CN107727784A - 一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法 - Google Patents

一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法 Download PDF

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Abstract

本发明提供一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，具体包括以下步骤：1）样品前处理：取烟草及烟草制品磨粉后获得烟末样品，将烟末样品加入NaOH溶液和甲基叔丁基醚，充分振荡后静置，取上层清液过滤后加入有机溶剂稀释，获得待测液；2）样品检测：将待测液进行超高效合相色谱‑串联质谱检测，采用峰面积归一化法测定待测液中烟碱和降烟碱的手性组成的相对含量。本发明提供的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，以烟碱和降烟碱为研究对象，对烟草及烟草制品进行优化处理，其分离效果优，灵敏度高，重复性好，可实现烟碱手性组成和降烟碱手性组成的测定。

Description

一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法
技术领域
本发明属于烟草化学成分分析领域，涉及一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法。
背景技术
烟碱是烟草和烟气中含量最丰富的生物碱，占生物碱总含量的90％～95％，可作用于人体中枢神经***，是吸烟者吸烟的主要动力。烟碱含有一个手性中心，存在两个对映体：S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱，两者在烟草中含量、代谢机理和生理特性完全不同。天然烟草中的烟碱主要为S-(-)-构型，但通过高灵敏度的分析技术，可在不同类型的烟草原料中检测到占总烟碱含量1％以内的R-(+)-烟碱。
降烟碱的含量通常低于总生物碱的5％，是烟碱的降解产物，对烟草香味存在影响，也存在两个对映体。目前对降烟碱手性组成的研究很少，分析表明，不同烟草及烟草制品中降烟碱的手性组成不同，有待进一步深入研究。
由于烟碱两个对映体含量差别极大，对方法的灵敏度要求较高，而方法灵敏度与S-(-)-烟碱、R-(+)-烟碱的分离度密切相关；同时基于烟草较为复杂的基质，有效排除杂质干扰是方法准确度的保证。超高效合相色谱结合了超临界流体色谱技术，兼具传统超高效液相色谱的优点，以超临界流体CO2为流动相主体，依靠流动相的溶剂化能力来进行分离。由于超临界流体CO2具有低粘度、高扩散速率和高质量转移能力的特点，其在手性化合物及相似物分离领域具有独特优势。将超高效合相色谱与质谱联用，分离度与选择性兼具，可实现烟碱与降烟碱手性异构体的同时检测。目前，未见关于超高效合相色谱与质谱联用法用于烟草及烟草制品中烟碱与降烟碱手性组成同时分析的报道。
发明内容
鉴于以上所述现有技术的缺点，本发明的目的在于提供一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，以烟碱和降烟碱为研究对象，对烟草及烟草制品进行前处理方法研究和超高效合相色谱-串联质谱条件优化，建立了烟碱和降烟碱的超高效合相色谱-串联质谱手性分析方法。
为实现上述目的及其他相关目的，本发明提供一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，具体包括以下步骤：
1)样品前处理：取烟草及烟草制品磨粉后获得烟末样品，将烟末样品加入NaOH溶液和甲基叔丁基醚，充分振荡后静置，取上层清液过滤后加入有机溶剂稀释，获得待测液；
2)样品检测：将步骤1)配制的待测液进行超高效合相色谱-串联质谱检测，采用峰面积归一化法测定待测液中烟碱和降烟碱的手性组成的相对含量。
优选地，所述烟碱包括有S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱。所述S-(-)-烟碱与R-(+)-烟碱是手性异构体。所述烟碱为外消旋烟碱。
优选地，所述降烟碱包括有S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱。所述S-(-)-降烟碱与R-(+)-降烟碱是手性异构体。所述降烟碱为外消旋降烟碱。
优选地，步骤1)中，所述烟草及烟草制品选自烟叶、烟梗、烟用薄片或烟丝中的任意一种。
更优选地，所述烟叶选自白肋烟烟叶、香料烟烟叶或烤烟烟叶中的一种。
更优选地，所述烟丝为卷烟烟丝。
优选地，步骤1)中，所述NaOH溶液为重量百分比为5-15％NaOH水溶液。更优选地，所述NaOH溶液为重量百分比为10％NaOH水溶液。
优选地，步骤1)中，所述烟末样品加入质量(g)与NaOH溶液加入的体积(mL)之比为1:1-5。更优选地，所述烟末样品加入质量(g)与NaOH溶液加入的体积(mL)之比为1:2。
优选地，步骤1)中，所述烟末样品加入质量(g)与甲基叔丁基醚加入的体积(mL)之比为1:2-8。更优选地，所述烟末样品加入质量(g)与甲基叔丁基醚加入的体积(mL)之比为1:4。
优选地，步骤1)中，所述振荡时间为1-10min。更优选地，所述振荡时间为5min。
优选地，步骤1)中，所述静置条件为：静置温度为室温；静置时间为6-18h。更优选地，所述静置条件为：静置温度为20-25℃；静置时间为10-14h。
优选地，步骤1)中，所述有机溶剂为甲基叔丁基醚。
优选地，步骤1)中，所述上层清液与有机溶剂加入的体积之比为1:1-100。
优选地，步骤1)中，所述过滤方式为滤膜过滤方式。更优选地，所述滤膜的孔径为0.22μm。
优选地，步骤2)中，所述超高效合相色谱的检测条件为：串联手性柱：分析柱1：改性多聚糖固定相手性色谱柱；分析柱2：正相手性液相色谱柱；流动相：超临界CO2流体-含异丙胺的甲醇溶液，其中，A相为超临界CO2流体，B相为含体积百分比为0.02-0.08％异丙胺的甲醇溶液；流动相流速：1.0-1.2mL/min；ISM补偿流路流动相：含体积百分比为0.05-0.15％甲酸的甲醇溶液；ISM补偿流路流动相流速：0.2-0.4mL/min；分析时间：32min；梯度洗脱。
更优选地，所述超高效合相色谱的检测条件为：串联手性柱：分析柱1：TrefoilCEL1柱，柱长150mm、内径3.0mm、固定相粒径2.5μm；分析柱2：Chiralcel OD-H液相色谱柱，柱长250mm、内径4.6mm、固定相粒径5μm；流动相：超临界CO2流体-含异丙胺的甲醇溶液，其中，A相为超临界CO2流体，B相为含体积百分比为0.05％异丙胺的甲醇溶液；流动相流速：1.1mL/min；ISM补偿流路流动相：含体积百分比为0.1％甲酸的甲醇溶液；ISM补偿流路流动相流速：0.3mL/min；分析时间：32min；梯度洗脱。
更优选地，所述梯度洗脱程序的具体为：
0-0.5min，A相：B相体积比为97：3-97：3；
0.5-8.0min，A相：B相体积比为97：3-92：8；
8.0-12.0min，A相：B相体积比为92：8-92：8；
12.0-30.0min，A相：B相体积比为92：8-90：10；
30.0-32.0min，A相：B相体积比为90：10-97：3。
更优选地，所述超高效合相色谱还包括有以下检测条件：柱温：35-45℃；进样室温度：8-12℃；进样量：1-10μL；背压：1550-1850psi。
进一步优选地，所述超高效合相色谱还包括有以下检测条件：柱温：40℃；进样室温度：10℃；进样量：2μL；背压：1600psi。
优选地，步骤2)中，所述质谱的检测条件为：离子源：ESI源；扫描方式：正离子扫描；离子源温度：300℃；电喷雾电压：5000V；雾化气压力：40psi；检测方式：多反应监测(MRM)，MRM参数的数值见表1。
表1质谱条件(MRM参数)
优选地，步骤2)中，所述峰面积归一化法是指：经超高效合相色谱-串联质谱测定后，分别获得烟碱和降烟碱的手性组成成分的色谱峰面积，计算烟碱的手性组成成分之和，获得烟碱的总色谱峰面积，计算降烟碱的手性组成成分之和，获得降烟碱的总色谱峰面积。然后，将烟碱的手性组成成分的色谱峰面积分别除以烟碱的总色谱峰面积，获得烟碱的手性组成成分的色谱峰面积占烟碱的总色谱峰面积的百分率，即为烟碱的手性组成成分的相对含量。将降烟碱的手性组成成分的色谱峰面积分别除以降烟碱的总色谱峰面积，获得降烟碱的手性组成成分的色谱峰面积占降烟碱的总色谱峰面积的百分率，即为降烟碱的手性组成成分的相对含量。具体来说，烟碱的手性组成以R-(+)烟碱占总烟碱百分比表示，即经超高效合相色谱-串联质谱测定后，分别得到烟碱两个手性异构体的色谱峰面积，以R-(+)烟碱的色谱峰面积除以烟碱的总色谱峰面积即可得到烟碱手性组成的相对含量。降烟碱的手性组成以R-(+)降烟碱占总降烟碱百分比表示，即经超高效合相色谱-串联质谱测定后，分别得到降烟碱两个手性异构体的色谱峰面积，以R-(+)降烟碱的色谱峰面积除以降烟碱的总色谱峰面积即可得到降烟碱手性组成的相对含量。
如上所述，本发明提供的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，以烟碱和降烟碱为研究对象，对烟草及烟草制品进行前处理方法研究和超高效合相色谱-串联质谱条件优化，建立了烟碱和降烟碱中手性异构体成分的分析方法。本发明中分析方法能同时实现烟碱手性异构体和降烟碱手性异构体的分析，在实际样品中两者分离度均可达2.5以上。本发明的分析方法中，通过超高效合相色谱与质谱联用能有效排除杂质干扰，实现样品中烟碱、降烟碱手性组成的准确测定。本发明中分析方法简便快速，灵敏度高，重复性好，能够完全满足烟草及烟草制品中烟碱及降烟碱手性组成分析需要。
附图说明
图1显示为本发明中外消旋烟碱(即S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱各占50％)标准样品和外消旋降烟碱(即S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱各占50％)标准样品的超高效合相色谱-质谱联用总离子流图。
图2显示为本发明中烤烟烟末待测液中烟碱手性异构体和降烟碱手性异构体的超高效合相色谱-质谱联用总离子流图。
具体实施方式
下面结合具体实施例进一步阐述本发明，应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的保护范围。
以下通过特定的具体实例说明本发明的实施方式，本领域技术人员可由本说明书所揭露的内容轻易地了解本发明的其他优点与功效。本发明还可以通过另外不同的具体实施方式加以实施或应用，本说明书中的各项细节也可以基于不同观点与应用，在没有背离本发明的精神下进行各种修饰或改变。
以下实施例使用的试剂和仪器如下：
1、试剂
白肋烟烟叶、香料烟烟叶、烤烟烟叶、成品卷烟烟丝(市售)；外消旋烟碱标准品(S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱各占50wt％，美国Sigma公司)；外消旋降烟碱标准品(S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱各占50wt％，美国Sigma公司)；甲醇、甲基叔丁基醚、异丙胺(色谱纯，Amethyst Chemicals公司)；氢氧化钠(分析纯，国药集团化学试剂有限公司)；超临界CO2流体(超高效合相色谱制备)。
2、仪器
ACQUITY UPC2型超高效合相色谱(美国Waters公司)；6410B三重四级杆串联质谱(美国Agilent公司)。
实施例1
1、样品前处理
取烤烟烟叶磨粉后获得烟末样品，取1g烟末样品置于15mL试管中，加入10％NaOH水溶液2mL及甲基叔丁基醚4mL，旋紧旋盖，充分振荡5min后，室温20-25℃静置10-14h过夜。取上层清液经0.22μm滤膜过滤后加入甲基叔丁基醚进行稀释，获得待测液。上层清液与甲基叔丁基醚加入的体积之比为1:10。每个样品平行测定三次。
2、测定
将上述步骤1中配制的待测液进行超高效合相色谱-串联质谱检测，采用峰面积归一化法测定待测液中烟碱和降烟碱的手性组成的相对含量。其中，待测液中烟碱手性组成的成分为：S-(-)-烟碱、R-(+)-烟碱，降烟碱手性异构体成分：S-(-)-降烟碱、R-(+)-降烟碱。具体检测结果见图1、2。由图1、2可知，本发明中方法对烟草及烟草制品如烤烟烟叶中烟碱手性异构体和降烟碱手性异构体的分离效果非常好。
具体测定时，烟碱的手性组成以R-(+)烟碱占总烟碱百分比表示，即经超高效合相色谱-串联质谱测定后，分别得到烟碱两个手性异构体的色谱峰面积，以R-(+)烟碱的色谱峰面积除以烟碱的总色谱峰面积即可得到烟碱手性组成的相对含量。降烟碱的手性组成以R-(+)降烟碱占总降烟碱百分比表示，即经超高效合相色谱-串联质谱测定后，分别得到降烟碱两个手性异构体的色谱峰面积，以R-(+)降烟碱的色谱峰面积除以降烟碱的总色谱峰面积即可得到降烟碱手性组成的相对含量。
其中，所述超高效合相色谱的检测条件为：串联手性柱：分析柱1：Trefoil CEL1柱，柱长150mm、内径3.0mm、固定相粒径2.5μm；分析柱2：Chiralcel OD-H液相色谱柱，柱长250mm、内径4.6mm、固定相粒径5μm；流动相：超临界CO2流体-含异丙胺的甲醇溶液，其中，A相为超临界CO2流体，B相为含体积百分比为0.05％异丙胺的甲醇溶液；流动相流速：1.1mL/min；ISM补偿流路流动相：含体积百分比为0.1％甲酸的甲醇溶液；ISM补偿流路流动相流速：0.3mL/min；分析时间：32min；梯度洗脱。
所述梯度洗脱程序的具体为：
0-0.5min，A相：B相体积比为97：3-97：3；
0.5-8.0min，A相：B相体积比为97：3-92：8；
8.0-12.0min，A相：B相体积比为92：8-92：8；
12.0-30.0min，A相：B相体积比为92：8-90：10；
30.0-32.0min，A相：B相体积比为90：10-97：3。
所述超高效合相色谱还包括有以下检测条件：柱温：40℃；进样室温度：10℃；进样量：2μL；背压：1600psi。
所述质谱的检测条件为：离子源：ESI源；扫描方式：正离子扫描；离子源温度：300℃；电喷雾电压：5000V；雾化气压力：40psi；检测方式：多反应监测(MRM)，MRM参数的数值见表1。
实施例2
1、样品前处理
取烟草及烟草制品磨粉后获得烟末样品，烟草及烟草制品选自烟叶、烟梗、烟用薄片或烟丝中的任意一种，其中，烟叶选自白肋烟烟叶、香料烟烟叶或烤烟烟叶中的一种，烟丝为卷烟烟丝。取1g烟末样品置于15mL试管中，加入5-15％NaOH水溶液1-5mL及甲基叔丁基醚2-8mL，旋紧旋盖，充分振荡1-10min后，室温静置6-18h过夜。取上层清液经0.22μm滤膜过滤后加入甲基叔丁基醚进行稀释，获得待测液。上层清液与甲基叔丁基醚加入的体积之比为1:1-100。每个样品平行测定三次。
2、测定
将上述步骤1中配制的待测液进行超高效合相色谱-串联质谱检测，采用峰面积归一化法测定待测液中烟碱和降烟碱的手性组成的相对含量。其中，待测液中烟碱手性异构体成分：S-(-)-烟碱、R-(+)-烟碱，降烟碱手性异构体成分：S-(-)-降烟碱、R-(+)-降烟碱，本发明中方法对烟草及烟草制品中烟碱手性异构体和降烟碱手性异构体的分离效果非常好。
具体测定时，所述峰面积归一化法是指：经超高效合相色谱-串联质谱测定后，分别获得烟碱和降烟碱的手性组成成分的色谱峰面积，计算烟碱的手性组成成分之和，获得烟碱的总色谱峰面积，计算降烟碱的手性组成成分之和，获得降烟碱的总色谱峰面积。然后，将烟碱的手性组成成分的色谱峰面积分别除以烟碱的总色谱峰面积，获得烟碱的手性组成成分的色谱峰面积占烟碱的总色谱峰面积的百分率，即为烟碱的手性组成成分的相对含量。将降烟碱的手性组成成分的色谱峰面积分别除以降烟碱的总色谱峰面积，获得降烟碱的手性组成成分的色谱峰面积占降烟碱的总色谱峰面积的百分率，即为降烟碱的手性组成成分的相对含量。
其中，所述超高效合相色谱的检测条件为：串联手性柱：分析柱1：改性多聚糖固定相手性色谱柱；分析柱2：正相手性液相色谱柱；流动相：超临界CO2流体-含异丙胺的甲醇溶液，其中，A相为超临界CO2流体，B相为含体积百分比为0.02-0.08％异丙胺的甲醇溶液；流动相流速：1.0-1.2mL/min；ISM补偿流路流动相：含体积百分比为0.05-0.15％甲酸的甲醇溶液；ISM补偿流路流动相流速：0.2-0.4mL/min；分析时间：32min；梯度洗脱。
所述梯度洗脱程序的具体为：
0-0.5min，A相：B相体积比为97：3-97：3；
0.5-8.0min，A相：B相体积比为97：3-92：8；
8.0-12.0min，A相：B相体积比为92：8-92：8；
12.0-30.0min，A相：B相体积比为92：8-90：10；
30.0-32.0min，A相：B相体积比为90：10-97：3。
所述超高效合相色谱还包括有以下检测条件：柱温：35-45℃；进样室温度：8-12℃；进样量：1-10μL；背压：1550-1850psi。
所述质谱的检测条件为：离子源：ESI源；扫描方式：正离子扫描；离子源温度：300℃；电喷雾电压：5000V；雾化气压力：40psi；检测方式：多反应监测(MRM)，MRM参数的数值见表1。
实施例3
取外消旋烟碱标准样品和外消旋降烟碱标准样品按实施例1的步骤1进行前处理，再按实施例1的步骤3的条件进行测定，以3倍信噪比为检测限，得到方法的检测限，具体结果如表2所示。其中，外消旋烟碱标准品为S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的混合标准品，S-(-)-烟碱与R-(+)-烟碱的质量之比为1:1。降烟碱标准品为S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱的混合标准品，S-(-)-降烟碱与R-(+)-降烟碱的质量之比为1:1。由表2可知，由于两个对映体之间具有良好的分离度，其方法的检测限小于0.064μg/mL，具有较高的方法灵敏度。
表2方法学考察：检测限
目标物 检测限(μg/mL)
S-(-)-烟碱 0.028
R-(+)-烟碱 0.031
S-(-)-降烟碱 0.064
R-(+)-降烟碱 0.061
实施例4
取外消旋烟碱标准样品和外消旋降烟碱标准样品按实施例1的步骤1进行前处理，再按实施例1的步骤3的条件进行测定，分别重复平行检测5次(n＝5)，结果见表3。其中，外消旋烟碱标准品为S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱的混合标准品，S-(-)-烟碱与R-(+)-烟碱的质量之比为1:1。降烟碱标准品为S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱的混合标准品，S-(-)-降烟碱与R-(+)-降烟碱的质量之比为1:1。
由表3可以看出，外消旋烟碱标准样品中R-(+)-烟碱的占总烟碱百分比为50.0％，与外消旋烟碱标准样品中R-(+)-烟碱的实际占比相符合，并且外消旋烟碱标准样品中R-(+)-烟碱的相对标准偏差(RSD)为1.26％。而外消旋降烟碱标准样品中R-(+)-降烟碱的占总降烟碱百分比为50.0％，与外消旋降烟碱标准样品中R-(+)-降烟碱的实际占比相符合，并且外消旋降烟碱标准样品中R-(+)-降烟碱的相对标准偏差(RSD)为0.98％。可见，本发明中测定方法的精密度较好，重复性佳。
表3方法学考察：精密度(n＝5)
序号 样品 R-(+)-烟碱(％)* R-(+)-降烟碱(％)* RSD(％)
1 外消旋烟碱标准样品 50.0 / 1.26
2 外消旋降烟碱标准样品 / 50.0 0.98
*R-(+)-烟碱的平均质量百分占比(相对于总烟碱含量)，*R-(+)-降烟碱的平均质量百分占比(相对于总降烟碱含量)
实施例5
采用本方法测定不同类型的烟草及烟草制品样品中烟碱和降烟碱手性组成，重复测定3次(n＝3)，具体结果见表4。由表4可知，不同类型的烟草及烟草制品样品中，R-(+)-烟碱相对总烟碱含量的平均质量百分占比为0.235-0.426％，R-(+)-降烟碱相对总降烟碱含量的平均质量百分占比为38.2-66.0％。而根据现有的烟碱和降烟碱手性异构体分析表述方式，主要以R-(+)-烟碱占总烟碱的百分比来表示烟碱手性组成，总烟碱中除R-(+)-烟碱以外均为S-(-)-烟碱，主要以R-(+)-降烟碱占总降烟碱的百分比来表示降烟碱手性组成，总降烟碱中除R-(+)-降烟碱以外均为S-(-)-降烟碱。从而表明针对不同类型的烟草及烟草制品样品，该方法均能有效测定其实际样品中烟碱和降烟碱手性异构体成分的含量，方法操作简便、适用性好，结果准确、可靠。
表4烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱手性组分分析结果(n＝3)
a R-(+)-烟碱的百分占比(相对于总烟碱含量)。
b R-(+)-降烟碱的百分占比(相对于总降烟碱含量)。
所以，本发明有效克服了现有技术中的种种缺点而具高度产业利用价值。
上述实施例仅例示性说明本发明的原理及其功效，而非用于限制本发明。任何熟悉此技术的人士皆可在不违背本发明的精神及范畴下，对上述实施例进行修饰或改变。因此，举凡所属技术领域中具有通常知识者在未脱离本发明所揭示的精神与技术思想下所完成的一切等效修饰或改变，仍应由本发明的权利要求所涵盖。

Claims (11)

1.一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，具体包括以下步骤：
1)样品前处理：取烟草及烟草制品磨粉后获得烟末样品，将烟末样品加入NaOH溶液和甲基叔丁基醚，充分振荡后静置，取上层清液过滤后加入有机溶剂稀释，获得待测液；
2)样品检测：将步骤1)配制的待测液进行超高效合相色谱-串联质谱检测，采用峰面积归一化法测定待测液中烟碱和降烟碱的手性组成的相对含量。
2.根据权利要求1所述的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，其特征在于，所述烟碱包括有S-(-)-烟碱和R-(+)-烟碱，所述降烟碱包括有S-(-)-降烟碱和R-(+)-降烟碱。
3.根据权利要求1所述的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，其特征在于，步骤1)中，所述烟草及烟草制品选自烟叶、烟梗、烟用薄片或烟丝中的任意一种。
4.根据权利要求1所述的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，其特征在于，步骤1)中，所述NaOH溶液为重量百分比为5-15％NaOH水溶液；所述烟末样品加入质量g与NaOH溶液加入的体积mL之比为1:1-5。
5.根据权利要求1所述的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，其特征在于，步骤1)中，所述烟末样品加入质量g与甲基叔丁基醚加入的体积mL之比为1:2-8。
6.根据权利要求1所述的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，其特征在于，步骤1)中，所述振荡时间为1-10min；所述静置条件为：静置温度为室温；静置时间为6-18h。
7.根据权利要求1所述的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，其特征在于，步骤1)中，所述有机溶剂为甲基叔丁基醚；所述上层清液与有机溶剂加入的体积之比为1:1-100。
8.根据权利要求1所述的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，其特征在于，步骤2)中，所述超高效合相色谱的检测条件为：串联手性柱：分析柱1：改性多聚糖固定相手性色谱柱；分析柱2：正相手性液相色谱柱；流动相：超临界CO2流体-含异丙胺的甲醇溶液，其中，A相为超临界CO2流体，B相为含体积百分比为0.02-0.08％异丙胺的甲醇溶液；流动相流速：1.0-1.2mL/min；ISM补偿流路流动相：含体积百分比为0.05-0.15％甲酸的甲醇溶液；ISM补偿流路流动相流速：0.2-0.4mL/min；分析时间：32min；梯度洗脱。
9.根据权利要求8所述的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，其特征在于，所述梯度洗脱程序的具体为：0-0.5min，A相：B相体积比为97：3-97：3；0.5-8.0min，A相：B相体积比为97：3-92：8；8.0-12.0min，A相：B相体积比为92：8-92：8；12.0-30.0min，A相：B相体积比为92：8-90：10；30.0-32.0min，A相：B相体积比为90：10-97：3。
10.根据权利要求8所述的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，其特征在于，所述超高效合相色谱还包括有以下检测条件：柱温：35-45℃；进样室温度：8-12℃；进样量：1-10μL；背压：1550-1850psi。
11.根据权利要求1所述的一种烟草及烟草制品中烟碱和降烟碱的手性分析方法，其特征在于，步骤2)中，所述质谱的检测条件为：离子源：ESI源；扫描方式：正离子扫描；离子源温度：300℃；电喷雾电压：5000V；雾化气压力：40psi；检测方式：多反应监测MRM。
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