CN106582578A - 耐高压亲和层析介质 - Google Patents

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Abstract

本案涉及耐高压亲和层析介质，其以聚丙烯酸酯微球为内核，并在所述聚丙烯酸酯微球表面键合有琼脂糖分子；所述琼脂糖分子中的羟基端一部分连接耐高压基团，剩余部分连接配基；其中，所述耐高压基团为CH2Ph‑p‑CH3或CH2Ph‑p‑OCH3。本案通过对亲和层析介质表面修饰基团的设计改进，在介质表面引入刚性大位阻基团，来提高亲和层析介质的机械强度，从而改善了层析介质在高压力下的分离效率和循环使用次数；同时，这种改进方法简单，生产成本低，利于大规模推广应用。

Description

耐高压亲和层析介质
技术领域
本发明涉及一种层析介质，具体涉及一种耐高压亲和层析介质。
背景技术
目前，在制药领域，如何提高药物的纯度和生物安全性，是重组蛋白、抗体等生物药研发和生产过程中的关键性步骤。我国药企对于分离介质的获得主要依赖进口，因此，国内亟需摆脱对进口分离介质的依赖，降低药物的生产成本。
对蛋白药物纯化分离用的亲和层析介质主要是琼脂糖产品，但这类产品机械强度较低，从而导致其在装填层析柱后，耐受压力较低，限制了其分离效率的提升空间，同时也抑制了琼脂糖的重复使用次数。
发明内容
针对现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种耐高压亲和层析介质。
本发明的技术方案概述如下：
一种耐高压亲和层析介质，其以聚丙烯酸酯微球为内核，并在所述聚丙烯酸酯微球表面键合有琼脂糖分子；所述琼脂糖分子中的羟基端一部分连接耐高压基团，剩余部分连接配基；
其中，所述耐高压基团为CH2Ph-p-CH3或CH2Ph-p-OCH3。(p代表甲基在苯环对位)
优选的是，所述的耐高压亲和层析介质，其中，所述耐高压基团与所述配基的摩尔比为5-15∶100。
优选的是，所述的耐高压亲和层析介质，其中，所述耐高压基团与所述配基的摩尔比为8-10∶100。
优选的是，所述的耐高压亲和层析介质，其中，所述耐高压基团为CH2Ph-p-CH3。
优选的是，所述的耐高压亲和层析介质，其中，所述耐高压基团为CH2Ph-p-OCH3。
优选的是，所述的耐高压亲和层析介质，其中，所述聚丙烯酸酯微球的粒径为30-100μm。
本发明的有益效果是：本案通过对亲和层析介质表面修饰基团的设计改进，在介质表面引入刚性大位阻基团，来提高亲和层析介质的机械强度，从而改善了层析介质在高压力下的分离效率和循环使用次数；同时，这种改进方法简单，生产成本低，利于大规模推广应用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
本案提供一实施例的耐高压亲和层析介质，其以聚丙烯酸酯微球为内核，并在聚丙烯酸酯微球表面键合有琼脂糖分子；琼脂糖分子中的羟基端一部分连接耐高压基团，剩余部分连接配基；
其中，耐高压基团为CH2Ph-p-CH3或CH2Ph-p-OCH3。
其中，耐高压基团与配基的摩尔比为5-15∶100；优选为8-10∶100。
其中，聚丙烯酸酯微球的粒径优选为30-100μm。
聚丙烯酸酯微球是一种常规市售商品，可以购买。以琼脂糖凝胶作为介质载体的层析柱耐压值一般为0.3-0.5MPa，而以表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球作为介质载体的层析柱耐压值一般为10-12MPa，重复使用次数为100次。
配基(L：Ligand)的种类不受限定，可根据待吸附物质的种类而定。例如当需要制备蛋白A亲和层析介质时，配基就选择ProA；当需要制备蛋白G亲和层析介质时，配基就选择ProG。配基的选择对该介质是否耐高压没有实质性影响。
实施例1
制备过程如下：
1)向1mol载体中按耐高压基团与配基的摩尔比为5-15∶100的比例添加BrCH2Ph-p-CH3、8-10mol甲苯和0.3-0.4mol的KOH，在70-75℃下搅拌反应1-1.5h；过滤，洗涤三次，干燥；载体为表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球；
2)加入3-4mol丙酮、1.1-1.2mol环氧氯丙烷和1.5-2mol NaOH，在30-40℃下搅拌1-2h，反应结束后，过滤，洗涤干燥；
3)加入1.2mol的配基、5-7mol的乙醇和2-3mol的NaOH，在55-60℃下搅拌反应12-15h，反应结束后过滤除去溶剂，洗涤三次，干燥即得层析介质。
实施例2
制备过程如下：
1)向1mol载体中按耐高压基团与配基的摩尔比为5-15∶100的比例添加CH2Ph-p-OCH3、8-10mol甲苯和0.3-0.4mol的KOH，在70-75℃下搅拌反应1-1.5h；过滤，洗涤三次，干燥；载体为表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球；
2)加入3-4mol丙酮、1.1-1.2mol环氧氯丙烷和1.5-2mol NaOH，在30-40℃下搅拌1-2h，反应结束后，过滤，洗涤干燥；
3)加入1.2mol的配基、5-7mol的乙醇和2-3mol的NaOH，在55-60℃下搅拌反应12-15h，反应结束后过滤除去溶剂，洗涤三次，干燥即得层析介质。
下表列出实施例1和实施例2的测试结果：
实施例1 实施例2
层析柱耐压值 18MPa 19MPa
重复使用次数 200次 200次
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。

Claims (6)

1.一种耐高压亲和层析介质，其以聚丙烯酸酯微球为内核，并在所述聚丙烯酸酯微球表面键合有琼脂糖分子；所述琼脂糖分子中的羟基端一部分连接耐高压基团，剩余部分连接配基；
其中，所述耐高压基团为CH2Ph-p-CH3或CH2Ph-p-OCH3。
2.根据权利要求1所述的耐高压亲和层析介质，其特征在于，所述耐高压基团与所述配基的摩尔比为5-15∶100。
3.根据权利要求2所述的耐高压亲和层析介质，其特征在于，所述耐高压基团与所述配基的摩尔比为8-10∶100。
4.根据权利要求1所述的耐高压亲和层析介质，其特征在于，所述耐高压基团为CH2Ph-p-CH3。
5.根据权利要求1所述的耐高压亲和层析介质，其特征在于，所述耐高压基团为CH2Ph-p-OCH3。
6.根据权利要求1所述的耐高压亲和层析介质，其特征在于，所述聚丙烯酸酯微球的粒径为30-100μm。
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