CN107880142A - 一种辣木根粗多糖的制备方法及其应用 - Google Patents

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王磊
陈晓阳
崔璨
任政华
刘泽平
叶佩仪
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    • C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
    • C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
    • C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
    • C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass

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Abstract

本发明公开了一种辣木根中粗多糖的提取方法，具体步骤可概括为：(1)超声辅助热水浸提。(2)复合酶制剂脱蛋白。按照本发明提供的方法能够实现辣木根多糖提取率较高的目标，且具有成本低廉，操作简便，工艺简单的优点。本发明制备的辣木根粗多糖无毒，且具有显著的抗氧化活性，可应用于水产、畜牧等的新型抗氧化饲料添加剂领域。

Description

一种辣木根粗多糖的制备方法及其应用
技术领域
本发明涉及一种辣木根粗多糖的提取纯化方法及其应用，属于天然产物化学领域及水产畜牧养殖领域。
背景技术
辣木，又称为鼓槌树，主要生长于热带以及亚热带国家和地区，因其含有丰富的营养成分、具有广泛的应用前景，获得了人们越来越多的青睐。早在古罗马时期，人们就已经开始提取辣木油作为香水使用。辣木味微辛、微苦、无刺激性，其全身均可用作食物，在作为营养补充剂的同时也可用于临床上止痛降压、预防免疫力低下、治疗高血压和糖尿病等方面。
鉴于辣木极高的营养价值，其营养成分的提取技术便成为了研究的重点，近年来对于茎叶中多糖提取和功能应用研究较多，比如梁鹏发表的“辣木茎叶中水溶性多糖的提取及抗氧化活性的研究”中指出辣木叶多糖的最佳提取条件为浸提时间120min、浸提温度80℃、料液比为1∶25(g/mL)，多糖的最高得率为5.66％。专利“一种辣木叶多糖的制备方法及其用途”公开的一种辣木叶多糖的制备方法是采用微波-超声协同提取，盐酸法脱蛋白，该方法制备的多糖对高尿酸症具有较好的治疗效果。但是，关于辣木根多糖等营养成分的提取工艺及应用研究甚少。
发明内容
鉴于目前辣木根粗多糖研究的空白，本发明的目的在于提供一种辣木根粗多糖的制备方法及其用途。
一种辣木根粗多糖的制备方法，包括以下步骤：
(1)超声辅助热水浸提
称取一定量已烘干的辣木根，将其清洗干净，按照1∶20的料液比加入一定量的水，80℃浸提2小时，50℃超声水浴1小时，得到辣木根粗多糖的提取液。重复上述步骤2-3次，合并提取液。
(2)悬蒸浓缩处理
将步骤(1)中的粗多糖提取液置于50℃-60℃，800W下悬蒸处理，直至浓缩液体积约为原提取液体积的1/3。
(3)复合酶制剂脱蛋白
将步骤(2)中得到的悬蒸液置于7800rpm，4℃下离心10min，取上清液，加入3倍体积的无水乙醇，置于4℃冰箱内沉淀过夜，然后在7000rpm，4℃下离心5min，得到的沉淀即为植物粗多糖。向粗多糖沉淀中加入少量的去离子水，充分复溶，采用木瓜蛋白酶∶纤维素酶∶碱性蛋白酶＝5∶3∶2的配比量作为复合酶制剂，在pH8，温度为55℃下水解蛋白2.5h，7000rpm，4℃下离心去沉淀，取上清液，反复2-3次，向得到的上清液中加入4倍体积的无水乙醇，4℃下醇沉过夜，7000rpm，4℃下离心处理，将得到的沉淀晾干、称重，即为粗多糖的重量。
本发明的有益效果是：本发明提供的辣木根多糖制备工艺简单，提取率高，成本低，该发明制备的辣木根粗多糖具有抗氧化活性，且动物实验表明没有毒性，可应用于新型抗氧化饲料添加剂的制备，适于产业化推广。
具体实施方式
下面，结合实施例对本发明做进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护之中。
实施例1 辣木根粗多糖的制备
(1)超声辅助热水浸提
称取100g已烘干的辣木根，清洗干净，按照1∶20的料液比加入2000mL的水，在80℃下浸提2h，50℃超声水浴处理1h得到辣木根粗多糖的提取液，以上步骤反复3次，合并提取液。
(2)悬蒸浓缩处理
将步骤(1)中的粗多糖提取液置于56℃，800W下悬蒸处理，直至浓缩液体积约为原提取液体积的1/2。
(3)复合酶制剂脱蛋白
将步骤(2)中得到的悬蒸液置于7800rpm，4℃下离心10min，取上清液，加入3倍体积的无水乙醇，置于4℃冰箱内沉淀过夜，7000rpm，4℃下离心5min，将沉淀复溶，采用木瓜蛋白酶∶纤维素酶∶碱性蛋白酶＝5∶3∶2的配比量作为复合酶制剂，在PH为8，温度为55℃下水解蛋白，7000rpm，4℃下离心去沉淀，取上清液，反复2次，向得到的上清液中加入4倍体积的无水乙醇，4℃下醇沉过夜，7000rpm，4℃下离心处理，将得到的沉淀晾干、称重，辣木根粗多糖的得率为24.8％。
实施例2 辣木根粗多糖的抗氧化活性测定
将多糖溶液稀释成0.5mg/mL、1mg/mL、2mg/mL、4mg/mL、8mg/mL、16mg/mL的浓度梯度，按照以下方法分别配制A0空白管、A1样品管、A2本底管。
A0空白管：1mLFeSO4溶液+1mLH2O2溶液+0.2mL蒸馏水
A1样品管：1mLFeSO4溶液+1mLH2O2溶液+0.2mL样品溶液
A2本底管：1mLFeSO4溶液+1mL蒸馏水+0.2mL样品溶液
(其中FeSO4溶液：1mmol/L H2O2溶液：3mmol/L)
A0、A1、A2管都用3mmol/L的水杨酸溶液定容至5mL。
将配好的溶液置于37±0.1℃水浴锅内反应15min，在519nm处测定它们的吸光度。
SA(％)＝{[A0-(A1-A2)]}×100
计算出它们的吸光度，绘制出浓度-清除率曲线，结果如表1，得到辣木根多糖浓度为4mg/ml时，其羟基自由基的清除率达到为74.919％。
表1 实验各管吸光度值与对·OH自由基的清除率SA(％)
实施例3 辣木根粗多糖的毒性测定
购买20只状态良好，20g左右重的KM鼠，清洁级，雄性。每5只1组，3组为实验组，1组为对照组，提供充足的水，每周按时更换垫料。实验组每天灌胃辣木根粗多糖1g，连续7天，观察KM鼠状况。结果发现：小鼠单次给药当天，未见死亡，且毛色光洁、活动正常、饮食正常；连续给药并持续观察7天，各组小鼠精神活跃，活动正常，体重、摄食及饮水正常，且未见死亡；实验后处死小鼠，肉眼检查重要脏器，未发现明显器质性病变。由此提示在当前剂量下，本发明获得的辣木粗多糖未见明显毒性反应，结果如表2。
表2 连续给药后观察7天的实验记录

Claims (2)

1.一种辣木根粗多糖的提取工艺，其特征在于：(1)超声-热水浸提，按照1∶20的料液比加入清洗干净的辣木根及水，80℃浸提2小时，50℃超声水浴1小时，反复2-3次，得到辣木根粗多糖的提取液。(2)复合酶制剂脱蛋白，粗多糖浓缩提取液采用木瓜蛋白酶∶纤维素酶∶碱性蛋白酶＝5∶3∶2的配比量作为复合酶制剂进行生物降解除蛋白。
2.根据权利要求1所述的具有抗氧化活性的辣木根粗多糖在制备饲料添加剂领域的应用。
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