R1为C1～C2烷基或由羟基取代的C1～C2烷基。
3.如权利要求2所述的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物，其特征在于，其中R1为甲基或由羟基取代的甲基。
4.如权利要求1所述的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物，其特征在于，其中R2为苯基或取代苯基；
所述取代苯基的取代基选自：C1～C6直链或支链烷基，C1～C6直链或支链全氟烷基，卤素，氰基，羟基，硝基，或中一种或二种以上，取代基的个数为1～4的整数；
其中，R3为C1～C4直链或支链烷基，Y为O或S，R4为C1～C4直链或支链烷基或由苯基取代的C1～C4直链或支链烷基。
5.如权利要求4所述的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物，其特征在于，其中R2为取代苯基；
所述取代苯基的取代基选自：C1～C3直链或支链烷基，C1～C3直链或支链全氟烷基，卤素，氰基，或中一种或二种以上，取代基的个数为1～3的整数；
其中，R3为C1～C2烷基，Y为O或S，R4为C1～C2烷基或由苯基取代的C1～C2烷基。
6.如权利要求5所述的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物，其特征在于，其中R2为取代苯基；
所述取代苯基的取代基选自：甲基，乙基，三氟甲基，卤素，氰基，甲氧基，甲硫基,乙酰基或苄氧基中一种或二种，取代基的个数为1或2。
7.如权利要求6所述的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物，其特征在于，其中R2是：邻甲基苯基、间甲基苯基、对甲基苯基、间乙基苯基、邻氟苯基、间氟苯基、间氯苯基、间溴苯基、间碘苯基、间三氟甲基苯基、间氰基苯基、间甲氧基苯基、3,4-二甲氧基苯基、2,5-二甲氧基苯基、间苄氧基苯基、间甲硫基苯基、间乙酰基苯基、5-氯-2-甲基苯基或2-氟-5-甲基苯基。
8.如权利要求3或7所述的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物，其特征在于，所述的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物是：N-(3-溴苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(邻甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(间甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(间氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(对甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-氟-5-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氯苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氰基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2,5-二甲氧基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-溴苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(3-碘苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(3-氟苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(3-苄氧基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(3,4-二甲氧基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(3-甲氧基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(3-乙酰基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(5-氯-2-甲基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(3-氯苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(3-氰基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(3-甲硫基苯基)-N’-[4-(3-甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]硫脲；N-(3-乙基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-三氟甲基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-溴苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(2-氟-5甲基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-甲基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氟苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(3-氯苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(对甲基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；N-(邻甲基苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲；或N-(邻氟苯基)-N’-[4-(3-羟甲基-1H-吡唑[3,4-b]吡啶-4-基)苯基]脲。
9.如权利要求1～8中任意一项所述的3,4-二取代(1H-吡唑[3,4-b]吡啶)类化合物在制备多靶点受体酪氨酸激酶抑制剂类抗肿瘤药物中的应用。
10.如权利要求9所述的应用，其特征在于，其中所述多靶点受体酪氨酸激酶包括c-Kit，PDGFRα，VEGFR2和FGFR1。
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