CN104996722B - 一种多菌种两步联合发酵饲料的方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种多菌种两步联合发酵饲料的方法，属于饲料技术领域。本发明以玉米粉、棕榈粕、豆粕、麸皮、次粉为原料，以黑根霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、啤酒酵母菌为发酵菌种，经过好氧发酵和厌氧发酵两个步骤获得的发酵饲料。利用本方法发酵的饲料蛋白质含量高达30％～34％，比原料提高了45％～62％，α‑淀粉酶含量高达90～110U/g，酸性蛋白酶活力高达110～130U/g，是富蛋白质、富益生菌以及高酶活性的饲料。本发明方法具有可操作性强，适用于大规模工业化生产等特点，具有良好的市场前景。

Description

一种多菌种两步联合发酵饲料的方法

技术领域

本发明涉及一种多菌种两步联合发酵饲料的方法，属于饲料技术领域。

背景技术

近年来，发酵饲料成为研究热点，多种发酵饲料的研究得到了一定的发展。发酵饲料是利用微生物的作用，将饲料原料转化为微生物菌体蛋白、生物活性小肽类氨基酸、微生物活性益生菌及复合酶制剂为一体的生物发酵饲料。发酵饲料不但可以弥补常规饲料中容易缺乏的氨基酸，而且能使粗饲料原料成分降解，提高饲料转化率，降解豆粕中的抗原蛋白，除此以外，发酵饲料还可以降低猪的腹泻率以及显著降低猪背膘厚度，乳酸菌发酵饲料还有降低猪舍氨含量的作用。

发酵饲料从发酵原料上划分可以分为青贮饲料发酵、精饲料发酵、农产品加工下脚料发酵等，从发酵基质的物理状态行分为固体发酵、液体发酵和半固体发酵。以玉米粉、棕粕等为主要原料的固体发酵饲料相对于以果蔬渣、大豆乳清液、食堂泔脚、青贮饲料等，产品质量更加稳定、更合适于贮藏和运输，有利于实现商业化大规模生产，主要包括以下几种生产方法：(1)只有厌氧发酵阶段的发酵方法，菌种与饲料混合后，直接封袋进行厌氧培养，这种直接装袋发酵的方法因氧气不足，好氧菌生长有限，导致原料中水解酶活性低，不能水解饲料中的大分子物质为小分子物质，进而不能为厌氧发酵的益生菌提供充足的养分。最终获得的饲料中蛋白质含量提高不显著，水解酶活性低，益生菌菌落总数低。(2)好氧加厌氧两段式发酵方法，通过固体好氧和固体厌氧两种方式相结合的发酵方法来使所生产的发酵饲料在产生有机酸和乳酸菌的同时，含有高比例的经过降解的小分子蛋白，以及更低的纤维素含量。

有些发酵饲料只采取细菌、酵母菌和乳酸菌进行厌氧发酵，该种组合需要外添加酶制剂或外添加单糖来为菌群的前期生长提供营养。有些只采取霉菌和酵母菌或枯草芽孢杆菌等进行好氧发酵而无厌氧发酵，该种发酵在提高蛋白质含量上对饲料有显著改善。

本发明以棕榈粕、豆粕、玉米等为原料，采用霉菌、酵母菌、细菌以及乳酸菌联合发酵，发酵过程分好养和厌氧两个阶段进行。在好氧发酵阶段，霉菌、枯草芽孢杆菌旺盛生长，产生淀粉酶、蛋白酶、纤维素酶等多种生物酶，水解原料中的淀粉、蛋白质、纤维素等大分子物质为小分子营养物质，为酵母菌、细菌以及乳酸菌的生长提供营养物质；在厌氧阶段，霉菌溶解，细胞内的水解酶释放到饲料中，进一步水解饲料中的大分子营养物质为小分子营养物质，枯草芽孢杆菌、酵母菌和乳酸菌继续生长，生成的乳酸及厌氧条件能够较好的抑制有害细菌的生长、保证益生菌的活性，最终获得富蛋白质、富益生菌以及高酶活性的芳香适口的饲料。

发明内容

本发明的目的是提供一种多菌种两步联合发酵饲料的方法，目的是通过多种微生物的好氧、厌氧两步发酵，获得富蛋白质、富益生菌以及高酶活性的芳香适口的饲料。

本发明技术方案主要包括以下步骤：

(1)活化菌种，并分别制备根霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、啤酒酵母的纯培养物；

(2)发酵原料预处理，包括将原料粉碎、拌水混匀后灭菌；

(3)好氧发酵：接种根霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、啤酒酵母种子培养物到发酵原料中，按质量比例接种，每100份灭菌后物料，接种根霉菌麸皮种子纯培养物0.2～0.7份，米曲霉麸皮种子纯培养物0.2～0.7份，枯草芽孢杆菌纯培养物0.8～1.2份，植物乳杆菌纯培养物0.5～1.5份，啤酒酵母纯培养物2～8份；接种后拌匀，置于28～30℃保湿好氧培养36～48h，温度升高后置于37℃恒温培养箱通风培养24h，控制相对湿度85％～95％；

(4)厌氧发酵：好氧阶段结束后，打散、拌匀发酵饲料，装入单向排气密封袋，置于室温下厌氧培养4～8d。

在本发明的一种实施方式中，所述发酵原料预处理包括：(1)发酵原料的粉碎：按质量比取玉米10～15份，麸皮10～15份，豆粕15～25份，棕榈粕35～45份，次粉10～15份，尿素1～2份，葡萄糖0.5～1份，混匀、粉碎，过筛，细度为20～40目；(2)发酵原料的拌水，料水比为1:0.6～1.0，拌匀，装盘；(3)发酵原料的灭菌：对发酵原料进行高压蒸汽灭菌，灭菌的条件是0.1Mpa～0.2Mpa，15～30min。

在本发明的一种实施方式中，每100份灭菌后物料，接种根霉菌麸皮种子纯培养物0.2～0.7份，米曲霉麸皮种子纯培养物0.2～0.7份，枯草芽孢杆菌纯培养物的接种量为1份，植物乳杆菌纯培养物的接种量为1份，啤酒酵母纯培养物的接种量为6份。

在本发明的一种实施方式中，根霉的活化，是接种根霉菌的孢子至马铃薯葡萄糖斜面试管培养基上，28～30℃恒温培养24～48h，挑取新生菌丝体，转接到马铃薯葡萄糖斜面试管培养基上，28～30℃恒温培养24～48h。

在本发明的一种实施方式中，米曲霉的活化，是接种米曲霉的孢子至马铃薯葡萄糖斜面试管培养基上，28～30℃恒温培养24～48h，挑取新生菌丝体，转接到马铃薯葡萄糖斜面试管培养基上，28～30℃恒温培养24～48h。

在本发明的一种实施方式中，枯草芽孢杆菌的活化，是将枯草芽孢杆菌接种至LB斜面试管培养基上，37℃恒温培养20～24h，再转接到LB斜面试管培养基上，37℃恒温培养20～24h。

在本发明的一种实施方式中，植物乳杆菌的活化，是将植物乳杆菌接种至MRS液体培养基上，37℃恒温培养20～24h，再转接一次到MRS液体培养基上，37℃恒温培养20～24h。

在本发明的一种实施方式中，啤酒酵母的活化，是将啤酒酵母，接种至YPD液体培养基上，37℃恒温培养20～24h，再转接一次到YPD液体培养基上，37℃恒温培养20～24h。

在本发明的一种实施方式中，根霉种子纯培养物的制备：接种活化后的根霉菌丝体到豆粕麸皮培养基固体培养基上，28～30℃恒温培养3～5d。

在本发明的一种实施方式中，米曲霉种子纯培养的制备：接种活化后的米曲霉菌丝体到豆粕麸皮培养基固体培养基上，28～30℃恒温培养3～5d。

在本发明的一种实施方式中，枯草芽孢杆菌种子纯培养的制备：接种活化后的枯草芽孢杆菌至50ml LB种子培养液，37℃恒温振荡培养10～18h。

在本发明的一种实施方式中，植物乳杆菌种子纯培养的制备：转接1ml～2ml活化后的植物乳杆菌液体培养液至50ml MRS种子培养液，37℃静置培养10～18h。

在本发明的一种实施方式中，啤酒酵母种子纯培养的制备：转接1ml～2ml活化后的啤酒酵母液体培养液至50ml YPD种子培养液，28～30℃静置培养12～18h。

本发明相较于传统制造方法，具有以下优点：

1、大幅度提高了饲料中淀粉酶和蛋白酶的活性。多菌种两步法发酵饲料的好氧培养过程，利于霉菌和枯草芽孢杆菌的旺盛生长繁殖，产生丰富的水解酶系，尤其是淀粉酶和蛋白酶。解决了仅利用酵母菌和细菌发酵时需要外添加酶制剂的问题。发酵过程中α-淀粉酶活性最高到达160U/g以上，酸性蛋白酶活力最高到140U/g以上；厌氧阶段结束时，α-淀粉酶活性仍然可以保持在90～110U/g，酸性蛋白酶活力保持在110～130U/g。这些水解酶类可以水解原料中的大分子物质为小分子营养物。

2、大幅度提高了饲料蛋白质的含量。利用本方法发酵的饲料蛋白质含量高达30％～34％，比原料提高了45％～62％。好氧培养过程中产生多种水解酶类，水解原料中的大分子物质为小分子营养物，为酵母菌、枯草芽孢杆菌、乳酸菌的生长连续不断的提供营养，获得大量菌体蛋白。这解决了仅用细菌和酵母厌氧发酵饲料中因水解酶不足而导致蛋白质含量增加不大的问题。

3、大幅度提高了饲料中益生菌的含量。通过好氧阶段和厌氧阶段的培养，米曲霉、根霉、啤酒酵母、枯草芽孢杆菌和乳酸菌大量的生长繁殖，最终获得的饲料中含有丰富的益生菌群。发酵结束后，乳酸菌为5.0×10¹⁰～5.0×10¹¹cfu/g，枯草芽孢杆菌为2.0×10⁹cfu/g～2.0×10¹⁰cfu/g，酵母菌为1.5×10⁴～2.0×10³cfu/g。

本发明方法具有可操作性强，适用于大规模工业化生产等特点，具有良好的市场前景。

附图说明

图1饲料中粗蛋白质的含量

图2饲料中α-淀粉酶活性

图3饲料中酸性蛋白酶活性

图4饲料中乳酸菌菌落总数对数值

具体实施方式

蛋白质的含量按照国家标准GB5009.5-2010方法测定。

α—淀粉酶的含量按照GB/T5521-2008方法测定。

乳酸菌菌落计数按照GB4789.35-2010方法测定。

豆粕麸皮培养基固体培养基组成为豆粕粉35～45g，麸皮30～40g，水40～50mL，装料厚度1～2cm。

马铃薯葡萄糖琼脂培养基是按下列方法配制而成的：马铃薯200份，加入500mL水煮沸30min，过滤，取滤液，煮沸，加入20份琼脂条，搅拌至完全溶解，加入葡萄糖20份，补水到1000份，115～121℃湿热灭菌20min。

LB培养基是按下列重量份的试剂配制而成的：牛肉膏3份，蛋白胨10份，氯化钠5份，去离子水1000份，混匀试剂后调pH至7.0～7.2，115～121℃湿热灭菌20min。

YPD培养基是按下列重量份的试剂配制而成的：酵母粉10份，蛋白胨20份，葡萄糖20份，去离子水1000份，混匀，115～121℃湿热灭菌20min。

MRS肉汤培养基是按下列重量份的试剂配制而成的：蛋白胨：10份；牛肉膏：10份；酵母提取物：5份；葡萄糖：20份；磷酸氢二钾：2份；柠檬酸氢二铵：2份；无水乙酸钠：5份；硫酸镁：0.58份；硫酸锰：0.25份；吐温80：1份；去离子水：1000份；混匀试剂后调pH至6.2～6.4，115～121℃湿热灭菌20min。

实施例1两菌种好氧、厌氧两步发酵饲料

具体实施步骤如下：

A.种子的培养

a.枯草芽孢杆菌种子纯培养的制备:转接活化后的枯草芽孢杆菌液体培养液至LB种子培养液，37℃恒温振荡培养10～18h。

b.植物乳杆菌种子纯培养的制备：转接活化后的植物乳杆菌液体培养液至MRS种子培

养液，37℃静置培养10～18h。

B.发酵原料的粉碎

取玉米10～15份，麸皮10～15份，豆粕15～25份，棕榈粕35～45份，次粉10～15份，尿素1～2份，葡萄糖0.5～1份，混匀、粉碎，过筛，细度为20～40目。

D.发酵原料的拌水

料水比为1:0.6～1.0，拌匀，装盘。

E.发酵原料的灭菌

对发酵原料进行高压蒸汽灭菌，灭菌的条件是0.1Mpa～0.2Mpa，15～30min。

F.好氧发酵

接种枯草芽孢杆菌种子培养物到发酵原料中，接种比例枯草芽孢杆菌：原料的质量比为1.5～2.5:100，接种后拌匀，置于28～30℃培养箱保湿好氧培养，温度升高后置于37℃恒温培养箱通风培养，控制相对湿度85％～95％。

好氧发酵2d结束后，接种植物乳杆菌种子培养物，接种比例为植物乳杆菌：原料的质量比为4～6：100，拌匀，装单向排气密封袋，置于室温下厌氧培养6d。测定饲料中蛋白质的含量、α—淀粉酶的含量、酸性蛋白酶的含量以及乳酸菌的活菌数。

实施例2多菌种厌氧发酵饲料

具体实施步骤如下：

A.种子液的制备

a.枯草芽孢杆菌种子纯培养的制备:转接1ml～2ml活化后的枯草芽孢杆菌液体培养液至50mlLB种子培养液，37℃恒温振荡培养10～18h。

b.植物乳杆菌种子纯培养的制备：转接1ml～2ml活化后的植物乳杆菌液体培养液至50mlMRS种子培养液，37℃静置培养10～18h。

c.啤酒酵母种子纯培养的制备：转接1ml～2ml活化后的啤酒酵母液体培养液至50mlYPD种子培养液，28～30℃静置培养12～18h。

B.发酵原料的粉碎

取玉米10～15份，麸皮10～15份，豆粕15～25份，棕榈粕35～45份，次粉10～15份，尿素1～2份，葡萄糖0.5～1份，混匀、粉碎，过筛，细度为20～40目。

C.发酵原料的拌水

料水比为1:0.6～1.0，拌匀，装盘。

D.发酵原料的灭菌

对发酵原料进行高压蒸汽灭菌，灭菌的条件是0.1Mpa～0.2Mpa，15～30min。

E.厌氧发酵

接种枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、啤酒酵母种子培养物到发酵原料中，接种质量比例如下，枯草芽孢杆菌：原料0.5～2:100，植物乳杆菌：原料0.5～2:100：啤酒酵母：原料2～8：100。接种后拌匀，装单向排气密封袋，厌氧发酵。发酵6d后测定饲料中蛋白质的含量、α—淀粉酶的含量、酸性蛋白酶的含量以及乳酸菌的活菌数。

实施例3本发明制作饲料的方法

具体实施步骤如下：

A.菌种的活化

a.根霉的活化：从保存于0-4℃冰箱的试管斜面上挑取根霉的孢子，接种至马铃薯葡萄糖斜面试管培养基上，28～30℃恒温培养24～48h，挑取新生菌丝体，转接到马铃薯葡萄糖斜面试管培养基上，28～30℃恒温培养24～48h。

b.米曲霉的活化：从保存于0-4℃冰箱的试管斜面上挑取米曲霉的孢子，接种至马铃薯葡萄糖斜面试管培养基上，28～30℃恒温培养24～48h，挑取新生菌丝体，转接到马铃薯葡萄糖斜面试管培养基上，28～30℃恒温培养24～48h。

c.枯草芽孢杆菌的活化：从0—4℃冰箱的试管斜面挑取一环枯草芽孢杆菌，接种至LB斜面试管培养基上，37℃恒温培养20～24h，再转接到LB斜面试管培养基上，37℃恒温培养20～24h。

d.植物乳杆菌的活化：从0—4℃冰箱的试管斜面挑取一环植物乳杆菌，接种至MRS液体培养基上，37℃恒温培养20～24h，再转接一次到MRS液体培养基上，37℃恒温培养20～24h。

e.啤酒酵母的活化：从0～4℃冰箱的试管斜面挑取一环啤酒酵母，接种至YPD液体培养基上，37℃恒温培养20～24h，再转接一次到YPD液体培养基上，37℃恒温培养20～24h。

B.菌种纯培养的制备

a.根霉种子纯培养的制备：接种活化后的根霉菌丝体到豆粕麸皮培养基固体培养基上，28～30℃恒温培养3～5d。

b.米曲霉种子纯培养的制备：接种活化后的根霉菌丝体到豆粕麸皮培养基固体培养基上，28～30℃恒温培养3～5d。

c.枯草芽孢杆菌种子纯培养的制备:转接1ml～2ml活化后的啤酒酵母液体培养液至50mlLB种子培养液，37℃恒温振荡培养10～18h。

d.植物乳杆菌种子纯培养的制备：转接1ml～2ml活化后的啤酒酵母液体培养液至50mlMRS种子培养液，37℃静置培养10～18h。

e.啤酒酵母种子纯培养的制备：转接1ml～2ml活化后的啤酒酵母液体培养液至50mlYPD种子培养液，28～30℃静置培养12～18h。

C.发酵原料的粉碎

取玉米10～15份，麸皮10～15份，豆粕15～25份，棕榈粕35～45份，次粉10～15份，尿素1～2份，葡萄糖0.5～1份，混匀、粉碎，过筛，细度为20～40目。

D.发酵原料的拌水

料水比为1:0.6～1.0，拌匀，装盘。

E.发酵原料的灭菌

对发酵原料进行高压蒸汽灭菌，灭菌的条件是0.1Mpa～0.2Mpa，15～30min。

F.好氧发酵

接种根霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、啤酒酵母种子培养物到发酵原料中，接种质量比例如下，根霉菌：原料0.25～1.5:100，米曲霉：原料0.25～1.5：100，枯草芽孢杆菌：原料0.5～2:100，植物乳杆菌：原料0.5～2:100：啤酒酵母：原料2～8：100。接种后拌匀，置于28～30℃培养箱保湿好氧培养48h，温度升高后置于37℃恒温培养箱通风培养，控制相对湿度85％～95％。

G.厌氧发酵

好氧阶段结束后，打散、拌匀发酵饲料，装单向排气密封袋，置于室温下厌氧培养。

厌氧发酵6d后，测定饲料中蛋白质的含量、α—淀粉酶的含量、酸性蛋白酶的含量及乳酸菌的活菌数。

实施例4外加酶制剂厌氧发酵饲料法

具体实施步骤如下：

A.种子液的制备

a.枯草芽孢杆菌种子纯培养的制备:转接1ml～2ml活化后的枯草芽孢杆菌液体培养液至50mlLB种子培养液，37℃恒温振荡培养10～18h。

b.植物乳杆菌种子纯培养的制备：转接1ml～2ml活化后的植物乳杆菌液体培养液至50mlMRS种子培养液，37℃静置培养10～18h。

c.啤酒酵母种子纯培养的制备：转接1ml～2ml活化后的啤酒酵母液体培养液至50mlYPD种子培养液，28～30℃静置培养12～18h。

B.发酵原料的粉碎

取玉米10～15份，麸皮10～15份，豆粕15～25份，棕榈粕35～45份，次粉10～15份，尿素1～2份，葡萄糖0.5～1份，混匀、粉碎，过筛，细度为20～40目。

C.发酵原料的拌水

料水比为1:0.6～1.0，拌匀，装盘。

D.发酵原料的灭菌

对发酵原料进行高压蒸汽灭菌，灭菌的条件是0.1Mpa～0.2Mpa，15～30min。

E.接种

接种枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、啤酒酵母种子培养物到发酵原料中，接种质量比例如下，枯草芽孢杆菌：原料0.5～2:100，植物乳杆菌：原料0.5～2:100：啤酒酵母：原料2～8：100。

F.外加酶制剂

接种后的发酵饲料接种α—淀粉酶100U/g，酸性蛋白酶100U/g，拌匀，装入单向排气密封袋，室温下发酵。

发酵6d后，测定饲料中粗蛋白质的含量、α—淀粉酶的含量、酸性蛋白酶的含量以及酵母菌、乳酸菌的活菌数。

以上各例中发酵原料种类及配比相同，原料蛋白质含量为20.11％(以绝干物料计)，α—淀粉酶、酸性蛋白酶含量及乳酸菌的活菌数皆为0。

对实施例1、实施例2、实施例3、实施例4中的发酵饲料粗蛋白质含量、α—淀粉酶、酸性蛋白酶的含量、乳酸菌的活菌数进行相关分析，分析结果列于图1、图2、图3和图4中。从图1可以看出，在4种实施方案中，实施例3最终发酵产物中蛋白质含量最高，为32.00％，比原饲料中蛋白质含量提高了59.12％，实施例4最终发酵饲料蛋白含量次高，为27.10％，提高了34.26％。可见实施例3发酵工艺最有利于发酵原料中蛋白质含量的提高。从图2可以看出，在4中实施方案中，实施例3最终发酵饲料中α—淀粉酶活性最高，为103U/g，实施例4次高，为70U/g，实施例2最低，为24U/g。从图3可以看出，在4种实施方案中，实施例3最终发酵饲料中酸性蛋白酶活性最高，为123U/g，实施例4次高，为71U/g，实施例2最低，为47U/g。从图4可以看出，实施例3最终发酵饲料中活乳酸菌数最高，其对数值为12.1。

此外，发酵过程中霉菌分泌蛋白酶和糖化酶，霉菌接种量过低，将不能提供足够的水解酶，进而不能获得足够的水解产物，影响酵母菌、细菌的生长；霉菌接种量过多，霉菌生长过于旺盛，一方面因竞争关系会影响酵母菌和细菌的生长，另一方面会导致供氧不足。

发酵过程中乳酸菌、枯草芽孢杆菌和酵母菌发挥不同的作用，各菌种的配比直接影响到发酵饲料的品质，具体见表1。

表1 发酵饲料细菌、酵母菌接种量试验结果

由表1可知，枯草芽孢杆菌接种量1％、酵母菌接种量6％、乳酸菌接种量1％时发酵饲料蛋白质含量最高。

好氧阶段可以产生大量的水解酶类，同时也是单细胞蛋白生产最主要的阶段。好氧阶段的长短又与温度相关。以28-30℃保温发酵36-48h后升温至37℃继续保温发酵24h，得到发酵饲料的蛋白质含量和酶活性最高。

虽然本发明已以较佳实施例公开如上，但其并非用以限定本发明，任何熟悉此技术的人，在不脱离本发明的精神和范围内，都可做各种的改动与修饰，因此本发明的保护范围应该以权利要求书所界定的为准。

Claims (8)

1.一种多菌种两步联合发酵饲料的方法，其特征在于，主要包括以下步骤：

(1)活化菌种，并分别制备根霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、啤酒酵母的纯培养物；

(2)发酵原料预处理，包括将原料粉碎、拌水混匀后灭菌；

(3)好氧发酵：接种根霉、米曲霉、枯草芽孢杆菌、植物乳杆菌、啤酒酵母的纯培养物到发酵原料中，接种后拌匀，置于28～30℃保湿好氧培养36～48h，温度升高后置于37℃恒温培养箱通风培养24h，控制相对湿度85％～95％；

(4)厌氧发酵：好氧阶段结束后，打散、拌匀发酵饲料，装入单向排气密封袋，置于室温下厌氧培养4～8d；

所述步骤(2)发酵原料预处理包括：①发酵原料的粉碎：按质量比取玉米10～15份，麸皮10～15份，豆粕15～25份，棕榈粕35～45份，次粉10～15份，尿素1～2份，葡萄糖0.5～1份，混匀、粉碎，过筛，细度为20～40目；②发酵原料的拌水，料水比为1:0.6～1.0，拌匀，装盘；③发酵原料的灭菌：对发酵原料进行高压蒸汽灭菌，灭菌的条件是0.1Mpa～0.2Mpa，15～30min；

所述步骤(3)中的菌种按质量比例接种，每100份灭菌后物料，接种根霉菌麸皮种子纯培养物0.2～0.7份，米曲霉麸皮种子纯培养物0.2～0.7份，枯草芽孢杆菌纯培养物0.8～1.2份，植物乳杆菌纯培养物0.5～1.5份，啤酒酵母纯培养物2～8份。

2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，每100份灭菌后物料，接种根霉菌麸皮种子纯培养物0.2～0.7份，米曲霉麸皮种子纯培养物0.2～0.7份，枯草芽孢杆菌纯培养物的接种量为1份，植物乳杆菌纯培养物的接种量为1份，啤酒酵母纯培养物的接种量为6份。

3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，根霉种子纯培养物的制备：接种活化后的根霉菌丝体到豆粕麸皮培养基固体培养基上，28～30℃恒温培养3～5d。

4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，米曲霉种子纯培养物 的制备：接种活化后的米曲霉菌丝体到豆粕麸皮培养基固体培养基上，28～30℃恒温培养3～5d。

5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，枯草芽孢杆菌种子纯培养物 的制备：接种斜面活化后的枯草芽孢杆菌至50ml LB种子培养液，37℃恒温振荡培养10～18h。

6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，植物乳杆菌种子纯培养物 的制备：转接1ml～2ml活化后的植物乳杆菌液体培养液至50ml MRS种子培养液，37℃静置培养10～18h。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，啤酒酵母种子纯培养物 的制备：转接1ml～2ml活化后的啤酒酵母液体培养液至50ml YPD种子培养液，28～30℃静置培养12～18h。

8.根据权利要求1-7任一所述方法制备得到的饲料。