CN108034599A - 一株源自白酒酿造体系的高效合成γ-氨基丁酸的短乳杆菌 - Google Patents

一株源自白酒酿造体系的高效合成γ-氨基丁酸的短乳杆菌 Download PDF

Info

Publication number
CN108034599A
CN108034599A CN201711275417.9A CN201711275417A CN108034599A CN 108034599 A CN108034599 A CN 108034599A CN 201711275417 A CN201711275417 A CN 201711275417A CN 108034599 A CN108034599 A CN 108034599A
Authority
CN
China
Prior art keywords
lactobacillus brevis
gaba
cgmcc
bacterial strain
aminobutyric acid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201711275417.9A
Other languages
English (en)
Other versions
CN108034599B (zh
Inventor
徐岩
任聪
宫璐婵
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Jiangnan University
Original Assignee
Jiangnan University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Jiangnan University filed Critical Jiangnan University
Priority to CN201711275417.9A priority Critical patent/CN108034599B/zh
Publication of CN108034599A publication Critical patent/CN108034599A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN108034599B publication Critical patent/CN108034599B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • C12N1/205Bacterial isolates
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23KFODDER
    • A23K10/00Animal feeding-stuffs
    • A23K10/10Animal feeding-stuffs obtained by microbiological or biochemical processes
    • A23K10/16Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions
    • A23K10/18Addition of microorganisms or extracts thereof, e.g. single-cell proteins, to feeding-stuff compositions of live microorganisms
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS, OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT COVERED BY SUBCLASSES A21D OR A23B-A23J; THEIR PREPARATION OR TREATMENT, e.g. COOKING, MODIFICATION OF NUTRITIVE QUALITIES, PHYSICAL TREATMENT; PRESERVATION OF FOODS OR FOODSTUFFS, IN GENERAL
    • A23L29/00Foods or foodstuffs containing additives; Preparation or treatment thereof
    • A23L29/065Microorganisms
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/20Bacteria; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P13/00Preparation of nitrogen-containing organic compounds
    • C12P13/005Amino acids other than alpha- or beta amino acids, e.g. gamma amino acids
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2400/00Lactic or propionic acid bacteria
    • A23V2400/11Lactobacillus
    • A23V2400/121Brevis
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61KPREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K35/00Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
    • A61K2035/11Medicinal preparations comprising living procariotic cells
    • A61K2035/115Probiotics
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12RINDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
    • C12R2001/00Microorganisms ; Processes using microorganisms
    • C12R2001/01Bacteria or Actinomycetales ; using bacteria or Actinomycetales
    • C12R2001/225Lactobacillus
    • C12R2001/24Lactobacillus brevis

Landscapes

  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Animal Husbandry (AREA)
  • Physiology (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)

Abstract

本发明公开了一株源自白酒酿造体系的高效合成γ‑氨基丁酸的短乳杆菌,属于食品微生物技术领域。本发明的短乳杆菌菌株D17,分离自传统白酒酿造体系,已于2017年7月6日保藏于中国普通微生物保藏管理中心,保藏编号CGMCCNO.14385。本发明的短乳杆菌D17菌株筛选于白酒酿造体系,可耐受高酸高醇等环境,GAD***可快速被谷氨酸钠诱导,且菌株的GABA合成与生长耦联,菌体自身可在高浓度的底物和产物中保持活力,因此具有高效合成GABA的能力。利用该菌株,采用控酸补料法分批发酵,GABA累积浓度达132.63g/L,生产效率为3.16g/L/h。本发明中的短乳杆菌D17菌株因具有高效转化谷氨酸钠合成GABA的能力及纯天然菌株的来源属性,可用于高纯度GABA制备、饲料级GABA制备等。

Description

一株源自白酒酿造体系的高效合成γ-氨基丁酸的短乳杆菌
技术领域
本发明涉及一株源自白酒酿造体系的高效合成γ-氨基丁酸的短乳杆菌,属于食品微生物技术领域。
背景技术
γ-氨基丁酸(GABA)是一种非蛋白质氨基酸,参与动物、植物和微生物的多项生理活动。作为一种重要的抑制性神经递质,GABA对哺乳动物学具有安神、降低血压、改善睡眠等多种生理功能,可作为生物活性物质广泛应用于食品、医药和饲料等行业,此外还可作为合成2-吡咯烷酮、尼龙-4等化工产品的前体。因此,GABA具有广阔的市场应用前景。
目前,食品级GABA多通过天然产物提取或微生物合成两种方法获得,其中微生物合成因可以达到较高的产生效率和纯度,具有更广阔的应用前景。微生物发酵法制备GABA主要是依靠微生物的谷氨酸脱羧酶***(GAD***)完成的。GAD***主要由谷氨酸脱羧酶GAD和Glu-GABA反向转运蛋白构成,在酸性条件下,Glu-GABA反向转运蛋白将胞外的谷氨酸转运至胞内,在胞内的谷氨酸脱羧酶(GAD)催化下脱去α-羧基,形成GABA,合成后的GABA再被Glu-GABA反向转运蛋白运输至胞外,该过程消耗H+,GABA合成过程中培养体系的pH逐渐升高。
乳酸菌是食品级生产菌株的重要来源,随着人们对食品安全的重视,越来越多的研究者聚焦在利用乳酸菌生产GABA,目前已经发现的可以合成GABA的微生物包括短乳杆菌和植物乳杆菌等。根据已报道的短乳杆菌(14株)基因组分析,13株短乳杆菌具有GAD***,仅有1株无GAD***,说明短乳杆菌具有成为GABA生产的细胞工厂的潜能。
目前公认的高产GABA短乳杆菌是L.brevis NCL912,GABA产量可达103g/L,菌株发酵12h菌体浓度达到最大,但随着底物的添加及产物的生成,菌株的生长受到严重抑制,无法实现菌株连续发酵生产,整个发酵周期为48~60h,生产效率不高;短乳杆菌NPS-QW-145发酵72h,GABA产量仅为25.8g/L;短乳杆菌K203发酵72h,GABA产量为44.4g/L,对于GABA产生菌而言,发酵周期越长,菌株的GABA的合成效率较低。因此,若要获得高效合成GABA的菌株,不仅要求菌株的GABA合成能力强,同时发酵周期也要降低。虽然,有些乳酸菌的GABA合成与生长可以耦联,但其GABA合成效率仍然很低。
因此,需要寻找一株能快速诱导GAD***,产生GABA的乳酸菌,并能长时间在高渗环境中的存活,为其连续发酵合成GABA提供条件,减少发酵时间,使菌株具有高产GABA能力的同时,具有较高的GABA生产效率。(Wu,Q.Shah,N.P.“High gamma-aminobutyric acidproduction from lactic acid bacteria:emphasis on Lactobacillus brevis as afunctional dairy starter”,Critical Review in Food Science and Nutrition,1,1-46,2016.Haixing Li,Yusheng Cao,et al.“Production of gamma-aminobutyric acidby Lactobacillus brevis NCL912 using fed-batch fermentation”Microbial CellFactories,9,1-7,2010.Wu,Q.,Shah,N.P.“Gas release-based prescreening combinedwith reversed-phase HPLC quantitation for efficient selection of high-gamma-aminobutyric acid(GABA)-producing lactic acid bacteria”,Journal of DairyScience,2015,98,790-797.)。
白酒作为中国的传统食品,发酵体系中富含乳酸菌,且乳酸菌菌株可长期存活于白酒酿造体系的高酸(pH为3.5左右)、高酒精度(50-90g/L)的极端环境中,因此,有必要从传统发酵食品(白酒)中筛选具有耐高渗且高效合成GABA的食源性菌株,推进微生物发酵法合成GABA的工业化。
发明内容
针对现有的技术难点及存在的问题,本发明提供了一株具有高效合成GABA能力的短乳杆菌,并将其应用于生物法合成GABA。本发明的短乳杆菌是从白酒酿造体系(酒醅)中分离得到的,进行控酸分批补料发酵42h合成GABA的产量可达132.63g/L,生产效率可达3.16g/L/h。
本发明的第一个目的是提供一株具有高效合成GABA能力的短乳杆菌D17,已于2017年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNO.14385。
所述短乳杆菌,是利用乳酸菌富集培养基(MRS培养基),从白酒酿造体系(酒醅)中分离得到的,经16s rDNA测序鉴定为短乳杆菌(Lactobacillus brevis),菌株编号D17。
本发明的第二个目的是提供含有所述短乳杆菌CGMCC NO.14385菌株的微生物菌剂。
在本发明的一种实施方式中,所述微生物菌剂含有短乳杆菌CGMCC NO.14385菌体的活细胞、冷冻干燥得到的短乳杆菌CGMCC NO.14385干菌体、固定化的短乳杆菌CGMCCNO.14385细胞、短乳杆菌CGMCC NO.14385的液体菌剂、短乳杆菌CGMCC NO.14385的固体菌剂,或者以其他任何形式存在的短乳杆菌CGMCC NO.14385菌株。
在本发明的一种实施方式中,所述微生物菌剂中还含有任何可以应用于食品、饲料、药物或者其制备的任意种属的菌株,比如地衣芽孢杆菌、酿酒酵母、枯草芽孢杆菌等等。
在本发明的一种实施方式中,所述微生物菌剂中还含有任意能用于食品、饲料、药物的载体。
本发明的第三个目的是提供一种生物法合成GABA的方法,是利用本发明的短乳酸菌CGMCC NO.14385菌株进行生产。
在本发明的一种实施方式中,所述方法是以葡萄糖、蔗糖、乳糖或***糖为生长碳源,以谷氨酸或谷氨酸钠为前体合成γ-氨基丁酸。
在本发明的一种实施方式中,所述方法是利用短乳杆菌CGMCC NO.14385菌株进行批次发酵,发酵过程不需要进行酸碱度调节及厌氧控制。在本发明的一种实施方式中,具体是:将短乳杆菌CGMCC NO.14385接种于不同浓度葡萄糖碳源的GYP液体发酵培养基中,添加不高于50g/L的谷氨酸或谷氨酸钠作为GABA合成的底物,其中葡萄糖浓度为10~50g/L,于适合短乳杆菌的培养条件下进行发酵。
在本发明的一种实施方式中,所述方法包括在发酵过程中对发酵体系酸碱度进行控制。
在本发明的一种实施方式中,所述方法是利用短乳杆菌CGMCC NO.14385菌株进行批次补料发酵,发酵过程进行酸碱度调节,不需要进行厌氧控制。在本发明的一种实施方式中,具体是:采用生物反应器,将短乳杆菌CGMCC NO.14385接种于含谷氨酸钠的GYP发酵培养基中,采用5mol/L浓度的硫酸将发酵液的pH控制为5.0,于37℃×100rpm搅拌不通气条件下进行发酵。为避免高浓度谷氨酸钠对菌体生长的抑制,于12~24h间补充谷氨酸钠底物及葡萄糖碳源。优选地,在6h、12h、18h和24h进行谷氨酸钠底物及葡萄糖添加,GABA在发酵42h的浓度为132.63g/L,此时生产效率高达3.16g/L/h。
在本发明的一种实施方式中,所述方法包括,先培养菌体,利用菌体作为全细胞催化剂,在合适的酸碱度转化液中,以谷氨酸或谷氨酸钠作为底物,进行全细胞催化合成γ-氨基丁酸。
在本发明的一种实施方式中,所述方法是先培养获得短乳杆菌CGMCC NO.14385细胞,再利用全细胞转化法。在本发明的一种实施方式中,具体是:挑取短乳杆菌CGMCCNO.14385接于GYP含10g/L的谷氨酸钠的GYP液体发酵培养基中,37℃×200rpm培养12h,收集菌体。取湿菌体,放入30~50g/L谷氨酸钠的0.2mol/LpH4.6的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液中,于30℃×200rpm条件下反应1.5~5h。优选地,转化反应体系为40mL,初始谷氨酸钠浓度30g/L,加入1g湿菌体,转化得GABA 14.5g/L,转化效率为9.7g/L/h/g湿菌。
本发明的第四个目的是提供一种含GABA干菌粉的制备方法,包括利用本发明的短乳酸菌CGMCC NO.14385菌株。
在本发明的一种实施方式中,所述方法包括:取出短乳杆菌菌株CGMCC NO.14385发酵结束后的发酵液(GABA含量不低于20~25g/L),采用60~65℃浓缩1~3h,总固形物含量达到30~40%后,经喷雾干燥,即得所述含有GABA的干菌粉。喷雾干燥条件为:进料温度30~40℃,进口温度140~150℃,出口温度50~60℃,进口气压0.25~0.3MPa,离心转盘转速19000~20000r/min,干燥时间为5~15s。获得产品出料水分含量≤7%,冷却后密封。
本发明还提供所述短乳杆菌CGMCC NO.14385在食品、制备药物或者畜禽养殖领域的应用。
本发明的有益效果:
本发明的短乳杆菌CGMCC NO.14385筛选自清香型白酒酿造体系的酒醅中,具有耐受清香型白酒制备过程中的高酸(pH为3.5左右)、高酒精度(50-90g/L)的酿造环境的特性,可在极端环境中长期保持生长,制备的高活力菌剂可应用于食品、医药、禽畜养殖等行业;菌株的GAD***能快速受到谷氨酸钠诱导,菌株的GABA合成与菌体生长同步进行,并在高浓度底物、产物及硫酸的环境中保持活力,为连续培养菌株产生GABA提供依据,可提高GABA产量的同时缩短发酵周期,进一步提升菌株的GABA的生产效率。
生物材料保藏
短乳杆菌D17,分类学命名为短乳杆菌Lactobacillus brevis,于2017年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.14385。
附图说明
图1短乳杆菌D17的菌落形态特征图;
图2短乳杆菌D17的菌体形态特征图;
图3谷氨酸钠标准品和GABA标准品高效液相色谱检测图;
图4筛选菌株发酵液GABA高效液相色谱检测图;
图5短乳杆菌D17菌株GABA合成与生长耦联;
图6短乳杆菌D17分批补料发酵高效合成GABA的菌株生长、底物利用和GABA产生曲线。
具体实施方式
实施例1:短乳杆菌的筛选
称取5g清香型白酒酒醅原料,加入50mL无菌生理盐水进行震荡。吸取菌悬液,以无菌生理盐水进行10倍梯度稀释,取100-200μL涂布于含CaCO3和谷氨酸钠的MC培养基(胰蛋白胨0.5%,牛肉膏0.5%,酵母提取物0.5%,葡萄糖2%,乳糖2%,碳酸钙1%,谷氨酸钠1%,琼脂2%,均为质量-体积分数,pH6.8)或MRS培养基(Sigma-Aldrich购买)平板上,于37℃厌氧培养48h,当出现乳白色或浅黄色菌落,且其周围出现水解圈者初步判定为乳酸菌。挑取单菌落,进行分离、纯化后,接种入分装有MRS液体培养基的试管中,过夜培养后接种于含有谷氨酸钠的GYP液体发酵培养基中,以HPLC法检测发酵上清液中的GABA含量,对获得的GABA产生菌株进行保菌。结果证明,从白酒酿造体系中筛选出65株乳酸菌,发酵48h后,测定发酵液中的GABA浓度,其中9株乳酸菌GABA产量大于5g/L的菌株。将GABA菌株接种于GYP液体发酵培养基中,每2h取样,采用HPLC分析发酵上清中的GABA与谷氨酸钠底物含量,筛选出发酵时间短,可高效合成GABA的乳酸菌,筛选获得编号为D17的短乳杆菌菌株,发酵培养基中起始谷氨酸钠浓度10g/L,发酵12h,可得到6.5g/L GABA,生产效率为0.542g/L/h。
得到的短乳杆菌D17,其菌落形态和菌体形态如图1、图2所示。短乳杆菌D17已于2017年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCCNO.14385。
实施例2:利用短乳杆菌D17菌株进行不控酸合成GABA
GYP培养基:葡萄糖1%,酵母膏1%,蛋白胨0.5%,乙酸钠0.2%,硫酸镁0.02%,硫酸锰0.01%,硫酸亚铁0.01%,氯化钠0.01%,均为质量-体积分数。固体培养基中添加2%浓度的琼脂,发酵培养基中添加不同浓度谷氨酸钠。
短乳杆菌为氧气耐受型乳酸菌,其在好养条件下的生长优于厌氧培养,因此推荐在好养条件下培养短乳杆菌D17菌株。
在无菌条件下,将-80℃保存的短乳杆菌D17菌株,划线于GYP固体平板上,37℃静置培养,待单菌落长出后从活化的GYP固体平板上挑取短乳杆菌D17单菌落,接种于GYP种子培养基中,37℃静置培养24h。取种子培养液,按10%的接种量接种于新的GYP种子培养基中,37℃静置培养12h后,培养液作为发酵种子。在250mL三角瓶中装入100mL的添加10~50g/L葡萄糖碳源和50g/L谷氨酸钠的GYP发酵培养基,取培养12h的发酵种子按10%的接种量接种,于37℃×200rpm培养48h。发酵上清液经高效液相色谱检测GABA含量。
实验结果如图5所示,短乳杆菌D17的GABA合成与生长耦联。采用30g/L葡萄糖作为碳源,短乳杆菌合成GABA产量为27.6g/L,生产效率为0.863g/L/h。
实施例3:利用短乳杆菌D17菌株进行控酸分批补料发酵合成GABA
将斜面上活化的菌株D17,接种于GYP液体培养基中,37℃培养24h,制成一级种子培养液,将一级种子培养液按10%接种量,接于pH为5含74.8g/L谷氨酸钠的GYP发酵培养基中,使用生物反应器控制温度37℃,200rpm搅拌,以5mol/L硫酸控制pH为5.0,在6h、12h、18h、24h时各补料(谷氨酸钠)37.3g、74.8g、37.3g、37.3g;同时在12h、18h、24h时各补加碳源(葡萄糖)5g、7.5g、15g,发酵48h。采用HPLC分析检测发酵上清液的GABA含量。
结果如图6所示,短乳杆菌D17菌株的GABA合成与生长耦联,在整个发酵过程中,菌株始终具有活力,菌体浓度逐步增加,说明菌株可在高浓度的底物、产物及酸性环境中保持高效合成GABA的能力,在发酵42h时GABA的的浓度为132.63g/L,生产效率高达3.16g/L/h。
实施例4:短乳杆菌D17菌株采用先培菌再全细胞转化法合成GABA
从活化的GYP固体斜面培养基上挑取短乳杆菌D17单菌落,接种于GYP液体培养基中,37℃静置培养24h,制成一级种子液,将一级种子液按10%的接种量接种于新鲜的GYP液体培养基中,37℃静置培养12h后,制成发酵种子。1L的摇瓶中装入500mL含1%谷氨酸钠的GYP液体培养基,取培养12h的发酵种子,按10%的接种量接种,37℃×200rpm,培养12h。取出发酵液,于4℃×6000rpm离心10min,收集菌体。将1g湿菌体重悬于含有30g/L谷氨酸钠的0.2M pH4.6的Na2HPO4-柠檬酸缓冲液40mL,于30℃×200rpm条件下反应1.5h。最终转化液中的GABA含量为14.448g/L,生产效率为9.7g/L/h/g湿菌体。
实施例5:利用短乳杆菌D17制备含GABA的干菌粉
对短乳杆菌D17发酵结束后的发酵液进行浓缩,浓缩条件为60℃,1.5h,浓缩液进行喷雾干燥加工,进料浓度为40%,进料温度35℃,进口温度140℃,出口温度55℃,进口气压0.3MPa,离心转盘转速保藏20000r/min。
干燥后含GABA的干菌粉收率为:15%,水分含量5%。活菌数达6.0×109cfu/g,GABA含量≥20%。
虽然本发明已以较佳实施例公开如上,但其并非用以限定本发明,任何熟悉此技术的人,在不脱离本发明的精神和范围内,都可做各种的改动与修饰,因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (10)

1.一株合成γ-氨基丁酸的短乳杆菌(Lactobacillus brevis),于2017年7月6日保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心,保藏编号为CGMCC NO.14385。
2.一种微生物菌剂,其特征在于,所述微生物菌剂含有短乳杆菌CGMCC NO.14385菌体的活细胞、冷冻干燥得到的短乳杆菌CGMCC NO.14385干菌体、固定化的短乳杆菌CGMCCNO.14385细胞、短乳杆菌CGMCC NO.14385的液体菌剂、短乳杆菌CGMCC NO.14385的固体菌剂,或者以其他任何形式存在的短乳杆菌CGMCC NO.14385菌株。
3.根据权利要求2所述的微生物菌剂,其特征在于,所述微生物菌剂中还含有任何能够应用于食品、饲料、药物或者其制备的任意种属的菌。
4.根据权利要求2所述的微生物菌剂,其特征在于,所述微生物菌剂中还含有任意能用于食品、饲料或药物的载体。
5.一种制备γ-氨基丁酸的方法,其特征在于,所述方法是利用权利要求1所述的短乳杆菌。
6.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述方法是以葡萄糖、蔗糖、乳糖或***糖为生长碳源,以谷氨酸或谷氨酸钠为前体合成γ-氨基丁酸。
7.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述方法包括在发酵过程中对发酵体系酸碱度进行控制。
8.根据权利要求5所述的方法,其特征在于,所述方法包括,先培养菌体,利用菌体作为全细胞催化剂,在合适的酸碱度转化液中,以谷氨酸或谷氨酸钠作为底物,进行全细胞催化合成γ-氨基丁酸。
9.一种含有权利要求1菌株的菌剂的应用,其特征在于,所述应用包括将短乳杆菌CGMCC NO.14385的干粉加入饲料中。
10.权利要求1所述短乳杆菌在食品、制备药物或者畜禽养殖领域的应用。
CN201711275417.9A 2017-12-06 2017-12-06 一株源自白酒酿造体系的高效合成γ-氨基丁酸的短乳杆菌 Active CN108034599B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711275417.9A CN108034599B (zh) 2017-12-06 2017-12-06 一株源自白酒酿造体系的高效合成γ-氨基丁酸的短乳杆菌

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201711275417.9A CN108034599B (zh) 2017-12-06 2017-12-06 一株源自白酒酿造体系的高效合成γ-氨基丁酸的短乳杆菌

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN108034599A true CN108034599A (zh) 2018-05-15
CN108034599B CN108034599B (zh) 2019-09-17

Family

ID=62095416

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201711275417.9A Active CN108034599B (zh) 2017-12-06 2017-12-06 一株源自白酒酿造体系的高效合成γ-氨基丁酸的短乳杆菌

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN108034599B (zh)

Cited By (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109777748A (zh) * 2018-11-27 2019-05-21 南昌大学 一株高产γ-氨基丁酸的短乳杆菌CD0817
CN111471724A (zh) * 2020-05-09 2020-07-31 济南大学 一种食品级γ-氨基丁酸全细胞转化生产的方法
CN111778191A (zh) * 2020-07-17 2020-10-16 鲁东大学 短乳杆菌菌株及其培养方法和用途
CN112300955A (zh) * 2019-07-29 2021-02-02 台湾中油股份有限公司 一种γ-胺基丁酸高产乳酸菌株及应用
CN113444664A (zh) * 2021-07-01 2021-09-28 陕西广播电视大学(陕西工商职业学院) 一株产γ-氨基丁酸短乳杆菌及其应用
JP2022535409A (ja) * 2019-06-06 2022-08-08 江南大学 ラクトバチルスブレビスのγ-アミノ酪酸の合成能を向上させる方法及びその使用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101724587A (zh) * 2009-09-10 2010-06-09 浙江师范大学 高产γ-氨基丁酸的短乳杆菌L2菌株及其筛选方法和应用
CN102925504A (zh) * 2012-08-23 2013-02-13 浙江师范大学 微生物发酵合成γ-氨基丁酸的方法及发酵培养基
CN103966139A (zh) * 2014-05-15 2014-08-06 四川省农业科学院农产品加工研究所 四川泡菜中一种高产γ-氨基丁酸的短乳杆菌
CN105087699A (zh) * 2015-09-28 2015-11-25 天津科技大学 一种利用生物转化法制备γ-氨基丁酸的方法
CN105907672A (zh) * 2016-06-07 2016-08-31 广西多得乐生物科技有限公司 γ-氨基丁酸菌株及其筛选和制备酸菜的方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101724587A (zh) * 2009-09-10 2010-06-09 浙江师范大学 高产γ-氨基丁酸的短乳杆菌L2菌株及其筛选方法和应用
CN102925504A (zh) * 2012-08-23 2013-02-13 浙江师范大学 微生物发酵合成γ-氨基丁酸的方法及发酵培养基
CN103966139A (zh) * 2014-05-15 2014-08-06 四川省农业科学院农产品加工研究所 四川泡菜中一种高产γ-氨基丁酸的短乳杆菌
CN105087699A (zh) * 2015-09-28 2015-11-25 天津科技大学 一种利用生物转化法制备γ-氨基丁酸的方法
CN105907672A (zh) * 2016-06-07 2016-08-31 广西多得乐生物科技有限公司 γ-氨基丁酸菌株及其筛选和制备酸菜的方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
李理 等: "产γ-氨基丁酸乳酸菌及其应用", 《中国乳品工业》 *
赵玉娟 等: "一株高产γ-氨基丁酸短乳杆菌的筛选、鉴定及发酵优化", 《吉林农业科学》 *

Cited By (8)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109777748A (zh) * 2018-11-27 2019-05-21 南昌大学 一株高产γ-氨基丁酸的短乳杆菌CD0817
JP2022535409A (ja) * 2019-06-06 2022-08-08 江南大学 ラクトバチルスブレビスのγ-アミノ酪酸の合成能を向上させる方法及びその使用
CN112300955A (zh) * 2019-07-29 2021-02-02 台湾中油股份有限公司 一种γ-胺基丁酸高产乳酸菌株及应用
CN111471724A (zh) * 2020-05-09 2020-07-31 济南大学 一种食品级γ-氨基丁酸全细胞转化生产的方法
CN111778191A (zh) * 2020-07-17 2020-10-16 鲁东大学 短乳杆菌菌株及其培养方法和用途
CN111778191B (zh) * 2020-07-17 2021-05-14 鲁东大学 短乳杆菌菌株及其培养方法和用途
CN113444664A (zh) * 2021-07-01 2021-09-28 陕西广播电视大学(陕西工商职业学院) 一株产γ-氨基丁酸短乳杆菌及其应用
CN113444664B (zh) * 2021-07-01 2023-12-12 陕西广播电视大学(陕西工商职业学院) 一株产γ-氨基丁酸短乳杆菌及其应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN108034599B (zh) 2019-09-17

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN108034599B (zh) 一株源自白酒酿造体系的高效合成γ-氨基丁酸的短乳杆菌
CN104996722B (zh) 一种多菌种两步联合发酵饲料的方法
CN102174449B (zh) 一种高产γ-氨基丁酸的生产方法及应用
CN102559552B (zh) 一种高产γ-氨基丁酸的生产方法及应用
CN103173371B (zh) 酿酒酵母与嗜酸乳杆菌的饲料用复合微生物制剂的生产
CN104087638A (zh) 一种利用枯草芽孢杆菌发酵米渣制备抗氧化肽的方法
Paulová et al. Advanced fermentation processes
CN102925504B (zh) 微生物发酵合成γ-氨基丁酸的方法及发酵培养基
CN102352329B (zh) 一种微生物菌粉的生产方法
CN105316257B (zh) 一种解木糖赖氨酸芽孢杆菌及其制备α-酮酸的方法
CN103805660B (zh) 一种利用廉价原料生产乳酸链球菌素的方法
CN102127515B (zh) 一株高产l-脯氨酸短波单胞杆菌(jnpp-1)的筛选及应用
CN102389024A (zh) 一种利用花生粕厌氧发酵生产饲用花生肽的方法
Furuta et al. Utilization of fermented barley extract obtained from a by-product of barley shochu for nisin production
CN114958694B (zh) 一种联产共轭亚油酸和γ-氨基丁酸的鼠李糖乳杆菌及应用
CN109943511A (zh) 一株产l-缬氨酸的黄色短杆菌及其应用
CN107201383A (zh) 一种可提高d-乳酸生产强度的d-乳酸生产方法
CN100526470C (zh) 一种功能性甜味剂d-塔格糖的制备方法
CN103667107B (zh) 一种产l-乳酸的屎肠球菌菌株
CN102286411A (zh) 植物乳杆菌及其在发酵白菜外包叶中的应用
CN105154360B (zh) 一种***丛毛单胞菌hy-08d的培养方法
CN107118885A (zh) 一种利用耐乙醇片球菌生产含gaba发酵酒的方法
CN107988288A (zh) 一种高密度发酵生产丙酸杆菌细菌素的方法
CN109161570B (zh) 一种提高发酵产n-乙酰神经氨酸的方法及发酵液
CN107058449A (zh) 一种餐厨垃圾解淀粉芽孢杆菌与鼠李糖乳杆菌混合发酵产乳酸的方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant
EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract

Application publication date: 20180515

Assignee: Guangdong Jianlibao Co.,Ltd.

Assignor: Jiangnan University

Contract record no.: X2024980001407

Denomination of invention: Efficient synthesis of a strain from Baijiu brewing system g- Lactobacillus brevis for aminobutyric acid

Granted publication date: 20190917

License type: Common License

Record date: 20240125

EE01 Entry into force of recordation of patent licensing contract