CN107319051A - 一种石斛红曲及其制备方法与应用 - Google Patents

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Abstract

一种石斛红曲及其制备方法与应用，属于养生保健品及茶产品领域。提供的石斛红，由红曲霉接种于石斛培养基，进行第一发酵得到发酵种子液；将发酵种子液接种于石斛发酵基质，进行第二发酵后制得；该石斛红曲具有良好的清除自由基的作用，能够抗氧化，延缓衰老；该制备方法设计科学，能够制备得到抗氧化性能良好的石斛红曲；该石斛红曲的应用广泛，可制备成石斛红曲茶、石斛红曲姜茶、石斛红曲胶囊以及石斛红曲咀嚼片或含片等多种形式，便于携带和食用。

Description

一种石斛红曲及其制备方法与应用
技术领域
本发明涉及养生保健品及茶产品领域，且特别涉及一种石斛红曲及其制备方法与应用。
背景技术
自由基是具有高度化学活性的物质，是生命活动中多种生化反应的中间产物，人的生命活动离不开自由基，但体内自由基过多或清除过慢，自由基则会攻击并损坏大分子，对细胞膜、核酸及机体蛋白质等造成损伤，是引起机体衰老的根本原因，也是诱发恶性肿瘤等许多疾病的重要起因。
因此，及时清除体内过多的自由成为了目前研究的重点。
发明内容
本发明的第一目的在于提供一种石斛红曲，该石斛红曲具有良好的清除自由基的作用，能够抗氧化，延缓衰老。
本发明的第二目的在于提供一种石斛红曲的制作方法，该制备方法设计科学，能够制备得到抗氧化性能良好的石斛红曲。
本发明的第三目的在于提供一种石斛红曲茶，该石斛红茶易于携带，饮用方便，适用于各种场合进行抗氧化保健。
本发明的第四目的在于提供一种石斛红曲姜茶，该石斛红曲姜茶具有良好的抗氧化和驱寒的功效。
本发明的第五目的在于提供一种石斛红曲胶囊，该胶囊食用方便，易于携带，能够起到清除自由基的作用。
本发明的第六目的在于提供一种石斛红曲咀嚼片或含片，该咀嚼片或含片食用方便，易于携带，能够起到清除自由基的作用。
本发明解决其技术问题是采用以下技术方案来实现的。
一种石斛红曲的制备方法，其包括：将红曲霉接种于石斛培养基，进行第一发酵得到发酵种子液；将发酵种子液接种于石斛发酵基质，进行第二发酵，得到石斛红曲。
一种石斛红曲，石斛红曲采用上述的石斛红曲的制备方法制得。
一种石斛红曲茶，将石斛红曲与茶叶按照4:1-1.5的质量比混合制得。
一种石斛红曲姜茶，将石斛红曲与茶叶、姜粉和黑糖按照4：0.5-1:0.1-0.2:0.2-0.5的质量比混合制得。
一种石斛红曲胶囊，将石斛红曲进行超微粉碎后制成。
一种石斛红曲咀嚼片或含片，将石斛红曲进行超微粉碎后压片制得。
本发明实施例的有益效果是：
本发明提供了一种石斛红曲，该石斛红曲结合了中草药源性和微生物源性抗氧化的物质的特点，能够利用微生物转化中药活性成分。微生物在生长过程中可以分泌几十种胞外酶于培养基中，其生命活动所产生的胞内酶更是成百上千，这些丰富而强大的酶***就可能成为中药发生化学反应的物质基础。
本发明提供了一种石斛红曲的制备方法，包括将红曲霉接种于石斛培养基，进行第一发酵得到发酵种子液；将发酵种子液接种于石斛发酵基质，进行第二发酵，得到石斛红曲。分两次发酵，能够使得石斛中大量的以聚合物形式存在的多糖物质得到充分的降解，在保持石斛原有功效的同时，还具有红曲发酵产物特有的保健功能及天然色泽。
本发明提供了一种石斛红曲茶，由上述石斛红曲与茶叶按照4:1-1.5的质量比混合制得，该石斛红曲茶具有石斛红曲的保健功效，又方便饮用和携带，尤其是在该配比范围内制得的石斛红曲茶的保健效果更好。
本发明提供了一种石斛红曲姜茶，将石斛红曲与茶叶、姜粉和黑糖按照4：0.5-1:0.1-0.2:0.2-0.5的质量比混合制得。该石斛红曲姜茶同时具有抗氧化和驱寒的功效，又方便饮用和携带，尤其是在该配比范围内制得的石斛红曲姜茶，能够充分利用石斛红曲、茶叶、姜粉和黑糖的各自的优势，协同协作，起到良好的保健功效。
本发明提供了一种石斛红曲胶囊，将石斛红曲进行超微粉碎后制成。该胶囊具有石斛红曲的保健功效，且食用方便，易于携带，将石斛红曲进行超微粉碎有利于石斛红曲中的药效更好地被人体吸收。
本发明提供了一种石斛红曲咀嚼片或含片，将石斛红曲进行超微粉碎后压片制得。该胶囊具有石斛红曲的保健功效，且食用方便，易于携带，将石斛红曲进行超微粉碎有利于石斛红曲中的药效更好地被人体吸收，压制成片剂在无需其他添加物的同时最大程度地保留了石斛红曲的功效。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例的一种石斛红曲及其制备方法与应用进行具体说明。
本发明实施例提供的一种石斛红曲由以下制备方法制备得到：红曲霉接种于石斛培养基，进行第一发酵得到发酵种子液。
其中，石斛作为传统珍稀的名贵中药，石斛在临床上广泛用于慢性萎缩性胃炎及高血糖、抗肿瘤、抗衰老、机体免疫力低下等多种疾病，而这些疾病的产生在很大程度上都与体内活性氧的代谢失调有关；红曲酶具有很高的药用价值，具有丰富的酶***，能够转化和修饰中草药的活性成分，是双向发酵体系用菌种的良好选择；且红曲霉的次级代谢产物中富含酚类、色素、黄酮等具有抗氧化作用的物质，因此，红曲霉可以为人体提供抗氧化物质，减少氧损伤。
需要说明的是，在本实施例中，红曲霉为红曲霉悬液，红曲霉悬液中红曲霉菌体浓度优选为3-7×106cfu/mL，将该浓度的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，更有利于石斛培养基中的活性物质的转化。
在本实施例中，每升石斛培养基包括：玉米浆4-6g；石斛汁8-12mL；蛋白胨4-7g；酵母膏2-4g，葡萄糖15-20g；石斛培养基中各组分的配比有利于其相互之间配合，协同增效，以达到更好的效果。
红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的7-10％。在该配比范围内，红曲霉能够充分转化石斛培养基中的活性物质，使制备得到的发酵种子液能够为二次发酵的接种做好充分的准备。
在本实施例中，第一发酵是指将红曲霉接种于石斛培养基后，在温度为27-33℃条件下220-250rpm振荡培养40-52h。低温有利于能源的节省，且不破坏红曲霉和石斛培养基中的营养物质；在220-250rpm振荡培养40-52h，有利于红曲霉与石斛培养基充分接触和反应。
将发酵种子液接种于石斛发酵基质，进行第二发酵，得到石斛红曲。
其中，石斛发酵基质由第一发酵基质与水按照1:0.6-1的质量比混合后灭菌得到。第一发酵基质在本实施例中，优选地由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.3-0.5:0.5-1:1.5-2的质量比混合得到；第一发酵基质中各组分的配比有利于其相互之间配合，协同增效，以达到更好的效果。在给定的第一发酵基质与水的配比范围内进行发酵，更有利于第一发酵基质与发酵种子液的反应。
第二发酵使指将发酵种子液按照料液比8-12％的量接种于石斛发酵基质，发酵种子液与石斛发酵基质在该配比范围能够充分接触发生反应，从而制备得到抗氧化性能优良的石斛红曲。
需要说明的是，第二次发酵是在在27-33℃条件下进行，该温度条件有利于发酵种子液与石斛发酵基质的充分反应，且不破坏发酵种子液与石斛发酵基质中的营养物质。
本发明实施例还提供了一种石斛红曲茶，由上述石斛红曲与茶叶按照4:1-1.5的质量比混合制得，该石斛红曲茶具有石斛红曲的保健功效，又方便饮用和携带，尤其是在该配比范围内制得的石斛红曲茶的保健效果更好。
本发明还提供了一种石斛红曲姜茶，将石斛红曲与茶叶、姜粉和黑糖按照4：0.5-1：0.1-0.2：0.2-0.5的质量比混合制得。该石斛红曲姜茶同时具有抗氧化和驱寒的功效，又方便饮用和携带，尤其是在该配比范围内制得的石斛红曲姜茶，能够充分利用石斛红曲、茶叶、姜粉和黑糖的各自的优势，协同协作，起到良好的保健功效。
本发明还提供了一种石斛红曲胶囊，将石斛红曲进行超微粉碎后制成。该胶囊具有石斛红曲的保健功效，且食用方便，易于携带，将石斛红曲进行超微粉碎有利于石斛红曲中的药效更好地被人体吸收。
本发明还提供了一种石斛红曲咀嚼片或含片，将石斛红曲进行超微粉碎后压片制得。该胶囊具有石斛红曲的保健功效，且食用方便，易于携带，将石斛红曲进行超微粉碎有利于石斛红曲中的药效更好地被人体吸收，压制成片剂在无需其他添加物的同时最大程度地保留了石斛红曲的功效。
以下结合实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆4g；石斛汁8mL；蛋白胨4g；酵母膏2g，葡萄糖15g；再将浓度为3×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的7％；然后，在温度为33℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于250rpm振荡培养51h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.3：0.5：1.5的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1：0.6的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的8％，且在33℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
实施例2
本实施例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆6g；石斛汁8mL；蛋白胨4g；酵母膏2g，葡萄糖15g；再将浓度为5×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的8％；然后，在温度为32℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于240rpm振荡培养52h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.5:0.5:1.5的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1:0.7的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的8％，且在32℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
实施例3
本实施例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为7×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的9％；然后，在温度为31℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于230rpm振荡培养48h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.5：1.0：2.0的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1：0.8的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的8％，且在31℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
实施例4
本实施例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为6×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的10％；然后，在温度为30℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于220rpm振荡培养47h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.4：0.5：2.0的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1:0.9的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的8％，且在28℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
实施例5
本实施例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为4×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的8％；然后，在温度为29℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于225rpm振荡培养46h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.3:0.6:1.5的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1:1的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的8％，且在29℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
实施例6
本实施例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为6×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的8％；然后，在温度为28℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于235rpm振荡培养45h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.5：0.7：1.8的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1：0.7的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的8％，且在30℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
实施例7
本实施例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为6.5×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的9％；然后，在温度为27℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于245rpm振荡培养44h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.4：0.8：1.8的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1：0.9的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的8％，且在27℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
实施例8
本实施例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为5.5×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的10％；然后，在温度为29℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于233rpm振荡培养43h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.4：1.0：1.8的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1:1的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的8％，且在27.5℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
实施例9
本实施例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为4.5×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的7％；然后，在温度为31℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于247rpm振荡培养42h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.4：0.7：1.9的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1:0.8的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的8％，且在28.5℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
实施例10
本实施例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为3.5×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的8％；然后，在温度为30℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于234rpm振荡培养41h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.5：0.8：1.7的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1：0.8的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的12％，且在29.5℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
实施例11
本实施例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为4.5×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的8％；然后，在温度为31℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于230rpm振荡培养40h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.3：0.7：2.0的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1：0.8的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的11％，且在30.5℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
实施例12
本实施例提供一种石斛红曲茶，该石斛红曲茶由实施例7制得的石斛红曲与茶叶按照4：1的质量比混合制得。
实施例13
本实施例提供一种石斛红曲茶，该石斛红曲茶由实施例7制得的石斛红曲与茶叶按照4：1.5的质量比混合制得。
实施例14
本实施例提供一种石斛红曲姜茶，该石斛红曲茶由实施例8制得的石斛红曲与茶叶、姜粉、黑糖按照4：0.5：0.1：0.2的质量比混合制得。
实施例15
本实施例提供一种石斛红曲姜茶，该石斛红曲茶由实施例8制得的石斛红曲与茶叶、姜粉、黑糖按照4：1：0.2：0.5的质量比混合制得。
实施例16
本实施例提供一种石斛红曲胶囊，该石斛红曲茶由实施例8制得的石斛红曲经超微粉碎，粒度达到微米和纳米级，然后装胶囊，制得石斛红曲胶囊。
实施例17
本实施例提供一种石斛红曲胶囊，该石斛红曲茶由实施例8制得的石斛红曲经超微粉碎，粒度达到微米和纳米级，压片，制得石斛红曲咀嚼片或含片。
对比例1
本对比例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆2g；石斛汁20mL；蛋白胨10g；酵母膏5g，葡萄糖30g；再将浓度为2×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的8％；然后，在温度为33℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于200rpm振荡培养35h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.2：0.4：2.2的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1：1.2的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的11％，且在20℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
对比例2
本对比例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为8×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的20％；然后，在温度为25℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于200rpm振荡培养55h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.4：0.8：1.8的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1：0.8的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的11％，且在25℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
对比例3
本对比例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为2.2×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的8％；然后，在温度为25℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于200rpm振荡培养35h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.2：1.2：1的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1：0.8的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的11％，且在25℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
对比例4
本对比例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为9×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的8％；然后，在温度为25℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于200rpm振荡培养35h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.4：0.8：1.8的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1：1.2的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的11％，且在25℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
对比例5
本对比例提供了一种石斛红曲，按照以下制备方法制备得到：
首先，准备石斛培养基包括：玉米浆5g；石斛汁10mL；蛋白胨5g；酵母膏3g，葡萄糖18g；再将浓度为2.5×106cfu/mL的红曲霉悬液接种到石斛培养基中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的8％；然后，在温度为235℃条件下将接种有红曲霉悬液的石斛培养基于200rpm振荡培养35h；接着，准备第一发酵基质；第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.4：0.8：1.8的质量比混合得到，将第一发酵基质与水按照1：0.8的质量比混合后灭菌得到石斛发酵基质，再将发酵种子液接种到石斛发酵基质中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的15％，且在25℃条件下进行发酵培养，制备得到石斛红曲。
试验例1
抗氧化活性测定
(1)ABTS自由基清除实验
分别取等量的实施例1-11和对比例1-5提供的石斛红曲，以及等量的与实施例1-11处理过程相同的未经添加红曲霉的石斛，设定为实验组1-17；
将2.5ml的ABTS(7mmol/L)和44μl的K2S2O8(140mmol/L)溶液充分混合，在室温、避光条件下静置过夜(12h-16h)，得到ABTS+储备液。将ABTS+储备液用PBS缓冲液(20mmol/L，pH值为7.4)稀释，用紫外分光光度计测量，使其在波长734nm处的吸光度值为0.700+0.002，得到ABTS+工作液。分别取实验组1-17的30μl的石斛红曲与3.0mlABTS+工作液混合，充分反应6min，常温条件下在波长734nm处测定吸光度值。计算公式为：清除率＝(A空白-A对照例)/A空白×100％。
式中：A空白为3.0mL ABTS+工作液加30μL甲醇，测得的吸光度值：A对照例为30μLVC溶液与3.0mL ABTS+工作液反应6min后，测得的吸光度值；检测样品时，将A对照例换成A样品即可。得到的结果如表1所示。
(2)DPPH自由基清除实验
取1mLDPPH(0.1mmol/L，乙醇为溶剂)，0.95mL Tris-HCl和缓冲液(0.05mol/L，pH值为7.4)，1mL乙醇和分别取实验组1-17的50μL的石斛红曲混合30min后波长517nm处常温条件下测定吸光度值，吸光度值越小，其对自由基的清除能力越强。计算公式为：清除率(％)＝(A空白-A对照例)/A空白×100％。
式中，A空白指以50μL甲醛代替样品测得的吸光度值；A对照例为指50μLVC与DPPH反应2min后测得的吸光度值；检测样品时，将A对照例换成A样品即可。得到的结果如表1所示。
(3)抗脂质过氧化抑制实验
使用10％鸡蛋黄匀浆液(体积分数)作为反应的脂质媒介，分别取实验组1-17的石斛红曲0.1mL同0.5mL鸡蛋黄匀浆液、0.4mL纯水及50μL硫酸亚铁溶液(FeSO4·7H2O,70mmol/L)混合，于37℃下孵育30min，迅速加入1.5mL乙酸溶液(20％，体积分数，pH值为3.5)及1.5mL硫代巴比妥酸溶液(0.8％，质量浓度，用1.1％十二烷基硫酸钠溶液配制)，高速混匀后于95℃下水浴60min。待反应物冷却至室温后，再加入5mL正丁醇，充分摇匀，混合物在5000r/min下离心15min，取上清夜测定其在532nm处的吸光度。计算公式为：脂质过氧化抑制率(％)＝(1-实验组吸光度/空白组吸光度)×100％。得到的结果如表1所示。
表1实验组1-17的抗氧化活性测定结果
由表1可知，实验组1-16的ABTS自由基清除率、DPPH自由基清除率以及抗脂质过氧化抑制率均高于实验组17，该结果表明，采用本发明实施例提供的石斛红曲的制备方法制备得到的石斛红曲，由于在石斛中添加有红曲霉，红曲霉将石斛的活性成分进行了转化利用，ABTS自由基清除率、DPPH自由基清除率以及抗脂质过氧化抑制率均得到显著提升，达到了预料不到的抗氧化的效果。
实验组1-11组的ABTS自由基清除率、DPPH自由基清除率以及抗脂质过氧化抑制率均高于实验组12-16。
其中，实验组12制得的石斛红曲中，玉米浆2g；石斛汁20mL；蛋白胨10g；酵母膏2g，葡萄糖30g，该配比未在本发明实施例提供的玉米浆4-6g，石斛汁8-12mL，蛋白胨4-7g，酵母膏2-4g，葡萄糖15-20g的范围内；
实验组13制得的石斛红曲中，红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的20％，该配比未在本发明实施例提供的红曲霉悬液的接种量为石斛培养基总体积的7-10％的范围内；
实验组14制得的石斛红曲中，第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.4:0.8:1.8的质量比混合得到，该配比未在本发明实施例提供的第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.3-0.5:0.5-1:1.5-2的质量比混合得到，的范围内；
实验组15制得的石斛红曲中，第一发酵基质与水按照1:0.8的质量比混合，该配比未在本发明实施例提供的石斛发酵基质由第一发酵基质与水按照的1:0.6-1的质量比混合的范围内；
实验组16制得的石斛红曲中，发酵种子液的接种量为石斛发酵基质总体积的11％，该配比未在本发明实施例提供的发酵种子液按照料液比8-12％的量接种于石斛发酵基质的范围内；
由此可见，在本发明实施例提供的该些范围内制备得到的石斛红曲的清除自由基的抗氧化活性能力更强。
综上所述，根据本发明实施例提供的石斛红曲的制备方法制备得到的石斛红曲具有以下优点：(1)保护中药活性成分免遭破坏，使药物的有效组分、活性物质最大限度地得以提取、利用；(2)提高中药药性，降低药物的毒副作用；(3)所优选的有益菌种本身能补充或增强原有药物的功能；(4)产生新的活性物质；(5)位中药活性成分结构修饰提供新途径；(6)节省药材资源，保护环境；(7)是实现中药现代化、具有高科技水平的又一新技术，生产工艺可控，所得产物精确，制剂方便，便于与国际接轨；此外，本发明提供的石斛红曲应用广泛，可制备成石斛红曲茶、石斛红曲姜茶、石斛红曲胶囊以及石斛红曲咀嚼片或含片等多种形式，便于携带和食用。
以上所描述的实施例是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。本发明的实施例的详细描述并非旨在限制要求保护的本发明的范围，而是仅仅表示本发明的选定实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。

Claims (10)

1.一种石斛红曲的制备方法，其特征在于，其包括：
将红曲霉接种于石斛培养基，进行第一发酵得到发酵种子液；将所述发酵种子液接种于石斛发酵基质，进行第二发酵，得到所述石斛红曲。
2.根据权利要求1所述的石斛红曲的制备方法，其特征在于，所述红曲霉为红曲霉悬液，所述红曲霉悬液的接种量为所述石斛培养基总体积的7-10％。
3.根据权利要求2所述的石斛红曲的制备方法，其特征在于，所述红曲霉悬液中红曲霉菌体浓度为3-7×106cfu/mL。
4.根据权利要求1所述的石斛红曲的制备方法，其特征在于，每升所述石斛培养基包括：玉米浆4-6g；石斛汁8-12mL；蛋白胨4-7g；酵母膏2-4g以及葡萄糖15-20g；所述石斛发酵基质由第一发酵基质与水按照的1：0.6-1的质量比混合后灭菌制得，所述第一发酵基质由石斛粉、薏仁米粉和大米粉按照0.3-0.5：0.5-1：1.5-2的质量比混合得到。
5.根据权利要求1所述的石斛红曲的制备方法，其特征在于，所述第一发酵是指将所述红曲霉接种于所述石斛培养基后，在温度为27-33℃条件下，220-250rpm振荡培养40-52h；所述第二发酵使指将所述发酵种子液按照料液比8-12％的量接种于所述石斛发酵基质，在27-33℃条件下发酵培养。
6.一种石斛红曲，其特征在于，所述石斛红曲采用权利要求1-5任一项所述的石斛红曲的制备方法制得。
7.一种石斛红曲茶，其特征在于，将如权利要求6所述的石斛红曲与茶叶按照4：1-1.5的质量比混合制得。
8.一种石斛红曲姜茶，其特征在于，将如权利要求6所述的石斛红曲与茶叶、姜粉和黑糖按照4：0.5-1：0.1-0.2：0.2-0.5的质量比混合制得。
9.一种石斛红曲胶囊，其特征在于，将如权利要求6所述的石斛红曲进行超微粉碎后制成。
10.一种石斛红曲咀嚼片或含片，其特征在于，将如权利要求6所述的石斛红曲进行超微粉碎后压片制得。
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