CN103864949A - 利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法，以玛咖为原料，经水（或酸水）提取、醇提取、微滤、酶解、纳滤、喷雾干燥等步骤顺次制备玛咖多糖及玛咖生物碱。玛咖多糖及生物碱是玛咖中重要的功能性成分，本发明采用膜分离技术联合酶解技术将二者高效分离出来，工艺简便易行，生产成本低，便于工业化生产。制备所得的玛咖多糖具有显著的提高免力功效，制备所得的玛咖生物碱具有抗疲劳，提高***数量的效果。
Description
技术领域
本发明涉及天然产物分离领域，具体地涉及利用膜技术联合酶解法制备玛咖功能性成分的方法及应用。
背景技术
玛咖（Lepidium meyenii Walp.)，又名Maca，为形似萝卜的块根类植物，属十字花科，原产秘鲁中部海拔4000米以上的安第斯山区。由于Maca耐低温、大风，能在恶劣的生态条件下生长，成为当地主要作物之一。常年的食用经验和研究表明Maca营养丰富，具有提高人畜生育能力、改善性功能、抑制***增大、抗疲劳、抗抑郁、改善骨质疏松、提高记忆力等作用，引起世人广泛关注，并于近几年逐步进入中国市场。
玛咖营养成分丰富，据测定，云南玛咖干样中含蛋白质12.31%、粗纤维32.57%、脂肪0.92%、VC314.97mg/kg、钙1818mg/kg、铁81.2mg/kg、锌23.8mg/kg、钾18.7mg/kg、磷1895mg/kg等多种营养成分，脂肪酸中含有38.64%亚油酸、26.46%亚麻酸、17.73%棕榈酸，同时富含14.04%氨基酸。除此之外，玛咖还含有其他活性成分如玛咖多糖、玛咖酰胺(mecamide)、玛咖烯(maceaen)、含硫的酯甙(glucosinolates)、生物碱等，具有增强人体免疫力、快速恢复体力、消除疲劳等功效，近几年来，引起国际保健食品、医药界的高度重视。
生物碱（Alkaloids）是多存在于植物体内的一类含氮的碱性有机物，大多数具有包含氮原子的复杂环状结构，且具有显著的生物活性，是中草药中重要的有效成分之一。同时生物碱也是玛咖重要的活性有效成分之一，在玛咖研究的早期就受到了众多科学研究者的极大关注。
植物多糖有多种多样的生物活性功能，以及在功能食品和临床上的广泛使用，使得植物多糖的研究成为近年来的热点。到目前为止，已有三百多种多糖类化合物从天然产物中分离出来，其中从植物中提取的水溶性多糖最为重要。这些多糖具有非常重要与特殊的生理活性，具有如免疫调节、抗肿瘤、降血糖、降血脂、抗辐射、抗病毒、抗炎、抗疲劳、抗衰老等生物活性功能。
发明内容
本发明的技术解决问题：克服现有技术的不足，提供一种工艺简单，易操作，对生产设备适应性强，易于工业化生产的玛咖多糖、玛咖生物碱的制备方法，本发明目的是通过如下技术方案实现的：
利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法，包括以下步骤：
步骤（1），玛咖经粉碎，按照料液比1:10～1:40加水充分混合，在温度20～90℃条件下，提取1～2h，固液分离得玛咖提取液A及提取渣A；
其中，提取方式可以采取加热搅拌提取，也可以采用超声波辅助提取；
步骤（2），提取渣A和体积分数为20～100%的乙醇按照料液比1:5～1:20混合，在温度20～90℃条件下，提取1～2h，固液分离得玛咖提取液B及提取渣B；
其中，提取方式可以采取加热搅拌提取，也可以采用超声波辅助提取；
步骤（3），提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用微孔滤膜进行过滤除杂，得滤液C；
步骤（4），滤液C加蛋白酶，酶解1～5h，采用分子量范围为3000～5000Da的纳滤膜过滤酶解液，得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；
步骤（5），滤液D加多糖水解酶，酶解1～3h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸等；然后所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
步骤（6），滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱。
所述步骤（1）中玛咖与水的料液比1:20～1:40。
所述步骤（1）中玛咖与水的料液比1:20～1:30。
所述步骤（1）中水是浓度0.5-2%的无机酸水溶液，所述无机酸为盐酸、硫酸或磷酸中的一种或几种组合。
所述步骤（2）中提取渣A和体积分数为60-65%的乙醇按照料液比1:10～1:15混合。
所述步骤（1）和步骤（2）中采用超声波提取时，提取温度为20～40℃。
所述步骤（1）中采用超声波提取时，超声功率50～2000W/h/L（W/h/L即每升提取液每小时接收的超声能量），优选1000W/h/L；占空比1:1～1:5，优选1:2；转速600～1500rpm，优选1200rpm。
所述步骤（2）中采用超声提取时，超声功率20～2000W/h/L，优选800W/h/L；占空比1:1～1:5，优选1:2；转速500～1500rpm，优选1000rpm。
所述步骤（3）中微孔滤膜的孔径为0.1～10μm，滤膜为无机类、聚砜类、含氟高分子材料类、聚酰胺类、聚烯烃类、纤维素类或甲壳素类膜材料中的一种几种混合膜，其中优选陶瓷膜。
所述步骤（4）中纳滤膜截留部分为玛咖多糖，玛咖多糖用80～85%乙醇反复冲洗2～3次，以除去残留的单糖、色素及小分子物质。
所述步骤（4）中蛋白酶为胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）、嗜热菌蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、葡萄球菌蛋白酶和梭菌蛋白酶的一种或几种。
所述步骤（5）中多糖水解酶为淀粉酶、木聚糖酶、几丁质酶、纤维素酶、溶菌酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、β-半乳糖苷酶中的一种或几种。
所述步骤（6）中喷雾干燥条件为：进风温度为150～220℃，优选180～200℃，更优选180℃；出风温度为60～130℃，优选80～100℃，更优选90℃；蒸发速度1～200L/h。
所述步骤（6）所得的滤液E经柱层析纯化能够得80%-99%高纯度的玛咖酰胺，所述的柱层析选用反相C18柱或硅胶柱。
上述述的玛咖多糖及玛咖生物碱的用途，所述玛咖提取物在功能性食品、保健品、药品中的应用。
本发明与现有技术相比的优点在于：本发明采用膜过滤技术联合酶解技术对玛咖多糖及玛咖生物碱进行分离，一个工艺顺次将二者分离出来，整个工艺简便易行，生产成本低，便于工业化生产。制备所得的玛咖多糖具有显著的提高免力、抗疲劳功效，制备所得的玛咖生物碱具有提高***数量的效果。
附图说明
图1本发明的工艺技术流程图。
具体实施方式
下面结合附图及具体实施例详细介绍本发明。但以下的实施例仅限于解释本发明，本发明的保护范围应包括权利要求的全部内容，不仅仅限于本实施例。
实施例1利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法
（1）玛咖经粉碎，按照料液比1:10加水充分混合，在温度90℃条件下，搅拌提取1h，固液分离得玛咖提取液A及提取渣A；
（2）提取渣A和体积分数为20%的乙醇按照料液比1:5混合，在温度90℃条件下，搅拌提取1h，固液分离得玛咖提取液B及提取渣B；
（3）提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用0.1μm微孔滤膜进行过滤除杂，得滤液C；滤膜为无机类滤膜；
（4）滤液C加胰蛋白酶，酶解1h，采用分子量范围为3000的纳滤膜过滤酶解液，得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；玛咖多糖用80乙醇反复冲洗2次，以除去残留的单糖、色素及小分子物质；
（5）滤液D加淀粉酶，酶解1h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸等；然后所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
（6）滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱，喷雾干燥条件为：进风温度为150℃，出风温度为60，蒸发速度1L/h。
实施例2利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法
（1）玛咖经粉碎，按照料液比1:10加酸水充分混合，在温度90℃条件下，搅拌提取1h，固液分离得玛咖提取液A及提取渣A；
其中酸水为0.5%的盐酸水溶液；
（2）提取渣A和体积分数为20%的乙醇按照料液比1:5混合，在温度90℃条件下，搅拌提取1h，固液分离得玛咖提取液B及提取渣B；
（3）提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用0.1μm微孔滤膜进行过滤除杂，得滤液C；滤膜为无机类滤膜；
（4）滤液C加胰蛋白酶，酶解1h，采用分子量范围为3000的纳滤膜过滤酶解液，得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；玛咖多糖用80乙醇反复冲洗2次，以除去残留的单糖、色素及小分子物质；
（5）滤液D加淀粉酶，酶解1h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸等；然后所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
（6）滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱，喷雾干燥条件为：进风温度为150℃，出风温度为60，蒸发速度1L/h。
实施例3利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法
（1）玛咖经粉碎，按照料液比1:40加水充分混合，在温度20℃条件下，超声提取2h，超声功率50W/h/L（W/h/L即每升提取液每小时接收的超声能量），占空比1:1，转速600rpm，固液分离得玛咖提取液A及提取渣A；
（2）提取渣A和体积分数为100%的乙醇按照料液比1:20混合，在温度20℃条件下，提取2h，超声功率2000W/h/L，占空比1:5，转速1500rpm。固液分离得玛咖提取液B及提取渣B；
（3）提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用10μm微孔陶瓷膜进行过滤除杂，得滤液C；
（4）滤液C加胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶），酶解5h，采用分子量范围为5000Da的纳滤膜过滤酶解液，得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；玛咖多糖用85%乙醇反复冲洗3次，以除去残留的单糖、色素及小分子物质；
（5）滤液D加木聚糖酶，酶解3h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸等；然后所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
（6）滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱，喷雾干燥条件为：进风温度为220℃，，出风温度为130℃，蒸发速度200L/h。
实施例4利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法
（1）玛咖经粉碎，按照料液比1:40加酸水充分混合，在温度20℃条件下，超声提取2h，超声功率50W/h/L（W/h/L即每升提取液每小时接收的超声能量），占空比1:1，转速600rpm，固液分离得玛咖提取液A及提取渣A；
其中酸水为2%的硫酸水溶液；
（2）提取渣A和体积分数为100%的乙醇按照料液比1:20混合，在温度20℃条件下，提取2h，超声功率2000W/h/L，占空比1:5，转速1500rpm。固液分离得玛咖提取液B及提取渣B；
（3）提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用10μm微孔陶瓷膜进行过滤除杂，得滤液C；
（4）滤液C加胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶），酶解5h，采用分子量范围为5000Da的纳滤膜过滤酶解液，得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；玛咖多糖用85%乙醇反复冲洗3次，以除去残留的单糖、色素及小分子物质；
（5）滤液D加木聚糖酶，酶解3h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸等；然后所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
（6）滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱，喷雾干燥条件为：进风温度为220℃，，出风温度为130℃，蒸发速度200L/h。
实施例5利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法
（1）玛咖经粉碎，按照料液比1:30加水充分混合，在温度50℃条件下，搅拌提取1.5h，固液分离得玛咖提取液A及提取渣A；
（2）提取渣A和体积分数为85%的乙醇按照料液比1:10混合，在温度30℃条件下，超声提取2h，超声功率1000W/h/L，占空比1:3，转速1000rpm，固液分离得玛咖提取液B及提取渣B；
（3）提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用0.22μm聚砜类微孔滤膜进行过滤除杂，得滤液C；
（4）滤液C加嗜热菌蛋白酶，酶解3h，采用分子量范围为4000Da的纳滤膜过滤酶解液，得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；玛咖多糖用80%乙醇反复冲洗，以除去残留的单糖、色素及小分子物质；
（5）滤液D加几丁质酶与木聚糖酶混合酶，酶解1h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸等；然后所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
（6）滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱，喷雾干燥条件为：进风温度为200℃，出风温度为100℃，蒸发速度100L/h。
实施例6利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法
（1）玛咖经粉碎，按照料液比1:20加水充分混合，在温度40℃条件下，超声提取1h，超声功率100W/h/L，占空比1:4，转速8500rpm，固液分离得玛咖提取液A及提取渣A；
（2）提取渣A和体积分数为60%的乙醇按照料液比1:15混合，在温度80℃条件下，搅拌提取2h，固液分离得玛咖提取液B及提取渣B；
（3）提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用10μm聚酰胺类微孔滤膜进行过滤除杂，得滤液C；
（4）滤液C加嗜热菌蛋白酶、胃蛋白酶及木瓜蛋白酶的混合酶，酶解3h，采用分子量范围为3000Da的纳滤膜过滤酶解液，得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；玛咖多糖用80%乙醇反复冲洗，以除去残留的单糖、色素及小分子物质；
（5）滤液D加入溶菌酶、果胶的混合酶，酶解1h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸等；然后所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
（6）滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱，喷雾干燥条件为：进风温度为180℃；出风温度为90℃；蒸发速度10L/h。
实施例7利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法
（1）玛咖经粉碎，按照料液比1:20加酸水充分混合，在温度40℃条件下，超声提取1h，超声功率100W/h/L，占空比1:4，转速8500rpm，固液分离得玛咖提取液A及提取渣A；
其中酸水为1.5%的磷酸水溶液；
（2）提取渣A和体积分数为60%的乙醇按照料液比1:15混合，在温度80℃条件下，搅拌提取2h，固液分离得玛咖提取液B及提取渣B；
（3）提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用10μm聚酰胺类微孔滤膜进行过滤除杂，得滤液C；
（4）滤液C加嗜热菌蛋白酶、胃蛋白酶及木瓜蛋白酶的混合酶，酶解3h，采用分子量范围为3000Da的纳滤膜过滤酶解液，得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；玛咖多糖用80%乙醇反复冲洗，以除去残留的单糖、色素及小分子物质；
（5）滤液D加入溶菌酶、果胶的混合酶，酶解1h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸等；然后所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
（6）滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱，喷雾干燥条件为：进风温度为180℃；出风温度为90℃；蒸发速度10L/h。
实施例8利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法
（1）玛咖经粉碎，按照料液比1:30加水充分混合，在温度70℃条件下，提取2h，固液分离得玛咖提取液A及提取渣A；
（2）提取渣A和体积分数为65%的乙醇按照料液比1:20混合，在温度30℃条件下，超声提取2h，超声功率800W/h/L；占空比1:2；转速1000rpm，固液分离得玛咖提取液B及提取渣B；
（3）提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用0.1μm纤维素类微孔滤膜进行过滤除杂，得滤液C；
（4）滤液C加木瓜蛋白酶、葡萄球菌蛋白酶和梭菌蛋白酶的混合酶，酶解1～5h，采用分子量范围为5000Da的纳滤膜过滤酶解液，得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；玛咖多糖用80乙醇反复冲洗2～3次，以除去残留的单糖、色素及小分子物质；
（5）滤液D加果胶酶、β-葡聚糖酶、β-半乳糖苷酶的混合酶，酶解3h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸等；然后所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
（6）滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱，喷雾干燥条件为：进风温度为190℃，出风温度为110℃，蒸发速度，50L/h。
实施例9利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法
（1）玛咖经粉碎，按照料液比1:40加水充分混合，在温度30℃条件下，超声提取1.5h，超声功率1000W/h/L，占空比1:4，转速800rpm，固液分离得玛咖提取液A及提取渣A；
（2）提取渣A和体积分数为55%的乙醇按照料液比1:10混合，在温度90℃条件下，搅拌提取2h，固液分离得玛咖提取液B及提取渣B；
（3）提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用5μm氟高分子材料类微孔滤膜进行过滤除杂，得滤液C；
（4）滤液C加嗜热菌蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、葡萄球菌蛋白酶混合酶，酶解1.5h，采用分子量范围为3000～5000Da的纳滤膜过滤酶解液得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；玛咖多糖用80%乙醇反复冲洗，以除去残留的单糖、色素及小分子物质；
（5）滤液D加纤维素酶、溶菌酶、果胶酶混合多糖水解酶，酶解2h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸等；然后所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
（6）滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱。
喷雾干燥条件为：进风温度为220℃，出风温度为130℃，蒸发速度10L/h。
实施例10利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法
（1）玛咖经粉碎，按照料液比1:40加水充分混合，在温度50℃条件下，超声提取2h，超声功率300W/h/L，占空比1:3，转速700rpm，固液分离得玛咖提取液A及提取渣A；
（2）提取渣A和体积分数为100%的乙醇按照料液比1:20混合，在温度90℃条件下，搅拌提取1h，固液分离得玛咖提取液B及提取渣B；
（3）提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用0.1μm陶瓷微孔滤膜进行过滤除杂，得滤液C；
（4）滤液C加胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶（糜蛋白酶）、嗜热菌蛋白酶、胃蛋白酶混合蛋白酶，酶解1～5h，采用分子量范围为3000～5000Da的纳滤膜过滤得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；玛咖多糖用80～85%乙醇反复冲洗2～3次，以除去残留的单糖、色素及小分子物质；
（5）滤液D加淀粉酶、木聚糖酶、几丁质酶、纤维素酶混合多糖水解酶，酶解1h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸等；然后所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
（6）滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱，喷雾干燥条件为：进风温度为190℃，出风温度为100℃，蒸发速度100L/h。
实施例11进一步纯化制备玛咖酰胺的方法
利用实施例1-7任意之一方法制备的生物碱进一步制备高纯度玛咖酰胺，步骤（6）所得的滤液E用甲醇溶解萃取物后上反相C18柱，依次以8个柱体积30%、8个柱体积50%和1个柱体积75%的三个浓度的甲醇水溶液进行3段等度洗杂；用4个柱体积的无水甲醇洗脱，洗脱液浓缩干燥得80%高纯度玛咖酰胺。
实施例12进一步纯化制备玛咖酰胺的方法
利用实施例1-7任意之一方法制备的生物碱进一步制备高纯度玛咖酰胺，步骤（6）所得的滤液E用甲醇溶解萃取物后上硅胶柱，依次以6个柱体积30%、5个柱体积50%和2个柱体积75%的三个浓度的甲醇水溶液进行3段等度洗杂；用3个柱体积的无水甲醇洗脱，洗脱液浓缩干燥得99%高纯度玛咖酰胺。
实施例13玛咖多糖及玛咖生物碱的用途
利用实施例1-7任意之一方法制备的生物碱及玛咖多糖在开发玛咖功能性保健饮料中的应用，按100份质量计，组成如下：玛咖多糖1份、玛咖生物碱0.5份、复合维生素5份、调味剂0.5份、复合氨基酸粉5份、其余为水88份。
实施例14玛咖酰胺的用途
利用实施例8-9任意之一方法制备的玛咖酰胺在开发玛咖功能性产品（片剂）中的应用，片剂组成如下：玛咖酰胺含量80%，其余为羟丙甲纤维素、微晶纤维素、硬脂酸镁、二氧化硅。
玛咖多糖的功效实验
玛咖多糖升高环磷酰胺诱发小鼠外周血白细胞总数低下作用(表1)：实验设9组：A.空白对照组；B.环磷酰胺组；余下为玛咖多糖1.0g/kg组；造模后及于第3、6天尾静脉取血，测定白细胞总数。
表1玛咖多糖升高环磷酰胺诱发小鼠外周血白细胞总数低下作用
注：与阴性对照组比较，*P<0.01
结果：与环磷酰胺组比较，给环磷酰胺后第3天，玛咖多糖组白细胞总数均明显升高（表1）。表明玛咖多糖具有升高免疫抑制剂环磷酰胺诱发小鼠白细胞低下作用。
玛咖生物碱的功效实验
选择健康昆明种鼠80只，体重18-22g，将每批动物按体重随机分为对照组，玛咖生物碱组（实施例1-9组，0.1g/kg/day），（实施例13组，10ml/kg/day），每组8只，经口灌胃，1次/d，连续30d，于末次给予小鼠受试物30min后，进行各项指标测定。
1、爬杆实验
试验时，将爬杆架置于水温15℃、深约10cm的水盆中，小鼠放在有机玻璃棒上，使肌肉处于静力紧张状态，记录小鼠由于肌肉疲劳从有机玻璃棒上跌落下来的时间，第三次落水时终止试验，累计三次的时间作为爬杆时间。具体功能比较如表2所示。
2、肝糖原的测定
各组小鼠末次给药30min后将小鼠放入温度为30℃的水箱中游泳90min，然后将其立即处死，取肝脏经生理盐水漂洗后用滤纸吸干，精确称取肝脏200mg，加入4mL TCA，每管匀浆l min，将匀浆液倒入离心管，以3000r/min离心15min，将上清液转移至另一试管内。在沉淀中再加入4mL TCA，匀浆1min，再次离心15min，取上清液，并与第一次离心的上清液合并，充分混匀。取l mL上清液放入10mL离心管中，每管加入95％的乙醇4mL，充分混匀至两种液体间不留有界面。用干净塞子塞上，将试管放在40℃水浴3h。沉淀完全后，将试管于3000r/min离心15min。小心倒掉上清液并使试管倒立放置10min。用2ml蒸馏水溶解糖原，用蒽酮法在620nm波长下测定肝糖原。具体功能比较如表2所示。
3、小鼠血清MDA值的影响
MDA是自由基引起的脂质过氧化的主要产物之一，其含量可间接体现机体抗氧化能力及清除氧化产物的能力。力竭运动引起脂质过氧化反应加强而产生较多的自由基，导致肌纤维膜及线粒体膜等生物膜完整性丧失及损伤，从而引发一系列细胞代谢机能紊乱、细胞广泛性损害及病理变化，使肌肉工作能力下降，产生疲劳。过氧化脂质降解产物中的MDA可与硫代巴比妥酸缩合，形成红色产物，在532nm处测定吸光度。具体功能比较如表2所示。
表2玛咖生物碱对小鼠爬杆时间、肝糖原、血清MDA的影响
| 样品 | 游泳时间（min） | 肝糖原（mg/g肝组织） | 血清MDA（mmol/L） |
| 对照 | 4.22±1.05 | 14.57±3.12 | 33.26±7.26 |
| 实施例1 | 5.73±1.41 | 29.04±2.21* | 25.16±7.01* |
| 实施例2 | 13.21±1.43* | 51.33±2.78* | 24.15±3.12* |
| 实施例3 | 9.34±1.72* | 63.52±1.88* | 25.89±5.42* |
| 实施例4 | 9.24±0.87* | 45.76±2.09* | 24.67±6.20* |
| 实施例5 | 8.38±2.02* | 46.32±1.09* | 24.23±6.31* |
| 实施例6 | 8.12±1.03* | 55.22±1.06* | 21.98±6.96* |
| 实施例7 | 9.32±1.58* | 62.79±2.37* | 22.34±6.89* |
| 实施例8 | 8.24±1.12* | 54.12±1.25* | 22.91±6.17* |
| 实施例9 | 8.31±1.28* | 67.69±2.22* | 21.14±6.34* |
| 实施例13 | 7.68±2.11* | 78.02±1.46* | 24.16±4.31* |
注：与阴性对照组比较，*P<0.01
由实验结果可见，玛咖生物碱10个实验例以及玛咖功能性保健饮料（实施例13）明显增加小鼠的爬杆时间，明显增加小鼠的肝糖原储备，明显降低血清MDA含量的作用。因此，上述几种指标的变化充分说明了本发明的玛咖生物碱具有抗疲劳的效果，最大限度地保留了玛咖的功能性成分。
玛咖酰胺的功效实验
对SD大鼠***发生的影响：三月龄SD大鼠30只，随机分为对照组（生理盐水），A组（对比例，0.05g/10mL），B组（实施例11得到的玛咖酰胺，0.005g/10mL），C组（实施例12得到的玛咖酰胺，0.005g/10mL），D组（实施例14得到的玛咖酰胺片剂，0.005g/10mL），每日灌胃1次，灌胃体积为10mL/kg体重，各组连续给药7天，自由取食和饮水，末次给药后24h***处死。分别测定其日***产量、附睾***数，结果见表3：不同玛咖提取物对大鼠***产量及质量的影响（X±SEM）（n=6）。
表3不同玛咖提取物对大鼠***产量及质量的影响
注：与空白对照组比较，**P<0.01。
实验结果表明实施例11、12得到的玛咖提取物以及实施例14制备的片剂明显增加SD大鼠日***产量及附睾***数。
以上所述，仅为本发明部分具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本领域的人员在本发明揭露的技术范围内，可轻易想到的变化或替换，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法，其特征在于：所述的方法包括以下步骤：
步骤（1），玛咖经粉碎，按照料液比1:10～1:40，优选1:20～1:40或1:20～1:30，加水充分混合，然后采用加热搅拌或超声波提取进行固-液分离，提取温度20～90℃，提取时间1～2h，固液分离得到玛咖提取液A及提取渣A；
步骤（2），提取渣A和体积分数为20～100%的乙醇按照料液比1:5～1:20混合，然后采用加热搅拌或超声波提取进行固-液分离，提取温度20～90℃，提取时间1～2h，固液分离得到玛咖提取液B及提取渣B；
步骤（3），提取液B经减压真空浓缩去除乙醇之后与提取液A合并，采用微孔滤膜进行过滤除杂，得滤液C；
步骤（4），滤液C加蛋白酶酶解1～5h，采用分子量范围为3000～5000Da的纳滤膜过滤酶解液，得滤液D，纳滤膜截留部分为玛咖多糖；
步骤（5），滤液D加多糖水解酶，酶解1～3h，先采用分子量为200Da的纳滤膜过滤酶解液，过滤液中含有单糖、双糖、氨基酸；然后将所得的截留液采用分子量为1000Da的纳滤膜过滤，得滤液E；
步骤（6），滤液E经喷雾干燥得玛咖生物碱。
2.根据权利要求1所述的利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法，其特征在于：所述步骤（1）中水是浓度0.5-2%的无机酸水溶液，所述无机酸为盐酸、硫酸或磷酸中的一种或几种组合。
3.根据权利要求1所述的利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法，其特征在于：所述步骤（2）中提取渣A和体积分数为60-65%的乙醇按照料液比1:10～1:15混合。
4.根据权利要求1-3任意之一所述的利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法，其特征在于：所述步骤（1）中采用超声波提取时，提取温度为20～40℃，超声功率50～2000W/h/L（W/h/L即每升提取液每小时接收的超声能量），优选1000W/h/L；占空比1:1～1:5，优选1:2；转速600～1500rpm，优选1200rpm；所述步骤（2）中采用超声提取时，提取温度为20～40℃，超声功率20～2000W/h/L，优选800W/h/L；占空比1:1～1:5，优选1:2；转速500～1500rpm，优选1000rpm。
5.根据权利要求1-3任意之一所述的利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法，其特征在于：所述步骤（3）中微孔滤膜的孔径为0.1～10μm，滤膜为无机类、聚砜类、含氟高分子材料类、聚酰胺类、聚烯烃类、纤维素类或甲壳素类膜材料中的一种几种混合膜，其中优选陶瓷膜。
6.根据权利要求1-3任意之一所述的利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法，其特征在于：所述步骤（4）中纳滤膜截留部分为玛咖多糖，玛咖多糖用80～85%乙醇反复冲洗2～3次，以除去残留的单糖、色素及小分子物质。
7.根据权利要求1-3任意之一所述的利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法，其特征在于：所述步骤（4）中蛋白酶为胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶即糜蛋白酶、嗜热菌蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、葡萄球菌蛋白酶和梭菌蛋白酶的一种或几种。
8.根据权利要求1-3任意之一所述的利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法，其特征在于：步骤（5）中多糖水解酶为淀粉酶、木聚糖酶、几丁质酶、纤维素酶、溶菌酶、果胶酶、β-葡聚糖酶、β-半乳糖苷酶中的一种或几种。
9.根据权利要求1-3任意之一所述的利用膜分离技术制备玛咖多糖、玛咖生物碱的方法，其特征在于：所述步骤（6）中喷雾干燥条件为：进风温度为150～220℃，优选180～200℃，更优选180℃；出风温度为60～130℃，优选80～100℃，更优选90℃；蒸发速度1～200L/h。
10.利用权利要求1-3任意之一所述的方法制备的生物碱进一步纯化制备玛咖酰胺的方法，其特征在于：所述步骤（6）所得的滤液E经柱层析纯化能够得高纯度80%-99%的玛咖酰胺，所述的柱层析选用反相C18柱或硅胶柱。
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Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104127468A (zh) * | 2014-07-30 | 2014-11-05 | 烟台新时代健康产业有限公司 | 一种玛咖提取物的制备提取工艺 |
| CN104522635A (zh) * | 2015-01-08 | 2015-04-22 | 江立富 | 一种抗疲劳制剂及其制备方法 |
| CN104522785A (zh) * | 2015-01-09 | 2015-04-22 | 杨昊军 | 玛咖饮料及其制备方法 |
| CN104872656A (zh) * | 2015-03-06 | 2015-09-02 | 天津江天同创酒业有限公司 | 一种具有保健功能的组合物及其制备方法 |
| CN105367677A (zh) * | 2015-12-01 | 2016-03-02 | 中国药科大学 | 一种具有免疫调节活性的玛卡多糖及其制备方法 |
| CN105395592A (zh) * | 2014-09-11 | 2016-03-16 | 宁波润沃生物科技有限公司 | 一种超声波逆流制备玛卡提取物的方法 |
| CN105558528A (zh) * | 2014-10-11 | 2016-05-11 | 华中科技大学 | 一种抗疲劳玛咖提取物及包括该提取物的功能饮料 |
| CN105767345A (zh) * | 2014-12-22 | 2016-07-20 | 康美（北京）药物研究院有限公司 | 一种玛咖速溶茶及其制备方法以及玛咖产品 |
| CN105943472A (zh) * | 2016-07-05 | 2016-09-21 | 湖北天路生物科技有限公司 | 一种玛咖面膜的制造方法 |
| CN105981876A (zh) * | 2015-02-04 | 2016-10-05 | 玛卡龙酒业有限公司 | 一种玛卡咖啡及其制备方法 |
| CN106176874A (zh) * | 2016-08-22 | 2016-12-07 | 得利斯集团有限公司 | 一种玛咖提取物的制备方法 |
| CN106376799A (zh) * | 2016-08-24 | 2017-02-08 | 杭州纳趣实业有限公司 | 一种功能型玛咖饮料及其制备方法 |
| CN106666736A (zh) * | 2016-07-11 | 2017-05-17 | 周晗生 | 玛卡提取物的提取方法 |
| CN106906097A (zh) * | 2017-03-30 | 2017-06-30 | 广东神石生物科技有限公司 | 一种铁皮石斛保健酒及其制备方法 |
| CN111647096A (zh) * | 2020-05-20 | 2020-09-11 | 昆明理工大学 | 一种中性玛咖多糖及其提取方法与应用 |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6267995B1 (en) * | 1999-03-03 | 2001-07-31 | Pure World Botanicals, Inc. | Extract of Lepidium meyenii roots for pharmaceutical applications |
| US20050171081A1 (en) * | 2002-08-14 | 2005-08-04 | Pure World Botanicals, Inc. | Imidazole alkaloids from lepidium meyenii and methods of usage |
| CN102526161A (zh) * | 2012-02-10 | 2012-07-04 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种高活性玛咖提取物制备方法 |
| CN102763752A (zh) * | 2012-07-25 | 2012-11-07 | 北京中科健宇生物科技有限公司 | 一种速溶玛咖功能性咖啡及其制备方法 |
| CN103275012A (zh) * | 2013-06-08 | 2013-09-04 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种玛咖生物碱的制备方法及应用 |
-
2014
- 2014-03-20 CN CN201410106218.5A patent/CN103864949B/zh active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6267995B1 (en) * | 1999-03-03 | 2001-07-31 | Pure World Botanicals, Inc. | Extract of Lepidium meyenii roots for pharmaceutical applications |
| US20050171081A1 (en) * | 2002-08-14 | 2005-08-04 | Pure World Botanicals, Inc. | Imidazole alkaloids from lepidium meyenii and methods of usage |
| CN102526161A (zh) * | 2012-02-10 | 2012-07-04 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种高活性玛咖提取物制备方法 |
| CN102763752A (zh) * | 2012-07-25 | 2012-11-07 | 北京中科健宇生物科技有限公司 | 一种速溶玛咖功能性咖啡及其制备方法 |
| CN103275012A (zh) * | 2013-06-08 | 2013-09-04 | 中国科学院过程工程研究所 | 一种玛咖生物碱的制备方法及应用 |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104127468B (zh) * | 2014-07-30 | 2017-08-29 | 烟台新时代健康产业有限公司 | 一种玛咖提取物的制备提取工艺 |
| CN104127468A (zh) * | 2014-07-30 | 2014-11-05 | 烟台新时代健康产业有限公司 | 一种玛咖提取物的制备提取工艺 |
| CN105395592A (zh) * | 2014-09-11 | 2016-03-16 | 宁波润沃生物科技有限公司 | 一种超声波逆流制备玛卡提取物的方法 |
| CN105558528A (zh) * | 2014-10-11 | 2016-05-11 | 华中科技大学 | 一种抗疲劳玛咖提取物及包括该提取物的功能饮料 |
| CN105558528B (zh) * | 2014-10-11 | 2018-09-07 | 华中科技大学 | 一种抗疲劳玛咖提取物及包括该提取物的功能饮料 |
| CN105767345A (zh) * | 2014-12-22 | 2016-07-20 | 康美（北京）药物研究院有限公司 | 一种玛咖速溶茶及其制备方法以及玛咖产品 |
| CN104522635A (zh) * | 2015-01-08 | 2015-04-22 | 江立富 | 一种抗疲劳制剂及其制备方法 |
| CN104522785A (zh) * | 2015-01-09 | 2015-04-22 | 杨昊军 | 玛咖饮料及其制备方法 |
| CN105981876A (zh) * | 2015-02-04 | 2016-10-05 | 玛卡龙酒业有限公司 | 一种玛卡咖啡及其制备方法 |
| CN104872656A (zh) * | 2015-03-06 | 2015-09-02 | 天津江天同创酒业有限公司 | 一种具有保健功能的组合物及其制备方法 |
| CN105367677A (zh) * | 2015-12-01 | 2016-03-02 | 中国药科大学 | 一种具有免疫调节活性的玛卡多糖及其制备方法 |
| CN105943472A (zh) * | 2016-07-05 | 2016-09-21 | 湖北天路生物科技有限公司 | 一种玛咖面膜的制造方法 |
| CN105943472B (zh) * | 2016-07-05 | 2019-05-31 | 湖北天路生物科技有限公司 | 一种玛咖面膜的制造方法 |
| CN106666736A (zh) * | 2016-07-11 | 2017-05-17 | 周晗生 | 玛卡提取物的提取方法 |
| CN106176874A (zh) * | 2016-08-22 | 2016-12-07 | 得利斯集团有限公司 | 一种玛咖提取物的制备方法 |
| CN106376799A (zh) * | 2016-08-24 | 2017-02-08 | 杭州纳趣实业有限公司 | 一种功能型玛咖饮料及其制备方法 |
| CN106906097A (zh) * | 2017-03-30 | 2017-06-30 | 广东神石生物科技有限公司 | 一种铁皮石斛保健酒及其制备方法 |
| CN111647096A (zh) * | 2020-05-20 | 2020-09-11 | 昆明理工大学 | 一种中性玛咖多糖及其提取方法与应用 |
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| Publication number | Publication date |
|---|---|
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