EA037561B1 - Способы лечения заболеваний антителами, которые связывают рецептор колониестимулирующего фактора 1 (csf1r) - Google Patents

Способы лечения заболеваний антителами, которые связывают рецептор колониестимулирующего фактора 1 (csf1r) Download PDF

Info

Publication number
EA037561B1
EA037561B1 EA201692482A EA201692482A EA037561B1 EA 037561 B1 EA037561 B1 EA 037561B1 EA 201692482 A EA201692482 A EA 201692482A EA 201692482 A EA201692482 A EA 201692482A EA 037561 B1 EA037561 B1 EA 037561B1
Authority
EA
Eurasian Patent Office
Prior art keywords
antibody
weeks
csf1r
human
seq
Prior art date
Application number
EA201692482A
Other languages
English (en)
Other versions
EA201692482A1 (ru
Inventor
Джули ХАМБЛТОН
Эмма Мастеллер
Джеймс Цзанхи
Роберт Сикорски
Хонг Сян
Original Assignee
Файв Прайм Терапьютикс, Инк.
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Файв Прайм Терапьютикс, Инк. filed Critical Файв Прайм Терапьютикс, Инк.
Publication of EA201692482A1 publication Critical patent/EA201692482A1/ru
Publication of EA037561B1 publication Critical patent/EA037561B1/ru

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2866—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for cytokines, lymphokines, interferons
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/545—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the dose, timing or administration schedule
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/51—Complete heavy chain or Fd fragment, i.e. VH + CH1
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/515—Complete light chain, i.e. VL + CL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/92—Affinity (KD), association rate (Ka), dissociation rate (Kd) or EC50 value
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/90—Immunoglobulins specific features characterized by (pharmaco)kinetic aspects or by stability of the immunoglobulin
    • C07K2317/94—Stability, e.g. half-life, pH, temperature or enzyme-resistance

Abstract

Предложены способы лечения заболеваний антителами, которые связывают рецептор колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R). Такие способы включают без ограничения способы лечения ревматоидного артрита.

Description

Настоящая заявка испрашивает приоритет предварительной заявки на патент США 62/015,710, поданной 23 июня 2014 года, которая полностью включена в настоящую заявку посредством отсылки в любых отношениях.
Область техники, к которой относится изобретение
Предложены способы лечения заболеваний антителами, которые связывают рецептор колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R). Такие способы включают, без ограничения, способы лечения ревматоидного артрита.
Уровень техники
Рецептор колониестимулирующего фактора 1 (указанный в настоящей заявке как CSF1R; также называемый в уровне техники FMS, FIM2, C-FMS, М-КСФ рецептор и CD115) является трансмембранным рецептором с одним трансмембранным доменом, N-концевым внеклеточным доменом (ECD) и Сконцевым внутриклеточным доменом с тирозинкиназной активностью. Связывание лиганда CSF1 или лиганда интерлейкина 34 (указанного в настоящем описании как IL-34; Lin et al., Science 320: 807-11 (2008)) с CSF1R приводит к димеризации рецептора, апрегуляции протеинтирозинкиназной активности CSF1R, фосфорилированию остатков тирозина в CSF1R и последующим сигнальным событиям. CSF1 и IL-34 стимулируют выживаемость, пролиферацию и дифференцировку моноцитов в макрофаги, а также другие линии моноцитарных клеток, такие как остеокласты, дендритные клетки и микроглию.
Было обнаружено, что многие опухолевые клетки секретируют CSF1, который активирует клетки моноцитов/макрофагов через CSF1R. Было показано, что уровень CSF1 в опухолях коррелирует с уровнем опухолеассоциированных макрофагов (ТАМ) в опухоли. Было обнаружено, что более высокие уровни ТАМ коррелируют с более плохими прогнозами для больных. Кроме того, было обнаружено, что CSF1 способствует росту опухоли и прогрессии до метастаза, например, в ксенотрансплантатах рака молочной железы человека у мышей. См., например, Paulus et al., Cancer Res. 66: 4349-56 (2006). Также CSF1R играет роль в остеолитической деструкции кости при костном метастазе. См., например, Ohno et al., Mol. Cancer Ther. 5: 2634-43 (2006).
Было также обнаружено, что CSF1 и его рецептор участвуют в различных воспалительных и аутоиммунных заболеваниях. См., например, Hamilton, Nat. Rev. 8: 533-44 (2008). Например, было обнаружено, что синовиальные эндотелиальные клетки из суставов, пораженных ревматоидным артритом, продуцируют CSF1, что указывает на некую роль CSF1 и его рецептора в болезни. Блокирование активности CSF1R антителом приводит к положительным клиническим эффектам в моделях артрита на мышах, включая уменьшение деструкции костной и хрящевой ткани и уменьшение количеств макрофагов. См., например, Kitaura et al., J. Clin. Invest. 115: 3418-3427 (2005).
Зрелые дифференцированные клетки миелоидных линий, такие как макрофаги, микроглиальные клетки и остеокласты, способствуют патологии различных заболеваний, таких как ревматоидный артрит, рассеянный склероз и болезни с потерей костной ткани. Дифференцированные клетки миелоидных линий образуются из промежуточных моноцитарных клеток периферической крови. Стимуляция CSF1R способствует развитию моноцитов из костномозговых клеток-предшественников, пролиферации и выживаемости моноцитов, и дифференцировке моноцитов периферической крови в дифференцированные клетки миелоидных линий, такие как макрофаги, микроглиальные клетки и остеокласты. Стимуляция CSF1R, таким образом, способствует пролиферации, выживаемости, активации и созреванию дифференцированных клеток миелоидных линий, и, в патологических условиях, стимуляция CSF1R вносит вклад в способность дифференцированных клеток миелоидных линий опосредовать патологию болезни.
Сущность изобретения
В некоторых вариантах осуществления предложены способы лечения ревматоидного артрита, включающие введение эффективного количества антитела, которое связывает рецептор колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R), человеку с ревматоидным артритом, где антитело блокирует связывание колониестимулирующего фактора 1 (CSF1) с CSF1R и блокирует связывание IL-34 с CSF1R, где эффективное количество является достаточным для уменьшения количества CD16+ моноцитов у субъекта по меньшей мере на 50% в течение по меньшей мере 4 недель после двух доз. В некоторых вариантах осуществления эффективная доза составляет от 0,2 до 10 мг/кг, или от 1 до 10 мг/кг, или от 1 до 5 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления антитело вводят с частотой один раз в две или больше недель.
В некоторых вариантах осуществления предложены способы лечения ревматоидного артрита. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение антитела, которое связывает рецептор колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R), субъекту с ревматоидным артритом, где антитело блокирует связывание колониестимулирующего фактора 1 (CSF1) с CSF1R и блокирует связывание IL-34 с CSF1R, и где антитело вводят в дозе от 0,2 до 10 мг/кг и при частоте введения один раз в две или больше недель. В некоторых вариантах осуществления частота введения составляет менее чем один раз в две недели, один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в месяц, один раз в пять недель, один раз в шесть недель, один раз в семь недель, один раз в два месяца, один раз в три месяца или четыре раза в год. В некоторых вариантах осуществления доза составляет от 1 до 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления доза составляет от 3 до 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение одной дозы антитела. В некоторых вариантах осуществления способ включает
- 1 037561 введение двух доз антитела. В некоторых вариантах осуществления дозы вводят по меньшей мере с интервалом в одну неделю или по меньшей мере с интервалом в две недели.
В некоторых вариантах осуществления после введения по меньшей мере одной дозы антитела количество CD16+ моноцитов у субъекта уменьшается по меньшей мере на 50%. В некоторых вариантах осуществления количество CD16- моноцитов не уменьшается или уменьшается меньше чем на 20%. В некоторых вариантах осуществления количество CD16+ моноцитов у субъекта уменьшается по меньшей мере на 75%. В некоторых вариантах осуществления количество CD16+ моноцитов уменьшается по меньшей мере на 50% в течение по меньшей мере одной недели, по меньшей мере двух недель, по меньшей мере трех недель, по меньшей мере четырех недель, по меньшей мере пяти недель, по меньшей мере шести недель, по меньшей мере семи недель или по меньшей мере восьми недель. В некоторых вариантах осуществления CD16+ моноциты являются CD16+ моноцитами периферической крови.
В некоторых вариантах осуществления уровень по меньшей мере одного маркера резорбции костной ткани снижается после введения по меньшей мере одной дозы антитела. В некоторых вариантах осуществления уровень по меньшей мере одного маркера резорбции костной ткани снижается по меньшей мере на 20%. В некоторых вариантах осуществления уровень по меньшей мере одного маркера резорбции костной ткани снижается по меньшей мере на 50%. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере один маркер резорбции костной ткани выбран из СТх и TRAP5b. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере одним маркером резорбции костной ткани является СТх.
В некоторых вариантах осуществления антитело обнаруживается в сыворотке субъекта по меньшей мере через две недели, по меньшей мере через три недели, по меньшей мере через четыре недели, по меньшей мере через один месяц, по меньшей мере через шесть недель или по меньшей мере через два месяца после введения дозы. В некоторых вариантах осуществления антитело обнаруживается в сыворотке субъекта по меньшей мере через четыре недели, по меньшей мере через один месяц, по меньшей мере через шесть недель или по меньшей мере через два месяца после введения дозы. В некоторых вариантах осуществления доза составляет от 3 до 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования антитела в организме субъекта превышает 2 дня. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования антитела превышает 4 дня. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования антитела превышает 15 дней. В некоторых таких вариантах осуществления доза составляет от 3 до 10 мг/кг.
В любом из вариантов осуществления способов, описанных в настоящей заявке, тяжелая цепь антитела и/или легкая цепь антитела может иметь следующую структуру.
В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь включает последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 9, 11, 13 и 39-45. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 10, 12, 14 и 46-52. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь включает последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 9, 11, 13 и 39-45, и легкая цепь включает последовательность, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 10, 12, 14 и 46-52.
В некоторых вариантах осуществления НС CDR1, НС CDR2 и НС CDR3 включают ряд последовательностей, выбранных из: (а) SEQ ID NO: 15, 16 и 17; (b) SEQ ID NO: 21, 22 и 23; и (с) SEQ ID NO: 27, 28 и 29. В некоторых вариантах осуществления LC CDR1, LC CDR2 и LC CDR3 включают ряд последовательностей, выбранных из: (a) SEQ ID NO: 18, 19 и 20; (b) SEQ ID NO: 24,25 и 26; и (с) SEQ ID NO: 30, 31 и 32.
В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь включает НС CDR1, НС CDR2 и НС CDR3, где НС CDR1, НС CDR2 и НС CDR3 включают ряд последовательностей, выбранных из: (a) SEQ ID NO: 15, 16 и 17; (b) SEQ ID NO: 21, 22 и 23; и (с) SEQ ID NO: 27, 28 и 29; и легкая цепь включает LC CDR1, LC CDR2 и LC CDR3, где LC CDR1, LC CDR2 и LC CDR3 включают ряд последовательностей, выбранных из: (a) SEQ ID NO: 18, 19 и 20; (b) SEQ ID NO: 24, 25 и 26; и (с) SEQ ID NO: 30, 31 и 32.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, где антитело включает: (а) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 9, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 10; (b) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 11, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 12; (с) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 13, и легкую цепь, включающую
- 2 037561 последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 14; (d) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 39, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 46; (е) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 40, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 46; (f) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 41, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 46; (g) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 39, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 47; (h) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 40, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 47; (i) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 41, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 47; и (j) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 42, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 48; (k) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 42, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 49; (l) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 42, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 50; (m) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 43, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 48; (n) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 43, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 49; (о) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 43, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 50; (р) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 44, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 51; (q) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 44, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 52; (r) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 45, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 51; или (s) тяжелую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 45, и легкую цепь, включающую последовательность, которая по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 99% или на 100% идентична SEQ ID NO: 52.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, где антитело включает: (а) тяжелую цепь, включающую CDR1 тяжелой цепи (НС), имеющую последовательность SEQ ID NO: 15, НС CDR2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 16, и НС CDR3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 17, и легкую цепь, включающую CDR1 легкой цепи (LC), имеющую последовательность SEQ ID NO: 18, LC CDR2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 19, и LC
- 3 037561
CDR3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 20; (b) тяжелую цепь, включающую CDR1 тяжелой цепи (НС), имеющую последовательность SEQ ID NO: 21, НС CDR2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 22, и НС CDR3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 23, и легкую цепь, включающую CDR1 легкой цепи (LC), имеющую последовательность SEQ ID NO: 24, LC CDR2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 25, и LC CDR3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 26; или (с) тяжелую цепь, включающую CDR1 тяжелой цепи (НС), имеющую последовательность SEQ ID NO: 27, НС CDR2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 28, и НС CDR3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 29, и легкую цепь, включающую CDR1 легкой цепи (LC), имеющую последовательность SEQ ID NO: 30, LC CDR2, имеющую последовательность SEQ ID NO: 31, и LC CDR3, имеющую последовательность SEQ ID NO: 32.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, где антитело включает: (а) тяжелую цепь, включающую последовательность SEQ ID NO: 53, и легкую цепь, включающую последовательность SEQ ID NO: 60; (b) тяжелую цепь, включающую последовательность SEQ ID NO: 53, и легкую цепь, включающую последовательность SEQ ID NO: 61; или (с) тяжелую цепь, включающую последовательность SEQ ID NO: 58, и легкую цепь, включающую последовательность SEQ ID NO: 65. В некоторых вариантах осуществления антитело включает тяжелую цепь и легкую цепь, где антитело включает: (а) тяжелую цепь, состоящую из последовательности SEQ ID NO: 53, и легкую цепь, состоящую из последовательности SEQ ID NO: 60; (b) тяжелую цепь, состоящую из последовательности SEQ ID NO: 53, и легкую цепь, состоящую из последовательности SEQ ID NO: 61; или (с) тяжелую цепь, состоящую из последовательности SEQ ID NO: 58, и легкую цепь, состоящую из последовательности SEQ ID NO: 65.
В некоторых вариантах осуществления антитело является гуманизированным антителом. В некоторых вариантах осуществления антитело выбрано из Fab, Fv, scFv, Fab' и (Fab')2. В некоторых вариантах осуществления антитело является химерным антителом. В некоторых вариантах осуществления антитело выбрано из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления антитело является IgG. В некоторых вариантах осуществления антитело является IgG4. В некоторых вариантах осуществления антитело является IgG4, включающим мутацию S241P по меньшей мере в одной константной области тяжелой цепи IgG4.
В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с человеческим CSF1R и/или связывается с CSF1R яванского макака. В некоторых вариантах осуществления антитело блокирует связывание лиганда с CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело блокирует связывание CSF1 и/или IL34 с CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело блокирует связывание CSF1 и IL-34 с CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело ингибирует лиганд-индуцированное фосфорилирование CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело ингибирует CSF1- и/или IL-34индуцированное фосфорилирование CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело связывается с человеческим CSF1R с аффинностью (KD) меньше 1 нМ. В некоторых вариантах осуществления антитело ингибирует реакции пролиферации и/или выживаемости моноцитов в присутствии CSF1 или IL34.
В некоторых вариантах осуществления предложена фармацевтическая композиция, включающая антитело, которое связывает CSF1R.
В некоторых вариантах осуществления предложены композиции, включающие антитела, которые связывают CSF1R, для применения в способах лечения человека или животных. В некоторых вариантах осуществления предложены антитела, которые связывают CSF1R, и композиции, включающие антитела, которые связывают CSF1R, для применения в способе лечения ревматоидного артрита у человека или животного.
Краткое описание фигур
На фиг. 1А-С показано выравнивание гуманизированных вариабельных областей тяжелых цепей каждого из гуманизированных антител huAb1 - huAb16, обсуждаемых в примере 1. Выделенные рамкой остатки являются аминокислотами в человеческой акцепторной последовательности, которые были заменены обратно на соответствующий мышиный остаток.
На фиг. 2А-С показано выравнивание гуманизированных вариабельных областей легких цепей каждого из гуманизированных антител huAb1 - huAb16, обсуждаемых в примере 1. Выделенные рамкой аминокислоты являются остатками в человеческой акцепторной последовательности, которые были заменены обратно на соответствующий мышиный остаток.
На фиг. 3А-В показано выведение из сыворотки huAb1 (FPA008) у людей после однократного введения в указанной дозе, как описано в примере 2.
На фиг. 4 показано выведение из сыворотки huAb1 (FPA008) у яванского макака и людей после однократного введения в указанной дозе, как описано в примере 2.
На фиг. 5А-В показаны уровни СТх в сыворотке у субъектов (А) с низким уровнем CSF1, которые вероятно получали плацебо, и (b) с высоким уровнем CSF1, которые вероятно получали huAbl, после однократного введения указанной дозы, как описано в примере 3.
На фиг. 6А-В показаны уровни TRAP5b в сыворотке у субъектов (А) с низким уровнем CSF1, кото- 4 037561 рые вероятно получали плацебо, и (b) с высоким уровнем CSF1, которые вероятно получали huAbl, после однократного введения указанной дозы, как описано в примере 3.
На фиг. 7 показана супрессия неклассических CD16+ моноцитов у субъектов в каждой группе введения (включая группы плацебо и huAb1) после однократного введения указанной дозы, как описано в примере 4.
На фиг. 8 показаны классические CD16- моноциты у субъектов в каждой группе введения (включая группы плацебо и huAb1) после однократного введения указанной дозы, как описано в примере 4.
На фиг. 9А-В показаны (А) уровни CSF1 в сыворотке и (В) уровни IL34 в сыворотке у субъектов, которые вероятно получали huAb1.
На фиг. 10 показана концентрация huAb1 в сыворотке в динамике у здоровых добровольцев (треугольники) и больных РА (незакрашенные кружки) после введения двух доз с интервалом две недели.
На фиг. 11 показано уменьшение неклассических CD16+ моноцитов у здоровых добровольцев после двух доз huAb1 (FPA008).
На фиг. 12 показано уменьшение неклассических CD16+ моноцитов у больных РА после двух доз huAb1.
Подробное описание
Предложены способы лечения заболеваний, включающие введение антител, которые связывают CSF1R и блокируют связывание лигандов CSF1 и IL-34. Как обсуждается в настоящем описании, антитела, которые связывают CSF1R и блокируют связывание лигандов CSF1 и IL-34, являются эффективными для лечения ревматоидного артрита. Авторы настоящего изобретения обнаружили, что введение таких антител людям уменьшало количество CD16+ моноцитов периферической крови у яванских макаков, но при этом не влияет на количество CD16- моноцитов периферической крови. CD16+ моноциты периферической крови являются моноцитами с высокой воспалительной активностью. См., например, ZieglerHeitbrock, J. Leukocyte Biol., 2007, 81: 584-592. Хотя ранее было установлено, что введение таких антител яванским макакам уменьшало количество CD16+ моноцитов, действие, наблюдаемое у людей, является существенно и неожиданно более длительным по сравнению с действием у яванского макака. Фактически, при однократной дозе лишь 1 мг/кг уровни CD16+ моноцитов были существенно супрессированы в течение по меньшей мере недели. При дозе 3 мг/кг уровни CD16+ моноцитов были по существу супрессированы в течение по меньшей мере четырех недель, тогда как однократная доза 10 мг/кг вызывала супрессию уровней CD16+ моноцитов в течение по меньшей мере восьми недель. Кроме того, введение таких антител людям также вызывало снижение уровней СТх в сыворотке и демонстрировало тенденцию к снижению уровней TRAP5b в сыворотке, при этом СТх и TRAP5b являются маркерами резорбции костной ткани. В совокупности эти результаты дают основание предположить, что антитела, которые связывают CSF1R и блокируют связывание лигандов CSF1 и IL-34, будут являться эффективным лечением ревматоидного артрита с нечастым введением.
Заголовки разделов, используемые в настоящем описании, служат исключительно в организационных целях и не должны рассмотриваться в качестве ограничения описанного объекта изобретения. Все источники, цитируемые в настоящем описании, включая заявки на патенты и патентные публикации, полностью включены посредством отсылки.
Определения
Если не определено иное, научно-технические термины, используемые в связи с настоящим изобретением, должны иметь значения, которые обычно известны средним специалистам в данной области техники. Кроме того, если из контекста не следует иное, термины в форме единственного числа должны включать множества, и термины в форме множественного числа должны включать форму единственного числа.
Примеры методик, используемых в отношении рекомбинантной ДНК, синтеза олигонуклеотидов, культуры тканей и трансформации (например, электропорации, липофекции), ферментных реакций, а также методики очистки, известны в уровне техники. Множество таких методик и процедур описаны, например, в Sambrook et al. Molecular Cloning: A Laboratory Manual (2nd ed., Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y. (1989)), среди прочих источников. Кроме того, примеры методик химических синтезов, химических анализов, получения, производства и применения лекарственных препаратов, и лечения больных также известны в уровне техники.
В настоящей заявке использование или означает и/или, если не указано иное. В рамках зависимого пункта формулы изобретения использование или обратно относится более чем к одному предыдущему независимому или зависимому пункту формулы изобретения только в качестве альтернативы. Кроме того, такие термины, как элемент или компонент, охватывают и элементы, и компоненты, включающие одну единицу, а также элементы и компоненты, которые включают более чем одну субъединицу, если прямо не указано иное.
При использовании в соответствии с настоящим описанием подразумевается, что следующие термины, если не указано иное, должны иметь следующие значения:
Термины молекула нуклеиновой кислоты и полинуклеотид могут использоваться попеременно и относятся к полимеру из нуклеотидов. Такие полимеры из нуклеотидов могут содержать природные
- 5 037561 и/или искусственные нуклеотиды и включают, без ограничения, ДНК, РНК и ПНК. Последовательность нуклеиновой кислоты относится к линейной последовательности нуклеотидов, которые включают молекулу нуклеиновой кислоты или полинуклеотид.
Термины полипептид и белок используются попеременно для обозначения полимера из аминокислотных остатков и не ограничены минимальной длиной. Такие полимеры из аминокислотных остатков могут содержать остатки природных или искусственных аминокислот и включают, без ограничения, пептиды, олигопептиды, димеры, тримеры и мультимеры из аминокислотных остатков. Данным определением охвачены как полноразмерные белки, так и их фрагменты. Термины также включают постэкспрессионные модификации полипептида, например, гликозилирование, сиалирование, ацетилирование, фосфорилирование и т.п. Кроме того, в рамках настоящего изобретения полипептид относится к белку, который включает модификации, такие как делеции, добавления и замены (как правило, консервативного характера), в нативной последовательности, при условии, что белок сохраняет требуемую активность. Эти модификации могут быть преднамеренными, например, в результате сайт-направленного мутагенеза, или могут быть случайными, например, в результате мутаций организмов-хозяев, которые продуцируют белки, или в результате ошибок при ПЦР-амплификации.
Термин CSF1R относится в настоящем описании к полноразмерному CSF1R, который включает N-концевой ECD, трансмембранный домен и внутриклеточный тирозинкиназный домен, с или без Nконцевой лидерной последовательности. В некоторых вариантах осуществления CSF1R является человеческим CSF1R, имеющим аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2.
Термин внеклеточный домен CSF1R (ECD CSF1R) при использовании в настоящем описании относится к полипептиду CSF1R, который не имеет внутриклеточного и трансмембранного доменов. Домены ECD CSF1R включают полноразмерный ECD CSF1R и фрагменты ECD CSF1R, которые способны к связыванию CSF1R и/или IL-34. Человеческий полноразмерный ECD CSF1R определен в настоящем описании как включающий любые аминокислоты 1-512 (то есть включающий лидерную последовательность) или аминокислоты 20-512 (то есть не имеющий лидерной последовательности) SEQ ID NO: 2. В некоторых вариантах осуществления фрагмент человеческого ECD CSF1R включает аминокислоты 20-506 из SEQ ID NO: 2 (см. SEQ ID NO: 5). В некоторых вариантах осуществления человеческий фрагмент CSF1R оканчивается на аминокислоте 507, 508, 509, 510 или 511. В некоторых вариантах осуществления ECD CSF1R супо включает последовательность SEQ ID NO: 7 (с лидерной последовательностью) или аминокислоты 20-506 из SEQ ID NO: 7 (без лидерной последовательности).
В отношении антител против CSF1R термины активный или активность, или функция, а также их грамматические варианты, используются для обозначения способности ингибировать (блокирующие или антагонистические антитела) или имитировать (агонистические антитела) по меньшей мере одну из предыдущих активностей. Антитела и фрагменты антител, называемые функциональными, отличаются наличием таких свойств.
Иммунологическая активность относится только к способности индуцировать продукцию антитела против антигенного эпитопа, которым обладает нативный или природный полипептид CSF1R.
Термин антитело при использовании в настоящем описании относится к молекуле, включающей по меньшей мере определяющую комплементарность область (CDR) 1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи и, по меньшей мере, CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, где молекула способна к связыванию с антигеном. Термин антитело включает, без ограничения, фрагменты, которые являются способными к связыванию с антигеном, такие как Fv, одноцепочечный Fv (scFv), Fab, Fab' и (Fab')2. Термин антитело также включает, без ограничения, химерные антитела, гуманизированные антитела и антитела из организмов различных видов, таких как мышь, человек, яванский макак и т.д.
В некоторых вариантах осуществления антитело включает вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления антитело включает по меньшей мере одну тяжелую цепь, включающую вариабельную область тяжелой цепи и, по меньшей мере, часть константной области тяжелой цепи и по меньшей мере одну легкую цепь, включающую вариабельную область легкой цепи и по меньшей мере часть константной области легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления антитело включает две тяжелых цепи, где каждая тяжелая цепь включает вариабельную область тяжелой цепи и по меньшей мере часть константной области тяжелой цепи, и две легких цепи, где каждая легкая цепь включает вариабельную область легкой цепи и по меньшей мере часть константной области легкой цепи. При использовании в настоящем описании одноцепочечный Fv (scFv) или любое другое антитело, которые включают, например, одну полипептидную цепь, включающую все шесть CDR (три CDR тяжелой цепи и три CDR легкой цепи), как полагают, имеют тяжелую цепь и легкую цепь. В некоторых таких вариантах осуществления тяжелая цепь является областью антитела, которая включает три CDR тяжелой цепи, и легкая цепь является областью антитела, которая включает три CDR легкой цепи.
Термин вариабельная область тяжелой цепи при использовании в настоящем описании относится к области, включающей CDR1 тяжелой цепи, каркасную область (FR) 2, CDR2, FR3 и CDR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи также включает, по меньшей мере, часть FR1 и/или, по меньшей мере, часть FR4. В некоторых вариантах осуществления CDR1 тяжелой
- 6 037561 цепи соответствует остаткам 26-35 согласно нумерации Кэбата; CDR2 тяжелой цепи соответствует остаткам 50-65 согласно нумерации Кэбата; и CDR3 тяжелой цепи соответствует остаткам 95-102 согласно нумерации Кэбата. См., например, Rabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 and 1991, NIH, Bethesda, Md.); и фиг. 1. В некоторых вариантах осуществления CDR1 тяжелой цепи соответствует остаткам 31-35 согласно нумерации Кэбата; CDR2 тяжелой цепи соответствует остаткам 50-65 согласно нумерации Кэбата; и CDR3 тяжелой цепи соответствует остаткам 95-102 согласно нумерации Кэбата. См. там же.
Термин константная область тяжелой цепи при использовании в настоящем описании относится к области, включающей по меньшей мере три константных домена тяжелой цепи, CH1, CH2 и CH3. Неограничивающие примеры константных областей тяжелой цепи включают γ, δ и α. Неограничивающие примеры константных областей тяжелой цепи также включают ε и μ. Каждая тяжелая константная область соответствует изотипу антитела. Например, антитело, включающее константную область γ, является антителом IgG, антитело, включающее константную область δ, является антителом IgD, и антитело, включающее константную область α, является антителом IgA. Кроме того, антитело, включающее константную область μ, является антителом IgM, и антитело, включающее константную область ε, является антителом IgE. Некоторые изотипы также могут подразделяться на субклассы.
Например, антитела IgG включают, без ограничения, антитела IgG1 (включающее константную область γ1) , IgG2 (включающее константную область γ2), IgG3 (включающее константную область γ3) и IgG4 (включающее константную область γ4); антитела IgA включают, без ограничения, антитела IgA1 (включающее константную область α1) и IgA2 (включающее константную область α2); и антитела IgM включают, без ограничения, IgM1 и IgM2.
В некоторых вариантах осуществления константная область тяжелой цепи включает одну или более мутаций (или замен), добавлений или делеций, которые придают антителу требуемое свойство. Неограничивающим примером мутации является мутация S241P в шарнирной области IgG4 (между константными доменами СН1 и СН2), которая меняет мотив CPSCP в IgG4 на СРРСР, который аналогичен соответствующему мотиву в IgG1. Такая мутация в некоторых вариантах осуществления приводит к более стабильному антителу IgG4. См., например, Angal et al., Mol. Immunol. 30: 105-108 (1993); Bloom et al., Prot. Sci. 6: 407-415 (1997); Schuurman et al., Mol. Immunol. 38: 1-8 (2001).
Термин тяжелая цепь при использовании в настоящем описании относится к полипептиду, включающему по меньшей мере вариабельную область тяжелой цепи, с или без лидерной последовательности. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь включает, по меньшей мере, часть тяжелой цепи константной области. Термин полноразмерная тяжелая цепь при использовании в настоящем описании относится к полипептиду, включающему вариабельную область тяжелой цепи и константную область тяжелой цепи, с или без лидерной последовательности.
Термин вариабельная область легкой цепи при использовании в настоящем описании относится к области, включающей CDR1 легкой цепи, каркасную область (FR) 2, CDR2, FR3 и CDR3. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи также включает FR1 и/или FR4. В некоторых вариантах осуществления CDR1 легкой цепи соответствует остаткам 24-34 согласно нумерации Кэбата; CDR2 легкой цепи соответствует остаткам 50-56 согласно нумерации Кэбата; и CDR3 легкой цепи соответствует остаткам 89-97 согласно нумерации Кэбата. См., например, Rabat Sequences of Proteins of Immunological Interest (1987 and 1991, NIH, Bethesda, Md.); и фиг. 1.
Термин константная область легкой цепи при использовании в настоящем описании относится к области, включающей константный домен легкой цепи, CL. Неограничивающие примеры константных областей легкой цепи включают λ и к.
Термин легкая цепь при использовании в настоящем описании относится к полипептиду, включающему, по меньшей мере, вариабельную область легкой цепи, с или без лидерной последовательности. В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает, по меньшей мере, часть константной области легкой цепи. Термин полноразмерная легкая цепь при использовании в настоящем описании относится к полипептиду, включающему вариабельную область легкой цепи и константную область легкой цепи, с или без лидерной последовательности.
Химерное антитело при использовании в настоящем описании относится к антителу, включающему по меньшей мере одну вариабельную область из первого биологического вида (такого как мышь, крыса, яванский макак и т.д.) и по меньшей мере одну константную область из второго биологического вида (такого как человек, яванский макак и т.д.). В некоторых вариантах осуществления химерное антитело включает по меньшей мере одну мышиную вариабельную область и по меньшей мере одну человеческую константную область. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело включает по меньшей мере одну вариабельную область яванского макака и по меньшей мере одну человеческую константную область. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело включает по меньшей мере одну крысиную вариабельную область и по меньшей мере одну мышиную константную область. В некоторых вариантах осуществления все вариабельные области химерного антитела получены из первого биологического вида, а все константные области химерного антитела получены из второго биологиче
- 7 037561 ского вида.
Гуманизированное антитело при использовании в настоящем описании относится к антителу, в котором по меньшей мере одна аминокислота в каркасной области нечеловеческой вариабельной области была заменена соответствующей аминокислотой из человеческой вариабельной области. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело включает по меньшей мере одну человеческую константную область или ее фрагмент. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело яляется Fab, scFv, (Fab')2 и т.д.
CDR-привитое антитело при использовании в настоящем описании относится к гуманизированному антителу, в котором определяющие комплементарность области (CDR) первого (не относящегося к человеку) биологического вида были привиты на каркасные области (FR) второго (относящегося к человеку) биологического вида.
Человеческое антитело при использовании в настоящем описании относится к антителам, вырабатываемым у людей, антителам, вырабатываемым у не относящихся к человеку животных, которые включают человеческие гены иммуноглобулинов, таким как XenoMouse®, и антителам, отобранным при использовании in vitro методов, таких как фаговый дисплей, где репертуар антител основан на человеческих иммуноглобулиновых последовательностях.
Термин лидерная последовательность относится к последовательности из аминокислотных остатков, расположенной на N-конце полипептида, которая способствует секреции полипептида из клетки млекопитающего. Лидерная последовательность может быть отщеплена после экспорта полипептида из клетки млекопитающего, с образованием зрелого белка. Лидерные последовательности могут быть природными или синтетическими, при этом они могут быть гетерологичными или гомологичными по отношению к белку, к которому они присоединены. Примеры лидерных последовательностей включают, без ограничения, лидерные последовательности антител, такие как, например, аминокислотные последовательности SEQ ID NO: 3 и 4, которые соответствуют лидерным последовательностям легких и тяжелых цепей человека, соответственно. Неограничивающие примеры лидерных последовательностей также включают лидерные последовательности из гетерологичных белков. В некоторых вариантах осуществления антитело не имеет лидерной последовательности. В некоторых вариантах осуществления антитело включает по меньшей мере одну лидерную последовательность, которая может быть выбрана из нативных лидерных последовательностей антител и гетерологичных лидерных последовательностей.
Термин вектор используется для описания полинуклеотида, который может быть сконструирован так, чтобы он содержал клонируемый полинуклеотид или полинуклеотиды, которые могут реплицироваться в клетке-хозяине. Вектор может включать один или более следующих элементов: точку начала репликации, одну или более регуляторных последовательностей (таких как, например, промоторы и/или энхансеры), которые регулируют экспрессию представляющего интерес полипептида, и/или один или более селективных маркерных генов (таких как, например, гены устойчивости к антибиотикам и гены, которые могут использоваться в колориметрических анализах, например, β-галактозидаза). Термин вектор экспрессии относится к вектору, который используется для экспрессии представляющего интерес полипептида в клетке-хозяине.
Клетка-хозяин относится к клетке, которая может быть или являлась реципиентом вектора или выделенного полинуклеотида. Клетки-хозяева могут быть прокариотическими клетками или эукариотическими клетками. Примеры эукариотических клеток включают клетки млекопитающих, такие как клетки приматов или клетки не относящихся к приматам животных; клетки грибов, таких как дрожжи; клетки растений; и клетки насекомых. Неограничивающие примеры клеток млекопитающих включают, без ограничения, клетки NSO, клетки PER.C6® (Crucell) и клетки 293 и СНО, а также их производные, такие как клетки 293-6Е и DG44, соответственно.
Термин выделенный при использовании в настоящем описании относится к молекуле, которая была отделена, по меньшей мере, от некоторых из компонентов, с которыми ее обычно обнаруживают в природе. Например, полипептид называют выделенным, когда он отделен, по меньшей мере, от некоторых из компонентов клетки, в которой он был синтезирован. Когда полипептид секретируется клеткой после экспрессии, физическое отделение супернатанта, содержащего полипептид из клетки, в которой он был синтезирован, считается выделением полипептида. Аналогичным образом, полинуклеотид называют выделенным, когда он не является частью более крупного полинуклеотида (такого как, например, геномная ДНК или митохондриальная ДНК, в случае ДНК полинуклеотида), в котором его обычно обнаруживают в природе, или отделен, по меньшей мере, от некоторых из компонентов клетки, в которой он был синтезирован, например, в случае РНК полинуклеотида. Таким образом, ДНК полинуклеотид, который содержится в векторе в клетке-хозяине, может быть указан как выделенный при условии, что такой полинуклеотид не присутствует в таком векторе в природе.
Термины субъект и больной используются в настоящем описании попеременно для обозначения человека. В некоторых вариантах осуществления также предложены способы лечения других млекопитающих, включающих, без ограничения перечисленными, грызунов, обезьян, кошачьих, псовых, лошадиных, бычьих, свинообразных, овец, коз, лабораторных млекопитающих, сельскохозяйственных млеко- 8 037561 питающих, спортивных млекопитающих и домашних млекопитающих.
При использовании в настоящем описании ревматоидный артрит или РА относится к подтвержденному состоянию болезни, которое может быть диагностировано согласно пересмотренным в 2000 году критериям Американской ревматологической ассоциации для классификации РА или любым подобным критериям. В некоторых вариантах осуществления термин ревматоидный артрит относится к хроническому аутоиммунному заболеванию, характеризуемому, прежде всего, воспалением выстилки (синовиальной оболочки) суставов, которое может приводить к повреждению суставов, вызывающему хроническую боль, потерю функции и инвалидизацию. Поскольку РА может воздействовать на многие органы тела, включая кожу, легкие и глаза, его называют системным заболеванием.
Термин ревматоидный артрит включает не только активный и ранний РА, но также и начальный РА, как определено ниже. Физиологические показатели РА включают симметричное опухание суставов, которое характерно, хотя и не является непременным при РА. Веретенообразное опухание проксимальных межфаланговых (ПМФ) суставов рук, а также пястно-фаланговых (ПФ), обычно часто поражаются запястья, локти, колени, лодыжки и плюснефаланговые (ПЛФ) суставы, при этом опухание легко обнаруживается. Боль при пассивном движении является наиболее чувствительным тестом на воспаление сустава, причем воспаление и структурная деформация часто ограничивают диапазон движения пораженного сустава. Типичные видимые изменения включают локтевое отведение пальцев в ПФ суставах, переразгибание или пересгибание ПФ и ПМФ суставов, сгибательные контрактуры локтей и подвывих запястных костей и пальцев ног. Субъект с РА может быть резистентным к болезнь-модифицирующему противоревматическому средству (БМПРС) и/или нестероидному противовоспалительному средству (НПВС). Неограничивающие примеры БМПРС включают гидроксихлорохин, сульфасалазин, метотрексат (МТХ), лефлуномид, этанерцепт, инфликсимаб (плюс МТХ перорально и подкожно), имуран, Dпеницилламин, соли золота (перорально), соли золота (внутримышечно), миноциклин, циклоспорин, включая циклоспорин А и циклоспорин для наружного применения, стафилококковый белок A (Goodyear and Silverman, J. Exp. Med., 197(9):1125-1139 (2003)), включая их соли и производные, и т.д. Другие кандидаты для терапии согласно настоящему изобретению включают тех, которые испытывали неадекватную реакцию на предыдущее или текущее лечение ингибиторами ФНО, такими как этанерцепт, инфликсимаб и/или адалимумаб вследствие токсичности или недостаточной эффективности.
Больной с активным ревматоидным артритом означает больного с активными и нелатентными симптомами РА. Субъекты с ранним активным ревматоидным артритом являются субъектами с активным РА, который диагностировали в течение по меньшей мере 8 недель, но не больше чем четыре года назад, согласно пересмотренным в 1987 году критериям ACR для классификации РА.
Субъекты с ранним ревматоидным артритом являются субъектами с РА, который диагностировали в течение по меньшей мере восьми недель, но больше чем четыре года назад, согласно пересмотренным в 1987 году критериям ACR для классификации РА. РА включает, например, ювенильный РА, ювенильный идиопатический артрит (ЮИА) или ювенильный РА (ЮРА).
Больные с начальным ревматоидным артритом имеют ранний полиартрит, который не полностью соответствует критериям ACR для диагноза РА, в сочетании с наличием РА-специфических прогностических биомаркеров, таких как антитела к ЦТ ЦП и общий эпитоп. Они включают пациентов с положительными антителами к ЦТ ЦП, у которых присутствует полиартрит, но еще нет диагноза РА, и которые подвергаются высокому риску продолжения развития истинных ACR критериев РА (вероятность 95%).
Повреждение сустава используется в самом широком смысле и относится к повреждению или частичному или полному разрушению любой части одного или более суставов, включая соединительную ткань и хрящ, где повреждение включает структурное и/или функциональное повреждение любой причины и может вызывать или не вызывать боль в суставах/артралгию. Это включает, без ограничения, повреждение суставов, связанное с или вызванное воспалительным заболеванием суставов, а также невоспалительным заболеванием суставов. Это повреждение может быть вызвано любым состоянием, таким как аутоиммунное заболевание, в особенности артрит, и особенно РА. Примеры таких состояний включают острый и хронический артрит, ревматоидный артрит (включая ювенильный РА, ювенильный идиопатический артрит (ЮИА) и ювенильный ревматоидный артрит (ЮРА)), а также стадии, такие как ревматоидный синовит, подагра или подагрический артрит, острый иммунологический артрит, хронический воспалительный артрит, дегенеративный артрит, вызванный коллагеном II типа артрит, инфекционный артрит, септический артрит, артрит Лайма, пролиферативный артрит, псориатический артрит, болезнь Стилла, артрит позвоночника, остеоартроз, артрит хронический прогрессирующий, артрит деформирующий, полиартрит хронический первичный, реактивный артрит, климактерический артрит, артрит в результате снижения уровня эстрогенов и анкилозирующий спондилит/ревматоидный спондилит), ревматическое аутоиммунное заболевание кроме РА и значительное системное поражение на фоне РА (включающее, без ограничения, васкулит, фиброз легких или синдром Фелти). В рамках настоящего описания, суставы являются точками контакта между элементами скелета (позвоночного, такого как животное), части которых окружают и поддерживают его и включают, без ограничения, например, бедра, суставы между позвонками позвоночного столба, суставы между позвоночным столбом и тазом (крестцовоподвзошные сочленения), суставы, в которых сухожилия и связки присоединены к костям, суставы меж- 9 037561 ду ребрами и позвоночным столбом, плечи, колени, стопы, локти, кисти рук, пальцы, лодыжки и пальцы ног, но особенно суставы в кистях рук и стопах.
Термин CD16+ нарушение означает заболевание, при котором CD16+ моноциты млекопитающего вызывают, опосредуют или иным образом способствуют развитию патологии у млекопитающего. Также включены заболевания, при которых снижение CD16+ моноцитов оказывает благоприятное воздействие на прогрессию болезни. В рамки данного термина включены CD16+ воспалительные заболевания, инфекционные заболевания, иммуннодефицитные заболевания, неоплазия и т.д. В некоторых вариантах осуществления CD16+ воспалительные заболевания включают воспалительные заболевания, которые не поддаются терапии метотрексатом. В некоторых вариантах осуществления CD16+ воспалительные заболевания включают метотрексат-резистентный ревматоидный артрит, метотрексат-резистентный рассеянный склероз, метотрексат-резистентную волчанку, метотрексат-резистентное воспалительное заболевание кишечника, метотрексат-резистентную болезнь Крона, метотрексат-резистентную астму и метотрексат-резистентный псориаз. В некоторых вариантах осуществления больные, имеющие метотрексатрезистентные заболевания, такие как метотрексат-резистентный ревматоидный артрит, указаны как больные с неполным ответом на метотрексат или больные с недостаточным ответом на метотрексат.
Примеры CD16+ нарушений, которые можно лечить согласно изобретению, включают, без ограничения перечисленными, системную красную волчанку, ревматоидный артрит, ювенильный хронический артрит, спондилоартропатии, системный склероз (склеродермию), идиопатические воспалительные миопатии (дерматомиозит, полимиозит), синдром Шегрена, системный васкулит, саркоидоз, аутоиммунную гемолитическую анемию (иммунную панцитопению, пароксизмальную ночную гемоглобинурию), аутоиммунную тромбоцитопению (идиопатическую тромбоцитопеническую пурпуру, иммунноопосредованную тромбоцитопению), тиреоидит (болезнь Грейвса, тиреоидит Хашимото, ювенильный лимфоцитарный тиреоидит, атрофический тиреоидит), сахарный диабет, иммунноопосредованную болезнь почек (гломерулонефрит, тубулоинтерстициальный нефрит), демиелинизирующие заболевания центральной и периферической нервных систем, такие как рассеянный склероз, идиопатическую демиелинизирующую полинейропатию или синдром Гийена-Барре и хроническую воспалительную демиелинизирующаю полинейропатию, заболевания печени и желчевыводящих путей, такие как инфекционный гепатит (гепатит А, В, С, D, Е и другие негепатотропные вирусы), аутоиммунный хронический активный гепатит, первичный билиарный цирроз, гранулематозный гепатит и склерозирующий холангит, воспалительное заболевание кишечника (ВЗК), включая неспецифический язвенный колит: болезнь Крона, глютеновую энтеропатию и болезнь Уиппла, аутоиммунные или иммунноопосредованные кожные заболевания, включая буллезные кожные заболевания, многоформную экссудативную эритему и контактный дерматит, псориаз, аллергические заболевания, такие как астму, аллергический ринит, аллергический дерматит, пищевую гиперчувствительность и крапивницу, иммунологические заболевания легких, такие как эозинофильную пневмонию, идиопатический фиброз легких и пневмонит гиперчувствительности, связанные с трансплантацией заболевания, включающие отторжение трансплантата и реакцию трансплантат против хозяина; фиброз, включая почечный фиброз и печеночный фиброз, сердечнососудистое заболевание, включая атеросклероз и ишемическую болезнь сердца, сердечно-сосудистые явления, связанные с хроническим заболеванием почек, инфарктом миокарда и застойной сердечной недостаточностью, диабет, включая диабет II типа, облитерирующий бронхиолит с организующейся пневмонией (ОБОП), гемофагоцитарный синдром, синдром активации макрофагов, саркоидоз и периодонтит. Инфекционные заболевания, включая вирусные заболевания, такие как СПИД (ВИЧ-инфекция), гепатит А, В, С, D и Е, герпес и т.д., бактериальные инфекции, микозы, протозойные инфекции и паразитарные инфекции.
Лечение при использовании в настоящем описании относится к терапевтическому лечению и к профилактическим или превентивным мерам, когда цель заключается в предотвращении или замедлении (уменьшении тяжести) целевого патологического состояния или нарушения. В некоторых вариантах осуществления термин лечение охватывает любое введение или применение терапевтического средства при заболевании у млекопитающего, включая человека, и включает ингибирование или замедление заболевания или прогрессии заболевания; частичное или полное устранение заболевания, например, вызывая регрессию или возобновление или восстанавление утерянной, отсутствующей или нарушенной функции; стимуляцию неэффективного процесса; или уменьшение тяжести плато заболевания. Термин лечение также включает уменьшение тяжести любой фенотипической характеристики и/или уменьшение числа случаев, степени или вероятности появления такой характеристики. Лица, нуждающиеся в лечении, включают лиц, которые уже имеют нарушение, а также лиц, склонных к развитию нарушения, или лиц, у которых требуется предотвратить развитие нарушения.
Длительное введение относится к введению средства в непрерывном режиме, в противоположность ударному режиму, с целью сохранения начального терапевтического действия (активности) в течение длительного периода времени. Периодическое введение является лечением, которое не осуществляется последовательно без прерывания, а скорее является циклическим по своему характеру.
Термин эффективное количество или терапевтически эффективное количество относится к количеству лекарственного средства, эффективного для лечения заболевания или нарушения у субъекта. В некоторых вариантах осуществления эффективное количество относится к количеству, эффективному, в
- 10 037561 необходимых дозировках и в течение необходимых периодов времени, для достижения требуемого терапевтического или профилактического результата. Терапевтически эффективное количество антитела против CSF1R изобретения может изменяться в зависимости от таких факторов, как состояние болезни, возраст, пол и вес лица, а также от способности антитела против CSF1R вызывать требуемый ответ у лица. Терапевтически эффективное количество охватывает количество, в котором любые токсические или нежелательные воздействия антитела против CSF1R перевешиваются терапевтически благоприятными воздействиями.
Профилактически эффективное количество относится к количеству, эффективному, в необходимых дозировках и в течение необходимых периодов времени, для достижения требуемого профилактического результата. Как правило, но не обязательно, поскольку профилактическая доза используется у субъектов до или на более ранней стадии заболевания, профилактически эффективное количество может быть меньше терапевтически эффективного количества.
Введение в комбинации с одним или более другими терапевтическими средствами включает одновременное (параллельное) и последовательное введение в любом порядке.
Фармацевтически приемлемый носитель относится к нетоксичному твердому, полутвердому или жидкому наполнителю, разбавителю, инкапсулирующему материалу, вспомогательному веществу или носителю, стандартному в данной области техники для применения с терапевтическим средством, которые вместе составляют фармацевтическую композицию для введения субъекту. Фармацевтически приемлемый носитель является нетоксичным для реципиентов в применяемых дозировках и концентрациях и является совместимым с другими компонентами лекарственной формы.
Фармацевтически приемлемый носитель подходит для применяемой лекарственной формы. Например, если терапевтическое средство надлежит вводить перорально, носитель может быть желатиновой капсулой. Если терапевтическое средство надлежит вводить подкожно, носитель в идеальном варианте не раздражает кожу и не вызывает реакции на участке инъекции.
Антитела против CSF1R
Антитела против CSF1R включают, без ограничения, гуманизированные антитела, химерные антитела, мышиные антитела, человеческие антитела и антитела, включающие CDR тяжелой цепи и/или легкой цепи, обсуждаемые в настоящей заявке.
Примеры гуманизированных антител
В некоторых вариантах осуществления предложены гуманизированные антитела, которые связывают CSF1R.
Гуманизированные антитела могут применяться в качестсве терапевтических молекул, поскольку гуманизированные антитела уменьшают или исключают иммунный ответ у человека против нечеловеческих антител (такой как ответ человеческих антител против иммуноглобулинов мыши (НАМА)), который может приводить к иммунному ответу против терапевтического антитела и уменьшать эффективность терапевтического средства.
Неограничивающие примеры гуманизированных антител включают huAb1 - huAb16, описанные в настоящей заявке. Неограничивающие примеры гуманизированных антител также включают антитела, включающие вариабельную область тяжелой цепи антитела, выбранного из huAb1 - huAb16 и/или вариабельной области легкой цепи антитела, выбранного из huAb1 - huAb16. Неограничивающие примеры гуманизированных антител включают антитела, включающие вариабельную область тяжелой цепи, выбранную из SEQ ID NO: 39-45, и/или вариабельную область легкой цепи, выбранную из SEQ ID NO: 4652. Примеры гуманизированных антител также включают, без ограничения, гуманизированные антитела, включающие CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи и/или CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи антитела, выбранного из 0301, 0302 и 0311.
В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело против CSF1R включает CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи и/или CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи антитела, выбранного из 0301, 0302 и 0311. Неограничивающие примеры гуманизированных антител против CSF1R включают антитела, включающие наборы CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, выбранные из: SEQ ID NO: 15, 16 и 17; SEQ ID NO: 21, 22 и 23; и SEQ ID NO: 27, 28 и 29. Неограничивающие примеры гуманизированных антител против CSF1R также включают антитела, включающие наборы CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, выбранные из: SEQ ID NO: 18, 19 и 20; SEQ ID NO: 24, 25 и 26; и SEQ ID NO: 30, 31 и 32.
Неограничивающие примеры гуманизированных антител против CSF1R включают антитела, включающие наборы CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, и CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи в Таблице 1 (показаны SEQ ID NO; последовательности см. в табл. 8). В каждой строке табл. 1 показаны CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, и CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи примера антитела.
- 11 037561
Таблица 1. CDR тяжелой цепи и легкоц цепи
Тяжелая цепь Легкая цепь
Ат CDR1 CDR2 CDR3 CDR1 CDR2 CDR3
SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID SEQ ID
0301 15 16 17 18 19 20
0302 21 22 23 24 25 26
0311 27 28 29 30 31 32
Другие примеры гуманизированных антител
В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело против CSF1R включает тяжелую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 9, 11, 13 и 39-45, и где антитело связывает CSF1R. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело против CSF1R включает легкую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 10, 12, 14 и 46-52, где антитело связывает CSF1R. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело против CSF1R включает тяжелую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 9, 11, 13 и 39-45; и легкую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 10, 12, 14 и 46-52; где антитело связывает CSF1R.
При использовании в настоящем описании, является ли специфический полипептид, например, по меньшей мере на 95% идентичным аминокислотной последовательности, можно определить с помощью, например, компьютерной программы. При определении, является ли специфическая последовательность, например, на 95% идентичной референсной последовательности, процент идентичности вычисляют по полной длине референсной аминокислотной последовательности.
В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело против CSF1R включает по меньшей мере один из CDR, обсуждаемых в настоящей заявке. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело против CSF1R включает по меньшей мере один CDR, выбранный из CDR1 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR2 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR3 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR1 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR2 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, и CDR3 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело против CSF1R включает по меньшей мере один мутантный CDR на основе CDR, обсуждаемого в настоящей заявке, где мутантный CDR включает 1, 2, 3 или 4 аминокислотных замены по сравнению с CDR, обсуждаемым в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления одна или более аминокислотных замен являются консервативными аминокислотными заменами. Специалист в данной области техники может выбрать одну или более подходящих консервативных аминокислотных замен для конкретной последовательности CDR, где подходящие консервативные аминокислотные замены не предполагают значительного изменения связывающих свойств антитела, включающего мутантный CDR.
Примеры гуманизированных антител против CSF1R также включают антитела, которые конкурируют за связывание с CSF1R с антителом, описанным в настоящей заявке. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено гуманизированное антитело против CSF1R, которое конкурирует за связывание с CSF1R с антителом, выбранным из Fabs 0301, 0302 и 0311; и вариантами бивалентных (то есть имеющих две тяжелых цепи и две легких цепи) антител на основе указанных Fabs.
Примеры гуманизированных константных областей антител В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело, описанное в настоящей заявке, включает одну или более человеческих константных областей. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область тяжелой цепи имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область легкой цепи имеет изотип, выбранный из к и λ. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых таких вариантах осу- 12 037561 ществления гуманизированное антитело, описанное в настоящей заявке, включает мутацию S241P в константной области IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область IgG4 человека и человеческую к легкую цепь.
Выбор константной области тяжелой цепи может определять, будет ли антитело обладать эффекторной функцией in vivo. Такая эффекторная функция в некоторых вариантах осуществления включает антителозависимую клеточноопосредованную цитотоксичность (ADCC) и/или комплементзависимую цитотоксичность (CDC), и может приводить к киллингу клетки, с которой связывается антитело. В некоторых способах лечения, включая способы лечения некоторых типов рака, киллинг клеток может требоваться, например, когда антитело связывается с клеткой, которая способствует поддержанию или росту опухоли. Примеры клеток, которые могут способствовать поддержанию или росту опухоли, включают, без ограничения, опухолевые клетки непосредственно, клетки, которые способствуют развитию сосудистой сети в опухоли, и клетки, которые обеспечивают лиганды, факторы роста или контррецепторы, которые способствуют или поддерживают рост опухоли или выживаемость опухоли. В некоторых вариантах осуществления, когда желательна эффекторная функция, выбирают антитело против CSF1R, включающее тяжелую цепь IgG1 человека или тяжелую цепь IgG3 человека.
В некоторых способах лечения эффекторная функция может быть нежелательной. Например, в некоторых вариантах осуществления может быть желательным, чтобы антитела, применяемые в лечении РА, не имели эффекторной функции. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления антитела против CSF1R, разработанные для лечения рака, могут не подходить для применения в лечении РА. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R, которое не обладает значимой эффекторной функцией, применяется в лечении РА. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R для лечения РА включает константную область тяжелой цепи IgG4 или IgG2 человека. В некоторых вариантах осуществления константная область IgG4 включает мутацию S241P.
Антитело может быть гуманизировано любым способом. Неограничивающие примеры способов гуманизации включают способы, описанные, например, в патентах США 5,530,101; 5,585,089; 5,693,761; 5,693,762; 6,180,370; Jones et al., Nature 321: 522-525 (1986); Riechmann et al., Nature 332: 323-27 (1988); Verhoeyen et al., Science 239: 1534-36 (1988); и в патентной публикации США 2009/0136500.
Как отмечено выше, гуманизированное антитело является антителом, в котором по меньшей мере одна аминокислота в каркасной области нечеловеческой вариабельной области была заменена аминокислотой из соответствующего положения в человеческой каркасной области. В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере две, по меньшей мере три, по меньшей мере четыре, по меньшей мере пять, по меньшей мере шесть, по меньшей мере семь, по меньшей мере восьмь, по меньшей мере девять, по меньшей мере 10, по меньшей мере 11, по меньшей мере 12, по меньшей мере 15 или по меньшей мере 20 аминокислот в каркасных областях нечеловеческой вариабельной области заменены аминокислотой из одного или более соответствующих положений в одной или более человеческих каркасных областях.
В некоторых вариантах осуществления некоторые из соответствующих человеческих аминокислот, используемых для замены, происходят из каркасных областей различных человеческих генов иммуноглобулинов. Таким образом, в некоторых таких вариантах осуществления одна или более нечеловеческих аминокислот могут быть заменены соответствующими аминокислотами из человеческой каркасной области первого человеческого антитела или могут кодироваться первым человеческим геном иммуноглобулина, одна или более нечеловеческих аминокислот могут быть заменены соответствующими аминокислотами из человеческой каркасной области второго человеческого антитела или могут кодироваться вторым человеческим геном иммуноглобулина, одна или более нечеловеческих аминокислот могут быть заменены соответствующими аминокислотами из человеческой каркасной области третьего человеческого антитела или могут кодироваться третьим человеческим геном иммуноглобулина, и т.д. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления все соответствующие человеческие аминокислоты, используемые для замены в одной каркасной области, например, FR2, не должны обязательно происходить из одного и того же человеческого каркаса. В некоторых вариантах осуществления, тем не менее, все соответствующие человеческие аминокислоты, используемые для замены, происходят из одного и того же человеческого антитела или кодируются одним и тем же человеческим геном иммуноглобулина.
В некоторых вариантах осуществления антитело гуманизировано путем полной замены одной или более каркасных областей соответствующими человеческими каркасными областями. В некоторых вариантах осуществления выбирают человеческую каркасную область, которая обладает высшим уровнем гомологии с заменяемой нечеловеческой каркасной областью. В некоторых вариантах осуществления такое гуманизированное антитело является CDR-привитым антителом.
В некоторых вариантах осуществления после CDR-графтинга одна или более каркасных аминокислот заменяют обратно на соответствующую аминокислоту в мышиной каркасной области. Такие обратные мутации в некоторых вариантах осуществления проводят с целью сохранить одну или более каркасных аминокислот мыши, которые могут вносить вклад в структуру одного или более CDR, и/или которые могут участвовать в контактах с антигеном и/или могут вносить вклад в общую структурную целостность антитела. В некоторых вариантах осуществления десять или меньше, девять или меньше, во- 13 037561 семь или меньше, семь или меньше, шесть или меньше, пять или меньше, четыре или меньше, три или меньше, две или меньше, одна или ноль обратных мутаций введены в каркасные области антитела после
CDR-графтинга.
В некоторых вариантах осуществления гуманизированное антитело также включает человеческую константную область тяжелой цепи и/или человеческую константную область легкой цепи.
Примеры химерных антител
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R является химерным антителом. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает по меньшей мере одну нечеловеческую вариабельную область и по меньшей мере одну человеческую константную область. В некоторых таких вариантах осуществления все вариабельные области антитела против CSF1R являются нечеловеческими вариабельными областями, а все константные области антитела против CSF1R являются человеческими константными областями. В некоторых вариантах осуществления одна или более вариабельных областей химерного антитела являются мышиными вариабельными областями.
Человеческая константная область химерного антитела не должна быть того же изотипа, что и нечеловеческая константная область, если таковые вообще присутствуют, которую она заменяет. Химерные антитела обсуждаются, например, в патенте США 4,816,567; и Morrison et al. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81: 6851-55 (1984).
Неограничивающие примеры химерных антител включают химерные антитела, включающие вариабельные области тяжелой и/или легкой цепи антитела, выбранного из 0301, 0302 и 0311. Дополнительные неограничивающие примеры химерных антител включают химерные антитела, включающие CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи и/или CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи антитела, выбранного из 0301, 0302 и 0311.
Неограничивающие примеры химерных антител против CSF1R включают антитела, включающие следующие пары вариабельных областей тяжелой и легкой цепи: SEQ ID NO: 9 и 10; SEQ ID NO: 11 и 12; и SEQ ID NO: 13 и 14.
Неограничивающие примеры антител против CSF1R включают антитела, включающие набор CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, и CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, показанный выше в табл. 1.
Другие примеры химерных антител
В некоторых вариантах осуществления химерное антитело против CSF1R включает тяжелую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 9, 11, 13 и 39-45, где антитело связывает CSF1R. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело против CSF1R включает легкую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 10, 12, 14 и 4652, где антитело связывает CSF1R. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело против CSF1R включает тяжелую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 9, 11, 13 и 39-45; и легкую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 10, 12, 14 и 46-52; где антитело связывает CSF1R.
В некоторых вариантах осуществления химерное антитело против CSF1R включает по меньшей мере один из CDR, обсуждаемых в настоящей заявке. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления химерное антитело против CSF1R включает по меньшей мере один CDR, выбранный из CDR1 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR2 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR3 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR1 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR2 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, и CDR3 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления химерное антитело против CSF1R включает по меньшей мере один мутантный CDR на основе CDR, обсуждаемого в настоящей заявке, где мутантный CDR включает 1, 2, 3 или 4 аминокислотных замены по сравнению с CDR, обсуждаемым в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления одна или более аминокислотных замен являются консервативными аминокислотными заменами. Специалист в данной области техники может выбрать одну или более подходящих консервативных аминокислотных замен для конкретной последовательности CDR, где подходящие консервативные аминокислотные замены не предполагают значимого изменения связывающих свойств антитела, включающего мутантный CDR.
- 14 037561
Примеры химерных антител против CSF1R также включают химерные антитела, которые конкурируют за связывание с CSF1R с антителом, описанным в настоящей заявке. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено химерное антитело против CSF1R, которое конкурирует за связывание с CSF1R с антителом, выбранным из Fabs 0301, 0302 и 0311; и вариантами бивалентных (то есть имеющих две тяжелых цепи и две легких цепи) антител на основе указанных Fabs.
Примеры константных областей химерных антител В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в настоящей заявке, включает одну или более человеческих константных областей. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область тяжелой цепи имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область легкой цепи имеет изотип, выбранный из к и λ. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых таких вариантах осуществления химерное антитело, описанное в настоящей заявке, включает мутацию S241P в константной области IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления химерное антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область IgG4 человека и человеческую к легкую цепь.
Как отмечено выше, является ли желательной эффекторная функция, может зависеть от конкретного способа лечения, предпологаемого для антитела. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, когда необходима эффекторная функция, выбирают химерное антитело против CSF1R, включающее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления, когда эффекторная функция не требуется, выбирают химерное антитело против CSF1R, включающее константную область тяжелой цепи IgG4 или IgG2 человека.
Примеры человеческих антител
Человеческие антитела могут быть получены любым подходящим способом. Неограничивающие примеры способов включают получение человеческих антител в трансгенных мышах, которые включают локусы иммуноглобулина человека. См., например, Jakobovits et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90: 255155 (1993); Jakobovits et al., Nature 362: 255-8 (1993); Lonberg et al., Nature 368: 856-9 (1994); а также патенты США 5,545,807; 6,713,610; 6,673,986; 6,162,963; 5,545,807; 6,300,129; 6,255,458; 5,877,397; 5,874,299; и 5,545,806.
Неограничивающие примеры способов также включают получение человеческих антител при использовании библиотек фагового дисплея. См., например, Hoogenboom et al., J. Mol. Biol. 227: 381-8 (1992); Marks et al., J. Mol. Biol. 222: 581-97 (1991); и публикацию РСТ WO 99/10494.
В некоторых вариантах осуществления человеческое антитело против CSF1R связывается с полипептидом, имеющим последовательность SEQ ID NO: 1. Примеры человеческих антител против CSF1R также включают антитела, которые конкурируют за связывание с CSF1R с антителом, описанным в настоящей заявке. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено человеческое антитело против CSF1R, которое конкурирует за связывание с CSF1R с антителом, выбранным из Fabs 0301, 0302 и 0311, и вариант бивалентного (то есть имеющего две тяжелых цепи и две легких цепи) антитела на основе указанных Fabs.
В некоторых вариантах осуществления человеческое антитело против CSF1R включает одну или более человеческих константных областей. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область тяжелой цепи имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область легкой цепи имеет изотип, выбранный из к и λ. В некоторых вариантах осуществления человеческое антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления человеческое антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых таких вариантах осуществления человеческое антитело, описанное в настоящей заявке, включает мутацию S241P в константной области IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления человеческое антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область IgG4 человека и человеческую к легкую цепь.
В некоторых вариантах осуществления, когда желательна эффекторная функция, выбирают человеческое антитело против CSF1R, включающее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления, когда эффекторная функция не требуется, выбирают человеческое антитело против CSF1R, включающее константную область тяжелой цепи IgG4 или IgG2 человека.
Дополнительные примеры антител против CSF1R Примеры антител против CSF1R также включают, без ограничения, мышиные, гуманизированные, человеческие, химерные и сконструированные антитела, которые включают, например, одну или более последовательностей CDR, описанных в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает вариабельную область тяжелой цепи, описанную в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает вариабельную область легкой цепи, описанную в настоящей заявке. В некоторых вари- 15 037561 антах осуществления антитело против CSF1R включает вариабельную область тяжелой цепи, описанную в настоящей заявке, и вариабельную область легкой цепи, описанную в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, описанные в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает CDR1, CDR2, и CDR3 легкой цепи, описанные в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, описанные в настоящей заявке, и CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, описанные в настоящей заявке.
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает вариабельную область тяжелой цепи антитела, выбранного из Fabs 0301, 0302 и 0311. Неограничивающие примеры антител против CSF1R также включают антитела, включающие вариабельную область тяжелой цепи антитела, выбранного из гуманизированных антител huAb1 - huAb16. Неограничивающие примеры антител против CSF1R включают антитела, включающие вариабельную область тяжелой цепи, включающую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 9, 11, 13 и 39-45.
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает вариабельную область легкой цепи антитела, выбранного из Fabs 0301, 0302 и 311. Неограничивающие примеры антител против CSF1R также включают антитела, включающие вариабельную область легкой цепи антитела, выбранного из гуманизированных антител huAb1 - huAb16. Неограничивающие примеры антител против CSF1R включают антитела, включающие вариабельную область легкой цепи, включающую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 10, 12, 14 и 46-52.
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела, выбранного из Fabs 0301, 0302 и 0311. Неограничивающие примеры антител против CSF1R также включают антитела, включающие вариабельную область тяжелой цепи и вариабельную область легкой цепи антитела, выбранного из гуманизированных антител huAb1 - huAb16. Неограничивающие примеры антител против CSF1R включают антитела, включающие следующие пары вариабельных областей тяжелой и легкой цепей: SEQ ID NO: 9 и 10; SEQ ID NO: 11 и 12; и SEQ ID NO: 13 и 14; SEQ ID NO: 39 и 40; SEQ ID NO: 41 и 42; SEQ ID NO: 43 и 44; SEQ ID NO: 45 и 46; SEQ ID NO: 47 и 48; SEQ ID NO: 49 и 50; и SEQ ID NO: 51 и 52. Неограничивающие примеры антител против CSF1R также включают антитела, включающие следующие пары тяжелой и легкой цепей: SEQ ID NO: 33 и 34; SEQ ID NO: 35 и 36; и SEQ ID NO: 37 и 38.
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи антитела, выбранного из Fabs 0301, 0302 и 0311. Неограничивающие примеры антител против CSF1R включают антитела, включающие наборы CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, выбранные из: SEQ ID NO: 15, 16 и 17; SEQ ID NO: 21, 22 и 23; и SEQ ID NO: 27, 28 и 29.
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи антитела, выбранного из Fabs 0301, 0302 и 0311. Неограничивающие примеры антител против CSF1R включают антитела, включающие наборы CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, выбранные из: SEQ ID NO: 18, 19 и 20; SEQ ID NO: 24, 25 и 26; и SEQ ID NO: 30, 31 и 32.
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, и CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи антитела, выбранного из Fabs 0301, 0302 и 0311.
Неограничивающие примеры антител против CSF1R включают антитела, включающие наборы CDR1, CDR2 и CDR3 тяжелой цепи, и CDR1, CDR2 и CDR3 легкой цепи, показанные выше в табл. 1.
Другие примеры антител
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает тяжелую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 9, 11, 13 и 39-45, где антитело связывает CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает легкую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 10, 12, 14 и 46-52, где антитело связывает CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает тяжелую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 9, 11, 13 и 39-45; и легкую цепь, включающую последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 10, 12, 14 и 4652; где антитело связывает CSF1R.
- 16 037561
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает по меньшей мере один из CDR, обсуждаемых в настоящей заявке. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает по меньшей мере один CDR, выбранный из CDR1 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR2 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR3 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR1 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR2 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, и CDR3 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R включает по меньшей мере один мутантный CDR на основе CDR, обсуждаемого в настоящей заявке, где мутантный CDR включает 1, 2, 3 или 4 аминокислотных замены по сравнению с CDR, обсуждаемым в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления одна или более аминокислотных замен являются консервативными аминокислотными заменами. Специалист в данной области техники может выбрать одну или более подходящих консервативных аминокислотных замен для конкретной последовательности CDR, где подходящие консервативные аминокислотные замены не предполагают значимого изменения связывающих свойств антитела, включающего мутантный CDR.
Примеры антител против CSF1R также включают антитела, которые конкурируют за связывание с CSF1R с антителом, описанным в настоящей заявке. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления предложено антитело против CSF1R, которое конкурирует за связывание с CSF1R с антителом, выбранным из Fabs 0301, 0302 и 0311, и вариантом бивалентного (то есть имеющего две тяжелых цепи и две легких цепи) антитела на основе указанных Fabs.
Примеры константных областей антитела
В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в настоящей заявке, включает одну или более человеческих константных областей. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область тяжелой цепи имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область легкой цепи имеет изотип, выбранный из к и λ. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область IgG человека. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых таких вариантах осуществления антитело, описанное в настоящей заявке, включает мутацию S241P в константной области IgG4 человека. В некоторых вариантах осуществления антитело, описанное в настоящей заявке, включает константную область IgG4 человека и человеческую к легкую цепь.
Как отмечено выше, является ли желательной эффекторная функция, может зависеть от конкретного способа лечения, предполагаемого для антитела. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления, когда желательна эффекторная функция, выбирают антитело против CSF1R, включающее константную область тяжелой цепи IgG1 человека или константную область тяжелой цепи IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления, когда эффекторная функция не требуется, выбирают антитело против CSF1R, включающее константную область тяжелой цепи IgG4 или IgG2 человека.
Примеры вариабельных областей тяжелой цепи антител к CSF1R
В некоторых вариантах осуществления предложены вариабельные области тяжелой цепи антитела против CSF1R. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи антитела против CSF1R является мышиной вариабельной областью, человеческой вариабельной областью или гуманизированной вариабельной областью.
Вариабельная область тяжелой цепи антитела против CSF1R включает CDR1, FR2, CDR2, FR3 и CDR3 тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи антитела против CSF1R дополнительно включает FR1 и/или FR4 тяжелой цепи. Неограничивающие примеры вариабельных областей тяжелой цепи включают, без ограничения, вариабельные области тяжелой цепи, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 9, 11, 13 и 39-45.
В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи антитела против CSF1R включает CDR1, включающую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 15, 21 и 27.
В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи антитела против CSF1R включает CDR2, включающую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 16, 22 и 28.
В некоторых вариантах осуществления вариабельная область тяжелой цепи антитела против CSF1R включает CDR3, включающую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 17, 23 и 29.
Неограничивающие примеры вариабельных областей тяжелой цепи включают, без ограничения, вариабельные области тяжелой цепи, включающие наборы CDR1, CDR2 и CDR3, выбранные из: SEQ ID NO: 15, 16 и 17; SEQ ID NO: 21, 22 и 23; и SEQ ID NO: 27, 28 и 29.
В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела против CSF1R включает последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 9, 11, 13 и 39-45, где тяжелая цепь вместе с легкой цепью способна образовывать антитело, которое связывает CSF1R.
В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела против CSF1R включает по меньшей
- 17 037561 мере один из CDR, обсуждаемых в настоящей заявке. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела против CSF1R включает по меньшей мере один CDR, выбранный из CDR1 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR2 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, и CDR3 тяжелой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь антитела против CSF1R включает по меньшей мере один мутантный CDR на основе CDR, обсуждаемого в настоящей заявке, где мутантный CDR включает 1, 2, 3 или 4 аминокислотных замены по сравнению с CDR, обсуждаемым в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления одна или более аминокислотных замен являются консервативными аминокислотными заменами. Специалист в данной области техники может выбрать одну или более подходящих консервативных аминокислотных замен для конкретной последовательности CDR, где подходящие консервативные аминокислотные замены не предполагают значимого изменения связывающих свойств тяжелой цепи, включающей мутантный CDR.
В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь включает константную область тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь включает человеческую константную область тяжелой цепи. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область тяжелой цепи имеет изотип, выбранный из IgA, IgG и IgD. В некоторых вариантах осуществления человеческая тяжелой цепи константная область является константной областью IgG. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь включает константную область тяжелой цепи IgG4 человека. В некоторых таких вариантах осуществления константная область тяжелой цепи IgG4 человека включает мутацию S241P.
В некоторых вариантах осуществления, когда желательна эффекторная функция, тяжелая цепь включает константную область тяжелой цепи IgG1 или IgG3 человека. В некоторых вариантах осуществления, когда эффекторная функция менее желательна, тяжелая цепь включает константную область тяжелой цепи IgG4 или IgG2 человека.
Примеры вариабельных областей легкой цепи антител к CSF1R
В некоторых вариантах осуществления предложены вариабельные области легкой цепи антитела против CSF1R. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи антитела против CSF1R является мышиной вариабельной областью, человеческой вариабельной областью или гуманизированной вариабельной областью.
Вариабельная область легкой цепи антитела против CSF1R включает CDR1, FR2, CDR2, FR3 и CDR3 легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи антитела против CSF1R дополнительно включает FR1 и/или FR4 легкой цепи. Неограничивающие примеры вариабельных областей легкой цепи включают вариабельные области легкой цепи, имеющие аминокислотную последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 10, 12, 14 и 46-52.
В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи антитела против CSF1R включает CDR1, включающую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 18, 24 и 30.
В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи антитела против CSF1R включает CDR2, включающую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 19, 25 и 31.
В некоторых вариантах осуществления вариабельная область легкой цепи антитела против CSF1R включает CDR3, включающую последовательность, выбранную из SEQ ID NO: 20, 26 и 32.
Неограничивающие примеры вариабельных областей легкой цепи включают, без ограничения, вариабельные области легкой цепи, включающие наборы CDR1, CDR2 и CDR3, выбранные из: SEQ ID NO: 18, 19 и 20; SEQ ID NO: 24, 25 и 26; и SEQ ID NO: 30, 31 и 32.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела против CSF1R включает последовательность варибельной области, которая по меньшей мере на 90%, по меньшей мере на 91%, по меньшей мере на 92%, по меньшей мере на 93%, по меньшей мере на 94%, по меньшей мере на 95%, по меньшей мере на 96%, по меньшей мере на 97%, по меньшей мере на 98% или по меньшей мере на 99% идентична последовательности, выбранной из SEQ ID NO: 10, 12, 14 и 46-52, где легкая цепь вместе с тяжелой цепью способна образовывать антитело, которое связывает CSF1R.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела против CSF1R включает по меньшей мере один из CDR, обсуждаемых в настоящей заявке. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела против CSF1R включает по меньшей мере один CDR, выбранный из CDR1 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, CDR2 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке, и CDR3 легкой цепи, обсуждаемого в настоящей заявке. Кроме того, в некоторых вариантах осуществления легкая цепь антитела против CSF1R включает по меньшей мере один мутантный CDR на основе CDR, обсуждаемого в настоящей заявке, где мутантный CDR включает 1, 2, 3 или 4 аминокислотных замены по сравнению с CDR, обсуждаемым в настоящей заявке. В некоторых вариантах осуществления одна или более аминокислотных замен являются консервативными аминокислотными заменами. Специалист в данной области техники может выбрать одну или более подходящих консервативных аминокислотных замен для конкретной последовательности CDR, где подходящие консервативные аминокислотные замены не предполагают значимого изменения связывающих свойств легкой цепи, включающей мутантный CDR.
В некоторых вариантах осуществления легкая цепь включает человеческую константную область
- 18 037561 легкой цепи. В некоторых вариантах осуществления человеческая константная область легкой цепи выбрана из константной области человеческой к и человеческой λ легкой цепи.
Примеры дополнительных CSF1R-связывающих молекул
В некоторых вариантах осуществления предложены дополнительные молекулы, которые связывают CSF1R. Такие молекулы включают, без ограничения, неканонические каркасы, такие как антикалины, аднектины, анкириновые повторы и т.д. См., например, Hosse et al., Prot. Sci. 15:14 (2006); Fiedler, M. and Skerra, A., Non-Antibody Scaffolds, pp.467-499, в Handbook of Therapeutic Antibodies, Dubel, S., ed., Wiley-VCH, Weinheim, Germany, 2007.
Примеры свойств антител против CSF1R
В некоторых вариантах осуществления антитело, имеющее описанную выше структуру, связывается с CSF1R с аффинностью связывания (KD) меньше 1 нМ, блокирует связывание CSF1 и/или IL-34 с CSF1R и ингибирует фосфорилирование CSF1R, вызываемое CSF1 и/или IL-34.
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R связывается с внеклеточным доменом CSF1R (CSF1R-ECD). В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R обладает аффинностью связывания (KD) в отношении CSF1R меньше 1 нМ, меньше 0,5 нМ, меньше 0,1 нМ или меньше 0,05 нМ. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R обладает KD 0,01-1 нМ, 0,01-0,5 нМ, 0,01-0,1 нМ, 0,01-0,05 нМ или 0,02-0,05 нМ.
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R блокирует связывание лиганда с CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R блокирует связывание CSF1 с CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R блокирует связывание IL-34 с CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R блокирует связывание и CSF1, и IL-34 с CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело, которое блокирует связывание лиганда, связывается с внеклеточным доменом CSF1R. Антитело, как предполагают, блокирует связывание лиганда с CSF1R, когда оно уменьшает количество обнаруживаемого связывания лиганда с CSF1R по меньшей мере на 50% при использовании анализа, описанного в примере 7. В некоторых вариантах осуществления антитело уменьшает количество обнаруживаемого связывания лиганда с CSF1R по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90% при использовании анализа, описанного в примере 7. В некоторых таких вариантах осуществления антитело, как считают, блокирует связывание лиганда по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70% и т.д.
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R ингибирует лиганд-индуцированное фосфорилирование CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R ингибирует CSF1-индуцированное фосфорилирование CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R ингибирует IL-34-индуцированное фосфорилирование CSF1R. В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R ингибирует и CSF1-индуцированное, и IL-34-индуцированное фосфорилирование CSF1R. Антитело, как предполагают, ингибирует лигандиндуцированное фосфорилирование CSF1R, когда оно уменьшает количество обнаруживаемого лигандиндуцированного фосфорилирования CSF1R по меньшей мере на 50% при использовании анализа, описанного в примере 6. В некоторых вариантах осуществления антитело уменьшает количество обнаруживаемого лигандиндуцированного фосфорилирования CSF1R по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90% при использовании анализа, описанного в примере 6. В некоторых таких вариантах осуществления антитело, как считают, ингибирует лиганд-индуцированное фосфорилирование CSF1R по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70% и т.д.
В некоторых вариантах осуществления антитело ингибирует реакции пролиферации и/или выживаемости моноцитов в присутствии CSF1 и/или IL-34. Антитело, как полагают, ингибирует реакции пролиферации и/или выживаемости моноцитов, если оно уменьшает количество реакций пролиферации и/или выживаемости моноцита в присутствии CSF1 и/или IL-34 по меньшей мере на 50% при использовании анализа, описанного в примере 10. В некоторых вариантах осуществления антитело уменьшает количество реакций пролиферации и/или выживаемости моноцитов в присутствии CSF1 и/или IL-34 по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90% при использовании анализа, описанного в примере 10. В некоторых таких вариантах осуществления антитело, как считают, ингибирует реакции пролиферации и/или выживаемости моноцитов по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70% и т.д.
Примеры конъюгатов антитела
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R конъюгировано с меткой и/или цитотоксическим средством. При использовании в настоящем описании метка является молекулой, которая облегчает обнаружение антитела и/или облегчает обнаружение молекулы, с которой связывается антитело. Неограничивающие примеры меткок включают, без ограничения, радиоизотопы, флуоресцентные группы, ферментные группы, хемилюминесцентные группы, биотин, эпитоп-метки, металлсвязывающие метки и т.д. Специалист в данной области техники может выбрать подходящую метку согласно предполагаемому применению.
При использовании в настоящем описании цитотоксическое средство является молекулой, которая
- 19 037561 уменьшает пролиферативную способность одной или более клеток. Клетка обладает уменьшенной пролиферативной способностью, когда уменьшается способность клетки к пролиферации, например, поскольку клетка подвергается апоптозу или гибнет иным путем, клетка не способна проходить клеточный цикл и/или не может делиться, клетка дифференцируется и т.д. Неограничивающие примеры цитотоксических средств включают, без ограничения, радиоизотопы, токсины и химиотерапевтические средства. Специалист в данной области техники может выбрать подходящее цитотоксическое средство согласно предполагаемому применению.
В некоторых вариантах осуществления метку и/или цитотоксическое средство конъюгируют с антителом при использовании химических методов in vitro. Неограничивающие примеры химических методов конъюгирования известны в уровне техники и включают услуги, методы и/или реактивы, предоставляемые на коммерческой основе, например, Thermo Scientific Life Science Research Produces (ранее Pierce; Rockford, IL), Prozyme (Hayward, CA), SACRI Antibody Services (Calgary, Canada), AbD Serotec (Raleigh, NC) и т.д. В некоторых вариантах осуществления, когда метка и/или цитотоксическое средство являются полипептидом, метка и/или цитотоксическое средство могут экспрессироваться с одного вектора экспрессии по меньшей мере с одной цепью антитела, с получением полипептида, включающего метку и/или цитотоксическое средство, которые слиты с цепью антитела. Специалист в данной области техники может подобрать подходящий способ конъюгирования метки и/или цитотоксического средства с антителом согласно предполагаемому применению.
Примеры лидерных последовательностей
В случае, если некоторые секретируемые белки требуется экспрессировать и секретировать в больших количествах, может быть необходимой лидерная последовательность из гетерологичного белка. В некоторых вариантах осуществления лидерная последовательность выбрана из SEQ ID NO: 3 и 4, которые являются лидерными последовательностями легкой цепи и тяжелой цепи, соответственно. В некоторых вариантах осуществления применение гетерологичных лидерных последовательностей может быть удобно тем, что получаемый зрелый полипептид может оставаться неизмененным, поскольку лидерная последовательность удаляется в ЭР в ходе процесса секреции. Добавление гетерологичной лидерной последовательности может требоваться при экспрессии и секреции некоторых белков.
Некоторые примеры последовательностей лидерной последовательности описаны, например, в онлайн Базе данных лидерных последовательностей, поддерживаемой департаментом биохимии Национального университета Сингапура. См. Choo et al., ВМС Bioinformatics, 6: 249 (2005); и публикацию РСТ WO 2006/081430.
Молекулы нуклеиновых кислот, кодирующие антитела против CSF1R
Предложены молекулы нуклеиновых кислот, включающие полинуклеотиды, которые кодируют одну или более цепей антител против CSF1R. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты включает полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь или легкую цепь антитела против CSF1R. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты включает полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, и полинуклеотид, который кодирует легкую цепь антитела против CSF1R. В некоторых вариантах осуществления первая молекула нуклеиновой кислоты включает первый полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, и вторая молекула нуклеиновой кислоты включает второй полинуклеотид, который кодирует легкую цепь.
В некоторых таких вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются с одной молекулы нуклеиновой кислоты или с двух отдельных молекул нуклеиновой кислоты, как два отдельных полипептида. В некоторых вариантах осуществления, например, когда антитело представляет собой scFv, один полинуклеотид кодирует один полипептид, включающий соединенные тяжелую цепь и легкую цепь.
В некоторых вариантах осуществления полинуклеотид, кодирующий тяжелую цепь или легкую цепь антитела против CSF1R, включает нуклеотидную последовательность, которая кодирует лидерную последовательность, которая после трансляции расположена на N-конце тяжелой цепи или легкой цепи. Как обсуждается выше, лидерная последовательность может быть нативной лидерной последовательностью тяжелой или легкой цепи или может быть другой гетерологичной лидерной последовательностью.
Молекулы нуклеиновой кислоты могут быть сконструированы при использовании технологий рекомбинантной ДНК, стандартных в данной области техники. В некоторых вариантах осуществления молекула нуклеиновой кислоты является вектором экспрессии, который является подходящим для экспрессии в выбранной клетке-хозяине.
Экспрессия и продукция антител против CSF1R Векторы
Предложены векторы, включающие полинуклеотиды, которые кодируют тяжелые цепи против CSF1R и/или легкие цепи против CSF1R. Также предложены векторы, включающие полинуклеотиды, которые кодируют тяжелые цепи против CSF1R и/или легкие цепи против CSF1R. Такие векторы включают, без ограничения, ДНК-векторы, фаговые векторы, вирусные векторы, ретровирусные векторы и т.д. В некоторых вариантах осуществления вектор включает первую полинуклеотидную последовательность, кодирующую тяжелую цепь, и вторую полинуклеотидную последовательность, кодирующую лег- 20 037561 кую цепь. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются с вектора как два отдельных полипептида. В некоторых вариантах осуществления тяжелая цепь и легкая цепь экспрессируются как часть одного полипептида, такого как, например, в случае, когда антитело представляет собой scFv.
В некоторых вариантах осуществления первый вектор включает полинуклеотид, который кодирует тяжелую цепь, и второй вектор включает полинуклеотид, который кодирует легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления первый вектор и второй вектор трансфицируют в клетки-хозяева в аналогичных количествах (например, аналогичных молярных количествах или аналогичных массовых количествах). В некоторых вариантах осуществления молярное или массовое отношение от 5:1 до 1:5 первого вектора и второго вектора трансфицируют в клетки-хозяева. В некоторых вариантах осуществления используют массовое отношение от 1:1 до 1:5 для вектора, кодирующего тяжелую цепь, и вектора, кодирующего легкую цепь. В некоторых вариантах осуществления используется массовое отношение 1:2 для вектора, кодирующего тяжелую цепь, и вектора, кодирующего легкую цепь.
В некоторых вариантах осуществления выбирают вектор, который оптимизирован для экспрессии полипептидов в клетках СНО или СНО-производных клетках, или в клетках NSO. Примеры таких векторов описаны, например, в Running Deer et al., Biotechnol. Prog. 20:880-889 (2004).
В некоторых вариантах осуществления вектор выбран для in vivo экспрессии тяжелых цепей против CSF1R и/или легких цепей против CSF1R в животных, включая людей. В некоторых таких вариантах осуществления экспрессия полипептида находится под контролем промотора, который функционирует тканеспецифическим образом. Например, печень-специфические промоторы описаны, например, в публикации РСТ WO 2006/076288.
Клетки-хозяева
В различных вариантах осуществления тяжелые цепи против CSF1R и/или легкие цепи против CSF1R могут экспрессироваться в прокариотических клетках, таких как бактериальные клетки; или в эукариотических клетках, таких как клетки грибов (таких как дрожжи), растительные клетки, клетки насекомых и клетки млекопитающих. Такая экспрессия может быть выполнена, например, согласно методикам, известным в уровне техники. Примеры эукариотических клеток, которые могут применяться для экспрессии полипептидов, включают, без ограничения, клетки COS, включая клетки COS 7; клетки 293, включая клетки 293-6Е; клетки СНО, включая CHO-S и клетки DG44; клетки PER.C6® (Crucell); и клетки NSO. В некоторых вариантах осуществления тяжелые цепи против CSF1R и/или легкие цепи против CSF1R могут экспрессироваться в дрожжах. См., например, патентную публикацию США US 2006/0270045 А1. В некоторых вариантах осуществления конкретная эукариотическая клетка-хозяин выбрана по ее способности вводить требуемые посттрансляционные модификации в тяжелые цепи против CSF1R и/или легкие цепи против CSF1R. Например, в некоторых вариантах осуществления клетки СНО продуцируют полипептиды, которые имеют более высокий уровень сиалирования, чем такой же полипептид, полученный в клетках 293.
Введение одной или более нуклеиновых кислот в требуемую клетку-хозяина может быть выполнено любым способом, включающим, без ограничения, трансфекцию с фосфатом кальция, DEAE-декстранопосредованную трансфекцию, опосредованную катионными липидами трансфекцию, электропорацию, трансдукцию, инфицирование и т.д. Неограничивающие примеры способов описаны, например, в Sambrook et al., Molecular Cloning, A Laboratory Manual, 3rd ed. Cold Spring Harbor Laboratory Press (2001). Нуклеиновые кислоты могут быть транзиентно или стабильно трансфицированы в требуемые клеткихозяева согласно любому подходящему способу.
В некоторых вариантах осуществления один или более полипептидов могут быть получены in vivo в животном, которое было сконструировано или трансфицировано одной или более молекулами нуклеиновой кислоты, кодирующими полипептиды, согласно любому подходящему способу.
Очистка антител против CSF1R
Антитела против CSF1R могут быть очищены любым подходящим способом. Такие способы включают, без ограничения, применение аффинных матриц или хроматографии гидрофобных взаимодействий. Подходящие аффинные лиганды включают ECD CSF1R и лиганды, которые связывают константные области антитела.
Например, белок А, белок G, белок A/G или колонка для аффинной очистки антител могут использоваться для связывания константной области и очистки антитела против CSF1R. Хроматография гидрофобных взаимодействий, например, на бутил или фенил колонке, также может подходить для очистки некоторых полипептидов. Множество способов очистки полипептидов известны в уровне техники.
Бесклеточная продукция антител против CSF1R
В некоторых вариантах осуществления антитело против CSF1R получают в бесклеточной системе. Неограничивающие примеры бесклеточных систем описаны, например, в Sitaraman et al., Methods Mol. Biol. 498: 229-44 (2009); Spirin, Trends Biotechnol. 22: 538-45 (2004); Endo et al., Biotechnol. Adv. 21: 695713 (2003).
- 21 037561
Терапевтические композиции и способы
Способы лечения заболеваний с применением антител против CSF1R
В настоящей заявке предложены способы лечения CD16+ нарушений антителом, которое связывает CSF1R и блокирует связывание лигандов CSF1 и IL-34. В настоящей заявке предложены способы лечения ревматоидного артрита антителом, которое связывает CSF1R и блокирует связывание лигандов CSF1 и IL-34.
В некоторых вариантах осуществления предложены способы лечения ревматоидного артрита, где способ включает введение антитела, которое связывает CSF1R и блокирует связывание лигандов CSF1 и IL-34, такое как антитело, выбранное из huAb1 - huAb16, субъекту с ревматоидным артритом. В некоторых вариантах осуществления предложены способы лечения ревматоидного артрита, где способ включает введение антитела huAb1 субъекту с ревматоидным артритом. В некоторых вариантах осуществления способ включает введение по меньшей мере одной дозы антитела, где доза составляет от 0,2 мг/кг до 10 мг/кг, например, от 1 мг/кг до 10 мг/кг или от 3 мг/кг до 10 мг/кг. В некоторых вариантах осуществления антитело выводится из сыворотки после введения однократной дозы 1 мг/кг приблизительно через 2 недели, после введения однократной дозы 3 мг/кг приблизительно через 6 недель и после введения однократной дозы 10 мг/кг приблизительно через 12 недель. Выведение из сыворотки у людей, которым была введена однократная дозу huAb1, было значительно и неожиданно более медленным, чем выведение из сыворотки у яванских макаков, которые получили такую же дозу. Низкая скорость выведения, в некоторых вариантах осуществления, позволяет производить нечастое введение дозы антитела. В некоторых вариантах осуществления антитело можно вводить один раз в две недели или реже. Например, в некоторых вариантах осуществления антитело можно вводить один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в месяц, один раз в пять недель, один раз в шесть недель, один раз в семь недель, один раз в два месяца, один раз в три месяца или четыре раза в год.
В некоторых вариантах осуществления полупериод существования huAb1 после введения человеку составляет более 2 дней. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования huAbl после введения человеку составляет более 4 дней. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования huAbl после введения человеку составляет более 15 дней. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования huAbl после введения дозы приблизительно 1,0 мг/кг человеку составляет более 2 дней. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования huAbl после введения дозы приблизительно 3,0 мг/кг человеку составляет более 4 дней. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования huAb1 после введения дозы приблизительно 10 мг/кг человеку составляет более 15 дней. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования huAbl после введения дозы приблизительно 10 мг/кг человеку составляет более 18 дней. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования huAb1 после введения дозы от 1 мг/кг до 10 мг/кг человеку составляет от 2 до 25 дней. В некоторых вариантах осуществления полупериод существования huAb1 после введения дозы от 3 мг/кг до 10 мг/кг человеку составляет от 4 до 25 дней.
В некоторых вариантах осуществления предложен способ снижения количества CD16+ моноцитов, где способ включает введение антитела, которое связывает CSF1R и блокирует связывание лигандов CSF1 и IL-34, такое как антитело, выбранное из huAb1 - huAb16, субъекту с повышенными CD16+ моноцитами. В некоторых вариантах осуществления субъект имеет ревматоидный артрит. В некоторых вариантах осуществления введение антитела, которое связывает CSF1R и блокирует связывание лигандов CSF1 и IL-34, не снижает количество CD16- моноцитов. В некоторых вариантах осуществления количество CD16+ моноцитов уменьшается в большей степени, чем количество CD16- моноцитов, при введении субъекту антитела, которое связывает CSF1R и блокирует связывание лигандов CSF1 и IL-34. В некоторых вариантах осуществления количество CD16+ моноцитов уменьшается по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70%, по меньшей мере на 80% или по меньшей мере на 90% после введения по меньшей мере одной дозы антитела, такого как huAb1. В некоторых вариантах осуществления количество CD16- моноцитов уменьшается меньше чем на 30%, меньше чем на 20% или меньше чем на 10%. В некоторых вариантах осуществления уменьшение количества CD16+ моноцитов продолжается в течение по меньшей мере одной недели, по меньшей мере двух недель, по меньшей мере трех недель, по меньшей мере четырех недель, по меньшей мере пяти недель, по меньшей мере 6 недель, по меньшей мере семи недель или по меньшей мере восьми недель после введения дозы антитела. В некоторых вариантах осуществления CD16+ моноциты являются CD16+ моноцитами периферической крови. В некоторых вариантах осуществления CD16-моноциmы являются CD16- моноцитами периферической крови.
В некоторых вариантах осуществления предложен способ уменьшения резорбции костной ткани, связанной с ревматоидным артритом, где способ включает введение антитела, которое связывает CSF1R и блокирует связывание лигандов CSF1 и IL-34, такого как антитело, выбранное из huAb1 - huAb16, субъекту с ревматоидным артритом. В некоторых вариантах осуществления предложен способ уменьшения резорбции костной ткани, связанной с ревматоидным артритом, где способ включает введение антитела huAb1 субъекту с ревматоидным артритом. Уменьшение резорбции костной ткани в некоторых вариантах осуществления включает уменьшение количества остеокластов в суставах, пораженных ревма- 22 037561 тоидным артритом.
В некоторых вариантах осуществления резорбция костной ткани может быть измерена путем определения уровня СТх и/или TRAP5b в плазме субъекта, где повышенный уровень СТх и/или TRAP5b указывает на повышенную резорбцию костной ткани у субъекта. Таким образом, в некоторых вариантах осуществления пониженный уровень СТх и/или TRAP5b указывает на уменьшение резорбции костной ткани. Уровни СТх и/или TRAP5b можно определить, в некоторых случаях, до и после применения антитела, которое связывает CSF1R, и/или можно периодически определять в течение всего курса лечения для контроля эффективности лечения в отношении уменьшения потери костной массы. Уровни СТх и/или TRAP5b можно определить при использовании любого метода из уровня техники, в том числе, без ограничения, ELISA (включая FAICEA или иммуноферментный анализ с захватом абсорбированными фрагментами; см., например, анализ TRAP5b Quidel®, TECOmedical Group, Sissach, Switzerland). В некоторых вариантах осуществления введение антитела, которое связывает CSF1R и блокирует связывание лигандов CSF1 и IL-34, такого как huAbl, снижает по меньшей мере один маркер резорбции костной ткани, такой как, например, СТх и/или TRAP5b. В некоторых вариантах осуществления уровень в сыворотке маркера резорбции костной ткани снижается по меньшей мере на 20%, по меньшей мере на 30%, по меньшей мере на 40%, по меньшей мере на 50%, по меньшей мере на 60%, по меньшей мере на 70% или по меньшей мере на 75%. В некоторых вариантах осуществления снижение уровня маркера резорбции костной ткани в сыворотке продолжается в течение по меньшей мере одной недели, по меньшей мере двух недель, по меньшей мере трех недель, по меньшей мере четырех недель, по меньшей мере пяти недель, по меньшей мере 6 недель, по меньшей мере семи недель или по меньшей мере восьми недель после введения дозы антитела.
Пути введения и носители
В различных вариантах осуществления антитела против CSF1R могут быть введены in vivo различными путями, включая, без ограничения, пероральный, внутриартериальный, перентеральный, интраназальный, внутримышечный, внутрисердечный, внутрижелудочковый, внутритрахеальный, буккальный, ректальный, внутрибрюшинный, внутрикожный, наружный, трансдермальный и интратекальный, или другим способом, посредством имплантации или ингаляции.
Рассматриваемые композиции могут быть изготовлены в виде препаратов в твердой, полутвердой, жидкой или газообразной формах; включая, без ограничения, таблетки, капсулы, порошки, гранулы, мази, растворы, суппозитории, ирригационные растворы, растворы для инъекций, препараты для ингаляции и аэрозоли. Молекула нуклеиновой кислоты, кодирующая антитело против CSF1R, может быть нанесена на микрочастицы золота и введена внутрикожно с помощью устройства для бомбардировки частицами или генной пушки, как описано в литературе (см., например, Tang et al., Nature 356:152-154 (1992)). Подходящая лекарственная форма и путь введения могут быть выбраны согласно предполагаемому применению.
В различных вариантах осуществления композиции, включающие антитела против CSF1R, предоставлены в лекарственных формах с целым рядом фармацевтически приемлемых носителей (см., например, Gennaro, Remington: The Science and Practice of Pharmacy with Facts and Comparisons: Drugfacts Plus, 20th ed. (2003); Ansel et al., Pharmaceutical Dosage Forms and Drug Delivery Systems, 7th ed., Lippencott Williams and Wilkins (2004); Kibbe et al., Handbook of Pharmaceutical Excipients, 3rd ed., Pharmaceutical Press (2000)). Доступны различные фармацевтически приемлемые носители, которые включают наполнители, вспомогательные вещества и разбавители. Кроме того, также доступны различные фармацевтически приемлемые вспомогательные вещества, такие как регуляторы рН и буферные вещества, регуляторы тоничности, стабилизаторы, смачивающие вещества и т.п. Неограничивающие примеры носителей включают раствор хлорида натрия, забуференный раствор хлорида натрия, декстрозу, воду, глицерин, этанол и их комбинации.
В различных вариантах осуществления композиции, включающие антитела против CSF1R, могут быть изготовлены в форме для инъекций, включая подкожное введение, при их растворении, суспендировании или эмульгировании в водном или неводном растворителе, таком как растительные или другие масла, синтетические глицериды алифатических кислот, сложные эфиры высших алифатических кислот или пропиленгликоль; и, в случае необходимости, с обычными добавками, такими как солюбилизаторы, изотонические вещества, суспендирующие вещества, эмульгирующие вещества, стабилизаторы и консерванты. В различных вариантах осуществления композиции могут быть изготовлены в форме для ингаляции, например, при использовании приемлемых пропеллентов под давлением, таких как дихлордифторметан, пропан, азот и т.п. Композиции могут быть также изготовлены в форме, в различных вариантах осуществления, микрокапсул с пролонгированным высвобождением, таких как с биоразлагаемыми или небиоразлагаемыми полимерами. Неограничивающий пример биоразлагаемой формы включает сополимер гликолевой кислоты и молочной кислоты. Неограничивающий пример небиоразлагаемой формы включает полиглицериновый сложный эфир жирной кислоты. Некоторые способы получения таких лекарственных форм описаны, например, в ЕР 1 125 584 А1.
Также предложены фармацевтические упаковки и наборы, включающие один или более контейнеров, каждый из которых содержит одну или более доз антитела против CSF1R. В некоторых вариантах
- 23 037561 осуществления предложена единичная доза, где единичная доза содержит заданное количество композиции, включающей антитело против CSF1R, с или без одного или более дополнительных средств. В некоторых вариантах осуществления такая единичная доза поставляется в предварительно наполненном шприце одноразового применения для инъекции. В различных вариантах осуществления композиция, содержащаяся в единичной дозе, может включать раствор хлорида натрия, сахарозу или подобное; буфер, такой как фосфат, или подобное; и/или она может быть изготовлена в пределах стабильного и эффективного диапазона рН. В альтернативе, в некоторых вариантах осуществления, композиция может быть предоставлена в виде лиофилизированного порошка, который может быть восстановлен при добавлении подходящей жидкости, например, стерильной воды. В некоторых вариантах осуществления композиция включает одно или более веществ, которые ингибируют агрегацию белка, включая, без ограничения, сахарозу и аргинин. В некоторых вариантах осуществления композиция изобретения включает гепарин и/или протеогликан.
Фармацевтические композиции вводят в количестве, эффективном для лечения или профилактики при определенном показании. Терапевтически эффективное количество обычно зависит от веса проходящего лечение субъекта, его или ее физического состояния или состояния здоровья, распространения состояния, подвергаемого лечению, или возраста проходящего лечение субъекта. В целом, антитела против CSF1R можно вводить в количестве в диапазоне от приблизительно 10 мкг/кг массы тела до приблизительно 100 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления антитела против CSF1R можно вводить в количестве в диапазоне от приблизительно 50 мкг/кг массы тела до приблизительно 5 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления антитела против CSF1R можно вводить в количестве в диапазоне от приблизительно 100 мкг/кг массы тела до приблизительно 10 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления антитела против CSF1R можно вводить в количестве в диапазоне от приблизительно 100 мкг/кг массы тела до приблизительно 20 мг/кг массы тела на дозу. В некоторых вариантах осуществления антитела против CSF1R можно вводить в количестве в диапазоне от приблизительно 0,5 мг/кг массы тела до приблизительно 20 мг/кг массы тела на дозу.
Композиции антитела против CSF1R можно вводить согласно потребности субъектов. Определение частоты введения может быть выполнено специалистами в данной области техники, такими как лечащий врач, в зависимости от оценки подвергаемого лечению состояния, возраста проходящего лечение субъекта, тяжести подвергаемого лечению состояния, общего состояния здоровья проходящего лечение субъекта и т.п. В некоторых вариантах осуществления эффективную дозу антитела против CSF1R вводят субъекту один или более раз. В различных вариантах осуществления эффективную дозу антитела против CSF1R вводят субъекту один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в месяц, один раз в пять недель, один раз в шесть недель, один раз в семь недель, один раз в два месяца, один раз в три месяца, четыре раза в год или реже. Эффективную дозу антитела против CSF1R вводят субъекту по меньшей мере один раз. В некоторых вариантах осуществления эффективную дозу антитела против CSF1R можно вводить многократно, в том числе в течение периодов продолжительностью по меньшей мере месяц, по меньшей мере шесть месяцев или по меньшей мере год.
Комбинированная терапия
Антитела против CSF1R можно вводить отдельно или в сочетании с другими способами лечения. Их можно предоставлять до, по существу одновременно или после применения других способов лечения, например, хирургии, химиотерапии, лучевой терапии или введения биопрепаратов, таких как другое терапевтическое антитело. Для лечения ревматоидного артрита, антитела против CSF1R можно применять с другими терапевтическими средствами, например, метотрексатом, антителами к ФНО, такими как Ремикейд (инфликсимаб), Хумира (адалимумаб), Симпони (голимумаб) и Энбрел (этанерцепт); глюкокортикоидами, такими как преднизон; лефлуномидом; азатиоприном; ингибиторам JAK, такими как СР 590690; ингибиторами SYK, такими как R788; антителами против IL-6; антителами против IL-6R, такими как тоцилизумаб; антителами против CD-20, такими как ритуксимаб; антителами против CD19; антителами против ГМ-КСФ; антителами против ГМ-КСФ-Р; антагонистами рецептора IL-1, такими как анакинра; антагонистами CTLA-4, такими как абатацепт; иммунодепрессантами, такими как циклоспорин.
Примеры
Примеры, обсуждаемые ниже, рассматриваются исключительно как примеры изобретения и не должны считаться каким-либо ограничением изобретения. Не следует считать, что примеры представляют, что эксперименты ниже являются всеми или единственными выполненными экспериментами. Были предприняты усилия, позволяющие гарантировать точность в отношении используемых числовых значений (например, количеств, температуры и т.д.), однако следует учитывать присутствие некоторых экспериментальных погрешностей и отклонений. Если не указано иное, части являются частями по весу, молекулярная масса является средневесовой молекулярной массой, температура указана в градусах Цельсия, и давление является атмосферным или близким к атмосферному.
Пример 1. Гуманизированные антитела против CSF1R.
Различные гуманизированные антитела против CSF1R были разработаны ранее. См., например, публикацию РСТ WO 2011/140249.
Последовательности каждой из гуманизированных вариабельных областей тяжелой цепи и гумани
- 24 037561 зированных вариабельных областей легкой цепи, выровненные относительно последовательностей вариабельных областей исходного химерного антитела и последовательностей человеческих акцепторных вариабельных каркасных областей, показаны на фиг. 1 (тяжелые цепи) и 2 (легкие цепи). Изменения в последовательностях гуманизированных вариабельных областей относительно последовательностей человеческих акцепторных вариабельных каркасных областей выделены рамкой. Каждый из CDR каждой из вариабельных областей показан в рамке и отмечен как CDR над последовательностями в рамке.
В табл. 6, ниже, показаны полные последовательности гуманизированных тяжелых цепей и гуманизированных легких цепей антител huAb1 - huAb16. Название и SEQ ID NO гуманизированной тяжелой цепи и гуманизированной легкой цепи каждого из этих антител показаны в табл: 3.
Таблица 3. Гуманизированные тяжелые цепи и легкие цепи антител huAb1-huAb16
Гуманизированное антитело Гуманизированная НС SEQ ID NO Гуманизированная LC SEQ ID NO
huAbl h0301-H0 53 h0301-L0 60
huAb 2 h0301-Hl 54 h0301-L0 60
НиАЬЗ h0301-H2 55 h0301-L0 60
huAb 4 h0301-H0 53 h0301-Ll 61
huAb5 h0301-Hl 54 h0301-Ll 61
huAb 6 h0301-H2 55 h0301-Ll 61
huAb 7 h0302-Hl 56 h0302-L0 62
huAb 8 h0302-Hl 56 h0302-Ll 63
huAb 9 h0302-Hl 56 h0302-L2 64
huAb10 h0302-H2 57 h0302-L0 62
huAb11 h0302-H2 57 h0302-Ll 63
huAb12 h0302-H2 57 h0302-L2 64
huAb13 hO311-Hl 58 h0311-L0 65
huAb14 hO311-Hl 58 hO311-Ll 66
huAb15 hO311-H2 59 h0311-L0 65
huAb16 hO311-H2 59 hO311-Ll 66
гуманизированных антител тестировали на связывание с ECD CSF1R человека, яванского макака и мыши, как описано ранее. См., например, публикацию РСТ WO 2011/140249. Было обнаружено, что антитела связывались с ECD CSF1R человека и яванского макака, но не связывались с мышиным ECD CSF1R. Также было установлено, что гуманизированные антитела блокировали связывание CSF1 и IL-34 и с человеческим, и с мышиным CSF1R, и ингибировали CSF1-индуцированное и IL-34-индуцированное фосфорилирование человеческого CSF1R, экспрессируемого в клетках СНО. См., например, публикацию РСТ WO 2011/140249.
Значения ka, kd и KD для связывания с человеческим ECD CSF1R были определены ранее и показаны в табл. 4. См., например, публикацию РСТ WO 2011/140249.
Таблица 4. Аффинность связывания гуманизированных антител с человеческим CSF1R
huAb ka (M^c-1) Kd (c-1) KD (нМ)
huAb 0301-L0H0 3,22x10s 1, llxio~03 0,35
huAb 0301-L0H1 3,56x10s 1,22xl0~°3 0,34
huAb 0301-L0H2 2,32x10s 6, 60xl0~°4 0,28
huAb 0301-L1H0 3,29x10s 1, 15xl0~°3 0,35
huAb 0301-L1H1 2,87x10s 9, 21xl0~°4 0,32
huAb 0301-L1H2 2,95x10s 7,42xl0~°4 0,25
huAb 0302-L0H1 3,54x10s 3, 69xl0~°3 1,04
huAb 0302-L1H1 3,47x10s 4, O4xlO~03 1,17
huAb 0302-L2H1 1,60x10s 9, 14xl0~°4 0,57
huAb 0302-L0H2 3,40x10s 1,79xl0~°3 0,53
huAb 0302-L1H2 2,71x10s 1,53xl0~°3 0,56
huAb 0302-L2H2 1,84x10s 8,40xl0~°4 0,46
huAb 0311-L0H1 1,22x10s 5, 40xl0~°4 0,44
huAb 0311-L1H1 1,32x10s 6, 64xl0~°4 0,50
huAb 0311-L0H2 1,34x10s 4,73xl0~°4 0,35
huAb 0311-L1H2 1,51x10s 6, 09xl0-°4 0,40
Пример 2. Фармакокинетика HuAb1 у яванских макаков и людей.
- 25 037561
Фармакокинетику (ФК) huAbl исследовали в 3 внутривенных (в/в) исследованиях на яванских макаках. Исследуемый диапазон дозы составлял 3-150 мг/кг после однократного введения и 3-150 мг/кг после повторного введения. Продолжительность инфузии составляла 30 мин. Интервал между введением доз в исследованиях с повторным введением составлял один раз в неделю, при этом каждое животное получало в общей сложности 4 дозы.
Профиль ФК после одной 30-минутной в/в инфузии huAb1 у яванских макаков отличался быстрым распределением с последующей более медленной конечной фазой, которая заканчивалась ускоренным выведением huAb1 из плазмы, что согласуется с мишень-опосредованным клиренсом.
Быстрое уменьшение может быть частично обусловлено антителами против huAb1 в дополнение к мишень-опосредованному клиренсу. Однако однократное введение дозы аналогичного химерного антитела против CSF1R мышам с ТКИД, которые не имеют способности к ADA ответу, показало подобный профиль. Наблюдаемую максимальную концентрацию в плазме (Cmax) регистрировали в конце инфузии для групп с более низкой дозой и через 0,5-1 ч после конца инфузии для группы дозы 150 мг/кг. Полупериод существования (t1/2) до ускоренного конечного снижения изменялся в пределах 1-12 дней. Значения Cmax и AUC, росли с увеличением дозы, при этом Cmax увеличивалась пропорционально дозе при всех тестируемых уровнях дозы. Увеличения AUC\ превышали пропорциональное увеличение дозы от 3 до 10 мг/кг и были пропорциональны дозе от 10 до 150 мг/кг.
HuAb1 или плацебо приготавливали в концентрации 20 мг/мл в буфере с рН 6,3, содержащем 20 мМ L-гистидина, 142 мМ L-аргинина и 0,01% полисорбата 20. Взрослых здоровых субъектов-добровольцев рандомизировали в каждую группу дозы (8 субъектов в группе; 6 получали лекарственное средство и 2 получали плацебо). Группы дозы включали однократную дозу 0,2 мг/кг, 1 мг/кг, 3 мг/кг и 10 мг/кг huAb1 или плацебо. HuAb1 или плацебо вводили в/в инфузией в течение 30 мин с последующим периодом наблюдения. Субъекты были должны в течение 72 ч после введения их исследуемого лекарственного препарата пройти обследования и гарантировать соблюдение определяемого протоколом руководства в отношении ограничения алкоголя и интенсивной физической нагрузки.
Начало инфузии считали нулевым моментом времени. Пробы крови забирали для определения концентраций huAbl в сыворотке в следующие моменты времени относительно начала инфузии:
t=0 часов (ч) (можно забирать до 60 мин перед введением доза), t=25 (25 мин после начала инфузии), t=30 мин (конец инфузии), t=35 мин (35 мин после начала инфузии, что эквивалентно 5 мин от конца инфузии), t=45 (45 мин после начала инфузии, эквивалентно 15 мин от конца инфузии), t=60 (60 мин после начала инфузии, эквивалентно 30 мин от конца инфузии).
После этого забор проб производили относительно начала инфузии в 2 ч, 4 ч, 8 ч, 24 ч, 36 ч, 48 ч и 72 ч, затем в дни исследования 8, 15, 22, 29, 57 и 85.
Среднюю концентрацию huAb1 в сыворотке субъектов определяли с помощью ELISA следующим образом. Образцы разбавляли минимум 1:30 в разбавителе для анализа (PBS, содержащем 1% бычьего гамма-глобулина, 0,3M NaCl и 0,05% Tween20). Человеческим CSFIR-Fc (слитым белком внеклеточного домена человеческого рецептора CSF1 с Fc IgG1 человека) покрывали планшеты для ELISA. HuAb1 из замороженного образца сыворотки связывали на планшетах и детектировали с использованием конъюгированного с пероксидазой хрена мышиного антитела IgG4 против иммуноглобулина человека с применением стандартных методов. Результаты данного анализа показаны на фиг. 3. На фиг. 3А показан логарифмический график huAb1 в сыворотке в зависимости от времени в неделях. На фиг. 3В показан линейный график для тех же данных. Эти данные указывают, что huAb1 выводится у субъектов в группе 10 мг/кг через 13 недель. Нелинейный профиль ФК согласуется с мишень-опосредованным клиренсом. В табл. 5 показан расчетный клиренс (CL) и полупериод существования huAb1 для каждой дозы. Значения представляют собой среднее±стандартное отклонение для 6 субъектов.
Таблица 5. Клиренс (CL) и полупериод существования huAb1 у людей в исследовании
Доза (мг/кг) CL (мл/ч/кг) tl/2 (ч) tl/2 (д)
0,2 1,62+0,21 12,5+1,3 0,5+0, 1
1 0,49+0,10 56,8+11,4 2,4+0,5
3 0,18+0,01 129,8+32,7 5,4+1,4
10 0,11+0,02 490,2+59,4* 20,4+2,5*
*полупериод элиминации первого порядка перед ускоренным конечным клиренсом.
Фармакокинетика, наблюдаемая у людей, по существу и неожиданно отличалась от фармакокинетики, наблюдаемой у яванского макака. Как показано на фиг. 4, клиренс huAb1 у человека был намного более медленым, чем клиренс у яванского макака.
Пример 3: huAb1 супрессирует маркеры резорбции костной ткани СТх и TRAP5b.
Было показано, что введение huAb1 вызывает значительное повышение лигандов CSF1R - CSF1 и IL-34. Такое увеличение использовали для распределения заслепленных образцов в вероятные группы huAbl и вероятные группы плацебо, определяя уровень CSF1 и/или IL-34 в сыворотке субъектов с помо- 26 037561 щью коммерческих ELISA (R&D Systems, Minneapolis, MN). См. фиг. 9. После распределения образцов по их вероятным группам, СТх сыворотки измеряли для определения, являлось ли huAb1 эффективным для супрессии данного маркера резорбции костной ткани. СТх сыворотки также измеряли при использовании коммерческого ELISA (IDS Serum CrossLaps ELISA). Образцы сыворотки предварительно замораживали.
Результаты этого эксперимента показаны на фиг. 5. На фиг. 5А, на которой показаны субъекты с низким CSF1, и поэтому вероятные группы плацебо, уровни СТх в сыворотке практически не изменялись при трех указанных дозах (n=2 на этих фигурах означает, что в каждой группе было по 2 субъекта). На фиг. 5B, на которой показаны субъекты с высоким CSF1, и поэтому вероятные группы huAb1, уровни СТх в сыворотке были супрессированы дозозависимом образом, указывая, что huAb1 может супрессировать резорбцию костной ткани (n=6 на этих фигурах означает, что в каждой группе было по 6 субъектов).
Уровни TRAP5b в сыворотке также измеряли для определения, являлось ли huAb1 эффективным при супрессии уровней TRAP5b, также маркера резорбции костной ткани. TRAP5b в сыворотке измеряли при использовании коммерческого ELISA (MicroVue Bone Health Trap5b Assay, REF 8033, Quidel). Образцы сыворотки были заморожены ранее. Результаты этого эксперимента показаны на фиг. 6. На фиг. 6А, на которой показаны субъекты с низким CSF1, и поэтому вероятные группы плацебо, уровни TRAP5b в сыворотке практически не изменялись при трех указанных дозах (n=2 на этих фигурах означает, что в каждой группе было по 2 субъекта). На фиг. 6В, на которой показаны субъекты с высоким CSF1, и поэтому вероятные группы huAb1, уровни TRAP5b в сыворотке отклонялись ниже, указывая, что huAb1 может супрессировать этот маркер резорбции костной ткани (n=6 на этих фигурах означает, что в каждой группе было по 6 субъектов).
Пример 4. huAb1 супрессирует CD16+ моноциты у людей.
Ранее было продемонстрировано, что huAb1 супрессирует уровни CD16+ моноцитов у яванских макаков, при этом уровни CD16- моноцитов остаются по существу без изменений. Уровни CD16+ моноцитов определяли у каждого из восьми субъектов на уровень дозы (6 субъектов получали huAb1 и 2 субъекта получали плацебо) с помощью проточной цитометрии следующим образом. Цельную кровь собирали в пробирки для забора крови Cyto-Chex® (Streck) и проводили анализ в течение 48 часов после забора. 75 мкл крови окрашивали моноклональными антителами к CD45, к CD14, к CD16 (все антитела производства BD Biosciences) и к HLA-DR (R&D Systems). Сферы для подсчета клеток AccuCheck® (Life Technologies) добавляли для определения абсолютного количества клеток. Образцы вводили в FACSCanto™ (BD Biosciences) и анализировали при использовании программы FlowJo (Tree Star Inc.). Моноциты, идентифицированные как CD45+HLA-DR+SSCintCD14+ клетки, делили на 3 субпопуляции моноцитов, идентифицированные как классические (CD14++CD16-), промежуточные (CD14++CD16+) и неклассические (CD14+CD16++), и подсчитывали на мкл крови.
Результаты данного эксперимента показаны на фиг. 7. Существенно пониженные уровни неклассических CD16+ моноцитов наблюдали в различные периоды времени в каждой исследуемой группе. В случае 0,2 мг/кг уровни неклассических CD16+ моноцитов были понижены у шести вероятных субъектов huAb1 в течение меньше одной недели. В случае 1 мг/кг уровни неклассических CD16+ моноцитов были понижены у шести вероятных субъектов huAbl в течение по меньшей мере одной недели. В случае 3 мг/кг уровни неклассических CD16+ моноцитов были понижены у шести вероятных субъектов huAb1 в течение по меньшей мере четырех недель. Наконец, в случае 10 мг/кг уровни неклассических CD16+ моноцитов были понижены у шести вероятных субъектов huAb1 в течение восьминедельного периода исследования. Эти результаты дают основание предположить, что нечастое введение huAbl может вызывать длительную супрессию CD16+ моноцитов. Также отмечали подобные снижения промежуточных CD16+ моноцитов (данные не показаны).
Также определяли уровни классических CD16-моноцитов. Как показано на фиг. 8, изменения уровней CD16-моноцитов не отличались у шести вероятных субъектов huAb1 и вероятных субъектов плацебо при всех уровнях доз.
Пример 5. Фармакокинетика huAb1 у здоровых добровольцев и больных РА.
HuAb1 приготавливали в концентрации 20 мг/мл в буфере с рН 6,3, содержащем 20 мМ Lгистидина, 142 мМ L-аргинина и 0,01% полисорбата 20. Два взрослых здоровых добровольца и три больных РА получали две дозы 3 мг/кг huAb1 с интервалом 14 дней. HuAb1 вводили внутривенной инфузией в течение 30 мин, с последующим периодом наблюдения. Начало инфузии считали нулевым моментом времени.
Концентрацию huAb1 в сыворотке здоровых добровольцев определяли с помощью ELISA, как описано в [0190]. Тот же анализ использовали для измерения концентрации huAb1 в сыворотке больных РА при использовании другого покрытия. Для покрытия для образцов больных РА использовали человеческий CSFIR-Fc белок, внеклеточный домен рецептора CSF1 человека, слитый с Fc IgG1 мыши. Результаты анализа здоровых добровольцев и больных РА показаны на фиг. 10. Незакрашенный кружок и закрашенный треугольник обозначают данные здоровых добровольцев и больных РА, соответственно. Пунктирная линия и сплошная линия соответствуют среднему группы для здоровых добровольцев и больных
- 27 037561
РА, соответственно. Данные ниже нижнего предела количественного определения (LLOQ) считали нулем с целью вычисления среднего группы для графического представления. Концентрация huAb1 в сыворотке в группе двухкратного введения дозы 3 мг/кг поддавалась измерению до приблизительно 12 недель для здоровых добровольцев и поддавалась измерению до 8 недель, и возможно дольше, для больных РА (с учетом значения, измеренного до указанного момента) после первого введения дозы.
Пример 6. huAb1 снижает CD16+ моноциты у больных РА.
Уровни CD16+ моноцитов определяли у каждого из двух здоровых добровольцев, которые получали две дозы huAb1 3 мг/кг с интервалом 14 дней. Уровни CD16+ моноцитов также определяли у каждого из трех больных РА, которые получали две дозы huAb1 3 мг/кг с интервалом 14 дней. Цельную кровь собирали в пробирки для забора крови Cyto-Chex® и проводили анализ, как описано в примере 4.
Результаты эксперимента показаны на фиг. 11 и 12. У здоровых добровольцев существенно пониженные уровни неклассических CD16+ моноцитов наблюдали через 6 недель после первой дозы huAb1 (FPA008). См. фиг. 11. У больных РА существенно пониженные уровни неклассических CD16+ моноцитов наблюдали через 2 недели после первой дозы huAb1. См. фиг. 12.
Таблица последовательностей
В табл. 6 приведены некоторые последовательности, обсуждаемые в настоящей заявке. Все последовательности полипептидов и антител показаны без лидерных последовательностей, если не указано иное.
Таблица 6. Последовательности и описания
SEQ ID NO Описание Последовательность
1 hCSFIR (полноразмерный, без лидерной последовательности) IPVIEPSVPE LVVKPGATVT LRCVGNGSVE WDGPPSPHWT LYSDGSSSIL STNNATFQNT GTYRCTEPGD PLGGSAAIHL YVKDPARPWN VLAQEVVVFE DQDALLPCLL TDPVLEAGVS LVRVRGRPLM RHTNYSFSPW HGFTIHRAKF IQSQDYQCSA LMGGRKVMSI SIRLKVQKVI PGPPALTLVP AELVRIRGEA AQIVCSASSV DVNFDVFLQH NNTKLAIPQQ SDFHNNRYQK VLTLNLDQVD FQHAGNYSCV ASNVQGKHST SMFFRVVESA YLNLSSEQNL IQEVTVGEGL NLKVMVEAYP GLQGFNWTYL GPFSDHQPEP KLANATTKDT YRHTFTLSLP RLKPSEAGRY SFLARNPGGW RALTFELTLR YPPEVSVIWT FINGSGTLLC AASGYPQPNV TWLQCSGHTD RCDEAQVLQV WDDPYPEVLS QEPFHKVTVQ SLLTVETLEH NQTYECRAHN SVGSGSWAFI PISAGAHTHP PDEFLFTPVV VACMSIMALL LLLLLLLLYK YKQKPKYQVR WKIIESYEGN SYTFIDPTQL PYNEKWEFPR NNLQFGKTLG AGAFGKVVEA TAFGLGKEDA VLKVAVKMLK STAHADEKEA LMSELKIMSH LGQHENIVNL LGACTHGGPV LVITEYCCYG DLLNFLRRKA EAMLGPSLSP GQDPEGGVDY KNIHLEKKYV RRDSGFSSQG VDTYVEMRPV STSSNDSFSE QDLDKEDGRP LELRDLLHFS SQVAQGMAFL ASKNCIHRDV AARNVLLTNG HVAKIGDFGL ARDIMNDSNY IVKGNARLPV KWMAPESIFD CVYTVQSDVW SYGILLWEIF SLGLNPYPGI LVNSKFYKLV KDGYQMAQPA FAPKNIYSIM QACWALEPTH RPTFQQICSF LQEQAQEDRR ERDYTNLPSS SRSGGSGSSS SELEEESSSE HLTCCEQGDI AQPLLQPNNY QFC
2 hCSFIR (полноразмерный, +лидерная последовательность) MGPGVLLLLL VATAWHGQGI PVIEPSVPEL VVKPGATVTL RCVGNGSVEW DGPPSPHWTL YSDGSSSILS TNNATFQNTG TYRCTEPGDP LGGSAAIHLY VKDPARPWNV LAQEVVVFED QDALLPCLLT DPVLEAGVSL VRVRGRPLMR HTNYSFSPWH GFTIHRAKFI QSQDYQCSAL MGGRKVMSIS IRLKVQKVIP GPPALTLVPA ELVRIRGEAA QIVCSASSVD VNFDVFLQHN NTKLAIPQQS DFHNNRYQKV LTLNLDQVDF QHAGNYSCVA SNVQGKHSTS MFFRVVESAY LNLSSEQNLI QEVTVGEGLN LKVMVEAYPG LQGFNWTYLG PFSDHQPEPK LANATTKDTY RHTFTLSLPR LKPSEAGRYS FLARNPGGWR ALTFELTLRY PPEVSVIWTF INGSGTLLCA ASGYPQPNVT WLQCSGHTDR CDEAQVLQVW DDPYPEVLSQ EPFHKVTVQS LLTVETLEHN QTYECRAHNS VGSGSWAFIP ISAGAHTHPP DEFLFTPVVV ACMSIMALLL LLLLLLLYKY KQKPKYQVRW KIIESYEGNS YTFIDPTQLP YNEKWEFPRN NLQFGKTLGA GAFGKVVEAT AFGLGKEDAV LKVAVKMLKS TAHADEKEAL MSELKIMSHL GQHENIVNLL GACTHGGPVL VITEYCCYGD LLNFLRRKAE AMLGPSLSPG QDPEGGVDYK NIHLEKKYVR RDSGFSSQGV DTYVEMRPVS TSSNDSFSEQ DLDKEDGRPL ELRDLLHFSS QVAQGMAFLA SKNCIHRDVA ARNVLLTNGH VAKIGDFGLA RDIMNDSNYI VKGNARLPVK WMAPESIFDC VYTVQSDVWS YGILLWEIFS LGLNPYPGIL VNSKFYKLVK DGYQMAQPAF APKNIYSIMQ ACWALEPTHR PTFQQICSFL QEQAQEDRRE RDYTNLPSSS RSGGSGSSSS ELEEESSSEH LTCCEQGDIA QPLLQPNNYQ FC
- 28 037561
5 6 hCSFIR ECD.506 hCSFIR ECD.506-Fc IPVIEPSVPE LVVKPGATVT LRCVGNGSVE WDGPPSPHWT LYSDGSSSIL STNNATFQNT GTYRCTEPGD PLGGSAAIHL YVKDPARPWN VLAQEVVVFE DQDALLPCLL TDPVLEAGVS LVRVRGRPLM RHTNYSFSPW HGFTIHRAKF IQSQDYQCSA LMGGRKVMSI SIRLKVQKVI PGPPALTLVP AELVRIRGEA AQIVCSASSV DVNFDVFLQH NNTKLAIPQQ SDFHNNRYQK VLTLNLDQVD FQHAGNYSCV ASNVQGKHST SMFFRVVESA YLNLSSEQNL IQEVTVGEGL NLKVMVEAYP GLQGFNWTYL GPFSDHQPEP KLANATTKDT YRHTFTLSLP RLKPSEAGRY SFLARNPGGW RALTFELTLR YPPEVSVIWT FINGSGTLLC AASGYPQPNV TWLQCSGHTD RCDEAQVLQV WDDPYPEVLS QEPFHKVTVQ SLLTVETLEH NQTYECRAHN SVGSGSWAFI PISAGAH IPVIEPSVPE LVVKPGATVT LRCVGNGSVE WDGPPSPHWT LYSDGSSSIL STNNATFQNT GTYRCTEPGD PLGGSAAIHL YVKDPARPWN VLAQEVVVFE DQDALLPCLL TDPVLEAGVS LVRVRGRPLM RHTNYSFSPW HGFTIHRAKF IQSQDYQCSA LMGGRKVMSI SIRLKVQKVI PGPPALTLVP AELVRIRGEA AQIVCSASSV DVNFDVFLQH NNTKLAIPQQ SDFHNNRYQK VLTLNLDQVD FQHAGNYSCV ASNVQGKHST SMFFRVVESA YLNLSSEQNL IQEVTVGEGL NLKVMVEAYP GLQGFNWTYL GPFSDHQPEP KLANATTKDT YRHTFTLSLP RLKPSEAGRY SFLARNPGGW RALTFELTLR YPPEVSVIWT FINGSGTLLC AASGYPQPNV TWLQCSGHTD RCDEAQVLQV WDDPYPEVLS QEPFHKVTVQ SLLTVETLEH NQTYECRAHN SVGSGSWAFI PISAGAHEPK SSDKTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRDEL TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGK
7 cynoCSFIR ECD (с лидерной последовательностью) MGPGVLLLLL VVTAWHGQGI PVIEPSGPEL VVKPGETVTL RCVGNGSVEW DGPISPHWTL YSDGPSSVLT TTNATFQNTR TYRCTEPGDP LGGSAAIHLY VKDPARPWNV LAKEVVVFED QDALLPCLLT DPVLEAGVSL VRLRGRPLLR HTNYSFSPWH GFTIHRAKFI QGQDYQCSAL MGSRKVMSIS IRLKVQKVIP GPPALTLVPA ELVRIRGEAA QIVCSASNID VDFDVFLQHN TTKLAIPQRS DFHDNRYQKV LTLSLGQVDF QHAGNYSCVA SNVQGKHSTS MFFRVVESAY LDLSSEQNLI QEVTVGEGLN LKVMVEAYPG LQGFNWTYLG PFSDHQPEPK LANATTKDTY RHTFTLSLPR LKPSEAGRYS FLARNPGGWR ALTFELTLRY PPEVSVIWTS INGSGTLLCA ASGYPQPNVT WLQCAGHTDR CDEAQVLQVW VDPHPEVLSQ EPFQKVTVQS LLTAETLEHN QTYECRAHNS VGSGSWAFIP ISAGAR
- 29 037561
8 3 4 9 10 11 cynoCSFIR ECD-Fc (с лидерной последовательностью) Лидерная последовательность легкой цепи Лидерная последовательность тяжелой цепи Fab 0301 вариабельная область тяжелой цепи Fab 0301 вариабельная область легкой цепи Fab 0302 вариабельная область тяжелой цепи MGPGVLLLLL VVTAWHGQGI PVIEPSGPEL VVKPGETVTL RCVGNGSVEW DGPISPHWTL YSDGPSSVLT TTNATFQNTR TYRCTEPGDP LGGSAAIHLY VKDPARPWNV LAKEVVVFED QDALLPCLLT DPVLEAGVSL VRLRGRPLLR HTNYSFSPWH GFTIHRAKFI QGQDYQCSAL MGSRKVMSIS IRLKVQKVIP GPPALTLVPA ELVRIRGEAA QIVCSASNID VDFDVFLQHN TTKLAIPQRS DFHDNRYQKV LTLSLGQVDF QHAGNYSCVA SNVQGKHSTS MFFRVVESAY LDLSSEQNLI QEVTVGEGLN LKVMVEAYPG LQGFNWTYLG PFSDHQPEPK LANATTKDTY RHTFTLSLPR LKPSEAGRYS FLARNPGGWR ALTFELTLRY PPEVSVIWTS INGSGTLLCA ASGYPQPNVT WLQCAGHTDR CDEAQVLQVW VDPHPEVLSQ EPFQKVTVQS LLTAETLEHN QTYECRAHNS VGSGSWAFIP ISAGARGSEP KSSDKTHTCP PCPAPELLGG PSVFLFPPKP KDTLMISRTP EVTCVVVDVS HEDPEVKFNW YVDGVEVHNA KTKPREEQYN STYRVVSVLT VLHQDWLNGK EYKCKVSNKA LPAPIEKTIS KAKGQPREPQ VYTLPPSRDE LTKNQVSLTC LVKGFYPSDI AVEWESNGQP ENNYKTTPPV LDSDGSFFLY SKLTVDKSRW QQGNVFSCSV MHEALHNHYT QKSLSLSPGK METDTLLLWV LLLWVPGSTG MAVLGLLLCL VTFPSCVLS EVQLQQSGPE LVRPGASVKM SCKASGYTFT DNYMIWVKQS HGKSLEWIGD INPYNGGTTF NQKFKGKATL TVEKSSSTAY MQLNSLTSED SAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTSVTV SS NIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCKASQSVD YDGDNYMNWY QQKPGQPPKL LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEEEDAATY YCHLSNEDLS TFGGGTKLEI К EIQLQQSGPE LVRPGASVKM SCKASGYTFS DFNIHWVKQK PGQGLEWIGY INPYTDVTVY NEKFKGKATL TSDRSSSTAY MDLSSLTSED SAVYYCASYF DGTFDYALDY WGQGTSITVS S
12 Fab 0302 вариабельная область легкой цепи DVVVTQTPAS LAVSLGQRAT ISCRASESVD NYGLSFMNWF QQKPGQPPKL LIYTASNLES GIPARFSGGG SRTDFTLTID PVEADDAATY FCQQSKELPW TFGGGTRLEI К
13 Fab 0311 вариабельная область тяжелой цепи EIQLQQSGPD LMKPGASVKM SCKASGYIFT DYNMHWVKQN QGKSLEWMGE INPNNGVVVY NQKFKGTTTL TVDKSSSTAY MDLHSLTSED SAVYYCTRAL YHSNFGWYFD SWGKGTTLTV SS
14 Fab 0311 вариабельная область легкой цепи DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCKASQSVD YDGDSHMNWY QQKPGQPPKL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGADFTLTIH PVEEEDAATY YCQQGNEDPW TFGGGTRLEI К
15 0301 CDR1 тяжелой цепи GYTFTDNYMI
16 0301 CDR2 тяжелой цепи DINPYNGGTT FNQKFKG
17 0301 CDR3 тяжелой цепи ESPYFSNLYV MDY
18 0301 CDR1 легкой цепи KASQSVDYDG DNYMN
19 0301 CDR2 легкой цепи AASNLES
20 0301 CDR3 легкой цепи HLSNEDLST
21 0302 CDR1 тяжелой цепи GYTFSDFNIH
22 0302 CDR2 тяжелой цепи YINPYTDVTV YNEKFKG
23 0302 CDR3 тяжелой цепи YFDGTFDYAL DY
24 0302 CDR1 легкой цепи RASESVDNYG LSFMN
25 0302 CDR2 легкой цепи TASNLES
- 30 037561
26 0302 CDR3 легкой цепи QQSKELPWT
27 0311 CDR1 тяжелой цепи GYIFTDYNMH
28 0311 CDR2 тяжелой цепи EINPNNGVVV YNQKFKG
29 0311 CDR3 тяжелой цепи ALYHSNFGWY FDS
30 0311 CDR1 легкой цепи KASQSVDYDG DSHMN
31 0311 CDR2 легкой цепи TASNLES
32 0311 CDR3 легкой цепи QQGNEDPWT
33 сАЬ 0301 тяжелая цепь EVQLQQSGPE LVRPGASVKM SCKASGYTFT DNYMIWVKQS HGKSLEWIGD INPYNGGTTF NQKFKGKATL TVEKSSSTAY MQLNSLTSED SAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTSVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK
34 сАЬ 0301 легкая цепь NIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCKASQSVD YDGDNYMNWY QQKPGQPPKL LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLNIH PVEEEDAATY YCHLSNEDLS TFGGGTKLEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
35 сАЬ 0302 тяжелая цепь EIQLQQSGPE LVKPGASVKM SCKASGYTFS DFNIHWVKQK PGQGLEWIGY INPYTDVTVY NEKFKGKATL TSDRSSSTAY MDLSSLTSED SAVYYCASYF DGTFDYALDY WGQGTSITVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTK TYTCNVDHKP SNTKVDKRVE SKYGPPCPPC PAPEFLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSQEEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSR LTVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSLGK
36 сАЬ 0302 легкая цепь DVVVTQTPAS LAVSLGQRAT ISCRASESVD NYGLSFMNWF QQKPGQPPKL LIYTASNLES GIPARFSGGG SRTDFTLTID PVEADDAATY FCQQSKELPW TFGGGTRLEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
37 сАЬ 0311 тяжелая цепь EIQLQQSGPD LMKPGASVKM SCKASGYTFT DYNMHWVKQN QGKSLEWMGE INPNNGVVVY NQKFKGTTTL TVDKSSSTAY MDLHSLTSED SAVYYCTRAL YHSNFGWYFD SWGKGTTLTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK
38 cAb 0311 легкая цепь DIVLTQSPAS LAVSLGQRAT ISCKASQSVD YDGDSHMNWY QQKPGQPPKL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGADFTLTIH PVEEEDAATY YCQQGNEDPW TFGGGTRLEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
39 h0301-H0 вариабельная область тяжелой цепи QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA PGQGLEWMGD INPYNGGTTF NQKFKGRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SS
40 h0301-Hl вариабельная область тяжелой цепи QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA PGQGLEWMGD INPYNGGTTF NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SS
41 h0301-H2 вариабельная область тяжелой цепи QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA PGQGLEWIGD INPYNGGTTF NQKFKGRATL TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SS
42 Н0302-Н1 вариабельная область тяжелой цепи QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DFNIHWVRQA PGQGLEWMGY INPYTDVTVY NEKFKGRVTI TSDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCASYF DGTFDYALDY WGQGTLVTVS S
43 Н0302-Н2 вариабельная область тяжелой цепи QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DFNIHWVRQA PGQGLEWIGY INPYTDVTVY NEKFKGRATL TSDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCASYF DGTFDYALDY WGQGTLVTVS S
44 Н0311-Н1 вариабельная область тяжелой цепи QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYIFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE INPNNGVVVY NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRAL YHSNFGWYFD SWGQGTLVTV SS
45 H0311-H2 вариабельная область тяжелой цепи QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYIFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE INPNNGVVVY NQKFKGTTTL TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRAL YHSNFGWYFD SWGQGTLVTV SS
46 h0301-L0 вариабельная область легкой цепи EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDNYMNWY QQKPGQAPRL LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCHLSNEDLS TFGGGTKVEI К
47 h0301-Ll вариабельная область легкой цепи NIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDNYMNWY QQKPGQAPRL LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCHLSNEDLS TFGGGTKVEI К
48 H0302-L0 вариабельная область легкой цепи EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSFMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW TFGQGTKVEI К
49 H0302-L1 вариабельная область легкой цепи EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSFMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SRTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW TFGQGTKVEI К
50 H0302-L2 вариабельная область легкой цепи EIVVTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSFMNWF QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SRTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW TFGQGTKVEI К
51 H0311-L0 вариабельная область легкой цепи EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDSHMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQGNEDPW TFGQGTKVEI К
52 H0311-L1 вариабельная область легкой цепи DIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDSHMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGADFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQGNEDPW TFGQGTKVEI К
- 32 037561
53 h0301-H0 тяжелая цепь QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA PGQGLEWMGD INPYNGGTTF NQKFKGRVTI TADKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK
54 h0301-Hl тяжелая цепь QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA PGQGLEWMGD INPYNGGTTF NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK
55 h0301-H2 тяжелая цепь QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DNYMIWVRQA PGQGLEWIGD INPYNGGTTF NQKFKGRATL TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCARES PYFSNLYVMD YWGQGTLVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK
56 Н0302-Н1 тяжелая цепь QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DFNIHWVRQA PGQGLEWMGY INPYTDVTVY NEKFKGRVTI TSDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCASYF DGTFDYALDY WGQGTLVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTK TYTCNVDHKP SNTKVDKRVE SKYGPPCPPC PAPEFLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSQEEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSR LTVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSLGK
57 Н0302-Н2 тяжелая цепь QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFS DFNIHWVRQA PGQGLEWIGY INPYTDVTVY NEKFKGRATL TSDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCASYF DGTFDYALDY WGQGTLVTVS SASTKGPSVF PLAPCSRSTS ESTAALGCLV KDYFPEPVTV SWNSGALTSG VHTFPAVLQS SGLYSLSSVV TVPSSSLGTK TYTCNVDHKP SNTKVDKRVE SKYGPPCPPC PAPEFLGGPS VFLFPPKPKD TLMISRTPEV TCVVVDVSQE DPEVQFNWYV DGVEVHNAKT KPREEQFNST YRVVSVLTVL HQDWLNGKEY KCKVSNKGLP SSIEKTISKA KGQPREPQVY TLPPSQEEMT KNQVSLTCLV KGFYPSDIAV EWESNGQPEN NYKTTPPVLD SDGSFFLYSR LTVDKSRWQE GNVFSCSVMH EALHNHYTQK SLSLSLGK
58 Н0311-Н1 тяжелая цепь QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYTFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE INPNNGVVVY NQKFKGRVTI TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRAL YHSNFGWYFD SWGQGTLVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK
- 33 037561
59 H0311-H2 тяжелая цепь QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKASGYIFT DYNMHWVRQA PGQGLEWMGE INPNNGVVVY NQKFKGTTTL TVDKSTSTAY MELSSLRSED TAVYYCTRAL YHSNFGWYFD SWGQGTLVTV SSASTKGPSV FPLAPCSRST SESTAALGCL VKDYFPEPVT VSWNSGALTS GVHTFPAVLQ SSGLYSLSSV VTVPSSSLGT KTYTCNVDHK PSNTKVDKRV ESKYGPPCPP CPAPEFLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSQ EDPEVQFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQFNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKGL PSSIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSQEEM TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS RLTVDKSRWQ EGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSLGK
60 H0301-L0 легкая цепь EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDNYMNWY QQKPGQAPRL LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCHLSNEDLS TFGGGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
61 h0301-Ll легкая цепь NIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDNYMNWY QQKPGQAPRL LIYAASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCHLSNEDLS TFGGGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
62 H0302-L0 легкая цепь EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSFMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW TFGQGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
63 H0302-L1 легкая цепь EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSFMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SRTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW TFGQGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
64 H0302-L2 легкая цепь EIVVTQSPAT LSLSPGERAT LSCRASESVD NYGLSFMNWF QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SRTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQSKELPW TFGQGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
65 H0311-L0 легкая цепь EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDSHMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQGNEDPW TFGQGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
66 H0311-L1 легкая цепь DIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSCKASQSVD YDGDSHMNWY QQKPGQAPRL LIYTASNLES GIPARFSGSG SGADFTLTIS SLEPEDFAVY YCQQGNEDPW TFGQGTKVEI KRTVAAPSVF IFPPSDEQLK SGTASVVCLL NNFYPREAKV QWKVDNALQS GNSQESVTEQ DSKDSTYSLS STLTLSKADY EKHKVYACEV THQGLSSPVT KSFNRGEC
67 CSF1 человека EEVSEYCSHM IGSGHLQSLQ RLIDSQMETS CQITFEFVDQ EQLKDPVCYL KKAFLLVQDI MEDTMRFRDN TPNAIAIVQL QELSLRLKSC FTKDYEEHDK ACVRTFYETP LQLLEKVKNV FNETKNLLDK DWNIFSKNCN NSFAECSSQG HERQSEGS
- 34 037561
68 IL-34 человека NEPLEMWPLT QNEECTVTGF LRDKLQYRSR LQYMKHYFPI NYKISVPYEG VFRIANVTRL QRAQVSEREL RYLWVLVSLSATESVQDVLL EGHPSWKYLQ EVQTLLLNVQ QGLTDVEVSP KVESVLSLLN APGPNLKLVR PKALLDNCFR VMELLYCSCC KQSSVLNWQD CEVPSPQSCS PEPSLQYAAT QLYPPPPWSP SSPPHSTGSV RPVRAQGEGL LP
69 Акцепторная A FR1 человека QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKAS
70 Акцепторная A FR2 человека WVRQAPGQGL EWMG
71 Акцепторная A FR3 человека RVTITADKST STAYMELSSL RSEDTAVYYC AR
72 Акцепторная A FR4 человека WGQGTLVTVS S
73 Акцепторная В FR1 человека QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKAS
74 Акцепторная В FR2 человека WVRQAPGQGL EWMG
75 Акцепторная В FR3 человека RVTITADKST STAYMELSSL RSEDTAVYYC AR
76 Акцепторная В FR4 человека WGQGTLVTVSS
77 Акцепторная С FR1 человека QVQLVQSGAE VKKPGSSVKV SCKAS
78 Акцепторная С FR2 человека WVRQAPGQGL EWMG
79 Акцепторная С FR3 человека RVTITADKST STAYMELSSL RSEDTAVYYC AR
80 Акцепторная С FR4 человека WGQGTLVTVS S
81 Акцепторная D FR1 человека EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSC
82 Акцепторная D FR2 человека WYQQKPGQAP RLLIY
83 Акцепторная D FR3 человека GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YC
84 Акцепторная D FR4 человека FGGGTKVEIK
85 Акцепторная Е FR1 человека EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSC
86 Акцепторная Е FR2 человека WYQQKPGQAP RLLIY
87 Акцепторная Е FR3 человека GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YC
88 Акцепторная Е FR4 человека FGQGTKVEIK
89 Акцепторная F FR1 человека EIVLTQSPAT LSLSPGERAT LSC
90 Акцепторная F FR2 человека WYQQKPGQAP RLLIY
91 Акцепторная F FR3 человека GIPARFSGSG SGTDFTLTIS SLEPEDFAVY YC
92 Акцепторная F FR4 человека FGQGTKVEIK
93 mCSFIR ECD-Fc APVIEPSGPE LVVEPGETVT LRCVSNGSVE WDGPISPYWT LDPESPGSTL TTRNATFKNT GTYRCTELED PMAGSTTIHL YVKDPAHSWN LLAQEVTVVE GQEAVLPCLI TDPALKDSVS LMREGGRQVL RKTVYFFSPW RGFIIRKAKV LDSNTYVCKT MVNGRESTST GIWLKVNRVH PEPPQIKLEP SKLVRIRGEA AQIVCSATNA EVGFNVILKR GDTKLEIPLN SDFQDNYYKK VRALSLNAVD FQDAGIYSCV ASNDVGTRTA TMNFQVVESA YLNLTSEQSL LQEVSVGDSL ILTVHADAYP SIQHYNWTYL GPFFEDQRKL EFITQRAIYR YTFKLFLNRV KASEAGQYFL MAQNKAGWNN LTFELTLRYP PEVSVTWMPV NGSDVLFCDV SGYPQPSVTW MECRGHTDRC DEAQALQVWN DTHPEVLSQK PFDKVIIQSQ LPIGTLKHNM TYFCKTHNSV GNSSQYFRAV SLGQSKQEPK SSDKTHTCPP CPAPELLGGP SVFLFPPKPK DTLMISRTPE VTCVVVDVSH EDPEVKFNWY VDGVEVHNAK TKPREEQYNS TYRVVSVLTV LHQDWLNGKE YKCKVSNKAL PAPIEKTISK AKGQPREPQV YTLPPSRDEL TKNQVSLTCL VKGFYPSDIA VEWESNGQPE NNYKTTPPVL DSDGSFFLYS KLTVDKSRWQ QGNVFSCSVM HEALHNHYTQ KSLSLSPGK
94 IgG4 S241P человека ASTKGPSVFP LAPCSRSTSE STAALGCLVK DYFPEPVTVS WNSGALTSGV HTFPAVLQSS GLYSLSSVVT VPSSSLGTKT YTCNVDHKPS NTKVDKRVES KYGPPCPPCP APEFLGGPSV FLFPPKPKDT LMISRTPEVT CVVVDVSQED PEVQFNWYVD GVEVHNAKTK PREEQFNSTY RVVSVLTVLH QDWLNGKEYK CKVSNKGLPS SIEKTISKAK GQPREPQVYT LPPSQEEMTK NQVSLTCLVK GFYPSDIAVE WESNGQPENN YKTTPPVLDS DGSFFLYSRL TVDKSRWQEG NVFSCSVMHE ALHNHYTQKS LSLSLGK
95 1дк человека RTVAAPSVFI FPPSDEQLKS GTASVVCLLN NFYPREAKVQ WKVDNALQSG NSQESVTEQD SKDSTYSLSS TLTLSKADYE KHKVYACEVT HQGLSSPVTK SFNRGEC
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

Claims (43)

  1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
    1. Способ лечения заболевания, связанного с CD16+, у человека, включающий введение человеку эффективного количества антитела, которое связывается с рецептором колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R) человека, где антитело блокирует связывание колониестимулирующего фактора 1 (CSF1) человека с CSF1R и блокирует связывание IL-34 человека с CSF1R человека, и
    - 35 037561 где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую
    CDR1 тяжелой цепи (НС) с последовательностью SEQ ID NO: 15,
    CDR2 НС с последовательностью SEQ ID NO: 16 и
    CDR3 НС с последовательностью SEQ ID NO: 17, и легкую цепь, содержащую
    CDR1 легкой цепи (LC) с последовательностью SEQ ID NO: 18,
    CDR2 LC с последовательностью SEQ ID NO: 19 и
    CDR3 LC с последовательностью SEQ ID NO: 20, где эффективное количество является достаточным для уменьшения количества неклассических CD16+ моноцитов у человека по меньшей мере на 50% на протяжении по меньшей мере 4 недель после введения двух доз.
  2. 2. Способ по п.1, в котором эффективное количество составляет от 3 до 10 мг/кг.
  3. 3. Способ по п.1 или 2, в котором дозу антитела вводят с частотой один раз в две недели или дольше.
  4. 4. Способ лечения заболевания, связанного с CD16+, у человека, включающий введение человеку антитела, которое связывается с рецептором колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R) человека, где антитело блокирует связывание колониестимулирующего фактора 1 (CSF1) человека с CSF1R человека и блокирует связывание IL-34 человека с CSF1R человека, и где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую
    CDR1 тяжелой цепи (НС) с последовательностью SEQ ID NO: 15,
    CDR2 НС с последовательностью SEQ ID NO: 16, и
    CDR3 НС с последовательностью SEQ ID NO: 17, и легкую цепь, содержащую
    CDR1 легкой цепи (LC) с последовательностью SEQ ID NO: 18,
    CDR2 LC с последовательностью SEQ ID NO: 19, и
    CDR3 LC с последовательностью SEQ ID NO: 20, где антитело вводят в дозе от 3 и 10 мг/кг и с частотой один раз в две недели или дольше.
  5. 5. Способ по любому из пп.1-4, в котором частота введения дозы составляет один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в месяц, один раз в пять недель, один раз в шесть недель, один раз в семь недель, один раз в два месяца, один раз в три месяца или четыре раза в год.
  6. 6. Способ по п.4, в котором способ включает введение одной дозы антитела.
  7. 7. Способ по любому из пп.1-5, который включает введение двух доз антитела.
  8. 8. Способ по п.7, в котором дозы вводят с перерывом по меньшей мере в две недели.
  9. 9. Способ по п.7, в котором дозы вводят с перерывом по меньшей мере в четыре недели.
  10. 10. Способ по любому из пп.1-9, в котором доза составляет 3 или 10 мг/кг.
  11. 11. Способ по любому из пп.1-10, в котором после введения одной дозы антитела количество неклассических CD16+ моноцитов у человека снижается по меньшей мере на 50%.
  12. 12. Способ любой из пп.1-11, в котором количество CD16-моноцитов не снижается или снижается по меньшей мере на 20%.
  13. 13. Способ по любому из пп.1-12, в котором после введения одной дозы антитела количество неклассических CD16+ моноцитов у человека снижается по меньшей мере на 70%.
  14. 14. Способ по любому из пп.1-12, в котором после введения одной дозы антитела количество неклассических CD16+ моноцитов у человека снижается по меньшей мере на 90%.
  15. 15. Способ по любому из пп.1-12, где количество неклассических CD16+ моноцитов снижается по меньшей мере на 50% в течение по меньшей мере одной недели, по меньшей мере двух недель, по меньшей мере трех недель, по меньшей мере четырех недель, по меньшей мере пяти недель, по меньшей мере шести недель, по меньшей мере семи недель или по меньшей мере восьми недель.
  16. 16. Способ по любому из пп.1-15, который дополнительно включает определение количества неклассических CD16+ моноцитов в образце периферической крови человека после введения по меньшей мере одной дозы антитела.
  17. 17. Способ по любому из пп.1-16, в котором CD16+ представляет собой неоплазию.
  18. 18. Способ уменьшения числа неклассических CD16+ моноцитов у человека, страдающего заболеванием, связанным с CD16+, включающий введение человеку эффективного количества антитела, которое связывается с рецептором колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R) человека, где антитело блокирует связывание колониестимулирующего фактора 1 (CSF1) человека с CSF1R человека и блокирует связывание IL-34 человека с CSF1R человека, и где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую
    CDR1 тяжелой цепи (НС) с последовательностью SEQ ID NO: 15,
    CDR2 НС с последовательностью SEQ ID NO: 16, и
    - 36 037561
    CDR3 НС с последовательностью SEQ ID NO: 17, и легкую цепь, содержащую
    CDR1 легкой цепи (LC) с последовательностью SEQ ID NO: 18,
    CDR2 LC с последовательностью SEQ ID NO: 19, и
    CDR3 LC с последовательностью SEQ ID NO: 20, где эффективное количество является достаточным для уменьшения количества неклассических CD16+ моноцитов у человека по меньшей мере на 50% на протяжении по меньшей мере 4 недель после введения двух доз.
  19. 19. Способ по п.18, в котором эффективное количество составляет от 3 до 10 мг/кг.
  20. 20. Способ по п.18 или 19, в котором дозу антитела вводят с частотой один раз в две недели или дольше.
  21. 21. Способ уменьшения числа неклассических CD16+ моноцитов у человека, страдающего заболеванием, связанным с CD16+, включающий введение человеку антитела, которое связывается с рецептором колониестимулирующего фактора 1 (CSF1R) человека, где антитело блокирует связывание колониестимулирующего фактора 1 (CSF1) человека с CSF1R человека и блокирует связывание IL-34 человека с CSF1R человека, и где антитело содержит тяжелую цепь, содержащую
    CDR1 тяжелой цепи (НС) с последовательностью SEQ ID NO: 15,
    CDR2 НС с последовательностью SEQ ID NO: 16, и
    CDR3 НС с последовательностью SEQ ID NO: 17, и легкую цепь, содержащую
    CDR1 легкой цепи (LC) с последовательностью SEQ ID NO: 18,
    CDR2 LC с последовательностью SEQ ID NO: 19, и
    CDR3 LC с последовательностью SEQ ID NO: 20, где антитело вводят в дозе от 3 и 10 мг/кг и с частотой один раз в две недели или дольше.
  22. 22. Способ по любому из пп.18-21, в котором частота введения доз составляет один раз в две недели, один раз в три недели, один раз в четыре недели, один раз в месяц, один раз в пять недель, один раз в шесть недель, один раз в семь недель, один раз в два месяца, один раз в три месяца или четыре раза в год.
  23. 23. Способ по п.21, в котором способ включает введение одной дозы антитела.
  24. 24. Способ по любому из пп.18-22, который включает введение двух доз антитела.
  25. 25. Способ по п.24, в котором дозы вводят с перерывом по меньшей мере в две недели.
  26. 26. Способ по п.24, в котором дозы вводят с перерывом по меньшей мере в четыре недели.
  27. 27. Способ по любому из пп.18-26, в котором доза составляет 3 мг/кг или 10 мг/кг.
  28. 28. Способ по любому из пп.18-27, в котором после введения одной дозы антитела количество неклассических CD16+ моноцитов у человека снижается по меньшей мере на 50%.
  29. 29. Способ любой из пп.18-28, в котором количество CD16-моноцитов не снижается или снижается по меньшей мере на 20%.
  30. 30. Способ по любому из пп.18-29, в котором после введения одной дозы антитела количество неклассических CD16+ моноцитов у человека снижается по меньшей мере на 70%.
  31. 31. Способ по любому из пп.18-29, в котором после введения одной дозы антитела количество неклассических CD16+ моноцитов у человека снижается по меньшей мере на 90%.
  32. 32. Способ по любому из пп.18-29, где количество неклассических CD16+ моноцитов снижается по меньшей мере на 50% в течение по меньшей мере одной недели, по меньшей мере двух недель, по меньшей мере трех недель, по меньшей мере четырех недель, по меньшей мере пяти недель, по меньшей мере шести недель, по меньшей мере семи недель или по меньшей мере восьми недель.
  33. 33. Способ по любому из пп.18-32, который дополнительно включает определение количества неклассических CD16+ моноцитов в образце периферической крови человека после введения по меньшей мере одной дозы антитела.
  34. 34. Способ по любому из пп.1-33, в котором неклассическими CD16+ моноцитами являются CD16+ моноциты периферической крови.
  35. 35. Способ по любому из пп.1-34, в котором антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 39 и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 46.
  36. 36. Способ по любому из пп.1-35, в котором антитело содержит тяжелую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 53 и легкую цепь, содержащую последовательность SEQ ID NO: 60.
  37. 37. Способ по любому из пп.1-35, в котором антитело представляет гуманизированное антитело.
  38. 38. Способ по любому из пп.1-35, в котором антитело выбрано из Fab, Fv, scFv, Fab' и (Fab')2.
  39. 39. Способ по любому из пп.1-38, в котором антитело детектируется в сыворотке крови человека в течение по меньше мере двух недель, по меньшей мере трех недель, по меньшей мере четырех недель, по меньшей мере месяца, по меньшей мере шести недель или по меньшей мере двух месяцев после введения дозы.
  40. 40. Способ по любому из пп.1-38, в котором антитело детектируется в сыворотке крови человека в течение по меньше мере четырех недель, по меньшей мере месяца, по меньшей мере шести недель или
    - 37 037561 по меньшей мере двух месяцев после введения дозы.
  41. 41. Способ по любому из пп.1-40, в котором период полураспада антитела в образце крови человека превышает 15 дней.
  42. 42. Способ по любому из пп.1-40, в котором период полураспада антитела в образце крови человека превышает 28 дней.
  43. 43. Способ по любому из пп.1-40, в котором период полураспада антитела в образце крови человека превышает 42 дня.
EA201692482A 2014-06-23 2015-06-18 Способы лечения заболеваний антителами, которые связывают рецептор колониестимулирующего фактора 1 (csf1r) EA037561B1 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201462015710P 2014-06-23 2014-06-23
PCT/US2015/036419 WO2015200089A1 (en) 2014-06-23 2015-06-18 Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r)

Publications (2)

Publication Number Publication Date
EA201692482A1 EA201692482A1 (ru) 2017-05-31
EA037561B1 true EA037561B1 (ru) 2021-04-14

Family

ID=53674259

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
EA201692482A EA037561B1 (ru) 2014-06-23 2015-06-18 Способы лечения заболеваний антителами, которые связывают рецептор колониестимулирующего фактора 1 (csf1r)

Country Status (13)

Country Link
US (2) US10975153B2 (ru)
EP (1) EP3157957A1 (ru)
JP (2) JP6964410B2 (ru)
KR (2) KR20170016501A (ru)
CN (2) CN106795222A (ru)
AU (1) AU2015280362B2 (ru)
BR (1) BR112016029460A2 (ru)
CA (1) CA2951156A1 (ru)
EA (1) EA037561B1 (ru)
IL (1) IL249393B (ru)
MX (1) MX2016016664A (ru)
SG (2) SG10201811475YA (ru)
WO (1) WO2015200089A1 (ru)

Families Citing this family (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20130302322A1 (en) 2012-05-11 2013-11-14 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r)
CN110709422B (zh) * 2017-04-19 2023-12-26 马伦戈治疗公司 多特异性分子及其用途
CN109053887B (zh) * 2018-07-18 2019-07-23 博奥信生物技术（南京）有限公司 一种抗人csf-1r单克隆抗体及用途
CN108948199B (zh) * 2018-07-18 2019-06-21 博奥信生物技术（南京）有限公司 抗人csf-1r单克隆抗体及其用途
EP3833762A4 (en) 2018-08-09 2022-09-28 Verseau Therapeutics, Inc. OLIGONUCLEOTIDE COMPOSITIONS FOR TARGETING CCR2 AND CSF1R AND THEIR USES

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011140249A2 (en) * 2010-05-04 2011-11-10 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies that bind csf1r
WO2013169264A1 (en) * 2012-05-11 2013-11-14 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r)
WO2014036357A1 (en) * 2012-08-31 2014-03-06 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r)

Family Cites Families (62)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
AU2728588A (en) 1987-10-23 1989-05-23 Genetics Institute Inc. Composition and method for treating cancers characterized by over-expression of the c-fms proto-oncogene
GB8823869D0 (en) 1988-10-12 1988-11-16 Medical Res Council Production of antibodies
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
US6673986B1 (en) 1990-01-12 2004-01-06 Abgenix, Inc. Generation of xenogeneic antibodies
US6713610B1 (en) 1990-01-12 2004-03-30 Raju Kucherlapati Human antibodies derived from immunized xenomice
US5877397A (en) 1990-08-29 1999-03-02 Genpharm International Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies of various isotypes
US5874299A (en) 1990-08-29 1999-02-23 Genpharm International, Inc. Transgenic non-human animals capable of producing heterologous antibodies
US6255458B1 (en) 1990-08-29 2001-07-03 Genpharm International High affinity human antibodies and human antibodies against digoxin
US6300129B1 (en) 1990-08-29 2001-10-09 Genpharm International Transgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
US5545806A (en) 1990-08-29 1996-08-13 Genpharm International, Inc. Ransgenic non-human animals for producing heterologous antibodies
EP0955365A3 (en) 1992-06-09 2000-12-20 Chiron Corporation Crystallization of M-CSF
US20020193575A1 (en) 1993-09-07 2002-12-19 Smithkline Beecham P.L.C. Recombinant IL4 antibodies useful in treatment of IL4 mediated disorders
JPH10218791A (ja) 1997-01-31 1998-08-18 Toagosei Co Ltd 慢性関節リウマチ治療薬
US6972323B1 (en) 1997-04-01 2005-12-06 Sankyo Company, Limited Anti-Fas antibodies
US6342220B1 (en) 1997-08-25 2002-01-29 Genentech, Inc. Agonist antibodies
AU1804499A (en) 1997-12-05 1999-06-28 La Jolla Institute For Experimental Medicine Inhibition of tumor growth by macrophage intervention
CA2348292A1 (en) 1998-10-30 2000-05-11 Takeda Chemical Industries, Ltd. Betacellulin protein-containing preparation
PL200134B1 (pl) 1999-05-07 2008-12-31 Genentech Inc Zastosowanie przeciwciała anty-CD20
AU783063B2 (en) 1999-10-28 2005-09-22 Seyedhossein Aharinejad Use of CSF-1 inhibitors
WO2001034177A2 (en) 1999-11-08 2001-05-17 The Government Of The United States Of America, A S Represented By The Secretary, Department Of Hea Lth & Human Services, The National Institutes Of Health Method of treating a viral infection using antagonists of macrophage colony stimulating factor
US7108852B2 (en) 2000-03-20 2006-09-19 Warner-Lambert Company Llc Methods of treating inflammation using antibodies to M-CSF
US7455836B2 (en) 2000-05-08 2008-11-25 The University Of Melbourne Method of treatment and agents useful for same
US6773895B2 (en) 2000-09-01 2004-08-10 Boehringer Ingelheim Pharma Kg Method for identifying substances which positively influence inflammatory conditions of chronic inflammatory airway diseases
US7247618B2 (en) 2001-04-30 2007-07-24 Tripathi Rajavashisth Methods for inhibiting macrophage colony stimulating factor and c-FMS-dependent cell signaling
WO2002102854A2 (en) 2001-06-20 2002-12-27 Morphosys Ag Antibodies that block receptor protein tyrosine kinase activation, methods of screening for and uses thereof
AU2003291002A1 (en) 2002-11-15 2004-06-15 Chiron Corporation Methods for preventing and treating cancer metastasis and bone loss associated with cancer metastasis
AR045563A1 (es) 2003-09-10 2005-11-02 Warner Lambert Co Anticuerpos dirigidos a m-csf
WO2005040395A1 (en) 2003-10-22 2005-05-06 Keck Graduate Institute Methods of synthesizing heteromultimeric polypeptides in yeast using a haploid mating strategy
GB0325836D0 (en) 2003-11-05 2003-12-10 Celltech R&D Ltd Biological products
JP2007524671A (ja) 2004-01-21 2007-08-30 カイロン コーポレイション Ｍ−ｃｓｆムテインおよびその使用
JP2008506366A (ja) 2004-05-14 2008-03-06 レセプター バイオロジックス インコーポレイテッド 細胞表面受容体アイソフォームならびにその同定および使用方法
WO2006012451A2 (en) 2004-07-22 2006-02-02 Five Prime Therapeutics, Inc. Compositions and methods of use for mgd-csf in disease treatment
WO2006076288A2 (en) 2005-01-11 2006-07-20 Five Prime Therapeutics, Inc. Dna constructs for long-term expression of intravascularly injected naked dna
AU2006207999A1 (en) 2005-01-27 2006-08-03 Five Prime Therapeutics, Inc. Leader sequences for directing secretion of polypeptides and methods for production thereof
US8003108B2 (en) 2005-05-03 2011-08-23 Amgen Inc. Sclerostin epitopes
KR20080082628A (ko) 2005-11-10 2008-09-11 리셉터 바이오로직스 인크 수용체 및 리간드 이소형태의 제조 방법
WO2007075933A2 (en) 2005-12-21 2007-07-05 Cell Signaling Technology, Inc. Translocation and mutant csf1r kinase in human leukemia
WO2007120252A2 (en) 2005-12-22 2007-10-25 Novartis Ag Soluble human m-csf receptor and uses thereof
KR20080083187A (ko) 2006-01-05 2008-09-16 노바르티스아게 암 전이 및 암 전이와 관련된 골 소실의 예방 및 치료 방법
AU2007248493B2 (en) 2006-05-04 2010-09-30 The Rockefeller University HCV coreceptor and methods of use thereof
US7833789B2 (en) 2006-08-01 2010-11-16 Fondazione Centro San Raffaele Del Monte Tabor Monocyte cell
JP2010510219A (ja) 2006-11-17 2010-04-02 バイオジェン・アイデック・エムエイ・インコーポレイテッド アミロイド関連障害を処置するためのコロニー刺激因子の全身投与
DE602008004296D1 (de) 2007-02-14 2011-02-17 Vaccinex Inc Humanisierte anti-cd100-antikörper
WO2008124858A2 (en) 2007-04-11 2008-10-23 F-Star Biotechnologische Forschungs- Und Entwicklungsges. M.B.H. Targeted receptor
WO2008150383A1 (en) 2007-05-30 2008-12-11 Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University Csf-1r mutants
BRPI0815368A2 (pt) 2007-08-21 2015-02-10 Amgen Inc "proteinas c-fms humanas a antigeno"
US7981415B2 (en) 2007-09-07 2011-07-19 Cisthera, Inc. Humanized PAI-1 antibodies
JP2011502266A (ja) 2007-10-31 2011-01-20 ジヤンセン・フアーマシユーチカ・ナームローゼ・フエンノートシヤツプ Ｆｍｓ治療に対する応答を評価するバイオマーカー
WO2009075344A1 (ja) 2007-12-12 2009-06-18 Japan As Represented By Director General Of Agency Of National Cancer Center M-csf受容体を分子標的とするmll白血病及びmoz白血病治療剤、およびその利用
CN102702358B (zh) 2008-03-14 2016-02-17 天士力创世杰（天津）生物制药有限公司 针对csf-1r的抗体
US8470977B2 (en) 2008-03-14 2013-06-25 Transgene S.A. Antibody against the CSF-1R
US8183207B2 (en) 2008-11-26 2012-05-22 Five Prime Therapeutics, Inc. Treatment of osteolytic disorders and cancer using CSF1R extracellular domain fusion molecules
WO2010062399A2 (en) 2008-11-26 2010-06-03 Five Prime Therapeutics, Inc. Csf1r extracellular domain fusion molecules and treatments using same
ES2722300T3 (es) 2009-12-10 2019-08-09 Hoffmann La Roche Anticuerpos que se unen preferentemente al dominio extracelular 4 de CSF1R y su uso
RU2617966C2 (ru) 2010-03-05 2017-04-28 Ф.Хоффманн-Ля Рош Аг Антитела против csf-1r человека и их применение
US9169323B2 (en) 2010-03-05 2015-10-27 Hoffmann-La Roche Inc. Antibodies against human CSF-1R
AR080698A1 (es) 2010-04-01 2012-05-02 Imclone Llc Anticuerpo o fragmento del mismo que especificamente enlaza la variante de csf -1r humano, composicion farmaceutica que lo comprende, su uso para la manufactura de un medicamento util para el tratamiento de cancer y metodo para determinar si un sujeto es candidato para tratamiento de cancer basado e
TW201307845A (zh) 2010-12-13 2013-02-16 Novartis Ag 預測方法及利用ｉｌ－１７拮抗劑治療關節炎的方法
CA2851771C (en) 2011-10-21 2018-09-11 Transgene Sa Modulation of macrophage activation
CA2852800A1 (en) 2011-10-21 2013-04-25 Inserm (Institut National De La Sante Et De La Recherche Medicale) A m-dc8+ monocyte depleting agent for the prevention or the treatment of a condition associated with a chronic hyperactivation of the immune system
SG11201702723VA (en) * 2014-10-29 2017-05-30 Five Prime Therapeutics Inc Combination therapy for cancer

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2011140249A2 (en) * 2010-05-04 2011-11-10 Five Prime Therapeutics, Inc. Antibodies that bind csf1r
WO2013169264A1 (en) * 2012-05-11 2013-11-14 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r)
WO2014036357A1 (en) * 2012-08-31 2014-03-06 Five Prime Therapeutics, Inc. Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r)

Also Published As

Publication number Publication date
KR20230086809A (ko) 2023-06-15
WO2015200089A1 (en) 2015-12-30
CN106795222A (zh) 2017-05-31
US10975153B2 (en) 2021-04-13
KR20170016501A (ko) 2017-02-13
US20170152320A1 (en) 2017-06-01
AU2015280362A1 (en) 2016-12-22
JP2017520562A (ja) 2017-07-27
IL249393B (en) 2022-02-01
IL249393A0 (en) 2017-02-28
US20210317219A1 (en) 2021-10-14
CA2951156A1 (en) 2015-12-30
SG11201610672YA (en) 2017-01-27
JP2020169179A (ja) 2020-10-15
SG10201811475YA (en) 2019-02-27
JP6964410B2 (ja) 2021-11-10
BR112016029460A2 (pt) 2017-10-24
EP3157957A1 (en) 2017-04-26
EA201692482A1 (ru) 2017-05-31
CN113350501A (zh) 2021-09-07
MX2016016664A (es) 2017-03-20
AU2015280362B2 (en) 2021-03-04

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20210277130A1 (en) Methods of Treating Conditions with Antibodies that Bind Colony Stimulating Factor 1 Receptor (CSF1R)
US10822421B2 (en) Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (CSF1R)
AU2012374617B2 (en) Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (CSF1R)
AU2020233652A1 (en) Tumor necrosis factor-like ligand 1A specific antibodies and compositions and uses thereof
US20210317219A1 (en) Methods of Treating Conditions with Antibodies that Bind Colony Stimulating Factor 1 Receptor (CSF1R)
EA036336B1 (ru) Связывающие csf1r антитела
EP4200018A1 (en) Anti-par-2 antibodies and methods of use thereof
AU2019204985B2 (en) Method of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (CSF1R)
NZ745504A (en) Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r)
NZ745504B2 (en) Methods of treating conditions with antibodies that bind colony stimulating factor 1 receptor (csf1r)

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s)

Designated state(s): AM AZ BY KZ KG TJ TM