CN107192772A - 一种检测3‑乙酰基‑2,5‑二甲基噻吩的方法 - Google Patents

一种检测3‑乙酰基‑2,5‑二甲基噻吩的方法 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种酸碱诱导液液微萃取结合磁固相净化高效液相色谱检测3‑乙酰基‑2,5‑二甲基噻吩的方法。该方法利用脂肪酸与非离子表面活性剂的混合物加入含有3‑乙酰基‑2,5‑二甲基噻吩的被测液中，加入碱与脂肪酸与非离子表面活性剂的混合物形成均相胶束，进行3‑乙酰基‑2,5‑二甲基噻吩的萃取，再加入酸诱导相分离，由于3‑乙酰基‑2,5‑二甲基噻吩与脂肪酸与非离子表面活性剂的混合物有很好的亲和性，萃取率超过98％；再利用磁性Fe3O4纳米粒子对样品进行净化，结合高效液相色谱测定其含量。磁性Fe3O4纳米粒子能够将样品中与3‑乙酰基‑2,5‑二甲基噻吩共存的脂肪进行很好的吸附，消除其对检测的干扰。该萃取技术在室温下进行，在20min以内完成萃取，具有操作简便、快速、灵敏度高等特点，方法检测灵敏度达0.5μg/kg。

Description

一种检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法
技术领域
本发明属于分析化学领域，具体是涉及一种酸碱诱导液液微萃取及磁性固相净化结合高效液相色谱检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法。
背景技术
3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩作为一种食品香精添加剂，其香气带有似霉腐的、蔬菜根的气息，坚果果仁香气，稍显烘烤香韵，家禽类肉的香气。产品可广泛用于芝麻、土豆、核桃、葡萄、蘑菇、蔬菜、人参、热带水果及肉类香精中。2013年6月15日，欧盟发布(EU)No 545/2013号委员会条例，修订了(EC)No 1334/2008号食用香精香料法规，禁止3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩(3-acetyl-2,5-dimethylthiophene，FEMA 3527)作为食用香料用于食品。2014年8月14日，中国香精香料化妆品工业协会根据现有的安全评估结论及协会对国内部分香料香精主要生产企业“3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩”生产和使用情况的调查结果，发布了香料香精行业自律文件-关于3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的限制要求(香化协字[2013]62号)，自律文件规定：自本自律文件发布之日起，香料生产企业不得生产用作食品用香料的3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩；食品用香精生产企业调整配方，不得再使用该物质。
目前我国尚无食品添加剂中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的检测方法，也缺乏相关方面的研究。发明专利“一种食品添加剂中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定方法”(CN104655753 A)，公开了内标法气相色谱-质谱联用测定食品添加剂中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩，方法用正己烷超声萃取样品，萃取液过滤膜后直接进入气相色谱-质谱联用仪进行测定。
本发明利用脂肪酸与非离子表面活性剂的混合物与3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩有较好的亲和性，首次通过碱与脂肪酸与非离子表面活性剂的混合物与水形成均相胶束体系，再通过加酸诱导相分离，实现3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的高效、快速及操作简便的萃取；同时利用磁性Fe3O4纳米粒子对样品进行净化，结合高效液相色谱测定其含量。磁性Fe3O4纳米粒子能够将样品中与3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩共存的脂肪进行很好的吸附，消除其对检测的干扰。该萃取技术在室温下进行，在20min以内完成萃取，具有操作简便、快速、灵敏度高等特点，方法检测灵敏度达0.5μg/kg，萃取回收率达98％。
发明内容
本发明的目的是提供一种酸碱诱导液液微萃取及磁性固相净化结合高效液相色谱检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法。
酸碱诱导液液微萃取及磁性固相净化结合高效液相色谱检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法。是通过以下方案来实现的：
在含有3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的提取液中，加入体积比5倍的去离子水，加入磁性Fe3O4纳米粒子，涡旋混合，用外磁场固液分离，取出上清液；加入脂肪酸与非离子表面活性剂的混合物，涡旋混合，形成混浊溶液，加入氨水，涡旋混合，形成均匀胶束，加入盐酸，涡旋混合，离心分相，取出上层脂肪酸与非离子表面活性剂的混合物，采用高效液相色谱进行含量测定。
所述的含有3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的提取液按以下方法得到：对于固体香精，称取一定量的香精样品，加入重量比为1：10～15的丙酮，超声提取30～45min，氮吹至1～3mL，用去离子水定容至10mL，备用；对于液体香精，取1～3mL，加入去离子水定容至10mL，备用。
所述的脂肪酸为壬酸、庚酸、辛酸中的任意一种，非离子表面活性剂为TMN-6，脂肪酸与非离子表面活性剂比例为5：1，用量为每10mL样品液中添加0.2～0.5mL。
所述的氨水的用量为每10mL样品液中添加0.3～0.6mL。
所述的盐酸的用量为每10mL样品液中添加1～2mL。
所述的磁性Fe3O4纳米粒子用量为每10mL样品液中添加5～10mg。
所述的涡旋时间为1～3min。
所述的离心转速为3000～5000r/min，时间为5～10min。
高效液相色谱色谱条件为：流动相：等度洗脱甲醇-水溶液，甲醇-水的比例为65:35，检测波长为：296nm，柱温为：25℃，流速：1mL/min。
相对于现有技术，本发明具有以下显著优点:
1、利用脂肪酸与非离子表面活性剂的混合物与3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩有较好的亲和性，首次通过碱与脂肪酸与非离子表面活性剂的混合物与水形成均相胶束体系，再通过加酸诱导相分离，实现3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的高效、快速及操作简便的萃取。
2、利用磁性Fe3O4纳米粒子对样品进行净化，结合高效液相色谱测定其含量。磁性Fe3O4纳米粒子能够将样品中与3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩共存的脂肪进行很好的吸附，消除其对检测的干扰。
3、该萃取技术在室温下进行，在20min以内完成萃取，具有操作简便、快速、灵敏度高等特点，方法检测灵敏度达0.5μg/kg，萃取回收率达98％。
附图说明：
图1为本发明涉及的酸碱诱导液液微萃取机制示意图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明作进一步地说明，但本发明的保护范围并不限于此。
实施例1：土豆香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定
(1)样品制备：取1mL土豆香精，加入去离子水定容至10mL，得样品液；
(2)样品测定：在步骤(1)的样品液，加入5mg磁性Fe3O4纳米粒子，涡旋混合1min，用外磁场固液分离，取出上清液；加入500μL辛酸与100μL TMN-6组成的混合液，涡旋混合1min，形成混浊溶液，加入300μL氨水，涡旋混合1min，形成均匀胶束，加入盐酸1.5mL，涡旋混合2min，4000r/min下离心8min，取出上层辛酸与非离子表面活性剂TMN-6的混合物，经0.45μm有机相滤膜过滤后用HPLC分析，HPLC色谱条件为：流动相：等度洗脱甲醇-水溶液，甲醇-水的比例为65:35，检测波长为：296nm，柱温为：25℃，流速：1mL/min。测得3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩含量12.5μg/g。
实施例2：葡萄香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定
(1)样品制备：取2mL葡萄香精，加入去离子水定容至10mL，得样品液；
(2)样品测定：在步骤(1)的样品液，加入6mg磁性Fe3O4纳米粒子，涡旋混合2min，用外磁场固液分离，取出上清液；加入500μL壬酸与100μL TMN-6组成的混合液，涡旋混合2min，形成混浊溶液，加入400μL氨水，涡旋混合1min，形成均匀胶束，加入盐酸1mL，涡旋混合1min，3000r/min下离心10min，取出上层壬酸与非离子表面活性剂TMN-6的混合物，经0.45μm有机相滤膜过滤后用HPLC分析，色谱条件同实施例1，测得3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩含量24.6μg/g。
实施例3：牛肉香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定
(1)样品制备：称取2g的牛肉香精，加入20g丙酮，超声提取30min，氮吹至1mL，用去离子水定容至10mL，备用；
(2)样品测定：样品测定：在步骤(1)的样品液，加入8mg磁性Fe3O4纳米粒子，涡旋混合3min，用外磁场固液分离，取出上清液；加入500μL庚酸与100μL TMN-6组成的混合液，涡旋混合2min，形成混浊溶液，加入500μL氨水，涡旋混合2min，形成均匀胶束，加入盐酸2mL，涡旋混合3min，5000r/min下离心5min，取出上层庚酸与非离子表面活性剂TMN-6的混合物，经0.45μm有机相滤膜过滤后用HPLC分析，色谱条件同实施例1，测得3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩含量39.0μg/g。
实施例4：猪肉香精中3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的测定
(1)样品制备：称取2g的鸡肉香精，加入30g丙酮，超声提取45min，氮吹至3mL，用去离子水定容至10mL，备用；
(2)样品测定：样品测定：在步骤(1)的样品液，加入10mg磁性Fe3O4纳米粒子，涡旋混合3min，用外磁场固液分离，取出上清液；加入500μL辛酸与100μL TMN-6组成的混合液，涡旋混合2min，形成混浊溶液，加入600μL氨水，涡旋混合2min，形成均匀胶束，加入盐酸2mL，涡旋混合3min，4500r/min下离心6min，取出上层辛酸与非离子表面活性剂TMN-6的混合物，经0.45μm有机相滤膜过滤后用HPLC分析，色谱条件同实施例1，测得3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩含量99.3μg/g。
本发明涉及的酸碱诱导液液微萃取机制如图1。该萃取技术在室温下进行，在20min以内完成萃取，具有操作简便、快速、灵敏度高等特点，方法检测灵敏度达0.5μg/kg，萃取回收率达98％。

Claims (10)

1.一种检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于：在含有3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的提取液中，加入体积比5倍的去离子水，加入磁性Fe3O4纳米粒子，涡旋混合，用外磁场固液分离，取出上清液；加入脂肪酸与非离子表面活性剂的混合物，涡旋混合，形成混浊溶液，加入氨水，涡旋混合，形成均匀胶束，加入盐酸，涡旋混合，离心分相，取出上层脂肪酸与非离子表面活性剂的混合物，采用高效液相色谱进行含量测定。
2.根据权利要求1所述的检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于：所述的含有3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的提取液按以下方法得到：对于固体香精，称取一定量的香精样品，加入重量比为1：10～15的丙酮，超声提取30-45min，氮吹至1～3mL，用去离子水定容至10mL，备用；对于液体香精，取1～3mL，加入去离子水定容至10mL，备用。
3.根据权利要求1所述的检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于：所述的脂肪酸为壬酸、庚酸、辛酸中的任意一种，非离子表面活性剂为TMN-6，脂肪酸与非离子表面活性剂比例为5：1，用量为每10mL样品液中添加0.2～0.5mL。
4.根据权利要求1所述的检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于：所述的氨水的用量为每10mL样品液中添加0.3～0.6mL。
5.根据权利要求1所述的检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于：所述的盐酸的用量为每10mL样品液中添加1～2mL。
6.根据权利要求1所述的检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于：所述的磁性Fe3O4纳米粒子用量为每10mL样品液中添加5～10mg。
7.根据权利要求1所述的检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于：所述的涡旋时间为1～3min。
8.根据权利要求1所述的检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于：所述的离心转速为3000～5000r/min，时间为5～10min。
9.根据权利要求1所述的检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于：高效液相色谱色谱条件为：流动相：等度洗脱甲醇-水溶液，甲醇-水的比例为65:35，检测波长为：296nm，柱温为：25℃，流速：1mL/min。
10.根据权利要求1所述的检测3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的方法，其特征在于：所述的含有3-乙酰基-2,5-二甲基噻吩的提取液按以下方法得到：对于固体香精，称取一定量的香精样品，加入重量比为1：10～15的丙酮，超声提取30-45min，氮吹至1～3mL，用去离子水定容至10mL，备用；对于液体香精，取1～3mL，加入去离子水定容至10mL，备用；
所述的脂肪酸为壬酸、庚酸、辛酸中的任意一种，非离子表面活性剂为TMN-6，脂肪酸与非离子表面活性剂比例为5：1，用量为每10mL样品液中添加0.2～0.5mL；
所述的氨水的用量为每10mL样品液中添加0.3～0.6mL；
所述的盐酸的用量为每10mL样品液中添加1～2mL；
所述的磁性Fe3O4纳米粒子用量为每10mL样品液中添加5～10mg；
所述的涡旋时间为1～3min；
所述的离心转速为3000～5000r/min，时间为5～10min；
高效液相色谱色谱条件为：流动相：等度洗脱甲醇-水溶液，甲醇-水的比例为65:35，检测波长为：296nm，柱温为：25℃，流速：1mL/min。
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