CN106957886A - 一种熊去氧胆酸的制备方法 - Google Patents

一种熊去氧胆酸的制备方法 Download PDF

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姜重学
金峰
王凯
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    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
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Abstract

本发明公开一种熊去氧胆酸的制备方法，包括以下步骤：1）将鹅去氧胆酸溶于有机溶剂—水混合溶液中，加入缓冲液调pH至7，加入脂肪酶Lipozyme CALB，在36‑38摄氏度下搅拌反应；2）反应后，反应液浓缩，析出大部分晶体后过滤，水洗，干燥得到熊去氧胆酸粗品；3）将熊去氧胆酸粗品重结晶，得到精制的熊去氧胆酸产品。本发明反应条件温和、收率高、选择性好、成本较低。

Description

一种熊去氧胆酸的制备方法
技术领域
本发明涉及一种熊去氧胆酸的制备方法。
技术背景
熊去氧胆酸(UDCA)，主要成分是3a,7β-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸，为有机化合物，无臭，味苦。在乙醇中易溶，在氯仿中不溶；在冰醋酸中易溶，在氢氧化钠试液中溶解。医学上用于增加胆汁酸分泌，并使胆汁成分改变，降低胆汁中胆固醇及胆固醇脂，有利于胆结石中的胆固醇逐渐溶解。
鹅去氧胆酸(CDCA)，主要成分为3α,7α-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸，主要作用是降低胆汁内胆固醇的饱和度，也是合成熊去氧胆酸的原料。
鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸反应式为：
由鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸的方法较多，主要为化学合成，如：
将7-酮去氧胆酸溶解于溶剂中，加入手性催化剂，碱性条件下，维持压力在0～20MPa，通入氢气在15～81℃下进行氢化还原反应，反应完成后蒸馏除溶剂；加入13～95倍纯化水，然后加入酸液使氢化还原反应后的产物结晶；将固体和液体分离，洗涤干燥后，所得固体粉末即为熊去氧胆酸。
以鹅去氧胆酸为原料，分别将羧基保护后和3-羟基选择性保护后，再将7-位羟基经Mitsunobu反应或采用对甲苯磺酰氯、甲磺酰氯、对硝基苯磺酰氯制成酯，再脱去保护基制备熊去氧胆酸。
将鹅去氧胆酸经过选择氧化得到7-O-石胆酸，7-O-石胆酸选择还原得到含有一定量鹅去氧胆酸的熊去氧胆酸产品，此熊去氧胆酸产品与硅化剂反应，生成熊去氧胆酸硅化物不溶于有机溶剂，而其中的鹅去氧胆酸与硅化剂反应，生成鹅去氧胆酸硅化物溶于有机溶剂，将得到的熊去氧胆酸硅化物酸化水解，得到高纯度熊去氧胆酸产品。
以上方法的优点是选择性较好、收率较稳定，其缺点主要是反应条件和过程较复杂，成本较高。
发明内容
本发明目的在于提供一种熊去氧胆酸的制备方法，反应条件温和、收率高、选择性好、成本较低。
为了解决上述问题，本发明采用的技术方案是这样的，一种熊去氧胆酸的制备方法，包括以下步骤：
1)将鹅去氧胆酸溶于有机溶剂—水混合溶液中，加入缓冲液调pH至7，加入脂肪酶Lipozyme CALB，在36-38摄氏度下搅拌反应；
2)反应后，反应液浓缩，析出大部分晶体后过滤，水洗，干燥得到熊去氧胆酸粗品；
3)将熊去氧胆酸粗品重结晶，得到精制的熊去氧胆酸产品。
其中，步骤1中有机溶剂—水混合溶液可以选择甲醇，乙醇，四氢呋喃，DMF，DMA，DMSO，HMPA等与水的混合溶液，机溶剂与水的体积比为2:1到1:2，优选1:1的丙酮—水混合溶剂。
脂肪酶Lipozyme CALB的加入量为鹅去氧胆酸质量的1/20-1/5。
缓冲液为Tris-盐酸缓冲液。其中Tris-盐酸缓冲液的配制方法为:50ml 0.1M三羟甲基氨基甲烷(Tris)溶液与45ml 0.1M盐酸混匀后，加水稀释至100ml。
步骤3)中，重结晶所用的溶剂为甲醇，乙醇，四氢呋喃中的一种或两种以上任意比例的混合。
本发明的特点在于提供一种高效酶催化鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸的方法；用一种。具体试验步骤为：
有益效果：本发明利用来源于南极假丝酵母B的非特异性脂肪酶Lipozyme CALB，该酶是一种手性催化酶，可以催化鹅去氧胆酸反应得到纯度较高的熊去氧胆酸，反应条件温和、收率高、选择性好、成本较低。
具体实施方式
实施例1将50g的鹅去氧胆酸溶于200ml丙酮—水(体积比为1:1)混合溶液，加入100mlTris-盐酸缓冲液调PH至7，加入5g脂肪酶Lipozyme CALB(购买于Novozymes公司)，水浴加热至37摄氏度，搅拌反应3小时。将反应液浓缩，析出大部分晶体后过滤，水洗，干燥得到熊去氧胆酸粗品。将熊去氧胆酸粗品用100ml甲醇重结晶，得到精制的熊去氧胆酸产品35g，收率为70％。
实施例2将50g的鹅去氧胆酸溶于200ml甲醇—水(体积比为1:1)混合溶液，加入100mlTris-盐酸缓冲液调PH至7，加入5g脂肪酶Lipozyme CALB，水浴加热至37摄氏度，搅拌反应3小时。将反应液浓缩，析出大部分晶体后过滤，水洗，干燥得到熊去氧胆酸粗品。将熊去氧胆酸粗品用100ml甲醇重结晶，得到精制的熊去氧胆酸产品32g，收率为64％。
实施例3将50g的鹅去氧胆酸溶于200ml DMF—水(体积比为1:1)混合溶液，加入100mlTris-盐酸缓冲液调PH至7，加入10g脂肪酶Lipozyme CALB，水浴加热至37摄氏度，搅拌反应3小时。将反应液浓缩，析出大部分晶体后过滤，水洗，干燥得到熊去氧胆酸粗品。将熊去氧胆酸粗品用100ml乙醇重结晶，收率为72％。
以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种熊去氧胆酸的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
1）将鹅去氧胆酸溶于有机溶剂—水混合溶液中，加入缓冲液调pH至7，加入脂肪酶Lipozyme CALB，在36-38摄氏度下搅拌反应；
2）反应后，反应液浓缩，析出大部分晶体后过滤，水洗，干燥得到熊去氧胆酸粗品；
3）将熊去氧胆酸粗品重结晶，得到精制的熊去氧胆酸产品。
2.根据权利要求1所述的一种熊去氧胆酸的制备方法，其特征在于，所述的有机溶剂—水混合溶液为甲醇，乙醇，丙酮，四氢呋喃，DMF，DMA，DMSO或HMPA与水的混合溶液。
3.根据权利要求2所述的一种熊去氧胆酸的制备方法，其特征在于，所述的有机溶剂—水混合溶液中有机溶剂与水的体积比为2:1-1:2。
4.根据权利要求3所述的一种熊去氧胆酸的制备方法，其特征在于，所述的有机溶剂—水混合溶液为体积比为1:1的丙酮—水混合溶剂。
5.根据权利要求1所述的一种熊去氧胆酸的制备方法，其特征在于，脂肪酶LipozymeCALB的加入量为鹅去氧胆酸质量的1/20-1/5。
6.根据权利要求1所述的一种熊去氧胆酸的制备方法，其特征在于，缓冲液为Tris-盐酸缓冲液。
7.根据权利要求1所述的一种熊去氧胆酸的制备方法，其特征在于，步骤3）中，重结晶所用的溶剂为甲醇，乙醇，四氢呋喃中的一种或两种以上任意比例的混合。
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