CN107567336A - 癌症的联合治疗 - Google Patents
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Abstract
提供了利用结合集落刺激因子1受体(CSF1R)的抗体与PD‑1/PD‑L1抑制剂联合治疗癌症的方法。
Description
相关申请的交叉引用
本申请要求2014年10月29日提交的美国临时申请No.62/072,035、2015年5月5日提交的62/157,368和2015年7月13日提交的62/192,025的优先权权益,将所有这些专利均通过提述完整并入本文用于任何目的。
技术领域
利用结合集落刺激因子1受体(CSF1R)的抗体与PD-1/PD-L1抑制剂联合治疗癌症的方法。
背景
集落刺激因子1受体(本文中称为CSF1R;在本领域中也称为FMS、FIM2、C-FMS、M-CSF受体和CD115)是一种带有N末端细胞外结构域(ECD)且具有酪氨酸激酶活性的C末端细胞内结构域的单次跨膜受体。CSF1或白细胞介素34配体(在本文中称为IL-34;Lin等人,Science 320:807-11(2008))与CSF1R的配体结合导致受体二聚化、CSF1R蛋白酪氨酸激酶活性上调、CSF1R酪氨酸残基磷酸化和下游信号转导事件。CSF1或IL-34对CSF1R的活化导致单核细胞和巨噬细胞以及其他单核细胞谱系如破骨细胞、树突细胞和小胶质细胞的运输、存活、增殖和分化。
已经发现许多肿瘤细胞或肿瘤基质细胞产生CSF1,CSF1通过CSF1R活化单核细胞/巨噬细胞。已经表明,肿瘤中的CSF1水平与肿瘤中的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)水平相关。已经发现,在大多数癌症中,较高水平的TAM与较差的患者预后相关联。另外,已经发现CSF1在例如小鼠中的人乳腺癌异种移植物中促进肿瘤生长和进展至转移。参见,例如,Paulus等人,Cancer Res.66:4349-56(2006)。此外,在骨转移中,CSF1R在溶骨性骨质破坏中起作用。参见,例如,Ohno等人,Mol.Cancer Ther.5∶2634-43(2006)。在某种程度上,TAM通过免疫抑制性细胞因子的释放和T细胞抑制性表面蛋白的表达而抑制抗肿瘤T细胞效应物功能,从而促进肿瘤生长。
癌症的遗传改变提供了多种可以介导抗肿瘤免疫的抗原。通过T细胞受体(TCR)的抗原识别引发T细胞应答,所述T细胞应答受到活化信号与抑制信号之间的平衡的调节。抑制信号或“免疫检查点”通过预防自身免疫而在正常组织中起重要作用。免疫检查点蛋白的上调允许癌症逃避抗肿瘤免疫。有两种免疫检查点蛋白已经成为临床癌症免疫治疗的焦点:细胞毒性T淋巴细胞相关抗原4(CTLA-4)和程序性细胞死亡蛋白1(PD-1)。抗CTLA-4抗体和抗PD-1抗体联合用于治疗转移性黑素瘤已得到批准,并且正在进行若干另外的临床试验以研究该组合用于治疗其他癌症的用途。目前也在临床试验中研究抗PD-1抗体和抗CTLA-4抗体作为单一疗法用于治疗许多不同类型癌症。结合PD-L1(PD-1配体之一)的抗PD-L1抗体目前也在临床开发中。
许多肿瘤经常同时表达多种检查点分子;因此,以提高功效为目的的检查点调变物的组合正处于临床测试中。与单独的抗CTLA-4Ab或历史对照相比较,在转移性黑素瘤中,抗CTLA-4抗体(抗CTLA-4Ab)和抗PD-1抗体(抗PD-1Ab)联合的初步临床结果已经证明了总应答率的提高、完全应答率以及总生存率的增加。
如本文中描述的,抗PD-1抗体与抗CSF1R抗体联合的显著抗肿瘤活性已在临床试验中得到了证实。
概述
在一些实施方案中,提供了治疗受试者中的癌症的方法,其包括向受试者施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是抗体。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是抗PD-1抗体。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含选自纳武单抗(nivolumab)和派姆单抗(pembrolizumab)的抗体的重链和轻链CDR。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含选自纳武单抗和派姆单抗的抗体的重链和轻链可变区。在一些实施方案中,抗PD-1抗体选自纳武单抗和派姆单抗。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,抗PD-L1抗体包含选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C的抗体的重链和轻链CDR。在一些实施方案中,抗PD-L1抗体包含选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C的抗体的重链和轻链可变区。在一些实施方案中,抗PD-L1抗体选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是融合蛋白。在一些实施方案中,融合蛋白是AMP-224。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂是同时或依次施用的。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂是同时施用的。在一些实施方案中,在施用抗CSF1R抗体之前施用一个或多个剂量的PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,受试者在施用抗CSF1R抗体之前接受了PD-1/PD-L1抑制剂治疗的完整疗程。在一些实施方案中,在PD-1/PD-L1抑制剂治疗的第二疗程期间施用抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,受试者在施用抗CSF1R抗体之前接受了至少一个、至少两个、至少三个、或至少四个剂量的PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,与抗CSF1R抑制剂同时施用至少一个剂量的PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,在施用PD-1/PD-L1抑制剂之前施用一个或多个剂量的抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,受试者在PD-1/PD-L1抑制剂施用之前接受了至少两个、至少三个、至少三个、或至少四个剂量的抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,与PD-1/PD-L1抑制剂同时施用至少一个剂量的抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,这两种药物在同一天施用。在一些实施方案中,将所述药物在施用前被混合在一起,因而以混合物的形式施用。例如,在一些实施方案中,药物可被包装并储存在同一个小瓶(即,固定剂量制剂)中,或者任选地,在施用前可将各自容纳不同药物的小瓶混合在一起。在不同的实施方案中,可以通过各种途径施用药物,包括但不限于口服、动脉内、肠胃外、鼻内、静脉内、肌内、心内、心室内、气管内、口腔、直肠、腹膜内、皮内、局部、透皮和鞘内施用,或以其他方式通过植入或吸入施用。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体以约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂以0.1-10mg/kg,例如约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂以例如上述剂量之一约每1、2、3、4或5周1次施用,比如约每2周1次施用。
在某些实施方案中,第一剂量是治疗剂量,并且第二剂量是治疗剂量。在其他实施方案中,第一剂量是亚治疗剂量,并且第二剂量是治疗剂量。在一些实施方案中,第一剂量以范围为从至少约80mg到至少约800mg、或以至少约0.1mg/kg到至少约10.0mg/kg体重的剂量施用。在一些实施方案中,第二剂量以范围为从至少约80mg到至少约800mg、或至少约0.1mg/kg到至少约10.0mg/kg体重的剂量施用。在一个具体实施方案中,第一剂量以至少约3mg/kg体重或240mg的剂量约每2周一次施用。
在一些实施方案中,对受试者施用至少两个剂量、至少三个剂量、至少四个剂量、至少五个剂量、至少六个剂量、至少七个剂量、至少八个剂量、至少九个剂量、至少十个剂量、至少12个剂量、至少20个剂量。
在一些实施方案中,第一剂量是固定剂量或基于体重的剂量。在其他实施方案中,第二剂量是固定剂量或基于体重的剂量。
在一些实施方案中,癌症选自非小细胞肺癌、黑素瘤、头颈部鳞状细胞癌、卵巢癌、胰腺癌、肾细胞癌、肝细胞癌、膀胱癌和子宫内膜癌。在一些实施方案中,癌症是中枢神经***肿瘤。在一些实施方案中,中枢神经***肿瘤是恶性胶质瘤或胶质母细胞瘤。在一些实施方案中,在选自手术、化学治疗、放射治疗或其组合的治疗之后,癌症是复发的或进行性的。在一些实施方案中,患者具有如下文关于特定癌症的定义部分中定义的III期或IV期癌症。在一些实施方案中,患者的癌症是转移性的。在一些实施方案中,受试者是对PD-1/PD-L1抑制剂应答不足者或对用PD-1/PD-L1抑制剂的先前治疗而言是难治的。在一些实施方案中,受试者先前已经接受了PD-1/PD-L1抑制剂治疗,而在其他实施方案中,受试者先前没有接受过PD-1/PD-L1抑制剂治疗。在一些实施方案中,患者先前已经接受了化学治疗、放射治疗或手术中的一者或多者;而在一些这样的实施方案中,尽管进行了这样的先前治疗,患者还是有记录在案的肿瘤进展。在一些实施方案中,在癌症的小鼠异种移植模型中,与单独施用抗CSF1R抗体或PD-1/PD-L1抑制剂相比,施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂导致在肿瘤生长、重量和/或体积方面相比的协同效应。
在上述方法的一些实施方案中,用抗CSF1R抗体(例如,本文所述的抗CSF1R抗体,比如包含HuAB1重链和轻链CDR的抗体)和PD-1/PD-L1抑制剂(例如,包含纳武单抗或派姆单抗重链和轻链CDR的抗PD-1抗体、或PD-1/PD-L1抑制剂融合蛋白、或PD-1/PD-L1抑制剂融合蛋白或肽,例如AMP-224或AUR-012)治疗患有非小细胞肺癌(NSCLC)的患者。在一些这样的实施方案中,患者具有IIIB期或IV期疾病、和/或在基于含铂双药的化疗方案或其他用于晚期或转移性疾病的化疗方案期间和/或之后已经表现出疾病进展或复发。在一些实施方案中,患者事先未曾暴露于PD-1/PD-L1抑制剂过,在其他实施方案中,患者对PD-1/PD-L1抑制剂治疗而言是难治性的。在一些实施方案中,以约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,以0.1-10mg/kg,例如约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,例如,以上述剂量之一,每1、2、3、4或5周1次,比如约每2周1次施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,与单独施用抗CSF1R抗体或PD-1/PD-L1抑制剂比较,在NSCLC的小鼠异种移植模型中施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂导致在肿瘤生长、重量和/或体积方面相比的协同效应。
在所述方法的一些实施方案中,用抗CSF1R抗体(例如,本文所述的抗CSF1R抗体,比如包含HuAB1的重链与轻链CDR的抗体)和PD-1/PD-L1抑制剂(例如,包含纳武单抗或派姆单抗重链和轻链CDR的抗PD-1抗体、或PD-1/PD-L1抑制剂融合蛋白或肽,诸如AMP-224或AUR-012)治疗黑素瘤。在一些这样的实施方案中,患者具有III期或IV期黑素瘤。在一些实施方案中,患者在用至少一种BRAF抑制剂治疗期间或之后已表现出疾病进展,或为BRAF野生型。在一些实施方案中,患者事先未曾暴露于PD-1/PD-L1抑制剂过,在其他实施方案中,患者对PD-1/PD-L1抑制剂治疗而言是难治性的。在一些实施方案中,以约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,以0.1-10mg/kg,例如约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,例如,以上述剂量之一,每1、2、3、4或5周1次,比如约每2周1次施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,与单独施用抗CSF1R抗体或PD-1/PD-L1抑制剂比较,在黑素瘤的小鼠异种移植模型中施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂导致在肿瘤生长、重量和/或体积方面相比的协同效应。
在所述方法的一些实施方案中,用抗CSF1R抗体(例如,本文所述的抗CSF1R抗体,比如包含HuAB1重链和轻链CDR的抗体)和PD-1/PD-L1抑制剂(例如,包含纳武单抗或派姆单抗重链和轻链CDR的抗PD-1抗体、或PD-1/PD-L1抑制剂融合蛋白、或PD-1/PD-L1抑制剂融合蛋白或肽如AMP-224或AUR-012)治疗头颈部鳞状细胞癌(SSCHN)。在一些实施方案中,患者具有III期或IV期SSCHN或具有复发或转移性SSCHN。在一些实施方案中,患者先前已经接受过化学治疗,例如铂类药物治疗,但已表现出肿瘤进展或复发。在一些实施方案中,患者先前已经接受过放射治疗,任选地连同铂类药物治疗,但已表现出肿瘤进展或复发。在一些实施方案中,患者未曾事先暴露于PD-1/PD-L1抑制剂,在其他实施方案中,患者对PD-1/PD-L1抑制剂治疗而言是难治性的。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体以约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂以0.1-10mg/kg,例如约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中,例如,以上述剂量之一,每1、2、3、4或5周1次,比如约每2周1次施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,与单独施用抗CSF1R抗体或PD-1/PD-L1抑制剂比较,在鳞状细胞癌的小鼠异种移植模型中施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂导致在肿瘤生长、重量和/或体积方面相比的协同效应。
在所述方法的一些实施方案中,用抗CSF1R抗体(例如,本文所述的抗CSF1R抗体,比如包含HuAB1的重链和轻链CDR的抗体)和PD-1/PD-L1抑制剂(例如,包含纳武单抗或派姆单抗重链和轻链CDR的抗PD-1抗体、或PD-1/PD-L1抑制剂融合蛋白或肽如AMP-224或AUR-012)治疗胰腺癌。在一些实施方案中,患者有记录在案的胰腺的局部性或转移性腺癌。在一些实施方案中,患者可能先前接受过手术和/或放射治疗。在一些实施方案中,患者未曾事先暴露于PD-1/PD-L1抑制剂,且在其他实施方案中,患者对PD-1/PD-L1抑制剂治疗而言是难治性的。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体以0.1、0.3、1、2、3或4mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂以0.5-10mg/kg,例如1、2、3、4、或5mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中,例如,以上述剂量之一,每1、2、3、4或5周1次,比如每2周1次施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂。在所述方法的一些实施方案中,用抗CSF1R抗体(例如,本文所述的抗CSF1R抗体,比如包含HuAB1的重链和轻链CDR的抗体)和PD-1/PD-L1抑制剂(例如,包含纳武单抗或派姆单抗的重链和轻链CDR的抗PD-1抗体、或PD-1/PD-L1抑制剂融合蛋白或肽如AMP-224或AUR-012)治疗结肠直肠癌。在一些实施方案中,患者具有结肠或直肠的腺癌。在一些实施方案中,患者具有转移性结肠直肠癌。在一些实施方案中,尽管先前使用了氟嘧啶、奥沙利铂、伊立替康、贝伐单抗、西妥昔单抗或帕尼单抗中的一种或多种进行了治疗,但患者还是具有转移性结肠直肠癌。在一些实施方案中,患者未曾事先暴露于PD-1/PD-L1抑制剂,在其他实施方案中,患者对PD-1/PD-L1抑制剂治疗而言是难治性的。在一些实施方案中,以约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,以0.1-10mg/kg,例如约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,例如,以上述剂量之一,每1、2、3、4或5周1次,比如约每2周1次施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,与单独施用抗CSF1R抗体或PD-1/PD-L1抑制剂比较,在胰腺癌的小鼠异种移植模型(例如包含KRasG12D/Ink4a-/-鼠胰腺导管腺癌(PDAC)细胞的模型)中施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂导致在肿瘤生长、重量和/或体积方面相比的协同效应。
在所述方法的一些实施方案中,用抗CSF1R抗体(例如,本文所述的抗CSF1R抗体,比如包含HuAB1重链和轻链CDR的抗体)和PD-1/PD-L1抑制剂(例如,包含纳武单抗或派姆单抗重链和轻链CDR的抗PD-1抗体、或诸如AMP-224或AUR-012的PD-1/PD-L1抑制剂融合蛋白或肽)治疗恶性胶质瘤(例如胶质母细胞瘤或胶质肉瘤)。在一些实施方案中,患者先前已经历手术、放射治疗和/或替莫唑胺治疗。在一些实施方案中,患者具有IV级恶性胶质瘤。在一些实施方案中,患者未曾事先暴露于PD-1/PD-L1抑制剂,在其他实施方案中,患者对PD-1/PD-L1抑制剂治疗而言是难治性的。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体以约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂以0.1-10mg/kg,例如约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用。在一些实施方案中,例如,以上述剂量之一,每1、2、3、4或5周1次,比如约每2周1次施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,与单独施用抗CSF1R抗体或PD-1/PD-L1抑制剂比较,在胶质瘤的小鼠异种移植模型中施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂导致在肿瘤生长、重量和/或体积方面相比的协同效应。
在一些实施方案中,该方法进一步包括施用一种或多种另外的抗癌剂。在某些实施方案中,所述抗癌剂选自与CTLA-4特异性结合并且抑制CTLA-4活性的抗体或其抗原结合部分(“抗CTLA-4抗体或其抗原结合部分”)、化学治疗、酪氨酸激酶抑制剂、抗VEGF抑制剂、吲哚胺-吡咯2,3-双加氧酶(IDO)抑制剂、或其任何组合。在一个实施方案中,抗癌剂是伊匹单抗。
在一些实施方案中,提供了包含抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂的组合物。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是抗体。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是抗PD-1抗体。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含选自纳武单抗和派姆单抗的抗体的重链和轻链CDR。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含选自纳武单抗和派姆单抗的抗体的重链和轻链可变区。在一些实施方案中,抗PD-1抗体选自纳武单抗和派姆单抗。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,抗PD-L1抗体包含选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C的抗体的重链和轻链CDR。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C的抗体的重链和轻链可变区。在一些实施方案中,抗PD-1抗体选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是融合蛋白。在一些实施方案中,融合蛋白是AMP-224。
在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体的抗体重链和/或抗体轻链可具有下述结构。
在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体重链可以包含与选自SEQ IDNO:9、11、13和39至45的序列至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列。在本文所述的任何方法中,抗CSF1R抗体轻链可以包含与选自SEQ ID NO:10、12、14和46至52的序列至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体重链可以包含与选自SEQ ID NO:9、11、13和39至45的序列至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列,并且抗CSF1R抗体轻链可以包含与选自SEQ ID NO:10、12、14和46至52的序列至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列。
在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3可以包含选自以下的一组序列:(a)SEQ ID NO:15、16、和17;(b)SEQ ID NO:21、22、和23;以及(c)SEQ ID NO:27、28、和29。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体LC CDR1、LCCDR2、和LC CDR3可以包含选自以下的一组序列:(a)SEQ ID NO:18、19、和20;(b)SEQ IDNO:24、25、和26;以及(c)SEQ ID NO:30、31、和32。
在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体重链可以包含HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3,其中HC CDR1、HC CDR2和HC CDR3包含选自以下的一组序列:(a)SEQ ID NO:15、16、和17;(b)SEQ ID NO:21、22、和23;以及(c)SEQ ID NO:27、28、和29,并且轻链可以包含LC CDR1、LC CDR2、和LC CDR3,其中LC CDR1、LC CDR2、和LC CDR3包含选自以下的一组序列:(a)SEQ ID NO:18、19、和20;(b)SEQ ID NO:24、25、和26;以及(c)SEQ ID NO:30、31、和32。
在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体可以包含:(a)包含与SEQ IDNO:9至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:10至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的轻链;(b)包含与SEQ ID NO:11至少95%、至少97%、至少99%或100%同一性的序列的重链和包含与SEQ ID NO:12至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(c)包含与SEQ ID NO:13至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:14至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(d)包含与SEQ ID NO:39至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(e)包含与SEQ ID NO:40至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(f)包含与SEQ ID NO:41至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:46至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(g)包含与SEQ ID NO:39至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ IDNO:47至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(h)包含与SEQ ID NO:40至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:47至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(i)包含与SEQ ID NO:41至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:47至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;和(j)包含与SEQ ID NO:42至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:48至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(k)包含与SEQ ID NO:42至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:49至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(1)包含与SEQ ID NO:42至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:50至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(m)包含与SEQ ID NO:43至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:48至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(n)包含与SEQ ID NO:43至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:49至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(o)包含与SEQID NO:43至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与与SEQ ID NO:50至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(p)包含与SEQ ID NO:44至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:51至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(q)包含与SEQ ID NO:44至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:52至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;(r)包含与SEQ ID NO:45至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:51至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链;或(s)包含与SEQ ID NO:45至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列的重链和包含与SEQ ID NO:52至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的序列的轻链。
在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体可以包含:(a)包含具有SEQ IDNO:15的序列的重链(HC)CDR1、具有SEQ ID NO:16的序列的HC CDR2、和具有SEQ ID NO:17的序列的HC CDR3的重链,以及包含具有SEQ ID NO:18的序列的轻链(LC)CDR1、具有SEQ IDNO:19的序列的LC CDR2、以及具有SEQ ID NO:20的序列的LC CDR3的轻链;(b)包含具有SEQID NO:21的序列的重链(HC)CDR1、具有SEQ ID NO:22的序列的HC CDR2和具有SEQ ID NO:23的序列的HC CDR3的重链,以及包含具有SEQ ID NO:24的序列的轻链(LC)CDR1、具有SEQID NO:25的序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:26的序列的LC CDR3的轻链;或(c)包含具有SEQ ID NO:27的序列的重链(HC)CDR1、具有SEQ ID NO:28的序列的HC CDR2和具有SEQ IDNO:29的HC CDR3的重链,以及包含具有SEQ ID NO:30的序列的轻链(LC)CDR1、具有SEQ IDNO:31的序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:32的序列的LC CDR3的轻链。
在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体可以包含:(a)包含SEQ ID NO:53的序列的重链和包含SEQ ID NO:60的序列的轻链;(b)包含SEQ ID NO:53的序列的重链和包含SEQ ID NO:61的序列的轻链;或(c)包含SEQ ID NO:58的序列的重链和包含SEQ IDNO:65的序列的轻链。在一些实施方案中,抗体包含重链和轻链,其中所述抗体包含:(a)由SEQ ID NO:53的序列组成的重链和由SEQ ID NO:60的序列组成的轻链;(b)由SEQ ID NO:53的序列组成的重链和由SEQ ID NO:61的序列组成的轻链;或(c)由SEQ ID NO:58的序列组成的重链和由SEQ ID NO:65的序列组成的轻链。
在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体可与人CSF1R结合和/或与食蟹猴CSF1R结合。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体可阻断配体与CSF1R结合。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体可阻断CSF1和/或IL-34与CSF1R结合。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体可阻断CSF1和IL-34两者与CSF1R结合。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体可抑制配体诱导的CSF1R磷酸化。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体可抑制CSF1和/或IL-34诱导的CSF1R磷酸化。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体可以小于1nM的亲和力(KD)与人CSF1R结合。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体在CSF1或IL-34存在下可抑制单核细胞增殖和/或存活应答。
在本文所述的任何组合物或方法中,PD-1/PD-L1抑制剂可以是具有下述结构的抗体,例如抗PD-1抗体。
在本文所述的任何组合物或方法中,PD-1/PD-L1抑制剂可以是具有这样的抗体重链的抗体,所述抗体重链可包含与选自SEQ ID NO:100和101的序列至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列。在本文所述的任何方法中,PD-1/PD-L1抑制剂可以是具有这样的抗体轻链的抗体,所述抗体轻链包含与选自SEQ ID NO:102和103的序列至少90%、至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的序列。
在本文所述的任何组合物或方法中,PD-1/PD-L1抑制剂可以是具有包含选自SEQID NO:105、107、和109的一组序列的重链(HC)CDR1、HC CDR2、和HC CDR3的抗体。在本文所述的任何组合物或方法中,PD-1/PD-L1抑制剂可以是具有包含选自SEQ ID NO:112、114、和116的一组序列的轻链(LC)CDR1、LC CDR2、和LC CDR3的抗体。
在本文所述的任何组合物或方法中,PD-1/PD-L1抑制剂可以是这样的抗体,其包含:(a)包含与SEQ ID NO:100至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的可变区序列的重链和包含与SEQ ID NO:102至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的可变区序列的轻链;(b)包含与SEQ ID NO:101至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的恒定区序列的重链和包含与SEQ ID NO:103至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的恒定区序列的轻链;(c)包含与SEQ ID NO:100至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的可变区序列的重链和包含与SEQ ID NO:102至少95%、至少97%、至少99%、或100%同一的可变区序列的轻链;和/或(d)包含与SEQ ID NO:101至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的恒定区序列的重链和包含与SEQ ID NO:103至少95%、至少97%、至少99%或100%同一的恒定区序列的轻链。
在本文所述的任何组合物或方法中,PD-1/PD-L1抑制剂可以是这样的抗体,其包含:包含具有SEQ ID NO:105的序列的重链(HC)CDR1、具有SEQ ID NO:107的序列的HCCDR2、和具有SEQ ID NO:109的序列的HC CDR3的重链,以及包含具有SEQ ID NO:112的序列的轻链(LC)CDR1、具有SEQ ID NO:114的序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:116的序列的LCCDR3的轻链。在本文所述的任何组合物或方法中,PD-1/PD-L1抑制剂可以是这样的抗体,其包含:包含具有SEQ ID NO:104的序列的重链(HC)FR1、具有SEQ ID NO:106的序列的HCFR2、具有SEQ ID NO:108的序列的HC FR3、和具有SEQ ID NO:110的序列的HC FR4的重链,以及包含具有SEQ ID NO:111的序列的轻链(LC)FR1、具有SEQ ID NO:113的序列的LC FR2、具有SEQ ID NO:115的序列的LC FR3、和具有SEQ ID NO:117的序列的LC FR4的轻链。
在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体或PD-1/PD-L1抑制剂可以是人源化抗体或嵌合抗体。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R或PD-1/PD-L1抑制剂可以选自Fab、Fv、scFv、Fab’、和(Fab’)2。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R或PD-1/PD-L1抑制剂可以选自IgA、IgG、和IgD。在本文所述的任何组合物或方法中,抗CSF1R抗体或PD-1/PD-L1抑制剂可以是IgG。在本文所述的任何方法中,抗体可以是IgG1、IgG2或IgG4。
在本文所述的任何方法中,肿瘤可以表达也可以不表达PD-L1。在一些实施方案中,肿瘤是PD-L1阳性的。在其他实施方案中,肿瘤是PD-L1阴性的。在本文所述的任何方法中,肿瘤可以表达也可以不表达PD-L2。在一些实施方案中,肿瘤是PD-L2阳性的。在其他实施方案中,肿瘤是PD-L2阴性的。
附图简述
图1A-C显示了人源化抗体huAb1至huAb16各自的人源化重链可变区的比对,如实施例1中讨论的。加框残基是人接纳体序列中被变回相应的小鼠残基的氨基酸。
图2A-C显示了人源化抗体huAb1至huAb16各自的人源化轻链可变区的比对,如实施例1中讨论的。加框氨基酸是人接纳体序列中被变回相应的小鼠残基的残基。
图3是显示各种癌症中的CSF1R表达与Tregs、PD-L1/PD-1表达和CD8+ T细胞之间的相关性的热图。
图4A显示了用MC38结肠直肠癌细胞皮下接种并施用抗CSF1R抗体、抗PD-1抗体或两种抗体的组合、或用IgG对照的C57BL/6小鼠中肿瘤体积随着时间推移的平均变化。与对照相比,抗CSF1R或抗PD-1治疗都降低了MC38的生长速率。抗CSF1R和抗PD-1的组合抑制MC38生长多于任一者单独治疗(P<0.05)。图4B显示了在治疗开始后第11天评估的个体MC38肿瘤体积(p值如图所示)。通过双尾非配对t检验确定统计学显著性。
图5显示了C57BL/6小鼠手术接种KRasG12D/Ink4a-/-鼠胰腺导管腺癌细胞(PDAC)细胞、结肠直肠癌细胞,并给药抗CSF1R抗体(标记为“008”的直条)、抗PD-1抗体或两种抗体的组合以及吉西他滨(GEM)后,C57BL/6小鼠的平均肿瘤重量。与对照小鼠相比,使用抗CSF1R或抗PD-1抗体进行治疗降低了肿瘤负荷。抗CSF1R、抗PD-1和GEM的组合与抗CSF1R和GEM或抗PD-1和GEM相比显著降低了肿瘤负荷(p值如图所示)。通过双尾非配对t检验确定统计学显著性。
图6是对实施例7和8中描述的涉及huAB1(也称为FPA008)和纳武单抗的临床实验的治疗群组的描述。
图7显示了实施例7和8的临床实验的剂量递增标准。
图8显示使用抗CSF1R抗体(称为cmFPA008)进行的治疗增加了两种结肠直肠小鼠肿瘤模型中的细胞毒性T细胞的频率以及PD-L1和其他基因的表达。用MC38(上图)或CT26(下图)结肠直肠癌细胞皮下接种免疫活性小鼠,并施用cmFPA008或小鼠IgG1作为对照。评估肿瘤样品(每组n≥7)中的基因表达,并对多个管家基因进行归一化。显示表达值是对IgG对照的相对值。通过双尾非配对t检验确定统计学显著性(*p<0.05,**p<0.01)。
详细说明
肿瘤相关巨噬细胞(TAM)据报道涉及许多癌症的发病机制,并与预后不良相关。抑制CSF1R可以减少小鼠模型和人类肿瘤中的免疫抑制性TAM。参见,例如,Ries等人,2014,Cancer Cell,25:846-859;Pyontech等人,2013,Nature Med.,19:1264-1272;和Zhu等人,2014,Cancer Res.,74:5057-5069。在胰腺肿瘤模型中,CSF1R的小分子抑制与免疫检查点的阻断发挥了协同作用。参见Zhu等人,2014,Cancer Res.,74:5057-5069。虽然不希望受任何具体理论的束缚,但是本发明涉及治疗可能既具有表达CSF1R的TAM、又具有表达PD1的CD8+ T细胞,并且对用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂联合治疗敏感的肿瘤的方法。在一些情况下,兼具表达CSF1R的TAM和表达PD-1的CD8+ T细胞的肿瘤可能对PD-1/PD-L1单一疗法具有抗性,而对联合治疗应当是敏感的。通过表达分析,本发明人已经鉴定了兼具表达CSF1R的TAM和表达PD-1的CD8+ T细胞的特定肿瘤类型,包括但不限于膀胱癌、***(例如鳞状细胞***)、头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)、直肠腺癌、非小细胞肺癌(NSCLC)、子宫内膜癌、***腺癌、结肠癌、卵巢癌(如浆液性上皮性卵巢癌)和黑素瘤。类似地,不希望受任何具体理论的束缚,具有高水平的表达CSF1R的TAM——它们抑制表达PD-1的CD8+ T细胞——的肿瘤可能对联合治疗是敏感的,例如,因为抗CSF1R抗体抑制TAM可以增强表达PD-1的CD8+ T细胞,使肿瘤对PD-1/PD-L1抑制剂敏感。
因此,本发明提供了治疗癌症的方法,包括施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是抗体。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是抑制PD-1的抗体。在一些这样的实施方案中,抗PD-1抗体破坏PD-L1与PD-1的结合。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是结合PD-L1的抗体。在一些这样的实施方案中,抗PD-L1抗体破坏PD-L1与PD-1的结合。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是破坏PD-L1与PD-1结合的融合蛋白,例如AMP-224。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是破坏PD-L1与PD-1结合的肽,例如AUR-012。
如上所述,在某些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体。在一些实施方案中,抗PD-L1Ab可取代本文公开的任何治疗方法或组合物中的抗PD-1Ab。在某些实施方案中,抗PD-L1Ab是BMS-936559(以前的12A4或MDX-1105)(参见,例如美国专利No.7,943,743;WO 2013/173223)。在其他实施方案中,抗PD-L1抗体是MPDL3280A(也称为RG7446)(参见,例如Herbst;美国专利No.8,217,149)或MEDI4736(Khleif,2013)。
在本文中使用的部分标题仅仅是出于组织的目的,而不应当解释为限制所描述的主题。在本文中引证的所有参考文献,包括专利申请和出版物,均出于任何目的通过提述完整并入本文。
定义
除非另行规定,结合本发明使用的科学和技术术语应具有本领域普通技术人员通常理解的含义。此外,除非上下文另有要求,单数术语应包括复数,并且复数术语应包括单数。
与重组DNA、寡核苷酸合成、组织培养和转化(例如电穿孔、脂质体转染)、酶促反应和纯化技术结合使用的示例性技术是本领域已知的。许多这样的技术和程序描述于,例如,Sambrook等人,Molecular Cloning:A Laboratory Manual(第2版,Cold Spring HarborLaboratory Press,Cold Spring Harbor,N.Y.(1989)),以及其他许多地方。另外,用于化学合成、化学分析、药物制备、配制和递送、以及患者治疗的示例性技术也是本领域已知的。
在本申请中,除非另有说明,“或”的使用意味着“和/或”。在多个从属权利要求的情况下,仅仅在替代方案中使用“或”引用一个以上的前述独立或从属权利要求。同样,诸如“要素”或“组分”之类的术语涵盖了包括一个单元的要素和组分以及包括一个以上的亚单元的要素和组分,除非另外特别说明。
如本文所述,任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应被理解为包括所述范围内的任何整数的值,并且在适当时包括其分数(诸如整数的十分之一和百分之一),除非另外指明。
单位、前缀和符号均以它们的国际单位制(SI)公认的形式表示。数值范围包括定义该范围的数字。在本文中提供的小标题不是本公开的不同方面的限制,可以通过整体上参考本说明书来获得这些方面。因此,通过完整地参考说明书,更详尽地定义了紧接着在下文中定义的术语。
除非另外指明,正如根据本公开所使用的,以下术语应理解为具有以下含义:
“施用”是指使用本领域技术人员已知的各种方法和递送***中的任何一种将包含治疗剂的组合物以物理方式引入到受试者中。抗PD-1Ab和/或抗PD-L1Ab的施用途径包括静脉内、肌内、皮下、腹膜内、脊柱或其他肠胃外施用途径,例如通过注射或输注。如本文中使用的短语“肠胃外施用”是指通常通过注射而不是肠内和局部施用的施用方式,包括但不限于静脉内、肌内、动脉内、鞘内、***内、病灶内、囊内、眶内、心内、皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内、硬膜外和胸骨内注射和输注、以及体内电穿孔。非肠胃外途径包括局部、表皮或粘膜施用途径,例如口服、鼻内、***、直肠、舌下或局部。还可以例如一次、多次、和/或经一个或多个延长的周期进行施用。
本文中使用的“不良事件”(AE)是与所使用的医疗关联的任何不利的、且通常是非预期的或不期望的征象(包括异常的实验室发现)、症状或疾病。例如,不良事件可以与响应于治疗的免疫***活化或免疫***细胞(例如T细胞)扩增关联。一种医疗可具有一种或多种关联的AE,并且各种AE的严重程度可以相同或不同。提到能够“改变不良事件”的方法是指降低与不同治疗方案的使用关联的一种或多种AE的发生和/或严重程度的治疗方案。术语“核酸分子”和“多核苷酸”可以互换使用,是指核苷酸聚合物。这样的核苷酸聚合物可以含有天然和/或非天然核苷酸,并且包括但不限于DNA、RNA和PNA。“核酸序列”是指核苷酸的线性序列,包括核酸分子或多核苷酸。
术语“多肽”和“蛋白质”可互换使用,是指氨基酸残基的聚合物,并且不限于某种最小长度。这种氨基酸残基聚合物可以含有天然或非天然氨基酸残基,并且包括但不限于含有氨基酸残基的肽、寡肽、二聚体、三聚体和多聚体。全长蛋白质及其片段都包含在该定义中。这些术语还包括多肽的表达后修饰,例如糖基化、唾液酸化、乙酰化、磷酸化,等等。此外,出于本发明的目的,“多肽”是指包括针对天然序列的修饰,例如缺失,添加和取代(通常在性质上保守)的蛋白质,只要该蛋白质保持期望的活性即可。这些修饰可以是故意的,比如通过定点诱变,或者可以是偶然的,比如通过产生蛋白质的宿主的突变或由于PCR扩增引起的错误。
术语“CSF1R”在本文中是指具有或不具有N末端前导序列的全长CSF1R,其包括N末端ECD、跨膜结构域和细胞内酪氨酸激酶结构域。在一些实施方案中,CSF1R是具有SEQ IDNO:1或SEQ ID NO:2的氨基酸序列的人CSF1R。
术语“程序性细胞死亡蛋白1”和“PD-1”是指属于CD28家族的免疫抑制受体。PD-1主要在体内表达于预先活化的T细胞,并与两种配体——PD-L1和PD-L2结合。如本文中使用的术语“PD-1”包括人PD-1(hPD-1),hPD-1的变体、同种型、和物种同源物,以及与hPD-1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-1序列可以GenBank登录号U64863找到。在一些实施方案中,PD-1是具有SEQ ID NO:96(前体,具有信号序列)或SEQ ID NO:97(成熟的,没有信号序列)的氨基酸序列的人PD-1。
术语“程序性细胞死亡1配体1”和“PD-L1”(PD-L1;B7同源物-1;B7-H1;或CD274)和“程序性死亡配体-2”(PD-L2;B7-DC;或CD273)是PD-1的两种细胞表面糖蛋白配体,其与PD-1结合后下调T细胞活化和细胞因子分泌。如本文中使用的术语“PD-L1”包括人PD-L1(hPD-L1),hPD-L1的变体、同种型、和物种同源物,以及与hPD-L1具有至少一个共同表位的类似物。完整的hPD-L1序列可以GenBank登录号Q9NZQ7找到。在一些实施方案中,PD-L1是具有SEQ ID NO:98(前体,具有信号序列)或SEQ ID NO:99(成熟的,没有信号序列)的氨基酸序列的人PD-L1。
“细胞毒性T淋巴细胞抗原-4”(CTLA-4)是指属于CD28家族的免疫抑制受体。CTLA-4在体内只在T细胞上表达,并结合两种配体,CD80和CD86(还分别称为B7-1和B7-2)。如本文中使用的术语“CTLA-4”包括人CTLA-4(hCTLA-4),hCTLA-4的变体、同种型、和物种同源物,以及与hCTLA-4具有至少一个共同表位的类似物。完整的hCTLA-4序列可以GenBank登录号AAB59385找到。
术语“PD-1/PD-L1抑制剂”是指破坏PD-1/PD-L1信号通路的部分(moiety)。在一些实施方案中,抑制剂通过与PD-1和/或PD-L1结合来抑制PD-1/PD-L1信号通路。在一些实施方案中,抑制剂还与PD-L2结合。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂阻断PD-1与PD-L1和/或PD-L2结合。PD-1/PD-L1抑制剂的非限制性实例包括与PD-1结合的抗体;与PD-L1结合的抗体;融合蛋白,比如AMP-224;和肽,比如AUR-012。
术语“抑制PD-1的抗体”是指与PD-1结合或与PD-L1结合从而抑制PD-1和/或PD-L1信号转导的抗体。在一些实施方案中,抑制PD-1的抗体与PD-1结合并阻断PD-L1和/或PD-L2与PD-1的结合。在一些实施方案中,抑制PD-1的抗体与PD-L1结合并阻断PD-1与PD-L1的结合。抑制与PD-L1结合的PD-1的抗体可以称为抗PD-L1抗体。抑制与PD-1结合的PD-1的抗体可以称为抗PD-1抗体。
如本文中使用的“PD-L1阳性”可以与“至少约5%的PD-L1表达”互换使用。可通过本领域中已知的任何方法来测量PD-L1表达。在一些实施方案中,通过自动IHC测量PD-L1表达。因此,正如自动IHC测量的,PD-L1阳性肿瘤可具有至少约5%、至少约10%或至少约20%的表达PD-L1的肿瘤细胞。在某些实施方案中,“PD-L1阳性”是指细胞表面上有至少100个表达PD-L1的细胞。
如本文中使用的“PD-L2阳性”可以与“至少约5%的PD-L2表达”互换使用。可通过本领域中已知的任何方法来测量PD-L2表达。在一些实施方案中,通过自动IHC测量PD-L2表达。因此,正如自动IHC测量的,PD-L2阳性肿瘤可具有至少约5%、至少约10%或至少约20%的表达PD-L2的肿瘤细胞。在某些实施方案中,“PD-L2阳性”是指细胞表面上有至少100个表达PD-L2的细胞。
关于抗CSF1R抗体,术语“阻断配体的结合”(所述配体诸如CSF1和/或IL-34及其语法变体)用于指抑制CSF1R与CSF1R配体(诸如CSF1和/或IL-34)之间的相互作用的能力。这种抑制可以通过任何机制发生,包括例如由于CSF1R上的重叠结合位点、和/或由改变配体亲和力的抗体诱导的CSF1R的构象变化等,通过配体结合进行直接干扰。被称为“功能性的”抗体和抗体片段的以具有这样的性质为特征。
关于抗PD-1抗体,术语“阻断配体的结合”(所述配体诸如PD-L1及其语法变体)用于指抑制PD-1与PD-1配体(诸如PD-L1)之间的相互作用的能力。这种抑制可以通过任何机制发生,包括例如由于PD-1上的重叠结合位点、和/或由改变配体亲和力的抗体诱导的PD-1的构象变化等,通过配体结合进行直接干扰。被称为“功能性的”抗体和抗体片段的以具有这样的性质为特征。
关于抗PD-L1抗体,术语“阻断配体的结合”(所述配体诸如PD-1及其语法变体)用于指抑制PD-L1与PD-L1配体(诸如PD-1)之间的相互作用的能力。这种抑制可以通过任何机制发生,包括例如由于PD-L1上的重叠结合位点、和/或由改变配体亲和力的抗体诱导的PD-L1的构象变化等,通过配体结合进行直接干扰。被称为“功能性的”抗体和抗体片段的以具有这样的性质为特征。
如本文中使用的术语“抗体”是指至少包含重链的互补决定区(CDR)1、CDR2和CDR3并且至少包含轻链的CDR1、CDR2和CDR3的分子,其中该分子能够与抗原结合。抗体这一术语包括但不限于能够结合抗原的片段,例如Fv,单链Fv(scFv)、Fab、Fab’、和(Fab’)2。术语抗体还包括但不限于嵌合抗体、人源化抗体和各种物种如小鼠、人、食蟹猴等的抗体。
在一些实施方案中,抗体包含重链可变区和轻链可变区。在一些实施方案中,抗体包含至少一条包含重链可变区和至少一部分重链恒定区的重链、以及至少一条包含轻链可变区和至少一部分轻链恒定区的轻链。在一些实施方案中,抗体包含两条重链和两条轻链,其中每条重链包含重链可变区和至少一部分重链恒定区,并且,其中每条轻链包含轻链可变区和至少一部分轻链恒定区。如本文中使用的,单链Fv(scFv),或包括例如包含所有六个CDR(三个重链CDR和三个轻链CDR)的单个多肽链的任何其他抗体被认为具有一条重链和一条轻链。在一些这样的实施方案中,重链是包含三个重链CDR的抗体区域,并且轻链是包含三个轻链CDR的抗体区域。
如本文中使用的术语“重链可变区”是指包含重链CDR1、框架(FR)2、CDR2、FR3、和CDR3的区域。在一些实施方案中,重链可变区还包含FR1的至少一部分和/或FR4的至少一部分。在一些实施方案中,重链CDR1对应于Kabat残基26至35;重链CDR2对应于Kabat残基50至65;而重链CDR3对应于Kabat残基95至102。参见,例如,Kabat Sequences of Proteins ofImmunological Interest(1987和1991,NIH,Bethesda,Md.);和图1。在一些实施方案中,重链CDR1对应于Kabat残基31至35;重链CDR2对应于Kabat残基50至65;而重链CDR3对应于Kabat残基95至102。参见同上。
如本文中使用的术语“重链恒定区”是指包含至少三个重链恒定结构域CH1、CH2、和CH3的区域。非限制性示例性重链恒定区包括γ、δ、和α。非限制性示例性重链恒定区还包括ε和μ。每个重链恒定区对应于一种抗体同种型。例如,包含γ恒定区的抗体为IgG抗体,包含δ恒定区的抗体为IgD抗体,包含α恒定区的抗体为IgA抗体。此外,包含μ恒定区的抗体为IgM抗体,包含ε恒定区的抗体为IgE抗体。某些同种型可以进一步细分为亚类。例如,IgG抗体包括但不限于,IgG1(包含γ1恒定区)、IgG2(包含γ2恒定区)、IgG3(包含γ3恒定区)、和IgG4(包含γ4恒定区)抗体;IgA抗体包括但不限于,IgA1(包含α1恒定区)和IgA2(包含α2恒定区)抗体;IgM包括但不限于,IgM1和IgM2。
在一些实施方案中,重链恒定区包含对抗体赋予期望特征的一个或多个突变(或取代)、添加或缺失。非限制性示例性突变为IgG4铰链区(在恒定区CH1和CH2之间)中的S241P突变,其将IgG4基序CPSCP改变为类似于IgG1中的相应基序的CPPCP。在一些实施方案中,该突变产生更稳定的IgG4抗体。参见,例如,Angal等人,Mol.Immunol.30:105-108(1993);Bloom等人,Prot.Sci.6:407-415(1997);Schuurman等人,Mol.Immunol.38:1-8(2001)。
如本文中使用的术语“重链”(缩写为HC)是指具有或不具有前导序列的至少包含重链可变区的多肽。在一些实施方案中,重链包含重链恒定区的至少一部分。如本文中使用的术语“全长重链”是指具有或不具有前导序列的包含重链可变区和重链恒定区的多肽。
如本文中使用的术语“轻链可变区”是指包含轻链CDR1、框架(FR)2、CDR2、FR3、和CDR3的区域。在一些实施方案中,轻链可变区还包含FR1和/或FR4。在一些实施方案中,轻链CDR1对应于Kabat残基24至34;轻链CDR2对应于Kabat残基50至56;而轻链CDR3对应于Kabat残基89至97。参见,例如,Kabat Sequences of Proteins of Immunological Interest(1987和1991,NIH,Bethesda,Md.);和图1。
如本文中使用的术语“轻链恒定区”是指包含轻链恒定结构域CL的区域。非限制性示例性轻链恒定区包括λ和κ。
如本文中使用的术语“轻链”(缩写为LC)是指具有或不具有前导序列的至少包含轻链可变区的多肽。在一些实施方案中,轻链包含轻链恒定区的至少一部分。如本文中使用的术语“全长轻链”是指具有或不具有前导序列的包含轻链可变区和轻链恒定区的多肽。
如本文中使用的“嵌合抗体”是指包含来自第一物种(比如小鼠、大鼠、食蟹猴等)的至少一个可变区和来自第二物种(比如人、食蟹猴等)的至少一个恒定区的抗体。在一些实施方案中,嵌合抗体包含至少一个小鼠可变区和至少一个人恒定区。在一些实施方案中,嵌合抗体包含至少一个食蟹猴可变区和至少一个人恒定区。在一些实施方案中,嵌合抗体包含至少一个大鼠可变区和至少一个小鼠恒定区。在一些实施方案中,嵌合抗体的所有可变区来自第一物种,并且嵌合抗体的所有恒定区均来自第二物种。
如本文中使用的“人源化抗体”是指其中非人可变区的框架区中的至少一个氨基酸已经被替换为来自人可变区的相应氨基酸的抗体。在一些实施方案中,人源化抗体包含至少一个人恒定区或其片段。在一些实施方案中,人源化抗体是Fab、scFv、(Fab’)2等。
如本文中使用的“CDR移植抗体”是指其中第一(非人)物种的互补决定区(CDR)已被移植到第二(人)物种的框架区(FR)上的人源化抗体。
如本文中使用的“人抗体”是指在人体中产生的抗体、在包含人免疫球蛋白基因的非人动物中产生的抗体如以及使用体外方法(例如噬菌体展示)选择的抗体,其中抗体库基于人免疫球蛋白序列。
“抗-抗原”Ab是指与抗原特异性结合的Ab。例如,抗PD-1Ab与PD-1特异性结合,抗PD-L1Ab与PD-L1特异性结合,抗CTLA-4Ab与CTLA-4特异性结合。
术语“前导序列”是指位于多肽的N末端的氨基酸残基序列,其有助于哺乳动物细胞分泌多肽。一旦多肽从哺乳动物细胞输出,前导序列即可能被切割,从而形成成熟蛋白质。前导序列可以是天然的或合成的,而且它们相对于与它们所附接的蛋白质而言可以是异源的或同源的。示例性的前导序列包括但不限于抗体前导序列,例如SEQ ID NO:3和4的氨基酸序列,它们分别对应于人轻链和重链前导序列。非限制性示例性前导序列还包括来自异源蛋白质的前导序列。在一些实施方案中,抗体缺乏前导序列。在一些实施方案中,抗体包含至少一个前导序列,其可以选自天然抗体前导序列和异源前导序列。
术语“载体”用于描述这样的多核苷酸,其可被工程化,从而包含克隆的、可在宿主细胞中增殖的多核苷酸(一个或多个)。载体可以包括以下元件中的一者或多者:复制起点、一个或多个调节感兴趣多肽表达的调节序列(例如,启动子和/或增强子)、和/或一个或多个选择标记基因(例如,抗生素抗性基因和可用于比色测定的基因,例如β-半乳糖苷酶)。术语“表达载体”是指用于在宿主细胞中表达感兴趣多肽的载体。
“宿主细胞”是指可以是或已经是载体或分离的多核苷酸的受体的细胞。宿主细胞可以是原核细胞或真核细胞。示例性真核细胞包括哺乳动物细胞,比如灵长类动物或非灵长类动物细胞;真菌细胞,如酵母;植物细胞;和昆虫细胞。非限制性示例性哺乳动物细胞分别包括但不限于,NSO细胞、细胞(Crucell)、以及293和CHO细胞及其衍生物,例如293-6E和DG44细胞。
如本文中使用的术语“分离的”是指已经与至少一部分通常在自然界中发现与其伴随的组分分开的分子。例如,当某一多肽与产生该多肽的细胞中的至少一些组分分开时,该多肽被称为“分离的”。若多肽在表达后被细胞分泌,则将含有该多肽的上清液与产生该多肽的细胞物理分离被视为“分离”该多肽。类似地,当一种多核苷酸不构成在自然界中通常发现的某一较大多核苷酸(例如,在DNA多核苷酸的情况下,基因组DNA或线粒体DNA)的一部分时,或者当一种多核苷酸与产生多核苷酸的细胞的至少一些组分分开时(例如,在RNA多核苷酸的情况下),这种多核苷酸被称为“分离的”。因此,宿主细胞内的载体中包含的DNA多核苷酸可以称为“分离的”,条件是该多核苷酸在自然界中并存在于该载体中。
术语“水平升高”是指在受试者的特定组织中的较高蛋白质水平,其相对于未患本文所述的癌症或其他病症的一个个体或多个个体的对照中的相同组织而言。水平升高可以是任何机制的结果,例如蛋白质的表达增加、稳定性增加、降解降低、分泌增加、清除率降低等。
术语“降低”是指使受试者的特定组织中的蛋白质的水平降低至少10%。在一些实施方案中,药剂,如结合CSF1R的抗体或PD-1/PD-L1抑制剂,可将受试者的特定组织中的蛋白质水平降低至少15%、至少20%、至少25%、至少30%、至少35%、至少40%、至少45%、至少50%、至少55%、至少60%、至少65%、至少75%、至少80%、至少85%、或至少90%。在一些实施方案中,蛋白质的水平相对于与药剂(例如,结合CSF1R的抗体或PD-1/PD-L1抑制剂)接触之前的蛋白质水平降低。
当在对治疗剂的抗性的语境中使用时,术语“抗性的”是指对标准剂量的治疗剂的应答降低或缺乏应答,所述应答降低或缺乏应答是相对于该受试者在过去对标准剂量的治疗剂的应答、或相对于患有相似病症的相似受试者对标准剂量的治疗剂的预期应答而言的。因此,在一些实施方案中,尽管以前没有向受试者施用过治疗剂,受试者也可能对治疗剂具有抗性,或受试者可以在以前一次或多次情况下对治疗剂作出应答之后对该治疗剂产生抗性。
术语“受试者”和“患者”在本文中可互换使用地指代人。在一些实施方案中,还提供了治疗其他哺乳动物的方法,所述哺乳动物包括但不限于,啮齿动物、猿猴、猫科动物、犬科动物、马科动物、牛、猪、绵羊、山羊、实验室哺乳动物、农场哺乳动物、运动哺乳动物和哺乳动物宠物。
如本文中使用的术语“样品”是指从包含例如基于物理、生物化学、化学和/或生理特征而将被表征、定量和/或鉴定的细胞和/或其他分子实体的受试者获得或衍生的混合物。示例性样品是组织样品。
术语“组织样品”是指从受试者的组织获得的相似细胞的集合。组织样品的来源可以是来自新鲜的、冷冻的和/或保存的器官或组织样品或活组织检查或抽吸物的固体组织;血液或血液成分;体液如脑脊髓液、羊水、腹膜液、滑膜液或间质液;来自受试者的妊娠或发育中的任何时间的细胞。在一些实施方案中,组织样品是滑膜活检组织样品和/或滑液样品。在一些实施方案中,组织样品是滑液样品。组织样品也可以是原代或培养的细胞或细胞系。任选地,从疾病组织/器官获得组织样品。组织样品可含有在自然界中不与该组织天然相互混在的化合物,例如防腐剂、抗凝剂、缓冲剂、固定剂、营养素、抗生素等等。如本文中使用的“对照样品”或“对照组织”是指从这样的来源获得的样品、细胞或组织,该来源已知没有或据信没有罹患受试者正在受治的疾病。
为本文的目的,组织样品的“切片”是指组织样品的一部分或块,例如从实体组织样品切下的组织薄片或细胞。
在本文中使用的术语“癌症”是指展现出异常高水平的增殖和生长的一群细胞。癌症可以是良性的(也称为良性肿瘤)、恶变前的、或恶性的。癌细胞可以是实体癌细胞或白血病癌细胞。在本文中使用术语“癌症生长”是指构成癌症一个或多个细胞的增殖或生长,使得癌症的大小或范围相应增加。
癌症的实例包括但不限于,癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤、和白血病。这些癌症的更具体的非限制性实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食道癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、非小细胞肺癌(包括鳞状细胞非小细胞肺癌)、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、***、卵巢癌、肝癌(liver cancer)、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肾细胞癌、肝癌、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌(hepatic carcinoma)、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑素瘤、和各种类型的头颈部癌(包括头颈部鳞状细胞癌)。
术语“复发性癌症”是指在先前的治疗方案之后有一段时间无法检测到癌症,而后又再现的癌症。
术语“进行性癌症”是自开始治疗方案以来,其大小增加或肿瘤扩散的癌症。在某些实施方案中,进行性癌症是自治疗方案开始以来,其大小增加或肿瘤扩散至少10%、至少20%、至少30%、至少40%或至少50%的癌症。
作为举例,“抗癌剂”促进受试者体内癌症的消退。在一些实施方案中,治疗有效量的药物促进癌症消退直至癌症消除。“促进癌症消退”是指有效量的药物单独施用或与抗癌剂组合施用导致肿瘤的生长或大小减少、肿瘤坏死、至少一种疾病症状的严重程度降低、疾病无症状期的频率和持续时间增加、或防止由于病痛导致的障碍或失能。此外,对于治疗而言,术语“有效的”和“有效性”既包括药理有效性也包括生理安全性。药理有效性是指药物促进患者体内癌症消退的能力。生理安全性是指毒性水平或其他由于药物施用导致的细胞、器官和/或生物水平上的不良生理效应(不良作用)的水平。
作为肿瘤治疗的实例,治疗有效量的抗癌剂相对于未治疗的受试者、相对于基线、或在某些实施方案中相对于用标准护理疗法治疗的患者,可以抑制细胞生长、抑制肿瘤生长、或减小肿瘤大小至少约5%、至少约10%、至少约10%、至少约15%、至少约20%、至少约25%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、至少约80%、至少约90%、至少约95%、或至少约100%。在本发明的其他实施方案中,肿瘤消退可以观察到,并且持续至少约20天、至少约40天、或至少约60天的时间。尽管有这些治疗效果的最终量度,但免疫治疗药物的评估还必须考虑到“免疫相关”的应答模式。
作为肿瘤治疗的实例,相对于未治疗的受试者,治疗有效量的抗癌剂可抑制细胞生长或肿瘤生长至少约20%、至少约30%、至少约40%、至少约50%、至少约60%、至少约70%、或至少约80%。
在本发明的其他实施方案中,肿瘤消退可以观察到并且持续至少约20天、至少约40天、或至少约60天的时间。尽管有这些治疗效果的最终量度,但免疫治疗药物的评估还必须考虑到“免疫相关”的应答模式。
“免疫相关”应答模式是指在用如下所述的免疫治疗剂治疗的癌症患者中经常观察到的临床应答模式:所述免疫治疗剂通过诱导癌症特异性免疫应答或通过修饰天然免疫过程产生抗肿瘤作用。这种应答模式的特征在于在最初的肿瘤负荷增加或新病变出现之后的有益治疗效果,而所述最初的肿瘤负荷的增加或新病变的出现在传统化学治疗剂的评价中会被归为疾病进展,并且会与药物无效同义。因此,对免疫治疗剂的正确评价可能需要长期监测这些药剂对目标疾病的影响。
“化学治疗剂/化疗剂”是用于治疗癌症的化合物。化学治疗剂的实例包括但不限于,烷化剂,如噻替派和环磷酰胺;烷基磺酸盐,如白消安、英丙舒凡和哌泊舒凡;氮丙啶类,如苯并多巴、卡波醌、美妥多巴和乌瑞多巴;乙烯亚胺类和甲基蜜胺类,包括六甲蜜胺、三亚乙基蜜胺、三亚乙基磷酰胺、三亚乙基硫代磷酰胺和三羟甲基蜜胺;番荔枝内酯类化合物(特别是布拉它辛和布拉它辛酮);喜树碱(包括合成类似物托泊替康);苔藓抑素;卡利他汀;CC-1065(包括它的阿多来新、卡折来新和比折来新合成类似物);隐藻素类(特别是隐藻素1和隐藻素8);多拉司他汀;倍癌霉素(包括合成类似物、KW-2189和CB1-TM1);艾植塞洛素;水鬼蕉碱;匍枝珊瑚醇;海绵抑素;氮芥类,如苯丁酸氮芥、萘氮芥、氯磷酰胺、雌莫司汀、异环磷酰胺、氮芥、盐酸氧氮芥、美法仑、新氮芥、苯芥胆甾醇、泼尼莫司汀、曲磷胺、尿嘧啶氮芥;亚硝基脲类,如卡莫司汀、氯脲菌素、福莫司汀、洛莫司汀、尼莫司汀和雷莫司汀;抗生素,如烯二炔类抗生素(例如,卡奇霉素,特别是卡奇霉素γ1I和卡奇霉素ω1I(参见,例如Agnew,Chem Intl.Ed.Engl.,33:183-186(1994));达内霉素,包括达内霉素A;双膦酸盐类,如氯屈膦酸盐;埃斯波霉素;以及新制癌菌素发色团和相关色蛋白烯二炔抗生素发色团)、阿克拉霉素类、放线菌素、氨茴霉素、偶氮丝氨酸、博来霉素、放线菌素C、卡柔比星、洋红霉素、嗜癌霉素、色霉素、放线菌素D、柔红霉素、多柔比星、6-重氮-5-氧代-L-正亮氨酸、阿霉素(包括吗啉代多柔比星、阿霉素多柔比星(包括吗啉代-多柔比星、氰基吗啉代-多柔比星、2-吡咯啉-多柔比星和脱氧多柔比星)、表柔比星、依索比星、伊达比星、麻西罗霉素、丝裂霉素类如丝裂霉素C、霉酚酸、诺拉霉素、橄榄霉素类、培洛霉素、泊非霉素、嘌呤霉素、三铁阿霉素、罗多比星、链黑霉素、链脲佐菌素、杀结核菌素、乌苯美司、净司他丁、佐柔比星;抗代谢物如甲氨蝶呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);叶酸类似物,如二甲叶酸、甲氨蝶呤、蝶罗呤、三甲曲沙;嘌呤类似物如氟达拉滨、6-巯基嘌呤、硫咪嘌呤、硫鸟嘌呤;嘧啶类似物如安西他滨、阿扎胞苷、6-氮杂尿苷、卡莫氟、阿糖胞苷、二脱氧尿苷、去氧氟尿苷、依诺他滨、氟尿苷;雄性激素,如卡普睾酮、屈他雄酮丙酸酯、环硫雄醇、美雄烷、睾内酯酮;抗肾上腺素,如氨鲁米特、米托坦、曲洛司坦;叶酸补充剂,如亚叶酸;醋葡醛内酯;醛磷酰胺糖苷;氨基乙酰丙酸;恩尿嘧啶;安吖啶;阿莫司汀;比生群;依达曲沙;地磷酰胺;地美可辛;地吖醌;依氟鸟氨酸;依利醋鞍;埃坡霉素;依托格鲁;硝酸镓;羟基脲;香菇多糖;氯尼达明;美登素生物碱类如美登素和安丝菌素;米托胍腙;米托蒽醌;莫哌达醇;尼曲吖啶;喷司他丁;苯来美特;吡柔比星;洛索蒽醌;鬼臼酸;2-乙基酰肼;丙卡巴肼;多糖复合物(JHS NaturalProducts,Eugene,OR);雷佐生;根霉素;西佐喃;锗螺胺;细交链孢菌酮酸;三亚胺醌;2,2′,2″-三氯三乙胺;单端孢霉烯类(特别是T-2毒素、疣孢菌素A、杆孢菌素A和蛇行菌素);乌拉坦;长春地辛;达卡巴嗪;甘露莫司汀;二溴甘露醇;二溴卫矛醇;哌泊溴烷;加西托新;***糖苷(“Ara-C”);环磷酰胺;噻替派;紫杉烷类,例如紫杉醇(Bristol-MyersSquibb Oncology,Princeton,N.J.)、 Cremophor-free、紫杉醇的白蛋白工程化纳米微粒制剂(American Pharmaceutical Partners,Schaumberg,Illinois)和多西他赛(Poulenc Rorer,Antony,France);苯丁酸氮芥(chloranbucil);吉西他滨;6-硫鸟嘌呤;巯嘌呤;甲氨蝶呤;铂类似物,如顺铂、奥沙利铂和卡铂;长春碱;铂;依托泊苷(VP-16);异环磷酰胺;米托蒽醌;长春新碱;长春瑞滨;诺消灵;替尼泊苷;依达曲沙;道诺霉素;氨基喋呤;希罗达;伊班膦酸盐;伊立替康(Camptosar,CPT-11)(包括伊立替康与5-FU和甲酰四氢叶酸的治疗方案);拓扑异构酶抑制剂RFS 2000;二氟甲基鸟氨酸(DMFO);类视黄醇,如视黄酸;卡培他滨;考布他汀;甲酰四氢叶酸(LV);奥沙利铂,包括奥沙利铂治疗方案(FOLFOX);降低细胞增殖的PKC-α、Raf、H-Ras、EGFR(例如厄洛替尼)和VEGF-A的抑制剂,以及上述任一项的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
其他非限制性的示例性化学治疗剂包括用于调节或抑制对癌症的激素作用的抗激素剂,如抗***和选择性***受体调节剂(SERM),包括例如他莫昔芬(包括他莫昔芬)、雷洛昔芬、屈洛昔芬、4-羟基他莫昔芬、曲沃昔芬、可莫昔芬(keoxifene)、LY117018、奥那司酮和托瑞米芬;抑制酶芳香酶的芳香酶抑制剂,其调节肾上腺中的***产生,例如4(5)-咪唑、氨鲁米特、醋酸甲地孕酮、依西美坦、福美司坦、法倔唑、伏氯唑、来曲唑和阿那曲唑;和抗雄激素,如氟他胺、尼鲁米特、比卡鲁胺、亮丙瑞林和戈舍瑞林;以及曲沙他滨(1,3-二氧戊环核苷胞嘧啶类似物);反义寡核苷酸,特别是抑制涉及异常细胞增殖的信号通路中的基因表达的那些,例如PKC-a、Ralf和H-Ras;核酶如VEGF表达抑制剂(例如核酶)和HER2表达抑制剂;诸如基因治疗疫苗之类的疫苗,例如疫苗、疫苗和疫苗; rIL-2;拓扑异构酶1抑制剂; rmRH;以及上述任一项的药学上可接受的盐、酸或衍生物。
“抗血管生成剂”或“血管生成抑制剂”是指直接或间接抑制血管生成、血管发生或不期望的血管通透性的小分子量物质、多核苷酸(包括,例如抑制性RNA(RNAi或siRNA))、多肽、分离的蛋白质、重组蛋白、抗体、或其缀合物或融合蛋白。应当理解,抗血管生成剂包括结合并阻断血管生成因子或其受体的血管生成活性的那些物质。例如,抗血管生成剂是血管生成剂的抗体或其他拮抗剂,例如VEGF-A抗体(例如贝伐单抗)或VEGF-A受体(例如KDR受体或Flt-1受体)的抗体、抗PDGFR抑制剂如(甲磺酸伊马替尼)、阻断VEGF受体信号转导的小分子(例如PTK787/ZK2284、SU6668、/SU11248(苹果酸舒尼替尼)、AMG706,或描述于例如国际专利申请WO 2004/113304中的那些小分子)。抗血管生成剂还包括天然血管生成抑制剂,例如血管抑素、内皮抑素等。参见,例如,Klagsbrun和D’Amore(1991)Annu.Rev.Physiol.53:217-39;Streit和Detmar(2003)Oncogene 22:3172-3179(例如,表3列出的恶性黑素瘤的抗血管生成治疗);Ferrara和Alitalo(1999)NatureMedicine 5(12):1359-1364;Tonini等人(2003)Oncogene 22:6549-6556(例如,表2列出的已知的抗血管生成因子);以及Sato(2003)Int.J.Clin.Oncol.8:200-206(例如,表1中列出的在临床试验中使用的抗血管生成剂)。
如本文中使用的“生长抑制剂”是指在体外或体内抑制细胞(例如表达VEGF的细胞)的生长的化合物或组合物。因此,生长抑制剂可以是显著降低在S期的细胞(例如表达VEGF的细胞)百分比的抑制剂。生长抑制剂的实例包括但不限于,阻断细胞周期进展(在S期以外的位置)的物质,例如诱导G1阻滞和M期阻滞的物质。经典的M期阻断剂包括长春花碱类(长春新碱和长春碱)、紫杉烷类和拓扑异构酶II抑制剂,如多柔比星、表柔比星,柔红霉素、依托泊苷和博来霉素。那些阻滞G1的物质也波及到S期阻滞,例如DNA烷化剂,如他莫昔芬、***、达卡巴嗪、氮芥、顺铂、甲氨蝶呤、5-氟尿嘧啶和ara-C。更多信息可以例如在Mendelsohn和Israel编辑的“The Molecular Basis of Cancer”第1章第13页由Murakami等人撰写的标题为“Cell cycle regulation,oncogenes,and antineoplastic drugs”(W.B.Saunders,Philadelphia,1995)的文章中找到。紫杉烷类(紫杉醇和多西他赛)均为来源于紫杉树的抗癌药物。来源于欧洲紫杉的多西他赛(Rhone-Poulenc Rorer)是紫杉醇(Bristol-Myers Squibb)的半合成类似物。紫杉醇和多西他赛促进从微管蛋白二聚体组装成微管,并通过防止解聚而使微管稳定化,导致细胞中有丝***的抑制。
术语“抗肿瘤组合物”是指包含至少一种活性治疗剂的可用于治疗癌症的组合物。治疗剂的实例包括但不限于,例如化学治疗剂、生长抑制剂、细胞毒性剂、放射治疗中使用的试剂、抗血管生成剂、癌症免疫治疗剂、凋亡剂、抗微管蛋白剂、和治疗癌症的其他药剂,如抗HER-2抗体、抗CD20抗体、表皮生长因子受体(EGFR)拮抗剂(例如,酪氨酸激酶抑制剂)、HER1/EGFR抑制剂(例如,厄洛替尼血小板衍生生长因子抑制剂(例如,格列卫(甲磺酸伊马替尼))、COX-2抑制剂(例如,塞来考昔)、干扰素、CTLA-4抑制剂(例如,抗CTLA抗体伊匹单抗)、PD-1抑制剂(例如,抗PD-1抗体,BMS-936558)、PD-L1抑制剂(例如,抗PD-L1抗体,MPDL3280A)、PD-L2抑制剂(例如,抗PD-L2抗体)、TIM3抑制剂(例如,抗TIM3抗体)、细胞因子、与下列靶标ErbB2、ErbB3、ErbB4、PDGFR-β、BlyS、APRIL、BCMA、PD-1、PD-L1、PD-L2、CTLA-4、TIM3、或VEGF受体、TRAIL/Apo2的一者或多者结合的拮抗剂(例如,中和抗体),以及其他生物活性剂和有机化学剂等等。以上物质的组合也包括在本发明中。
当药剂中和、阻断、抑制、消除、降低和/或干扰因子的活性时,包括当该因子为配体时药剂与一种或多种受体结合,则该药剂“拮抗”该因子的活性。
如本文中使用的“治疗”是指治疗性治疗和预防用药性或预防性措施,其目的是预防或减缓(减轻)靶向的病理状况或病症。在某些实施方案中,术语“治疗”涵盖在哺乳动物(包括人)中疾病治疗剂的任何施用或应用,并且包括抑制或减缓疾病或疾病进展;部分或完全应答疾病,例如通过引起消退、或恢复或修复丧失的、失去的或有缺陷的功能;刺激无效过程;或使疾病平稳到降低的严重程度。术语“治疗”还包括降低任何表型特征的严重性和/或降低该特征的发生率、程度或可能性。需要治疗者包括已经患有失调者以及具有患该失调的倾向者、或其中有待预防该失调者。
如本文中使用的“治疗前”或“基线”是指在施用特定治疗之前,例如在施用抗癌剂,例如免疫治疗,例如抗PD-1Ab或其抗原结合部分或抗CSF1R Ab或其抗原结合部分之前的受试者的状态。“治疗前”可以指未经治疗的受试者或已经接受一种或多种在先治疗的受试者的状态。因此,即使受试者在本治疗或疗法之前的某个时间接受过某种形式的治疗或疗法,也有可能将受试者视为“治疗前”。此外,“治疗前”可以指直到施用本治疗的时刻之前的任何时刻。例如,“治疗前”可以包括施用治疗前的数周、数天、数小时、数分钟或数秒。在一个具体实施方案中,可以在施用第一剂量的治疗或疗法之前即刻从受试者采集“治疗前”样品。“治疗前”和“基线”在本文中可互换使用。
如本文中使用的“治疗中”是指受试者已经接受一个或多个初始剂量的特定治疗,例如抗癌剂,例如免疫治疗,例如抗PD-1 Ab或其抗原结合部分或抗CSF1R Ab或其抗原结合部分的状态。“治疗中”可以指仅接受了单个剂量的抗PD-1 Ab或其抗原结合部分或抗CSF1RAb或抗原结合部分的受试者或接受了多个剂量的抗PD-1 Ab或其抗原结合部分或抗CSF1RAb或抗原结合部分的受试者。在一些方面,“治疗中”是指正在接受进行中的特定治疗方案的受试者,例如,受试者正在接受用抗PD-1 Ab或其抗原结合部分或抗CSF1R Ab或其抗原结合部分进行的治疗。在某些实施方案中,可以在约第1天、约第2天、约第3天、约第4天、约第5天、约第6天、约第7天、约第8天、约第9天、约第10天、约第11天、约第12天、约第13天、约第14天、约第15天、约第16天、约第17天、约第18天、约第19天、约第20天、约第21天(或以上时间的任何组合)从受试者采集“治疗中”样品,其中治疗在第1天施用。在某些实施方案中,所述治疗为施用抗PD-1 Ab或其抗原结合部分或抗PD-L1 Ab或其抗原结合部分。在一些实施方案中,在每个21天周期的第1天施用抗PD-1 Ab或其抗原结合部分或抗CSF1R Ab或其抗原结合部分。在某些实施方案中,在21天周期的约第1天、约第2天、约第3天、约第4天、约第5天、约第6天、约第7天、约第8天、约第9天、约第10天、约第11天、约第12天、约第13天、约第14天、约第15天、约第16天、约第17天、约第18天、约第19天、约第20天、或约第21天,或以上时间的任何组合,从受试者采集“治疗中”样品。在一个具体实施方案中,在第1周期的第1天、第2周期的第1天、第2周期的第8天、第4周期的第1天,或以上时间的任何组合,采集治疗中样品。在一个实施方案中,在第2周期的第8天采集治疗中样品。
治疗前和治疗中样品可以以肿瘤活检(例如,芯针活检)、部分或完全手术切除、抽血的形式,或本领域已知的任何其他方法采集。在某些实施方案中,选择用于活检的肿瘤部位先前未曾接受过放射治疗。
术语“免疫治疗”是指通过包括诱导、增强、抑制或以其他方式修饰免疫应答在内的方法治疗罹患疾病或处于患病风险中或遭受疾病复的受试者。
术语“有效量”或“治疗有效量”是指有效治疗受试者的疾病或病症的药物的量。在某些实施方案中,有效量是指在足够的剂量和时程下,可有效实现期望的治疗或预防结果的量。本发明的抗CSF1R抗体和/或PD-1/PD-L1抑制剂的治疗有效量可以根据个体的疾病状态、年龄、性别和体重等因素以及一种抗体或多种抗体以在个体中引发期望应答的能力而变化。治疗有效量涵盖这样的量,在该量下,某种抗体或多种抗体的治疗有益效果超过任何毒性或有害作用。在一些实施方案中,表述“有效量”是指对治疗癌症有效的抗体量。“治疗量”是指监管机构已经批准使用的药物的剂量。如本文中使用的“亚治疗量”是指显著低于批准剂量的药物或治疗剂的剂量。治疗剂促进疾病消退的能力可以使用多种技术人员已知的方法来评估,例如在临床试验期间的人类受试者中,在预测在人体内效力的动物模型***中,或者通过在体外试验中测定治疗剂的活性。
“预防有效量”是指在必要的剂量和时程下,可有效实现期望的预防结果的量。通常(但不一定),由于预防剂量是在疾病之前或疾病早期的受试者中使用,因此预防有效量将小于治疗有效量。
受试者可以被表征为具有一种或多种“先前治疗”或为“未经治疗的”。如本文中使用的,除非另外指明,“先前治疗”是指对于癌症的任何先前的全身性治疗。“未经治疗的”受试者是在肿瘤转移或辅助疗法情境下从未接受过任何先前的全身性治疗的受试者。
如本文中使用的,如果施用多个剂量以确定患者对抗PD-1 Ab或抗CSF1R Ab治疗的敏感性,即某些蛋白质(例如,PD-L1)的差异表达,则术语“第一剂量”包括在施用“第二剂量”之前施用的单个剂量,但可以是多于一个剂量,即,多个剂量(至少两个剂量、至少三个剂量或更多)。术语“第一剂量”也可以是治疗剂量、高于治疗剂量的剂量、或亚治疗剂量。
如本文中使用的术语“第二剂量”还可以包括在第一剂量(单个剂量或多个剂量)之后施用的单个剂量或多个剂量。第二剂量可以是治疗剂量。
术语“固定剂量”(fixed dose)用于本发明的组合物或方法时是指单一组合物中的两种或更多种不同的抗体在该组合物中彼此以特定的(固定的)比率存在。在一些实施方案中,固定剂量基于抗体的重量(例如,mg)。在特定实施方案中,固定剂量基于抗体的浓度(例如,mg/m1)。在一些实施方案中,第一抗体对第二抗体的比率为至少约1∶1、约1∶2、约1∶3、约1∶4、约1∶5、约1∶6、约1∶7、约1∶8、约1∶9、约1∶10、约1∶15、约1∶20、约1∶30、约1∶40、约1∶50、约1∶60、约1∶70、约1∶80、约1∶90、约1∶100、约1∶120、约1∶140、约1∶160、约1∶180、约1∶200、约200∶1、约180∶1、约160∶1、约140∶1、约120∶1、约100∶1、约90∶1、约80∶1、约70∶1、约60∶1、约50∶1、约40∶1、约30∶1、约20∶1、约15∶1、约10∶1、约9∶1、约8∶1、约7∶1、约6∶1、约5∶1、约4∶1、约3∶1、或约2∶1mg第一抗体对mg第二抗体。例如,第一抗体与第二抗体的3∶1的比率可以表示一个小瓶可以含有约240mg的第一抗体和80mg的第二抗体,或含有约3mg/ml的第一抗体和1mg/ml第二抗体。
术语“不变剂量”(flat dose)用于本发明的组合物时表示向患者施用一定的剂量,而不考虑患者的重量或体表面积(BSA)。因此,不变剂量并非以mg/kg剂量的形式提供,而是作为药剂(例如,抗CSF1R抗体和/或PD-1/PD-L1抑制剂)的绝对量提供。例如,60kg的人和100kg的人将接受相同剂量的组合物(例如,240mg抗PD-1抗体和80mg抗CSF1R抗体,装在含有240mg抗PD-1抗体和80mg抗CSF1R抗体的单个固定剂量给药小瓶(fixed dosing vial)中(或装在两个含有120mg抗PD-1抗体和40mg抗CSF1R抗体的固定剂量给药小瓶中,等等))。
如本文中所提及的术语“基于重量的剂量”是指施用给患者的剂量是基于患者的体重计算的。例如,当具有60kg体重的患者需要3mg/kg抗PD-1抗体与1mg/kg抗CSF1R抗体的组合时,人们可以从具有3∶1比率的抗PD1抗体和抗CSF1R抗体的固定剂量给药制剂中一次性抽取适量的抗PD-1抗体(即,180mg)和抗CSF1R抗体(即,60mg)。
与一种或多种其他治疗剂“组合”(或“联合”)施用包括以任何顺序同时和连续(序贯)施用。
“药学上可接受的载体”是指本领域常规地与治疗剂一起使用的无毒固体、半固体或液体填充剂、稀释剂、包封材料、配制助剂或载体,其与治疗剂一起构成向受试者施用的“药物组合物”。药学上可接受的载体在所采用的剂量和浓度时对接受者是无毒的,并且与制剂的其他成分相容。药学上可接受的载体对于所采用的制剂而言是适合的。例如,如果口服施用治疗剂,则载体可以是凝胶胶囊。如果要皮下施用治疗剂,则理想的载体对皮肤应无刺激性,并且不引起注射部位的反应。
术语“难治的”当用于某种治疗时,表示对该治疗缺乏部分或完全的临床应答。例如,如果患者在接受至少2个剂量的PD-1或PD-L1抑制剂后未表现出至少部分应答,则所述患者可以被视为对该抑制剂而言是难治的。
分类为“III期”或“IIIB期”或“IV期”或“IV级”等等的患者是基于其特定疾病的分类***被分类的。例如,根据国际肺癌研究协会胸部肿瘤分期手册(InternationalAssociation for the Study of Lung Cancer Staging manual in Thoracic oncology)第7版,NSCLC患者可被分为“IIIB期”或“IV期”。根据美国联合委员会癌症分期***(American Joint Committee on Cancer staging system),黑素瘤患者可被分为“III期”或“IV期”。根据世界卫生组织标准,恶性胶质瘤患者可被分为“IV级”。
抗CSF1R抗体
抗CSF1R抗体包括但不限于人源化抗体、嵌合抗体、小鼠抗体、人抗体和包含本文中讨论的重链和/或轻链CDR的抗体。
示例性人源化抗体
在一些实施方案中,提供了结合CSF1R的人源化抗体。人源化抗体可用作治疗分子,因为人源化抗体降低或消除了人对非人抗体的免疫应答(比如人抗小鼠抗体(HAMA)应答),人对非人抗体的免疫应答可导致对抗体治疗剂的免疫应答,并降低治疗效果。
人源化抗体的非限制性示例包括本文所述的huAb1至huAb16。人源化抗体的非限制性示例还包括包含选自huAb1至huAb16的抗体的重链可变区和/或选自huAb1至huAb16的抗体的轻链可变区的抗体。非限制性示例性人源化抗体还包括包含选自SEQ ID NO:39到45的重链可变区和/或选自SEQ ID NO:46到52的轻链可变区的抗体。示例性人源化抗体还包括但不限于,包含选自0301、0302和0311的抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3、和/或轻链CDR1、CDR2和CDR3的人源化抗体。
在一些实施方案中,人源化抗CSF1R抗体包含选自0301、0302和0311的抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3和/或轻链CDR1、CDR2和CDR3。非限制性示例性人源化抗CSF1R抗体包括包含选自下列的重链CDR1、CDR2和CDR3组的抗体:SEQ ID NO:15、16和17;SEQ ID NO:21、22和23;和SEQ ID NO:27、28和29的。非限制性示例性人源化抗CSF1R抗体还包括包含选自下列的轻链CDR1、CDR2和CDR3组的抗体:SEQ ID NO:18、19和20;SEQ ID NO:24、25和26;和SEQID NO:30、31和32。
非限制性示例性人源化抗CSF1R抗体包括包含表1中的重链CDR1、CDR2和CDR3组以及轻链CDR1、CDR2和CDR3组的抗体(显示了SEQ ID NO;关于序列参见表8)。表1的各行显示示例性抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3。
表1:重链和轻链CDR
其他示例性人源化抗体
在一些实施方案中,人源化抗CSF1R抗体具有包含与选自SEQ ID NO:9、11、13、以及39到45的序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列的重链,并且其中所述抗体结合CSF1R。在一些实施方案中,人源化抗CSF1R抗体具有包含与选自SEQ ID NO:10、12、14、以及46到52的序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列的轻链,其中所述抗体结合CSF1R。在一些实施方案中,人源化抗CSF1R抗体包含:包含与选自SEQ ID NO:9、11、13、以及39到45的序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列的重链,以及包含与选自SEQ ID NO:10、12、14、以及46到52的序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列的轻链;其中所述抗体结合CSF1R。
如本文中使用的,可以使用例如计算机程序来确定特定某一特定多肽是否与某一特定氨基酸序列例如至少95%同一。当确定某一特定序列是否与参考序列例如至少95%同一时,同一性的百分比是在参考氨基酸序列的全长上计算的。
在一些实施方案中,人源化的抗CSF1R抗体包含本文讨论的CDR中的至少一个。也就是说,在一些实施方案中,人源化抗CSF1R抗体包含自本文讨论的重链CDR1、本文讨论的重链CDR2、本文讨论的重链CDR3、本文讨论的轻链CDR1、本文讨论的轻链CDR2、和本文讨论的轻链CDR3中选择的至少一个CDR。此外,在一些实施方案中,人源化抗CSF1R抗体包含基于本文讨论的CDR的至少一个突变的CDR,其中所述突变的CDR相对于本文讨论的CDR包含1、2、3或4个氨基酸取代。在一些实施方案中,一个或多个氨基酸取代是保守氨基酸取代。本领域技术人员可以选择特定CDR序列的一个或多个适合的保守氨基酸取代,其中所述适合的保守氨基酸取代预计不会显著改变包含该突变的CDR的抗体的结合特性。
示例性的人源化抗CSF1R抗体还包括与本文所述的抗体竞争结合CSF1R的抗体。因此,在一些实施方案中,提供了与选自Fab 0301、0302和0311的抗体竞争结合CSF1R的人源化抗CSF1R抗体;和这些Fab的二价(即,具有两条重链和两条轻链)抗体版本。
示例性人源化抗体恒定区
在一些实施方案中,本文所述的人源化抗体包含一个或多个人恒定区。在一些实施方案中,人重链恒定区属于选自IgA、IgG和IgD的同种型。在一些实施方案中,人轻链恒定区属于选自κ和λ的同种型。在一些实施方案中,本文所述的人源化抗体包含人IgG恒定区。在一些实施方案中,本文所述的人源化抗体包含人IgG4重链恒定区。在一些这样的实施方案中,本文所述的人源化抗体包含在人IgG4恒定区中的S241P突变。在一些实施方案中,本文所述的人源化抗体包含人IgG4恒定区和人κ轻链。
重链恒定区的选择可以决定抗体是否在体内具有效应物功能。在一些实施方案中,这种效应物功能包括抗体依赖性细胞介导的细胞毒性(ADCC)和/或补体依赖性细胞毒性(CDC),并且可导致该抗体所结合的细胞的杀伤。在包括治疗某些癌症的方法在内的一些治疗方法中,例如当抗体与支持肿瘤的维持或生长的细胞结合时,杀伤细胞是期望的。可能支持肿瘤的维持或生长的示例性细胞包括但不限于,肿瘤细胞本身;有助于向肿瘤募集血管***的细胞;以及提供支持或促进肿瘤生长或肿瘤存活的配体、生长因子或反受体的细胞。在一些实施方案中,当效应物功能为合意时,选择包含人IgG1重链或人IgG3重链的抗CSF1R抗体。
可以通过任何方法将抗体人源化。人源化的非限制性示例性方法包括例如在美国专利No.5,530,101、5,585,089、5,693,761、5,693,762、6,180,370;Jones等人,Nature321:522-525(1986);Riechmann等人,Nature 332:323-27(1988);Verhoeyen等人,Science239:1534-36(1988);和美国公开号US 2009/0136500中描述的方法。
如上所述,人源化抗体是其中非人可变区的框架区中的至少一个氨基酸已经被替换为来自人框架区中的相应位置的氨基酸的抗体。在一些实施方案中,非人可变区的框架区中的至少两个、至少三个、至少四个、至少五个、至少六个、至少七个、至少八个、至少九个、至少10个、至少11个、至少12个、至少15个、或至少20个氨基酸被替换为来自一个或多个人框架区中的一个或多个相应位置的氨基酸。
在一些实施方案中,用于取代的相应的人氨基酸中的一些来自不同的人免疫球蛋白基因的框架区。也就是说,在某些这样的实施方案中,非人氨基酸中的一个或多个可以被替换为来自第一人抗体的人框架区的相应氨基酸或者被第一人免疫球蛋白基因编码;非人氨基酸中的一个或多个可以被替换为来自第二人抗体的人框架区的相应氨基酸或者被第二人免疫球蛋白基因编码;一个或多个非人氨基酸可以被替换为来自第三人抗体的人框架区的相应氨基酸或者被第三人免疫球蛋白基因编码,等等。此外,在一些实施方案中,用于在单一框架区(例如,FR2)中进行取代的所有相应的人氨基酸不必来自同一种人框架。然而,在一些实施方案中,所有用于取代的相应的人氨基酸均来自相同的人抗体或由相同的人免疫球蛋白基因编码。
在一些实施方案中,通过将一个或多个完整框架区替换为相应的人框架区来将抗体人源化。在一些实施方案中,选择与要替换的非人框架区具有最高水平的同源性的人框架区。在一些实施方案中,这样的人源化抗体是CDR移植抗体。
在一些实施方案中,在CDR移植后,将一个或多个框架氨基酸改变回复为小鼠框架区中的相应氨基酸。在一些实施方案中,进行了这样的“回复突变”,以保留表现出有助于一个或多个CDR的结构和/或可能涉及抗原接触和/或表现出涉及抗体的整体结构完整性的一个或多个小鼠框架氨基酸。在一些实施方案中,在CDR移植后对抗体的框架区进行了十个或更少、九个或更少、八个或更少、七个或更少、六个或更少、五个或更少、四个或更少、三个或更少、两个或更少、一个、或零个回复突变。
在一些实施方案中,人源化抗体还包含人重链恒定区和/或人轻链恒定区。
示例性嵌合抗体
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体是嵌合抗体。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含至少一个非人可变区和至少一个人恒定区。在一些这样的实施方案中,抗CSF1R抗体的所有可变区都是非人可变区,并且抗CSF1R抗体的所有恒定区都是人恒定区。在一些实施方案中,嵌合抗体的一个或多个可变区是小鼠可变区。嵌合抗体的人恒定区与其所替换的非人恒定区(如果有的话)不必为相同的同种型。嵌合抗体在例如美国专利No.4,816,567;和Morrison等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81:6851-55(1984)中有讨论。
非限制性示例性嵌合抗体包括包含选自0301、0302和0311的抗体的重链和/或轻链可变区的嵌合抗体。另外的非限制性示例性嵌合抗体包括包含选自0301、0302和0311的抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3和/或轻链CDR1、CDR2和CDR3的嵌合抗体。
非限制性示例性嵌合抗CSF1R抗体包括包含以下各对重链和轻链可变区的抗体:SEQ ID NO:9和10;SEQ ID NO:11和12;以及SEQ ID NO:13和14。
非限制性示例性抗CSF1R抗体包括包含以上表1中所示的一组重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3的抗体。
其他示例性嵌合抗体
在一些实施方案中,嵌合抗CSF1R抗体具有包含与选自SEQ ID NO:9、11、13、以及39到45的序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一性的可变区序列的重链,其中所述抗体结合CSF1R。在一些实施方案中,嵌合抗CSF1R抗体具有包含与选自SEQ ID NO:10、12、14、以及46到52的序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一性的可变区序列的轻链,其中所述抗体结合CSF1R。在一些实施方案中,嵌合抗CSF1R抗体包含:包含与选自SEQ ID NO:9、11、13、以及39到45的序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一性的可变区序列的重链以及包含与选自SEQ ID NO:10、12、14、以及46到52的序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一性的可变区序列的轻链;其中所述抗体结合CSF1R。
在一些实施方案中,嵌合抗CSF1R抗体包含本文讨论的CDR中的至少一个。也就是说,在一些实施方案中,嵌合抗CSF1R抗体包含选自本文讨论的重链CDR1、本文讨论的重链CDR2、本文讨论的重链CDR3、本文讨论的轻链CDR1、本文讨论的轻链CDR2、和本文讨论的轻链CDR3中的至少一个CDR。此外,在一些实施方案中,嵌合抗CSF1R抗体包含基于本文讨论的CDR的至少一个突变的CDR,其中所述突变的CDR包含相对于本文讨论的CDR的1、2、3或4个氨基酸取代。在一些实施方案中,一个或多个氨基酸取代是保守氨基酸取代。本领域技术人员可以选择特定CDR序列的一个或多个适合的保守氨基酸取代,其中所述适合的保守氨基酸取代预计不会显著改变包含该突变的CDR的抗体的结合特性。
示例性的嵌合抗CSF1R抗体还包括与本文所述的抗体竞争结合CSF1R的嵌合抗体。因此,在一些实施方案中,提供了与选自Fab 0301、0302和0311的抗体竞争结合CSF1R的嵌合抗CSF1R抗体;和这些Fab的二价(即,具有两条重链和两条轻链)抗体版本。
示例性嵌合抗体恒定区
在一些实施方案中,本文所述的嵌合抗体包含一个或多个人恒定区。在一些实施方案中,人重链恒定区属于选自IgA、IgG和IgD的同种型。在一些实施方案中,人轻链恒定区属于选自κ和λ的同种型。在一些实施方案中,本文所述的嵌合抗体包含人IgG恒定区。在一些实施方案中,本文所述的嵌合抗体包含人IgG4重链恒定区。在一些这样的实施方案中,本文所述的嵌合抗体包含在人IgG4恒定区中的S241P突变。在一些实施方案中,本文所述的嵌合抗体包含人IgG4恒定区和人κ轻链。
如上所述,是否期望效应物功能可取决于针对抗体预期的具体治疗方法。因此,在一些实施方案中,当期望效应物功能时,选择包含人IgG1重链恒定区或人IgG3重链恒定区的嵌合抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,当不期望效应物功能时,选择包含人IgG4或IgG2重链恒定区的嵌合抗CSF1R抗体。
示例性人抗体
可以通过任何适合的方法产生人抗体。非限制性示例性方法包括在包含人免疫球蛋白基因座的转基因小鼠中产生人抗体。参见,例如Jakobovits等人,Proc.Natl.Acad.Sci.USA 90:2551-55(1993);Jakobovits等人,Nature 362:255-8(1993);Lonberg等人,Nature 368:856-9(1994);以及美国专利No.5,545,807、6,713,610、6,673,986、6,162,963、5,545,807、6,300,129、6,255,458、5,877,397、5,874,299、和5,545,806。
非限制性示例性方法还包括使用噬菌体展示文库产生人抗体。参见,例如Hoogenboom等人,J.Mol.Biol.227:381-8(1992);Marks等人,J.Mol.Biol.222:581-97(1991);和PCT公开号WO 99/10494。
在一些实施方案中,人抗CSF1R抗体与具有序列SEQ ID NO:1的多肽结合。示例性的人抗CSF1R抗体还包括与本文所述的抗体竞争结合CSF1R的抗体。因此,在一些实施方案中,提供了与选自Fab 0301、0302和0311的抗体竞争结合CSF1R的人抗CSF1R抗体;和这些Fab的二价(即,具有两条重链和两条轻链)抗体版本。
在一些实施方案中,人抗CSF1R抗体包含一个或多个人恒定区。在一些实施方案中,人重链恒定区属于选自IgA、IgG和IgD的同种型。在一些实施方案中,人轻链恒定区属于选自κ和λ的同种型。在一些实施方案中,本文所述的人抗体包含人IgG恒定区。在一些实施方案中,本文所述的人抗体包含人IgG4重链恒定区。在一些这样的实施方案中,本文所述的人抗体包含在人IgG4恒定区中的S241P突变。在一些实施方案中,本文所述的人抗体包含人IgG4恒定区和人κ轻链。
在一些实施方案中,当期望效应物功能时,选择包含人IgG1重链恒定区或人IgG3重链恒定区的人抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,当不期望效应物功能时,选择包含人IgG4或IgG2重链恒定区的人抗CSF1R抗体。
另外的示例性抗CSF1R抗体
示例性抗CSF1R抗体还包括但不限于,包含例如本文所述的一个或多个CDR序列的小鼠、人源化、人、嵌合和工程化抗体。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含本文所述的重链可变区。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含本文所述的轻链可变区。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含本文所述的重链可变区和本文所述的轻链可变区。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含本文所述的重链CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含本文所述的轻链CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施方案中,抗CSF 1R抗体包含本文所述的重链CDR1、CDR2、和CDR3以及本文所述的轻链CDR1、CDR2、和CDR3。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含选自Fab 0301、0302、和0311的抗体的重链可变区。非限制性示例性抗CSF1R抗体还包括包含选自人源化抗体huAb1至huAb16的抗体重链可变区的抗体。非限制性示例性抗CSF1R抗体包括具有包含选自SEQ ID NO:9、11、13、以及39到45的序列的重链可变区的抗体。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含选自Fab 0301、0302、和0311的抗体的轻链可变区。非限制性示例性抗CSF1R抗体还包括包含选自人源化抗体huAb1至huAb16的抗体轻链可变区的抗体。非限制性示例性抗CSF1R抗体包括具有包含选自SEQ ID NO:10、12、14、以及46到52的序列的轻链可变区的抗体。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含选自Fab 0301、0302、和0311的抗体的重链可变区和轻链可变区。非限制性示例性抗CSF1R抗体还包括包含选自人源化抗体huAb1至huAb16的抗体重链可变区和轻链可变区的抗体。非限制性示例性抗CSF1R抗体包括包含以下成对的重链和轻链可变区的抗体:SEQ ID NO:9和10;SEQ ID NO:11和12;以及SEQ IDNO:13和14;SEQ ID NO:39和40;SEQ ID NO:41和42;SEQ ID NO:43和44;SEQ ID NO:45和46;SEQ ID NO:47和48;SEQ ID NO:49和50;以及SEQ ID NO:51和52。非限制性示例性抗CSF1R抗体还包括包含以下成对的重链和轻链的抗体:SEQ ID NO:33和34;SEQ ID NO:35和36;以及SEQ ID NO:37和38。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含选自Fab 0301、0302、和0311的抗体的重链CDR1、CDR2、和CDR3。非限制性示例性抗CSF1R抗体包括这样的抗体,其包含从下述者选择的重链CDR1、CDR2和CDR3组:SEQ ID NO:15、16和17;SEQ ID NO:21、22和23;和SEQ ID NO:27、28和29。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含选自下述抗体的轻链CDR1、CDR2、和CDR3:Fab 0301、0302、和0311。非限制性示例性抗CSF1R抗体包括这样的抗体,其包含选自下述者的轻链CDR1、CDR2和CDR3组:SEQ ID NO:18、19和20;SEQ ID NO:24、25和26;和SEQ ID NO:30、31和32。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含选自Fab 301、0302和0311的抗体的重链CDR1、CDR2和CDR3以及轻链CDR1、CDR2和CDR3。
非限制性示例性抗CSF1R抗体包括包含以上表1中所示的重链CDR1、CDR2和CDR3组以及轻链CDR1、CDR2和CDR3组的抗体。
其他示例性抗体
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含这样的重链,所述重链包含与选自SEQ IDNO:9、11、13、以及39到45的序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列,其中所述抗体结合CSF1R。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含这样的轻链,所述轻链包含与选自SEQ ID NO:10、12、14、以及46到52的序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列,其中所述抗体结合CSF1R。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含这样的重链和轻链,所述重链包含与选自SEQID NO:9、11、13、以及39到45的序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列,所述轻链包含与选自SEQ ID NO:10、12、14、以及46到52的序列至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列;其中所述抗体结合CSF1R。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含本文讨论的CDR中的至少一个。也就是说,在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含选自本文讨论的重链CDR1、本文讨论的重链CDR2、本文讨论的重链CDR3、本文讨论的轻链CDR1、本文讨论的轻链CDR2、和本文讨论的轻链CDR3中的至少一个CDR。此外,在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含基于本文讨论的CDR的至少一个突变的CDR,其中所述突变的CDR包含相对于本文讨论的CDR的1、2、3或4个氨基酸取代。在一些实施方案中,一个或多个氨基酸取代是保守氨基酸取代。本领域技术人员可以选择特定CDR序列的一个或多个适合的保守氨基酸取代,其中所述适合的保守氨基酸取代预计不会显著改变包含该突变的CDR的抗体的结合特性。
示例性的抗CSF1R抗体还包括与本文所述的抗体竞争结合CSF1R的抗体。因此,在一些实施方案中,提供了与选自Fab 0301、0302和0311的抗体竞争结合CSF1R的抗CSF1R抗体;和这些Fab的二价(即,具有两条重链和两条轻链)抗体版本。
示例性抗体恒定区
在一些实施方案中,本文所述的抗体包含一个或多个人恒定区。在一些实施方案中,人重链恒定区属于选自IgA、IgG和IgD的同种型。在一些实施方案中,人轻链恒定区属于选自κ和λ的同种型。在一些实施方案中,本文所述的抗体包含人IgG恒定区。在一些实施方案中,本文所述的抗体包含人IgG4重链恒定区。在一些这样的实施方案中,本文所述的抗体包含在人IgG4恒定区中的S241P突变。在一些实施方案中,本文所述的抗体包含人IgG4恒定区和人κ轻链。
如上所述,是否期望效应物功能可取决于针对抗体预期的具体治疗方法。因此,在一些实施方案中,当期望效应物功能时,选择包含人IgG1重链恒定区或人IgG3重链恒定区的抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,当不期望效应物功能时,选择包含人IgG4或IgG2重链恒定区的抗CSF1R抗体。
示例性抗CSF1R重链可变区
在一些实施方案中,提供了抗CSF1R抗体重链可变区。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体重链可变区是小鼠可变区、人可变区或人源化可变区。
抗CSF1R抗体重链可变区包含重链CDR1、FR2、CDR2、FR3和CDR3。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体重链可变区进一步包含重链FR1和/或FR4。非限制性示例性重链可变区包括但不限于具有选自SEQ ID NO:9、11、13和39到45的氨基酸序列的重链可变区。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体重链可变区包括包含选自SEQ ID NO:15、21和27的序列的CDR1。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体重链可变区包括包含选自SEQ ID NO:16、22和28的序列的CDR2。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体重链可变区包括包含选自SEQ ID NO:17、23和29的序列的CDR3。
非限制性示例性重链可变区包括但不限于包含选自以下CDR1、CDR2和CDR3组的重链可变区:SEQ ID NO:15、16、和17;SEQ ID NO:21、22、和23;以及SEQ ID NO:27、28、和29。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体重链包含与选自SEQ ID NO:9、11、13、以及39到45的序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一性的可变区序列,其中所述重链与轻链一起能够形成结合CSF1R的抗体。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体重链包含本文讨论的CDR中的至少一个。也就是说,在一些实施方案中,抗CSF1R抗体重链包含选自本文讨论的重链CDR1、本文讨论的重链CDR2、和本文讨论的重链CDR3中的至少一个CDR。此外,在一些实施方案中,抗CSF1R抗体重链包含基于本文讨论的CDR的至少一个突变的CDR,其中所述突变的CDR包含相对于本文讨论的CDR的1、2、3或4个氨基酸取代。在一些实施方案中,一个或多个氨基酸取代是保守氨基酸取代。本领域技术人员可以选择特定CDR序列的一个或多个适合的保守氨基酸取代,其中所述适合的保守氨基酸取代预计不会显著改变包含该突变的CDR的重链的结合特性。
在一些实施方案中,重链包含重链恒定区。在一些实施方案中,重链包含人重链恒定区。在一些实施方案中,人重链恒定区属于选自IgA、IgG和IgD的同种型。在一些实施方案中,人重链恒定区为IgG恒定区。在一些实施方案中,重链包含人IgG4重链恒定区。在一些这样的实施方案中,人IgG4重链恒定区包含S241P突变。
在一些实施方案中,当期望效应物功能时,重链包含人IgG1或IgG3重链恒定区。在一些实施方案中,当不太期望效应物功能时,重链包含人IgG4或IgG2重链恒定区。
示例性抗CSF1R轻链可变区
在一些实施方案中,提供了抗CSF1R抗体轻链可变区。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体轻链可变区是小鼠可变区、人可变区或人源化可变区。
抗CSF1R抗体轻链可变区包含轻链CDR1、FR2、CDR2、FR3和CDR3。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体轻链可变区进一步包含轻链FR1和/或FR4。非限制性示例性轻链可变区包括具有选自SEQ ID NO:10、12、14和46到52的氨基酸序列的轻链可变区。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体轻链可变区包括包含选自SEQ ID NO:18、24和30的序列的CDR1。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体轻链可变区包括包含选自SEQ ID NO:19、25和31的序列的CDR2。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体轻链可变区包括包含选自SEQ ID NO:20、26和32的序列的CDR3。
非限制性示例性轻链可变区包括但不限于包含选自以下CDR1、CDR2和CDR3组的轻链可变区:SEQ ID NO:18、19、和20;SEQ ID NO:24、25、和26;以及SEQ ID NO:30、31、和32。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体轻链包含与选自SEQ ID NO:10、12、14、以及46到52的序列具有至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一性的可变区序列,其中所述轻链与重链一起能够形成结合CSF1R的抗体。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体轻链包含本文讨论的CDR中的至少一个。也就是说,在一些实施方案中,抗CSF1R抗体轻链包含选自本文讨论的轻链CDR1、本文讨论的轻链CDR2、和本文讨论的轻链CDR3中的至少一个CDR。此外,在一些实施方案中,抗CSF1R抗体轻链包含基于本文讨论的CDR的至少一个突变的CDR,其中所述突变的CDR包含相对于本文讨论的CDR的1、2、3或4个氨基酸取代。在一些实施方案中,一个或多个氨基酸取代是保守氨基酸取代。本领域技术人员可以选择特定CDR序列的一个或多个适合的保守氨基酸取代,其中所述适合的保守氨基酸取代预计不会显著改变包含该突变的CDR的轻链的结合特性。
在一些实施方案中,轻链包含人轻链恒定区。在一些实施方案中,人轻链恒定区选自人κ和人λ轻链恒定区。
另外的示例性CSF1R结合分子
在一些实施方案中,提供了另外的结合CSF1R的分子。这样的分子包括但不限于非经典支架,比如抗运载蛋白、Adnectin、锚蛋白重复序列,等等。参见,例如Hosse等人,Prot.Sci.15:14(2006);Fiedler,M.和Skerra,A.,“Non-Antibody Scaffolds,”pp.467-499 in Handbook of Therapeutic Antibodies,Dubel,S.编辑,Wiley-VCH,Weinheim,Germany,2007。
抗CSF1R抗体的示例特性
在一些实施方案中,具有上述结构的抗体以小于1nM的结合亲和力(KD)与CSF1R结合、阻断CSF1和/或IL-34与CSF1R结合、并抑制通过CSF1和/或IL-34诱导的CSF1R磷酸化。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体与CSF1R的细胞外结构域(CSF1R-ECD)结合。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体对于CSF1R具有小于1nM、小于0.5nM、小于0.1nM、或小于0.05nM的结合亲和力(KD)。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体具有0.01至1nM、0.01至0.5nM、0.01至0.1nM、0.01至0.05nM、或0.02至0.05nM之间的KD。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体阻断配体与CSF1R结合。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体阻断CSF1与CSF1R结合。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体阻断IL-34与CSF1R结合。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体阻断CSF1和IL-34两者与CSF1R结合。在一些实施方案中,阻断配体结合的抗体与CSF1R的细胞外结构域结合。在一些实施方案中,当抗体使配体与CSF1R的可检测结合量降低至少50%时[例如使用描述于美国专利No.8,206,715 B2实施例7(将此专利通过提述并入本文用于所有目的)中的测定法测得的],该抗体阻断配体与CSF1R的结合。在一些实施方案中,抗体使配体与CSF1R的可检测结合量降低至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在一些这样的实施方案中,称抗体可阻断配体结合至少50%、至少60%、至少70%等。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体抑制配体诱导的CSF1R磷酸化。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体抑制CSF1诱导的CSF1R磷酸化。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体抑制IL-34诱导的CSF1R磷酸化。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体抑制IL-34诱导的CSF1R磷酸化和CSF1诱导的CSF1R磷酸化。在一些实施方案中,当抗体使可检测的配体诱导的CSF1R磷酸化的量降低至少50%时[例如使用描述于美国专利No.8,206,715 B2实施例6(将此专利通过提述并入本文用于所有目的)中的测定法测得的],则认为该抗体“抑制配体诱导的CSF1R磷酸化”。在一些实施方案中,抗体使得可检测的配体诱导的CSF1R磷酸化的量降低至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在一些这样的实施方案中,称抗体可抑制配体诱导的CSF1R磷酸化至少50%、至少60%、至少70%等。
在一些实施方案中,抗体在CSF1和/或IL-34存在下抑制单核细胞增殖和/或存活应答。在一些实施方案中,当抗体在CSF1和/或IL-34存在下使抑制单核细胞增殖和/或存活应答的量降低至少50%时[例如使用描述于美国专利No.8,206,715 B2实施例10(将此专利通过提述并入本文用于任何目的)中的测定法测得],则认为该抗体“抑制单核细胞增殖和/或存活应答”。在一些实施方案中,抗体在CSF1和/或IL-34存在下使单核细胞增殖和/或存活应答的量降低至少60%、至少70%、至少80%或至少90%。在一些这样的实施方案中,称抗体可抑制单核细胞增殖和/或存活应答至少50%、至少60%、至少70%等。
示例性PD-1/PD-L1抑制剂
示例性PD-1/PD-L1抑制剂包括抑制PD-1的抗体,例如抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体。这样的抗体可以是人源化抗体、嵌合抗体、小鼠抗体、人抗体,以及包含本文中讨论的重链和/或轻链CDR的抗体。PD-1/PD-L1抑制剂还包括阻断PD-1对PD-L1的结合的融合蛋白,如AMP-22。各种抗PD-1抗体是本领域已知的。
抗PD-1抗体
PD-1是由活化的T细胞和B细胞表达的关键免疫检查点受体,并介导免疫抑制。PD-1是CD28受体家族的成员,该家族包括CD28、CTLA-4、ICOS、PD-1和BTLA。PD-1的两种细胞表面糖蛋白配体已经得到鉴定:程序性死亡配体-1(PD-L1)和程序性死亡配体-2(PD-L2),这两种配体在抗原递呈细胞以及许多人类癌症中表达,并且已被证明在与结合PD-1后下调T细胞活化和细胞因子分泌。在临床前模型中,PD-1/PD-L1相互作用的抑制可介导强有力的抗肿瘤活性。
在美国专利No.8,008,449中已经公开了以高亲和力与PD-1特异性结合的HuMAb。在例如美国专利No.6,808,710、7,488,802、8,168,757和8,354,509、以及PCT公开号WO2012/145493中已经描述了其他抗PD-1mAb。美国专利No.8,008,449中公开的每种抗PD-1HuMAb均已被证明表现出一个或多个以下特征:(a)以1x 10-7M或更小的KD[如通过使用Biacore生物传感器***的表面等离子体共振测定的]与人PD-1结合;(b)基本上不与CD28、CTLA-4或ICOS结合;(c)在混合淋巴细胞反应(MLR)测定中增加T细胞增殖;(d)在MLR测定中增加干扰素γ产生;(e)在MLR测定中增加IL-2分泌;(f)与人PD-1和食蟹猴PD-1结合;(g)抑制PD-L1和/或PD-L2与PD-1结合;(h)刺激抗原特异性回忆应答;(i)刺激Ab应答;和/或(j)体内抑制肿瘤细胞生长。可用于本发明的抗PD-1Ab包括与人PD-1特异性结合并且表现出至少一个、至少两个、至少三个、至少四个或至少五个前述特征的mAb。
示例性抗PD-1抗体还包括但不限于包含例如本文所述的一个或多个CDR序列的小鼠、人源化、人、嵌合和工程化抗体。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含本文所述的重链可变区。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含本文所述的轻链可变区。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含本文所述的重链可变区和本文所述的轻链可变区。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含本文所述的重链CDR1、CDR2和CDR3,例如包含SEQ ID NO:105、107、和109的重链CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含本文所述的轻链CDR1、CDR2和CDR3,例如包含SEQ ID NO:112、114、和116的轻链CDR1、CDR2和CDR3。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含本文所述的重链CDR1、CDR2和CDR3,例如包含SEQ ID NO:105、107、和109的重链CDR1、CDR2和CDR3,以及本文所述的轻链CDR1、CDR2和CDR3,例如包含SEQ ID NO:112、114、和116的轻链CDR1、CDR2和CDR3。
在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含分别包含SEQ ID NO:105、107、和109的重链CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含分别包含SEQ ID NO:112、114、和116的轻链CDR1、CDR2、和CDR3。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包括包含SEQ ID NO:100的重链可变区。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包括包含SEQ ID NO:102的轻链可变区。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包括包含SEQ ID NO:100的重链可变区和包含SEQ ID NO:102的轻链可变区。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包括包含SEQ ID NO:101的重链恒定区和/或包含SEQ ID NO:103的轻链恒定区。
其他示例性抗体
在一些实施方案中,抗PD-1抗体包括这样的重链,所述重链包含包含与SEQ IDNO:100至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列,其中所述抗体结合PD-1。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包括这样的轻链,所述轻链包含与SEQ ID NO:102至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列,其中所述抗体结合PD-1。在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含这样的重链和轻链,所述重链包含与SEQ ID NO:100至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列,所述轻链包含与SEQ ID NO:102至少90%、至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或至少99%同一的可变区序列;其中所述抗体结合PD-1。
在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含本文讨论的CDR中的至少一个。也就是说,在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含选自本文讨论的重链CDR1、本文讨论的重链CDR2、本文讨论的重链CDR3、本文讨论的轻链CDR1、本文讨论的轻链CDR2、和本文讨论的轻链CDR3中的至少一个CDR。此外,在一些实施方案中,抗PD-1抗体包含基于本文讨论的CDR的至少一个突变的CDR,其中所述突变的CDR包含相对于本文讨论的CDR的1、2、3或4个氨基酸取代。在一些实施方案中,一个或多个氨基酸取代是保守氨基酸取代。本领域技术人员可以选择特定CDR序列的一个或多个适合的保守氨基酸取代,其中所述适合的保守氨基酸取代预计不会显著改变包含该突变的CDR的抗体的结合特性。
在一个实施方案中,该抗PD-1 Ab是纳武单抗。纳武单抗(也称为以前命名为5C4、BMS-936558、MDX-1106、或ONO-4538)是一种全人IgG4(S228P)PD-1免疫检查点抑制剂Ab,其可选择性地阻止与PD-1配体(PD-L1和PD-L2)的相互作用,由此阻断对抗肿瘤T细胞功能的下调(美国专利No.8,008,449;Wang等人,2014 Cancer Immunol Res.2(9):846-56)。
在另一个实施方案中,抗PD-1 Ab是派姆单抗。派姆单抗(也称为拉姆布罗力珠单抗(lambrolizumab)、和MK-3475)是针对人细胞表面受体PD-1(程序性死亡受体-1)的人源化单克隆IgG4抗体。派姆单抗描述于例如美国专利No.8,900,587;还参见http://www.cancer.gov/drugdictionary?cdrid=695789(最后访问日期:2014年12月14日)。派姆单抗已被FDA批准用于治疗复发性或难治性黑素瘤。
在其他实施方案中,抗PD-1 Ab是MEDI0608(以前称为AMP-514),其为针对PD-1受体的单克隆抗体。MEDI0608描述于例如美国专利No.8,609,089,B2,或描述于http://www.cancer.gov/drugdictionary?cdrid=756047(最近一次访问日期:2014年12月14日)。
可用于本公开方法中的抗PD-1 Ab还包括与人PD-1特异性结合并且与纳武单抗(参见,例如,美国专利No.8,008,449;WO 2013/173223)交叉竞争结合人PD-1的分离的Ab。Ab交叉竞争结合抗原的能力表明这些Ab结合抗原的相同表位区,并且在空间上阻碍其他交叉竞争性Ab与该特定表位区的结合。预期这些交叉竞争性Ab具有与纳武单抗非常相似的功能特性,因为它们与PD-1的相同表位区结合。交叉竞争性Ab可以容易地根据它们在标准PD-1结合测定(如Biacore分析、ELISA测定或流式细胞术)中与纳武单抗交叉竞争的能力加以鉴定(参见例如,WO 2013/173223)。
在某些实施方案中,与纳武单抗交叉竞争结合人PD-1、或与纳武单抗结合人PD-1的相同表位区的Ab是mAb。为了向人类受试者施用,这些交叉竞争性Ab可以是嵌合Ab,或者可以是人源化Ab或人Ab。这样的嵌合、人源化或人mAb可以通过本领域熟知的方法加以制备和分离。
可用于本公开发明的方法中的抗PD-1抗体还包括上述Ab的抗原结合部分。已经充分证明,一种Ab的抗原结合功能可以通过全长Ab的片段来执行。术语Ab的“抗原结合部分”所涵盖的结合片段的实例包括:(i)Fab片段,这是一种由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段;(ii)F(ab’)2片段,这是一种二价片段,包含通过铰链区的二硫桥连接的两个Fab片段;(iii)Fd片段,由VH和CH1结构域组成;和(iv)Fv片段,由Ab单臂的VL和VH结构域组成。
作为PD-1/PD-L1抑制剂的融合蛋白的一个非限制性实例是AMP-224(Amplimmune,GlaxoSmithKline)。
作为PD-1/PD-L1抑制剂的肽的一个非限制性实例是AUR-012。
示例性抗体缀合物
在一些实施方案中,抗体与标记物和/或细胞毒性剂缀合。如本文中使用的,标记物是这样的部分(moiety):其可易化对抗体的检测和/或易化对抗体所结合的分子的检测。标记物的非限制性例子包括但不限于,放射性同位素、荧光基团、酶基团、化学发光基团、生物素、表位标签、金属结合标签等。本领域技术人员可以根据预期的应用选择适合的标记物。
如本文中使用的,细胞毒性剂是这样的部分:其可降低一个或多个细胞的增殖能力。当细胞的增殖能力变低时,例如,由于细胞经历细胞凋亡或以其他方式死亡,细胞不能进行细胞周期进程和/或不能***,细胞分化等等,细胞具有降低的增殖能力。细胞毒性剂的非限制性实例包括但不限于,放射性同位素、毒素和化学治疗剂。本领域技术人员可以根据预期的应用选择适合的细胞毒性剂。
在一些实施方案中,使用体外化学方法将标记物和/或细胞毒性剂与抗体缀合。化学缀合方法的非限制性示例是本领域已知的,并且包括从例如Thermo Scientific LifeScience Research Produces(以前称为Pierce;Rockford,IL)、Prozyme(Hayward,CA)、SACRI Antibody Services(Calgary,Canada)、AbD Serotec(Raleigh,NC)等等可商购的服务、方法和/或试剂。在一些实施方案中,当标记物和/或细胞毒性剂是多肽时,该标记物和/或细胞毒性剂可以与至少一个抗体链一起从同一个表达载体表达,以产生包含与抗体链融合的标记物和/或细胞毒性剂的多肽。本领域技术人员可以根据预期的应用选择标记物和/或细胞毒性剂与抗体缀合的适宜方法。
示例性前导序列
为了使一些分泌型的蛋白质大量表达和分泌,来自异源蛋白质的前导序列可能是期望的。在一些实施方案中,前导序列选自SEQ ID NO:3和4,二者分别为轻链和重链前导序列。在一些实施方案中,使用异源前导序列可能是有利的,因为所得到的成熟多肽当在分泌过程中去除ER的前导序列时可保持不变。为了表达和分泌某些蛋白质,可能需要添加异源前导序列。
某些示例性前导序列描述于例如由新加坡国立大学生物化学系维护的在线前导序列数据库中。参见Choo等人,BMC Bioinformatics,6:249(2005);和PCT公开号WO 2006/081430。
编码抗体的核酸分子
提供了包含编码抗体的一条或多条链的多核苷酸的核酸分子。在一些实施方案中,核酸分子包含编码抗体的重链或轻链的多核苷酸。在一些实施方案中,核酸分子包含编码抗体的重链的多核苷酸以及编码抗体的轻链的多核苷酸。在一些实施方案中,第一核酸分子包含编码重链的第一多核苷酸,第二核酸分子包含编码轻链的第二多核苷酸。
在一些这样的实施方案中,重链和轻链是自一个核酸分子表达,或自两个独立的核酸分子作为两条独立的多肽表达的。在一些实施方案中,比如当抗体是scFv时,单个多核苷酸编码单条多肽,该单条多肽包含连接在一起的重链和轻链两者。
在一些实施方案中,编码抗体的重链或轻链的多核苷酸包含编码前导序列的核苷酸序列,其在翻译时位于重链或轻链的N末端。如上所述,前导序列可以是天然重链或轻链前导序列,或者可以是另一个异源前导序列。
可以使用本领域常规的重组DNA技术构建核酸分子。在一些实施方案中,核酸分子是适合在选定宿主细胞中表达的表达载体。
抗体表达和产生
载体
提供了包含编码抗体重链和/或轻链的多核苷酸的载体。还提供了包含编码抗体重链和/或轻链的多核苷酸的载体。这样的载体包括但不限于,DNA载体、噬菌体载体、病毒载体、逆转录病毒载体等。在一些实施方案中,载体包含编码重链的第一多核苷酸序列和编码轻链的第二多核苷酸序列。在一些实施方案中,重链和轻链作为两个单独的多肽从载体表达。在一些实施方案中,例如当抗体是scFv时,重链和轻链被表达为单个多肽的一部分。
在一些实施方案中,第一载体包含编码重链的多核苷酸,第二载体包含编码轻链的多核苷酸。在一些实施方案中,将第一载体和第二载体以相似的量(比如相似的摩尔量或相似的质量)转染到宿主细胞中。在一些实施方案中,将第一载体和第二载体以5∶1和1∶5之间的摩尔比或质量比转染到宿主细胞中。在一些实施方案中,所使用的编码重链的载体和编码轻链的载体的质量比在1∶1和1∶5之间。在一些实施方案中,所使用的编码重链的载体和编码轻链的载体的质量比为1∶2。
在一些实施方案中,选择为在CHO或CHO衍生的细胞或NSO细胞中表达多肽优化过的载体。这种载体的示例描述于,例如,Running Deer等人,Biotechnol.Prog.20:880-889(2004)。
在一些实施方案中,选择载体以在动物(包括人)中进行抗体重链和/或抗体轻链的体内表达。在一些这样的实施方案中,多肽的表达受到以组织特异性方式起作用的启动子的控制。例如,肝脏特异性启动子描述于例如PCT公开号WO 2006/076288。
宿主细胞
在不同的实施方案中,可以在原核细胞如细菌细胞;或在真核细胞,如真菌细胞(如酵母)、植物细胞、昆虫细胞和哺乳动物细胞中表达抗体重链和/或轻链。可以例如根据本领域已知的程序进行这种表达。可用于表达多肽的示例性真核细胞包括但不限于,COS细胞,包括COS7细胞;293细胞,包括293-6E细胞;CHO细胞,包括CHO-S和DG44细胞;细胞(Crucell);和NSO细胞。在一些实施方案中,可以在酵母中表达抗体重链和/或轻链。参见,例如,美国公开号US 2006/0270045 A1。在一些实施方案中,具体的真核宿主细的是根据其对抗体重链和/或轻链进行期望的翻译后修饰的能力来选择的。例如,在一些实施方案中,相比于在293细胞中产生的同一种多肽,CHO细胞产生的多肽具有更高的唾液酸化水平。
可以通过任何方法将一个或多个核酸引入期望的宿主细胞中,包括但不限于磷酸钙转染、DEAE-葡聚糖介导的转染、阳离子脂质介导的转染、电穿孔、转导、感染等。非限制性示例性方法描述于例如Sambrook等人,Molecular Cloning,A Laboratory Manual,3rded.Cold Spring Harbor Laboratory Press(2001)。根据任何适合的方法,可以将核酸瞬时或稳定地转染到期望的宿主细胞中。
在一些实施方案中,可以根据任何适合的方法在动物体内产生一个或多个多肽,其中所述动物已经用编码所述多肽的一个或多个核酸分子加以工程改造或转染。
抗体的纯化
可以通过任何适合的方法纯化抗体。这些方法包括但不限于使用亲和基质或疏水相互作用色谱法。适合的亲和配体包括结合抗体恒定区的抗原和配体。例如,蛋白A、蛋白G、蛋白A/G或抗体亲和柱可用于结合恒定区并纯化抗体。疏水相互作用色谱法,例如丁基或苯基柱也可适用于纯化一些多肽。许多纯化多肽的方法是本领域已知的。
抗体的无细胞生产
在一些实施方案中,在无细胞***中产生抗体。无细胞***的非限制性示例描述于,例如,Sitaraman等人,Methods Mol.Biol.498:229-44(2009);Spirin,TrendsBiotechnol.22:538-45(2004);Endo等人,Biotechnol.Adv.21:695-713(2003)。
治疗组合物和方法
治疗癌症的方法
在一些实施方案中,提供了治疗癌症的方法,包括施用有效量的抗CSF1R抗体和有效量的PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,同时施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,依次施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,在施用PD-1/PD-L1抑制剂之前施用至少一个、至少两个、至少三个剂量、至少五个剂量、或至少十个剂量的抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,在施用抗CSF1R抗体之前施用至少一个、至少两个、至少三个剂量、至少五个剂量、或至少十个剂量的PD-1/PD-L1抑制剂。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂的最后剂量在CSFR1抑制剂的第一剂量之前至少一天、两天、三天、五天、或十天,或一周、两周、三周、五周、十二周、或二十四周施用。在某些其他实施方案中,CSFR1抑制剂的最后剂量在PD-1/PD-L1抑制剂的第一剂量之前至少一天、两天、三天、五天、或十天,或一周、两周、三周、五周、十二周、或二十四周施用。在一些实施方案中,受试者已经接受或正在接受PD-1/PD-L1抑制剂治疗,并且将抗CSF1R抗体添加到治疗方案中。
在一些实施方案中,提供了选择用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂进行联合治疗的患者的方法,该方法包括确定患者的TAM和/或CD8+ T细胞的水平。在一些实施方案中,如果患者的TAM水平高,则选择患者进行联合治疗。在一些实施方案中,如果患者的TAM和CD8+ T细胞水平高,则选择患者进行联合治疗。如果TAM或CD8+ T细胞水平比没有癌症的个体的水平高出至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少75%或至少100%,则认为该TAM或CD8+ T细胞水平是“高”的。在一些实施方案中,如果TAM或CD8+ T细胞的水平高于患有癌症的个体的中值水平,则认为该TAM或CD8+ T细胞的水平是“高”的。在一些实施方案中,如果患者的TAM水平高且CD8+ T细胞水平低,则选择患者以抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂进行联合治疗。如果CD8+ T细胞的水平等于或低于患有癌症的个体的中值水平,则认为该CD8+ T细胞的水平是“低”的。在一些实施方案中,如果CD8+ T细胞的水平比没有癌症的个体的水平低至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少75%或至少100%,则认为该CD8+ T细胞的水平是“低”的。在一些实施方案中,确定患者TAM上的CSF1R的表达。在一些实施方案中,如果患者的TAM表达CSF1R,则选择患者进行联合治疗。在一些实施方案中,如果患者的TAM表达升高水平的CSF1R,则选择患者进行联合治疗。在一些实施方案中,如果CSF1R的水平等于或高于在患有癌症的个体中所见的TAMS上表达的CSF1R的中值水平,则认为患者的TAM表达“升高”水平的CSF1R。在一些实施方案中,如果患者的CSF1R表达显示出与CD8+ T细胞、T细胞或PD-1/PD-L1表达水平的高度相关性,则选择患者进行联合治疗。如果这些表达的相关性等于或高于患有癌症的个体的中值水平,则认为该相关性是“高”的。
可以通过本领域的方法测量TAM、CSF1R表达、CD8+ T细胞、调节性T细胞、和/或PD-1表达的水平。非示例性的方法包括免疫组织化学(IHC)、荧光激活细胞分选(FACS)、蛋白质阵列和基因表达测定,如RNA测序、基因阵列和定量PCR。在一些实施方案中,可以通过IHC、FACS、或肿瘤切片上的基因表达测定、或来自肿瘤切片的解离细胞来检测选自CSF1R、CD68、CD163、CD8、FoxP3、PD-1和PD-L1中的一种或多种标志物。
在一些实施方案中,所述癌症选自鳞状细胞癌、小细胞肺癌、垂体癌、食道癌、星形细胞瘤、软组织肉瘤、非小细胞肺癌、肺腺癌、肺鳞状细胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、胶质母细胞瘤、***、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜癌或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肾脏癌、肝癌、***癌、外阴癌、甲状腺癌、肝癌、脑癌、子宫内膜癌、睾丸癌、胆管癌、胆囊癌、胃癌、黑素瘤、和各种类型的头颈部癌。在一些实施方案中,肺癌是非小细胞肺癌或肺鳞状细胞癌。在一些实施方案中,白血病是急性骨髓性白血病或慢性淋巴细胞性白血病。在一些实施方案中,乳腺癌是乳腺浸润性癌。在一些实施方案中,卵巢癌是卵巢浆液性囊腺癌。在一些实施方案中,肾癌是肾脏肾透明细胞癌。在一些实施方案中,结肠癌是结肠腺癌。在一些实施方案中,膀胱癌是膀胱尿路上皮癌。在一些实施方案中,所述癌症选自膀胱癌、***(如鳞状细胞***)、头颈部鳞状细胞癌、直肠腺癌、非小细胞肺癌、子宫内膜癌、***腺癌、结肠癌、卵巢癌(如浆液性上皮性卵巢癌)和黑素瘤。
在一些实施方案中,抗CSF1R抗体阻断CSF1和/或IL-34与CSF1R结合和/或抑制由CSF1和/或IL-34诱导的CSF1R磷酸化。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体阻断CSF1和IL-34与CSF1R结合和/或抑制由CSF1和/或IL-34诱导的CSF1R磷酸化。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含本文所述的选自huAb1至huAb16的抗体的CDR或可变区。在一些实施方案中,抗CSF1R抗体包含huAb1的CDR或可变区。
在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂选自融合蛋白(如AMP-224)和抗体。在一些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂选自抗PD-1抗体和抗PD-L1抗体。抗PD-1抗体的非限制性示例包括这样的抗体,所述抗体包含选自纳武单抗和派姆单抗的抗体的CDR或可变区。在一些实施方案中,抗PD-1抗体选自纳武单抗和派姆单抗。非限制性示例性抗PD-L1抗体包括这样的抗体,其包含选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C的抗体的CDR或可变区。在一些实施方案中,抗PD-L1抗体选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C。
在本文描述的方法的一些实施方案中,受试者是对PD-1/PD-L1抑制剂应答不足者。作为对PD-1/PD-L1抑制剂应答不足者的受试者,可能以前对PD-1/PD-L1抑制剂有过应答,但可能对PD-1/PD-L1抑制剂的应答已变差;或者所述受试者可能从未对PD-1/PD-L1抑制剂作出过应答。对PD-1/PD-L1抑制剂的应答不足意味着:预期在PD-1/PD-L1抑制剂的标准剂量之后会改善的征候方面并没有改善,和/或只有在施用大于标准剂量的剂量才得到改善。在一些实施方案中,对PD-1/PD-L1抑制剂应答不足者在接受至少两周、至少三周、至少四周、至少六周、或至少十二周的标准剂量之后经历过或正在经历对PD-1/PD-L1抑制剂的应答不足。“标准”剂量由医学专业人员确定,并且可能取决于受试者的年龄、体重、健康史、疾病严重程度、给药频率等。在一些实施方案中,对PD-1/PD-L1抑制剂应答不足者经历过或正在经历对抗PD-1抗体和/或抗PD-L1抗体的应答不足。在一些实施方案中,对PD-1/PD-L1抑制剂应答不足者经历过或正在经历对AMP-224的应答不足。在一些实施方案中,对PD-1/PD-L1抑制剂应答不足者经历过或正在经历对选自纳武单抗和派姆单抗的PD-1/PD-L1抑制剂的应答不足。
施用途径和载体
在不同的实施方案中,抗体可以通过各种途径施用,包括但不限于口服、动脉内、肠胃外、鼻内、静脉内、肌内、心内、心室内、气管内、口腔、直肠、腹膜内、皮内、局部、透皮和鞘内施用,或另外地通过植入或吸入施用。可以将主题组合物配制成固体、半固体、液体或气体形式的制剂;包括但不限于片剂、胶囊、散剂、颗粒剂、软膏剂、溶液、栓剂、灌肠剂、注射剂、吸入剂和气雾剂。可以将编码抗体的核酸分子包被在金微粒上,并通过粒子轰击装置或“基因枪”进行皮内递送,如文献中所述(参见,例如Tang等人,Nature 356:152-154(1992))。可以根据预期的应用选择适当的制剂和施用途径。
在不同的实施方案中,包含抗体的组合物以与多种药学上可接受的载体一起形成的制剂的形式提供(参见,例如Gennaro,Remington:The Science and Practice ofPharmacy with Facts and Comparisons:Drugfacts Plus,20th ed.(2003);Ansel等人,Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems,7th ed.,LippencottWilliams and Wilkins(2004);Kibbe等人,Handbook of Pharmaceutical Excipients,3rded.,Pharmaceutical Press(2000))。有各种药学上可接受的载体可供使用,包括赋形剂、佐剂和稀释剂等。而且,还可以使用各种药学上可接受的辅助物质,例如pH调节和缓冲剂、张力调节剂、稳定剂、润湿剂等。载体的非限制性示例包括盐水、缓冲盐水、右旋糖、水、甘油、乙醇及其组合。
在不同的实施方案中,通过在水性或非水性溶剂(如植物油或其他油、合成脂族酸甘油酯、高级脂族酸的酯、或丙二醇;如果需要,可以使用常规的添加剂,如增溶剂、等渗剂、悬浮剂、乳化剂、稳定剂和防腐剂)中将包含抗体的组合物溶解、悬浮或乳化,可以将其配制为用于注射,包括皮下施用。在不同的实施方案中,例如使用加压的可接受的推进剂,例如二氯二氟甲烷、丙烷、氮气等,可以将组合物配制为用于吸入。在不同的实施方案中,例如利用可生物降解或不可生物降解的聚合物,还可以将组合物配制成缓释微胶囊。非限制性示例性可生物降解制剂包括聚乳酸-乙醇酸聚合物。不可生物降解的制剂的非限制性示例包括聚甘油脂肪酸酯。制造这样的制剂的某些方法描述于例如EP 1 125 584 A1中。
还提供了包括一个或多个容器的药物包装和试剂盒,每个容器含有一个或多个剂量的抗体或抗体组合。在一些实施方案中,提供了单位剂量,其中该单位剂量含有预定量的包含抗体或抗体组合的组合物,同时有或没有一种或多种另外的药剂。在一些实施方案中,这样的单位剂量例如提供在单次使用的预填充注射器中,或者作为试剂盒提供。在不同的实施方案中,单位剂量中所含的组合物可包括盐水、蔗糖等;缓冲液,如磷酸盐等;和/或配制在稳定且有效的pH范围内。或者,在一些实施方案中,组合物可以提供为冻干粉,在加入适当的液体,例如无菌水之后可以将其复原。在一些实施方案中,组合物包含一种或多种抑制蛋白质聚集的物质,包括但不限于蔗糖和精氨酸。在一些实施方案中,本发明的组合物包含肝素和/或蛋白聚糖。
药物组合物以有效治疗或预防具体适应症的量施用。治疗有效量通常取决于被治疗的受试者的体重、他或她的身体或健康状况、要治疗的病症的广泛性或被治疗的受试者的年龄。通常,可以按照范围为每剂量约10μg/kg体重至约100mg/kg体重的量施用抗体。在一些实施方案中,可以按照范围为每剂量约50μg/kg体重至约5mg/kg体重的量施用抗体。在一些实施方案中,可以按照范围为每剂量约100μg/kg体重至约10mg/kg体重的量施用抗体。在一些实施方案中,可以按照范围为每剂量约100μg/kg体重至约20mg/kg体重的量施用抗体。在一些实施方案中,可以按照范围为每剂量约0.5mg/kg体重至约20mg/kg体重的量施用抗体。在一些实施方案中,以1至4mg/kg的剂量施用PD-1/PD-L1抑制剂,例如抗体或融合蛋白,并且以0.5至10mg/kg的剂量施用抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,以1、2或4mg/kg的剂量施用PD-1/PD-L1抑制剂,并且以约0.3至约10mg/kg、约0.5至约10mg/kg、约0.5至约5mg/kg、或约1至约5mg/kg体重,例如约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用抗CSF1R抗体。
在某些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂或抗CSF1R抗体的剂量是药物组合物中的固定剂量。在其他实施方案中,本发明的方法可以以不变剂量(不考虑患者体重的对患者给定的剂量)使用。例如,纳武单抗的不变剂量可以为约240mg。例如,派姆单抗的不变剂量可以为约200mg。
在一些实施方案中,当与PD-1/PD-L1抑制剂组合时,抗CSF1R Ab可以以约0.3至约10mg/kg、约0.5至约10mg/kg、约0.5至约5mg/kg、或约1至约5mg/kg体重的范围给药,例如以约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg,约每两周或三周施用一次。在其他实施方案中,以与PD-1/PD-L1抑制剂不同的剂量方案施用抗CSF1R抗体。在一些实施方案中,施用抗CSF1R抗体约每周一次、约每两周一次、约每三周一次、约每四周一次、约每五周一次、约每六周一次、约每七周一次、约每八周一次、约每九周一次、约每十周一次、约每十一周一次、约每十二周一次、或约每十五周一次。抗CSF1R抗体或PD-1/PD-L1抑制剂的显著低于批准治疗剂量的剂量可以视为是亚治疗剂量。例如,相对于每3周一次的约3.0mg/kg的治疗剂量,约每3周或4周一次的约0.3mg/kg或更少的剂量可视为亚治疗剂量。在某些实施方案中,以约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、或约5mg/kg的剂量施用PD-1/PD-L1抑制剂,与以约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量约每2周一次、约每3周一次、或约每4周一次施用的抗CSF1R抗体组合。
在某些实施方案中,在导入阶段以约每2周或3周一次静脉内施用PD-1/PD-L1抑制剂和抗CSF1R Ab的组合,共施用1、2、3或4次。在某些实施方案中,在导入阶段约每3周一次静脉内施用纳武单抗和抗CSF1R Ab的组合,共施用约4次。导入阶段之后是维持阶段,在维持阶段期间仅以约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量每两周或三周一次向受试者施用PD-1/PD-L1抑制剂,只要治疗显示有效或者没有出现难以控制的毒性或疾病进展即可。在某些实施方案中,在维持期全程内以约3mg/kg体重的剂量约每2周一次施用纳武单抗。
在某些实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂和抗CSF1R抗体被配制成单一组合物,其中PD-1/PD-L1抑制剂的剂量和抗CSF1R抗体的剂量以例如1∶50、1∶40、1∶30、1∶20、1∶10、1∶5、1∶3、1∶1、3∶1、5∶1、10∶1、20∶1、30∶1、40∶1、或50∶1的比例组合。在其他实施方案中,抗CSF1R抗体的剂量是固定剂量。在某些实施方案中,抗CSF1R抗体或PD-1/PD-L1抑制剂的剂量为不变剂量,不考虑体重而给予患者该剂量。在具体实施方案中,PD-1/PD-L1抑制剂的不变剂量为约80mg。
为了与其他抗癌剂联合,这些药剂以其经过批准的剂量施用。只要观察到临床益处或没有出现难以控制的毒性或疾病进展,就继续进行治疗。然而,在某些实施方案中,所施用的这些抗癌剂的剂量显著低于批准剂量,即,将亚治疗剂量的抗癌剂与抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂联合施用。抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂可以以在临床试验中作为单一疗法显示产生最高功效的剂量施用,例如,对于纳武单抗,施用约3mg/kg的纳武单抗约每三周一次(Topalian等人,2012a;Topalian等人,2012),或以显著更低的剂量,即,以亚治疗剂量施用。
剂量和频率取决于Ab在受试者体内的半衰期而变化。一般而言,人Ab显示的半衰期最长,其次是人源化Ab、嵌合Ab、和非人Ab。施用的剂量和频率可以取决于治疗是预防性的还是治疗性的而变化。在预防性应用中,在一段长时间内一般以相对低频的间隔施用相对低的剂量。一些患者终身继续接受治疗。在治疗性应用中,有时需要以相对短的时间间隔施用相对高的剂量,直到疾病的进展减慢或结束时为止,或直到患者显示出疾病症状的部分或完全改善时为止。此后,可以对患者施用预防性方案。
可以变化本发明药物组合物中活性成分的实际剂量水平,以获得活性成分的如下所述的量:针对特定的患者、组合物和施用模式,该量可有效地实现期望的治疗应答,而不会对患者产生过度毒性。选定的剂量水平取决于多种药代动力学因素,包括所用本发明特定组合物的活性,施用途径,施用时间,所用特定化合物的***速率,治疗的持续时间,与所用特定组合物联合使用的其他药物、化合物和/或材料,被治疗患者的年龄、性别、体重、状况、一般健康和先前的病史,以及医学领域众所周知的类似因素。可以使用本领域熟知的多种方法中的一种或多种经由一种或多种施用途径施用本发明的组合物。正如本领域技术人员将理解的,施用途径和/或模式将取决于期望的结果而变化。可以根据需要向受试者施用抗体组合物。可以基于被治疗的病症、被治疗受试者的年龄、被治疗病症的严重程度、被治疗受试者的一般健康状态等考虑因素由本领域技术人员,例如由主治医师做出施用频率的决定。在一些实施方案中,向受试者施用有效剂量的抗体一次或多次。在不同的实施方案中,向受试者施用有效剂量的抗体每月一次、每月少于一次,例如每两个月一次或每三个月一次。在其他实施方案中,施用有效剂量的抗体每月一次以上,例如每三周一次、每两周一次或每周一次。在一些实施方案中,施用有效剂量的抗体每1、2、3、4、或5周一次。在一些实施方案中,施用有效剂量的抗体每周两次或三次。向受试者施用有效剂量的抗体至少一次。在一些实施方案中,可以多次施用有效剂量的抗体,包括持续至少一个月、至少六个月或至少一年的时间。
联合治疗
可以单独地或与其他治疗方式一起施用抗体。可以在其他治疗方式之前、基本上同时或之后提供这些抗体,所述其他治疗方式例如手术、化学治疗、放射治疗或生物制剂(例如另一种治疗性抗体)的施用。在一些实施方案中,在选自手术、化学治疗、放射治疗或其组合的治疗之后,癌症已经复发或进展。
为了治疗癌症,如本文中讨论的,抗体可以与一种或多种另外的抗癌剂例如化学治疗剂、生长抑制剂、抗血管生成剂和/或抗肿瘤组合物一起施用。可以与本发明的抗体联合使用的化学治疗剂、生长抑制剂、抗血管生成剂、抗癌剂和抗肿瘤组合物的非限制性实例提供在本文中的“定义”下。
实施例
以下讨论的实施例只不过旨在做出本发明的示例,而不应该被认为是以任何方式限制本发明。这些实施例并不旨在表示以下实验是进行的全部或唯一的实验。已尽量确保所使用的数字的准确性(例如量、温度等),但一些实验误差和偏差应加以考虑。除非另外指明,否则,份数是重量份数,分子量是重均分子量,温度是摄氏度,压力为大气压或接近大气压。
实施例1:人源化抗CSF1R抗体
以前开发了各种人源化抗CSF1R抗体。参见,例如PCT公开号WO 2011/140249。
每个人源化重链可变区和人源化轻链可变区的序列与亲本嵌合抗体可变区的序列和人接纳体可变框架区的序列比对显示于图1(重链)和图2(轻链)中。人源化可变区序列中相对于人接纳体可变框架区序列的改变被加框。每个可变区的每个CDR显示在加框的区域中,并且在加框序列上方标记“CDR”。
以下表8显示了抗体huAb1至huAb16的人源化重链和人源化轻链的完整序列。每一种这些抗体的人源化重链和人源化轻链的名称和SEQ ID NO示于表3中。
表3:huAb1至huAb16的人源化重链和轻链
人源化抗体 | 人源化HC | SEQ ID NO | 人源化LC | SEQ ID NO |
huAb1 | h0301-H0 | 53 | h0301-L0 | 60 |
huAb2 | h0301-H1 | 54 | h0301-L0 | 60 |
huAb3 | h0301-H2 | 55 | h0301-L0 | 60 |
huAb4 | h0301-H0 | 53 | h0301-L1 | 61 |
huAb5 | h0301-H1 | 54 | h0301-L1 | 61 |
huAb6 | h0301-H2 | 55 | h0301-L1 | 61 |
huAb7 | h0302-H1 | 56 | h0302-L0 | 62 |
huAb8 | h0302-H1 | 56 | h0302-L1 | 63 |
huAb9 | h0302-H1 | 56 | h0302-L2 | 64 |
huAb10 | h0302-H2 | 57 | h0302-L0 | 62 |
huAb11 | h0302-H2 | 57 | h0302-L1 | 63 |
huAb12 | h0302-H2 | 57 | h0302-L2 | 64 |
huAb13 | h0311-H1 | 58 | h0311-L0 | 65 |
huAb14 | h0311-H1 | 58 | h0311-L1 | 66 |
huAb15 | h0311-H2 | 59 | h0311-L0 | 65 |
huAb16 | h0311-H2 | 59 | h0311-L1 | 66 |
测试了16种人源化抗体与如前所述的人、食蟹猴和小鼠CSF1R ECD的结合。参见,例如PCT公开号WO 2011/140249。发现这些抗体与人和食蟹猴CSF1R ECD结合,但不与小鼠CSF1R ECD结合。还发现人源化抗体阻断CSF1和IL-34与人和食蟹猴CSF1R两者的结合,并抑制CHO细胞中表达的人CSF1R在CSF1诱导的和IL-34诱导下的磷酸化。参见,例如PCT公开号WO 2011/140249。
以前测定了与人CSF1R ECD结合的ka、kd、和KD,并显示在表4中。参见,例如PCT公开号WO 2011/140249。
表4:人源化抗体对人CsF1R的结合亲和力
实施例2:肿瘤中CSF1R表达与T细胞标记的相关性
为了确定癌症T细胞标记(T cell signature)与CSF1R表达之间的相关性,使用了来自癌症基因组图谱(The Cancer Genome Atlas)的mRNA表达数据。癌症基因组图谱是美国国家癌症研究所(NCI)和美国国家人类基因组研究所(NHGRI)合作开发的可公开访问的数据库。参见cancergenome.nih.gov.使用Illumina RNASeq平台测定mRNA水平。计算FOXP3、CTLA-4、CD274、PDCD1、CD8A和GZMB针对RNASeq数据中的所有基因和每种癌症类型的相关性。然后将相关性分级。RNASeq数据中有大约20486个基因,因此针对每个基因,给所有其他基因分配相关等级。例如,对于结肠癌中的FOXP3,相关等级的范围为从1到20486。CSF1R的相关等级为38,表明与FOXP3表达高度相关。FOXP3和CSF1R的高相关性与一种假说一致,该假说认为结肠癌亚组具有表达CSF1R的肿瘤相关巨噬细胞(TAM)和表达FOXP3的Treg细胞。将该分析扩展到许多癌症类型,并可使用基因标志物产生显示具有与Treg细胞、CD8+ T细胞和PD-L1表达相关的CSF1R表达的癌组织的热图。参见图3。
实施例3:抗CSF1R抗体和抗PD-1抗体对小鼠结肠直肠肿瘤的体内作用
七周龄雌性C57BL/6小鼠购自Harlan Laboratories(Livermore,CA),并在研究开始前使其适应六天。将鼠结肠直肠癌细胞系MC38以0.5x106个细胞/100μl/小鼠皮下植入小鼠右胁。在接种之前,将细胞在补充有10%热灭活的胎牛血清(FBS)、2mM L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中培养3代。在37C下在5%CO2的潮湿气氛中培养细胞。达到80-85%汇合时,收获细胞,并以5x106个细胞/毫升重悬浮于冷的无血清RPMI 1640中。
在细胞植入后监测小鼠的肿瘤生长,每周两次。对于肿瘤测量,使用卡尺测量每个肿瘤的长度和宽度,并根据以下公式计算体积:肿瘤体积(mm3)=(宽度(mm)x长度(mm))2/2。在第7天,测量所有肿瘤,将小鼠随机分配到治疗组。入选治疗组的所有动物的平均肿瘤体积为58mm3。施用组如下:1)小鼠IgG1(Bio X Cell,West Lebanon,NH,USA;克隆MOPC-21)加上大鼠IgG2a(Bio X Cell,Clone 2A3),2)抗CSF1R(Bio X Cell,克隆AFS98)加上大鼠IgG2a,3)抗PD-1(Bio X Cell,克隆RMP1-14)加上小鼠IgG1,或4)抗CSF1R加上抗PD-1。继续测量肿瘤每周至少两次,直到肿瘤体积超过动物体重的10%或大约为2000mm3时为止.
通过绘制相对于用MC38细胞接种动物的日期的平均肿瘤体积的图形来表示肿瘤大小的变化。与IgG对照相比,用抗CSF1R或抗PD-1抗体治疗均显著降低了肿瘤生长(P<0.05)。抗CSF1R和抗PD-1的联合与单独的抗CSF1R或抗PD-1相比显著降低了肿瘤生长(P<0.05)。在开始治疗后第11天,使用计算的肿瘤体积的非配对双尾t检验分析来计算P值。(参见图4A和4B。)
实施例4:抗CSF1R抗体和抗PD-1抗体对小鼠胰腺肿瘤的体内作用
八周龄雌性FVB小鼠购自Jackson Laboratories,并在研究开始前使其适应两周。将来源于KrasG12D/Ink4a-/-转基因小鼠的鼠胰腺腺癌细胞系以0.2x106个细胞/50μl/小鼠通过手术植入小鼠的胰腺中。在接种之前,将细胞在补充有10%热灭活的胎牛血清(FBS)的DMEM培养基中培养不超过3代。在37C下在5%CO2的潮湿气氛中培养细胞。达到80-85%汇合时,收获细胞,并以4x106个细胞/毫升重悬浮于具有Matrigel的冷PBS中。
在细胞植入后监测小鼠的肿瘤生长,每周两次。每周至少两次轻轻地触诊小鼠以评估胰腺肿瘤的相对大小。在第12天,评估所有肿瘤,并将小鼠随机分配到治疗组。给药组如下:1)小鼠IgG1(Bio X Cell;克隆MOPC-21)加上载体对照,2)抗CSF1R抗体(鼠抗体,其与鼠CSF1R的亲和力类似于huAB1与人CSF1R的亲和力)加上载体,3)抗CSF1R加上吉西他滨(GEM),4)抗PD-1抗体(Bio X Cell;克隆RMP1-14)加上GEM,或5)抗CSF1R加上抗PD-1和GEM。抗CSF1R抗体的施用在第12天开始,抗PD-1和GEM治疗从第17天开始。从抗CSF1R抗体治疗开始20天后,继续评估肿瘤,每周至少两次。
在研究结束时,通过绘制所有组的平均肿瘤重量的图形来显示肿瘤大小的变化。与IgG对照相比,使用抗CSF1R或抗PD-1抗体治疗均降低了肿瘤生长。抗CSF1R和抗PD-1的联合与单独的抗CSF1R或抗PD-1相比显著降低了肿瘤生长(P<0.05)。在第32天,使用计算的肿瘤体积的非配对双尾t检验分析来计算P值。(参见图5。)
实施例5:抗CSF1R抗体治疗增加多种小鼠肿瘤模型中细胞毒性T细胞的频率和PD-L1的表达
七周龄雌性C57BL/6和BALB/c小鼠购自Charles River Laboratories(Hollister,CA),并在研究开始前使其适应至少三天。将鼠结肠直肠癌细胞系MC38和CT26在右胁皮下植入免疫活性小鼠。MC38以0.5x106个细胞/100μl/小鼠接种,CT26以1.0x106个细胞/200μL/小鼠植入。在接种之前,将细胞在补充有10%热灭活的胎牛血清(FBS)、2mM L-谷氨酰胺的RPMI 1640培养基中培养3代。在37℃下在5%CO2的潮湿气氛中培养细胞。达到80-85%汇合时,收获细胞,并以每毫升5x106个细胞重悬于冷的无血清RPMI 1640(MC38)或RPMI/Matrigel中(CT26)。
在细胞植入后监测小鼠的肿瘤生长,每周两次。对于肿瘤测量,使用卡尺测量每个肿瘤的长度和宽度,并根据以下公式计算体积:肿瘤体积(mm3)=(宽度(mm)x长度(mm))2/2。在第5天(CT26)或第7天(MC38)开始,测量所有肿瘤,并将小鼠随机分配到治疗组。给小鼠施用小鼠IgG1(克隆MOPC-21)或抗CSF1R抗体(cmFPA008)。研究在接种后21-24天结束,切除肿瘤并在液氮中速冻。
为了评估基因表达,使用了QuantiGene Plex测定法。裂解来自每个治疗组的7-10只小鼠的肿瘤组织,评定多种基因的相对表达,所述基因包括PTPRC(CD45)、CD8a、CD4、GZMA、CSF1R、和CD274(PD-L1)。针对用作对照的PPIB、GUSB、和HPRT将基因表达值归一化。将Cd8a表达进一步针对CD45归一化以评估CD8与CD4的相对丰度,用于检查CD8与CD4细胞的比率。图8显示了分别相对于MC38和CT26肿瘤的IgG治疗小鼠的归一化表达值。
如果P<0.05,则相对基因表达的比较被确定为统计学显著的。计算抗CSF1R抗体(cmFPA008)***后与IgG对照相比的基因表达,对计算得到的基因表达进行非配对双尾t检验分析,计算P值。统计学显著性如下图8所示:*p<0.05,**p<0.01。
实施例6:抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂的联合治疗
在具有各种肿瘤类型的受试者中,以渐增的剂量联合施用抗CSF1R抗体(分别包含SEQ ID NO:53和60的重链和轻链可变区的抗体)和抗PD-1抗体,所述肿瘤类型包括NSCLC、黑素瘤、SCCHN、膀胱癌和胰腺癌。以1mg/kg至10mg/kg的剂量施用抗CSF1R抗体。同时施用抗CSF1R抗体和抗PD-1抗体,每2周一次。
将抗CSF1R抗体和抗PD-1抗体施用于黑素瘤患者的三个亚组:未经治疗的(从未接受过任一抗体),获得抗性(初始对抗PD-1抗体有应答,之后出现了病情发展)和从头抗性(对PD-1/PD-L1抑制疗法没有应答)。
在一个亚组的受试者中进行治疗前和治疗后芯针活组织检查,以评估治疗后免疫细胞、基质和肿瘤细胞的潜在变化。除了使用苏木精和伊红染色评估肿瘤的整体细胞结构之外,还使用特异性测定法监测巨噬细胞数量和亚型。另外,监测患者的总应答、免疫相关应答和总生存期。
对于一些、大多数或所有患者,在联合治疗后CD8+ T细胞的数量增加、和/或在联合治疗后Treg细胞的数量减少。另外,对于一些、大多数或所有患者,联合治疗后,肿瘤增强性M2巨噬细胞的数量减少,并且肿瘤抑制性M1巨噬细胞的数量增加。最后,对于一些、大多数或所有患者,联合治疗后肿瘤坏死增加。
实施例7:抗CSF1R抗体和抗PD-1抗体的单一疗法和联合治疗临床试验概述
在一项开放标签、多中心剂量递增和剂量扩展研究中,将抗CSF1R抗体HuAB1作为单一疗法,以及与抗PD-1抗体纳武单抗联合施用给患有选定的晚期癌症、先前未曾接受过CSF1R通路抑制剂的患者。纳武单抗先前已被批准用于黑素瘤、转移性NSCLC,并与伊匹单抗(一种抗CTLA-4抗体)联合用于治疗转移性黑素瘤。对于研究的联合臂,将在每个14天治疗周期的第1天施用HuAB1和纳武单抗;首先经过30分钟IV输注纳武单抗,在2次输注之间休息30分钟,然后进行30分钟的HuAB1 IV输注。
研究的第一期(1a期)包括两个HuAB1单一疗法参考群组(1aM1和1aM2)和HuAB1与纳武单抗联合的三个剂量递增群组(1aC1、1aC2和1aC3)。研究的第二期(1b期)包括遍及六个癌症类型的八个群组(1b1到1b8)。大约总共270名患者将参加研究,第一期为30名,第二期为240名,其中第二期的8个群组的每个群组为30名。个体患者不得纳入研究臂1aM、1aC或1b中的多于一个臂。图6显示了研究设计的示意图。
在1a期,对于群组1aM1和1aM2中的单一疗法患者,每14天施用一次(q2w)2mg/Kg或4mg/Kg HuAB1。对于联合治疗群组1aC1、1aC2和1aC3,每14天施用一次(q2w)1、2或4mg/KgHuAB1和3mg/Kg纳武单抗。在28天的时间段内,在1aM1和1aC1群组中的患者共治疗总共两个14天的周期,随后为其他群组。还可包括3mg/Kg HuAB1和3mg/Kg纳武单抗群组。在1a期中,如果患者具有局部复发或转移的组织学或细胞学证实的实体瘤,并且在标准治疗后出现病情进展或不适合于标准治疗,则可将患者包括在单一疗法或联合治疗群组中。任何事先曾暴露于任何靶向PD-1途径的药物的患者均被排除。
在第1b期,治疗如下8个患者群组。
群组1b1:NSCLC(未经过抗PD-1治疗的、第二或第三线的)。
该群组可能包括具有组织学或细胞学证据的鳞状或非鳞状NSCLC的患者,其呈现出IIIB期或IV期疾病(根据国际肺癌研究协会胸部肿瘤分期手册第7版),并且在接受了针对局部晚期或转移性疾病的多重模式治疗(放射治疗、手术切除或根治性放化疗)后疾病复发或进展。该群组可能包括这样的患者:在为了治疗晚期或转移性疾病而接受了双铂的化疗方案期间/之后,病情进展或复发。任何事先已暴露于任何靶向PD-1途径的药物的患者均被排除。
群组1b2:NSCLC(抗PD-1靶向药难治性的患者)。
该群组可能包括下述患者:具有组织学或细胞学证据的NSCLC、呈现IIIB期局部晚期或IV期疾病的患者;用PD-1途径靶向药治疗未产生临床应答(即,既无CR也无PR),其最好的应答是疾病进展,且在治疗期间有疾病进展的放射学证据的患者。在该群组的语境中,难治性患者是接受至少2个剂量的任何PD-1靶向药之后没有临床应答的患者。对任何靶向PD-1途径的药物不耐受的患者被排除在外,其中“不耐受”定义为:任何治疗相关的4级不良事件,或任何治疗相关的、患者不能接受的、且尽管采取了标准对策仍然持续的2级或3级不良事件。
群组1b3:黑素瘤(未接受过抗PD-1治疗的)
这个群组可能包括具有根据美国癌症联合委员会(AJCC)分期***的组织学或细胞学证据的III期或IV期黑素瘤的患者,这些患者对于治疗转移性黑素瘤的标准治疗或是难治性的、或是不耐受的,或是已经拒绝标准治疗。入选的患者可能尽管用BRAF抑制剂治疗还是显示出疾病进展的客观证据,或者可能是BRAF野生型。下列患者被排除:事先暴露于任何PD-1途径靶向药的,BRAF突变的,或其BRAF突变状态未知或不能确定的。
群组1b4:黑素瘤(抗PD-1靶向药难治性的或复发的)
这个群组中的患者具有组织学或细胞学证实的不能切除的III期或IV期黑素瘤(根据AJCC分期***)。入选的患者可能在接受检查点抑制剂或PD-1靶向药的治疗期间显示了疾病进展的放射学证据,且上述治疗未产生临床益处;或者可能在接受PD-1靶向药治疗的同时显示的最佳应答是疾病进展,或者在最初获得临床益处之后疾病进展。在该群组的语境下,难治性患者是接受至少2个剂量的任何PD-1靶向药之后没有临床应答的患者。入选的患者可能尽管用BRAF抑制剂治疗还是显示出疾病进展的客观证据,或者可能是BRAF野生型。任何在先抗癌疗法,包括达卡巴嗪、BRAF抑制剂(如果BRAF V600突变为阳性的话)和/或伊匹单抗和姑息性放疗在内,应于研究药物施用之前至少3周完结,并且在第一剂量的研究药物至少6周之前停止用PD-1靶向药进行治疗。排除下述患者:对任何PD-1途径靶向药不耐受的患者;BRAF突变的患者;或其BRAF突变状态未知或不能确定的患者。
群组1b5:头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)(二线)
具有组织学或细胞学证据的复发性或转移性SCCHN(口腔、咽、喉)III期或IV期,并且不适用于具有治愈意图的局部治疗(结合或不结合化学治疗的手术或放射治疗)的患者可以包括在该群组中。患者也可能在辅助治疗(即手术后放射)、主要治疗(即放射)、复发、或转移情境下,在最后一个剂量的铂类治疗的6个月内具有病情进展或复发。铂治疗后的临床进展对于入选是容许的事件,其被定义为下述病变的进展:尺寸至少为10mm的适合于卡尺测量(例如,根据RECIST v1.1的浅表皮肤病变)的病变,或者已经被可视化且具有带度量的照相记录、并显示已经进展的病变。排除事先曾暴露于抗PD-1药物的患者。
群组1b6:胰腺癌(二线)
包括的患者可能具有组织学或细胞学证实的胰腺的局部或转移性腺癌,对其的标准治疗已经失败(或没有标准治疗指征)。假设已经有疾病进展的证据,患者也可以是已经接受过在先手术、用于胰腺局部晚期或转移性腺癌管理的放射治疗的。所有的毒性作用都应当消退,并且放射治疗的最后一个部分应在首次研究药物施用之前至少4周完成。排除事先曾暴露于抗PD-1药物的患者。
群组1b7:结肠直肠癌(三线)
包括的患者可能具有组织学或细胞学证实的结肠或直肠腺癌,并且可能具有转移性结肠直肠癌,其中在最后一次施用标准疗法之后证实疾病进展或对标准疗法(批准的疗法必须包括氟嘧啶、奥沙利铂、伊立替康、贝伐单抗、以及如果是KRAS野生型,西妥昔单抗或帕尼单抗)不耐受。排除事先曾暴露于抗PD-1药物的患者。
群组1b8:恶性胶质瘤(首次复发)
该群组中的患者可能具有组织学或细胞学证实的根据世界卫生组织(WHO)的晚期IV级恶性胶质瘤(胶质母细胞瘤或神经胶质肉瘤),并且可能以前已经进行过手术、放射治疗和替莫唑胺治疗。按照“神经肿瘤反应评价”(RANO)标准,在首次研究药物施用21天内,患者通过诊断性活检或对比增强MRI可能已经证实有首次复发。如果患者已接受贝伐单抗或另一种VEGF或VEGF受体靶向剂的预先治疗、胶质母细胞瘤或神经胶质肉瘤复发超过1次、或事先曾暴露于任何PD-1靶向药,则排除该患者。
对于单一疗法患者,以30分钟IV输注施用HuAB1。在每个14天治疗周期的第1天,联合治疗的患者首先接受3mg/kg剂量的纳武单抗30分钟的IV输注。在每个14天治疗周期的第1天,患者接受HuAB1之后接受纳武单抗输注,在两次输注之间休息30分钟。
在研究的第一个周期的第1天之前,收集肿瘤部位的活检,并且在第29天再次收集。根据RECIST v1.1的标准,还对患者进行总生存后期研究、无进展生存期、和具有确认应答的患者的应答持续时间的评估。在研究前1天、治疗期间、和研究之后进行CT/MRI(胸部、腹部、骨盆和脑),并进行肿瘤负荷测量。主要应答参数为客观应答率,客观应答率为完全或部分应答的患者数除以基线时可测量疾病的治疗患者的总数。使用RECIST v1.1附录F评价肿瘤反应。
实施例8:完整的临床试验1a和1b期规程-抗CSF1R抗体(HuAB1,也称为FPA008)和抗PD-1抗体(纳武单抗)的单一疗法和联合治疗临床试验
1导论与研究理据
集落刺激因子1受体和肿瘤相关巨噬细胞
巨噬细胞是在人体内进行各种功能的骨髓衍生细胞。它们可以通过两种不同的机制来定植于组织(和肿瘤):循环单核细胞的血源性播种,或以组织驻留巨噬细胞形式局部自我更新(Lavin,2013)。最近的研究表明,巨噬细胞在其具有活性的组织中发挥其生理效应,并对所述组织发挥独特的作用(Lavin,2014)。巨噬细胞调节是复杂的,因为这些细胞在其局部环境中积极地分泌并响应于多种细胞因子和趋化因子梯度。
肿瘤相关巨噬细胞(TAM)是肿瘤微环境中最丰富的免疫细胞类型。相当多证据暗示,在细胞-细胞接触和可溶性因子(如诸如免疫抑制细胞因子)的作用下,TAM极化为抑制抗肿瘤免疫应答的抗炎表型(M2)(Noy,2014)。与此一致,TAM水平的升高与大多数癌症预后不良有关(Komohara,2014)。
用抗CSF1R剂治疗后,未被耗竭的巨噬细胞可以从M2免疫抑制状态复极化到支持T细胞应答的M1抗肿瘤状态。这种转变,结合同时进行的治疗模态(如抗PD-1治疗),可能对降低肿瘤生长有更大的影响(Ruffell,2015)。
在当前进行的PD-L1研究中,已经显示应答率与肿瘤基质中PD-1/PD-L1的浓度相关(Tumeh,2014)。值得注意的是,随着单核细胞募集到肿瘤基质中导致其发育为为抑制性M2巨噬细胞,在肿瘤基质中也存在大量巨噬细胞。已证明单核细胞和巨噬细胞与PD-L1的关联可抑制肿瘤特异性T细胞免疫,并与患者生存不良相关。预料之中地,已证明体内阻断单核细胞相关的PD-L1阳性细胞可提高肿瘤特异性T细胞免疫。体外研究还已证明,表达PD-L1的活化单核细胞能相当程度地阻止肿瘤特异性T细胞增殖、细胞因子产生和细胞毒性潜力(Kuang,2009)。
集落刺激因子1受体(CSF1R)信号转导在巨噬细胞以及包括单核细胞和破骨细胞在内的其他骨髓谱系细胞亚群的分化、维持和功能中发挥基础性作用(Hamilton,2013)。两种已知的CSF1R配体是CSF1和IL34。这两种激动剂以相似的亲和力结合CSF1R中重叠的区域(Masteller,2014),即便它们几乎没有共同的氨基酸同源性。缺乏CSF1R的小鼠具有巨噬细胞方面的缺陷,这突出了CSF1R途径在这种细胞类型的生物学中的重要作用(Dai,2002)。阻断癌症环境中的CSF1R的药理学治疗预期会减少或重编程(reprogram)TAM,并减轻免疫抑制。总体而言,这可能产生更有利于基于免疫的抗癌疗法的肿瘤微环境。
HuAB1是一种与人CSF1R结合的重组人源化免疫球蛋白G4(IgG4)单克隆抗体。HuAB1和CSF1R的相互作用拮抗CSF1和IL34两者与CSF1R的结合,从而阻止受体活化。在经工程改造而过表达CSF1R(CHO-CSF1R)的细胞系中,HuAB1抑制CSF1和IL34诱导的CSF1R磷酸化,这在实验上证明,HuAB1阻断配体诱导的CSF1R信号通路的激活。HuAB1还抑制CSF1和IL34诱导的外周血单核细胞的体外增殖和存活,这证明HuAB1不仅抑制CSF1和IL34信号通路的启动,而且抑制原代人单核细胞对这些配体的后续生理应答。
总之,这些数据和其他新出现的数据表明,用HuAB1治疗阻断CSF1R可以改善由TAM产生的免疫抑制性肿瘤环境,并且可以提高基于免疫的抗癌疗法的功效。
PD-1
程序性细胞死亡-1(PD-1;CD279)是一种细胞表面信号转导受体,其通过与其配体PD-L1(CD274;B7-H1)和PD-L2(B7-DC/CD273)相互作用来递送抑制信号,所述抑制信号调节T细胞活化和耐受性之间的平衡。它是一种55kD的I型跨膜蛋白,属于T细胞共刺激受体的CD28家族成员,CD28家族还包括可诱导共刺激分子(ICOS)、细胞毒性T淋巴细胞抗原-4(CTLA-4)以及B和T淋巴细胞衰减因子(BTLA)(Freeman,2000)。PD-1含有细胞内膜近端免疫受体酪氨酸抑制基序(ITIM)和膜远端免疫受体酪氨酸转换基序(ITSM)。PD-1主要在活化的T细胞、B细胞和骨髓细胞上表达(Nishimura,2001a)。已经显示其配体PD-L1和PD-L2在鼠和人体***中与PD-1结合时下调T细胞活化(Carter,2002;Latchman,2001)。PD-1通过将SHP-2募集到其胞质区内的ITSM中的磷酸化酪氨酸残基来递送负信号(Chemnitz,2004;Sheppard,2004)。
PD-1负调控作用的证据来自PD-1缺陷型小鼠的研究,所述小鼠产生各种自身免疫表型,包括扩张型心肌病以及伴随有关节炎和肾炎的狼疮样综合征(Nishimura,1999;Nishimura,2001b;Okazaki,2003)。这些自身免疫表型的出现取决于小鼠品系的遗传背景;许多这些表型出现在不同的时间,并显示出可变的外显率。除了无效突变的表型外,已经发现在几种鼠模型中通过抗体介导的阻断的PD-1抑制在自身免疫疾病如脑脊髓炎、移植物抗宿主病和I型糖尿病的发展中起作用(Ansari,2003;Blazar,2003;Salama,2003)。总之,这些结果表明,PD-1阻断具有激活抗自身T细胞应答的潜力,但是这些应答是易变的,并且依赖于各种宿主遗传因素。因此,PD-1缺陷或抑制并不伴随对自身抗原的耐受性的普遍丧失。
在几种肿瘤类型中,包括NSCLC、黑素瘤和肾细胞癌(RCC)在内,已经临床测试了PD-1靶向剂——纳武单抗作为单一药剂或与其他治疗组合的效果。纳武单抗研究者手册(IB)的一些疗效数据如下表1所示。纳武单抗作为单一药剂在患者的一个亚群中具有显著的持久疗效。纳武单抗组合的增强的作用提示其也许可以与其他未测试的药剂联合用于患者。
纳武单抗目前已经被FDA批准用于不能切除的或转移性黑素瘤和在使用伊匹单抗(以及在BRAF V600突变为阳性的情况下的BRAF抑制剂)之后的疾病进展。它也被批准用于在以铂类为基础的化疗过程中或之后进展的转移性鳞状非小细胞肺癌(NSCLC)。
表1-纳武单抗在黑素瘤、NSCLC和RCC中的临床功效数据总结
aOpdivo包装说明书,2015
bRizvi,2015
cWeber,2015
1.1 HuAB1和纳武单抗联合治疗的理据
HuAB1是针对CSF1R的人源化单克隆抗体。已经证明在同基因小鼠肿瘤模型中用抗体或小分子抑制剂靶向CSF1R途径是有效的。在小鼠的MC38结肠腺癌模型中,CSF1R靶向抗体导致TAM显著降低,伴随着CD8+与CD4+比率向细胞毒性CD8+ T细胞正向移动。在一项新近的临床研究中,在实体瘤患者中测试了RG7155(CSF1R靶向抗体),证实其大幅降低肿瘤中的CSF1R+CD163+巨噬细胞(Ries,2014)。巨噬细胞的这种降低也与FOXP3+调节性T细胞的减少相关。这些数据提示,其他免疫效应细胞间接受到CSF1R阻断的影响。在小鼠神经元前体型多形性胶质母细胞瘤(GBM)模型中,CSF1R的小分子抑制显著增加了存活率并使已经建立的肿瘤消退(Pyonteck,2013)。在这个模型中,TAM没有被耗竭,而是在CSF1R抑制的存在下转化为更促炎的表型。
在原位胰腺导管腺癌(PDAC)模型中,用小分子或抗CSF1抗体阻断CSF1R途径选择性地减少了免疫抑制性TAM,从而随后减轻了免疫抑制。免疫抑制性TAM的这种减少使得剩余的促炎TAM能够支持抗原递呈并增强抗肿瘤T细胞应答(Zhu,2014)。这进而导致干扰素应答增加,其上调肿瘤细胞上的T细胞检查点抑制剂,包括PD-L1在内。这种反调节通过接合T细胞抑制剂PD-1来限制抗肿瘤T细胞应答。重要的是,抗PD-1治疗能够克服PD-L1介导的抑制。靶向PD-1作为单一药剂在遏制PDAC肿瘤生长中显示出有限的效果,但是即使在大的已建立的肿瘤中,PD-1阻断与CSF1R抑制相结合强有力地引起肿瘤消退。
总之,这些数据表明,通过HuAB1介导的CSF1R阻断将肿瘤中的TAM区室重编程,可以减少肿瘤微环境中的免疫抑制性TAM,并提高基于检查点的免疫治疗(比如纳武单抗)的疗效。
1.2在选定肿瘤类型中的HuAB1/纳武单抗联合治疗的理据
TAM可以强有力地抑制抗肿瘤免疫应答。CSF1R是在TAM上表达并调节其存活和功能的细胞表面受体。已经显示,阻断CSF1R的抗体减少了鼠和人肿瘤中的TAM(Ries,2014)。TAM存在于许多人类癌症中,表明阻断CSF1R的抗体,如HuAB1,可用于治疗多种肿瘤类型。另外,已经显示TAM与许多癌症的不良预后相关,包括肺癌、胰腺癌、头颈部癌和黑素瘤等(Komohara,2014)。此外,“癌症基因组图谱”的分析显示CSF1R与PD-1/PD-L1共表达、以及头颈部癌、肺癌和黑素瘤以及其他癌中的T细胞特征的高度相关性。在临床前模型中,CSF1R抑制也显示出改变巨噬细胞极化并阻断胶质瘤进展(Pyonteck,2013)。在胰腺癌模型中,CSF1R阻断还减少TAM,并与的PD-1和CTLA4检查点阻断协同作用(Zhu,2014)。还显示,与黑素瘤或肺癌相比,结肠直肠肿瘤细胞表达相对较低水平的PD-L1,并且在浸润性骨髓细胞上存在着观察到的PD-L1水平(Llosa,2015)。
目前,正在多种肿瘤类型包括本研究1b期部分提出的所有肿瘤类型中对纳武单抗进行测试。随着纳武单抗数据的完善,它们将有助于将本研究的1b期信息扩展到选定的肿瘤类型。
除了正在进行的研究之外,纳武单抗已被批准用于黑素瘤和鳞状NSCLC。黑素瘤批准是基于CheckMate 037研究的结果。在本研究中,将纳武单抗的疗效和安全性与研究者的化疗选择(ICC)进行比较,作为晚期黑素瘤患者的二线或更后线治疗。在本研究中,272例患者被随机分配到纳武单抗,133例随机分配到ICC。纳武单抗组的前120名患者中有32%报告了确定的客观应答,而对于ICC组患者为11%。归因于纳武单抗的3-4级不良事件包括脂肪酶增加、ALT增加、贫血和疲劳(各自为1%);对于ICC,其中包括中性粒细胞减少(14%)、血小板减少(6%)和贫血(5%)。在5%的纳武单抗治疗患者中,也存在3-4级药物相关的SAE,而对于ICC组患者为9%。没有发生与治疗有关的死亡(Weber,2015)。
纳武单抗用于NSCLC的批准是基于CheckMate 017和CheckMate 063研究的结果。CheckMate 017纳入了具有转移性鳞状NSCLC的在一次在先的基于双铂的化疗方案期间或之后经历过疾病进展的患者。用纳武单抗治疗的OS为9.2个月,而用多西他赛为6.0个月(Opdivo Package Insert,2015)。CheckMate 063评估了纳武单抗在晚期、难治性、鳞状NSCLC患者中的活性。该研究纳入并治疗了117例患者。正如独立放射学评审委员会评定,在这些患者中,14.5%的患者具有客观应答,26%的患者病情稳定。中位应答时间为3.3个月,而中位应答持续时间未实现。在17例应答的患者中,有77%在分析时正在应答之中。在117例患者中,17%报告了3-4级治疗相关的AE,包括:疲劳(4%)、肺炎(3%)和腹泻(3%)。存在着由肺炎和缺血性中风引起的两例治疗相关死亡,其发生在具有进行性疾病背景下的多种并发症的患者中(Rizvi,2015)。
上述报告数据支持HuAB1与纳武单抗联合应用于黑素瘤、NSCLC、头颈部癌、胰腺癌、结肠直肠癌和胶质瘤等癌症的研究。
1.3 HuAB1单一疗法的起始剂量和联合剂量递增的理据
项目主办者已经开始了被设计为3个部分的第一个在人类中的1期临床研究,以评估单一药剂HuAB1在健康志愿者和类风湿性关节炎(RA)患者中的安全性、PK和生物标志物(研究FPA008-001)。在本研究的第1部分和第2部分中,在健康志愿者中以0.2、1、3和10mg/kg体重的剂量对HuAB1进行了测试。在健康志愿者组中,在1mg/kg时,7名受试者接受了单次剂量,5名受试者接受了2次剂量;在3mg/kg时,10名受试者接受了单次剂量,2名受试者接受了2次剂量;在10mg/kg时,6名受试者接受了单次剂量的HuAB1。多剂量群组以14天间隔给药,随访所有受试者的剂量限制性毒性(DLT)持续28天窗口期。
截至2014年9月23日,共有48名受试者完成了研究的第1部分和第2部分。在第1部分或第2部分中没有报告DLT。所有不良事件(AE)均为1级或2级并且是自限性的,其中最常见的HuAB1治疗相关毒性为瘙痒、眼睑水肿以及面部肿胀、疲劳和头痛。观察到血清酶如肌酸激酶(CK)、乳酸脱氢酶(LDH)、丙氨酸转氨酶(ALT)和天冬氨酸转氨酶(AST)的一过性升高。
在正在进行的1期研究的第三部分的臂中,对疾病缓解型抗风湿药物(DMARD)没有作出应答的RA患者正在参加1、3、和6mg/kg体重的不同剂量水平的HuAB1开放标签研究。在研究之前和研究期间,这些患者需要稳定的每周一次的甲氨蝶呤剂量,并将接受间隔14天的2个剂量的HuAB1。除了其他分析外,在2剂量方案之后,跟踪监测患者的安全性、药代动力学(PK)和药效学(PD)。
总之,36名健康志愿者和6名RA患者迄今为止已接受HuAB1,在第1部分或第2部分中没有报告DLT,并且在1mg/kg或3mg/kg剂量水平的RA患者没有报告显著的治疗相关毒性。纳武单抗的安全性已经得到充分证实,最近在美国得到用于治疗黑素瘤和鳞状NSCLC上市授权也支持了纳武单抗的安全性。给药的受试者数量、评估的剂量水平以及HuAB1和纳武单抗的当前总AE曲线均支持在本研究中同时启动2mg/kg HuAB1单一疗法群组以及1mg/kgHuAB1与3mg/kg纳武单抗联合治疗群组。
本研究的1a期部分将由两步单一疗法剂量递增组成:2mg/kg HuAB1,然后是4mg/kg HuAB1。还将有一个三步剂量递增:固定剂量为3mg/kg的纳武单抗联合1mg/kg的HuAB1、随后为2mg/kg的HuAB1、然后为4mg/kg的HuAB1。
在2mg/kg HuAB1单一疗法群组中的28天DLT期通过之后,将启动4mg/kg HuAB1单一疗法群组。只有在1mg/kg HuAB1/纳武单抗联合群组和2mg/kg HuAB1单一疗法群组中的DLT期通过之后,才能开始2mg/kg HuAB1/纳武单抗联合群组。在1mg/kg和2mg/kg HuAB1/纳武单抗联合群组中以及在2mg/kg和4mg/kg HuAB1单一疗法群组中的DLT期通过之后,将启动4mg/kg HuAB1/纳武单抗联合群组。剂量递增示意图显示在图7中。
所有患者将遵循每14天一次的连续施用方案,接受随访直到疾病进展、不可接受的毒性或撤回其同意为止。
1.4每种研究药物的30分钟输注施用的理据
长的输注时间,特别是在多种药剂依次施用个体时,会给患者和治疗中心造成负担。
HuAB1,一种CSF1R抑制剂,在以往健康志愿者以及RA患者的研究中,施用的时间是30分钟。
纳武单抗曾在长治疗持续期内以剂量范围高达10mg/kg安全地施用长达60分钟。在CA209010研究(晚期/转移性透明细胞RCC患者纳武单抗的2期随机双盲剂量范围研究)中,观察到输注部位反应和超敏反应的剂量相关性(0.3mg/kg时为1.7%,2mg/kg时为3.7%,10mg/kg时为18.5%)。所有事件均为1级或2级并且是可控的。与以前的10mg/kg纳武单经过60分钟输注的经验相比,3mg/kg纳武单抗的30分钟输注持续时间(以30mg/kg提供剂量的30%)预期不会出现更严重的安全问题。
总体来说,输液反应,包括高级别的超敏反应,在纳武单抗和HuAB1临床研究中是罕见的。此外,在联合群组中,纳武单抗输注后的30分钟休息将确保适当的在HuAB1输注开始之前有时间进行适当的安全监测。总体而言,预期单独或联合地输入纳武单抗或HuAB130分钟时安全性特征不会有改变。
1.5研究目的
本试验的第1a期臂的目的是评估在晚期癌症患者中施用HuAB1单一疗法以及HuAB1与纳武单抗联合施用之后的安全性和耐受性,并确定HuAB1用于本研究的1b期联合臂的推荐剂量(RD)。
本试验的1b期臂的目的是进一步表征HuAB1与纳武单抗联合的安全性,并评估在具有选定的晚期癌症的患者中以RD施用的HuAB1/纳武单抗联合治疗的临床益处。
1.6目的
1.6.1 1a期目的
1.6.1.1主要目的
评估HuAB1作为单一疗法的安全性和耐受性
评估HuAB1与纳武单抗联合的安全性和耐受性
确定与固定剂量的纳武单抗联合的HuAB1的RD
1.6.1.2次要目的
表征HuAB1的PK特征
表征纳武单抗与HuAB1联合时的PK峰和谷浓度概貌
表征HuAB1和纳武单抗的PD特征
表征HuAB1和纳武单抗的免疫原性
使用治疗前和治疗中肿瘤活检来评估选定生物标志物测量与临床功效量度的关联
1.6.1.3探索性目的
进一步表征HuAB1和纳武单抗的PD特征
1.6.2 1b期目的
1.6.2.1主要目的
通过客观应答率(ORR)分析,评估HuAB1与纳武单抗联合在具有选定的晚期癌症的患者中的临床益处。
评估以RD施用的HuAB1与纳武单抗联合治疗在具有选定的晚期癌症的患者中的安全性和耐受性
1.6.2.2次要目的
通过总生存期(OS)、应答持续时间(DOR)、和无进展生存期(PFS)分析,评估HuAB1与纳武单抗联合在具有选定的晚期癌症的患者中的临床益处。
表征HuAB1的PK特征
表征纳武单抗与HuAB1联合时的PK峰和谷浓度概貌
表征HuAB1和纳武单抗的PD特征
表征HuAB1和纳武单抗的免疫原性
使用治疗前和治疗中肿瘤活检来评估选定生物标志物测量与临床功效量度的关联
1.6.2.3探索性目的
进一步表征HuAB1和纳武单抗的PD特征
1.7产品开发背景
1.7.1作用机制
1.7.1.1 HuAB1
HuAB1是与人CSF1R结合的重组人源化IgG4单克隆抗体。HuAB1与CSF1R的结合拮抗其天然配体CSF1和IL34,从而阻止CSF1R的活化。HuAB1在铰链区含有单个氨基酸取代,以防止同二聚体(hemi-dimer)交换。
在被工程改造为过表达CSF1R的细胞系(CHO-CSF1R)中,HuAB1抑制CSF1和IL34两者诱导的CSF1R磷酸化,证明HuAB1阻断了配体诱导的CSF1R信号通路的激活。HuAB1还抑制CSF1和IL34诱导的外周血单核细胞的体外增殖和存活,证明HuAB1不仅抑制CSF1和IL34信号通路的启动,而且抑制原代人单核细胞对这些配体的后续生理反应。
CSF1R在单核细胞/巨噬细胞谱系的细胞上表达,并通过CSF1R经由其配体CSF1和IL34进行信号转导,支持单核细胞、巨噬细胞和破骨细胞的分化、维持和功能。TAM是肿瘤微环境中最丰富的免疫细胞类型。实质性证据表明,TAM朝向抗炎表型极化,并通过细胞表面抑制剂和可溶性因子两者,如免疫抑制细胞因子,在抑制抗肿瘤免疫应答中发挥主要作用(Noy,2014)。CSF1是TAM的主要存活因子,通过HuAB1靶向CSF1R将会降低TAM介导的免疫抑制,从而加强针对免疫治疗的抗肿瘤应答。因此,抑制CSF1R的药物将会限制TAM对肿瘤微环境的免疫抑制作用,可以补充和增进当前的癌症治疗。
由于HuAB1不与小鼠CSF1R交叉反应,开发了替代抗体cmHuAB1,其结合并阻断小鼠CSF1R的效力与观察到的HuAB1对人CSF1R的效力相似。cmHuAB1含有大鼠可变区和小鼠IgG1Fc区。在直接结合酶联免疫吸附测定(ELISA)中证明了cmHuAB1与小鼠CSF1R的结合,并且通过cmHuAB1抑制CSF1诱导的和IL-34诱导的CSF1/IL34依赖性细胞系(mNFS60)增殖的能力证明了它的抑制活性。cmHuAB1与小鼠CSF1R结合的EC50值为2.4ng/mL,小鼠CSF1诱导和小鼠IL34诱导的mNFS60细胞增殖/存活的抑制的IC50值分别为32.9和9.1ng/mL。
1.7.1.2纳武单抗
癌症免疫治疗赖以成立的前提是肿瘤可被识别为外来的而不是自身的,并且可以受到激活的免疫***的有效攻击。在这种情境下,有效的免疫应答被认为依赖于对癌细胞上表达的肿瘤抗原的免疫监视,免疫监视最终导致适应性免疫应答和癌细胞死亡。同时,肿瘤进展可能依赖于获得能够使癌细胞逃避免疫监视并逃避有效的先天和适应性免疫应答的性状(Dunn,2002;Jemal,2011;Pardoll,2003;Zitvogel,2006)。当前的免疫治疗研究尝试通过治疗性疫苗接种引入癌症抗原或通过调变免疫***的调节性检查点来破坏免疫***对肿瘤细胞和抗原的表观耐受性。
T细胞刺激是一个复杂的过程,涉及许多正和负共刺激信号的整合加上T细胞受体(TCR)的抗原识别(Greenwald,2004)。这些信号合起来控制T细胞活化和耐受之间的平衡。已经显示PD-1信号转导抑制CD28介导的IL-2、IL-10、IL-13、干扰素-γ(IFN-γ)和Bcl-xL的上调。还注意到PD-1信号转导抑制T细胞的活化和预先活化的细胞的扩增。PD-1负调控作用的证据来自产生多种自身免疫表型的PD-1缺陷小鼠的研究(Sharpe,2007)。这些结果表明,PD-1阻断具有促进抗自身T细胞应答的潜力,但是这些应答是不定的,因各种宿主遗传因素而变。因此,PD-1缺陷或抑制并不伴随对自身抗原的耐受性的普遍丧失。
在体外,纳武单抗以高亲和力(EC50 0.39-2.62nM)与PD-1结合,并抑制PD-1与其配体PD-L1和PD-L2的结合(IC50 1nM)。纳武单抗与PD-1特异性结合而不与CD28家族的相关成员如CD28、ICOS、CTLA-4和BTLA结合。纳武单抗阻断PD-1途径导致混合淋巴细胞反应(MLR)中增殖和IFN-γ释放的可重复的增强。当使用人外周血单核细胞(PBMC)进行巨细胞病毒(CMV)再刺激测定时,纳武单抗对抗原特异性回忆应答的作用表明,相对于同种型匹配的对照,纳武单抗可以以剂量依赖性方式增强来自CMV特异性记忆T细胞的IFN-γ分泌。纳武单抗的鼠类似物体内阻断PD-1可增强抗肿瘤免疫应答并导致几种免疫活性小鼠肿瘤模型中的肿瘤排斥(MC38、SA1/N、和PAN02)(Wolchok,2009)。
1.7.2临床前总结
1.7.2.1 HuAB1
研究了cmHuAB1在免疫活性小鼠的MC38结肠癌模型中抑制癌体内生长的能力。选择这些小鼠以允许建立完整的肿瘤-免疫相互作用。当肿瘤达到大约100mm3时,开始用cmHuAB1处理。通过腹膜内注射30mg/kg的cmHuAB1处理小鼠,每周一次,并与仅用白蛋白处理的小鼠比较肿瘤生长。与对照处理的小鼠相比,cmHuAB1显著降低了MC38肿瘤的生长。对照小鼠的流式细胞术分析显示,MC38肿瘤中的CD11b+骨髓区室主要是CD206+巨噬细胞。CD206是免疫抑制性M2巨噬细胞的标志物。用cmHuAB1处理后这些CD206+ M2免疫抑制巨噬细胞显著减少。M2巨噬细胞的减少伴随着CD8+细胞毒性T细胞相对于总CD4+ T细胞或总调节性T细胞(定义为CD4+CD25高细胞)的增加。这些数据表明,cmHuAB1减少免疫抑制巨噬细胞,导致肿瘤中朝向更强的细胞毒性T细胞应答的转变。
HuAB1的PK特征是复杂的,其特征在于非线性清除,该非线性清除可能是被与细胞上的CSF1R结合所介导的。由于单核细胞和巨噬细胞的活力依赖于CSF1R,在HuAB1治疗后这些携带靶标的细胞数量减少,导致靶标介导的清除降低。随着靶标-介导的清除在高剂量或重复剂量下变饱和,HuAB1的清除与其他的人IgG抗体类似。
三种PD生物标志物在非临床研究中与HuAB1暴露相关:CSF1血清水平、循环CD16阳性外周血单核细胞(CD16+单核细胞)和骨吸收血清标志物(Trap5b和CTX)。以与HuAB1血浆浓度密切相关联的剂量依赖性方式,CSF1血清水平迅速上升,CD16+单核细胞水平迅速下降。在食蟹猴中PD反应在低剂量的HuAB1(每周3mg/kg)达到饱和。针对CD16+单核细胞降低的半最大应答(IC50)发生在约3μg/mL的血清浓度,而最大应答发生在约10μg/mL。CD16阴性(CD16-)单核细胞的水平不随HuAB1暴露而变化。
在食蟹猴的体内毒理学研究中,对HuAB1的耐受性一般而言良好。测试物相关的发现(test article-related findings)包括临床观察结果、血液学和临床化学变化以及组织病理学变化。大多数这些观察结果被认为并非不良。最突出的临床观察结果是,长期暴露于HuAB1后观察到的可逆性眶周水肿。水肿的发生与暴露水平没有明显的关系,但在药物的全身清除之后,水肿消退。眶周水肿是已知的影响CSF1途径的药物的副作用(Cassier,2014;Ries,2014)。主要的血液学变化是循环CD16+单核细胞的可逆性减少,这被认为是PD效应。HuAB1相关的临床化学作用包括ALT、AST、CK和LDH血清水平的可逆性增加。这些实验室异常与肝脏、心脏或肌肉组织损伤的任何组织病理学证据无关。另外,心肌肌钙蛋白、骨骼肌肌钙蛋白(SkTnI)、肌红蛋白和醛缩酶显示没有任何变化,进一步证实了没有任何肝脏或肌肉损伤。增加的血清水平归因于ALT、AST、CK和LDH分子从血清中的清除减少,原因在于肝脏Kupffer细胞数量减少(Radi,2011)。因此,ALT、AST、CK和LDH升高被认为是非毒性的,并且是HuAB1暴露的间接PD效应。
一个值得注意的组织病理学发现是粘膜下胶原纤维的可逆性膨胀,这是由于在多种组织中具有透明空间和不同量的蓝色颗粒状细胞外基质(ECM)所致。这种变化既与炎性细胞无关,也与膨胀区域内的胶原纤维、成纤维细胞或平滑肌细胞的变性或其他改变的任何征象无关。在缺乏功能性CSF1的op/op小鼠中也见到类似的观察结果。组织巨噬细胞减少是观察到的ECM积聚的可能原因,原因在于糖胺聚糖(特别是透明质酸)的清除率降低,糖胺聚糖在***中占优势并且通常被巨噬细胞分解代谢(Radi,2009)。这种变化也被认为是HuAB1的间接PD效应。
所有样品中的心肌肌钙蛋白I均低于定量限(LOQ),除了第28天150mg/kg组中的一只雌性猴子之外。这只动物在心脏中确实有相应的显微镜发现。虽然心肌肌钙蛋白I的升高对于心肌损伤是高度特异性的,但是在这只猴子中检测到的水平(0.26ng/mL)略高于测定LOQ(0.20ng/mL),并且远低于不良心脏事件的预期水平。
当对食蟹猴施用13个每周剂量时,HuAB1的无可见有害作用水平(NOAEL)被确定为100mg/kg,其提供的基于体表面积计算的针对人体中1mg/kg起始剂量的安全系数是32倍。
评估了最小预期生物效应水平(MABEL),以指导首次用于人的研究中健康志愿者的起始剂量决策。鉴定为代表生物效应的PD标志为:CD16+单核细胞水平的变化、血浆CSF1的升高、以及血清ALT、AST、CK和LDH的升高。针对各种标志出现生物效应时的最低HuAB1血浆浓度范围为5μg/mL至105μg/mL,并且在最大血清浓度(Cmax)下对应于5μg/mL的HuAB1剂量估计为0.2mg/kg,此即为推荐的健康志愿者的起始剂量。
1.7.2.2纳武单抗
已显示纳武单抗与人PD-1受体特异性结合,而不与CD28家族的相关成员如ICOS、CTLA-4和BTLA(纳武单抗IB,2014)结合。纳武单抗抑制PD-1与其配体PD-L1和PD-L2的相互作用,导致增强的体外T细胞增殖和IFN-γ释放(Velu,2009;纳武单抗IB,2014)。荧光激活细胞分选仪(FACS)分析证实,纳武单抗与表达细胞表面PD-1的经转染的中国仓鼠卵巢(CHO)和活化人T细胞结合,并且与食蟹猴PD-1结合,但不与大鼠或兔PD-1分子结合。纳武单抗也显示与来自慢性感染的丙型肝炎病毒患者的病毒特异性CD8+ T细胞上的PD-1结合(Kaufmann,2008;Rutebemberwa,2008)。
MLR中的PD-1抑制导致了MLR中的IFN-γ释放可重复地浓度依赖性地增强(高达50μg/mL)。对于人IgG4同种型对照或CD4+ T细胞和树突状细胞(DC)对照没有观察到这种效应(Wang,2014)。
在食蟹猴的静脉内(IV)重复剂量毒理学研究中,纳武单抗在剂量高达50mg/kg每周一次施用5周,以及在剂量高达50mg/kg每周两次施用27个剂量的情况耐受性良好。纳武单抗相关发现仅限于,在施用27个剂量50mg/kg纳武单抗的女性中三碘甲状腺原氨酸(T3)可逆性降低28%。没有观察到在甲状腺素(T4)、促甲状腺激素(TSH)水平上的相应变化或甲状腺的组织学变化。虽然纳武单抗在食蟹猴中耐受性良好,但联合研究突出显示了与其他免疫刺激剂联合时毒性增强的可能(纳武单抗IB,2014)。
伊匹单抗(BMS-734016),一种阻断T细胞活化下调的抗CTLA-4单克隆抗体(mAb),与纳武单抗联合使用以研究PD-1和CTLA-4受体在非人灵长类动物中的并发抑制作用(纳武单抗IB,2014)。虽然在仅用纳武单抗治疗的食蟹猴中没有观察到胃肠道(GI)毒性,但是在联合使用纳武单抗+伊匹单抗分别以10mg/kg和3mg/kg以及50和10mg/kg的联合每周一次治疗4周的食蟹猴中,剂量依赖性GI毒性是明显的。在伊匹单抗施用后,也观察到了低发生率的GI作用(纳武单抗IB)。
另外,在妊娠食蟹猴中用纳武单抗进行了强化的出生前后发育(ePPND)研究(纳武单抗IB,2014)。施用高达50mg/kg的纳武单抗每2周一次时,妊娠猴的耐受性良好;然而,在从器官发生到分娩的时期以≥10mg/kg施用时,纳武单抗被确定为选择性发育毒物(从0到168小时的浓度-时间曲线下面积[AUC][AUC(0-168h)]117,000μg·h/mL)。具体而言,在没有明显母体毒性的情况下,注意到发育死亡率增加(包括妊娠晚期胎儿丢失和伴有新生儿死亡的极端早熟)。在出生后6个月的全部时间内,在测试的存活婴儿中没有纳武单抗相关的变化。虽然这些妊娠失败的原因尚未确定,但纳武单抗相关的妊娠维持作用与PD-L1在维持小鼠胎儿母体耐受性方面的已得到证实的作用是一致的(Habicht,2007)。
1.7.3临床总结
1.7.3.1 HuAB1
1.7.3.1.1正在进行的HuAB1研究总结
当前正在双盲随机安慰剂对照的首次人体试验(first-in-human trial)中对HuAB1进行评估,该试验被设计为3个部分,旨在研究在健康志愿者和RA患者中的安全性、PK和PD。研究的前两个部分在健康志愿者中进行并且已经完成。在第1部分中,按照0.2、1、3或10mg/kg的剂量群组,将8名健康志愿者随机分配为接受单次IV输注HuAB1或安慰剂(3∶1)。在第2部分中,将8名健康志愿者随机分配为接受间隔14天施用的1mg/kg或3mg/kg的2个剂量的HuAB1或安慰剂(3∶1)。研究的第3部分将在RA患者中评估HuAB1,目前正在进行。第1部分和第2部分的数据总结如下。
1.7.3.1.2 HuAB1的临床药理学总结
在第1部分和第2部分接受HuAB1的所有36名受试者中,通过测量随着时间推移的全身药物水平来评估HuAB1的PK。在施用前和首次剂量后直到第112天(对于第1部分)或第98天(对于第2部分)的不同时间点,采集血样用于测定血清HuAB1浓度。另外,在施用前和从第15天到第85天(对于第1部分)或第15天到第99天(对于第2部分)的不同时间点,采集血样用于测定抗-HuAB1抗体。
在以0.2、1、3和10mg/kg单次施用HuAB1后,总清除率随着剂量的增加而降低,范围为38.7-2.55mL/天/kg。10mg/kg时的mL/天/kg的总清除率处于典型的人IgG单克隆抗体的范围内。Cmax随着剂量成比例地增加,但AUC并非如此。在以14天间隔施用2次后,在1mg/kg没有蓄积。然而,当剂量增加至3mg/kg时,从第1天到第15天针对AUC观察到在第一剂量和第二剂量之间的平均1.60倍的药物蓄积,而在相同剂量水平下观察到Cmax的最小蓄积。观察到的PK数据表明,CSF1R在单核细胞/巨噬细胞谱系和其他细胞类型上表达有助于HuAB1的靶标介导的清除。由于单核细胞和巨噬细胞的活力依赖于CSF1R,这些携带靶标的细胞在HuAB1治疗后数量减少,导致靶标介导的清除降低。一旦靶标介导的清除在高剂量或重复剂量下被饱和,HuAB1的清除与其他的人IgG抗体类似。
使用经过验证的电化学发光测定(ECLA)测量血清中的总抗HuAB1抗体来评估HuAB1的免疫原性。该测定的检测限(灵敏度)为39.1ng/mL。群组2(1mg/kg单剂量)中的三名受试者具有微量的阳性抗体滴度,发生率8.3%(36名接受HuAB1的受试者中的3名)。微量的阳性抗体滴度首先在第15天在2名受试者中观察到,并且在第57天在1名受试者中观察到。在第85天(测试的最后时间点),两名受试者仍然具有ADA-阳性滴度。在可用数据的基础上,与相同剂量群组中没有ADA的受试者相比,ADA的存在对HuAB1暴露(如果有的话)的影响可以忽略不计,并且没有相关的临床后遗症。
HuAB1治疗引起非经典CD16+单核细胞的剂量依赖性减少,这是HuAB1治疗的PD标志。分析了HuAB1血清浓度与非经典CD16+单核细胞减少之间的关系,根据治疗后72小时直到研究结束收集的数据,发现该关系是浓度依赖性的。在血清中HuAB1≥5μg/mL时,观察到非典型CD16+单核细胞的最大减少。因此,在大多数患者中达到≥5μg/mL的谷血清浓度的剂量预期是达到非经典CD16+单核细胞最大减少的目标剂量。实现临床疗效所需的最佳暴露量仍需在患者使用HuAB1的临床试验中加以探索。
总之,HuAB1在测试的剂量范围内表现出非线性清除。在健康志愿者中观察到的PK特征支持每2周一次或以更低频率给药HuAB1以维持期望的药物暴露量。
1.7.3.1.3 HuAB1的临床安全性总结
第1部分和第2部分接受HuAB1的受试者总数均为36人,每个剂量群组中有6名受试者。做出剂量递增决定的基础是DLT的发生率加上超出DLT期的归因的AE。
HuAB1在高达3mg/kg的多个剂量的健康志愿者中耐受良好。最常见的HuAB1治疗相关毒性是瘙痒、眼睑水肿以及面部肿胀、疲劳和头痛。这些事件为1级或2级并且是自限性的。AE特征与其他靶向CSF1R途径的化合物的报道相似(Cassier,2014)。在10mg/kg,所有6名活跃的受试者均经历了中度(2级)眼睑水肿或面部肿胀,一些伴有手足肿胀、视力模糊和体重增加。这些事件持续长达3个月,与此剂量水平下延长的HuAB1暴露一致。
HuAB1显示出肝酶升高,在药物施用后2-8周达峰值,停药后12周恢复正常化。在1mg/kg及以上时,发现CK的剂量依赖性升高达到正常上限(ULN)的6.8倍且LDH高达ULN的3.2倍;在3mg/kg及以上时,AST升高到ULN的2.4倍,且随着剂量增加,在健康志愿者中发生AST升高的百分比越来越大;在10mg/kg时,1名受试者出现轻度ALT升高,达ULN的1.2倍。这些升高被认为更多地是由于HuAB1介导的Kupffer细胞抑制的作用机制,而不是任何器官功能衰竭或损伤所致,并且没认为临床上没有显著意义。最初在健康志愿者中以1mg/kg和3mg/kg体重的剂量测试HuAB1。在1mg/kg时,7名受试者接受单次剂量,5名受试者接受间隔14天的2次剂量,并接受随访经过28天DLT窗口。在3mg/kg健康志愿者组中,10名受试者接受单次剂量,2名受试者以14天间隔接受2次剂量,并接受关于DLT的随访。在3mg/kg群组中只有1名受试者的碱性磷酸酶和AST有1级同时增加。
1.7.3.2纳武单抗
1.7.3.2.1纳武单抗的临床药理学总结
在CA209001中评估了多种肿瘤类型的患者中纳武单抗的单剂量PK,而在CA209003中正在评估患者中的多剂量PK。另外,利用来自CA209001、CA209002和CA209003的350名患者的数据,已经开发了初步的群体药代动力学(PPK)模型。
在剂量范围为0.1到20mg/kg的患者中,以单次剂量或每2或3周一次的多个剂量施用,对纳武单抗的PK进行了研究。基于使用来自909例患者的数据的PPK分析,清除率(CL)(CV%)为9.5mL/h(49.7%),稳态分布容积(Vss)的几何平均值为8.0L(30.4%),消除半衰期(t1/2)的几何平均值为26.7天(101%)。以3mg/kg每2周一次施用时,到12周达到纳武单抗的稳态浓度,全身蓄积约为3倍。对于以剂量范围0.1到10mg/kg每2周一次施用,对纳武单抗的暴露量随着剂量成比例地增加(Opdivo包装插页,2015)。
根据使用来自909例患者的数据的群体PK分析,纳武单抗的清除率随着体重的增加而增加,这支持基于体重的剂量。群体PK分析表明,以下因素对纳武单抗的清除无临床上显著的影响:年龄(29到87岁)、性别、种族、基线LDH、PD-L1表达、肿瘤类型、肿瘤大小、肾损伤和轻度肝损伤(Opdivo包装插页,2015)。
1.7.3.2.2纳武单抗的安全性总结
总的来说,在所有已完成的和正在进行的临床试验中,在没有达到MTD的不超过10mg/kg的任何剂量下,纳武单抗单一疗法以及联合治疗的安全性特征是可控的,并且大体上是一致的。在针对纳武单抗剂量水平的AE的发生率、严重性、或因果关系方面没有固定的模式。大多数AE是低级别的(1级至2级),相关的高级别(3级至4级)AE相对较少。根据纳武单抗IB(纳武单抗IB,2014)中提供的管理算法的指示,通过使用皮质类固醇或激素替代疗法(内分泌病),大多数高级事件是可控的。
在已完成的1期单剂量研究(CA209001)和正在进行的1期多剂量研究(CA209003)中,分别对具有选定的复发性或难治性恶性肿瘤的总共39例和306例患者进行了治疗。到目前为止,由于来自CA209003的安全性特征与CA209001观察到的安全性特征一致,下文仅提供了来自规模更大且更新的研究CA209003的数据。
在CA209003(n=306,包括129例NSCLC患者)中,截至2013年3月05日的数据库锁定,在75%的患者中出现任意等级的药物相关AE。出现在至少5%的患者中的最频繁的药物相关AE包括:疲劳(28%)、皮疹(15%)、腹泻(13%)、瘙痒(11%)、恶心(9%)、食欲下降(9%)、血红蛋白下降(6%)、和发热(6%)。大多数事件是低级别的,在17%的患者中观察到3/4级药物相关AE。在至少1%患者中出现的最常见的3/4级药物相关AE为:疲劳(2%)、肺炎(1%)、腹泻(1%)、腹痛(1%)、低磷血症(1%)、和淋巴细胞减少(1%)。在14%的患者中出现药物相关SAE;8%为3/4级,包括肺炎(1%)和腹泻(1%)。药物相关AE的范围、频率和严重性在测试的剂量水平上大致相似。在具有跨肿瘤类型记载的AE的患者的比例方面,关于肿瘤类型(RCC、NSCLC、转移性去势抵抗性***癌[mCRPC]、结肠直肠癌[CRC]和黑素瘤)的安全性数据的综述也显示没有任何临床意义上的差异。
考虑到多个事件,还分析了具有潜在免疫相关因果关系的选择性AE(以前称为“免疫相关不良事件”或“重点关注的不良事件”),并对治疗持续时间的等级进行了调整。大多数事件出现在治疗的前6个月内;对于延长的药物暴露未观察到累积毒性或新的毒性。306名患者中有19名(6%)经历了3/4级治疗-相关的选择性AE。具有药物相关AE的230名患者中有52名(23%)需要用全身性糖皮质激素和/或其他免疫抑制剂进行治疗。在毒性消除之后,52名中的22名(40%)继续纳武单抗治疗,而其他患者停止治疗。
虽然肿瘤进展是死亡率最常见的原因,但有与3/4级肺炎相关联的3例药物相关死亡。在306名患者的12名(4%)中出现肺炎(任何等级),在4名患者(1%)中出现3/4级肺炎,临床表现范围从无症状的放射影像学异常到伴随咳嗽、发热、和/或呼吸困难的进行性弥漫性肺浸润。在肺炎发生与肿瘤类型、剂量水平或治疗持续时间之间没有观察到明确的关系。在12名患者的9名中,在治疗停止和/或用免疫抑制治疗(糖皮质激素、英利昔单抗、霉酚酸酯)之后可逆转肺炎。
关于纳武单抗安全性的更多详情,包括来自其他临床研究的结果,也可在IB和包装说明书中找到(纳武单抗IB,2014;Opdivo包装插页,2015)。
1.8总体风险/利益评估
许多靶向CSF1R途径的候选药物正处于临床研究中。这些包括阻断与CSF1R结合的激动剂配体或抑制CSF1R二聚化的抗体、以及阻断CSF1R激酶活性的小分子。已经报道了针对CSF1的抗体PD-0360324在健康志愿者中的安全性、PK和PD(Sadis,2009)。迄今为止,用PD-0360324治疗展现出的最显著的治疗中出现的发现[treatment-emergent findings](肝酶水平升高)和AE(即,眶周水肿)与关于HuAB1获得的数据一致。
RG7155(抗二聚化CSF1R抗体)的临床研究包括具有弥漫型巨细胞肿瘤(Dt-GCT)的患者。所有7名可评估的患者在FDG-PET成像中显示出部分代谢应答(根据欧洲癌症研究与治疗组织),其中两名患者接近完全代谢应答。7名患者中有5名在第一次评估时继续达到了部分应答。与靶向CSF1R途径的其他药剂一样,眶周水肿是最常见的AE(Ries,2014)。
CSF1是TAM的主要存活因子,通过HuAB1靶向CSF1R将会降低TAM介导的免疫抑制,从而加强针对免疫治疗的抗肿瘤应答。通过HuAB1抑制CSF1R可能会限制TAM对肿瘤微环境的影响,也可以补充并改进当前的癌症疗法。
纳武单抗已经表现出跨若干肿瘤类型的临床活性,特别是对于黑素瘤和NSCLC,其已获FDA批准授权。纳武单抗也表现出可控的安全性。最常见的AE包括疲劳、皮疹、瘙痒、腹泻和恶心。
特异性CSF1R抑制剂的初步报告表明,HuAB1可能为实体瘤恶性肿瘤患者的有益治疗。与可控的安全性结合,纳武单抗在晚期黑素瘤、NSCLC和RCC患者中展现出的稳健的临床活性支持进一步开发适用于晚期癌症患者的这种治疗。
根据可用的临床安全性数据,HuAB1和纳武单抗的毒性没有重叠(明显例外之处是下面讨论的肝酶升高),因此,不能预期由于这种联合所致的累积毒性。HuAB1与眶周水肿有关,而关于纳武单抗只有一例外周水肿。另外,纳武单抗与免疫相关AE有关,迄今为止没有关于HuAB1的免疫相关AE。
由于Kupffer细胞减少,采用HuAB1的患者中的肝酶(CK、AST、ALT和LDH)有一过性的增加,这与肝脏、心肌或骨骼组织损害的任何组织病理学证据并不相关。已知纳武单抗引起肝毒性的频率较低。由于HuAB1和纳武单抗联合可能产生具有不同基础机制的肝酶升高,因此已经设计了风险应答指南,以便在本研究中快速检测和适当地响应于肝脏干扰的任何证据(附录E)。
对于癌症患者的医疗需要尚未满足。鉴于支持这两种分子的稳健的非临床和临床数据、非冗余的基于免疫的作用机制、以及来自多个临床研究的当前机体安全性数据,这两种药物的逻辑组合可能对需要扩大治疗选项的癌症患者是有益的。
2研究计划
2.1研宄设计和持续期间
本研究是一项1a期和1b期开放标签、多中心、剂量递增和剂量扩展研究,用于评估HuAB1作为单一疗法以及与纳武单抗的联合疗法在患有选定晚期癌症的患者中的安全性、耐受性、PK和PD。HuAB1是针对CSF1R的人源化单克隆抗体,纳武单抗是针对PD-1的全人单克隆抗体。对于研究的联合臂,将在每个14天治疗周期的第1天施用HuAB1和纳武单抗;首先经过30分钟予以纳武单抗IV输注,在2次输注之间休息30分钟,然后进行30分钟的HuAB1 IV输注。
该研究将包括1a期剂量递增和1b期剂量扩展。1a期由两个HuAB1单一疗法参考群组(1aM1和1aM2)和HuAB1与纳武单抗联合的三个剂量递增群组(1aC1、1aC2和1aC3)组成。1b期由六个癌症类型的八个群组(1b1到1b8)组成。患者将被纳入研究的1aM期、1aC期或1b期,但不能纳入两个期或全部三个期。研究示意图显示在图6中。
该研究将由3个时期组成,包括筛查(直到第28天)、治疗和随访/生存随访。
2.1.1筛查期
所有筛查评估必须由研究人员根据“研究参考手册”完成和评审注册过程,以确认患者在首次输注研究药物之前符合所有资格标准。在进行任何不被视为护理标准的研究特异的筛查测试或程序之前,必须获得参与本研究的书面知情同意书。除非另外规定,筛查评估将在第一个剂量的研究药物之前28天内进行。
在此期间,将收集在ICF签署之后并且在施用第一个研究药物剂量之前出现的研究程序相关的AE。
2.1.2治疗期
2.1.2.1 1a期单一疗法群组(1aM1和1aM2)和联合剂量递增群组(1aC1、1C2和1aC3)
1a期由两个HuAB1单一疗法参考群组和HuAB1与纳武单抗联合的三个剂量递增群组组成,每个群组至少纳入3名患者。1a期群组的计划剂量水平和时间表如下:
群组1aM1:2mg/kg HuAB1,每2周一次
群组1aM2:4mg/kg HuAB1,每2周一次
群组1aC1:1mg/kg HuAB1+3mg/kg纳武单抗,每2周一次
群组1aC2:2mg/kg HuAB1+3mg/kg纳武单抗,每2周一次
群组1aC3:4mg/kg HuAB1+3mg/kg纳武单抗,每2周一次
按照依次的注册顺序,首先同时开始2mg/kg HuAB1单一疗法群组(1aM1)和1mg/kgHuAB1+纳武单抗联合群组(1aC1),继之为从1aM1单一疗法群组开始的3+3设计。在28天的DLT期内,将治疗这些群组中的患者总共两个14天的治疗周期。
在2mg/kg HuAB1单一疗法群组(1aM1)中的DLT期通过之后,将启动4mg/kg HuAB1单一疗法群组(1aM2);只有在1aCl HuAB1/纳武单抗联合群组和1aM1 HuAB1单一疗法群组两者都通过DLT期之后,才能开始2mg/kg HuAB1/纳武单抗联合群组。只有在1aC2 HuAB1/纳武单抗联合群组和1aM2 HuAB1单一疗法群组中的DLT期通过之后,才能开始4mg/kg HuAB1/纳武单抗联合群组(1aC3)。根据4mg/kg HuAB1单一疗法群组的结果,按照群组审查委员会的决定,可以启动针对单一疗法和联合治疗的较高或较低的中间剂量群组(例如,单独的3mg/kg HuAB1或与纳武单抗联合)。所有剂量递增的决定均将以DLT、总体安全性和耐受性的评估为基础。剂量递增决定将由研究者与主办者商定。在起始每个新剂量水平或扩展现有剂量水平之前,将举行安全性电话会议,其中研究者和主办者将审查患者数据,包括但不限于人口统计学、药物剂量、伴随用药、血液学和血清化学和AE;并协商和记录下认为剂量递增或扩展现有剂量水平是适当的一致意见。如果在对安全性、PK和PD数据进行审查后,研究者和主办者集体认可应该使用与所规定的剂量的不同的剂量递增方案(例如,3mg/kg的中间HuAB1剂量,单独或与纳武单抗联合),这将得到允许。根据对安全性、PK和PD参数的审查得到的信息,可能作出这样的决定:增加具有替代剂量水平或剂量方案(例如,更低频率的给药)的群组以达到最佳目标暴露。
DLT评估和注册决定将遵循下表2中的指导:
表2-用于1a期剂量递增决定的算法
单一疗法组和联合治疗组的剂量递增将继续,直至达到HuAB1的MTD或最大计划剂量,其中每个群组中至少登录3名患者。
MTD被定义为在28天的DLT期间,在不到33%的接受HuAB1或HuAB1+纳武单抗联合治疗的患者(6名患者中不到2名)中与DLT相关的最高剂量。这通常是进行进一步研究的推荐剂量;然而,基于对安全性、PK和PD数据的审查,RD可能低于MTD。如果没有达到MTD,并且单独的或与纳武单抗联合的最高评估HuAB1剂量被良好耐受,则将审查数据以评定是否需要高达6mg/kg HuAB1的进一步的剂量递增。
如果在1a期联合剂量递增期间没有达到MTD,或者在已过关的1a期联合群组中的后续治疗周期提供了对安全性特征的进一步认识,则可以基于总体耐受性、安全性、PK和PD来选择RD。
如果1aC期患者未接受每种研究药物的2个剂量,并且由于药物相关AE之外的原因(例如,疾病进展或撤回同意)在第28天DLT期间未完成安全性评估(例如,安全性实验室和/或AE报告),则另外一名患者将被纳入该群组,使得该群组具有至少三名DLT期可评估的患者。所有这些讨论和决定将作为做出剂量递增决定过程的一部分予以记录。
一旦完成28天DLT期,1a期患者可按照4.1.2.2节的指南参与延长的治疗期。
2.1.2.1.1剂量限制性毒性
DLT定义为在第28天DLT期间出现的研究药物相关的≥3级的AE(使用美国国家癌症研究所[NCI]不良事件常见术语标准[CTCAE]v4.03),不包括:3级燃瘤(tumor flare)(定义为定位于已知或疑似肿瘤部位的局部疼痛、刺激或皮疹)、3级皮疹,在28天内减弱至1级或更低级别的3级免疫相关不良事件(irAE,下文定义)、或短暂的(在起始6小时之内消除)3级输液相关AE。irAE被定义为与研究药物暴露量相关的、病因不明的、并且与免疫介导机制一致的有临床意义的AE。
2.1.2.2 1a期延长治疗期
DLT期完成后,1aM期和1aC群组的患者可参与延长治疗期,在第3周期的第1天(第29个研究日)开始。
允许1aM期群组的患者以相同的HuAB1剂量水平继续接受HuAB1单一疗法,并且允许1aC期群组的患者以相同的剂量水平继续接受HuAB1与纳武单抗的联合,除非存在疾病进展、不可接受的毒性或治疗中止的其他原因。
2.1.2.3 1b期扩展群组
为了进一步表征HuAB1与纳武单抗联合的安全性和有效性,在1b期将至多登录6个晚期癌症类型的8个扩展群组。群组审查委员会根据总体安全性、耐受性、PK和PD数据确定了RD后,将开始1b期的登录。
2.1.3随访期
由于疾病进展之外的原因停止治疗而显示出临床益处(完全应答[CR]、部分应答[PR]或稳定[SD])的患者应该接受如下文规定的关于肿瘤评估和任何研究药物相关AE的随访。随访期从治疗完成/提早终止访视开始。
随访包括以下内容(关于完整的时间表,参考第6节):
继续肿瘤评估每12(±2)周一次。
审查研究药物相关的AE,直到根据治疗研究者的评估这些AE消除、回到基线或稳定时为止。将记录在最后一个剂量之后至少100天的所有AE,或直到满足上述任一条件时为止。
在整个随访期间,如果患者经历局部治疗(例如,切除术、放射治疗)或开始进行新的全身性治疗,则应每3个月随访一次患者的生存情况(第4.1.4节)。
2.1.4生存随访
对于在退出研究治疗后同意生存随访、由于疾病进展而停止研究药物治疗、或停止第4.1.3节所述的随访的患者,将对其每3个月一次或在需要的情况下更频繁地进行生存随访。生存随访可以通过电话来进行,而不需要亲自访问。
2.1.5研究持续时间
只要患者在研究者的观点看来经历了临床益处,或者,除非有在综合评估放射影像学检查数据、活组织检查结果(如果可用)、临床状态、或撤回同意之后由研究者确定的不可接受的毒性或归因于疾病进展的症状恶化,他们可以继续接受研究药物。
2.1.6停止规则
2.1.6.1 1a期停止规则
如果任何剂量水平的2名或更多名患者在28天DLT评估期内经历了DLT,研究者和主办者将审查数据并遵循表2(第4.1.2.1节)中的准则。如果剂量递增由于DLT而终止,那么调用停止规则之下的评估剂量将被宣布为MTD。
2.1.6.2所有群组的停止规则
4或5级药物相关毒性的管理将遵循不良事件管理表(附录E和F)。
主办者将与群组审查委员会和研究者酌情讨论此类情况,以确定进一步登录。研究者将通知IRB所有关于继续登录的情况和决定。
2.1.6.3针对临床恶化的停止规则
积累的临床证据表明,针对激活抗肿瘤免疫应答的药剂的客观应答的出现可能遵循数周或数月的延迟动力学,在其之前可能病情可能最初表现出进展,出现新病变或病变有一些扩大,同时某些指标病变在消退(“混合性反应”)。因此,允许经历明显进展的患者继续接受治疗,直到下一次成像评估证实进展为止(第5.3.8节)是合理的。这些考虑因素应该与下述临床判断权衡:患者是否在临床上恶化并且不太可能从继续治疗中获得任何益处。
上述的恶化在如下所述的临床事件之后将被评定为已经发生:根据研究者的意见,该临床事件可归因于疾病进展并且不太可能随着继续研究治疗而逆转,因此表明患者不再受益于研究治疗并且不能通过增加支持治疗加以管理。停止治疗的决定应该与主办者的医学监察员或指定人员讨论。在研究者的观点看来,可能指示缺乏临床益处的事件的例子包括但不限于下述者:
美国东部肿瘤协作组(ECOG)评分从基线增加至少2分(例如从0到2)。
习惯变化,如活动和症状的变化,包括食欲和/或睡眠减退、觉知改变、以及由于癌症导致的疼痛相关症状增加。
经治疗研究者确认的疾病进展。
任何这样的情境:在此情境下,即使没有任何此类记录的临床事件,启动新的抗肿瘤治疗也被认为是对患者有益的。
2.2研究群体
2.2.1计划的患者和研究中心的数目
本研究计划的患者总数估计为270人;在1a部分中的约30名患者和1b部分的240名患者(8个1b期群组中,每个群组约30名患者)。将有65至70个研究中心参加这项研究。在任何扩展群组的登录期间,如果观察到的应答数量使得该适应症的目标应答率(例如10%)不太可能达到,则可能暂停或终止该群组的进一步招募。
2.2.2关于所有群组的纳入标准
对于进入该研究,必须满足所有以下标准。
1.按照“实体瘤疗效反应的评价标准”(Response Evaluation Criteria inSolid Tumors)(RECIST)v1.1,疾病可通过计算机断层扫描(CT)/磁共振成像(MRI)测量,并且所述测量优选在第一个剂量后28天内进行。
2.患者必须有至少1个可以进行活检的肿瘤部位,并且愿意接受推荐的治疗前、治疗中和进展后活组织检查(胶质母细胞瘤群组中的患者例外);进展后活检对于1b期群组中的患者是任选的。根据治疗机构的自身准则对每个1b期群组中的至少10名患者进行活组织检查。
3.归档的***固定石蜡包埋(FFPE)的肿瘤材料(如果有的话)
4.在任何研究特异性评估之前了解并签署IRB/IEC批准的ICF
5.年龄≥18岁
6.0或1的ECOG体能状态
7.愿意并且能够遵守所有研究程序
8.预先病灶放射治疗必须在第一个剂量的研究药物施用之前至少2周完成。在研究药物施用之前前8周内没有放射性药物(锶、钐)。
9.需要全身麻醉的预先手术必须在研究药物施用之前至少2周完成。需要局部/硬膜外麻醉的手术必须在研究药物施用之前至少72小时完成,并且患者应当恢复。
10.筛查实验室值必须满足以下标准:
血液学
a.白细胞(WBC)≥2000个细胞/μL
b.中性粒细胞≥1500个细胞/μL
c.血小板≥100x 103/μL
d.血红蛋白≥9.0g/dL
血清肌酐≤1.5x ULN或肌酐清除率≥40mL/分(使用Cockcroft/Gault公式)
e.PT/INR≤1.5x ULN和PTT(aPTT)≤1.5x ULN
肝脏
a.AST或ALT≤3x ULN没有肝转移,和≤5x ULN,伴有肝转移
b.胆红素≤1.5x ULN(吉尔伯特综合征患者例外,其必须总胆红素<3mg/dL)
11.有生育能力的女性(WOCBP)在筛选时必须具有阴性血清β-人绒毛膜***(β-hCG),并且在治疗期(和在接受研究药物情况下的治疗/随访)期间之前至少28天、以及在任何研究药物的最后一个剂量之后至少23周同意使用可靠的避孕形式(例如口服避孕药、宫内节育器或避孕套和杀***剂双重屏障法)。将遵循具体的国家要求(例如,在英国,有生育能力的女性和男性患者及其有生育能力的伴侣在研究期间必须使用两种避孕方法,其中一种方法必须是屏障法)。
12.与WOCBP性生活活跃的男性必须同意在研究药物治疗持续时间以及治疗完成后31周遵循避孕方法的说明。
2.2.3关于所有群组的排除标准
满足以下任何标准的患者将被排除在研究入选之外。
1.当前的临床上显著的肌肉病症(如肌炎)或其病史、最近未痊愈的肌肉损伤、或任何已知会升高血清CK水平的病症
2.必须在研究药物施用之前至少2周停用免疫抑制剂量的全身用药,例如类固醇或局部吸收类固醇(剂量>10mg/天强的松或每日等效剂量),在肿瘤相关AE治疗的情况下例外。患有在治疗的2周之内需要用皮质类固醇(吸入或局部类固醇和剂量>10mg/天的强的松当量的肾上腺替代类固醇)或其他免疫抑制药物慢性全身性治疗的病症的患者在没有活动性自身免疫病的情况下是允许的。
3.具有NYHA>2级的心功能下降
4.未受控制或显著的心脏病,如不稳定型心绞痛
5.筛查时ECG显著异常。筛查时男性QTcF>450毫秒或女性QTcF>470毫秒
6.抗药物抗体史,以前对某种生物制剂的严重过敏、过敏或其他输液相关反应
7.已知的对含有吐温20(聚山梨醇酯20)和聚山梨酸酯80的输液的过敏史
8.经常食用非巴氏消毒牛奶,或已知有暴露于机会性细胞内感染如李斯特菌或其他类似病原体的重大风险
9.在研究药物施用的4周内用于预防感染性疾病的非肿瘤疫苗疗法(例如,HPV疫苗)。灭活的季节性流感疫苗可以在治疗前施用受试者,并且在治疗时不受限制。可以允许含有活病毒的流感疫苗或其他有临床指征的感染性疾病(即,肺炎、水痘等)的疫苗接种;但必须与主办者的医学监察员讨论,并可能需要在疫苗施用之前和之后执行研究药物清除期。
10.当前未消除的感染或慢性、活动性、临床上显著的感染(病毒、细菌、真菌或其他)病史,根据研究者的意见,上述情况会妨碍患者暴露于生物制剂、或对患者安全性构成风险
11.筛查时潜伏性结核病(TB)阳性试验(Quantiferon试验)或活动性TB证据
12.缺乏外周静脉通路或任何会干扰药物施用或研究样品采集的状况
13.任何根据研究者的意见会对患者安全性构成风险、或干扰研究参与或个体患者结果的解释的未受控制的医学病症或精神障碍
14.在研究的同时使用他汀类药物。然而,在研究药物施用之前使用他汀类药物超过3个月并且没有CK升高的稳定状态的患者可以允许登录
15.怀孕或哺乳
16.已知的、活动的、或疑似的自身免疫病。患者具有I型糖尿病、只需要激素替代的甲状腺功能减退、不需要全身治疗的皮肤病(如白癜风、银屑病或脱发)、或在没有外部触发因素的情况下预期不会复发的病症的,允许登录。
17.在第一个剂量的研究药物施用之前28天内或在本研究的同时参与另一项研究性药物试验
18.已知的人类免疫缺陷病毒(HIV)1和2阳性检出史或已知的获得性免疫缺陷综合征(AIDS)
19.乙型肝炎病毒表面抗原(HBsAg)试验阳性或指示急性或慢性感染的可检出的丙型肝炎病毒核糖核酸(HCV RNA)
20.症状性间质性肺病或炎症性肺炎
21.未治疗的或活动性的中枢神经***(CNS)或柔脑膜转移。如果转移已经得到治疗并且患者在第一个剂量的研究药物施用之前至少2周在神经学上返回到基线(除了与CNS治疗相关的残留体征或症状之外),则患者是适格的
22.有肝硬化的证据,通过碱性磷酸酶升高得以证实,伴随ALT/AST比例升高和低白蛋白血症(<3.0g/dL)
23.有凝血病或出血素质的证据
24.任何未受控制的炎性胃肠疾病,包括克罗恩病和溃疡性结肠炎。
25.事先暴露于任何CSF1R通路抑制剂
26.在第一个剂量的研究药物施用之前72小时内完成的输血
2.2.4关于选定群组的附加纳入和排除标准
2.2.4.1 1a期
2.2.4.1.1 HuAB1单一疗法群组
纳入:
1.组织学或细胞学证实的实体瘤,系局部复发的或转移的,并且在标准治疗后进展或不适合标准治疗
2.2.4.1.2 HuAB1+ 纳武单抗联合群组
纳入:
1.组织学或细胞学证实的实体瘤,系局部复发的或转移的,并且在标准治疗后进展或不适合标准治疗
排除
1.事先暴露于任何PD-1途径靶向药
2.2.4.2 1b期
2.2.4.2.1群组1b1:NSCLC(未经抗PD-1治疗的、第二或第三线的)
纳入:
1.患有组织学或细胞学证实的鳞状或非鳞状NSCLC的患者,其呈现出IIIB期或IV期疾病(根据国际肺癌研究协会胸部肿瘤分期手册第7版)并且呈现出在局部晚期或转移性疾病的多重模式治疗(放射治疗、手术切除或根治性放化疗)后的复发或进展性疾病
2.在晚期或转移性疾病的基于双铂药物的化疗方案期间/之后疾病进展或复发。
·基于双铂药物的化疗后的维持治疗不视为单独的治疗方案。
·接受针对局部晚期疾病施用的含铂辅助药物、新辅助疗法或根治性放化疗,并在完成治疗后6个月内产生复发(局部或转移)疾病的受试者是合格的。
·在针对局部晚期疾病施用的含铂辅助药物、新辅助疗法或根治性放化疗之后具有复发性疾病>6个月,随后也在针对治疗所述复发施用的基于双铂的方案期间或之后进展的受试者是适格的。
排除:
1.事先暴露于任何PD-1途径靶向药
2.2.4.2.2群组1b2:NSCLC(抗PD-1靶向药难治性的)
纳入
1.患者患有组织学或细胞学证实的NSCLC,呈现IIIB期局部晚期或IV期疾病。
2.患者用PD-1途径靶向药治疗未产生临床应答(即,既无CR也无PR),最好的应答是进行性疾病,在治疗期间患者有疾病进展的放射学证据。
3.患者应当在接受至少2个剂量的任何PD-1靶向药之后没有临床应答,方可被视为难治的。
排除
1.对任何PD-1途径靶向药不耐受
不耐受定义为:任何治疗相关的4级AE,或者任何患者不能接受并且尽管采取了标准对应措施仍然持续的治疗相关的2级或3级AE。
2.2.4.2.3群组1b3黑素瘤(未经历过抗PD-1治疗的)
纳入
1.具有根据美国癌症联合委员会(AJCC)分期***的组织学或细胞学证实的III期或IV期黑素瘤的患者,这些患者对于治疗转移性黑素瘤的标准治疗是难治性的、不耐受的或已经拒绝。
2.在用至少1种BRAF抑制剂(如果是BRAF V600突变阳性的话)期间或之后疾病进展的客观证据(临床或放射学)
3.根据当地区域接受的V600突变状态测试知晓为BRAF野生型
排除
1.用任何PD-1途径靶向药预先治疗
2.BRAF突变体受试者和BRAF状态不确定或未知的受试者不允许参与本研究
2.2.4.2.4群组1b4:黑素瘤(抗PD-1靶向药难治性的或复发的)
纳入:
1.患者具有根据AJCC分期***的组织学或细胞学证实的不能切除的III期或IV期黑素瘤。
2.患者用检查点抑制剂或PD-1靶向药治疗未产生临床益处(无CR、PR、或SD)并且最好的应答是进行性疾病,且在治疗期间有疾病进展的放射学证据;或者患者在接受用PD-1靶向药治疗时,最先有CR、PR或SD的临床益处,之后有疾病进展
3.患者应当在接受至少2个剂量的任何PD-1靶向药之后没有应答,方可视为难治性的。
4.2.在用至少1种BRAF抑制剂(如果是BRAF V600突变阳性的话)期间或之后疾病进展的客观证据(临床或放射学)
5.包括达卡巴嗪、BRAF抑制剂(如果BRAF V600突变未阳性的话)和/或伊匹单抗和姑息性放疗在内的在先抗癌疗法必须已在研究药物施用之前至少3周完成
6.在第一个剂量的研究药物之前6周内,没有用PD-1靶向药进行在先治疗
排除:
1.BRAF突变体受试者和BRAF状态不确定或未知的受试者不允许参与本研究
2.眼黑素瘤.
3.先前对任何PD-1途径靶向药不耐受
不耐受定义为:任何治疗相关的4级AE,或者任何患者不能接受并且尽管采取了标准对应措施仍然持续的治疗相关的2级或3级AE。应该充分记载不耐受的原因。
2.2.4.2.5群组1b5:头颈部鳞状细胞癌(SCCHN)(二线)
纳入:
1.具有组织学或细胞学证据的复发性或转移性SCCHN(口腔、咽、喉)III期或IV期,并且不适用于具有治愈意图的局部治疗(结合或不结合化学治疗的手术或放射治疗)
2.在辅助治疗(即手术后放射)、主要治疗(即放射)、复发、或转移情境下,在最后一个剂量的铂类治疗的6个月内具有病情进展或复发。铂治疗后的临床进展对于入选是容许的事件,其被定义为下述病变的进展:尺寸至少为10mm的适合于卡尺测量(例如,根据RECIST v1.1的浅表皮肤病变)的病变,或者已经被可视化且具有带度量的照相记录、并显示已经进展的病变。
排除:
1.组织学证实的鼻咽和任何唾液腺的复发或转移性癌或非鳞状组织学
2.事先暴露于任何PD-1途径靶向药
2.2.4.2.6群组1b6:胰腺癌(二线)
纳入:
1.组织学或细胞学证实的胰腺的局部或转移性腺癌,对其的标准治疗已经失败(或没有指征)
2.可能已经接受过在先手术、用于胰腺局部晚期或转移性腺癌管理的放射治疗的患者,条件是已经记录到疾病进展。所有的毒性作用都应当消退,并且放射治疗的最后一个部分应在首次研究药物施用之前至少4周完成
排除:
1.患有胰岛细胞肿瘤、神经内分泌肿瘤或胰腺中的其他原发性肿瘤的患者
2.患有活动性胰腺炎的患者
3.事先暴露于任何PD-1途径靶向药
4.2级以上腹水
2.2.4.2.7群组1b7:结肠直肠癌(三线)
纳入:
1.组织学或细胞学证实的结肠或直肠的腺癌
2.转移性CRC,在最后一次施用标准疗法之后有已证实的疾病进展;或对标准疗法不耐受(批准的疗法必须包括氟嘧啶、奥沙利铂、伊立替康、贝伐单抗、以及在KRAS野生型情况下的西妥昔单抗或帕尼单抗)。
排除:
1.事先暴露于任何PD-1途径靶向药
2.2.4.2.8群组1b8:恶性胶质瘤(首次复发)
纳入:
1.组织学或细胞学证实的世界卫生组织(WHO)晚期IV级恶性胶质瘤(胶质母细胞瘤或神经胶质肉瘤)
2.以前用手术、放射治疗和替莫唑胺治疗
3.按照“神经肿瘤反应评价”(RANO)标准GBM的首次复发,通过在首次研究药物施用21天内进行的诊断性活检或对比增强MRI证实。
4.如果在使用类固醇,必须在基线MRI之前5天内使剂量稳定或降低
排除:
1.预先用贝伐单抗或另一种VEGF或VEGFR靶向剂治疗
2.通过基线MRI扫描有超过1级CNS出血的最近证据
3.通过生理/神经学检查有与癌症无关的CNS疾病(例如癫痫发作)的历史或证据,除非通过用药充分控制或可能干扰研究治疗
4.患者由于包括起搏器或植入式心律转复除颤器(ICD)装置在内的预先存在的医疗状况而不能进行对比增强的头部MRI
5.胶质母细胞瘤或神经胶质肉瘤超过1次复发
6.事先暴露于任何PD-1途径靶向药
2.3伴随用药
在第一个剂量的任何研究药物施用之前28天内服用的所有药物,以及在研究全程中直到任何研究药物的最后一个剂量之后的100天为止施用的所有伴随治疗都将予以记载。
将收集为晚期癌症指征的所有先前治疗的信息,包括化学治疗、生物化学治疗、免疫治疗、放射治疗、手术、生物学和实验治疗。
在患者中止研究之后,不会采集伴随用药信息,与研究药物相关AE或导致退出研究的AE关联的伴随用药除外。
2.3.1禁止和/或限制的治疗
在研究期间禁止以下药物(除非用于处理药物相关AE或在适格性部分中规定):
免疫抑制剂
免疫抑制剂量的全身性皮质类固醇。吸入或局部类固醇,以及剂量>10mg/天的强的松当量的肾上腺替代类固醇在没有活动性自身免疫病的情况下是允许的。也允许使用类固醇治疗有临床指征的肿瘤相关AE。
除了在4.3.2节中所记载之外的疫苗
用于治疗高胆固醇血症的他汀类药物。只有当患者在研究之前使用稳定剂量持续3个月并且处于没有任何CK升高的稳定状态时,才允许使用他汀类药物
包括生物治疗、免疫治疗、广泛的非姑息性放射治疗、标准治疗或研究药物或装置在内的其他疗法
2.3.2允许的治疗
允许患者使用局部、眼部、关节内、鼻内和吸入的皮质类固醇(具有最小的全身吸收)。剂量>10mg/天的强的松的肾上腺替代类固醇是允许的。用于预防(例如,对比染料过敏)或用于治疗非自身免疫病(例如,由接触性变应原引起的延迟型超敏反应)、以及用于***相关AE的短疗程(少于3周)的皮质类固醇是允许的。
针对疾病相关症状的伴随姑息性和支持性治疗(包括双膦酸盐和RANK-L抑制剂),如果是在第一次研究药物施用之前启动的,则是允许的。根据需要允许输血。
灭活的季节性流感疫苗可以在治疗过程中给予受试者而不受限制。含有活病毒的流感疫苗或其他有临床指征的感染性疾病(即,肺炎、水痘等)的疫苗接种可以允许;但必须与主办者的医学监察员讨论,并可能需要在疫苗施用之前和之后执行研究药物清除期。
只有当患者在研究之前已使用稳定剂量持续3个月并且处于没有任何CK升高的稳定状态时,才允许伴随使用他汀类药物。
对初始的HuAB1和纳武单抗剂量不实施常规的前驱给药。如果患者出现恶心、呕吐或其他输液相关AE,则可能随后由研究者自行判断输注研究药物之前预先施用患者止吐剂、类固醇或抗组胺药。治疗将依照机构的标准实践来施用,并应记录在患者的CRF上。
2.4用研究药物进行任何治疗后患者停药
患者由于任何以下原因必须中止研究药物:
撤回知情同意书(患者由于任何原因而决定撤回)
根据研究者的意见,任何临床上显著的AE、异常实验室检查结果或并发疾病表明继续参与研究并不符合患者的最佳利益
患者需要使用被禁止的伴随用药
妊娠
主办者终止研究
为了治疗精神病或身体疾病(例如,传染病)被关押或非自愿监禁从而丧失自由提供同意的能力
在接受积极的研究治疗的同时证实疾病进展或临床恶化
患者不依从
所有停止研究治疗的患者均应遵守第6节中概述的方案规定的随访程序。这种要求的唯一例外是,当患者撤回对所有研究程序的同意或丧失自由同意的能力(即,为了治疗精神病或身体疾病被关押或非自愿监禁)时。
如果患者在完成研究之前退出,则必须在适当的CRF上输入撤回的原因。停止HuAB1和/或纳武单抗的日期和原因将被记录在案,研究者必须尽一切努力执行治疗完成/提早终止访视程序。在最后一个剂量的HuAB1之后,随访患者100天以检查安全性,并且随访正在发生的SAE的患者,直到SAE消除或稳定时为止。
2.5治疗后随访
在仍然收获临床益处(即,CR、PR或SD)的情况下停止治疗的患者应按照方案进行随访肿瘤扫描,以确定应答持续时间,除非撤回同意。
3研究药物
在这项研究中,两种研究药物HuAB1和纳武单抗都视为研究性的[药用的]产品(IP/IMP)。HuAB1和纳武单抗的产品描述记载于表3和表4:
3.1研究产品
研究产品,在某些地区也称为研究性药物产品,被定义为在临床研究中被测试或用作参考的活性物质或安慰剂的药物形式,包括已经具有上市授权但以不同于授权形式的方式使用或组装(配制或包装)、或用于未得到授权的适应证、或在为了获得有关授权形式的进一步信息时使用的产品。在本规程中,研究产品为HuAB1和纳武单抗。
3.2研究药物施用和剂量修改
3.2.1.给药
对于联合治疗,纳武单抗应始终首先以30分钟IV输注施用,在2次输注之间休息30分钟,然后输注HuAB1 30分钟。可以按照距离前一次剂量不少于12天的间隔向患者给药。
对于4mg/kg单一疗法群组(1aM2)和联合剂量递增群组1aC2和1aC3,每个群组中的第一和第二名患者之间的剂量间隔应至少为24小时,以便监测安全性。
剂量计算应该以在第一个剂量的研究药物施用之前的第1周期第1天时评估的体重为基础。如果患者的体重变化在用于计算前一剂量的体重的10%以内,则不必重新计算后续剂量。所有剂量应四舍五入到最接近的毫克数。
在研究药物施用期间,应仔细监测患者的输液反应。如果观察到急性输液反应,应按照5.3.10节和附录E和F中的指南管理患者。
研究药物的剂量可能会中断、延迟或停药,这取决于患者耐受治疗的程度。
所有小瓶仅供单次使用。有关研究药物制备和施用的进一步说明将在“药学手册”中提供。
3.2.1.1纳武单抗给药
在每个14天治疗周期的第1天,联合治疗群组中的患者首先接受3mg/kg剂量的纳武单抗输注,为30分钟的IV输注。
不允许纳武单抗的剂量递增或降低。可以按照距离前一次剂量不少于12天的间隔向患者施用。在第一个周期,没有推荐的纳武单抗的前驱给药。准备和操作说明请参考纳武单抗IB。
3.2.1.2 HuAB1给药
对于联合治疗群组中的患者,在每个14天治疗周期的第1天,在纳武单抗输注结束之后30分钟施用HuAB1输注,HuAB1输注为30分钟的IV输注。对于单一疗法群组中的患者,在每个14天治疗周期的第1天,可以在任何时间启动HuAB1输注,HuAB1输注为30分钟的IV输注。
根据在治疗期期间观察到的毒性,可以修改HuAB1施用。如果必要,将根据毒性修改表(附录E和F)调整剂量。
研究药剂师(或其他负责人员)将准备用于给药的溶液。在计算小瓶数后,根据患者的体重,将用0.9%氯化钠注射液(USP)稀释研究药物产品。配制好的HuAB1应在配制后6小时内施用(环境温度)。用于HuAB1输注的IV施用装置必须装有0.22μm的串联过滤器或0.22μm的针筒过滤器。将在医学监督下通过外周静脉或中心静脉导管以30分钟(±5分钟)IV输注的方式施用HuAB1。尚未观察到HuAB1输液与聚氯乙烯(PVC)、乙烯/丙烯IV组分或玻璃瓶之间的不相容性。
3.2.2 HuAB1和纳武单抗的剂量延迟
单一疗法中的HuAB1或联合治疗中的HuAB1/纳武单抗的施用由于下列原因应该延迟:
任何3级疲劳,在下次治疗随访之前无法缓解到1级或基线的
任何2级或3级药物相关实验室异常不需要剂量延迟,除非有临床指征或者在规程或不良事件管理表中有规定。请根据需要与主办者的医医学监察员或指定人员进行讨论。
针对所有其他AE的剂量延迟或修改,请参阅附录E中的AE管理表。
需要HuAB1或HuAB1+纳武单抗的剂量延迟的患者应当每周(或者更频繁地,如果临床上有指征的话)重新评估,当满足再治疗标准时恢复研究药物施用。
如果患者对HuAB1或纳武单抗或这两种研究药物有输液反应,则应按照5.3.10节和附录E和F中的输液反应治疗指南对输液反应进行治疗。
3.2.3恢复HuAB1和纳武单抗治疗的标准
当药物相关AE减弱到≤1级或基线时,患者可以恢复HuAB1或HuAB1+纳武单抗治疗,如附录E和F中的AE管理表所示。
3.2.4关于HuAB1的剂量降低
按照附录E和F中适当的AE管理表中的指南,对于延长治疗超过Ia期中的DLT期的患者或1b期中的任何患者,可以允许HuAB1剂量降低。如果研究者正在考虑未落入这些指南的范围内的剂量降低或中断,则这些剂量降低或中断将需要由主办者或指定人员进行讨论和批准。
3.2.5关于HuAB1和纳武单抗的剂量停止标准
单一疗法中的HuAB1或HuAB1与纳武单抗联合的治疗由于下列原因应该永久停止:
任何2级药物相关葡萄膜炎、眼痛或视力模糊,对局部治疗无反应并且在第二次再治疗期间未改善至1级或需要全身治疗的
任何需要停药和重新开始治疗的3级或以上输液相关反应和超敏反应将需要咨询主办者的医学监察员或指定人员。
任何持续>7天的3级非皮肤药物相关AE,包括药物相关葡萄膜炎、肺炎、缺氧、支气管痉挛和内分泌病,下列情况例外:
仅用生理激素替代就能充分控制的3级药物相关内分泌病不需要停药
3级药物相关实验室异常不需要停止治疗,例外情况是:
>7天的或者与≥2级出血相关联的3级药物相关性血小板减少需要停药
任何满足下列标准的药物相关肝功能试验(LFT)异常都要求停药:
AST或ALT 10x ULN
总胆红素>3x ULN(>5x ULN,伴有并发肝转移)
在没有碱性磷酸酶并发增加的情况下AST或ALT>3x ULN以及总胆红素>2x ULN
任何4级药物相关AE或实验室异常,除了下列不需要停药的事件外:
7天的4级中性粒细胞减少
7天的4级淋巴细胞减少或白细胞减少
与胰腺炎的症状或临床表现无关的孤立的4级淀粉酶或脂肪酶异常。关于4级淀粉酶或脂肪酶异常应该咨询主办者的医学监察员。
与临床后遗症无关的并在其发病后72小时内通过补充/适当的管理加以纠正的孤立的4级电解质失衡/异常
四级药物相关内分泌病AE,如肾上腺功能不全、促肾上腺皮质激素(ACTH)缺乏、甲状腺功能亢进或甲状腺功能减退或葡萄糖耐量不良,其分别通过生理激素替代(皮质类固醇、甲状腺激素)或葡萄糖控制剂得以消除或充分控制,经过主办者的医学监察员的讨论和批准后,可能不需要停药。
任何导致由于前一次剂量所致的持续>6周的施用延迟的事件都需要停药,下列情况例外:
考虑到延长的类固醇逐渐减量(taper)来管理药物相关不良事件的施用延迟是允许的。在由于前一次剂量所致的持续>6周的施用延迟的患者中重新开始治疗之前,必须咨询主办者的医学监察员。即使施用延迟,也应按照方案继续进行肿瘤评估。为了评估安全性的定期研究随访和实验室研究也应该按照方案继续进行,或者如果在这样的给药延迟期间有临床指征更加频繁地进行,或者按照研究者的裁量继续进行
如果主办者的医学监察员予以批准,可以允许针对非药物相关原因而发生的由于前一次剂量所致的的持续>6周的施用延迟。在持续>6周的施用延迟的患者中重新开始治疗之前,必须咨询主办者的医学监察员。即使施用延迟,也应按照方案每8周一次继续进行肿瘤评估。为了评估安全性的定期研究随访和实验室研究也应该按照方案、或者如果在这样的施用延迟期间有临床指征就更加频繁地、或者按照研究者的决定继续进行。
根据研究者的判断,对持续HuAB1和/或纳武单抗施用的患者呈现出重大临床风险的任何AE、实验室异常或并发疾病
任何3级或以上的神经毒性
任何3级或以上的眶周水肿和需要漏用2次剂量的持续性2级眶周水肿,除非经主办者的医学监察员批准
任何3级或以上的药物相关腹泻或结肠炎,干扰日常生活活动。
任何3级或4级皮肤毒性
任何3级或以上的葡萄膜炎
如果需要停药的不良事件的原因被证实是由于联合治疗中的一种研究药物所致,在以下情景下可以按照方案继续使用另一种药物:
根据治疗修改表及时消除不良事件
根据研究者的评估,受试者显示出临床益处
3.2.6 HuAB1和纳武单抗的输注延迟和漏用剂量
不能在预定访视时施用输注的情况下,必须尽可能早地施用。如果延迟1到3天,则应当进行最初预定访视的程序。如果延迟超过3天,则应进行下一次访视的程序,后续访视将重新设置为遵循2周施用间隔(最初预定访视时的输注将被视为漏用剂量)。两个治疗周期之间的时间应该不少于12天。
患者可以漏用至多2个连续剂量(剂量间隔至多6周),如果在治疗中断后6周内事件恢复到基线或≤1级,可以恢复研究药物。如果由于AE额外遗漏给药超过6周,则患者必须中断研究,除非得到主办者允许。在参加研究过程中,患者可能会遗漏剂量,包括由于预定假期或根据需要的其他个人原因的遗漏剂量,但不得连续超过2个剂量,除非得到主办者的医学监察员的批准。
3.2.7 HuAB1和纳武单抗的患者内剂量递增
不允许纳武单抗或HuAB1的患者内剂量递增。
3.2.8关于HuAB1和纳武单抗的超越疾病进展的治疗
累积的证据表明,少数接受免疫治疗的患者尽管最初有进行性疾病的证据,仍可以获得临床益处(Wolchok,2009)
用HuAB1和纳武单抗治疗的患者根据研究者的评估最初发生RECIST v1.1定义的进行性疾病之后,只要满足以下标准,将被允许继续HuAB1和纳武单抗治疗:
要进行在疾病进展后治疗的患者必须在继续接受研究药物之前审阅并签署ICF
由研究者评估临床益处,并且不得有迅速疾病进展
对研究药物耐受
体能状态稳定
进展后治疗不会延误为防止严重的疾病进展并发症(例如CNS转移)而即将进行的干预,
在最初的研究者评估的进展之后约8周,应该进行放射影像学评估/扫描,以确定肿瘤大小是否有减小或继续的进行性疾病。临床益处的评估应该与关于患者是否在临床上恶化并且不太可能从用HuAB1和纳武单抗继续治疗中获得任何益处的临床判断相权衡。
如果研究者认为HuAB1和纳武单抗患者通过继续治疗而继续获得临床益处,则患者应继续进行试验,并按照方案规程的时间和事件进度继续接受监测。
对于在进展后继续纳武单抗研究治疗的患者,“进一步的进展”定义为从初始进展时间起肿瘤负荷另外增加10%。这包括所有目标病变的直径总和和/或新的可测量病变的直径与初始进展时间相比的增加。一旦记录进一步的进展,HuAB1和纳武单抗治疗应该永久停止。
对新病变的评估将遵循RECIST v1.1中的指南(附录G)。
3.2.9免疫-肿瘤学药物的剂量修改算法
与其他治疗类别引起的AE相比,与免疫-肿瘤学药物相关联的AE在严重程度和持续时间上可能有所不同。在本方案中,HuAB1和纳武单抗视为免疫-肿瘤学药物。早期识别和管理与免疫-肿瘤学药物相关联的AE的可以减轻严重毒性。已经开发了管理算法来协助研究者评定和管理以下类别的AE:
胃肠道
肾
肺
肝
内分泌病
皮肤
神经
输液反应
眶周水肿
葡萄膜炎
3.2.10 HuAB1和纳武单抗相关输液反应的治疗
HuAB1和纳武单抗可诱发输液反应或超敏反应。如果发生这样的反应,可以表现为发热、恶寒、寒颤、头痛、皮疹、瘙痒、关节痛、低血压或高血压、支气管痉挛或其他症状。
输液反应应根据CTCAE v4.03指南进行分级。任何3级或4级输液反应均应在24小时内向医学监察员报告,并在满足标准的情况下作为SAE报告。
首先施用纳武单抗输注,在2次输注之间休息30分钟,然后输注HuAB130分钟。可能不清楚输液反应是由于HuAB1还是纳武单抗引起,抑或由于这两种研究药物引起。因此,下面提供了一组治疗建议(基于由任一研究药物引起的输液反应的最保守的治疗),并且可以根据临床判断、局部治疗标准和指南和/或具体症状酌情进行修改:
关于1级症状:(轻度反应[例如,局部皮肤反应,包括轻度瘙痒、潮红、皮疹],需要降低输注速度;可能需要干预。)
降低研究药物输注的速度,直到恢复为没有症状为止。
留在床边并监测患者的生命体征,直到症状消除为止。可由治疗医师决定施用苯海拉明50mg。
当症状消除时,以原来的输注速度重新开始输注。
如果患者具有纳武单抗输液反应,若输液反应在3小时内消除,则可以施用HuAB1(无需预防药物)。为了进度安排,可以在第二天施用HuAB1输注。在所有后续纳武单抗输注之前,应施用预防性的输注前用药。
如果患者具有HuAB1输液反应,在所有后续的HuAB1和纳武单抗输注之前,应施用预防性的输注前用药。
在未来输注HuAB1和纳武单抗之前,推荐使用以下预防性的输注前用药:在另外的研究药物施用之前至少30分钟施用苯海拉明50mg(或等效物)和/或扑热息痛(对乙酰氨基酚)325至1000mg。
关于2级症状:(中度反应[即,上面列出的任何症状(轻度症状)或以下(严重症状),如全身性瘙痒、潮红、皮疹、呼吸困难、收缩压>80mmHg的低血压],需要中断输液,但迅速响应于对症治疗[例如,抗组胺药、非甾体抗炎药、麻醉剂、皮质类固醇、IV液];有≤24小时的预防性的输注前用药指征。)
中断研究药物输注。
开始静脉输注生理盐水,用苯海拉明50mg IV(或等效物)和/或扑热息痛(对乙酰氨基酚)325至1000mg治疗患者。
留在床边并监测患者的生命体征,直到症状消除为止。可由治疗医师决定施用皮质类固醇治疗。
当症状消除时,以原来输注输注的50%重新开始输注;如果在30分钟后没有进一步的并发症发生,则可以将速度增加到原来输注速度的100%。
密切监测患者。如果症状复发,立即停止输注;此次访视不再施用研究药物。施用苯海拉明50mg IV,并留在床边监测患者,直到症状消除为止。
如果患者具有纳武单抗输注引起的输液反应,若输液反应在3小时内消除,则可以施用HuAB1输注(无需预防药物)。为了进度安排的目的,可以在第二天施用HuAB1输注。在所有后续纳武单抗输注之前,应施用预防性的输注前用药。
如果患者具有HuAB1输液反应,在所有后续的HuAB1和纳武单抗输注之前,应施用预防性的输注前用药。
在未来输注HuAB1和纳武单抗之前,推荐使用以下预防性的输注前用药:应该在另外的研究药物施用之前至少30分钟施用苯海拉明50mg(或等效物)和/或扑热息痛(对乙酰氨基酚)325至1000mg。如果需要,可以使用皮质类固醇(高达25mg的氢化可的松琥珀酸钠(SoluCortef)或等效物)。
必须记录研究药物的输注量。
关于3级或4级症状:(支气管痉挛、全身性荨麻疹、收缩压<80mmHg或血管性水肿等严重反应;3级症状,包括需要6个小时或更多的时间才能响应于对症用药和/或停止输注的延长的症状;最初改善之后症状复发;有住院治疗指征的其他临床后遗症,如肾功能损害、肺部浸润;4级:威胁生命;有加压或通气支持的指征。)
立即停止研究药物输注。不再施用研究药物。必须将研究药物的输注量记录在CRF上。
开始静脉输注生理盐水,并按如下方式治疗患者:如果需要,推荐支气管扩张剂肾上腺素0.2至1.0mg(1∶1,000溶液用于皮下施用)或0.1至0.25mg缓慢注射(1∶10,000溶液用于IV施用)、和/或苯海拉明50mg Iv与甲泼尼龙100mg IV(或等效物)。
留在床边并监测患者的生命体征,直到恢复为没有症状为止。
应该监测患者,直到研究者相信症状不会再发生为止。
研究者应遵循他们制定的治疗过敏反应的指南。
在迟发型超敏反应症状(例如,治疗后1周内出现局部或全身性瘙痒)的情况下,可以施用对症治疗(例如口服抗组胺药或皮质类固醇)。
3.3指定患者标识的方法
患者必须能够提供书面的知情同意书并满足所有资格标准。主办方或其指定人员不会免除任何参加研究的患者的纳入或排除标准。在登录患者之前,必须满足所有资格标准。
对于本研究1a期合格的患者将登录如下:
在1aM1期单一疗法群组中的三名患者将被首先登录为:在28天DLT期间每14天一次接受2mg/kg HuAB1治疗。
一旦上述单一疗法群组完全登录,即登录一个具有3名新患者的群组(1aC1):在28天的DLT期间每14天一次接受1mg/kg HuAB1联合3mg/kg纳武单抗的治疗。
一旦2mg/kg HuAB1单一治疗群组(1aM1)中的DLT期通过,即进行剂量递增到4mg/kg HuAB1单一治疗群组(1aM2)。
经参与研究者和主办者的医学监察员讨论并达成一致之后,继续剂量递增到更高的HuAB1与纳武单抗联合的剂量水平,直到在HuAB1单一治疗群组中或HuAB1与纳武单抗联合的群组中观察到DLT时为止。
在1b期,每个群组将登录约30名患者。登录将对所有群组平行开放,并将持续到达到登录目标为止。一旦群组满员,进一步的登录将局限于尚未满员的群组。在该研究的1b期组中,总共将登录约240名患者。
如果不合资格的发现被认为是错误,或者急性发现(acute finding)可能会在重复测试时满足资格标准,研究者可以在登录之前重复进行为了取得资格的实验室检查和生命体征/ECG。
3.4设盲/揭盲
这是一项开放标签的研究,在本研究期间不存在患者的设盲或揭盲。
4研究评估和程序
4.1评估计划
评估计划表以附录A、B和C的形式附随于本规程。
4.2各次访视的研究程序
4.2.11a期单一疗法
4.2.1.1筛选期(第-28天到第0天)
完全同意参与研究的患者将在施用第一次输注HuAB1之前28天(4周)内进行筛选评估(除非另外说明)。为了确定患者是否满足所有纳入标准,并且不违反任何排除标准,将执行以下程序(附录A):
必须在任何研究特异性程序之前收集书面签署的知情同意书
完整的医学史和病史
人口统计学和基线特征
完整的体格检查,包括身高和体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温)
ECOG体能状态评估
筛选实验室(如附录A中所述,脚注g)
临床安全性实验室(如附录A中所述,脚注h)
12导联心电图(筛选时并且如果在研究期间有临床指征时需要)
放射成像:在第一次输注HuAB1之前28天内进行CT/MRI。如果MRI在第一次研究输注后的28天内作为患者护理标准的一部分进行,若结果的文档资料已经提供并且对于评估足够,则不需要重复MRI。
血清妊娠试验(β-hCG),针对有生育能力的女性
活检采集(用于附录D中所述的分析)
SAE报告(如果适用)
记录在先和同时用药
4.2.1.2第1周期,第1天
将执行下列程序:
HuAB1输注之前(在≤72小时内,除非另外说明):
资格验证
更新医学史和病史,以收集来自筛选的任何变化
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室检验(如附录A脚注h中所述);结果必须在给药前审查)
血清β-hCG(由当地实验室评估)将在第一个剂量的HuAB1之前进行,只针对有生育能力的女性
采血以获得:
血清(用于附录D中所述的分析,纳武单抗分析除外)
全血(用于附录D中所述的分析)
冷冻PBMC(用于T细胞表型分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
研究药物施用:HuAB1,经过30分钟IV输注
HuAB1施用后
在IV输注完成后的以下时间点的施用后生命体征(仰卧位休息5分钟后的心率、血压、体温):
5分钟、15分钟、30分钟和1小时
施用后15分钟(±5分钟):
采血以获得血清(用于HuAB1PK)
施用后4小时(±60分钟):
采血以获得血清(用于HuAB1 PK)
4.2.1.3第1周期,第2天
研究患者将在第2天返回研究中心进行24小时(±6小时)的施用后评估。本次访视期间将不施用治疗,但将完成下列评估:
采血以获得:
血清(用于HuAB1 PK和细胞因子多重平板)
全血(用于基因表达分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.1.4第1周期,第4天
研究患者将在第4天返回研究中心进行72小时(±12小时)的施用后评估。本次访视期间将不施用治疗,但将完成下列评估:
采血
血清(用于HuAB1 PK)
全血(用于CD14+/CD16+单核细胞和基因表达分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.1.5第1周期,第8天
研究患者将在第8天返回研究中心进行168小时(±24小时)的施用后评估。本次访视期间将不施用治疗,但将完成下列评估:
体格检查
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温)
临床安全性实验室检验(如附录A脚注h中所述)
采血用于:
血清(用于HuAB1 PK和细胞因子多重平板)
全血(用于CD14+/CD16+单核细胞和基因表达分析)
冷冻PBMC(用于T细胞表型分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.1.6第2周期,第1天
将执行下列程序:
HuAB1输注之前(在≤72小时内,除非另外说明):
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室(如附录A中所述,脚注h;必须在施用前评审结果:
采血以获得:
血清(用于附录D中所述的分析,纳武单抗分析除外)
全血(用于附录D中所述的分析,MDSC平板除外))
冷冻PBMC(用于T细胞表型分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
研究药物施用:HuAB1,经过30分钟IV输注
HuAB1施用后
在IV输注完成后的以下时间点的施用后生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温):
5分钟、15分钟、30分钟和1小时
施用后15分钟(±5分钟):
针对血清采血(用于HuAB 1PK)
4.2.1.7第2周期结束
对于单一疗法群组中的1a期患者,如果在第2周结束时,研究者确定患者可能受益于继续HuAB1施用,可以提议其进入延长的治疗期。
如果患者继续接受延长的治疗期(第3周期及更多),则行进到6.2.1.8节中概述的程序。
如果患者不具备接受另外剂量的HuAB1的资格,患者将返回诊所进行6.2.1.9节中概述的治疗完成/提早终止访视程序。
4.2.1.8延长治疗-第3周期和后续周期,第1天
单一疗法群组患者的1a期延长治疗可以在第3周期的第1天(第29天)开始。如果患者经历疾病进展或不可接受的毒性,则将停止施用。
在每次输液访视时,每次施用HuAB1后,患者将留在研究现场,直到完成所有用于安全性监测的施用后评估为止。除非另外说明,否则每次访视时将进行以下评估(附录A):
每次输注研究药物之前(在72小时内,除非另外说明):
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室检验(如附录A脚注h中所述;结果必须在施用前审查)
放射成像:对于继续治疗的患者,前12个月每8周一次(此后每12周一次)并且在最后一个剂量的研究治疗之后28天(±7天)进行CT/MRI扫描。
活检采集(仅在第3周期之前;用于附录D中所述的分析)
采血以获得:
血清(用于附录D中所述的分析),下列情况除外:
用于周期3、5、9、13、和21的HuAB1 PK
用于周期3、5、13、和21的HuAB1 ADA
用于周期3、5、9、13、21的ANA,然后,治疗中每6个周期一次
用于周期3和9的CSF1和IL34
用于周期3、9、和21的细胞因子多重平板
全血(用于附录D中所述的分析),下列情况除外:
用于周期3和9的CD14+/CD16+单核细胞
仅用于周期3的MDSC平板
用于周期3、5、9、13、和21的基因表达分析
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
研究药物施用:HuAB1,经过30分钟IV输注
HuAB1施用后
在IV输注完成后的以下时间点的施用后生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温):
5分钟、15分钟、30分钟和1小时
施用后15分钟(±5分钟):
采血获得血清(用于附录D中所述的分析),下列情况除外:
HuAB1 PK,仅对于第8周期
4.2.1.9治疗完成或提早终止访视
患者最后一次输注HuAB1之后约28(±7)天将返回研究中心。
将进行下列评估:
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室检验(如附录A脚注h中所述)
12导联ECG
放射成像:如果在治疗完成/提早终止访视之前8周内进行了CT/MRI扫描,或者如果预先确定了肿瘤进展,则不需要重复CT/MRI扫描。
血清妊娠试验(β-hCG)(如果适用)
病情进展患者的活检(用于附录D中所述的分析)
采血
血清(用于附录D中所述的分析,纳武单抗分析除外)
全血(仅用于CD14+/CD16+单核细胞分析和基因表达分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.21a期联合剂量递增
4.2.2.1筛选期(第-28天到第0天)
完全同意参与研究的患者将在施用第一次输注HuAB1和纳武单抗之前28天(4周)内进行筛选评估(除非另外说明)。为了确定患者是否满足所有纳入标准,并且不违反任何排除标准,将执行以下程序(附录B):
必须在任何研究特异性程序之前收集书面签署的知情同意书
完整的医学史和病史
人口统计学和基线特征
完整的体格检查,包括身高和体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
ECOG体能状态评估
筛选实验室检验(如附录B脚注g中所述)
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述)
12导联心电图(筛选时并且如果在研究期间有临床指征时需要)
放射成像:在第1周期第1天之前28天内进行CT/MRI。如果CT/MRI在第1周期第1天之前28天内作为患者护理标准的一部分进行,若结果的文档资料已经提供并且对于RECIST1.1足够,则不需要重复CT/MRI。
血清妊娠试验(β-hCG),第1周期第1天之前≤5天,针对有生育能力的女性
活检采集(用于附录D中所述的分析)
SAE报告(如果适用)
记录在先和同时用药
4.2.2.2第1周期,第1天
将执行下列程序:
HuAB1和纳武单抗输注之前(在≤72小时内,除非另外说明):
资格验证
更新医学史和病史,以收集来自筛选的任何变化
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述;结果必须在施用前审查)
血清β-hCG(由当地实验室评估)将在第一个剂量的研究药物之前进行,只针对有生育能力的女性
采血以获得:
血清(用于附录D中所述的分析)
全血(用于附录D中所述的分析)
冷冻PBMC(用于T细胞表型分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
研究药物施用:分别通过30分钟IV输注施用HuAB1和纳武单抗。首先施用纳武单抗,在2次输注之间休息30分钟,然后经过30分钟施用HuAB1。
HuAB1和纳武单抗施用后:
在每一次IV输注完成后的以下时间点的施用后生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温):
纳武单抗施用之后5分钟和15分钟
在HuAB1施用之后5分钟、15分钟、30分钟和1小时
HuAB1施用后15分钟(±5分钟):
采血获得血清(用于HuAB1和纳武单抗PK分析)
HuAB1施用后4小时(±60分钟):
采血获得血清(仅用于HuAB1 PK)
4.2.2.3第1周期,第2天
研究患者将在第2天返回研究中心进行24小时(±6小时)的施用后评估。本次访视期间将不施用治疗,但将完成下列评估:
采血以获得:
血清(用于HuAB1 PK和细胞因子多重平板)
全血(用于基因表达分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.2.4第1周期,第4天
研究患者将在第4天返回研究中心进行72小时(±12小时)的施用后评估。本次访视期间将不施用治疗,但将完成下列评估:
采血以获得:
血清(仅用于PK)
全血(用于CD14+/CD16+单核细胞和基因表达分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.2.5第1周期,第8天
研究患者将在第8天返回研究中心进行168小时(±24小时)的施用后评估。本次访视期间将不施用治疗,但将完成下列评估:
体格检查
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述)
采血以获得:
血清(用于HuAB1 PK和细胞因子多重平板)
全血(用于CD14+/CD16+单核细胞和基因表达分析)
冷冻PBMC(用于T细胞表型分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.2.6第2周期,第1天
将执行下列程序:
HuAB1和纳武单抗输注之前(在≤72小时内,除非另外说明):
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述;结果必须在施用前审查)
采血以获得:
血清(用于附录D中所述的分析)
全血(用于附录D中所述的分析,MDSC平板除外))
冷冻PBMC(用于T细胞表型分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
研究药物施用:分别通过30分钟IV输注施用HuAB1和纳武单抗。首先施用纳武单抗,在2次输注之间休息30分钟,然后施用HuAB1。
HuAB1和纳武单抗施用后:
在IV输注完成后的以下时间点的施用后生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温):
纳武单抗施用之后5分钟和15分钟
在HuAB1施用之后5分钟、15分钟、30分钟和1小时
HuAB1施用后15分钟(±5分钟):
采血获得血清(仅用于HuAB1 PK)
4.2.2.7第2周期的结束
对于联合群组中的1a期患者,如果在第2周结束时研究者确定患者可能受益于继续HuAB1和纳武单抗施用,可以提议其进入延长的治疗期。
如果患者继续接受延长的治疗期(第3周期及更多),则行进到6.2.2.8节中概述的程序。
如果患者不具备接受另外的研究药物的资格,患者将返回诊所进行6.2.2.9节中概述的治疗完成/提早终止访视程序。
4.2.2.8延长治疗-第3周期和后续周期,第1天
联合剂量递增群组患者的1a期延长治疗可以在第3周期的第1天(第29天)开始。
在每次输液访视时,每次施用HuAB1和纳武单抗后,患者将留在研究现场,直到完成所有用于安全性监测的施用后评估为止。除非另外说明,否则每次访视时将进行以下评估(附录B):
每次输注研究药物之前(在≤72小时内,除非另外说明):
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述;结果必须在施用前审查)
放射成像:对于继续治疗的患者,前12个月每8周一次(此后每12周一次)并且在最后一个剂量的研究治疗之后28天(±7天)进行CT/MRI扫描。
活检采集(用于附录D中所述的分析)
采血以获得:
血清(用于附录D中所述的分析),下列情况除外:
HuAB1 PK,仅对于周期3、5、9、13、和21
纳武单抗PK,仅对于周期3、5、9、13、和21
HuAB1和纳武单抗ADA,仅对于周期3、5、13、和21
ANA,对于周期3、5、9、13、21;然后,治疗中每6个周期一次
CSF1、IL34,仅对于周期3和9
细胞因子多重组,仅对于周期3、9、和21
全血(对于附录D中所述的分析),下列情况除外:
CD14+/CD16+,仅对于周期3和11
髓源性抑制细胞组,仅对于周期3
基因表达分析,仅对于周期3、5、9、13、和21
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
研究药物施用:分别通过30分钟IV输注施用HuAB1和纳武单抗。首先施用纳武单抗,在2次输注之间休息30分钟,然后施用HuAB1。
HuAB1和纳武单抗施用后:
在IV输注完成后的以下时间点的施用后生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温):
纳武单抗施用之后5分钟和15分钟
在HuAB1施用之后5分钟、15分钟、30分钟和1小时
HuAB1施用后15分钟(±5分钟):
采血获得血清(用于附录D中所述的分析),下列情况除外:
HuAB1和纳武单抗PK,仅对于周期8
4.2.2.9治疗完成或提早终止访视
最后一次输注HuAB1和纳武单抗之后约28(±7)天,或者如果患者过早地退出研究,患者将返回研究中心。
将进行下列评估:
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述)
12导联ECG
放射成像:如果在治疗完成/提早终止访视之前8周内进行了CT/MRI扫描,或者如果预先确定了肿瘤进展,则不需要重复CT/MRI扫描。
血清妊娠试验(β-hCG)(如果适用)
病情进展患者的活检(用于附录D中所述的分析)
采血以获得:
血清(用于附录D中所述的分析)
全血(仅用于CD14+/CD16+单核细胞分析和通过RNA测序进行基因表达分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.31b期联合剂量扩展
4.2.3.1筛选期(第-28天到第0天)
完全同意参与研究的患者将在施用第一次输注HuAB1和纳武单抗之前28天(4周)内进行筛选评估(除非另外说明)。为了确定患者是否满足所有纳入标准,并且不违反任何排除标准,将执行以下程序(附录B):
必须在任何研究特异性程序之前收集书面签署的知情同意书
完整的医学史和病史
人口统计学和基线特征
完整的体格检查,包括身高和体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
ECOG体能状态评估
筛选实验室(如附录B脚注g中所述)
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述)
12导联心电图(筛选时并且如果在研究期间有临床指征时需要)
放射成像:在第一次输注研究药物之前28天内进行CT/MRI。如果MRI在第一次研究输注后的28天内作为患者护理标准的一部分进行,若结果的文档资料已经提供并且对于RECIST 1.1足够,则不需要重复MRI。
血清妊娠试验(β-hCG),第1周期第1天之前≤5天,针对有生育能力的女性
活检采集(用于附录D中所述的分析)
SAE报告(如果适用)
记录在先和同时用药
4.2.3.2第1周期,第1天
将执行下列程序:
HuAB1和纳武单抗输注之前(在≤72小时内,除非另外说明):
资格验证
更新医学史和病史,以收集来自筛选的任何变化
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述;结果必须在施用前审查)
血清β-hCG(由当地实验室评估)将在第一个剂量的研究药物之前进行,只针对有生育能力的女性
采血以获得:
血清(用于附录D中所述的分析)
全血(用于附录D中所述的分析)
冷冻PBMC(用于T细胞表型分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
研究药物施用:分别通过30分钟IV输注施用HuAB1和纳武单抗。首先施用纳武单抗,在2次输注之间休息30分钟,然后施用HuAB1。
HuAB1和纳武单抗施用后:
在IV输注完成后的以下时间点的施用后生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温):
纳武单抗施用之后5分钟和15分钟
在HuAB1施用之后5分钟、15分钟、30分钟和1小时
HuAB1施用后15分钟(±5分钟):
采血获得血清(用于HuAB1和纳武单抗PK分析)
HuAB1施用后4小时(±60分钟):
采血获得血清(仅用于HuAB1PK)
4.2.3.3第1周期,第2天
研究患者将在第2天返回研究中心进行24小时(±6小时)的施用后评估。本次访视期间将不施用治疗,但将完成下列评估:
采血以获得:
血清(用于HuAB1 PK和细胞因子多重平板)
全血(用于基因表达分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.3.4第1周期,第4天
研究患者将在第4天返回研究中心进行72小时(±12小时)的施用后评估。本次访视期间将不施用治疗,但将完成下列评估:
采血以获得:
血清(仅用于HuAB1 PK)
全血(用于CD14+/CD16+单核细胞和基因表达分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.3.5第1周期,第8天
研究患者将在第8天返回研究中心进行168小时(±24小时)的施用后评估。本次访视期间将不施用治疗,但将完成下列评估:
体格检查
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述)
采血以获得:
血清(用于HuAB1 PK和细胞因子多重平板)
全血(用于CD14+/CD16+单核细胞和基因表达分析)
冷冻PBMC(用于T细胞表型分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.3.6第2周期,第1天
将执行下列程序:
HuAB1和纳武单抗输注之前(在≤72小时内,除非另外说明):
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述;结果必须在施用前审查)
采血以获得:
血清(用于附录D中所述的分析)
全血(用于附录D中所述的分析,MDSC平板除外))
冷冻PBMC(用于T细胞表型分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
研究药物施用:分别通过30分钟IV输注施用HuAB1和纳武单抗。首先施用纳武单抗,在2次输注之间休息30分钟,然后施用HuAB1。
HuAB1和纳武单抗施用后:
在IV输注完成后的以下时间点的施用后生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温):
纳武单抗施用之后5分钟和15分钟
在HuAB1施用之后5分钟、15分钟、30分钟和1小时
HuAB1施用后15分钟(±5分钟):
采血获得血清(仅用于HuAB1PK)
4.2.3.7第3周期和后续周期,第1天
在每次输液访视时,每次施用HuAB1和纳武单抗后,患者将留在研究现场,直到完成所有用于安全性监测的施用后评估为止。除非另外说明,否则每次访视时将进行以下评估(附录B):
每次输注研究药物之前(在≤72小时内,除非另外说明):
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述;结果必须在施用前审查)
放射成像:对于继续治疗的患者,前12个月每8周一次(此后每12周一次)并且在最后一个剂量的研究治疗之后28天(±7天)进行CT/MRI扫描。
活检采集(用于附录D中所述的分析)
采血
血清(对于附录D中所述的分析),下列情况除外:
HuAB1 PK,仅对于周期3、5、9、13、和21
纳武单抗PK,仅对于周期3、5、9、13、和21
HuAB1和纳武单抗ADA,仅对于周期3、5、13、和21
ANA,对于周期3、5、9、13、21,然后,治疗中每6个周期一次
CSF1、IL34,仅对于周期3和9
细胞因子多重组,仅对于周期3、9、和21
全血(对于附录D中所述分析),下列情况除外:
CD14+/CD16+,仅对于周期3和9
MDSC组,仅对于周期3
基因表达分析,仅对于周期3、5、9、13、和21
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
研究药物施用:分别通过30分钟IV输注施用HuAB1和纳武单抗。首先施用纳武单抗,在2次输注之间休息30分钟,然后施用HuAB1。
HuAB1和纳武单抗施用后:
在IV输注完成后的以下时间点的施用后生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温):
纳武单抗施用之后5分钟和15分钟
在HuAB1施用之后5分钟、15分钟、30分钟和1小时
HuAB1施用后15分钟(±5分钟):
采血获得血清(用于附录D中所述的分析),下列情况除外:
HuAB1和纳武单抗PK,仅对于周期8
4.2.3.8治疗完成或提早终止访视
最后一次输注HuAB1和纳武单抗之后约28(±7)天,或者如果患者过早地退出研究,患者将返回研究中心。
将进行下列评估:
体格检查,包括体重
生命体征(仰卧位休息5分钟后的血压、脉搏、呼吸频率和体温;休息时和用力后的脉搏血氧饱和度)
ECOG体能状态评估
临床安全性实验室检验(如附录B脚注h中所述)
12导联ECG
放射成像:如果在治疗完成/提早终止访视之前8周内进行了CT/MRI扫描,或者如果预先确定了肿瘤进展,则不需要重复CT/MRI扫描。
血清妊娠试验(β-hCG)
病情进展患者任选活检(用于附录D中所述的分析)
采血
血清(用于附录D中所述的分析)
全血(仅用于CD14+/CD16+单核细胞分析)
AE报告(如果适用)
伴随用药审查
4.2.4所有患者的随访和生存随访
在研究治疗中止访视后,应该随访每例持续的AE,直到事件已经减弱到基线级别、事件由研究者评估为稳定、患者失访、患者撤回同意或已经确定研究治疗不是AE的原因为止。
采集SAE的发生,直到研究治疗最后一个剂量之后100天或直到消除为止。此后,仅采集由研究者确定为与研究治疗有关的SAE。
另外,还可以在最后一个剂量后100天收集血清,分析HuAB1 PK、HuAB1 ADA和纳武单抗ADA。
根据“研究治疗中止访视”,由于疾病进展以外的原因而停止研究治疗的患者将继续接受肿瘤评估,大约每8周(±2周)一次,直到疾病进展为止。
在“研究治疗中止访视”后,所有患者(不论停止原因如何)都将予以抗癌治疗记录,并将每3个月进行一次生存随访,直到死亡、失访、撤回同意或由主办方终止研究为止。
对于从研究中撤回同意但同意参与生存随访的患者,只需每3个月一次采集生存信息。
4.3研究评估
4.3.1安全性评估
将获得基线时的病史,以了解有关的基本情况。基线检查应包括在第一次施用前28天内的体重、身高、ECOG体能状态(附录G)、ECG、血压(BP)、心率(HR)、体温、和以静息血氧饱和度表示的氧饱和度(还监测补充氧量,如果适用的话)。
如附录A、B和C记载,在施用前的每次访视期间,包括血清血液学、化学、ECOG、体重和包括ECG在内的其他评估(如果有临床指征的话)的安全性评估将作为标准护理的一部分来进行。在施用期间也将监测患者的任何输注相关AE,并根据方案指南进行随访。按照方案指南,如果患者产生输液反应,则在未来给药前将给予包括类固醇、抗组胺药物或其他治疗在内的前驱给药。
任何接受研究药物的患者将接受安全性评估。在治疗阶段和个人随访期间将继续毒性评估。一旦患者达到生存随访期,记录电话/电子邮件通信来评估患者的状态是可以接受的。
AE和实验室检验值将根据NCI CTCAE v4.03进行分级
应在施用之前的每次研究访视时评估以静息脉搏血氧饱和度表示的氧饱和度(也可监测补充氧量,如果适用的话)。如果患者出现脉搏血氧饱和度的变化或与可能的肺部AE相符的其他肺部相关体征(缺氧、发热)或症状(例如呼吸困难、咳嗽、发热),应该根据附录E中的“疑似肺毒性管理表”立即评估患者,以排除肺毒性。
在有临床指征时进行体格检查。如果自上次检查以来出现新的或恶化的临床上显著的变化,请在适当的非严重AE或SAE页面上报告所述变化。
应该在临床上有指征时或者按照地方法规执行另外的措施,包括非研究需要的实验室试验。在随访期间,将通过现场/地方实验室监测实验室毒性(例如,疑似药物诱导的肝酶评估),直到所有研究药物相关毒性消除、恢复到基线或被认为稳定为止。
本节中提到的一些评估可能不会作为CRF中的数据记录。它们旨在由治疗医师用于进行安全性监测。在临床上必要时,或者在机构或地方法规要求的情况下,可以进行额外的测试或评估。
4.3.2功效评估
4.3.2.1主要功效参数
主要功效参数为客观应答率(ORR;其为具有确认的CR或PR应答的患者数除以具有基线时可测量疾病的治疗患者的总数)。使用RECIST v1.1评价肿瘤反应状态(附录F)。由主办者裁量,可以要求肿瘤评估结果的独立审查。
4.3.2.2额外的功效参数
额外的功效参数可以包括下述者:基于RECIST v1.1,具有确认应答的那些患者的总生存期(OS、1年OS、和中位OS)、无进展生存期(PFS)和应答持续时间(DOR)。
按照规程,将在筛选期间、治疗期间和在研究结束/提早终止时进行CT/MRI(胸部、腹部、盆腔和脑)。每次测量后,必须对肿瘤负荷变化的测量结果进行审查和记录。
4.3.2.3肿瘤活检
对于所有1a期患者和在1b期中的每群组10例患者,在筛选时以及在治疗第29天(第3周期第1天之前),采集原发性肿瘤部位的活检。一旦证实肿瘤进展,本研究1a期部分的患者也将接受治疗后活检。该进展后活检对于1b期患者是任选的。将评定活检的肿瘤相关白细胞、肿瘤增殖和细胞死亡标志物。
4.3.3药代动力学评估
将从所有患者(1a期和1b期)采集血样评估HuAB1和纳武单抗的PK。
在周期1期间的第1、2、4和8天,将采集血样用于测量血清HuAB1浓度。对于周期2,将在输注前和输注结束时采集血样。另外,将在周期8的输注结束时以及在周期3、5、9、13和21的输注之前采集血样。还将在最后一个剂量后100天和治疗完成/提早终止访视时采集血样用于PK分析。
参加1a期和1b期的剂量递增的患者将在周期1的输注前和输注结束时接受采血,用于测量血清纳武单抗的浓度。另外,将在周期2、3、5、9、13和21的输注之前采集血样。还将在最后一个剂量后100天和治疗完成/提早终止访视时采集血样用于PK分析。
在适当时将根据血清HuAB1浓度-时间数据确定标准PK参数。将对HuAB1与纳武单抗之间的潜在药代动力学药物相互作用进行评估。
4.3.3.1药代动力学样品采集和处理
将根据独立的实验室手册中提供的说明书采集血样并针对血清进行处理。
4.3.3.2药代动力学样品分析
将使用经验证的ELISA方法在血清中测定血清中HuAB1浓度。将使用经验证的ECLA方法在血清中测定血清中纳武单抗浓度。
4.3.4免疫原性评估
在周期1、2、3、5、13和21的输注之前,在最后一个剂量后100天,以及在治疗完成/提早终止访视时,将采集血样,以测量HuAB1和纳武单抗的ADA。将通过经验证的利用介尺度发现(MSD)技术的桥接ECLA来测量血清中HuAB1的ADA。将通过经验证的ECLA法来测量血清中纳武单抗的ADA。
4.3.5生物标志评估
在治疗前和治疗期间,将调查从患者取得的所有外周血和肿瘤标本中的可能潜在预测针对HuAB1和纳武单抗联合的临床应答的各种因素。将评估来自这些调查的数据,其针对与应答和/或安全性(AE)数据的关联。另外,治疗组之间标志物的分析将提供必要的数据,用以鉴定和验证具有预测与预后价值的生物标志。有关本文中描述的所有样品的采集、处理、操作和装运的完整说明将在“生物标志物手册”中提供。
4.3.5.1肿瘤组织标本
将呈石蜡包埋块或未染色载玻片形式的肿瘤组织标本交付给中心IHC评估。这些活检样品应为切除性的、切入性的或芯针形式的,因为细针抽吸物或其他细胞学标本不足以用于下游生物标志物分析。正在采集组织样品以评估研究药物对肿瘤微环境的PD效应。也可以对这些样品进行基因测序以确定研究药物对基因途径的影响以及鉴定的与反应抗性相关的基因标签。这些分析可能有助于预测未来对治疗的反应。将要进行的分析的总结描述于附录D中。
在治疗前以及治疗中获得肿瘤活检标本,以检查免疫浸润和选择的肿瘤标志物的表达。从这些样品获得的肿瘤组织将适当地划分为:用于基因表达分析的新鲜冷冻样品和用于IHC的***固定样品。
染色的组织切片将交付中心实验室,在那里将由病理学家进行评估,并针对PD-L1阳性进行评分。
可以使用多种方法学来评定样品的免疫相关基因或疾病相关基因、RNA和/或蛋白质的表达,以及免疫细胞群的存在,包括但不限于IHC、qRT-PCR、基因突变检测和荧光原位杂交(FISH)。肿瘤生物标志物表达的其他方法正在进行评价。
4.3.5.2血清
将在评估计划(附录A、B和C)中指示的时间点抽取用于探索性血清生物标志物分析的血样。处理血样以收集血清,然后进行冷冻保存,直到用于分析。除了上面提到的PK和ADA分析之外,还将分析血清样品,以确定研究药物对细胞因子和CSF1R配体浓度的PD效应。可以通过ELISA、血清组学(seromics)和/或其他有关的基于多重的蛋白质测定方法来评定样品。血清标志物分析还可能有助于建立可以预测益处或与功效相关的生物标志物特征,所述生物标志物特征可用于指导本研究和未来的研究。样品采集的时间列在附录C中,要进行的分析描述在附录D中。
4.3.5.3用于单核苷酸多态性(SNP)评估的全血
将从所有患者采集用于探查性药物遗传学评估的全血样,进行冷冻保存,直到用于分析。将提取基因组DNA,随后评估候选基因中可能使患者倾向于受益或AE的单核苷酸多态性和其他遗传变异。这些数据的其他用途可以包括旨在鉴定临床相关生物标志物的基因型关联的相关性分析,所述临床相关生物标志物是通过本节中描述的其他方法鉴定的。
4.3.5.4流式细胞术
通过流式细胞术分析治疗前和治疗中的样品,研究HuAB1和纳武单抗对各种外周血免疫细胞亚群的影响。将评定全血样品,以确认预计的HuAB1对减少CD16+单核细胞的PD效应。分析PBMC样品以确定阻断PD-1与靶向CSF1R的组合是否会影响外周T细胞的活化和功能。可以评定PBMC样品的髓源性抑制细胞和单核细胞表型的水平。样品采集的时间列在附录C中,要进行的分析描述在附录D中。
4.3.5.5基因表达谱
使用RNA测序和qPCR来评估肿瘤样品中基因表达模式的变化,特别重点关注免疫功能的途径。保存采集的所有样品,它们可用于与肿瘤免疫应答有关的后续研究。
5统计学考虑
所有分析将是描述性的,并视情况按剂量组区分和整体提供。将使用汇总表和患者数据列表来提供本研究中收集的数据。将使用描述性统计,特别是平均值、中位值、标准偏差、最小值和最大值来总结连续变量。将按频率和百分比来总结分类变量。
5.1样本量确定
1a期(剂量递增)将登录大约30名患者;根据图6中概述的算法,预期每个剂量递增群组治疗3至6名患者。表5总结了针对不同的真实DLT率递增到下一剂量群组的概率。
表5-剂量递增和剂量限制毒性的概率
客观应答率是本研究的1b期部分的主要功效变量。每个疾病类型中有约30名患者,相应的应答率的95%置信区间半宽度将在18%以内。
5.2分析群体
所有登录的群体:所有签署ICF并且在IXRS中登记的患者。
安全性群体:所有接受至少一次剂量的HuAB1和/或纳武单抗的患者。
PK群体:所有接受至少一次剂量的HuAB1并具有可评价PK特征确定的可用的血清浓度数据的患者。所有接受至少一次剂量的纳武单抗的患者,将确定峰和谷PK概貌。
生物标志物患者:所有接受至少一次剂量的HuAB1和/或纳武单抗并具有可用的生物标志物数据的患者。
免疫原性患者:所有接受至少一次剂量的HuAB1和/或纳武单抗并具有可用的ADA数据的患者。
5.3终点
5.3.11a期终点
5.3.1.1主要终点
安全性
定义为DLT的3级和4级AE以及临床实验室异常的发生率。
AE、临床实验室异常和ECG异常的发生率
5.3.1.2次要终点
药代动力学
在适当和适用时将从HuAB1的浓度-时间数据推导出下列PK参数。还可以计算其他参数,比如剂量依赖性和累积比。在适当时将对HuAB1与纳武单抗之间的潜在药代动力学药物相互作用进行评定。
血清浓度-时间曲线下面积(AUC)
最大血清浓度(Cmax)
最小血清浓度(Cmin)
稳态分布容积(Vss)
在适当和适用时将从纳武单抗血清浓度数据推导出峰和谷浓度PK概貌。
免疫原性
免疫原性,定义为对HuAB1或纳武单抗的免疫应答,将通过测量所有患者的总抗HuAB1抗体和总抗纳武单抗抗体加以评定。免疫原性测试由HuAB1和纳武单抗的筛选、确认和效价测定(titration)组成。
药效学生物标志物
通过流式细胞术显示的全血单核细胞亚群的变化
细胞因子水平多重分析的变化
通过IHC测量的肿瘤活检样品中的生物标志表达水平
5.3.1.3探索性终点
药效学生物标志
选定标志血清水平的变化
通过流式细胞术显示的外周T细胞和其他白细胞表型的变化
通过流式细胞术显示的外周MDSC的水平
全血或PBMC中基因表达的变化
5.3.21b期终点
5.3.2.1主要终点
功效
客观应答率(ORR)定义为具有确认的应答CR或PR的患者的总数除以应答可评价的患者的总数
安全性
AE、SAE、临床实验室异常和ECG异常的发生率
由于不良事件治疗停止、修改、中断的发生率
3级和4级AE以及临床实验室异常。
5.3.2.2次要终点
药代动力学
在适当和适用时将从HuAB1的浓度-时间数据推导出下列PK参数。还可以计算其他参数,比如剂量依赖性和累积比。在适当时将对HuAB1与纳武单抗之间的潜在药代动力学药物相互作用进行评定。
血清浓度-时间曲线下面积(AUC)
最大血清浓度(Cmax)
最小血清浓度(Cmin)
稳态分布容积(Vss)
在适当和适用时将从纳武单抗血清浓度数据推导出峰和谷浓度PK概貌。
免疫原性
免疫原性,定义为对HuAB1或纳武单抗的免疫应答,将通过测量所有患者的总抗HuAB1抗体和总抗纳武单抗抗体加以评定。免疫原性测试由HuAB1和纳武单抗的筛选、确认和效价测定组成。
药效学生物标志
通过流式细胞术显示的全血单核细胞亚群的变化
细胞因子水平多重分析的变化
通过IHC测量的肿瘤活检样品中的生物标志物表达水平
功效
总生存期(Os)将被定义为从施用第一个剂量的研究药物到死亡的时间。
一年OS
中位OS
应答持续时间(DOR)将定义为从应答(CR或PR)到随后确认的PD开始的时间。
对每位患者,无进展生存期(PFS)定义为从第一个剂量到第一次观察到由于任何原因所致的疾病进展或死亡的时间。
5.3.2.3探索性
药效学生物标志物
选定标志物血清水平的变化
通过流式细胞术显示的外周T细胞和其他白细胞表型的变化
通过流式细胞术显示的外周MDSC的水平
全血或PBMC中基因表达的变化
5.4分析
5.4.1人口统计学和基线特征
将分群组和整体总结人口统计数据、医学史、其他基线特征、伴随疾病和伴随用药。为了确定研究行为是否满足标准,将提供相应的表格和列表。这些将包括对方案偏差的评估、研究药物可追溯性以及可能影响研究的一般行为的其他数据。
5.4.2功效分析
对于每种疾病类型,对治疗的应答将按ORR总结,ORR定义为达到客观应答的患者数与登录患者数的比率。将为应答率构建精确置信区间。将通过Kaplan-Meier法估算总生存期、1年生存期和中位生存期。也将提出相应的置信区间。
5.4.3安全性分析
将对安全群体中包括的患者进行安全性分析。列表并总结AE、临床实验室信息、生命体征、ECOG体能状态、体重和ECG。
总结总的AE,并分别总结SAE、导致停药的AE、导致死亡的AE、和NCI-CTCAE版本4.03的3级或更高级别的AE。
将描述性地总结体重和生命体征(n、平均值、标准偏差、中位值、最小值和最大值)。ECOG体能状态将概括性和描述性地总结。
将提供实验数据的分群组和总体的变化表(shift table),显示患者按照基线等级和治疗中最高等级分类的计数和百分比。明显的实验室变化(marked laboratorychange)定义为从基线0级到治疗中3级(非血液学)或4级(血液学)的变化,或从基线1级到治疗中4级的变化。将具有显著实验室变化的患者的数量和百分比分群组和总体列表。
5.4.4药代动力学分析
分剂量水平将HuAB1和纳武单抗的个体和平均血清浓度针对时间数据进行作图。在适当时将HuAB1的血清浓度-时间数据和估计的PK参数的汇总统计列表。将对HuAB1与纳武单抗之间的潜在PK药物相互作用进行评估。
对于HuAB1,将估算包括Cmax、AUC、C谷、CL、和Vss在内的PK参数。当数据可用时,将评估其他PK参数以及患者间变异性、HuAB1蓄积和剂量比例性。从本研究收集的PK数据(HuAB1和/或纳武单抗)可以与针对暴露反应或群体PK建模的其他研究结合使用,这将是单独报告的一部分。
5.4.5免疫原性
将提供HuAB1和纳武单抗两者的所有可用的免疫原性数据的列表。另外,将提供分剂量水平的在任何时间点来自具有至少一次阳性ADA的患者的免疫原性数据的列表。将分剂量提供具有至少一次阳性ADA评估的患者的频率、以及在负基线评估之后产生ADA的患者的频率。为了考察免疫原性与安全性之间的潜在关系,可以分总体免疫原性状态考察特别感兴趣的AE的频率和类型。可以探索HuAB1或纳武单抗的剂量前浓度与相应的ADA评估之间的关联。
5.4.6生物标志分析
为了评估HuAB1和纳武单抗对各种探索性生物标志(如,可溶性因子、外周血免疫细胞亚群、和通过IHC评估的其他标志)的PD效应,将这些标志的总结统计及其相对基线的变化(或百分比变化)分访视和剂量列表。另外,将以图解法研究探索性生物标志结果的时间过程,借助通过随着时间的推移的汇总作图或患者个体作图。还可以使用适当的建模,例如通过线性混合效应模型,研究这些生物标志值随时间变化的模式以及这些模式在剂量水平之间如何不同。
根据数据可用性,将研究生物标志测量与包括OS在内的临床功效量度的可能关联。可以使用例如但不限于逻辑回归的方法来进一步研究这样的关联。
如果在主要和次要终点的数据库锁定时,与探索性目标相关的生物标志数据不可用,则这些生物标志分析结果可能不包括在CSR中,而是单独报告。
选定的血清标志的表达:
表达的分析在本质上是描述性的,旨在检查表达的分布,并评定在表达与功效量度之间的潜在关联。如果存在着有意义关联的指示,未来的工作将会把表达作为一种预测性生物标志来加以评估,包括选择最佳表达截止值,以将患者分类为阳性或阴性。截止选择和验证将跨研究进行,并在个体CSR之外报告。此外,下面详述的分析可以在CSR之外报告,以确保使用本研究数据进行任何潜在的验证分析的完整性。
将进行下列分析:
选定的生物标志数据的列表
肿瘤标本获取和特征的总结
按照选择亚组和整体的表达统计的总结
按照治疗组和整体的表达的箱形图
将使用每个表达四分位数(Expression Quartile)亚组的Kaplan-Meier(KM)乘积极限法和具有未知或不确定IHC结果的患者亚组来估计每个治疗组的OS曲线。将根据总群体来定义表达四分位数。将通过Brookmeyer和Crowley方法计算中位OS的双侧95%置信区间。
将使用每个表达四分位数(Expression Quartile)亚组的KM乘积极限法和具有未知或不确定IHC结果的患者亚组来估算每个治疗组的研究者确定的PFS曲线。将根据总群体来定义表达四分位数。将通过Brookmeyer和Crowley方法计算中位PFS的双侧95%置信区间。
将使用每个表达四分位数(Expression Quartile)亚组的Clopper-Pearson方法和具有未知或不确定表达结果的患者亚组按照治疗组和精确95%CI来计算研究者确定的ORR。将根据总群体来定义表达四分位数。将计算相关优势比和95%CI。
按照治疗组的表达与反应状态的箱形图
按照治疗组和整体的表达与群体百分位数的累积分布图
按照治疗组的个体表达的瀑布图
每个表达四分位数亚组和具有未知或不确定IHC结果的患者亚组的具有95%CI的OS和PFS风险比森林图。将根据总群体来定义表达四分位数。
5.5中期分析
没有正式的中期分析计划。
主办者(和/或指定人员)和研究者将在剂量递增或减低之前审查每个剂量群组的安全性数据。另外,在完成研究之前可以进行几次中期数据总结,以便促进方案决策和支持演讲或出版。
术语 | 定义 |
ACTH | 促肾上腺皮质激素 |
ADA | 抗药物抗体 |
AE | 不良事件 |
ALT | 丙氨酸转氨酶 |
ANA | 抗核抗体 |
ANC | 中性粒细胞绝对计数 |
AST | 天冬氨酸转氨酶 |
AT | 转氨酶 |
AUC | 浓度-时间曲线下面积 |
AUC(INF) | 从时间点零外推到无限大时间的浓度-时间曲线下面积 |
β-HCG | β-人绒毛膜*** |
BID | 1日2次;每日两次 |
BMI | 身体质量指数 |
BMS | 百时美施贵宝公司(Bristol-Myers squibb) |
BP | 血压 |
BTLA | B和T淋巴细胞衰减蛋白 |
BUN | 血尿素氮 |
℃ | 摄氏度 |
CBC | 全血细胞计数 |
CD | 分化簇 |
CFR | 联邦法规汇编 |
CHO | 中国仓鼠卵巢 |
术语 | 定义 |
CI | 置信区间 |
CK | 肌酸激酶 |
CL | 清除率 |
Cmax,最大 | 最大观察浓度 |
Cmin,最小 | 观察谷浓度 |
CMV | 巨细胞病毒 |
CNS | 中枢神经*** |
CR | 完全应答 |
CRC | 结肠直肠癌 |
CRF | 病例报告表,可以是纸质或电子的 |
CRO | 合同研究组织 |
CRP | C反应蛋白 |
CSF1 | 集落刺激因子1 |
CSF1R | 集落刺激因子1受体 |
CSR | 临床研究报告 |
CT | 计算机断层摄影 |
CTA | 临床试验协议 |
CTCAE | 不良事件常见术语标准4.03版 |
CTLA-4 | 细胞毒性T淋巴细胞抗原4 |
C谷 | 观察血浆谷浓度 |
CTX | 胶原交联C末端肽 |
CV | 变异系数 |
DC | 树突状细胞 |
DEHP | 邻苯二甲酸二-(2-乙基己基)酯 |
DILI | 药物性肝损伤 |
dL | 分升 |
DLT | 剂量限制性毒性 |
DMARD | 疾病应答型抗风湿药物 |
DNA | 脱氧核糖核苷酸 |
DOR | 应答持续时间 |
EC50 | 半最大有效浓度 |
ECG | 心电图 |
ECLA | 电化学发光测定 |
ECM | 细胞外基质 |
ECOG | 美国东部肿瘤协作组 |
eCRF | 电子病例报告表 |
EDC | 电子数据采集 |
术语 | 定义 |
e.g. | 例如(举例来说) |
ELISA | 酶联免疫吸附测定 |
ePPND | 强化的出生前后发育 |
ESR | 红细胞沉降率 |
°F | 华氏度 |
FACS | 荧光激活细胞分选仪 |
Fc | 可结晶片段 |
FDA | 食品药品监督管理局 |
FFPE | ***固定石蜡包埋 |
FISH | 荧光原位杂交 |
FivePrime | 戊瑞治疗有限公司(Five Prime Therapeutics,Inc.) |
FSH | 促卵泡激素 |
g | 克 |
GBM | 多形性胶质母细胞瘤 |
GCP | 良好临床实践 |
GI | 胃肠道 |
h | 小时 |
HBcAg | 乙型肝炎核心抗原 |
HBsAg | 乙型肝炎表面抗原 |
HBV | 乙型肝炎病毒 |
HCV | 丙型肝炎病毒 |
HIV | 人类免疫缺陷病毒 |
HR | 心率 |
HRP | 辣根过氧化物酶 |
HRT | 激素替代疗法 |
IB | 研究者手册 |
IC50 | 半最大抑制浓度 |
ICD | 植入式心律转复除颤器 |
ICF | 知情同意书 |
ICH | 国际协调会 |
ICOS | 可诱导共刺激分子 |
ID | 传染病 |
i.e. | 那就是(即) |
IEC | 独立伦理委员会 |
IFN | 干扰素 |
IgG | 免疫球蛋白G |
IHC | 免疫组织化学 |
术语 | 定义 |
IL | 白细胞介素 |
IM | 肌内 |
IMP | 研究性药物产品 |
IND | 研究性新药 |
INR | 国际归一化比值 |
I-O | 肿瘤免疫 |
irAE | 免疫相关不良事件 |
IRB | 机构审查委员会 |
ITIM | 免疫受体酪氨酸抑制基序 |
ITSM | 免疫受体酪氨酸转换基序 |
IU | 国际单位 |
IV | 静脉内 |
IXRS | 一体式语音与网络应答*** |
kg | 千克 |
KM | Kaplan-Meier |
LAG-3 | 淋巴细胞活化基因3 |
LDH | 乳酸脱氢酶 |
LFT | 肝功能试验 |
LLOQ | 定量下限 |
MABEL | 最小预期生物效应水平 |
mCRPC | 转移性去势抵抗性***癌 |
MDSC | 髓源性抑制细胞 |
mg | 毫克 |
min | 分钟 |
L | 微升 |
mL | 毫升 |
MLR | 混合淋巴细胞反应 |
μM | 微米 |
mM | 毫摩尔的 |
mm3 | 立方毫米 |
mmHg | 毫米汞柱 |
MRI | 磁共振成像 |
MSD | 中尺度发现 |
MTD | 最大耐受剂量 |
N | 患者或观察数 |
NCA | 非房室分析 |
NCI | 国家癌症研究所 |
术语 | 定义 |
ng | 纳克 |
NOAEL | 无可见有害作用水平 |
NSCLC | 非小细胞肺癌 |
NYHA | 纽约心脏学会 |
NSAID | 非甾体抗炎药 |
ORR | 客观应答率 |
OS | 总生存期 |
PBMC | 外周血单核细胞 |
PD | 药效学 |
PD-1 | 程序性死亡1 |
PDAC | 胰腺导管腺癌 |
PD-L1 | 程序性死亡配体1 |
PD-L2 | 程序性死亡配体2 |
PFS | 无进展生存期 |
PK | 药代动力学 |
Po | 口服;经口 |
PPK | 群体药代动力学 |
PR | 部分应答 |
PTT(aPTT) | 部分凝血酶原时间 |
PVC | 聚氯乙烯 |
q2w | 每两周一次 |
qPCR | 定量实时聚合酶链反应 |
qRT-PCR | 定量逆转录聚合酶链反应 |
QTcF | QT间期Fridericia校正公式 |
RBC | 红细胞 |
RCC | 肾细胞癌 |
RD | 推荐剂量 |
RECIST | 实体瘤功效反应的评价标准,1.1版 |
RNA | 核糖核酸 |
SAE | 严重不良事件 |
SAP | 统计分析计划 |
SCCHN | 头颈部鳞状细胞癌 |
SD | 病情稳定 |
SkTnI | 骨骼肌肌钙蛋白 |
SOP | 标准操作规程 |
T3 | 三碘甲状腺原氨酸 |
T4 | 甲状腺素 |
术语 | 定义 |
TAM | 肿瘤相关巨噬细胞 |
TB | 结核 |
TCR | T细胞受体 |
TIL | 肿瘤浸润淋巴细胞 |
Tmax,最大 | 最大观察浓度的时间 |
TNF | 肿瘤坏死因子 |
Trap5b | 抗酒石酸酸性磷酸酶5b |
ULN | 正常上限 |
USP | 《美国药典》 |
Vss | 稳态分布容积 |
Vz | 终末期分布容积(如果IV并且如果多指数下降的话) |
WBC | 白细胞 |
WHO | 世界卫生组织 |
WOCBP | 有生育能力的女性 |
6参考文献
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附录D-用于PD分析的样品采集
·血样
·全血分析
·CD14+/CD16+单核细胞
·基因表达
·用于SNP分析的DNA
·血清分析
·HuAB1的PK
·纳武单抗的PK
·HuAB1的ADA
·纳武单抗的ADA
·ANA(如果结果为阳性,请检查ESR和CRP加以证实)
·多重血清细胞因子
·选定的血清标志
·冷冻PBMC分析,用于通过流式细胞术表征T细胞、单核细胞和髓源性抑制细胞
·肿瘤活检样品
·选定生物标志的IHC分析
·基因表达分析
·T细胞受体克隆性
·新抗原分析
序列表格
表10提供了本文中讨论的某些序列。除非另外指明,所有多肽和抗体序列显示为没有前导序列。
表10:序列和描述
序列表
<110> 戊瑞治疗有限公司
百时美施贵宝公司
<120> 癌症的联合治疗
<130> 01134-0036-00PCT
<150> US 62/072,035
<151> 2014-10-29
<150> US 62/157,368
<151> 2015-05-05
<150> US 62/192,025
<151> 2015-07-13
<160> 117
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 953
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hCSF1R (全长, 无前导序列)
<400> 1
Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val Glu Trp Asp
20 25 30
Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Ser
35 40 45
Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly Thr Tyr Arg
50 55 60
Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala Ile His Leu
65 70 75 80
Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala Gln Glu Val
85 90 95
Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu Leu Thr Asp
100 105 110
Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg Gly Arg Pro
115 120 125
Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr
130 135 140
Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala
145 150 155 160
Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg Leu Lys Val
165 170 175
Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val Pro Ala Glu
180 185 190
Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys Ser Ala Ser
195 200 205
Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn Asn Thr Lys
210 215 220
Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg Tyr Gln Lys
225 230 235 240
Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His Ala Gly Asn
245 250 255
Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser Thr Ser Met
260 265 270
Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser Ser Glu Gln
275 280 285
Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn Leu Lys Val
290 295 300
Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp Thr Tyr Leu
305 310 315 320
Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala Asn Ala Thr
325 330 335
Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu Pro Arg Leu
340 345 350
Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg Asn Pro Gly
355 360 365
Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Pro Pro Glu
370 375 380
Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr Leu Leu Cys
385 390 395 400
Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu Gln Cys Ser
405 410 415
Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln Val Trp Asp
420 425 430
Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His Lys Val Thr
435 440 445
Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn Gln Thr Tyr
450 455 460
Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp Ala Phe Ile
465 470 475 480
Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu Phe Leu Phe
485 490 495
Thr Pro Val Val Val Ala Cys Met Ser Ile Met Ala Leu Leu Leu Leu
500 505 510
Leu Leu Leu Leu Leu Leu Tyr Lys Tyr Lys Gln Lys Pro Lys Tyr Gln
515 520 525
Val Arg Trp Lys Ile Ile Glu Ser Tyr Glu Gly Asn Ser Tyr Thr Phe
530 535 540
Ile Asp Pro Thr Gln Leu Pro Tyr Asn Glu Lys Trp Glu Phe Pro Arg
545 550 555 560
Asn Asn Leu Gln Phe Gly Lys Thr Leu Gly Ala Gly Ala Phe Gly Lys
565 570 575
Val Val Glu Ala Thr Ala Phe Gly Leu Gly Lys Glu Asp Ala Val Leu
580 585 590
Lys Val Ala Val Lys Met Leu Lys Ser Thr Ala His Ala Asp Glu Lys
595 600 605
Glu Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Met Ser His Leu Gly Gln His
610 615 620
Glu Asn Ile Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr His Gly Gly Pro Val
625 630 635 640
Leu Val Ile Thr Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu Asn Phe Leu
645 650 655
Arg Arg Lys Ala Glu Ala Met Leu Gly Pro Ser Leu Ser Pro Gly Gln
660 665 670
Asp Pro Glu Gly Gly Val Asp Tyr Lys Asn Ile His Leu Glu Lys Lys
675 680 685
Tyr Val Arg Arg Asp Ser Gly Phe Ser Ser Gln Gly Val Asp Thr Tyr
690 695 700
Val Glu Met Arg Pro Val Ser Thr Ser Ser Asn Asp Ser Phe Ser Glu
705 710 715 720
Gln Asp Leu Asp Lys Glu Asp Gly Arg Pro Leu Glu Leu Arg Asp Leu
725 730 735
Leu His Phe Ser Ser Gln Val Ala Gln Gly Met Ala Phe Leu Ala Ser
740 745 750
Lys Asn Cys Ile His Arg Asp Val Ala Ala Arg Asn Val Leu Leu Thr
755 760 765
Asn Gly His Val Ala Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala Arg Asp Ile
770 775 780
Met Asn Asp Ser Asn Tyr Ile Val Lys Gly Asn Ala Arg Leu Pro Val
785 790 795 800
Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Ile Phe Asp Cys Val Tyr Thr Val Gln
805 810 815
Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile Phe Ser Leu
820 825 830
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835 840 845
Leu Val Lys Asp Gly Tyr Gln Met Ala Gln Pro Ala Phe Ala Pro Lys
850 855 860
Asn Ile Tyr Ser Ile Met Gln Ala Cys Trp Ala Leu Glu Pro Thr His
865 870 875 880
Arg Pro Thr Phe Gln Gln Ile Cys Ser Phe Leu Gln Glu Gln Ala Gln
885 890 895
Glu Asp Arg Arg Glu Arg Asp Tyr Thr Asn Leu Pro Ser Ser Ser Arg
900 905 910
Ser Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Ser Glu Leu Glu Glu Glu Ser Ser
915 920 925
Ser Glu His Leu Thr Cys Cys Glu Gln Gly Asp Ile Ala Gln Pro Leu
930 935 940
Leu Gln Pro Asn Asn Tyr Gln Phe Cys
945 950
<210> 2
<211> 972
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(972)
<223> hCSF1R (全长, + 前导序列)
<400> 2
Met Gly Pro Gly Val Leu Leu Leu Leu Leu Val Ala Thr Ala Trp His
1 5 10 15
Gly Gln Gly Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val
20 25 30
Lys Pro Gly Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val
35 40 45
Glu Trp Asp Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly
50 55 60
Ser Ser Ser Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala
85 90 95
Ile His Leu Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala
100 105 110
Gln Glu Val Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu
115 120 125
Leu Thr Asp Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg
130 135 140
Gly Arg Pro Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His
145 150 155 160
Gly Phe Thr Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln
165 170 175
Cys Ser Ala Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg
180 185 190
Leu Lys Val Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val
195 200 205
Pro Ala Glu Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys
210 215 220
Ser Ala Ser Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn
225 230 235 240
Asn Thr Lys Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg
245 250 255
Tyr Gln Lys Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His
260 265 270
Ala Gly Asn Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser
275 280 285
Thr Ser Met Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser
290 295 300
Ser Glu Gln Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn
305 310 315 320
Leu Lys Val Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp
325 330 335
Thr Tyr Leu Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala
340 345 350
Asn Ala Thr Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu
355 360 365
Pro Arg Leu Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg
370 375 380
Asn Pro Gly Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr
385 390 395 400
Pro Pro Glu Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr
405 410 415
Leu Leu Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu
420 425 430
Gln Cys Ser Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln
435 440 445
Val Trp Asp Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His
450 455 460
Lys Val Thr Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn
465 470 475 480
Gln Thr Tyr Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp
485 490 495
Ala Phe Ile Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Thr His Pro Pro Asp Glu
500 505 510
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515 520 525
Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Leu Tyr Lys Tyr Lys Gln Lys Pro
530 535 540
Lys Tyr Gln Val Arg Trp Lys Ile Ile Glu Ser Tyr Glu Gly Asn Ser
545 550 555 560
Tyr Thr Phe Ile Asp Pro Thr Gln Leu Pro Tyr Asn Glu Lys Trp Glu
565 570 575
Phe Pro Arg Asn Asn Leu Gln Phe Gly Lys Thr Leu Gly Ala Gly Ala
580 585 590
Phe Gly Lys Val Val Glu Ala Thr Ala Phe Gly Leu Gly Lys Glu Asp
595 600 605
Ala Val Leu Lys Val Ala Val Lys Met Leu Lys Ser Thr Ala His Ala
610 615 620
Asp Glu Lys Glu Ala Leu Met Ser Glu Leu Lys Ile Met Ser His Leu
625 630 635 640
Gly Gln His Glu Asn Ile Val Asn Leu Leu Gly Ala Cys Thr His Gly
645 650 655
Gly Pro Val Leu Val Ile Thr Glu Tyr Cys Cys Tyr Gly Asp Leu Leu
660 665 670
Asn Phe Leu Arg Arg Lys Ala Glu Ala Met Leu Gly Pro Ser Leu Ser
675 680 685
Pro Gly Gln Asp Pro Glu Gly Gly Val Asp Tyr Lys Asn Ile His Leu
690 695 700
Glu Lys Lys Tyr Val Arg Arg Asp Ser Gly Phe Ser Ser Gln Gly Val
705 710 715 720
Asp Thr Tyr Val Glu Met Arg Pro Val Ser Thr Ser Ser Asn Asp Ser
725 730 735
Phe Ser Glu Gln Asp Leu Asp Lys Glu Asp Gly Arg Pro Leu Glu Leu
740 745 750
Arg Asp Leu Leu His Phe Ser Ser Gln Val Ala Gln Gly Met Ala Phe
755 760 765
Leu Ala Ser Lys Asn Cys Ile His Arg Asp Val Ala Ala Arg Asn Val
770 775 780
Leu Leu Thr Asn Gly His Val Ala Lys Ile Gly Asp Phe Gly Leu Ala
785 790 795 800
Arg Asp Ile Met Asn Asp Ser Asn Tyr Ile Val Lys Gly Asn Ala Arg
805 810 815
Leu Pro Val Lys Trp Met Ala Pro Glu Ser Ile Phe Asp Cys Val Tyr
820 825 830
Thr Val Gln Ser Asp Val Trp Ser Tyr Gly Ile Leu Leu Trp Glu Ile
835 840 845
Phe Ser Leu Gly Leu Asn Pro Tyr Pro Gly Ile Leu Val Asn Ser Lys
850 855 860
Phe Tyr Lys Leu Val Lys Asp Gly Tyr Gln Met Ala Gln Pro Ala Phe
865 870 875 880
Ala Pro Lys Asn Ile Tyr Ser Ile Met Gln Ala Cys Trp Ala Leu Glu
885 890 895
Pro Thr His Arg Pro Thr Phe Gln Gln Ile Cys Ser Phe Leu Gln Glu
900 905 910
Gln Ala Gln Glu Asp Arg Arg Glu Arg Asp Tyr Thr Asn Leu Pro Ser
915 920 925
Ser Ser Arg Ser Gly Gly Ser Gly Ser Ser Ser Ser Glu Leu Glu Glu
930 935 940
Glu Ser Ser Ser Glu His Leu Thr Cys Cys Glu Gln Gly Asp Ile Ala
945 950 955 960
Gln Pro Leu Leu Gln Pro Asn Asn Tyr Gln Phe Cys
965 970
<210> 3
<211> 20
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Light chain 前导序列
<400> 3
Met Glu Thr Asp Thr Leu Leu Leu Trp Val Leu Leu Leu Trp Val Pro
1 5 10 15
Gly Ser Thr Gly
20
<210> 4
<211> 19
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> Heavy chain 前导序列
<400> 4
Met Ala Val Leu Gly Leu Leu Leu Cys Leu Val Thr Phe Pro Ser Cys
1 5 10 15
Val Leu Ser
<210> 5
<211> 487
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hCSF1R ECD.506
<400> 5
Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val Glu Trp Asp
20 25 30
Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Ser
35 40 45
Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly Thr Tyr Arg
50 55 60
Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala Ile His Leu
65 70 75 80
Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala Gln Glu Val
85 90 95
Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu Leu Thr Asp
100 105 110
Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg Gly Arg Pro
115 120 125
Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr
130 135 140
Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala
145 150 155 160
Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg Leu Lys Val
165 170 175
Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val Pro Ala Glu
180 185 190
Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys Ser Ala Ser
195 200 205
Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn Asn Thr Lys
210 215 220
Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg Tyr Gln Lys
225 230 235 240
Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His Ala Gly Asn
245 250 255
Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser Thr Ser Met
260 265 270
Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser Ser Glu Gln
275 280 285
Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn Leu Lys Val
290 295 300
Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp Thr Tyr Leu
305 310 315 320
Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala Asn Ala Thr
325 330 335
Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu Pro Arg Leu
340 345 350
Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg Asn Pro Gly
355 360 365
Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Pro Pro Glu
370 375 380
Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr Leu Leu Cys
385 390 395 400
Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu Gln Cys Ser
405 410 415
Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln Val Trp Asp
420 425 430
Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His Lys Val Thr
435 440 445
Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn Gln Thr Tyr
450 455 460
Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp Ala Phe Ile
465 470 475 480
Pro Ile Ser Ala Gly Ala His
485
<210> 6
<211> 719
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> hCSF1R ECD.506-Fc
<400> 6
Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Val Pro Glu Leu Val Val Lys Pro Gly
1 5 10 15
Ala Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val Glu Trp Asp
20 25 30
Gly Pro Pro Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly Ser Ser Ser
35 40 45
Ile Leu Ser Thr Asn Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Gly Thr Tyr Arg
50 55 60
Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala Ile His Leu
65 70 75 80
Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala Gln Glu Val
85 90 95
Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu Leu Thr Asp
100 105 110
Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Val Arg Gly Arg Pro
115 120 125
Leu Met Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His Gly Phe Thr
130 135 140
Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Ser Gln Asp Tyr Gln Cys Ser Ala
145 150 155 160
Leu Met Gly Gly Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg Leu Lys Val
165 170 175
Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val Pro Ala Glu
180 185 190
Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys Ser Ala Ser
195 200 205
Ser Val Asp Val Asn Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn Asn Thr Lys
210 215 220
Leu Ala Ile Pro Gln Gln Ser Asp Phe His Asn Asn Arg Tyr Gln Lys
225 230 235 240
Val Leu Thr Leu Asn Leu Asp Gln Val Asp Phe Gln His Ala Gly Asn
245 250 255
Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser Thr Ser Met
260 265 270
Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Ser Ser Glu Gln
275 280 285
Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn Leu Lys Val
290 295 300
Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp Thr Tyr Leu
305 310 315 320
Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala Asn Ala Thr
325 330 335
Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu Pro Arg Leu
340 345 350
Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg Asn Pro Gly
355 360 365
Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Pro Pro Glu
370 375 380
Val Ser Val Ile Trp Thr Phe Ile Asn Gly Ser Gly Thr Leu Leu Cys
385 390 395 400
Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu Gln Cys Ser
405 410 415
Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln Val Trp Asp
420 425 430
Asp Pro Tyr Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe His Lys Val Thr
435 440 445
Val Gln Ser Leu Leu Thr Val Glu Thr Leu Glu His Asn Gln Thr Tyr
450 455 460
Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp Ala Phe Ile
465 470 475 480
Pro Ile Ser Ala Gly Ala His Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
485 490 495
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
500 505 510
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
515 520 525
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
530 535 540
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
545 550 555 560
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
565 570 575
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
580 585 590
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
595 600 605
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
610 615 620
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
625 630 635 640
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
645 650 655
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
660 665 670
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
675 680 685
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
690 695 700
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
705 710 715
<210> 7
<211> 506
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> cynoCSF1R ECD (with 前导序列)
<400> 7
Met Gly Pro Gly Val Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Thr Ala Trp His
1 5 10 15
Gly Gln Gly Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Gly Pro Glu Leu Val Val
20 25 30
Lys Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val
35 40 45
Glu Trp Asp Gly Pro Ile Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly
50 55 60
Pro Ser Ser Val Leu Thr Thr Thr Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Arg
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala
85 90 95
Ile His Leu Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala
100 105 110
Lys Glu Val Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu
115 120 125
Leu Thr Asp Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Leu Arg
130 135 140
Gly Arg Pro Leu Leu Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His
145 150 155 160
Gly Phe Thr Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Gly Gln Asp Tyr Gln
165 170 175
Cys Ser Ala Leu Met Gly Ser Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg
180 185 190
Leu Lys Val Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val
195 200 205
Pro Ala Glu Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys
210 215 220
Ser Ala Ser Asn Ile Asp Val Asp Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn
225 230 235 240
Thr Thr Lys Leu Ala Ile Pro Gln Arg Ser Asp Phe His Asp Asn Arg
245 250 255
Tyr Gln Lys Val Leu Thr Leu Ser Leu Gly Gln Val Asp Phe Gln His
260 265 270
Ala Gly Asn Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Val Gln Gly Lys His Ser
275 280 285
Thr Ser Met Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asp Leu Ser
290 295 300
Ser Glu Gln Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn
305 310 315 320
Leu Lys Val Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp
325 330 335
Thr Tyr Leu Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala
340 345 350
Asn Ala Thr Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu
355 360 365
Pro Arg Leu Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg
370 375 380
Asn Pro Gly Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr
385 390 395 400
Pro Pro Glu Val Ser Val Ile Trp Thr Ser Ile Asn Gly Ser Gly Thr
405 410 415
Leu Leu Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu
420 425 430
Gln Cys Ala Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln
435 440 445
Val Trp Val Asp Pro His Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe Gln
450 455 460
Lys Val Thr Val Gln Ser Leu Leu Thr Ala Glu Thr Leu Glu His Asn
465 470 475 480
Gln Thr Tyr Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp
485 490 495
Ala Phe Ile Pro Ile Ser Ala Gly Ala Arg
500 505
<210> 8
<211> 740
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> cynoCSF1R ECD-Fc (with 前导序列)
<400> 8
Met Gly Pro Gly Val Leu Leu Leu Leu Leu Val Val Thr Ala Trp His
1 5 10 15
Gly Gln Gly Ile Pro Val Ile Glu Pro Ser Gly Pro Glu Leu Val Val
20 25 30
Lys Pro Gly Glu Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Gly Asn Gly Ser Val
35 40 45
Glu Trp Asp Gly Pro Ile Ser Pro His Trp Thr Leu Tyr Ser Asp Gly
50 55 60
Pro Ser Ser Val Leu Thr Thr Thr Asn Ala Thr Phe Gln Asn Thr Arg
65 70 75 80
Thr Tyr Arg Cys Thr Glu Pro Gly Asp Pro Leu Gly Gly Ser Ala Ala
85 90 95
Ile His Leu Tyr Val Lys Asp Pro Ala Arg Pro Trp Asn Val Leu Ala
100 105 110
Lys Glu Val Val Val Phe Glu Asp Gln Asp Ala Leu Leu Pro Cys Leu
115 120 125
Leu Thr Asp Pro Val Leu Glu Ala Gly Val Ser Leu Val Arg Leu Arg
130 135 140
Gly Arg Pro Leu Leu Arg His Thr Asn Tyr Ser Phe Ser Pro Trp His
145 150 155 160
Gly Phe Thr Ile His Arg Ala Lys Phe Ile Gln Gly Gln Asp Tyr Gln
165 170 175
Cys Ser Ala Leu Met Gly Ser Arg Lys Val Met Ser Ile Ser Ile Arg
180 185 190
Leu Lys Val Gln Lys Val Ile Pro Gly Pro Pro Ala Leu Thr Leu Val
195 200 205
Pro Ala Glu Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys
210 215 220
Ser Ala Ser Asn Ile Asp Val Asp Phe Asp Val Phe Leu Gln His Asn
225 230 235 240
Thr Thr Lys Leu Ala Ile Pro Gln Arg Ser Asp Phe His Asp Asn Arg
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
Thr Ser Met Phe Phe Arg Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asp Leu Ser
290 295 300
Ser Glu Gln Asn Leu Ile Gln Glu Val Thr Val Gly Glu Gly Leu Asn
305 310 315 320
Leu Lys Val Met Val Glu Ala Tyr Pro Gly Leu Gln Gly Phe Asn Trp
325 330 335
Thr Tyr Leu Gly Pro Phe Ser Asp His Gln Pro Glu Pro Lys Leu Ala
340 345 350
Asn Ala Thr Thr Lys Asp Thr Tyr Arg His Thr Phe Thr Leu Ser Leu
355 360 365
Pro Arg Leu Lys Pro Ser Glu Ala Gly Arg Tyr Ser Phe Leu Ala Arg
370 375 380
Asn Pro Gly Gly Trp Arg Ala Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr
385 390 395 400
Pro Pro Glu Val Ser Val Ile Trp Thr Ser Ile Asn Gly Ser Gly Thr
405 410 415
Leu Leu Cys Ala Ala Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Asn Val Thr Trp Leu
420 425 430
Gln Cys Ala Gly His Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Val Leu Gln
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Val Trp Val Asp Pro His Pro Glu Val Leu Ser Gln Glu Pro Phe Gln
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Gln Thr Tyr Glu Cys Arg Ala His Asn Ser Val Gly Ser Gly Ser Trp
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Ala Phe Ile Pro Ile Ser Ala Gly Ala Arg Gly Ser Glu Pro Lys Ser
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Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu
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Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser
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660 665 670
Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro
675 680 685
Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr
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Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val
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<213> 人工序列
<220>
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<220>
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<400> 33
Glu Val Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Glu Leu Val Arg Pro Gly Ala
1 5 10 15
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Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Phe Asn Gln Lys Phe
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Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
260 265 270
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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
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Lys
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<213> 人工序列
<220>
<223> cAb 0301 light chain
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Asn Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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100 105 110
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115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
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Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
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Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
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Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
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Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
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Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
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Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
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<210> 35
<211> 448
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<213> 人工序列
<220>
<223> cAb 0302 heavy chain
<400> 35
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Asn Ile His Trp Val Lys Gln Lys Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Met Asp Leu Ser Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
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Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
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Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
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Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
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Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
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Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> cAb 0302 light chain
<400> 36
Asp Val Val Val Thr Gln Thr Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
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Gly Leu Ser Phe Met Asn Trp Phe Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
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Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
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Arg Phe Ser Gly Gly Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Asp
65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Ala Ala Thr Tyr Phe Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gly Gly Thr Arg Leu Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 37
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> cAb 0311 heavy chain
<400> 37
Glu Ile Gln Leu Gln Gln Ser Gly Pro Asp Leu Met Lys Pro Gly Ala
1 5 10 15
Ser Val Lys Met Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
Asn Met His Trp Val Lys Gln Asn Gln Gly Lys Ser Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Val Val Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120 125
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130 135 140
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145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp
195 200 205
His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr
210 215 220
Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
Lys
<210> 38
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> cAb 0311 light chain
<400> 38
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly
1 5 10 15
Gln Arg Ala Thr Ile Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
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Gly Asp Ser His Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Pro Pro
35 40 45
Lys Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Pro Val Glu Glu Glu Asp Ala Ala Thr Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn
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Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
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Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h0301-H0 heavy chain variable region
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1 5 10 15
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Tyr Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Phe Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
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100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h0301-H1 heavy chain variable region
<400> 40
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn
20 25 30
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35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Phe Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
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100 105 110
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115 120
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<211> 122
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 41
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Phe Asn Gln Lys Phe
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Phe
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Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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<220>
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Phe
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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65 70 75 80
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100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
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<220>
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Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
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Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Val Val Tyr Asn Gln Lys Phe
50 55 60
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Leu Tyr His Ser Asn Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Ser Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
115 120
<210> 45
<211> 122
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> H0311-H2 heavy chain variable region
<400> 45
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
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Asn Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Glu Ile Asn Pro Asn Asn Gly Val Val Val Tyr Asn Gln Lys Phe
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h0301-L0 light chain variable region
<400> 46
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 47
Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 48
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<220>
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<400> 49
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
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<213> 人工序列
<220>
<223> H0302-L2 light chain variable region
<400> 50
Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
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<213> 人工序列
<220>
<223> H0311-L0 light chain variable region
<400> 51
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
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<213> 人工序列
<220>
<223> H0311-L1 light chain variable region
<400> 52
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser His Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
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65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Gly Asn
85 90 95
Glu Asp Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105 110
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<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h0301-H0 heavy chain
<400> 53
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Phe Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
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Ala Arg Glu Ser Pro Tyr Phe Ser Asn Leu Tyr Val Met Asp Tyr Trp
100 105 110
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115 120 125
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Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
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Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
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260 265 270
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Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
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Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
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Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
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405 410 415
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
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Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
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Lys
<210> 54
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h0301-H1 heavy chain
<400> 54
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn
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Tyr Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
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Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Phe Asn Gln Lys Phe
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
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100 105 110
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130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
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Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
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Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
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Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
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Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
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Lys
<210> 55
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h0301-H2 heavy chain
<400> 55
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Thr Asp Asn
20 25 30
Tyr Met Ile Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
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Gly Asp Ile Asn Pro Tyr Asn Gly Gly Thr Thr Phe Asn Gln Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Arg Glu Ser Pro Tyr Phe Ser Asn Leu Tyr Val Met Asp Tyr Trp
100 105 110
Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
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260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
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385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
Lys
<210> 56
<211> 448
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<213> 人工序列
<220>
<223> H0302-H1 heavy chain
<400> 56
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Phe
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Thr Asp Val Thr Val Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Val Thr Ile Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Tyr Phe Asp Gly Thr Phe Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser
115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
180 185 190
Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly
210 215 220
Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser
225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
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370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser
405 410 415
Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala
420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
435 440 445
<210> 57
<211> 448
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> H0302-H2 heavy chain
<400> 57
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Thr Phe Ser Asp Phe
20 25 30
Asn Ile His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Ile
35 40 45
Gly Tyr Ile Asn Pro Tyr Thr Asp Val Thr Val Tyr Asn Glu Lys Phe
50 55 60
Lys Gly Arg Ala Thr Leu Thr Ser Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr
65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Ser Tyr Phe Asp Gly Thr Phe Asp Tyr Ala Leu Asp Tyr Trp Gly
100 105 110
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115 120 125
Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala
130 135 140
Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val
145 150 155 160
Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala
165 170 175
Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val
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Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His
195 200 205
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225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg
245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro
260 265 270
Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala
275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val
290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr
305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr
325 330 335
Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu
340 345 350
Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys
355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser
370 375 380
Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp
385 390 395 400
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<213> 人工序列
<220>
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<400> 58
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
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Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
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35 40 45
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65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Thr Arg Ala Leu Tyr His Ser Asn Phe Gly Trp Tyr Phe Asp Ser Trp
100 105 110
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130 135 140
Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
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Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
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260 265 270
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275 280 285
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290 295 300
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305 310 315 320
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325 330 335
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420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
Lys
<210> 59
<211> 449
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> H0311-H2 heavy chain
<400> 59
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr Ile Phe Thr Asp Tyr
20 25 30
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35 40 45
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Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro
115 120 125
Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr
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Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr
145 150 155 160
Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro
165 170 175
Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr
180 185 190
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195 200 205
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210 215 220
Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Phe Leu Gly Gly Pro
225 230 235 240
Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser
245 250 255
Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser Gln Glu Asp
260 265 270
Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn
275 280 285
Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe Asn Ser Thr Tyr Arg Val
290 295 300
Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu
305 310 315 320
Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ser Ser Ile Glu Lys
325 330 335
Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr
340 345 350
Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr
355 360 365
Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu
370 375 380
Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu
385 390 395 400
Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Arg Leu Thr Val Asp Lys
405 410 415
Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu
420 425 430
Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Leu Gly
435 440 445
Lys
<210> 60
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h0301-L0 light chain
<400> 60
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
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20 25 30
Gly Asp Asn Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
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100 105 110
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115 120 125
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Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser Thr
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Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
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195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 61
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> h0301-L1 light chain
<400> 61
Asn Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
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Gly Asp Asn Tyr Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
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180 185 190
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Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
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<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> H0302-L0 light chain
<400> 62
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
Arg Leu Leu Ile Tyr Thr Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly Ile Pro Ala
50 55 60
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65 70 75 80
Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys
85 90 95
Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gln
115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln Ser
145 150 155 160
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165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
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195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 63
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> H0302-L1 light chain
<400> 63
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
20 25 30
Gly Leu Ser Phe Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
35 40 45
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50 55 60
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Glu Leu Pro Trp Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys Arg
100 105 110
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Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr
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165 170 175
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195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 64
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> H0302-L2 light chain
<400> 64
Glu Ile Val Val Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Asn Tyr
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100 105 110
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195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 65
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> H0311-L0 light chain
<400> 65
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Lys Ala Ser Gln Ser Val Asp Tyr Asp
20 25 30
Gly Asp Ser His Met Asn Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro
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195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
210 215
<210> 66
<211> 218
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> H0311-L1 light chain
<400> 66
Asp Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
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145 150 155 160
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165 170 175
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys
180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro
195 200 205
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210 215
<210> 67
<211> 158
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(158)
<223> 人CSF1
<400> 67
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65 70 75 80
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100 105 110
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130 135 140
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145 150 155
<210> 68
<211> 222
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(222)
<223> 人IL-34
<400> 68
Asn Glu Pro Leu Glu Met Trp Pro Leu Thr Gln Asn Glu Glu Cys Thr
1 5 10 15
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20 25 30
Tyr Met Lys His Tyr Phe Pro Ile Asn Tyr Lys Ile Ser Val Pro Tyr
35 40 45
Glu Gly Val Phe Arg Ile Ala Asn Val Thr Arg Leu Gln Arg Ala Gln
50 55 60
Val Ser Glu Arg Glu Leu Arg Tyr Leu Trp Val Leu Val Ser Leu Ser
65 70 75 80
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85 90 95
Lys Tyr Leu Gln Glu Val Gln Thr Leu Leu Leu Asn Val Gln Gln Gly
100 105 110
Leu Thr Asp Val Glu Val Ser Pro Lys Val Glu Ser Val Leu Ser Leu
115 120 125
Leu Asn Ala Pro Gly Pro Asn Leu Lys Leu Val Arg Pro Lys Ala Leu
130 135 140
Leu Asp Asn Cys Phe Arg Val Met Glu Leu Leu Tyr Cys Ser Cys Cys
145 150 155 160
Lys Gln Ser Ser Val Leu Asn Trp Gln Asp Cys Glu Val Pro Ser Pro
165 170 175
Gln Ser Cys Ser Pro Glu Pro Ser Leu Gln Tyr Ala Ala Thr Gln Leu
180 185 190
Tyr Pro Pro Pro Pro Trp Ser Pro Ser Ser Pro Pro His Ser Thr Gly
195 200 205
Ser Val Arg Pro Val Arg Ala Gln Gly Glu Gly Leu Leu Pro
210 215 220
<210> 69
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor A FR1
<400> 69
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 70
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor A FR2
<400> 70
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 71
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor A FR3
<400> 71
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 72
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor A FR4
<400> 72
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 73
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor B FR1
<400> 73
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 74
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor B FR2
<400> 74
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 75
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor B FR3
<400> 75
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 76
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor B FR4
<400> 76
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 77
<211> 25
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor C FR1
<400> 77
Gln Val Gln Leu Val Gln Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ser
1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser
20 25
<210> 78
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor C FR2
<400> 78
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Gln Gly Leu Glu Trp Met Gly
1 5 10
<210> 79
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor C FR3
<400> 79
Arg Val Thr Ile Thr Ala Asp Lys Ser Thr Ser Thr Ala Tyr Met Glu
1 5 10 15
Leu Ser Ser Leu Arg Ser Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Arg
20 25 30
<210> 80
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor C FR4
<400> 80
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 81
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor D FR1
<400> 81
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 82
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor D FR2
<400> 82
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 83
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor D FR3
<400> 83
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 84
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor D FR4
<400> 84
Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 85
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor E FR1
<400> 85
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 86
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor E FR2
<400> 86
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 87
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor E FR3
<400> 87
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 88
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor E FR4
<400> 88
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 89
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor F FR1
<400> 89
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 90
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor F FR2
<400> 90
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 91
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor F FR3
<400> 91
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 92
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人acceptor F FR4
<400> 92
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
<210> 93
<211> 719
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> mCSF1R ECD-Fc
<400> 93
Ala Pro Val Ile Glu Pro Ser Gly Pro Glu Leu Val Val Glu Pro Gly
1 5 10 15
Glu Thr Val Thr Leu Arg Cys Val Ser Asn Gly Ser Val Glu Trp Asp
20 25 30
Gly Pro Ile Ser Pro Tyr Trp Thr Leu Asp Pro Glu Ser Pro Gly Ser
35 40 45
Thr Leu Thr Thr Arg Asn Ala Thr Phe Lys Asn Thr Gly Thr Tyr Arg
50 55 60
Cys Thr Glu Leu Glu Asp Pro Met Ala Gly Ser Thr Thr Ile His Leu
65 70 75 80
Tyr Val Lys Asp Pro Ala His Ser Trp Asn Leu Leu Ala Gln Glu Val
85 90 95
Thr Val Val Glu Gly Gln Glu Ala Val Leu Pro Cys Leu Ile Thr Asp
100 105 110
Pro Ala Leu Lys Asp Ser Val Ser Leu Met Arg Glu Gly Gly Arg Gln
115 120 125
Val Leu Arg Lys Thr Val Tyr Phe Phe Ser Pro Trp Arg Gly Phe Ile
130 135 140
Ile Arg Lys Ala Lys Val Leu Asp Ser Asn Thr Tyr Val Cys Lys Thr
145 150 155 160
Met Val Asn Gly Arg Glu Ser Thr Ser Thr Gly Ile Trp Leu Lys Val
165 170 175
Asn Arg Val His Pro Glu Pro Pro Gln Ile Lys Leu Glu Pro Ser Lys
180 185 190
Leu Val Arg Ile Arg Gly Glu Ala Ala Gln Ile Val Cys Ser Ala Thr
195 200 205
Asn Ala Glu Val Gly Phe Asn Val Ile Leu Lys Arg Gly Asp Thr Lys
210 215 220
Leu Glu Ile Pro Leu Asn Ser Asp Phe Gln Asp Asn Tyr Tyr Lys Lys
225 230 235 240
Val Arg Ala Leu Ser Leu Asn Ala Val Asp Phe Gln Asp Ala Gly Ile
245 250 255
Tyr Ser Cys Val Ala Ser Asn Asp Val Gly Thr Arg Thr Ala Thr Met
260 265 270
Asn Phe Gln Val Val Glu Ser Ala Tyr Leu Asn Leu Thr Ser Glu Gln
275 280 285
Ser Leu Leu Gln Glu Val Ser Val Gly Asp Ser Leu Ile Leu Thr Val
290 295 300
His Ala Asp Ala Tyr Pro Ser Ile Gln His Tyr Asn Trp Thr Tyr Leu
305 310 315 320
Gly Pro Phe Phe Glu Asp Gln Arg Lys Leu Glu Phe Ile Thr Gln Arg
325 330 335
Ala Ile Tyr Arg Tyr Thr Phe Lys Leu Phe Leu Asn Arg Val Lys Ala
340 345 350
Ser Glu Ala Gly Gln Tyr Phe Leu Met Ala Gln Asn Lys Ala Gly Trp
355 360 365
Asn Asn Leu Thr Phe Glu Leu Thr Leu Arg Tyr Pro Pro Glu Val Ser
370 375 380
Val Thr Trp Met Pro Val Asn Gly Ser Asp Val Leu Phe Cys Asp Val
385 390 395 400
Ser Gly Tyr Pro Gln Pro Ser Val Thr Trp Met Glu Cys Arg Gly His
405 410 415
Thr Asp Arg Cys Asp Glu Ala Gln Ala Leu Gln Val Trp Asn Asp Thr
420 425 430
His Pro Glu Val Leu Ser Gln Lys Pro Phe Asp Lys Val Ile Ile Gln
435 440 445
Ser Gln Leu Pro Ile Gly Thr Leu Lys His Asn Met Thr Tyr Phe Cys
450 455 460
Lys Thr His Asn Ser Val Gly Asn Ser Ser Gln Tyr Phe Arg Ala Val
465 470 475 480
Ser Leu Gly Gln Ser Lys Gln Glu Pro Lys Ser Ser Asp Lys Thr His
485 490 495
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val
500 505 510
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr
515 520 525
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu
530 535 540
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys
545 550 555 560
Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser
565 570 575
Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys
580 585 590
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro Ile Glu Lys Thr Ile
595 600 605
Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro
610 615 620
Pro Ser Arg Asp Glu Leu Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu
625 630 635 640
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn
645 650 655
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser
660 665 670
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg
675 680 685
Trp Gln Gln Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu
690 695 700
His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys
705 710 715
<210> 94
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人IgG4 S241P
<400> 94
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 95
<211> 107
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(107)
<223> 人Ig-kappa
<400> 95
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 96
<211> 288
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(288)
<223> 人PD-1前体(带有信号序列) UniProtKB/Swiss-Prot:
Q15116.3, 01-OCT-2014
<400> 96
Met Gln Ile Pro Gln Ala Pro Trp Pro Val Val Trp Ala Val Leu Gln
1 5 10 15
Leu Gly Trp Arg Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp
20 25 30
Asn Pro Pro Thr Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp
35 40 45
Asn Ala Thr Phe Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val
50 55 60
Leu Asn Trp Tyr Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala
65 70 75 80
Ala Phe Pro Glu Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg
85 90 95
Val Thr Gln Leu Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg
100 105 110
Ala Arg Arg Asn Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu
115 120 125
Ala Pro Lys Ala Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val
130 135 140
Thr Glu Arg Arg Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro
145 150 155 160
Arg Pro Ala Gly Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly
165 170 175
Leu Leu Gly Ser Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys
180 185 190
Ser Arg Ala Ala Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro
195 200 205
Leu Lys Glu Asp Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly
210 215 220
Glu Leu Asp Phe Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro
225 230 235 240
Cys Val Pro Glu Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly
245 250 255
Met Gly Thr Ser Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg
260 265 270
Ser Ala Gln Pro Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
275 280 285
<210> 97
<211> 268
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人PD-1 (mature, 无信号序列)
<400> 97
Pro Gly Trp Phe Leu Asp Ser Pro Asp Arg Pro Trp Asn Pro Pro Thr
1 5 10 15
Phe Ser Pro Ala Leu Leu Val Val Thr Glu Gly Asp Asn Ala Thr Phe
20 25 30
Thr Cys Ser Phe Ser Asn Thr Ser Glu Ser Phe Val Leu Asn Trp Tyr
35 40 45
Arg Met Ser Pro Ser Asn Gln Thr Asp Lys Leu Ala Ala Phe Pro Glu
50 55 60
Asp Arg Ser Gln Pro Gly Gln Asp Cys Arg Phe Arg Val Thr Gln Leu
65 70 75 80
Pro Asn Gly Arg Asp Phe His Met Ser Val Val Arg Ala Arg Arg Asn
85 90 95
Asp Ser Gly Thr Tyr Leu Cys Gly Ala Ile Ser Leu Ala Pro Lys Ala
100 105 110
Gln Ile Lys Glu Ser Leu Arg Ala Glu Leu Arg Val Thr Glu Arg Arg
115 120 125
Ala Glu Val Pro Thr Ala His Pro Ser Pro Ser Pro Arg Pro Ala Gly
130 135 140
Gln Phe Gln Thr Leu Val Val Gly Val Val Gly Gly Leu Leu Gly Ser
145 150 155 160
Leu Val Leu Leu Val Trp Val Leu Ala Val Ile Cys Ser Arg Ala Ala
165 170 175
Arg Gly Thr Ile Gly Ala Arg Arg Thr Gly Gln Pro Leu Lys Glu Asp
180 185 190
Pro Ser Ala Val Pro Val Phe Ser Val Asp Tyr Gly Glu Leu Asp Phe
195 200 205
Gln Trp Arg Glu Lys Thr Pro Glu Pro Pro Val Pro Cys Val Pro Glu
210 215 220
Gln Thr Glu Tyr Ala Thr Ile Val Phe Pro Ser Gly Met Gly Thr Ser
225 230 235 240
Ser Pro Ala Arg Arg Gly Ser Ala Asp Gly Pro Arg Ser Ala Gln Pro
245 250 255
Leu Arg Pro Glu Asp Gly His Cys Ser Trp Pro Leu
260 265
<210> 98
<211> 290
<212> PRT
<213> Homo sapiens
<220>
<221> MISC_FEATURE
<222> (1)..(290)
<223> 人PD-L1前体(带有信号序列)
UniProtKB/Swiss-Prot: Q9NZQ7.1, 01-OCT-2014
<400> 98
Met Arg Ile Phe Ala Val Phe Ile Phe Met Thr Tyr Trp His Leu Leu
1 5 10 15
Asn Ala Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr
20 25 30
Gly Ser Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu
35 40 45
Asp Leu Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile
50 55 60
Ile Gln Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser
65 70 75 80
Tyr Arg Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn
85 90 95
Ala Ala Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr
100 105 110
Arg Cys Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val
115 120 125
Lys Val Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val
130 135 140
Asp Pro Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr
145 150 155 160
Pro Lys Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser
165 170 175
Gly Lys Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn
180 185 190
Val Thr Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr
195 200 205
Cys Thr Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu
210 215 220
Val Ile Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His
225 230 235 240
Leu Val Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr
245 250 255
Phe Ile Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys
260 265 270
Gly Ile Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu
275 280 285
Glu Thr
290
<210> 99
<211> 272
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 人PD-L1 (成熟, 无信号序列)
<400> 99
Phe Thr Val Thr Val Pro Lys Asp Leu Tyr Val Val Glu Tyr Gly Ser
1 5 10 15
Asn Met Thr Ile Glu Cys Lys Phe Pro Val Glu Lys Gln Leu Asp Leu
20 25 30
Ala Ala Leu Ile Val Tyr Trp Glu Met Glu Asp Lys Asn Ile Ile Gln
35 40 45
Phe Val His Gly Glu Glu Asp Leu Lys Val Gln His Ser Ser Tyr Arg
50 55 60
Gln Arg Ala Arg Leu Leu Lys Asp Gln Leu Ser Leu Gly Asn Ala Ala
65 70 75 80
Leu Gln Ile Thr Asp Val Lys Leu Gln Asp Ala Gly Val Tyr Arg Cys
85 90 95
Met Ile Ser Tyr Gly Gly Ala Asp Tyr Lys Arg Ile Thr Val Lys Val
100 105 110
Asn Ala Pro Tyr Asn Lys Ile Asn Gln Arg Ile Leu Val Val Asp Pro
115 120 125
Val Thr Ser Glu His Glu Leu Thr Cys Gln Ala Glu Gly Tyr Pro Lys
130 135 140
Ala Glu Val Ile Trp Thr Ser Ser Asp His Gln Val Leu Ser Gly Lys
145 150 155 160
Thr Thr Thr Thr Asn Ser Lys Arg Glu Glu Lys Leu Phe Asn Val Thr
165 170 175
Ser Thr Leu Arg Ile Asn Thr Thr Thr Asn Glu Ile Phe Tyr Cys Thr
180 185 190
Phe Arg Arg Leu Asp Pro Glu Glu Asn His Thr Ala Glu Leu Val Ile
195 200 205
Pro Glu Leu Pro Leu Ala His Pro Pro Asn Glu Arg Thr His Leu Val
210 215 220
Ile Leu Gly Ala Ile Leu Leu Cys Leu Gly Val Ala Leu Thr Phe Ile
225 230 235 240
Phe Arg Leu Arg Lys Gly Arg Met Met Asp Val Lys Lys Cys Gly Ile
245 250 255
Gln Asp Thr Asn Ser Lys Lys Gln Ser Asp Thr His Leu Glu Glu Thr
260 265 270
<210> 100
<211> 113
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗重链可变区
<400> 100
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser Asn Ser
20 25 30
Gly Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val
35 40 45
Ala Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val
50 55 60
Lys Gly Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe
65 70 75 80
Leu Gln Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys
85 90 95
Ala Thr Asn Asp Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser
100 105 110
Ser
<210> 101
<211> 327
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗重链恒定区
<400> 101
Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Leu Ala Pro Cys Ser Arg
1 5 10 15
Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly Cys Leu Val Lys Asp Tyr
20 25 30
Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser Gly Ala Leu Thr Ser
35 40 45
Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gln Ser Ser Gly Leu Tyr Ser
50 55 60
Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser Leu Gly Thr Lys Thr
65 70 75 80
Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser Asn Thr Lys Val Asp Lys
85 90 95
Arg Val Glu Ser Lys Tyr Gly Pro Pro Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro
100 105 110
Glu Phe Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys
115 120 125
Asp Thr Leu Met Ile Ser Arg Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val
130 135 140
Asp Val Ser Gln Glu Asp Pro Glu Val Gln Phe Asn Trp Tyr Val Asp
145 150 155 160
Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Phe
165 170 175
Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp
180 185 190
Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Gly Leu
195 200 205
Pro Ser Ser Ile Glu Lys Thr Ile Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg
210 215 220
Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Gln Glu Glu Met Thr Lys
225 230 235 240
Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp
245 250 255
Ile Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys
260 265 270
Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser
275 280 285
Arg Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Glu Gly Asn Val Phe Ser
290 295 300
Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser
305 310 315 320
Leu Ser Leu Ser Leu Gly Lys
325
<210> 102
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗轻链可变区
<400> 102
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr
20 25 30
Leu Ala Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile
35 40 45
Tyr Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly
50 55 60
Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro
65 70 75 80
Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg
85 90 95
Thr Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
100 105
<210> 103
<211> 107
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗轻链恒定区
<400> 103
Arg Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe Ile Phe Pro Pro Ser Asp Glu
1 5 10 15
Gln Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe
20 25 30
Tyr Pro Arg Glu Ala Lys Val Gln Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu Gln
35 40 45
Ser Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu Gln Asp Ser Lys Asp Ser
50 55 60
Thr Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu
65 70 75 80
Lys His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser
85 90 95
Pro Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys
100 105
<210> 104
<211> 30
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗重链可变区 FR1
<400> 104
Gln Val Gln Leu Val Glu Ser Gly Gly Gly Val Val Gln Pro Gly Arg
1 5 10 15
Ser Leu Arg Leu Asp Cys Lys Ala Ser Gly Ile Thr Phe Ser
20 25 30
<210> 105
<211> 5
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗重链可变区 CDR1
<400> 105
Asn Ser Gly Met His
1 5
<210> 106
<211> 14
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗重链可变区 FR2
<400> 106
Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly Lys Gly Leu Glu Trp Val Ala
1 5 10
<210> 107
<211> 17
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗重链可变区 CDR2
<400> 107
Val Ile Trp Tyr Asp Gly Ser Lys Arg Tyr Tyr Ala Asp Ser Val Lys
1 5 10 15
Gly
<210> 108
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗重链可变区 FR3
<400> 108
Arg Phe Thr Ile Ser Arg Asp Asn Ser Lys Asn Thr Leu Phe Leu Gln
1 5 10 15
Met Asn Ser Leu Arg Ala Glu Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys Ala Thr
20 25 30
<210> 109
<211> 4
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗重链可变区 CDR3
<400> 109
Asn Asp Asp Tyr
1
<210> 110
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗重链可变区 FR4
<400> 110
Trp Gly Gln Gly Thr Leu Val Thr Val Ser Ser
1 5 10
<210> 111
<211> 23
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗轻链可变区 FR1
<400> 111
Glu Ile Val Leu Thr Gln Ser Pro Ala Thr Leu Ser Leu Ser Pro Gly
1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr Leu Ser Cys
20
<210> 112
<211> 11
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗轻链可变区 CDR1
<400> 112
Arg Ala Ser Gln Ser Val Ser Ser Tyr Leu Ala
1 5 10
<210> 113
<211> 15
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗轻链可变区 FR2
<400> 113
Trp Tyr Gln Gln Lys Pro Gly Gln Ala Pro Arg Leu Leu Ile Tyr
1 5 10 15
<210> 114
<211> 7
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗轻链可变区 CDR2
<400> 114
Asp Ala Ser Asn Arg Ala Thr
1 5
<210> 115
<211> 32
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗轻链可变区 FR3
<400> 115
Gly Ile Pro Ala Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr
1 5 10 15
Leu Thr Ile Ser Ser Leu Glu Pro Glu Asp Phe Ala Val Tyr Tyr Cys
20 25 30
<210> 116
<211> 9
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗轻链可变区 CDR3
<400> 116
Gln Gln Ser Ser Asn Trp Pro Arg Thr
1 5
<210> 117
<211> 10
<212> PRT
<213> 人工序列
<220>
<223> 纳武单抗轻链可变区 FR4
<400> 117
Phe Gly Gln Gly Thr Lys Val Glu Ile Lys
1 5 10
Claims (64)
1.一种治疗受试者中的癌症的方法,其包括向该受试者施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂。
2.权利要求1的方法,其中该PD-1/PD-L1抑制剂是抗体。
3.权利要求2的方法,其中该PD-1/PD-L1抑制剂是抗PD-1抗体。
4.权利要求3的方法,其中该抗PD-1抗体选自:
a)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含SEQ ID NO:100的序列,所述轻链包含SEQ ID NO:102的序列;
b)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含具有SEQ ID NO:105的序列的重链(HC)CDR1、具有SEQ ID NO:107的序列的HC CDR2、和具有SEQ ID NO:109的序列的HC CDR3,所述轻链包含具有SEQ ID NO:112的序列的轻链(LC)CDR1、具有SEQ ID NO:114的序列的LCCDR2和具有SEQ ID NO:116的序列的LC CDR3;和
c)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含SEQ ID NO:100和101的序列,所述轻链包含SEQ ID NO:102和103的序列。
5.权利要求2至4任一项的方法,其中该抗体是人源化抗体或者选自:Fab、Fv、scFv、Fab’、和(Fab’)2
6.权利要求3的方法,其中该抗PD-1抗体包含选自纳武单抗和派姆单抗的抗体的重链和轻链CDR。
7.权利要求6的方法,其中该抗PD-1抗体包含选自纳武单抗和派姆单抗的抗体的重链和轻链可变区。
8.权利要求7的方法,其中该抗PD-1抗体选自纳武单抗和派姆单抗。
9.权利要求2的方法,其中该PD-1/PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体。
10.权利要求9的方法,其中该抗PD-L1抗体包含选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C的抗体的重链和轻链CDR。
11.权利要求10的方法,其中该抗PD-L1抗体包含选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C的抗体的重链和轻链可变区。
12.权利要求11的方法,其中该抗PD-L1抗体选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C。
13.权利要求1的方法,其中该PD-1/PD-L1抑制剂是融合蛋白。
14.权利要求13的方法,其中该融合蛋白是AMP-224。
15.前述权利要求中任一项的方法,其中抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂是同时或依次施用的。
16.前述权利要求中任一项的方法,其中抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂是同时施用的。
17.权利要求15的方法,其中在施用所述抗CSF1R抗体之前施用一个或多个剂量的所述PD-1/PD-L1抑制剂。
18.权利要求17的方法,其中该受试者在施用所述抗CSF1R抗体之前接受了PD-1/PD-L1抑制剂治疗的完整疗程。
19.权利要求18的方法,其中在第二个疗程的所述PD-1/PD-L1抑制剂治疗期间施用所述抗CSF1R抗体。
20.权利要求16至18中任一项的方法,其中该受试者在施用所述抗CSF1R抗体之前接受了至少一个、至少两个、至少三个、或至少四个剂量的所述PD-1/PD-L1抑制剂。
21.权利要求16至19中任一项的方法,其中至少一个剂量的所述PD-1/PD-L1抑制剂与所述抗CSF1R抑制剂同时施用。
22.权利要求15的方法,其中在施用所述PD-1/PD-L1抑制剂之前施用一个或多个剂量的所述抗CSF1R抗体。
23.权利要求22的方法,其中该受试者在所述PD-1/PD-L1抑制剂施用之前接受了至少两个、至少三个、至少三个、或至少四个剂量的所述抗CSF1R抗体。
24.权利要求22或权利要求23的方法,其中至少一个剂量的所述抗CSF1R抗体与所述PD-1/PD-L1抑制剂同时施用。
25.前述权利要求中任一项的方法,其中所述抗CSF1R抗体是以约0.1、约0.3、约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用的。
26.前述权利要求中任一项的方法,其中所述PD-1/PD-L1抑制剂是以约0.5-10mg/kg的剂量,比如约0.5、约1、约2、约3、约4、约5或约10mg/kg的剂量施用的。
27.前述权利要求中任一项的方法,其中施用抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂每1、2、3、4、或5周一次,例如每周一次,或例如每2周一次,或每3周一次。
28.前述权利要求中任一项的方法,其中癌症选自非小细胞肺癌、黑素瘤、头颈部鳞状细胞癌、卵巢癌、胰腺癌、肾细胞癌、肝细胞癌、膀胱癌、恶性胶质瘤、结肠直肠癌和子宫内膜癌。
29.前述权利要求中任一项的方法,其中癌症在选自手术、化学治疗、放射治疗或其组合的治疗之后是复发性的或进行性的。
30.前述权利要求中任一项的方法,其中受试者先前已经接受了PD-1/PD-L1抑制剂治疗。
31.权利要求30的方法,其中,在至少2个剂量之后,受试者对所述PD-1/PD-L1抑制剂反应不足或对于所述PD-1/PD-L1抑制剂而言是难治性的。
32.前述权利要求中任一项的方法,其中所述抗CSF1R抗体阻断CSF1和/或IL-34与CSF1R结合。
33.前述权利要求中任一项的方法,其中所述抗CSF1R抗体在体外抑制配体诱导的CSF1R磷酸化。
34.前述权利要求中任一项的方法,其中所述抗CSF1R抗体选自:
a)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含SEQ ID NO:39的序列,所述轻链包含SEQID NO:46的序列;
b)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含具有SEQ ID NO:15的序列的重链(HC)CDR1、具有SEQ ID NO:16的序列的HC CDR2、和具有SEQ ID NO:17的序列的HC CDR3,所述轻链包含具有SEQ ID NO:18的序列的轻链(LC)CDR1、具有SEQ ID NO:19的序列的LC CDR2和具有SEQ ID NO:20的序列的LC CDR3;和
c)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含SEQ ID NO:53的序列,所述轻链包含SEQID NO:60的序列的轻链的抗体。
35.权利要求34的方法,其中该抗体是人源化抗体或者选自:Fab、Fv、scFv、Fab’、和(Fab’)2。
36.前述权利要求中任一项的方法,其中,在癌症的小鼠异种移植模型中,施用所述抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂导致肿瘤生长的协同抑制。
37.权利要求36的方法,其中所述癌症是结肠癌、直肠癌或结肠直肠癌,且所述小鼠异种移植模型包括结直肠癌细胞,如MC38结肠直肠癌细胞。
38.权利要求36的方法,其中所述癌症是胰腺癌,且所述小鼠异种移植模型包括鼠胰腺导管腺癌(PDAC)细胞,如KRasG12D/Ink4a-/-胰腺导管腺癌细胞。
39.前述权利要求中任一项的方法,其中患者患有IIIB期或IV期非小细胞肺癌。
40.权利要求1-36中任一项的方法,其中患者患有III期或IV期头颈部鳞状细胞癌。
41.权利要求40的方法,其中患者在铂治疗后是复发性或进展性的。
42.权利要求1-36或38中任一项的方法,其中患者患有胰腺的局部或转移腺癌。
43.权利要求1-37中任一项的方法,其中患者患有结肠或直肠的腺癌。
44.权利要求43的方法,其中患者是复发性或进展性的,或者对于氟嘧啶、奥沙利铂、伊立替康、贝伐单抗、西妥昔单抗或帕尼单抗中的一种或多种不耐受。
45.权利要求1-36中任一项的方法,其中患者患有IV级恶性胶质瘤。
46.权利要求1-36中任一项的方法,其中患者患有III期或IV期黑素瘤。
47.一种包含抗CSF1R抗体和PD-1/PD-L1抑制剂的组合物。
48.权利要求47的组合物,其中该PD-1/PD-L1抑制剂是抗体。
49.权利要求48的组合物,其中该PD-1/PD-L1抑制剂是抗PD-1抗体。
50.权利要求49的组合物,其中该抗PD-1抗体选自:
a)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含SEQ ID NO:100的序列,所述轻链包含SEQ ID NO:102的序列;
b)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含具有SEQ ID NO:105的序列的重链(HC)CDR1、具有SEQ ID NO:107的序列的HC CDR2、和具有SEQ ID NO:109的序列的HC CDR3;所述轻链包含具有SEQ ID NO:112的序列的轻链(LC)CDR1、具有SEQ ID NO:114的序列的LCCDR2、和具有SEQ ID NO:116的序列的LC CDR3;和
c)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含SEQ ID NO:100和101的序列,所述轻链包含SEQ ID NO:102和103的序列。
51.权利要求50的组合物,其中该PD-1抗体是人源化抗体或者选自:Fab、Fv、scFv、Fab’、和(Fab’)2。
52.权利要求49的组合物,其中该抗PD-1抗体包含选自纳武单抗和派姆单抗的抗体的重链和轻链CDR。
53.权利要求52的组合物,其中该抗PD-1抗体包含选自纳武单抗和派姆单抗的抗体的重链和轻链可变区。
54.权利要求53的组合物,其中该抗PD-1抗体选自纳武单抗和派姆单抗。
55.权利要求48的组合物,其中该PD-1/PD-L1抑制剂是抗PD-L1抗体。
56.权利要求55的组合物,其中该抗PD-L1抗体包含选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C的抗体的重链和轻链CDR。
57.权利要求56的组合物,其中该抗PD-L1抗体包含选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C的抗体的重链和轻链可变区。
58.权利要求57的组合物,其中该抗PD-L1抗体选自BMS-936559、MPDL3280A、MEDI4736、和MSB0010718C。
59.权利要求47的组合物,其中该PD-1/PD-L1抑制剂是融合蛋白。
60.权利要求59的组合物,其中该融合蛋白是AMP-224。
61.权利要求47至60任一项的组合物,其中该抗CSF1R抗体选自:
a)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含SEQ ID NO:39的序列,所述轻链包含SEQID NO:46的序列;
b)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含具有SEQ ID NO:15的序列的重链(HC)CDR1、具有SEQ ID NO:16的序列的HC CDR2、和具有SEQ ID NO:17的序列的HC CDR3;所述轻链包含具有SEQ ID NO:18的序列的轻链(LC)CDR1、具有SEQ ID NO:19的序列的LC CDR2、和具有SEQ ID NO:20的序列的LC CDR3;和
c)包括下述重链和轻链的抗体,所述重链包含SEQ ID NO:53的序列,所述轻链包含SEQID NO:60的序列。
62.权利要求61的组合物,其中该抗CSF1R抗体是人源化抗体或者选自:Fab、Fv、scFv、Fab’、和(Fab’)2。
63.权利要求47至62中任一项的组合物,其中所述抗CSF1R抗体和所述PD-1/PD-L1抑制剂协同抑制小鼠异种移植癌症模型中的肿瘤生长,所述癌症模型例如结肠直肠癌细胞模型,如MC38结肠直肠癌细胞模型,或例如鼠胰腺导管腺癌(PDAC)细胞模型,如KRasG12D/Ink4a-/-胰腺导管腺癌细胞模型。
64.权利要求47-63中任一项的组合物用于制备药物的用途,所述药物用根据权利要求1-46中任一项的步骤和/或条件与PD-1/PD-L1抑制剂联合治疗受试者中的癌症。
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