CN105907672A - γ-氨基丁酸菌株及其筛选和制备酸菜的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了γ‑氨基丁酸菌株及其筛选和制备酸菜的方法。该发明中筛选得到的γ‑氨基丁酸产生菌SC221被鉴定为短乳杆菌(Lactobacillus brevis)。该菌株发酵生产γ‑氨基丁酸的最适初始pH为4.0，最适发酵温度为35℃。经短乳杆菌(Lactobacillus brevis)SC221发酵制作的酸菜，γ‑氨基丁酸的含量为6.73g/kg。本发明公布的方法具有发酵周期短、生产成本低、安全性好、易实现工业化等特点，既提高了酸菜的营养价值，又扩展了乳酸菌的应用范围，为农产品的深加工提供了一条很具经济效益和社会效益的途径。

Description

γ-氨基丁酸菌株及其筛选和制备酸菜的方法
技术领域
本发明属于食品工程技术领域，涉及γ-氨基丁酸菌株及其筛选和制备酸菜的方法。
背景技术
γ-氨基丁酸是谷氨酸经脱羧后形成的一种非蛋白氨基酸，广泛分布在自然界的微生物、植物以及动物体内。γ-氨基丁酸作为一种神经递质抑制剂在动物体内起着重要的生理作用，具有抗焦虑、降血压、促进睡眠、改善脑机能、增强记忆力等多种生理功能，具有良好的医药、保健等应用前景。它可以作为生物活性成分应用到药物以及保健食品中，例如奶酪、茶叶等。因此，近些年来关于γ-氨基丁酸的研究越来越引起人们的兴趣。
目前，γ-氨基丁酸的生产主要有化学合成与生物合成法，化学合成法具有生产成本高且安全性差等缺点，而生物合成法则是工艺简单、效率高、成本低并且安全性高的一种γ-氨基丁酸生产方法。2009年，由生物方法制备的γ-氨基丁酸已经被我国***列为“新资源食品”。
目前，γ-氨基丁酸的生物法生产主要是利用具有谷氨酸脱羧酶活性的菌株作用于谷氨酸钠，谷氨酸钠经谷氨酸脱羧酶作用产生γ-氨基丁酸。这样的菌株如红曲霉、乳酸菌、酵母菌等。乳酸菌作为食品中常见的菌种，通常可以从酸奶、酸菜、腐乳等食品中分离得到， 也可以被安全地用以γ-氨基丁酸生产中。
酸菜是一种非常常见的风味食品，在全国各地都有各自不同风味的酸菜，酸菜具有开胃提神、醒酒解腻、促进食欲等食用效果。乳酸菌是酸菜的发酵过程起主要作用的菌株，因此在制作酸菜时，有目的性地添加能产生γ-氨基丁酸的乳酸菌，则既能缩短酸菜的制作时间，又能提高酸菜的营养价值。
发明内容
本专利公开了一种γ-氨基丁酸菌株及其筛选和制备酸菜的方法。
为实现上述目的，本发明提供的技术方案：
一种γ-氨基丁酸菌株，其分类属于为乳杆菌目(lactobacillus)、乳杆菌科(Lactobacillaceae)、短乳杆菌属的γ-氨基丁酸菌(Lactobacillus brevis)SC221，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为CGMCC No 11437，保藏日期为2015年09月21日，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的地址为北京市朝阳区北辰西路1号院3号，邮政编码为100101。
以上所述的γ-氨基丁酸菌株的筛选方法，包括以下步骤：
(1)γ-氨基丁酸产生菌的初筛：从市场购买的酸菜研磨，取研磨液加入发酵培养基，28-37℃静置培养4-6天，薄层层析检测培养液中γ-氨基丁酸含量；
(2)γ-氨基丁酸产生菌的复筛：挑选γ-氨基丁酸含量高的培养液，涂布筛选培养基平板，28-37℃培养1-3天后，选取周围具有透明圈的单菌落接种到发酵培养基，28-37℃静置培养4-6天，HPLC检测发酵液中γ-氨基丁酸含量，根据检测结果选取浓度大于3g/L菌株， 即可得到权利要求1所述的γ-氨基丁酸菌株。
以上所述的γ-氨基丁酸菌株的筛选方法，所述的步骤(1)和(2)所用的发酵培养基的组分为：葡萄糖5-12g/L；酵母浸提物8-15g/L；蛋白胨1-6g/L；乙酸钠1-5g/L；谷氨酸钠5-15g/L；MgSO4·7H2O0.1-0.4g/L；MnSO4·H2O 0.001-0.3g/L；FeSO4·7H2O 0.0005-0.005g/L；NaCl0.0005-0.005g/L；pH 6.5-7.2。
以上所述的γ-氨基丁酸菌株的筛选方法，所述的步骤(2)筛选培养基的组分为：胰蛋白胨8-13g/L，酵母1-6g/L，葡萄糖10-25g/L，柠檬酸二铵0.5-5g/L，吐温-80 0.3-1.5mL/L，CH3COONa·3H2O 15-30g/L，KH2PO4 2-9g/L，MgSO4·7H2O 0.1-1g/L，MnSO4·4H2O0.05-0.3g/L，FeSO4·7H2O 0.01-0.05g/L，CaCO3 10-25g/L，琼脂8-18g/L，pH6.6-7.0。
将经过上述筛选到的菌株(在此命名为γ-氨基丁酸菌(Lactobacillus brevis)SC221)进行16S rDNA基因序列测定和生理生化鉴定，结果如下：
1.提取菌株SC221的总DNA，然后以总DNA为模板，利用通用引物27f(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492r(5’-TACGGCTACCTT-GTTACG ACTT-3’)，PCR得到其16s保守序列，经过对SC221菌株的16S rDNA基因序列比对，与短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)的序列同源性最高，为99％。经测序得到SC221具体DNA基因序列(1480bp序列)为：
16s
5’-CCGATCTCTGTCACCTTAGACGGCTGACTCCCGAAGGTTATCTCACCGGCTTTGGGTGTTACAAACTCTCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAACTTCATGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAATCCGAACTGAGAACGGCTTTAAGAGATTAGCTTAGCCTCACGACTTCGCAACTCGTTGTACCGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCACCAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTGATAATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCATTCTGTCCCCGAAGGGAACGTCTTATCTCTAAGATTGGCAGAAGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTAGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACTAGACAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTCCACCGCTACACATGGAGTTCCACTGTCCTCTTCTGCACTCAAGTCTCCCAGTTTCCGATGCACTTCTCCGGTTAAGCCGAAGGCTTTCACATCAGACTTAAAAAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAAATACCGTCAACCCTTGAACAGTTACTCTCAAAGGTGTTCTTCTTTAACAACAGAGTTTTACGAGCCGAAACCCTTCTTCACTCACGCGGCATTGCTCCATCAGACTTTCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGATTACCCTCTCAGGTCGGCTACGTATCATCGTCTTGGTGGGCCTTTACCTCACCAACTAACTAATACGCCGCGGGATCATCCAGAAGTGATAGCCGAAGCCACCTTTCAAACAAAATCCATGCGGATTTTGTTGTTATACGGTATTAGCACCTGTTTCCAAGTGTTATCCCCTGCTTCTGGGCAGATTTCCCACGTGTTACTCACCAGTTCGCCACTCGCTTCATTGTTGAAATCAGTGCAAGCACGTCATTCAACGGAAGCTCGTTCGACTTGCATGTATTAGGCATGCCGCCAGCTGCTTT-3’。
2.菌株SC221在筛选培养基上菌落呈乳白色，表面光滑。显微镜观察菌体呈杆状，无鞭毛，无孢子，革兰氏染色显阳性，在空气中不生长，兼性厌氧，最适生长温度为32-37℃，适宜生长pH为5.0-7.0。
3.菌株SC221可以发酵以下底物产酸：葡萄糖，果糖，麦芽糖，D-木糖，核糖，乳糖，果糖，葡萄糖酸钠，D-***糖等。
由以上16S rDNA基因序列测定和生理生化特性结果，可以认定SC221其分类属于为乳杆菌目(lactobacillus)、乳杆菌科(Lactobacillaceae)、短乳杆菌属的γ-氨基丁酸菌(Lactobacillus brevis)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为CGMCC No 11437。
运用以上所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，将盐水浸泡后的新鲜蔬菜码入容器，每公斤蔬菜加入300-500mg维生素C；接种经种子培养基中培养的权利要求1所述γ-氨基丁酸菌株，加入含0.1-2％食盐和0.1-2％MSG的无菌水；在32-37℃培养5-10天后，即得到富含γ-氨基丁酸的酸菜。
进一步的，运用以上所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，所述经种子培养基中培养的权利要求1所述γ-氨基丁酸菌株为的γ-氨基丁酸菌(Lactobacillus brevis)SC221在种子培养基中培养1-5天后所得菌液。
进一步的，运用以上所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，所述的种子培养基的组分为：葡萄糖5-15g/L；酵母浸提物5-15g/L；蛋白胨3-8g/L；乙酸钠1-5g/L；MgSO4·7H2O0.1-0.5g/L；MnSO4·H2O0.005-0.15g/L；FeSO4·7H2O0.0005-0.002g/L；NaCl 0005-0.002g/L。
进一步的，运用以上所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，所述的无菌水pH为3.5-4.5。
进一步的，运用以上所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，所述γ-氨基丁酸菌株接入量为每1kg大白菜接入0.5-5g在种子培养基中培养1-5天后所得菌液。
进一步的，运用以上所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，所述γ-氨基丁酸菌株接入量为每1kg大白菜接入0.5-5g在种子培养基中培养1-5天后所得菌液。。
本发明具有以下有益效果：
(1)本发明筛选到一株γ-氨基丁酸菌株CGMCC No 11437(SC221)，具有工业化生产的潜力。
(2)本发明公布的方法具有发酵周期短、生产成本低、安全性好、易实现工业化等特点。
(3)本发明将所制备得到的γ-氨基丁酸菌株用于制作酸菜，既能缩短酸菜的制作时间，提高了酸菜的营养价值，又扩展了乳酸菌的应用范围，为农产品的深加工提供了一条很具经济效益和社会效益的途径。
附图说明
图1：培养液的薄层层析分析。其中，GABA：γ-氨基丁酸；MSG：谷氨酸钠。
图2：菌株SC221的形态学观察。
图3：菌株SC221生产γ-氨基丁酸的最适pH。
图4：菌株SC221生产γ-氨基丁酸的最适温度。
图5：酸菜中所含γ-氨基丁酸的HPLC分析。
具体实施方式
以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。下述实施例中的％，如无特殊说明，均为质量百分含量。以下实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。以下实施例中的转速，均为在半径为5.5cm的离心半径下的转速。
一、γ-氨基丁酸菌株
实施例1
γ-氨基丁酸产生菌的获得
(1)γ-氨基丁酸产生菌的初筛：从市场随机购买的酸菜研磨，取研磨液加入发酵培养基(发酵培养基的组分为：葡萄糖5g/L；酵母浸提物8g/L；蛋白胨1g/L；乙酸钠1g/L；谷氨酸钠5g/L；MgSO4·7H2O 0.1g/L；MnSO4·H2O 0.001g/L；FeSO4·7H2O 0.0005g/L；NaCl0.0005g/L；pH 6.5。)，28℃静置培养4天，薄层层析检测培养液中γ-氨基丁酸含量；
(2)γ-氨基丁酸产生菌的复筛：挑选γ-氨基丁酸含量高的培养液，涂布筛选培养基平板，(筛选培养基的组分为：胰蛋白胨8g/L，酵母1g/L，葡萄糖10g/L，柠檬酸二铵0.5g/L，吐温-80 0.3mL/L，CH3COONa·3H2O 15g/L，KH2PO4 2g/L，MgSO4·7H2O 0.1g/L，MnSO4·4H2O 0.05g/L，FeSO4·7H2O 0.01g/L，CaCO3 10g/L，琼脂8g/L，pH 6.6。)28℃培养1天后，选取周围具有透明圈的单菌落接种到发酵培养基，(发酵培养基的组分为：葡萄糖5g/L；酵母浸提物8g/L；蛋白胨1g/L；乙酸钠1g/L；谷氨酸钠5g/L；MgSO4·7H2O 0.1g/L；MnSO4·H2O0.001g/L；FeSO4·7H2O 0.0005g/L；NaCl0.0005g/L；pH 6.5。)28℃静置培养4天，HPLC检测发酵液中γ-氨基丁酸含量，根据检测结果选取浓度大3g/L菌株，即可得到高产γ-氨基丁酸的菌株SC221。
实施例2
γ-氨基丁酸产生菌的获得
(1)γ-氨基丁酸产生菌的初筛：从市场随机购买的酸菜研磨，取研磨液加入发酵培养基(发酵培养基的组分为：葡萄糖8g/L；酵母浸提物10g/L；蛋白胨3g/L；乙酸钠2g/L；谷氨酸钠10g/L；MgSO4·7H2O 0.2g/L；MnSO4·H2O 0.01g/L；FeSO4·7H2O0.001g/L；NaCl0.001g/L；pH 6.8。)，30℃静置培养5天，薄层层析检测培养液 中γ-氨基丁酸含量；
(2)γ-氨基丁酸产生菌的复筛：挑选γ-氨基丁酸含量高的培养液，涂布筛选培养基平板，(筛选培养基的组分为：胰蛋白胨10g/L，酵母2g/L，葡萄糖15g/L，柠檬酸二铵2g/L，吐温-80 1mL/L，CH3COONa·3H2O 20g/L，KH2PO4 4g/L，MgSO4·7H2O0.5g/L，MnSO4·4H2O0.15g/L，FeSO4·7H2O 0.02g/L，CaCO3 15g/L，琼脂10g/L，pH 6.8/。)30℃培养2天后，选取周围具有透明圈的单菌落接种到发酵培养基，(发酵培养基的组分为：葡萄糖8g/L；酵母浸提物10g/L；蛋白胨3g/L；乙酸钠2g/L；谷氨酸钠10g/L；MgSO4·7H2O0.2g/L；MnSO4·H2O0.01g/L；FeSO4·7H2O0.001g/L；NaCl0.001g/L；pH 6.8。)30℃静置培养5天，HPLC检测发酵液中γ-氨基丁酸含量，根据检测结果选取浓度大于3g/L菌株，即可得到高产γ-氨基丁酸的菌株SC221。
实施例3
γ-氨基丁酸产生菌的获得
(1)γ-氨基丁酸产生菌的初筛：从市场随机购买的酸菜研磨，取研磨液加入发酵培养基(发酵培养基的组分为：葡萄糖10g/L；酵母浸提物12g/L；蛋白胨4g/L；乙酸钠4g/L；谷氨酸钠12g/L；MgSO4·7H2O 0.3g/L；MnSO4·H2O 0.02g/L；FeSO4·7H2O 0.003g/L；NaCl0.003g/L；pH 7.0。)，33℃静置培养6天，薄层层析检测培养液中γ-氨基丁酸含量；
(2)γ-氨基丁酸产生菌的复筛：挑选γ-氨基丁酸含量高的培养液，涂布筛选培养基平板，(筛选培养基的组分为：胰蛋白胨12g/L，酵母4g/L，葡萄糖20g/L，柠檬酸二铵3g/L，吐温-80 1.2mL/L，CH3COONa·3H2O 25g/L，KH2PO4 6g/L，MgSO4·7H2O 0.8g/L，MnSO4·4H2O0.02g/L，FeSO4·7H2O 0.04g/L，CaCO3 20g/L，琼脂15g/L，pH 7.0。)33℃培养3天后，选取周围具有透明圈的单菌落接种到发酵培养基，(发酵培养基的组分为：葡萄糖10g/L；酵母浸提物12g/L；蛋白胨4g/L；乙酸钠4g/L；谷氨酸钠12g/L；MgSO4·7H2O0.3g/L；MnSO4·H2O0.02g/L；FeSO4·7H2O 0.003g/L；NaCl0.003g/L；pH 7.0。)33℃静置培养6天，HPLC检测发酵液中γ-氨基丁酸含量，根据检测结果选取浓度大3g/L菌株，即可得到高产γ-氨基丁酸的菌株SC221。
实施例4
γ-氨基丁酸产生菌的获得
(1)γ-氨基丁酸产生菌的初筛：从市场随机购买的酸菜研磨，取研磨液加入发酵培养基(发酵培养基的组分为：葡萄糖12g/L；酵母浸提物15g/L；蛋白胨6g/L；乙酸钠5g/L；谷氨酸钠15g/L；MgSO4·7H2O 0.4g/L；MnSO4·H2O 0.3g/L；FeSO4·7H2O 0.005g/L；NaCl0.005g/L；pH 7.2。)，37℃静置培养5天，薄层层析检测培养液中γ-氨基丁酸含量；
(2)γ-氨基丁酸产生菌的复筛：挑选γ-氨基丁酸含量高的培 养液，涂布筛选培养基平板，(筛选培养基的组分为：胰蛋白胨13g/L，酵母6g/L，葡萄糖25g/L，柠檬酸二铵5g/L，吐温-80 1.5mL/L，CH3COONa·3H2O 30g/L，KH2PO4 9g/L，MgSO4·7H2O 1g/L，MnSO4·4H2O-0.3g/L，FeSO4·7H2O0.05g/L，CaCO3 25g/L，琼脂18g/L，pH 7.0。)37℃培养2天后，选取周围具有透明圈的单菌落接种到发酵培养基，(发酵培养基的组分为：葡萄糖12g/L；酵母浸提物15g/L；蛋白胨6g/L；乙酸钠5g/L；谷氨酸钠15g/L；MgSO4·7H2O0.4g/L；MnSO4·H2O 0.3g/L；FeSO4·7H2O 0.005g/L；NaCl0.005g/L；pH 7.2。)37℃静置培养5天，HPLC检测发酵液中γ-氨基丁酸含量，根据检测结果选取浓度大3g/L菌株，即可得到高产γ-氨基丁酸的菌株SC221。
二、菌株的鉴定
将经过上述实施例1筛选到的菌株(SC221)进行16S rDNA基因序列测定和生理生化鉴定，结果如下：
1.提取菌株SC221的总DNA，然后以总DNA为模板，利用通用引物27f(5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1492r(5’-TACGGCTACCTT-GTTACG ACTT-3’)，PCR得到其16s保守序列，经过对SC221菌株的16S rDNA基因序列比对，与短乳杆菌(Lactobacillusbrevis)的序列同源性最高，为99％。经测序得到SC221具体DNA基因序列(1480bp序列)为：
16s
5’-CCGATCTCTGTCACCTTAGACGGCTGACTCCCGAAGGTTATCTCACCGGCTTTGGGTGTTACAAACTCTCATGGTGTGACGGGCGGTGTGTACAAGGCCCGGGAACGTATTCACCGCGGCATGCTGATCCGCGATTACTAGCGATTCCAACTTCATGTAGGCGAGTTGCAGCCTACAATCCGAACTGAGAACGGCTTTAAGAGATTAGCTTAGCCTCACGACTTCGCAACTCGTTGTACCGTCCATTGTAGCACGTGTGTAGCCCAGGTCATAAGGGGCATGATGATTTGACGTCATCCCCACCTTCCTCCGGTTTGTCACCGGCAGTCTCACCAGAGTGCCCAACTGAATGCTGGCAACTGATAATAAGGGTTGCGCTCGTTGCGGGACTTAACCCAACATCTCACGACACGAGCTGACGACAACCATGCACCACCTGTCATTCTGTCCCCGAAGGGAACGTCTTATCTCTAAGATTGGCAGAAGATGTCAAGACCTGGTAAGGTTCTTCGCGTAGCTTCGAATTAAACCACATGCTCCACCGCTTGTGCGGGCCCCCGTCAATTCCTTTGAGTTTCAACCTTGCGGTCGTACTCCCCAGGCGGAGTGCTTAATGCGTTAGCTGCAGCACTGAAGGGCGGAAACCCTCCAACACTTAGCACTCATCGTTTACGGCATGGACTACCAGGGTATCTAATCCTGTTCGCTACCCATGCTTTCGAGCCTCAGCGTCAGTTACAGACTAGACAGCCGCCTTCGCCACTGGTGTTCTTCCATATATCTACGCATTCCACCGCTACACATGGAGTTCCACTGTCCTCTTCTGCACTCAAGTCTCCCAGTTTCCGATGCACTTCTCCGGTTAAGCCGAAGGCTTTCACATCAGACTTAAAAAACCGCCTGCGCTCGCTTTACGCCCAATAAATCCGGACAACGCTTGCCACCTACGTATTACCGCGGCTGCTGGCACGTAGTTAGCCGTGGCTTTCTGGTTAAATACCGTCAACCCTTGAACAGTTACTCTCAAAGGTGTTCTTCTTTAACAACAGAGTTTTACGAGCCGAAACCCTTCTTCACTCACGCGGCATTGCTCCATCAGACTTTCGTCCATTGTGGAAGATTCCCTACTGCTGCCTCCCGTAGGAGTTTGGGCCGTGTCTCAGTCCCAATGTGGCCGATTACCCTCTCAGGTCGGCTACGTATCATCGTCTTGGTGGGCCTTTACCTCACCAACTAACTAATACGCCGCGGGATCATCCAGAAGTGATAGCCGAAGCCACCTTTCAAACAAAATCCATGCGGATTTTGTTGTTATACGGTATTAGCACCTGTTTCCAAGTGTTATCCCCTGCTTCTGGGCAGATTTCCCACGTGTTACTCACCAGTTCGCCACTCGCTTCATTGTTGAAATCAGTGCAAGCACGTCATTCAACGGAAGCTCGTTCGACTTGCATGTATTAGGCATGCCGCCAGCTGCTTT-3’。
2.菌株SC221在筛选培养基上菌落呈乳白色，表面光滑。显微 镜观察菌体呈杆状，无鞭毛，无孢子，革兰氏染色显阳性，在空气中不生长，兼性厌氧，最适生长温度为32-37℃，适宜生长pH为5.0-7.0。
3.菌株SC221可以发酵以下底物产酸：葡萄糖，果糖，麦芽糖，D-木糖，核糖，乳糖，果糖，葡萄糖酸钠，D-***糖等。
重复对实施例2-4进行同样的鉴定，其结果与实施例1高度吻合，并具有良好的重现性。
由以上16S rDNA基因序列测定和生理生化特性结果，可以认定SC221其分类属于为乳杆菌目(lactobacillus)、乳杆菌科(Lactobacillaceae)、短乳杆菌属的γ-氨基丁酸菌(Lactobacillus brevis)，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为CGMCC No 11437。
三、运用所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法
γ-氨基丁酸菌株(Lactobacillus brevis)SC221在种子培养基中培养1-5天后得到菌液。所述的种子培养基的组分为：葡萄糖5-15g/L；酵母浸提物5-15g/L；蛋白胨3-8g/L；乙酸钠1-5g/L；MgSO4·7H2O0.1-0.5g/L；MnSO4·H2O 0.005-0.15g/L；FeSO4·7H2O0.0005-0.002g/L；NaCl 0005-0.002g/L。
实施例5：富含γ-氨基丁酸的酸菜的制作
将盐水浸泡后的新鲜蔬菜码入容器，每公斤蔬菜加入300mg维生素C；接种γ-氨基丁酸菌株SC221经种子培养基中培养后得到的 菌液0.5g，加入含0.1％食盐和0.1％MSG及pH为3.5的无菌水；在32℃培养5天后，即得到富含γ-氨基丁酸的酸菜。
实施例6：富含γ-氨基丁酸的酸菜的制作
将盐水浸泡后的新鲜蔬菜码入容器，每公斤蔬菜加入400mg维生素C；接种γ-氨基丁酸菌株SC221经种子培养基中培养后得到的菌液1g，加入含0.5％食盐和0.5％MSG及pH为3.8的无菌水；在33℃培养6天后，即得到富含γ-氨基丁酸的酸菜。
实施例7：富含γ-氨基丁酸的酸菜的制作
将盐水浸泡后的新鲜蔬菜码入容器，每公斤蔬菜加入500mg维生素C；接种γ-氨基丁酸菌株SC221经种子培养基中培养后得到的菌液2g，加入含1％食盐和1％MSG及pH为4.0的无菌水；在34℃培养7天后，即得到富含γ-氨基丁酸的酸菜。
实施例8：富含γ-氨基丁酸的酸菜的制作
将盐水浸泡后的新鲜蔬菜码入容器，每公斤蔬菜加入350mg维生素C；接种γ-氨基丁酸菌株SC221经种子培养基中培养后得到的菌液3g，加入含1.5％食盐和1.5％MSG及pH为4.2的无菌水；在35℃培养8天后，即得到富含γ-氨基丁酸的酸菜。
实施例9：富含γ-氨基丁酸的酸菜的制作
将盐水浸泡后的新鲜蔬菜码入容器，每公斤蔬菜加入450mg维生素C；接种γ-氨基丁酸菌株SC221经种子培养基中培养后得到的菌液5g，加入含2％食盐和2％MSG及pH为4.5的无菌水；在37℃培养10天后，即得到富含γ-氨基丁酸的酸菜。
对所制备得到酸菜中所含γ-氨基丁酸的HPLC分析，检测结果见图5。

Claims (10)

1.一种γ-氨基丁酸菌株，其分类属于为乳杆菌目(lactobacillus)、乳杆菌科(Lactobacillaceae)、短乳杆菌属的γ-氨基丁酸菌(Lactobacillus brevis)SC221，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保存编号为CGMCC No 11437。
2.一种如权利要求1所述的γ-氨基丁酸菌株的筛选方法，其特征在于：包括以下步骤：
(1)γ-氨基丁酸产生菌的初筛：从市场购买的酸菜研磨，取研磨液加入发酵培养基，28-37℃静置培养4-6天，薄层层析检测培养液中γ-氨基丁酸含量；
(2)γ-氨基丁酸产生菌的复筛：挑选γ-氨基丁酸含量高的培养液，涂布筛选培养基平板，28-37℃培养1-3天后，选取周围具有透明圈的单菌落接种到发酵培养基，28-37℃静置培养4-6天，HPLC检测发酵液中γ-氨基丁酸含量，根据检测结果选取浓度大于3g/L菌株，即可得到权利要求1所述的γ-氨基丁酸菌株。
3.根据权利要求2所述的γ-氨基丁酸菌株的筛选方法，其特征在于：步骤(1)和(2)所用的发酵培养基的组分为：葡萄糖5-12g/L；酵母浸提物8-15g/L；蛋白胨1-6g/L；乙酸钠1-5g/L；谷氨酸钠5-15g/L；MgSO4·7H2O 0.1-0.4g/L；MnSO4·H2O 0.001-0.3g/L；FeSO4·7H2O0.0005-0.005g/L；NaCl0.0005-0.005g/L；pH 6.5-7.2。
4.根据权利要求2或3所述的γ-氨基丁酸菌株的筛选方法，其特征在于：步骤(2)筛选培养基的组分为：胰蛋白胨8-13g/L，酵母1-6g/L，葡萄糖10-25g/L，柠檬酸二铵0.5-5g/L，吐温-80 0.3-1.5mL/L，CH3COONa·3H2O 15-30g/L，KH2PO4 2-9g/L，MgSO4·7H2O 0.1-1g/L，MnSO4·4H2O 0.05-0.3g/L，FeSO4·7H2O 0.01-0.05g/L，CaCO3 10-25g/L，琼脂8-18g/L，pH6.6-7.0。
5.一种运用权利要求1所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，其特征在于：将盐水浸泡后的新鲜蔬菜码入容器，每公斤蔬菜加入300-500mg维生素C；接种经种子培养基中培养的权利要求1所述γ-氨基丁酸菌株，加入含0.1-2％食盐和0.1-2％MSG的无菌水；在32-37℃培养5-10天后，即得到富含γ-氨基丁酸的酸菜。
6.根据权利要求5所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，其特征在于：所述经种子培养基中培养的权利要求1所述γ-氨基丁酸菌株为的γ-氨基丁酸菌(Lactobacillusbrevis)SC221在种子培养基中培养1-5天后所得菌液。
7.根据权利要求5或6所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，其特征在于：所述的种子培养基的组分为：葡萄糖5-15g/L；酵母浸提物5-15g/L；蛋白胨3-8g/L；乙酸钠1-5g/L；MgSO4·7H2O 0.1-0.5g/L；MnSO4·H2O 0.005-0.15g/L；FeSO4·7H2O0.0005-0.002g/L；NaCl0005-0.002g/L。
8.根据权利要求5或6所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，其特征在于：所述的无菌水pH为3.5-4.5。
9.根据权利要求6所述的所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，其特征在于：所述γ-氨基丁酸菌株接入量为每1kg大白菜接入0.5-5g在种子培养基中培养1-5天后所得菌液。
10.根据权利要求8所述的所述γ-氨基丁酸菌株制备酸菜的方法，其特征在于：所述γ-氨基丁酸菌株接入量为每1kg大白菜接入0.5-5g在种子培养基中培养1-5天后所得菌液。
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