CN107955072A - Pd-1抗体 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及结合人程序性细胞死亡受体1(PD‑1)的抗体，其可单独、或与化疗药物及其它癌症治疗药物联合用于治疗癌症。

Description

PD-1抗体
技术领域
本发明涉及医药领域。更具体地，本发明涉及与人程序性细胞死亡受体1(PD-1)结合的抗体，且其可用于单独、与化疗药物及其它癌症疗法联用以治疗癌症。
背景技术
肿瘤细胞通过多种机制逃避免疫***的检测和消除。免疫检查点通路用于自身耐受维持以及活化T细胞控制，但癌细胞可利用该通路来避免受到破坏。PD-1/人程序性细胞死亡1配体1(PD-L1)通路就是这样一种免疫检查点。T细胞上发现存在人PD-1，且PD-L1和人程序性细胞死亡1配体2(PD-L2)与PD-1的结合抑制了T细胞的增殖和细胞因子的产生。因此PD-L1和PD-L2的肿瘤细胞的生成可以使其逃避T细胞的监视。
一种针对人PD-1的全人IgG4(S228P)抗体，纳武单抗(nivolumab)，已经表现出抑制PD-1与PD-L1和PD-L2的结合，并已经在多个临床试验中进行测试。(Wang等人，CancerImmunol Res(2014)2(9):846).一种针对PD-1的人源化IgG4(S22P)抗体派姆单抗(也曾称为lambrolizumab)，已经表现出了对PD-1与PD-L1及PD-L2的结合抑制性，并在多个临床试验中进行测试。(WO2008156712和Hamid等人,N Engl J Med(2013)369:2)。
目前仍需要提供另一种抗体，其可以结合、中和人PD-1与PD-L1和PD-L2的相互作用。具体地，仍需要提供一种与人PD-1高亲和力结合的抗体。此外，也仍需要提供一种能够有效阻断人PD-1与PD-L1和PD-L2相互作用的抗体。
发明内容
本发明的第一方面，提供了一种结合人PD-1(SEQ ID NO.:1)的抗体，其包含轻链(LC)和重链(HC)，其中，
所述轻链包括轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，其分别由氨基酸序列RASQGISSWLA(SEQ ID NO:10)、SAASSLQS(SEQ ID NO:11)、和QQANHLPFT(SEQ ID NO:12)构成，和
所述重链包括重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中，
HCDR1由KASGGTFSSTAIS(SEQ ID NO:2(用于xd-16A、xd-16B、xd-16C、xd-16D和/或xd-16E的HCDR1))所示的氨基酸序列构成；
HCDR2由以下所示氨基酸序列构成：
GIWPSFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO:3(用于xd-16A的HCDR2)),
GIWPSFGTASYAQKFQG(SEQ ID NO:4(用于xd-16B的HCDR2)),
GIWPSFGTASYAQKFRG(SEQ ID NO:5(用于xd-16C的HCDR2)),
GIWPSFDTANYAQKFRG(SEQ ID NO:6(用于xd-16D的HCDR2)),或
GIWPSFGTANYARKFQG(SEQ ID NO:7(用于xd-16E的HCDR2))；和
HCDR3由ARAEYSSTGTFDY(SEQ ID NO:8(用于xd-16A、xd-16B、xd-16C和/或xd-16D的HCDR3))或ARAEYSSTGIFDY(SEQ ID NO.:9(用于xd-16B和/或xd-16E的HCDR3))所示的氨基酸序列构成。
本发明的特定抗体在某些条件下以高于尼莫单抗和彭博瑞珠单抗的高亲合力结合人PD-1。此外，与尼莫单抗和彭博瑞珠单抗相比，本发明的特定抗体在体内模型中介导了优选更高的同种异体反应性。
在一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中LCDR1、LCDR2和LCDR3分别由氨基酸序列RASQGISSWLA(SEQ ID NO:10)、SAASSLQS(SEQ ID NO:11)、和QQANHLPFT(SEQ ID NO:12)构成，且其中HCDR1、HCDR2和HCDR3分别由氨基酸序列KASGGTFSSTAIS(SEQ ID NO:2)、GIWPSFGTANYAQKFQG(SEQ ID NO:3)和ARAEYSSTGTFDY(SEQ ID NO:8)构成。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中LCDR1、LCDR2和LCDR3分别由氨基酸序列RASQGISSWLA(SEQ ID NO:10)、SAASSLQS(SEQ ID NO:11)、和QQANHLPFT(SEQ IDNO:12)构成，且其中HCDR1、HCDR2和HCDR3分别由氨基酸序列KASGGTFSSTAIS(SEQ ID NO:2)、GIWPSFGTASYAQKFQG(SEQ ID NO:4)和ARAEYSSTGIFDY(SEQ ID NO:9)构成。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中LCDR1、LCDR2和LCDR3分别由氨基酸序列RASQGISSWLA(SEQ ID NO:10)、SAASSLQS(SEQ ID NO:11)、和QQANHLPFT(SEQ IDNO:12)构成，且其中HCDR1、HCDR2和HCDR3分别由氨基酸序列KASGGTFSSTAIS(SEQ ID NO:2)、GIWPSFGTASYAQKFRG(SEQ ID NO:5)和ARAEYSSTGTFDY(SEQ ID NO:8)构成。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中LCDR1、LCDR2和LCDR3分别由氨基酸序列RASQGISSWLA(SEQ ID NO:10)、SAASSLQS(SEQ ID NO:11)、和QQANHLPFT(SEQ IDNO:12)构成，且其中HCDR1、HCDR2和HCDR3分别由氨基酸序列KASGGTFSSTAIS(SEQ ID NO:2)、GIWPSFDTANYAQKFRG(SEQ ID NO:6)和ARAEYSSTGTFDY(SEQ ID NO:8)构成。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中LCDR1、LCDR2和LCDR3分别由氨基酸序列RASQGISSWLA(SEQ ID NO:10)、SAASSLQS(SEQ ID NO:11)、和QQANHLPFT(SEQ IDNO:12)构成，且其中HCDR1、HCDR2和HCDR3分别由氨基酸序列KASGGTFSSTAIS(SEQ ID NO:2)、GIWPSFGTANYARKFQG(SEQ ID NO:7)和ARAEYSSTGIFDY(SEQ ID NO:9)构成。
在一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其包含1或2条轻链(LC)以及1或2条重链(HC)，其中各轻链包含一轻链可变区(LCVR)且各重链包含一重链可变区(HCVR)，其中所述的LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有SEQ ID NO.:13、SEQID NO.:14、SEQ ID NO.:15、SEQ ID NO.:16、或SEQ ID NO.:17所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有SEQ ID NO.:13所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有SEQ ID NO.:14所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有SEQ ID NO.:15所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有SEQ ID NO.:16所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有SEQ ID NO.:17所示的氨基酸序列。
在一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有SEQ ID NO.:19、SEQ ID NO.:20、SEQ ID NO.:21、SEQ IDNO.:22或SEQ ID NO.:23所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:19所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:20所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:21所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:22所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:23所示的氨基酸序列。
在一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其含有两条轻链和两条重链，其中各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:19、SEQ ID NO.:20、SEQ ID NO.:21、SEQ ID NO.:22或SEQ ID NO.:23所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:19所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述各重链具有如SEQ ID NO.:20所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述各重链具有如SEQ ID NO.:21所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述各重链具有如SEQ ID NO.:22所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述各重链具有如SEQ ID NO.:23所示的氨基酸序列。
在一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中，一条重链与一条轻链之间形成了一对链间二硫键，且另一条重链与另一条轻链形成了一对链间二硫键，且其中一条重链与另一条重链形成了两对链间二硫键。
在一实施方式中，本发明提供了一种抗体，其中所述抗体是经过糖基化的。
在一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其包含一轻链(LC)和一重链(HC)，其中所述轻链含有一轻链可变区(LCVR)，且所述重链包含一重链可变区(HCVR)，其中所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有如SEQ ID NO.:13、SEQ ID NO.:14、SEQ ID NO.:15、SEQ ID NO.:16或SEQ ID NO.:17所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中，所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有如SEQ ID NO.:13所示的氨基酸序列。在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ IDNO.:1)，其中，所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有如SEQID NO.:14所示的氨基酸序列。在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中，所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有如SEQ ID NO.:15所示的氨基酸序列。在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中，所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有如SEQ ID NO.:16所示的氨基酸序列。在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中，所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有如SEQ ID NO.:17所示的氨基酸序列。
在一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，所述HC具有如SEQ ID NO.:19、SEQ IDNO.:20、SEQ ID NO.:21、SEQ ID NO.:22或SEQ ID NO.:23所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:19所示的序列。在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:20所示的序列。在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:21所示的序列。在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:22所示的序列。在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:23所示的序列。
在一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其含有两条轻链和两条重链，其中各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:19、SEQ ID NO.:20、SEQ ID NO.:21、SEQ ID NO.:22或SEQ ID NO.:23所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:19所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:20所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:21所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:22所示的氨基酸序列。
在另一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:23所示的氨基酸序列。
在一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中一条重链与一条轻链之间形成了一对链间二硫键，且另一条重链与另一条轻链形成了一对链间二硫键，且其中一条重链与另一条重链形成了两对链间二硫键。
在一实施方式中，本发明提供了一种结合于人PD-1的抗体(SEQ ID NO.:1)，其中所述抗体是经过糖基化的。
本发明第二方面，提供了一种编码本发明上述任一所述抗体、片段或其衍生物的多核苷酸。
在另一优选例中，编码xd-16A S228P IgG4的HC的多核苷酸如SEQ ID NO.:25所示。
在另一优选例中，编码xd-16B S228P IgG4的HC的多核苷酸如SEQ ID NO.:26所示。
在另一优选例中，编码xd-16C S228P IgG4的HC的多核苷酸如SEQ ID NO.:27所示。
在另一优选例中，编码xd-16D S228P IgG4的HC的多核苷酸如SEQ ID NO.:28所示。
在另一优选例中，编码xd-16E S228P IgG4的HC的多核苷酸如SEQ ID NO.:29所示。
在另一优选例中，编码xd-16A、xd-16B、xd-16C、xd-16D和xd-16E的LC的多核苷酸如SEQ ID NO.:30所示。
本发明的第三方面，提供了一种含有本发明第二方面的多核苷酸的载体。
本发明的第四方面，提供了一种宿主细胞，所述宿主细胞含有本发明第三方面的载体或所述细胞的基因组中整合了外源性的本发明第二方面的多核苷酸。
在另一优选例中，所述宿主细胞是哺乳动物细胞，较佳地，CHO细胞。
在一实施方式中，本发明提供了一种哺乳动物细胞，其含有一DNA分子，所述DNA分子含有编码具有SEQ ID NO.:24所示氨基酸序列的多肽的多核苷酸序列以及编码如SEQ IDNO.:19所示氨基酸序列多肽的多核苷酸，其中所述细胞可以表达一种抗体，所述抗体含有如SEQ ID NO.:24所示氨基酸序列的轻链以及如SEQ ID NO.:19所示氨基酸序列的重链。
在一实施方式中，本发明提供了一种哺乳动物细胞，其含有一DNA分子，所述DNA分子含有编码具有SEQ ID NO.:24所示氨基酸序列的多肽的多核苷酸序列以及编码如SEQ IDNO.:20所示氨基酸序列多肽的多核苷酸，其中所述细胞可以表达一种抗体，所述抗体含有如SEQ ID NO.:24所示氨基酸序列的轻链以及如SEQ ID NO.:20所示氨基酸序列的重链。
在一实施方式中，本发明提供了一种哺乳动物细胞，其含有一DNA分子，所述DNA分子含有编码具有SEQ ID NO.:24所示氨基酸序列的多肽的多核苷酸序列以及编码如SEQ IDNO.:21所示氨基酸序列多肽的多核苷酸，其中所述细胞可以表达一种抗体，所述抗体含有如SEQ ID NO.:24所示氨基酸序列的轻链以及如SEQ ID NO.:21所示氨基酸序列的重链。
在一实施方式中，本发明提供了一种哺乳动物细胞，其含有一DNA分子，所述DNA分子含有编码具有SEQ ID NO.:24所示氨基酸序列的多肽的多核苷酸序列以及编码如SEQ IDNO.:22所示氨基酸序列多肽的多核苷酸，其中所述细胞可以表达一种抗体，所述抗体含有如SEQ ID NO.:24所示氨基酸序列的轻链以及如SEQ ID NO.:22所示氨基酸序列的重链。
在一实施方式中，本发明提供了一种哺乳动物细胞，其含有一DNA分子，所述DNA分子含有编码具有SEQ ID NO.:24所示氨基酸序列的多肽的多核苷酸序列以及编码如SEQ IDNO.:23所示氨基酸序列多肽的多核苷酸，其中所述细胞可以表达一种抗体，所述抗体含有如SEQ ID NO.:24所示氨基酸序列的轻链以及如SEQ ID NO.:23所示氨基酸序列的重链。
本发明第五方面，提供了一种生产抗体的方法，所述抗体含有一轻链和重链，所述轻链具有SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列且所述重链具有如SEQ ID NO.:20所示的氨基酸序列，包括：在抗体表达的条件下，培养本发明第四方面所述的宿主细胞，和收集所述表达的抗体。
在一实施方式中，本发明提供了一种由本发明方法生产的抗体。
本发明第六方面，提供了一种药物组合物，其含有本发明的抗体，以及药学上可接受的载体。
本发明第七方面，提供了一种治疗癌症的方法，包括步骤：向需要的对象施用有效量的本发明抗体。
在另一实施方式中，所述治疗癌症的方法还包括步骤：向需要的对象施用有效量的本发明抗体，其中，所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、***癌、乳腺癌、卵巢癌或肝癌。
在另一实施方式中，这些方法包括与一种或多种抗肿瘤药同时、分别或序贯性地联合施用有效量的本发明抗体。
在一优选实施方式中，所述抗肿瘤药包括但不限于：雷莫芦单抗(ramucirumab)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、奥莱妥单抗(olaratumab)、格伦尼昔替(galunisertib)、阿贝马昔(abemaciclib)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、脂质体多柔比星(liposomal doxorubicin)、多烯紫杉醇(docetaxel)、环磷酰胺(cyclophosphamide)和多柔比星(doxorubicin)、诺维本(navelbine)、艾日布林(eribulin)、紫杉醇(paclitaxel)、紫杉醇蛋白结合的可注射悬浮颗粒、伊沙匹隆(ixabepilone)、卡培他滨(capecitabine)、FOLFOX(亚叶酸、氟尿嘧啶、和奥沙利铂)、FOLFIRI(亚叶酸、氟尿嘧啶和伊立替康)、西妥昔单抗(cetuximab)、纳武单抗(nivolumab)、易普利姆玛(ipilimumab)、匹迪珠单抗(pidilizumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、曲美母单抗(tremelimumab)、尤瑞单抗(urelumab)、丽瑞单抗(lirilumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、杜伐单抗(durvalumab)、或其组合。
在另一优选例中，所述抗肿瘤药为免疫-肿瘤药物。
在另一实施方式中，所述免疫-肿瘤药物选自下组：纳武单抗(nivolumab)、易普利姆玛(ipilimumab)、匹迪珠单抗(pidilizumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、曲美母单抗(tremelimumab)、尤瑞单抗(urelumab)、丽瑞单抗(lirilumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、杜伐单抗(durvalumab)、或其组合。
本发明第八方面，提供了一种本发明抗体的治疗用途。
本发明第九方面，提供了一种本发明抗体在治疗癌症中的应用。
在另一实施方式中，本发明提供了一种本发明抗体在治疗癌症中的应用，其中，所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、***癌、乳腺癌、卵巢癌或肝癌。
本发明第十方面，提供了本发明任一方面所述抗体与一种或多种抗肿瘤药同时、分别或序贯地在治疗癌症中的应用。
在一优选实施方式中，所述抗肿瘤药包括但不限于：雷莫芦单抗(ramucirumab)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、奥莱妥单抗(olaratumab)、格伦尼昔替(galunisertib)、阿贝马昔(abemaciclib)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、脂质体多柔比星(liposomal doxorubicin)、多烯紫杉醇(docetaxel)、环磷酰胺(cyclophosphamide)和多柔比星(doxorubicin)、诺维本(navelbine)、艾日布林(eribulin)、紫杉醇(paclitaxel)、紫杉醇蛋白结合的可注射悬浮颗粒、伊沙匹隆(ixabepilone)、卡培他滨(capecitabine)、FOLFOX(亚叶酸、氟尿嘧啶、和奥沙利铂)、FOLFIRI(亚叶酸、氟尿嘧啶和伊立替康)、西妥昔单抗(cetuximab)、纳武单抗(nivolumab)、易普利姆玛(ipilimumab)、匹迪珠单抗(pidilizumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、曲美母单抗(tremelimumab)、尤瑞单抗(urelumab)、丽瑞单抗(lirilumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、杜伐单抗(durvalumab)、或其组合。
在另一优选例中，所述抗肿瘤药为免疫-肿瘤药物。
在另一实施方式中，所述免疫-肿瘤药物选自下组：纳武单抗(nivolumab)、易普利姆玛(ipilimumab)、匹迪珠单抗(pidilizumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、曲美母单抗(tremelimumab)、尤瑞单抗(urelumab)、丽瑞单抗(lirilumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、杜伐单抗(durvalumab)、或其组合。
本发明第十一方面，提供了一种本发明抗体的用途，用于制备治疗癌症的药物。
在另一实施方式中，所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、***癌、乳腺癌、卵巢癌、或肝癌。
在另一实施方式中，所述药物组合物还包括一种或多种抗肿瘤药和/或免疫-肿瘤药物。
在另一实施方式中，所述药物组合物与一种或多种抗肿瘤药同时、分别或序贯联合施用于需要的对象。
在一优选实施方式中，所述抗肿瘤药包括但不限于：雷莫芦单抗(ramucirumab)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、奥莱妥单抗(olaratumab)、格伦尼昔替(galunisertib)、阿贝马昔(abemaciclib)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、脂质体多柔比星(liposomal doxorubicin)、多烯紫杉醇(docetaxel)、环磷酰胺(cyclophosphamide)和多柔比星(doxorubicin)、诺维本(navelbine)、艾日布林(eribulin)、紫杉醇(paclitaxel)、紫杉醇蛋白结合的可注射悬浮颗粒、伊沙匹隆(ixabepilone)、卡培他滨(capecitabine)、FOLFOX(亚叶酸、氟尿嘧啶、和奥沙利铂)、FOLFIRI(亚叶酸、氟尿嘧啶和伊立替康)、西妥昔单抗(cetuximab)、纳武单抗(nivolumab)、易普利姆玛(ipilimumab)、匹迪珠单抗(pidilizumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、曲美母单抗(tremelimumab)、尤瑞单抗(urelumab)、丽瑞单抗(lirilumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、杜伐单抗(durvalumab)、或其组合。
在另一优选例中，所述抗肿瘤药为免疫-肿瘤药物。
在另一实施方式中，所述免疫-肿瘤药物选自下组：纳武单抗(nivolumab)、易普利姆玛(ipilimumab)、匹迪珠单抗(pidilizumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、曲美母单抗(tremelimumab)、尤瑞单抗(urelumab)、丽瑞单抗(lirilumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、杜伐单抗(durvalumab)、或其组合。
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
具体实施方式
本发明抗体是一种工程化的、非天然存在多肽复合物。本发明的DNA分子是一种非天然存在的DNA分子，其含有一多核苷酸，所述多核苷酸编码一多肽，所述多肽具有本发明抗体中任一多肽的氨基酸序列。
本发明抗体被设计为工程化的CDR，并具有抗体的某些部分(框架区、铰链区以及恒定区的全部或部分)从而成为与人基因组序列来源的框架区和恒定区一致或基本一致(基本人源)的人源形式。完整的人框架区、铰链区和恒定区指的是那些人种系来源的序列，以及天然存在的体细胞突变型序列以及那些工程化突变序列。本发明的抗体可包括框架区、铰链区或恒定区，其来源于在其中含有一个或多个氨基酸替换、删除或增加的完整的人框架区、铰链区或恒定区。此外，本发明抗体优选是对于人基本无免疫原性的。
本发明抗体是一种IgG型抗体，且具有四条通过链内和链间二硫键互相交联的氨基酸链(两条“重”链和两条“轻”链)。各重链包含N-末端的HCVR以及重链恒定区(“HCCR”)。各轻链包含LCVR和轻链恒定区(“LCCR”)。当在特定生物***中表达时，具有初始人Fc序列的抗体在Fc区糖基化。通常，糖基化发生在所述抗体Fc区的高度保守性的N-糖基化位点。N-聚糖通常与天冬酰胺相连。抗体也可在其它位点进行糖基化。
任选地，本发明抗体含有衍生自人IgG4Fc区的Fc部分，由于与Fc受体介导的炎性机制结合能力降低或激活补体导致效应子功能降低。
S22P突变是铰链区的突变，其防止了半抗体的形成(IgG4抗体中半分子动态交换的现象)。F234A和L235A的突变进一步降低了人IgG4同种型已经很低的效应子功能。
所述HCVR和LCVR区还可以进一步被细分为超变异区域，被称为互补决定区(“CDR”)，其间穿插更加保守的框架区(“FR”)。每个HCVR和LCVR均由3个CDR和4个FR构成，以下列的顺序从氨基端到羧基端排列：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4。在本文中，重链的三个CDR被称为“HCDR1、HCDR2和HCDR3”，并且所述轻链的三个CDR被称为“LCDR1、LCDR2和LCDR3”。CDR包含了与抗原进行特异性反应的大部分残基。目前有三种用于序列描述的抗体CDR分配体系。Kabat CDR定义(Kabat等人，“免疫学上目标蛋白的序列-Sequences ofProteins of Immunological Interest”，国立卫生研究院-National Institutes ofHealth,Bethesda,Md.(1991))，其基于抗体序列的变异性。Chothia CDR定义(Chothia等人，“免疫球蛋白超变异区的经典结构-Canonical structures for the hypervariableregions of immunoglobulins”，分子生物学杂志-Journal of Molecular Biology,196,901-917(1987)；Al-Lazikani等，“免疫球蛋白经典结构的标准构型-Standardconformations for the canonical structures of immunoglobulins”，分子生物学杂志-Journal of Molecular Biology,273,927-948(1997))，其基于抗体的三维结构以及CDR环的拓扑结构。Chothia CDR定义与Kabat CDR定义除了HCDR1和HCDR2以外都是相同的。North CDR定义(North等人，“抗体CDR环构型的新分类-A New Clustering of AntibodyCDR Loop Conformations”，分子生物学杂志-Journal of Molecular Biology,406,228-256(2011))是基于大量晶体结构的亲和力传播分类。为了本发明目的，采用的是North CDR定义。
通过将编码HCVR的DNA与另一个编码重链恒定区的DNA分子进行可操作地连接，编码HCVR区的分离的DNA可与转变为全长重链基因。人类以及其它哺乳动物的重链恒定区基因序列是已知的。涵盖了这些区域的DNA片段可以通过例如标准的PCR扩增而获得。
通过将编码LCVR的DNA与另一个编码轻链恒定区的DNA分子进行可操作地连接，编码LCVR区的分离的DNA可与转变为全长轻链基因。人类以及其它哺乳动物的轻链恒定区基因序列是已知的。涵盖了这些区域的DNA片段可以通过例如标准的PCR扩增而获得。轻链恒定区可以是κ或λ恒定区。
当序列已经与表达控制序列可操作地连接之后，本发明多核苷酸可以在宿主细胞中表达。在宿主生物体中，表达载体通常以附加体或宿主染色体DNA的整合部分而可被复制。通常，表达载体包含了选择性标记，例如四环素、新霉素、二氢叶酸还原酶，从而监测那些用所需DNA序列转化的细胞。
本发明的抗体易于从哺乳细胞中产生，例如CHO、NS0、HEK293或COS细胞。宿主细胞采用本领域技术熟知的技术进行培养。
可以通过熟知的方法将含有目标多核苷酸序列(例如，编码抗体多肽的多核苷酸以及表达控制序列)的载体转入至宿主细胞中，其根据细胞宿主的类型而变化。
可以采用多种蛋白纯化方法，且这些方法在现有技术中已知并进行了描述，例如，Deutscher，酶学方法-Methods in Enzymology，182:83-89(1990)以及Scopes，蛋白纯化-Protein Purification：理论与实践；第三版，Spriger，NY(1994)。
在本发明的另一优选例中，所述抗体，或编码所述抗体的所述核酸以分离的形式提供。如本文所述，术语“分离的”是指在细胞环境中游离或基本上不含任何其它大分子物质的蛋白质、肽或核酸。如本文所述，“基本不含”指的是含有其它大分子物质20％以下(基于摩尔量)，优选10％以下，更优选地为5％以下。
本发明抗体，或含有本发明抗体的药物组合物，可以通过胃肠外途径进行施用(例如皮下和静脉)。本发明抗体可以与药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂以单剂或多剂的方式单独施用于患者。本发明药物组合物可以采用本领域熟知的方法制备(例如，Remington，药剂科学与技术-The Science and Practice of Pharmacy，第19版(1995)，A.Gennaro等,Mack Publishing Co。)，且其包含本文所述的抗体以及一种或多种药学上可接受的载体、稀释剂或赋形剂。
术语“治疗的”(或“治疗”或“疗法”)指的是减缓、干扰、停止、减轻、阻碍、减少或逆转现有症状、障碍、病症或疾病的进展或严重程度。
如本文所用，如未另行说明，“结合”指的是通过本领域常规方法(包括在37℃下使用表面等离子体共振(SPR)生物传感器，基本如本文所述)，参考人PD-1抗体亲和力，KD低于1×10-9M，优选地，低于2×10-10M。
为了本发明的目的，术语“高亲和力”指人PD-1的KD小于约150pM。通过结合动力学建立所述KD值，如“测定部分”中的“结合动力学和亲和力”所述。
本发明还提供了药物组合物，其含有本发明多肽或其同种型，以及安全有效量的药学上可接受的载体或赋形剂。这些载体包括但不限于：盐水、缓冲液、葡萄糖、水、甘油、乙醇或其组合。药物制剂应与施用方式相匹配。本发明药物组合物可以制备成注射剂形式，例如通过常规方法制备成含有葡萄糖或其它助剂的盐水或水性溶液。药物组合物，如片剂或胶囊剂，可以通过常规方法制备。药物组合物，如注射剂、溶液剂、片剂以及胶囊剂可优选在无菌环境下生产。活性成分的施用量是治疗有效量，例如，每天约1μg/kg(体重)-5mg/kg(体重)。此外，本发明的多肽还可与其它治疗药物共同施用。
“有效量”指的是本发明抗体或含有本发明抗体的药物组合物在组织、***、动物、哺乳动物或人类身上表现出生物学或医学反应或所需治疗作用的量，其为研究人员、医生或其他临床医生所寻。抗体的有效量可以根据各种因素而变化，例如疾病状态、年龄、性别以及个体的体重，和抗体在个体中表现出所需反应的能力。有效量也是治疗有益效果超过该抗体的任何毒性或不利影响的量。
本发明将进一步通过以下实施例进行阐述。这些实施例仅用于说明本发明，而并非限制本发明的范围。对于以下没有具体指出特定条件的实施例中的实验方法，它们即在常规条件下进行，例如，根据Sambrook等在分子克隆：实验室手册-Molecular Cloning:ALaboratory Manual，纽约：冷泉港实验室出版社-Cold Spring Harbor LaboratoryPress，2012；或按照生产商的指导进行。除非另行说明，百分比和份数均指重量百分比和重量份。
本发明主要优点：
xd-16B、xd-16C、xd-16D和xd-16E在单价和预期的结合模式下以高于派姆单抗和纳武单抗的亲和力与人PD-1结合。在免疫细胞的激活实验中，各浓度下的抗体xd-16B增加了IFN-γ的IL-2，并且与纳武单抗和派姆单抗相当或更好。
实施例
实施例1：抗体的表达和纯化
重链和轻链可变区的多肽、抗体A-抗体I的全长重链和轻链氨基酸序列以及编码它们的核苷酸序列，如下节“氨基酸和核苷酸序列”中所示。此外，抗体A-抗体I的轻链、重链、轻链可变区以及重链可变区的SEQ ID NO.如表1所示。
本发明的抗体，包括但不限于抗体A-抗体I，可大致通过如下方法进行制备和纯化。取合适的宿主细胞，例如HEK293或CHO，采用最佳预设HC：LC载体比例(比如1:3或1:2)或同时编码HC和LC的单独载体***作为可分泌抗体的的表达***进行瞬时或稳定转染。可使用许多常用的技术纯化已经分泌有抗体的澄清的培养基。例如，该培养基较易采用MabSelect柱(GE医疗)或KappaSelect柱(GE医疗)以获得Fab片段，采用相容缓冲液，例如采用磷酸盐缓冲液(pH7.4)进行平衡。对柱进行洗涤以去除非特异性结合成分。所结合的抗体可以用例如pH梯度进行洗脱(如20mM的pH7的Tris缓冲液到10mM的pH3.0的柠檬酸钠缓冲液，或pH7.4的磷酸盐缓冲液到100mM的pH3.0的甘氨酸缓冲液)。可通过SDS-PAGE对抗体部分进行检测，然后收集。可任选进行下一步的纯化，这取决于所需的用途。所述抗体可采用常规方法进行浓缩和/或无菌过滤。可溶性沉积物和多聚物可通过常规技术，包括体积排阻、疏水作用、离子交换、多重模态或羟磷灰石层析进行有效去除。经过这些层析步骤后，抗体的纯度大于95％。该产品可以在-70℃下立即冰冻或冻干。
表1：SEQ ID NOs
实验
结合动力学以及亲和力
采用MSD、表面等离子体共振(Biacore)、生物光干扰法(ForteBio)测定方法对本发明抗体对人PD-1的结合动力学以及解离平衡常数(KD)进行测定。
如本文所用，纳武抗体是一种在293HEK细胞中瞬时表达的人IgG4PD-1抗体，其利用从Proposed INN：List 107(CAS#946414-94-4)中获取的重链和轻链序列。如本文所用，派姆单抗是一种在293HEK细胞中瞬时表达的人IgG4PD-1抗体，其利用从Proposed INN：List72中获取的重链和轻链序列。
MSD测定
如在先文件中所述(Estep,P.等人,MAbs,2013.5(2):p.270-8)进行平衡亲和力测定。在PBS+0.1％的无IgG BSA(PBSF)中进行溶液平衡滴定(SET)，其中抗原(b-PD-1单体)保持在10-10pM不变，并且采用3-5倍连续稀释的Fab或mAb进行孵育，起始浓度为5-100nM(实验条件根据样本而不同)。将在20nM PBS中稀释的抗体涂覆于标准结合MSD-ECL板上，4℃过夜或室温下30min。用BSA封闭板30分钟，同时在700rpm下振荡。然后用洗涤缓冲液(PBSF+0.05％吐温20)洗涤板3次。上样SET样本，并在板上孵育150秒并在700rpm下振荡，然后洗涤一次。在板内孵育3分钟，采用250ng/mL磺基标签标记的链霉亲和素的PBSF检测捕获在板上的抗原。用洗涤缓冲液对板洗涤三次，然后采用含有表面活性剂的1×读数的缓冲液T在MSDSector Imager 2400设备上读数。作为Prism中滴定抗体的函数绘制游离抗原百分比，并代入二次方程以得出KD。为了加快输出，在整个MSD-SET实验中，包括在SET样本制备时均采用液体处理机器人。
在大致如上所述的实验中，xd-16B、xd-16C、xd-16D和xd-16E以IgG1的形式并在酵母中表达，分别以45pM、50pM、93pM和150pM的KD值与人PD-1相结合。派姆单抗和纳武单抗分别以130pM和640pM的KD值与PD-1相结合。对xd-16B、xd-16C、xd-16D和xd-16E进行有效性测定，结果的KD值大约分别为0.9pM、2.5pM、1.3pM和0.9pM。派姆单抗和纳武单抗分别以大约3pM和5pM的KD值与人PD-1结合。
表2：MSD测得的IgG1形式的本发明抗体的结合
生物光干扰测定法
基本如在先技术所述(Estep,P.等，高通量的基于溶液的测定抗体-抗原亲和力和表位分组－High throughput solution-based measurement of antibody-antigenaffinity and epitope binning.MAbs,2013.5(2):p.270-8.)，进行了ForteBio亲和力测定。简而言之，通过将IgG在线上样至AHQ传感器从而进行ForteBio亲和力测定。传感器在测试缓冲液中离线平衡30分钟，然后在线监测60秒建立基线。上样了IgG的传感器在100nM的抗原中暴露5分钟，然后转移至测试缓冲液中5分钟进行解离率测定。用1:1结合模型分析其动力学。
在大致如上所述的实验中，当PD-1_Fc在传感器端部时，从酵母表达的IgG1中产生的Fab形式的xd-16B、xd-16C、xd-16D和xd-16E以低于纳武单抗和派姆单抗大约2-3倍的KD值结合于人PD-1_Fc。当抗体在传感器的端部时，xd-16B、xd-16C、xd-16D和xd-16E为IgG1形式并在酵母中表达，以低于纳武单抗和派姆单抗约3-4倍的KD值结合于人PD-1_His。从酵母表达的IgG1中产生的Fab形式的xd-16B、xd-16C、xd-16D和xd-16E，以与纳武单抗和派姆单抗相似的KD值结合于cynoPD-1_Fc。
表3：生物光干扰测定法测得的IgG1形式的本发明抗体的结合
CHO细胞中与人PD-1的结合
本发明抗体与人PD-1的结合可通过流式细胞法测定。
在冰上，在1％BSA的PBS中，将CHO细胞(0.2×106)与来自200nM滴定的19×的因子为2的实验抗体一起孵育30分钟，从而达到0.381pM的最低浓度。然后洗涤细胞三次，再用第二抗体(经PE标记的，终浓度5μg/ml)在冰上，在1％BSA的PBS中孵育30分钟(避光)。洗涤细胞三次，并用流式细胞仪进行分析。在Accuri C6***(BD生物科学-BD Biosciences)上进行流式细胞分析并在C6软件上进行MFI计算。用Graphpad软件计算EC50。
在大致如上所述的实验中，xd-16B(IgG4 S228P)以剂量依赖性的方式与PD-1结合，EC50值(n＝1)为1.461nM，xd-16D(IgG4 S228P)以剂量依赖性的方式与PD-1结合，EC50值(n＝1)为1.471nM，纳武单抗(IgG4 S228P)以剂量依赖性的方式与PD-1结合，EC50值(n＝1)为1.311nM。在大致如上所述的实验中，在这些条件下，xd-16B和xd-16D以与纳武单抗类似的EC50与人PD-1结合。
表4：CHO细胞中与人PD-1的结合
在CHO细胞中阻断人PD-1与PD-L1和PD-L2的结合
可通过流式细胞仪测定本发明抗体阻断人PD-1与PD-L1和PD-L2的结合能力。
CHO细胞与实验抗体(100nM)在冰上，在1％BSA的PBS中孵育30分钟。然后洗涤细胞3次，用偶联了荧光素NHS(普洛麦格-Promega)的PD-L2在冰上的1％BSA的PBS中孵育30分钟(避光)。洗涤3次细胞，再通过流式细胞仪分析。流式细胞仪在Accuri C6***(BD生物科学)中进行，并在C6软件中计算MFI。在Graphpad软件上计算EC50。
在大致如上所述的实验中，xd-16B,xd-16C,xd-16D和xd-16E(以IgG1形式在酵母中表达)阻断了人PD-L2-FITC的结合，与对照IgG的MFI的182.959.1相比，MFI分别为26,445.9、26,524.8、39,983.1和40,867.9。派姆单抗和纳武单抗的MFI结果分别为46,245.9和54,509.8。
表5：在CHO细胞中阻断人PD-1
混合淋巴细胞反应
通过测定T细胞激活释放的抑制信号，从而评估本发明抗体对PD-1信号的阻断。
将2×106个PBMC在6孔组织培养板的每个孔或T25组织培养瓶的完全的T细胞培养基中铺板。细胞孵育2-3小时从而黏附单核细胞。若黏附不足，则采用无血清培养基。通过用3X的新鲜培养基轻轻旋转烧瓶来除去未附着的细胞。
通过在含有1％AB血清、10mM HEPES、50μMβ-Me、IL-4(1000U/ml)和GM-CSF(1000U/ml)，或每种取25-50ng/ml的X-VIVO 15培养基中培养来自PBMC的单核细胞(1×10 6个细胞/ml)以产生不成熟的骨髓DC。两天后，加入含有IL-4和GM-CSF的新鲜培养基。在第五天，将细胞进行冰冻或通过加入含有rTNFa(1000U/ml)、IL-1b(5ng/ml)、IL-6(10ng/ml)和1μMPGE2的刺激性混合物诱导成熟2天，细胞密度为3×105个细胞/ml。
T细胞按照未触碰的(Untouched)CD4+T细胞分离试剂盒(Invitrogen)中的制造商说明进行分离。使用装有1.5毫升管架的磁铁去除不需要的磁珠(QIAGEN)。
在37℃下，将100,000-200,000个分离的T细胞与10,000-20,000个同种异体moDC在总体积为200μl的96孔底组织培养板中混合4-5天。使用抗CD3/CD28 DynaBeads以3:1的比例(细胞：磁珠)作为阳性对照刺激T细胞；按照制造商的说明书制备磁珠。在MLR开始时加入测试抗体，并在整个培养期间孵育。
根据制造商的说明书(e生物科学-eBioscience)进行IL-2和IFN-γ的检测。在Multiskan FC***(Thermo)上测定OD。
在大致如上所述的实验中，相比纳武单抗和派姆单抗，各浓度下的抗体xd-16B增加了IFN-γ和IL-2。
表6：IL-2的分泌倍数变化vs.IgG对照
表7：IFN-γ分泌倍数变化vs.IgG对照
在本发明提及的所有文献都在本申请中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本申请所附权利要求书所限定的范围。
序列表
<110> 信达生物制药(苏州)有限公司
<120> PD-1抗体
<130> P2017-1871
<150> PCT/CN2016/102238
<151> 2016-10-15
<160> 30
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 288
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 1
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165 170 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180 185 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro
195 200 205
Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly
210 215 220
Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro
225 230 235 240
Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly
245 250 255
Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg
260 265 270
Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275 280 285
<210> 2
<211> 13
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 2
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<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 3
Gly Ile Trp Pro Ser Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 4
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 4
Gly Ile Trp Pro Ser Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Gln
1 5 10 15
Gly
<210> 5
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 5
Gly Ile Trp Pro Ser Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe Arg
1 5 10 15
Gly
<210> 6
<211> 17
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<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 6
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1 5 10 15
Gly
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<211> 17
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<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 7
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Gly
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<211> 13
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1 5 10
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<213> 人工序列(artificial sequence)
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1 5
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<213> 人工序列(artificial sequence)
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1 5
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<213> 人工序列(artificial sequence)
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20 25 30
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50 55 60
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65 70 75 80
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<213> 人工序列(artificial sequence)
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Thr
20 25 30
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35 40 45
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50 55 60
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<213> 人工序列(artificial sequence)
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Thr
20 25 30
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35 40 45
Gly Gly Ile Trp Pro Ser Phe Asp Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 17
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Thr
20 25 30
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Gly Gly Ile Trp Pro Ser Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Arg Lys Phe
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
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<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 18
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
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65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn His Leu Pro Phe
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Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
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<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 19
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Thr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Trp Pro Ser Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Ala Glu Tyr Ser Ser Thr Gly Thr Phe Asp Tyr Trp Gly Gln
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
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Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
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165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
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Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
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His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
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<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 20
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Thr
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35 40 45
Gly Gly Ile Trp Pro Ser Phe Gly Thr Ala Ser Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
Gln Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Glu Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
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130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
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Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
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Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
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Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
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Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
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Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
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405 410 415
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420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
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<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 22
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Thr
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Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Trp Pro Ser Phe Asp Thr Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe
50 55 60
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
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165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
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195 200 205
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210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
260 265 270
Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
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Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
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Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
340 345 350
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Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
370 375 380
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
405 410 415
Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 23
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 23
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Gly Thr Phe Ser Ser Thr
20 25 30
Ala Ile Ser Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Gly Ile Trp Pro Ser Phe Gly Thr Ala Asn Tyr Ala Arg Lys Phe
50 55 60
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Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val
115 120 125
Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val
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Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
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Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu
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Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
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Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
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Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile
325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
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Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
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Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
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420 425 430
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
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<210> 24
<211> 447
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 24
Gly Val Gly Leu Val Gly Ser Gly Ala Gly Val Leu Leu Pro Gly Ser
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Ala Ile Ser Thr Val Ala Gly Ala Pro Gly Gly Gly Leu Gly Thr Met
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Gly Gly Ile Thr Pro Ser Pro Gly Thr Ala Ala Thr Ala Ala Leu Pro
50 55 60
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65 70 75 80
Met Gly Leu Ser Ser Leu Ala Ser Gly Ala Thr Ala Val Thr Thr Cys
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Ala Ala Ala Gly Thr Ser Ser Thr Gly Ile Pro Ala Thr Thr Gly Gly
100 105 110
Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Leu Gly Pro Ser Val
115 120 125
Pro Pro Leu Ala Pro Cys Ser Ala Ser Thr Ser Gly Ser Thr Ala Ala
130 135 140
Leu Gly Cys Leu Val Leu Ala Thr Pro Pro Gly Pro Val Thr Val Ser
145 150 155 160
Thr Ala Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Pro Pro Ala Val
165 170 175
Leu Gly Ser Ser Gly Leu Thr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro
180 185 190
Ser Ser Ser Leu Gly Thr Leu Thr Thr Thr Cys Ala Val Ala His Leu
195 200 205
Pro Ser Ala Thr Leu Val Ala Leu Ala Val Gly Ser Leu Thr Gly Pro
210 215 220
Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Gly Pro Leu Gly Gly Pro Ser Val
225 230 235 240
Pro Leu Pro Pro Pro Leu Pro Leu Ala Thr Leu Met Ile Ser Ala Thr
245 250 255
Pro Gly Val Thr Cys Val Val Val Ala Val Ser Gly Gly Ala Pro Gly
260 265 270
Val Gly Pro Ala Thr Thr Val Ala Gly Val Gly Val His Ala Ala Leu
275 280 285
Thr Leu Pro Ala Gly Gly Gly Pro Ala Ser Thr Thr Ala Val Val Ser
290 295 300
Val Leu Thr Val Leu His Gly Ala Thr Leu Ala Gly Leu Gly Thr Leu
305 310 315 320
Cys Leu Val Ser Ala Leu Gly Leu Pro Ser Ser Ile Gly Leu Thr Ile
325 330 335
Ser Leu Ala Leu Gly Gly Pro Ala Gly Pro Gly Val Thr Thr Leu Pro
340 345 350
Pro Ser Gly Gly Gly Met Thr Leu Ala Gly Val Ser Leu Thr Cys Leu
355 360 365
Val Leu Gly Pro Thr Pro Ser Ala Ile Ala Val Gly Thr Gly Ser Ala
370 375 380
Gly Gly Pro Gly Ala Ala Thr Leu Thr Thr Pro Pro Val Leu Ala Ser
385 390 395 400
Ala Gly Ser Pro Pro Leu Thr Ser Ala Leu Thr Val Ala Leu Ser Ala
405 410 415
Thr Gly Gly Gly Ala Val Pro Ser Cys Ser Val Met His Gly Ala Leu
420 425 430
His Ala His Thr Thr Gly Leu Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Leu
435 440 445
<210> 31
<211> 214
<212> PRT
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 31
Asp Ile Gln Met Thr Gln Ser Pro Ser Ser Val Ser Ala Ser Val Gly
1 5 10 15
Asp Arg Val Thr Ile Thr Cys Arg Ala Ser Gln Gly Ile Ser Ser Trp
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Lys Ala Pro Lys Leu Leu Ile
35 40 45
Ser Ala Ala Ser Ser Leu Gln Ser Gly Val Pro Ser Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Gln Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Ala Asn His Leu Pro Phe
85 90 95
Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg Thr Val Ala Ala
100 105 110
Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln Leu Lys Ser Gly
115 120 125
Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr Pro Arg Glu Ala
130 135 140
Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser Gly Asn Ser Gln
145 150 155 160
Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr Tyr Ser Leu Ser
165 170 175
Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys His Lys Val Tyr
180 185 190
Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro Val Thr Lys Ser
195 200 205
Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210
<210> 25
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 25
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agcactgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atctggccta gttttggtac agcaaactac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc aagagccgag 300
tacagtagca caggaacctt tgattactgg ggacagggta cattggtcac cgtctcctca 360
gcttccacaa aaggccccag cgtgtttccc ctggcccctt gtagcaggtc cacctccgaa 420
agcacagccg ctctgggctg cctggtcaag gattacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480
tggaatagcg gcgctctcac atccggagtg catacctttc ctgccgtgct ccagtcctcc 540
ggcctgtact ccctgagctc cgtggtgacc gtcccttcca gctccctggg caccaagacc 600
tatacctgta acgtggacca caagccctcc aataccaagg tggataagcg ggtcgagtcc 660
aagtacggac ccccttgccc tccttgtcct gctcctgaat tcctcggcgg acctagcgtc 720
tttctcttcc cccccaagcc caaggatacc ctgatgatct ccaggacccc cgaggtgaca 780
tgcgtcgtgg tcgatgtgtc ccaggaggat cctgaagtgc agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtcgaag tgcataacgc caagaccaag cccagggagg agcagttcaa ctccacctat 900
cgggtggtga gcgtgctgac cgtgctgcat caggactggc tcaacggcaa agagtacaag 960
tgcaaggtct ccaacaaggg actcccctcc agcatcgaga agaccattag caaggccaaa 1020
ggccaaccca gggagcctca ggtatatacg ctgcccccca gccaggagga gatgaccaaa 1080
aaccaggtca gcctcacctg tctggtcaag ggcttctacc ctagcgacat tgctgtcgag 1140
tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tataaaacca ccccccctgt cctggactcc 1200
gacggatcct tcttcctgta ctccaggctg acagtcgaca agtcccggtg gcaagaggga 1260
aacgtcttct cctgctccgt gatgcacgaa gctctccaca accactacac ccagaagagc 1320
ctcagcctgt ccctgggcaa atgatga 1347
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列( )
caggtgcagc tggtgcagtc tggggctgag gtgaagaagc ctgggtcctc ggtgaaggtc 60
tcctgcaagg cttctggagg caccttcagc agcactgcta tcagctgggt gcgacaggcc 120
cctggacaag ggcttgagtg gatgggaggg atctggccta gttttggtac agcaagctac 180
gcacagaagt tccagggcag agtcacgatt accgcggacg aatccacgag cacagcctac 240
atggagctga gcagcctgag atctgaggac acggcggtgt actactgcgc aagagccgag 300
tacagtagca caggaatctt tgattactgg ggacagggta cattggtcac cgtctcctca 360
gcttccacaa aaggccccag cgtgtttccc ctggcccctt gtagcaggtc cacctccgaa 420
agcacagccg ctctgggctg cctggtcaag gattacttcc ccgagcccgt gaccgtgtcc 480
tggaatagcg gcgctctcac atccggagtg catacctttc ctgccgtgct ccagtcctcc 540
ggcctgtact ccctgagctc cgtggtgacc gtcccttcca gctccctggg caccaagacc 600
tatacctgta acgtggacca caagccctcc aataccaagg tggataagcg ggtcgagtcc 660
aagtacggac ccccttgccc tccttgtcct gctcctgaat tcctcggcgg acctagcgtc 720
tttctcttcc cccccaagcc caaggatacc ctgatgatct ccaggacccc cgaggtgaca 780
tgcgtcgtgg tcgatgtgtc ccaggaggat cctgaagtgc agttcaactg gtacgtggac 840
ggcgtcgaag tgcataacgc caagaccaag cccagggagg agcagttcaa ctccacctat 900
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tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tataaaacca ccccccctgt cctggactcc 1200
gacggatcct tcttcctgta ctccaggctg acagtcgaca agtcccggtg gcaagaggga 1260
aacgtcttct cctgctccgt gatgcacgaa gctctccaca accactacac ccagaagagc 1320
ctcagcctgt ccctgggcaa atgatga 1347
<210> 27
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 27
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<210> 28
<211> 1347
<212> DNA
<213> 人工序列(artificial sequence)
<400> 28
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<211> 648
<212> DNA
<213> 人工序列( )
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ccccgggagg ccaaggtgca gtggaaggtc gacaatgccc tgcagagcgg caactcccag 480
gagagcgtga ccgagcagga cagcaaggac tccacctact ccctgagctc caccctgaca 540
ctgtccaagg ccgactacga gaagcacaag gtgtacgcct gcgaggtgac acaccagggc 600
ctgagctccc ccgtgaccaa gtccttcaac aggggcgagt gctgatga 648

Claims (36)

1.一种结合人PD-1(SEQ ID NO.:1)的抗体，其特征在于，包含轻链(LC)和重链(HC)，其中，
所述轻链包含轻链互补决定区LCDR1、LCDR2和LCDR3，分别由氨基酸序列SEQ ID NO.:10、11、12构成，和
所述重链包括重链互补决定区HCDR1、HCDR2和HCDR3，其中，
HCDR1由如SEQ ID NO:2所示的氨基酸序列构成；
HCDR2由如SEQ ID NO:3、4、5、6或7所示的氨基酸序列构成；
HCDR3由如SEQ ID NO:8或9所示的氨基酸序列构成。
2.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，HCDR1、HCDR2和HCDR3分别由如SEQ ID NO.:2、3和8所示的氨基酸序列构成。
3.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，HCDR1、HCDR2和HCDR3分别由如SEQ ID NO.:2、4和9所示的氨基酸序列构成。
4.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，HCDR1、HCDR2和HCDR3分别由如SEQ ID NO.:2、5和8所示的氨基酸序列构成。
5.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，HCDR1、HCDR2和HCDR3分别由如SEQ ID NO.:2、6和8所示的氨基酸序列构成。
6.如权利要求1所述的抗体，其特征在于，HCDR1、HCDR2和HCDR3分别由如SEQ ID NO.:2、7和9所示的氨基酸序列构成。
7.一种抗体，其特征在于，包含1或2条轻链(LC)以及1或2条重链(HC)，其中各轻链包含一轻链可变区(LCVR)且各重链包含一重链可变区(HCVR)，其中所述的LCVR具有如SEQ IDNO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有SEQ ID NO.:13、SEQ ID NO.:14、SEQ ID NO.:15、SEQ ID NO.:16、或SEQ ID NO.:17所示的氨基酸序列。
8.如权利要求7所述的抗体，其特征在于，所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有如SEQ ID NO.:13所示的氨基酸序列。
9.如权利要求7所述的抗体，其特征在于，所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有如SEQ ID NO.:14所示的氨基酸序列。
10.如权利要求7所述的抗体，其特征在于，所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有如SEQ ID NO.:15所示的氨基酸序列。
11.如权利要求7所述的抗体，其特征在于，所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有如SEQ ID NO.:16所示的氨基酸序列。
12.如权利要求7所述的抗体，其特征在于，所述LCVR具有如SEQ ID NO.:18所示的氨基酸序列，且所述HCVR具有如SEQ ID NO.:17所示的氨基酸序列。
13.如权利要求7所述的抗体，其特征在于，所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:19、SEQ ID NO.:20、SEQ ID NO.:21、SEQ ID NO.:22或SEQ ID NO.:23所示的氨基酸序列。
14.如权利要求13所述的抗体，其特征在于，所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:19所示的氨基酸序列。
15.如权利要求13所述的抗体，其特征在于，所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:20所示的氨基酸序列。
16.如权利要求13所述的抗体，其特征在于，所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:21所示的氨基酸序列。
17.如权利要求13所述的抗体，其特征在于，所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:22所示的氨基酸序列。
18.如权利要求13所述的抗体，其特征在于，所述LC具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且所述HC具有如SEQ ID NO.:23所示的氨基酸序列。
19.如权利要求13所述的抗体，其特征在于，包含两条轻链和两条重链，其中各轻链具有SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:19、SEQ ID NO.:20、SEQID NO.:21、SEQ ID NO.:22或SEQ ID NO.:23所示的氨基酸序列。
20.如权利要求19所述的抗体，其特征在于，各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:19所示的氨基酸序列。
21.如权利要求19所述的抗体，其特征在于，各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:20所示的氨基酸序列。
22.如权利要求19所述的抗体，其特征在于，各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:21所示的氨基酸序列。
23.如权利要求19所述的抗体，其特征在于，各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:22所示的氨基酸序列。
24.如权利要求19所述的抗体，其特征在于，各轻链具有如SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列，且各重链具有如SEQ ID NO.:23所示的氨基酸序列。
25.如权利要求19-24任一所述的抗体，其特征在于，一条重链与一条轻链之间形成了一对链间二硫键，且另一条重链与另一条轻链形成了一对链间二硫键，且其中一条重链与另一条重链形成了两对链间二硫键。
26.如权利要求1-24任一所述的抗体，其特征在于，所述抗体是经过糖基化的。
27.一种哺乳动物细胞，其特征在于，含有DNA分子，所述DNA分子含有编码具有SEQ IDNO.:24所示氨基酸序列的多肽的多核苷酸序列以及编码如SEQ ID NO.:20所示氨基酸序列的多肽的多核苷酸序列，其中所述细胞可表达一种抗体，所述抗体含有如SEQ ID NO.:24所示氨基酸序列的轻链以及如SEQ ID NO.:20所示氨基酸序列的重链，较佳地，所述哺乳动物细胞为CHO细胞。
28.一种生产抗体的方法，所述抗体含有轻链和重链，所述轻链具有SEQ ID NO.:24所示的氨基酸序列且所述重链具有如SEQ ID NO.:20所示的氨基酸序列，其特征在于，包括：在抗体表达的条件下，培养权利要求27所述的哺乳动物细胞，和收集所述表达的抗体。
29.一种权利要求28所述方法生产的抗体。
30.一种药物组合物，其特征在于，含有权利要求1-26任一所述的抗体，以及药学上可接受的载体。
31.一种权利要求1-26任一所述抗体的用途，其特征在于，用于制备治疗癌症的药物。
32.如权利要求31所述抗体的用途，其特征在于，所述癌症是黑色素瘤、肺癌、头颈癌、结直肠癌、胰腺癌、胃癌、肾癌、膀胱癌、***癌、乳腺癌、卵巢癌、或肝癌。
33.如权利要求31-32所述抗体的用途，其特征在于，所述药物与一种或多种抗肿瘤药同时、分别或序贯联合施用于需要的对象。
34.如权利要求33所述抗体的用途，其特征在于，所述抗肿瘤药选自下组：雷莫芦单抗(ramucirumab)、耐昔妥珠单抗(necitumumab)、奥莱妥单抗(olaratumab)、格伦尼昔替(galunisertib)、阿贝马昔(abemaciclib)、顺铂(cisplatin)、卡铂(carboplatin)、达卡巴嗪(dacarbazine)、脂质体多柔比星(liposomal doxorubicin)、多烯紫杉醇(docetaxel)、环磷酰胺(cyclophosphamide)和多柔比星(doxorubicin)、诺维本(navelbine)、艾日布林(eribulin)、紫杉醇(paclitaxel)、紫杉醇蛋白结合的可注射悬浮颗粒、伊沙匹隆(ixabepilone)、卡培他滨(capecitabine)、FOLFOX(亚叶酸、氟尿嘧啶、和奥沙利铂)、FOLFIRI(亚叶酸、氟尿嘧啶和伊立替康)、西妥昔单抗(cetuximab)、纳武单抗(nivolumab)、易普利姆玛(ipilimumab)、匹迪珠单抗(pidilizumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、曲美母单抗(tremelimumab)、尤瑞单抗(urelumab)、丽瑞单抗(lirilumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、杜伐单抗(durvalumab)、或其组合。
35.如权利要求33所述的用途，其特征在于，所述抗肿瘤药为免疫-肿瘤药物。
36.如权利要求35所述的用途，其特征在于，所述免疫-肿瘤药物选自下组：纳武单抗(nivolumab)、易普利姆玛(ipilimumab)、匹迪珠单抗(pidilizumab)、派姆单抗(pembrolizumab)、曲美母单抗(tremelimumab)、尤瑞单抗(urelumab)、丽瑞单抗(lirilumab)、阿特珠单抗(atezolizumab)、杜伐单抗(durvalumab)、或其组合。
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