CN107467670B - 一种益生菌制剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种益生菌制剂及其制备方法与应用，该益生菌制剂按质量百分比计包括：30‑45%的枯草芽孢杆菌、5‑20%的地衣芽孢杆菌、20‑40%的粪肠球菌、20‑35%的胃蛋白酶、0‑5%的马齿苋。该益生菌制剂可以在制备用于调理肠道微生物环境的保健品、食品、药品或饲料中应用，其能够有效治疗因肠道内菌群失调引起的便秘，同时该益生菌制剂也可以在制备发酵饲料中应用，其能够大大缩短发酵饲料的发酵时间。
Description
技术领域
本发明属于生物技术领域，具体涉及一种益生菌制剂及其制备方法与应用。
背景技术
健康人和动物的肠道内寄居着种类繁多的微生物，这些微生物称为肠道菌群。肠道菌群按一定的比例组合，各菌间互相制约，互相依存，在质和量上形成一种生态平衡，一旦机体内外环境发生变化，例如饮食发生改变、使用抗生素药物、肠道免疫功能障碍等，导致敏感肠菌被压制，未被抑制的细菌乘机繁殖，从而引起菌群失调，使人或动物产生相应疾病。
正常粪便含有70-80％的水份，这些水份的保持就得益于肠内菌群的附着和存在。所以维持身体的健康，保持肠内有益菌占优势是十分必要的。如果在肠道中没有肠道菌群，例如吃了抗生素把肠道菌群大部分都杀死了，粪便中也就没有了菌群和水份的完美结合，使粪便又干又硬，导致便秘。
目前临床上常用的治疗便秘的药物有：容积性泻药、刺激性泻药、润滑性泻药、渗透性缓泻药、肠动力药、微生态制剂等，这些药物虽在治疗便秘上有效果，但是其副作用也十分明显，对人和动物有伤害。市场上面还有些治疗便秘的益生菌制剂，这些益生菌产品菌数高，但由于缺乏保护，能成功到达肠道定点繁殖的活菌数量确很少，导致治疗周期普遍偏长，不能及时有效的缓解便秘患者的痛苦。
发明内容
本发明的第一个目的在于提供一种益生菌制剂，该益生菌制剂利用益生菌抑制有害菌，能够调理肠道微生物环境，使肠道内有益菌占优势，治疗因肠道内菌群失调引起的便秘；同时，通过胃蛋白酶使肠道内的粪便稀化，使粪便顺利排出，且排出的粪便无臭味，该益生菌制剂起效快，效果显著，还能提高人体和动物的消化功能和免疫功能。
为实现上述目的，本发明提供的益生菌制剂，其按质量百分比计包括：30-45％的枯草芽孢杆菌、5-20％的地衣芽孢杆菌、20-40％的粪肠球菌、20-35％的胃蛋白酶、0-5％的马齿苋。
作为本发明的优选，本发明提供的益生菌制剂，其按质量百分比计包括：30-40％的枯草芽孢杆菌、10-20％的地衣芽孢杆菌、25-35％的粪肠球菌、20-30％的胃蛋白酶、2-5％的马齿苋。
作为本发明的进一步优选，本发明提供的益生菌制剂，其按质量百分比计包括：35％的枯草芽孢杆菌、10％的地衣芽孢杆菌、30％的粪肠球菌、22％的胃蛋白酶、3％的马齿苋。
作为本发明的更进一步优选，本发明提供的益生菌制剂在具体使用时可以将其与糖类物质进行配伍使用，所述糖类物质加入量至少为益生菌制剂的3倍；所述糖类物质优选红糖、白糖或葡萄糖，也可以是蜂蜜等含糖量较高的物质，还可以是其他的单糖或寡糖。糖类物质对枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌有增殖作用，使枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌在肠道中占有优势，提高治疗效果。
本发明提供的益生菌制剂，每克微生物组合剂中，活菌数为100亿-110亿，保证益生菌制剂能够对动物肠道产生有效的调节作用。
本发明的第二个目的在于提供一种益生菌制剂的制备方法：具体包括以下步骤：
(1)按上述质量百分比称取晒干后的马齿苋，用粉碎机将其粉碎，过筛，得马齿苋细粉；
(2)将马齿苋细粉与枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌、胃蛋白酶进行混合均匀即可。
本发明的第三个目的在于提供一种益生菌制剂在制备用于调理肠道微生物环境的保健品、食品、药品或饲料中的应用，该益生菌制剂能够改善宿主肠道内菌群的构成，预防和改善便秘，其起效快，无副作用，且排出的粪便无臭味。
本发明的第四个目的在于提供一种益生菌制剂在制备发酵饲料中的应用，将3-5重量份的益生菌制剂、300-500重量份的水与1000-1200重量份的待发酵饲料混均，常温下发酵即可，该益生菌制剂能够使饲料在16-32小时发酵完成，大大缩短饲料发酵时间；同时，将益生菌发酵后的饲料喂养动物后，饲料中的营养成分可全部被吸收，动物排便正常，能够健康成长，且免疫力提高，不会发生***等病症。
本发明提供的益生菌制剂在制备发酵饲料中应用时，最好将益生菌制剂与糖配伍使用，即将3-5重量份的益生菌制剂、50-100重量份的糖、300-500重量份的水与1000-1200重量份的待发酵饲料混均，常温下发酵即可，加入糖能够进一步缩短发酵时间，使发酵时间在12小时内完成，该发酵时间居世界首位。所述的糖为食用的红糖、白糖、葡萄糖等，也可以是其他的单糖或寡糖。
本发明提供的益生菌制剂中各原料的功能作用如下：
枯草芽孢杆菌，对特殊菌体进行促芽孢和微胶囊包被处理，在孢子状态下稳定性好，能耐氧化、耐挤压、耐高温、耐酸碱，在酸性胃中保持活性，可耐唾液和胆汁的攻击，是微生物中可100％直达大小肠的活菌。加入枯草芽孢杆菌主要有以下几点作用；一：枯草芽孢杆菌菌体生长过程中产生的枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌肽等活性物质，这些活性物质对致病菌或内源性感染的条件致病菌有明显的抑制作用；同时，枯草芽孢杆菌迅速消耗环境中的游离氧，造成肠道低氧，促进有益厌氧菌生长，并产生乳酸等有机酸类，降低肠道PH值，间接抑制其它致病菌生长。二：枯草芽孢杆菌能够提高免疫球蛋白和抗体水平，增强细胞免疫和体液免疫功能，提高群体免疫力；同时，枯草芽孢杆菌菌体自身合成α-淀粉酶、蛋白酶、脂肪酶、纤维素酶等酶类，在消化道中与动物体(人体)内的消化酶类一同发挥作用，提高机体的消化功能。三：枯草芽孢杆菌通过与病原菌对营养素的竞争，抑制病原菌，调节肠道微生态平衡，形成生物学屏障。同时，其代谢产物乳酸和细菌素具有抑制其他有害细菌在肠道内增殖的作用，维持和保证菌群最佳优势组合及这种组合的稳定，阻止了致病菌的定殖和入侵，抑制致病菌和有害微生物的生长及其毒素的黏附；四：枯草芽孢杆菌对革兰阳性和革兰阴性致病菌均有抑制作用，枯草芽孢杆菌能够抑制大肠杆菌和沙门菌对Caco-2细胞的黏附，从而阻止其在肠道内的定殖；五：枯草芽孢杆菌具有良好的肠道黏附特性。枯草芽孢杆菌与致病菌对甘露糖特异性受体的竞争，减少了致病菌对人体细胞的黏附，从而保护宿主免于感染。
地衣芽孢杆菌，细胞形态和排列呈杆状、单生，可调整菌群失调达到治疗目的，可促使机体产生抗菌活性物质、杀灭致病菌。能产生抗活性物质，并具有独特的生物夺氧作用机制，能抑制致病菌的生长繁殖。此外，地衣芽孢杆菌具有较强的蛋白酶、脂肪酶、淀粉酶的活性，能够促进机体对营养物质的吸收利用，增强机体免疫力；同时，促进肠道内正常生理性厌氧菌的生长，调整肠道菌群失调，恢复肠道功能。
粪肠球菌，在肠黏膜具有较强的耐受和定植能力，能产生天然抗生素，有利于机体健康；同时还能产生细菌素等抑菌物质，抑制大肠杆菌和沙门氏菌等病原菌的生长，改善肠道微环境，还能抑制肠道内产尿素酶细菌和腐败菌的繁殖，减少肠道尿素酶和内毒素的含量，使血液中氨和内毒素的含量下降。粪肠球菌与枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌配合使用，枯草芽孢杆菌和地衣芽孢杆菌具有促进粪肠球菌增殖的作用，进一步增强治疗效果。
胃蛋白酶，是一种消化性胃蛋白酶，由胃部中的胃粘膜主细胞(gastricchiefcell)所分泌，能将食物中的蛋白质分解为小的肽片段，胃蛋白酶是一种酸性胃蛋白酶，能分解蛋白质中由芳香族氨基酸或酸性氨基酸所形成的肽键，故能催化酪蛋白、球蛋白、组蛋白，动物的角、指甲和羽毛中的角蛋白，以及催化植物蛋白等的水解。本发明中加入胃蛋白酶主要有以下两个目的；一：为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌提供养分，使更多的活菌直达肠道，促进肠道中有益菌的生长。二：促进食物在胃部分解转化，使肠道内的粪便稀化，辅助肠道运动，减少肠道与有毒物质接触的机会，抑制有害物质的吸收并促进***。
马齿苋，性寒，入心、肝、脾、大肠经，具有清热解毒、利水祛湿、止血凉血、消炎止痛等功效，还可以增强机体的免疫力，从而提高机体的调节能力，避免病毒侵入人体，在枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌、胃蛋白酶中加入马齿苋，由于马齿苋能够使肠道更加润滑，使粪便***更加通畅，可以大大的缩短治疗便秘的时间，及时缓解便秘者的痛苦，其与胃蛋白酶协同作用使排出的粪便无臭味。
本发明的优点和有益效果：
(1)本发明提供的益生菌制剂通过加入枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌，并对其比例进行了调节，其能够调理肠道微生物环境，改善宿主肠道内菌群的构成、利用益生菌抑制有害菌，能够快速调整因肠道内菌群失调引起的便秘。
(2)本发明提供的益生菌制剂通过加入胃蛋白酶，一方面为枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠肠菌提供营养，使更多的活菌直达肠道，另一方面通过胃蛋白酶加速食物在胃部的分解转化，提高机体的消化功能，使肠道内的粪便稀化，辅助肠道运动，进一步改善便秘。
(3)本发明提供的益生菌制剂通过加入马齿苋排毒、降火，同时增加肠道的润滑性，其与地衣芽孢杆菌、粪肠球菌、胃蛋白酶配合使用，使粪便***更加通畅，缩短治疗便秘的时间，其与胃蛋白酶协同作用使排出的粪便无臭味。
(4)本发明提供的益生菌通过枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌、胃蛋白酶和马齿苋的作用，其调整肠道内菌群失调的效果明显，能使多种益生菌在肠道中定植，调整人与动物肠道菌群平衡，从而提高机体的免疫力以及微生物环境度，能够有效的治疗因肠道内菌群失调引起的便秘，起效快，治疗便秘的周期较短，还能提高机体自身的免疫力，从根本上解决便秘。
(5)本发明提供的益生菌与糖配合使用时，能够提高益生菌的活化效率，将其用在发酵饲料中能够大大缩短饲料的发酵时间，使饲料原发酵时间由28天缩短到12-32小时；同时，将采用该益生菌发酵的饲料喂养动物后，饲料中的营养成分能全部被吸收，动物的身体状况良好，生长速度快，免疫力提高，不***不吃药，不得***。
具体实施方式
为使本领域技术人员更好的理解本发明实施的目的、技术方案和优点，下面结合具体实施案例对本发明的技术方案进行清楚、完成地描述，但并不用于对本发明保护范围的限定。
实施例1
本实施例提供的益生菌制剂，按质量百分比计包括：枯草芽孢杆菌35％、地衣芽孢杆菌10％、粪肠球菌35％、胃蛋白酶20％，其中，每克益生菌制剂中，活菌数为108亿。
具体制备方法：按上述质量百分比称取晒干后的马齿苋，用粉碎机将其粉碎，过筛，得马齿苋细粉；再将马齿苋细粉与枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌、胃蛋白酶进行混合均匀即可。
实施例2
本实施例提供的益生菌制剂，按质量百分比计包括：枯草芽孢杆菌30％、地衣芽孢杆菌20％、粪肠球菌25％、胃蛋白酶20％、马齿苋5％，其中，每克益生菌制剂中，活菌数为105亿。
具体制备方法：同实施例1。
实施例3
本实施例提供的益生菌制剂，按质量百分比计包括：枯草芽孢杆菌40％、地衣芽孢杆菌5％、粪肠球菌23％、胃蛋白酶30％、马齿苋2％，其中，每克益生菌制剂中，活菌数为101亿。
具体制备方法：同实施例1。
实施例4
本实施例提供的益生菌制剂，按质量百分比计包括：枯草芽孢杆菌45％、地衣芽孢杆菌10％、粪肠球菌20％、胃蛋白酶20％、马齿苋5％，其中，每克益生菌制剂中，活菌数为105亿。
具体制备方法：同实施例1。
实施例5
本实施例提供的益生菌制剂，按质量百分比计包括：枯草芽孢杆菌30％、地衣芽孢杆菌10％、粪肠球菌20％、胃蛋白酶35％、马齿苋5％，其中，每克益生菌制剂中，活菌数为100亿。
具体制备方法：同实施例1。
实施例6
本实施例提供的益生菌制剂，按质量百分比计包括：枯草芽孢杆菌30％、地衣芽孢杆菌5％、粪肠球菌40％、胃蛋白酶22％、马齿苋3％，其中，每克益生菌制剂中，活菌数为107亿。
具体制备方法：同实施例1。
实施例7
本实施例提供的益生菌制剂，按质量百分比计包括：枯草芽孢杆菌35％、地衣芽孢杆菌10％、粪肠球菌30％、胃蛋白酶22％、马齿苋3％，其中，每克益生菌制剂中，活菌数为107亿。
具体制备方法：同实施例1。
对比例1
一种益生菌制剂，按质量百分比计包括：枯草芽孢杆菌45％、地衣芽孢杆菌20％、粪肠球菌20％、15％的胃蛋白酶，其中，每克益生菌制剂中，活菌数为110亿。
对比例2
一种益生菌制剂，按质量百分比计包括：枯草芽孢杆菌45％、地衣芽孢杆10％、粪肠球菌30％、胃蛋白酶12％、马齿苋3％，其中，每克益生菌制剂中，活菌数为110亿。
本发明益生菌制剂在临床上的应用情况如下：
1、病例选择：
本组病例均为因肠道内菌群失调引起的便秘的患者，符合纳入、排除标准，年龄20-65岁之间，其中，男士占50％、女士占50％。随机分为12组，每组各20例，其中实验组为第1～9组，对照组为第10-12组。这12组患者的年龄、性别、病情等资料无显著性差异，具有可比性。
2、治疗方案：
第1～7组(实验组)患者分别服用实施例1～7所提供的制剂，每日一次，每次1.5g；第8组(实验组)、第9组(实验组)分别服用实施例6、实施例7所提供的制剂，且在服用制剂后另外服用5g白糖，第10组(对照组)患者食用对比例1所提供的制剂，每日一次，每次1.5g，第11组(对照组)患者食用对比例1所提供的制剂，每日一次，每次1.5g，且在服用制剂后另外服用5g白糖；第12组(对照组)患者食用对比例2所提供的制剂，每日一次，每次1.5g。
观察并记录：服药7天后、15天之后、30天之后分别记录病情，并按照“效果显著”、“有效”、“无效”这三个等级来对该药剂的治疗作用进行评价。
3、临床评价标准：
效果显著：患者大便1-2次/日，便质柔软，无臭味，不粘便池。
有效：患者大便2日一次，便质接近正常，需继续服药。
无效：患者大便情况无明显变化。
4、服用7天之后进行观察，结果如表1所示：
表1临床试验结果
| 项目 | 效果显著(例) | 有效(例) | 无效(例) |
| 实验组1 | 13 | 7 | 0 |
| 实验组2 | 17 | 3 | 0 |
| 实验组3 | 17 | 3 | 0 |
| 实验组4 | 18 | 2 | 0 |
| 实验组5 | 16 | 4 | 0 |
| 实验组6 | 17 | 3 | 0 |
| 实验组7 | 18 | 2 | 0 |
| 实验组8 | 19 | 1 | 0 |
| 实验组9 | 19 | 1 | 0 |
| 对照组1 | 0 | 6 | 14 |
| 对照组2 | 0 | 8 | 12 |
| 对照组3 | 2 | 9 | 9 |
5、服用15天之后进行观察，结果如表2所示：
表2临床试验结果
| 项目 | 效果显著(例) | 有效(例) | 无效(例) |
| 实验组1 | 16 | 4 | 0 |
| 实验组2 | 19 | 1 | 0 |
| 实验组3 | 18 | 2 | 0 |
| 实验组4 | 19 | 1 | 0 |
| 实验组5 | 18 | 2 | 0 |
| 实验组6 | 19 | 1 | 0 |
| 实验组7 | 20 | 0 | 0 |
| 实验组8 | 20 | 0 | 0 |
| 实验组9 | 20 | 0 | 0 |
| 对照组1 | 1 | 9 | 10 |
| 对照组2 | 1 | 11 | 8 |
| 对照组3 | 5 | 10 | 5 |
6、服用30天之后进行观察，结果如表3所示：
表3临床试验结果
从上述结果可以看出，本发明提供的益生菌制剂中胃蛋白酶的加入量直接影响治疗效果，当胃蛋白酶加入量过低时，其治疗效果较差，即便长期服用，效果仍不理想。同时，在该制剂中加入马齿苋能够增加治疗效果，明显缩短治疗周期；且该益生菌制剂与白糖同服时，能够进一步加强治疗效果。
由此可见，本发明提供的益生菌制剂能够在制备用于调理肠道微生物环境的保健品、食品、药品或饲料中的应用，改善宿主肠道内菌群的构成，预防和改善便秘，其起效快，无副作用，且排出的粪便无臭味。
实施例8
本发明制得的益生菌制剂在制备发酵饲料中的应用。
在1000重量份的农粮作物(土豆20-25％、玉米18-20％、豆粕5-10％、骨粉2-5％、豆渣34-40％、蔬菜4-6％、地瓜秧7-10％)中加入3重量份实施例7制得的益生菌制剂、300重量份的水，常温状态下发酵，20小时即可制得发酵饲料。
实施例9
在1000重量份的农粮作物(土豆20-25％、玉米18-20％、豆粕5-10％、骨粉2-5％、豆渣34-40％、蔬菜4-6％、地瓜秧7-10％)中加入3重量份的实施例7制得的益生菌制剂、300重量份的水、50重量份的白糖，常温状态下发酵，12小时即可制得发酵饲料。
将实施例8、实施例9制得的发酵饲料喂养饲料猪，饲料猪三个月内没有生病，且生长状况良好，饲料中的营养成分利用率高，食用该发酵饲料较普通发酵饲料喂养的猪长得更快，而且饲料猪的免疫力提高，期间没有得过***，也没有得过其他病症。
Claims (10)
1.一种益生菌制剂，其特征在于：按质量百分比计包括：30-45%的枯草芽孢杆菌、5-20%的地衣芽孢杆菌、20-40%的粪肠球菌、20-35%的胃蛋白酶、0-5%的马齿苋。
2.根据权利要求1所述的一种益生菌制剂，其特征在于：按质量百分比计包括：30-40%的枯草芽孢杆菌、10-20%的地衣芽孢杆菌、25-35%的粪肠球菌、20-30%的胃蛋白酶、2-5%的马齿苋。
3.根据权利要求1所述的一种益生菌制剂，其特征在于：按质量百分比计包括：35%的枯草芽孢杆菌、10%的地衣芽孢杆菌、30%的粪肠球菌、22%的胃蛋白酶、3%的马齿苋。
4.根据权利要求1所述的一种益生菌制剂，其特征在于：每克益生菌制剂中活菌数为100亿-110亿。
5.权利要求1所述的益生菌制剂的制备方法，其特征在于：具体包括以下步骤：
（1）按要求称取晒干后的马齿苋，用粉碎机将其粉碎，过筛，得马齿苋细粉；
（2）将马齿苋细粉与枯草芽孢杆菌、地衣芽孢杆菌、粪肠球菌、胃蛋白酶进行混合均匀即可。
6.权利要求1或2或3所述的益生菌制剂在制备用于调理肠道微生物环境的保健品、食品、药品或饲料中的应用。
7.根据权利要求6所述的一种益生菌制剂在制备用于调理肠道微生物环境的保健品、食品、药品或饲料中的应用，其特征在于：具体使用时将益生菌制剂与糖类物质配伍，所述糖类物质加入量至少为益生菌制剂的3倍。
8.权利要求1或2或3所述的益生菌制剂在制备发酵饲料中的应用。
9.根据权利要求8所述的益生菌制剂在制备发酵饲料中的应用，其特征在于：具体使用时将 3-5重量份的益生菌制剂、300-500重量份的水与1000-1200重量份的待发酵饲料混均，常温下发酵即可。
10.根据权利要求9所述的益生菌制剂在制备发酵饲料中的应用，其特征在于：具体使用时将益生菌制剂与糖类物质配伍使用，将 3-5重量份的益生菌制剂、50-100重量份的糖类物质、300-500重量份的水与1000-1200重量份的待发酵饲料混均，常温下发酵即可。
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