CN106928306A - 一种熊去氧胆酸的纯化方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种熊去氧胆酸的纯化方法。该方法包括以下步骤：首先，熊去氧胆酸三乙胺盐的制备；其次，熊去氧胆酸三乙胺盐的水解；最后，重结晶精制。本发明的熊去氧胆酸的纯化方法步骤简单，易操作，使用的溶剂简单易得，并且耗能小。利用本发明的纯化方法得到的精制熊去氧胆酸的纯度高达99.8％。

Description

一种熊去氧胆酸的纯化方法

技术领域

本发明涉及医药分离领域，具体涉及一种熊去氧胆酸的纯化方法。

背景技术

熊去氧胆酸(Ursodeoxycholic acid，UDCA，3α,7β-二羟基-5β-胆甾烷-24-酸)，是名贵中药熊胆的主要有效成分，是治疗原发性胆汁性肝硬化(PBC)的唯一药物。国内外临床应用证明，熊去氧胆酸在治疗各种胆疾、肝病和各种高血脂疾病，尤其在溶解胆固醇型胆结石方面有较好的疗效，近年来又发现了一些新的疗效，如细胞保护作用，免疫调节作用，抗癌作用等。

鉴于熊去氧胆酸的重要性，其临床应用的需求不断增加。但天然的熊去氧胆酸来源于胆汁，以往的杀熊取胆以及现在的活体引流，不仅来源少，而且违反动物保护原则。因此，人工合成熊去氧胆酸，并提取出高纯度的熊去氧胆酸至关重要。鹅去氧胆酸是合成熊去氧胆酸的原料之一。鹅去氧胆酸是熊去氧胆酸的同分异构体，本身也可以用于胆固醇性胆结石的治疗。但是相比熊去氧胆酸，鹅去氧胆酸可以从鸡胆、鸭胆和猪胆中获得，来源比较丰富，所以从鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸是工业应用较多的方法。

目前工业中采用有机溶剂选择性地从含有熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸的混合物中溶解除去鹅去氧胆酸等杂质。乙醇和乙酸等熔剂对两种去氧胆酸的溶解度都很大，对鹅去氧胆酸的选择性溶解不明显，所以也不适合工业应用。乙酸乙酯是工业中最常用的有机溶剂。由于两者的溶解度相差巨大，采用多次乙酸乙酯洗涤之后，就可以从沉淀物中得到纯度较高的熊去氧胆酸。但是由于两种胆酸在乙酸乙酯中的溶解度都不大，所以实际生产中需要用固体量30倍以上的乙酸乙酯才能将鹅去氧胆酸从去氧胆酸混合物中充分溶解出来。总体来说，以乙酸乙酯作为溶剂，单位溶剂的生产能力较低，溶剂用量大，后续的溶剂回收步骤能耗巨大。

发明内容

[要解决的技术问题]

本发明的目的是解决上述现有技术的问题，提供一种熊去氧胆酸的纯化方法。

[技术方案]

为了达到上述的技术效果，本发明采取以下技术方案：

一种熊去氧胆酸的纯化方法，它包括以下步骤：

A，熊去氧胆酸三乙胺盐的制备

向熊去氧胆酸粗品依次加入丙酮、乙醇后，搅拌升温至40～50℃，维持温度1～2h；

然后加入熊去氧胆酸粗品等体积的三乙胺，升温回流反应1～2h后，缓慢降温至10～15℃，搅拌反应4h；过滤，丙酮洗涤滤饼，得到湿品熊去氧胆酸三乙胺盐；

B，熊去氧胆酸三乙胺盐的水解

将步骤A得到的湿品熊去氧胆酸三乙胺盐投入反应瓶中，加入丙酮和水，搅拌升温至40～50℃，维持温度30min至完全溶解后，滴加冰乙酸调节pH为4～5；然后加入活性炭进行脱色反应1～2h；过滤，并利用丙酮和水的混合溶液洗涤活性炭，收集滤液，并在65℃以下回收滤液中的丙酮，当残余滤液体积为650～750mL时，停止回收，缓慢降温至10～15℃，搅拌反应1h；过滤，水洗滤饼，滤饼干燥，得到熊去氧胆酸；

C，重结晶精制

将步骤B得到的熊去氧胆酸投入到反应瓶中，加入乙酸乙酯，升温回流反应1～2h，缓慢降温至0～5℃，维持温度4h后，过滤、滤饼干燥，得到精制的熊去氧胆酸。

本发明更近一步的技术方案，在步骤A中，所述丙酮的加入量为熊去氧胆酸粗品体积的6倍，所述乙醇的加入量为熊去氧胆酸粗品体积的3倍。

本发明更近一步的技术方案，在步骤B中，所述加入丙酮和水是指加入熊去氧胆酸粗品10倍体积的丙酮和熊去氧胆酸粗品3倍体积的水；所述丙酮和水的混合溶液是按照丙酮与水的体积比为10：3混合得到。

本发明更近一步的技术方案，在步骤B中，所述活性炭的加入量为熊去氧胆酸粗品质量的5％。

本发明更近一步的技术方案，在步骤B和步骤C中，所述滤饼干燥是指在温度为70℃的条件下进行热风干燥。

本发明更近一步的技术方案，在步骤C中，所述乙酸乙酯的加入量为熊去氧胆酸体积的3倍。

下面将详细地说明本发明。

在进行熊去氧胆酸粗品的溶解时，采用丙酮和乙醇混合液可以使熊去氧胆酸UDCA溶解更充分，同时还可以有效除去部分杂质。

在步骤A中，加入三乙胺是为了使三乙胺与熊去氧胆酸之间进行反应，具体的加入量需要根据UDCA量确定，按UDCA粗品的体积等体积加入三乙胺，由于三乙胺并不与鹅去氧胆酸CDCA进行反应，因此三乙胺与熊去氧胆酸的反应可以有效去除CDCA，而降温至10～15℃，是为了使晶体性状更好，得到产物更纯；降温后搅拌反应是使结晶产物更多。

在步骤B中，步骤A得到的滤饼加入丙酮与水的混合溶液中是为了充分溶解，使用冰乙酸调节pH值，是因为冰乙酸能够有效去除金属离子，而且酸性较弱，不会发生副反应。

活性炭的主要目的为脱色，在进行活性炭脱色时，避免加入过多的活性炭，因为加入过多，产物损失加大。

本发明还进一步限定了回收滤液中的丙酮，当残余滤液体积为650～750mL时，停止回收丙酮，并进行降温结晶。该步骤回收丙酮不能过多或过少，因为回收过多丙酮，杂质会析出；过少，收率偏低。随后，采用水洗滤饼，该处水洗的目的是为了去除残余丙酮、无机盐等水溶性杂质，以保证熊去氧胆酸具有较高的纯度。

在步骤C中，用乙酸乙酯进行重结晶是为了进一步的去除鹅去氧胆酸和其他杂质胆酸的干扰，提高熊去氧胆酸的纯度。乙酸乙酯的加入量为熊去氧胆酸的2～3倍量，过多收率偏低，过少杂质较多。并且使用的结晶温度过高容易破坏UDCA，过低难以干燥完全。因此需要保证乙酸乙酯结晶的温度在0～5℃范围内。本发明将得到的精制熊去氧胆酸采用欧洲药典标准8.0版本进行质量分析。采用本发明纯化方法纯化的精制熊去氧胆酸的纯度高达99.8％。

[有益效果]

本发明与现有技术相比，具有以下的有益效果：

本发明的熊去氧胆酸的纯化方法步骤简单，易操作，使用的溶剂简单易得，并且耗能小。利用本发明的纯化方法得到的精制熊去氧胆酸的纯度高达99.8％。

具体实施方式

下面结合本发明的实施例对本发明作进一步的阐述和说明。

实施例1：

1、熊去氧胆酸三乙胺盐的制备

100g(熊去氧胆酸含量80％)粗品依次加入6倍体积的丙酮600mL，0.5倍体积的乙醇50mL搅拌升温至46℃，维持温度1.5小时；再次加入1倍体积的三乙胺100mL，升温回流反应1.5小时，使熊去氧胆酸与三乙胺反应生成熊去氧胆酸三乙胺盐；缓慢降温至14℃，搅拌反应4小时；过滤，1倍体积的丙酮100mL洗涤滤饼，得到湿品熊去氧胆酸三乙胺盐130.7g。

2、熊去氧胆酸三乙胺盐的水解

将上诉滤饼投入反应瓶，加入10倍体积的丙酮1000mL，3倍体积的水300mL，搅拌升温至46℃，维持温度半小时；待完全溶解后，滴加冰乙酸调pH值4～5，消耗冰乙酸110mL，溶液pH值为4.7；加入5％质量的活性炭5g，进行脱色反应2小时；过滤，1倍体积的丙酮：水＝10：3的混合溶液100mL洗涤活性炭；收集滤液，65℃以下常压回收丙酮，待残余体积700mL时，停止回收，缓慢降温至10～15℃，搅拌反应1小时；过滤，1倍体积的水100mL水洗滤饼，滤饼在70℃进行热风干燥，干燥失重≤2.0％，得熊去氧胆酸75.3g。

3、重结晶精制

将上述干燥完成的熊去氧胆酸投入反应瓶，加入3倍体积的乙酸乙酯，升温回流反应2小时，缓慢降温至0～5℃，维持温度4小时，过滤，滤饼在70℃进行热风干燥，干燥失重＜1.0％，得熊去氧胆酸68.2g。

按欧洲药典标准8.0版本进行质量分析，结果如下：

性状：白色粉末，含量：99.8％，熔点：203.5℃，旋光度：+59.2；

相关物质：薄层色谱法：石胆酸＜0.1％；液相色谱法：熊去氧胆酸99.7％，鹅去氧胆酸0.1％，未知单杂质0.07％，总杂质0.3％；

重金属：≤20ppm，炽灼残渣：≤0.1％。

实施例2

1、熊去氧胆酸三乙胺盐的制备

100g(熊去氧胆酸含量82％)粗品依次加入6倍体积的丙酮600mL，0.5倍体积的乙醇50mL搅拌升温至45℃，维持温度2小时；再次加入1倍体积的三乙胺100mL，升温回流反应2小时，使熊去氧胆酸与三乙胺反应生成熊去氧胆酸三乙胺盐；缓慢降温至10～15℃，搅拌反应4小时；过滤，1倍体积的丙酮100mL洗涤滤饼，得到湿品熊去氧胆酸三乙胺盐130.6g。

2、熊去氧胆酸三乙胺盐的水解

将上诉滤饼投入反应瓶，加入10倍体积的丙酮1000mL，3倍体积的水300mL，搅拌升温至45℃，维持温度半小时；待完全溶解后，滴加冰乙酸调pH值4～5，消耗冰乙酸110mL，溶液pH值为4.7；加入5％质量的活性炭5g，进行脱色反应1～2小时；过滤，1倍体积的丙酮：水＝10：3的混合溶液100mL洗涤活性炭；收集滤液，65℃以下常压回收丙酮，待残余体积680mL时，停止回收，缓慢降温至10～15℃，搅拌反应1小时；过滤，1倍体积的水100mL水洗滤饼，滤饼在70℃进行热风干燥，干燥失重≤2.0％，得熊去氧胆酸75.1g。

3、重结晶精制

将上述干燥完成的熊去氧胆酸投入反应瓶，加入3倍体积的乙酸乙酯，升温回流反应1～2小时，缓慢降温至0～5℃，维持温度4小时，过滤，滤饼在70℃进行热风干燥，干燥失重＜1.0％，得熊去氧胆酸67.9g。

按欧洲药典标准8.0版本进行质量分析，结果如下：

性状：白色粉末，含量：99.8％，熔点：202.5℃，旋光度：+59.6；

相关物质：薄层色谱法：石胆酸＜0.1％；液相色谱法：熊去氧胆酸99.8％，鹅去氧胆酸0.1％，未知单杂质0.05％，总杂质0.2％；

重金属：≤20ppm，炽灼残渣：≤0.1％。

实施例3

1、熊去氧胆酸三乙胺盐的制备

100g(熊去氧胆酸含量79％)粗品依次加入6倍体积的丙酮600mL，0.5倍体积的乙醇50mL搅拌升温至50℃，维持温度1小时；再次加入1倍体积的三乙胺100mL，升温回流反应1～2小时，使熊去氧胆酸与三乙胺反应生成熊去氧胆酸三乙胺盐；缓慢降温至10～15℃，搅拌反应4小时；过滤，1倍体积的丙酮100mL洗涤滤饼，得到湿品熊去氧胆酸三乙胺盐130.2。

2、熊去氧胆酸三乙胺盐的水解

将上诉滤饼投入反应瓶，加入10倍体积的丙酮1000mL，3倍体积的水300mL，搅拌升温至50℃，维持温度半小时；待完全溶解后，滴加冰乙酸调pH值4～5，消耗冰乙酸110mL，溶液pH值为4.7；加入5％质量的活性炭5g，进行脱色反应1～2小时；过滤，1倍体积的丙酮：水＝10：3的混合溶液100mL洗涤活性炭；收集滤液，65℃以下常压回收丙酮，待残余体积720mL时，停止回收，缓慢降温至10～15℃，搅拌反应1小时；过滤，1倍体积的水100mL水洗滤饼，滤饼在70℃进行热风干燥，干燥失重≤2.0％，得熊去氧胆酸74.4g。

3、重结晶精制

将上述干燥完成的熊去氧胆酸投入反应瓶，加入3倍体积的乙酸乙酯，升温回流反应1～2小时，缓慢降温至0～5℃，维持温度4小时，过滤，滤饼在70℃进行热风干燥，干燥失重＜1.0％，得熊去氧胆酸67.4g。

按欧洲药典标准8.0版本进行质量分析，结果如下：

性状：白色粉末，含量：99.9％，熔点：203.0℃，旋光度：+59.8；

相关物质：薄层色谱法：石胆酸＜0.1％；液相色谱法：熊去氧胆酸99.9％，鹅去氧胆酸0.05％，未知单杂质0.05％，总杂质0.1％；

重金属：≤20ppm，炽灼残渣：≤0.1％。

尽管这里参照本发明的解释性实施例对本发明进行了描述，上述实施例仅为本发明较佳的实施方式，本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，应该理解，本领域技术人员可以设计出很多其他的修改和实施方式，这些修改和实施方式将落在本申请公开的原则范围和精神之内。

Claims (6)

1.一种熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于它包括以下步骤：

A，熊去氧胆酸三乙胺盐的制备

向熊去氧胆酸粗品依次加入丙酮、乙醇后，搅拌升温至40～50℃，维持温度1～2h；

然后加入熊去氧胆酸粗品等体积的三乙胺，升温回流反应1～2h后，缓慢降温至10～15℃，搅拌反应4h；过滤，丙酮洗涤滤饼，得到湿品熊去氧胆酸三乙胺盐；

B，熊去氧胆酸三乙胺盐的水解

将步骤A得到的湿品熊去氧胆酸三乙胺盐投入反应瓶中，加入丙酮和水，搅拌升温至40～50℃，维持温度30min至完全溶解后，滴加冰乙酸调节pH为4～5；然后加入活性炭进行脱色反应1～2h；过滤，并利用丙酮和水的混合溶液洗涤活性炭，收集滤液，并在65℃以下回收滤液中的丙酮，当残余滤液体积为650～750mL时，停止回收，缓慢降温至10～15℃，搅拌反应1h；过滤，水洗滤饼，滤饼干燥，得到熊去氧胆酸；

C，重结晶精制

将步骤B得到的熊去氧胆酸投入到反应瓶中，加入乙酸乙酯，升温回流反应1～2h，缓慢降温至0～5℃，维持温度4h后，过滤、滤饼干燥，得到精制的熊去氧胆酸。

2.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于在步骤A中，所述丙酮的加入量为熊去氧胆酸粗品体积的6倍，所述乙醇的加入量为熊去氧胆酸粗品体积的3倍。

3.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于在步骤B中，所述加入丙酮和水是指加入熊去氧胆酸粗品10倍体积的丙酮和熊去氧胆酸粗品3倍体积的水；所述丙酮和水的混合溶液是按照丙酮与水的体积比为10：3混合得到。

4.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于在步骤B中，所述活性炭的加入量为熊去氧胆酸粗品质量的5％。

5.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于在步骤B和步骤C中，所述滤饼干燥是指在温度为70℃的条件下进行热风干燥。

6.根据权利要求1所述的熊去氧胆酸的纯化方法，其特征在于在步骤C中，所述乙酸乙酯的加入量为熊去氧胆酸体积的2～3倍。