CN106754881A - 一种血液病毒rna保护剂及其制备方法与应用 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种血液病毒RNA保护剂及其制备方法,该保护剂是护剂不仅能防止血液凝固,而且能够抑制RNA酶保护其中的病毒RNA。所述保护剂是由bestain、glycine、EDTA‑3K、IDU、AEBSF、核糖核苷复合物溶解于DEPC水中配制而成,其中各组分在所述DEPC水溶解液中的浓度分别为:bestain(0.05‑0.2g/L)、glycine(20‑50g/L)、EDTA‑3K(30g‑70g/L)、IDU(100‑400g/L)、AEBSF(0.15‑0.4g/L)、核糖核苷复合物(0.4ml‑1ml/L)。本发明将采集的血液与血液病毒RNA保护剂以35:2的比例缓慢充分混匀后,血液病毒RNA在常温条件下可保存3天,‑20℃至‑80℃可长期保存,适用于各种血液病毒RNA的保护和储存。
Description
技术领域
本发明涉及生物技术领域,特别涉及一种血液病毒RNA保护剂及其制备方法与应用。
背景技术
病毒(Virus)由一种核酸分子(DNA或RNA)与蛋白质(Protein)构成或仅由蛋白质构成(如朊病毒)。病毒体积非常微小,结构及其简单,但具有高度的寄生性,完全依赖宿主细胞的能量和代谢***。当它接触到宿主细胞时,便脱去蛋白质外套,它的核酸(基因)侵入宿主细胞内,借助后者的复制***,按照病毒基因的指令复制新的病毒,最后造成宿主细胞死亡。自然界中DNA病毒很少,基本上都是RNA病毒,如艾滋病病毒,烟草花叶病毒,SARS 病毒,MERS病毒,埃博拉病毒(EBV),西班牙流感病毒,甲型H1N1流感病毒,禽流感病毒等。
人体被RNA病毒感染后,随着病毒的大量繁殖,在人血液中可检测到病毒RNA,故可通过对血液进行对应的相关病毒检测便可确认是否感染了病毒。所以,血液病毒RNA的检测及其在基因诊断等方面的应用对于RNA病毒等的诊断和监测具有十分重要的意义。
但在血液中的病毒RNA含量少,而血液中RNA酶含量多,病毒RNA在没有保护的状态下很容易降解消失,所以研发一种有效可行的延长病毒RNA保存期限的保护剂是很有必要的。
发明内容
本发明的目的在于提出一种血液病毒RNA保护剂,该保护剂不仅能防止血液凝固,并且可以保护病毒RNA分子,避免其被RNA酶降解,并将基因表达体内变化的改变降至最小。该保护剂的组成成份是:bestain、glycine、EDTA-3K、IDU、AEBSF、核糖核苷复合物、DEPC水溶解液,把血液与血液病毒RNA保护剂以35:2 的比例缓慢充分混匀后,室温放置约半小时即可,室温可保存3天,-20℃至-80℃长期保存。
本发明的目的可以通过以下技术方案来实现:一种血液病毒RNA保护剂,所述保护剂是由bestain、glycine、EDTA-3K、IDU、AEBSF、核糖核苷复合物溶解于DEPC水配制而成,其中各组分在所述DEPC水溶解液中的浓度分别为:bestain(0.05-0.2g/L)、glycine(20-50g/L)、EDTA-3K(30g-70g/L)、IDU(100-400g/L)、AEBSF(0.15-0.4g/L)、核糖核苷复合物(0.4ml-1ml/L)。
作为优选,本发明所述的血液病毒RNA保护剂是由bestain、glycine、EDTA-3K、IDU、AEBSF、核糖核苷复合物按照一定的比例溶解于DEPC水配制而成,其中bestain、glycine、EDTA-3K、IDU、AEBSF、核糖核苷复合物在所述溶液中的浓度分别为0.1g/L、30g/L、50g/L、250g/L、0.235g/L、0.7ml/L。
本发明所述的制备病毒RNA保护剂的方法,具体步骤如下:
1)按配方称(吸)取各组分到容器中;
2)向1)中加入800ml已灭菌的DEPC水,待所有组分溶解后,将溶液pH值调至7.35-7.45,再将溶液转移到1L容量瓶中,定容至1L,得到病毒RNA保护剂。
权利要求1-2任一项所述的血液病毒RNA保护剂在血液病毒RNA保存中的应用,其特征在于,在所述应用中,将采集的血液与病毒RNA保护剂以35:2 的比例缓慢充分混匀后,室温放置约半小时。
根据权利要求4所述的半小时后,其特征在于室温可保存3天,-20℃至-80℃可长期保存。
本发明的优点:
1.血液中的病毒RNA可以在第一时间被保护起来;
2.更好地保证病毒RNA的完整性。
附图说明
图1为感染HIV的全血置于本文所述的血液病毒离RNA保护剂中保存0天后进行核酸提取,提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果
图2为感染HIV的全血置于本文所述的血液病毒离RNA保护剂中保存1天后进行核酸提取,提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果
图3为感染HIV的全血置于本文所述的血液病毒离RNA保护剂中保存2天后进行核酸提取,提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果
图4为感染HIV的全血置于本文所述的血液病毒离RNA保护剂中保存3天后进行核酸提取,提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果
图5为感染HIV的全血置于EDTA-Na2采血管中保存0天后进行核酸提取,提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果
图6为感染HIV的全血置于EDTA-Na2采血管中保存1天后进行核酸提取,提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果
图7为感染HIV的全血置于EDTA-Na2采血管中保存2天后进行核酸提取,提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果
图8为感染HIV的全血置于EDTA-Na2采血管中保存3天后进行核酸提取,提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果
具体实施方法
以下实施案例仅用于解释本发明,而并非限制本发明。
实施例1:
随机抽取5份感染HIV的人全血样本,分别按5ml/人份分成8人份,其中4人份为1组,分成2组。其中1组置于常规EDTA-Na2采血管中,另1组置于本发明所述的血液病毒RNA保护剂中,分别常温放置0天、1天、2天、3天后进行核酸提取(Qiagen公司的RNeasy Mini Kit (50)-货号74104试剂盒),以提取的核酸为样本进行人HIV基因的实时荧光PCR检测。
检测结果:
置于常规EDTA-Na2采血管和本发明所述的血液病毒RNA保护剂中的感染了HIV的全血样本,在常温放置不同时间后,分别进行核酸提取,提取的核酸进行HIV基因的实时荧光PCR检测,其检测结果的Ct值如表1。由表1可知,血液病毒RNA保护剂能够在3天内有效地保护血液中病毒RNA,只有极其轻微的降解;而常规EDTA-Na2采血管对病毒RNA的稳定性维持时间不到1天且降解情况比较严重。
表1
图1~图8为表1对应的HIV基因的实时荧光PCR检测结果图,其中图1~图4为全血置于本文所述的游离病毒RNA保护剂中保存不同时间后进行核酸提取,提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果图,由图可知,在0~3天的检测时间内,所有检测样本都被正确检出,且稳定性良好,血液中病毒RNA得到了有效的保护;图5~图8为全血置于常规EDTA-Na2采血管中保存不同时间后进行核酸提取,提取得到的核酸进行HIV基因实时荧光PCR的检测结果图,检测结果显示,常规EDTA-Na2采血管中的病毒RNA连1天的稳定性都不能维持,降解情况十分严重。
Claims (5)
1.一种血液病毒RNA保护剂,其特征在于,所述保护剂是由bestain、glycine、EDTA-3K、IDU、AEBSF、核糖核苷复合物溶解于DEPC水中配制而成,其中各组分在所述DEPC水溶解液中的浓度分别为:bestain(0.05-0.2g/L)、glycine(20-50g/L)、EDTA-3K(30g-70g/L)、IDU(100-400g/L)、AEBSF(0.15-0.4g/L)、核糖核苷复合物(0.4ml-1ml/L)。
2. 根据权利要求1 所述的血液病毒RNA保护剂,其特征在于,所述的血液游离RNA保护剂是是由bestain、glycine、EDTA-3K、IDU、AEBSF、核糖核苷复合物按照一定的比例溶解于DEPC水中配制而成的,其中bestain、glycine、EDTA-3K、IDU、AEBSF、核糖核苷复合物在所述溶液中的浓度分别为0.1g/L、30g/L、50g/L、250g/L、0.235g/L、0.7ml/L。
3. 一种制备权利要求1-2 任一项所述血液病毒RNA保护剂的方法,其特征在于,所述制备方法的具体步骤如下:
1)按配方称(吸)取各组分到容器中;
2)向1)中加入800ml已灭菌的DEPC水,待所有组分溶解后,将溶液pH值调至7.35-7.45,再将溶液转移到1L容量瓶中,定容至1L,得到病毒RNA保护剂。
4. 权利要求3中的1)-2)任一项所述的血液病毒RNA保护剂在血液病毒RNA保存中的应用,其特征在于,在所述应用中,将采集的血液与病毒RNA保护剂以35:2 的比例缓慢充分混匀后,室温放置约半小时。
5.根据权利要求4所述的半小时后,其特征在于室温可保存3天,-20℃至-80℃可长期保存。
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---|---|---|---|---|
CN109679946A (zh) * | 2019-01-04 | 2019-04-26 | 宁波艾捷康宁生物科技有限公司 | 一种血液病毒ran保护剂及采血管 |
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WO2010134246A1 (ja) * | 2009-05-20 | 2010-11-25 | オリンパス株式会社 | 核酸含有試料の調製方法 |
CN103789202A (zh) * | 2014-01-26 | 2014-05-14 | 付士明 | 常温保存核酸的采集容器 |
CN105431536A (zh) * | 2013-08-16 | 2016-03-23 | 通用电气公司 | 用于提取和储存核酸的方法和组合物 |
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- 2016-12-26 CN CN201611214325.5A patent/CN106754881A/zh active Pending
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