CN106622184B - 用于抗体药物纯化的层析介质 - Google Patents

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Abstract

本案涉及用于抗体药物纯化的层析介质，其包括载体和配基，其特征在于，在载体和配基之间还连接有以下片段：‑OCH(R)CH(OH)CH2‑；其中，R选自CH3、CH2CH3、CH(CH3)2、CH2CH2Cl和CH2CH2Br中的一种。本案通过对亲和层析介质表面修饰基团的设计改进，在支链上引入一定位阻的基团，来提高了层析介质的机械强度，从而改善了层析介质在高压力下的分离效率；同时，这种改进操作步骤简单，生产成本低，利于大规模推广应用。

Description

用于抗体药物纯化的层析介质
技术领域
本发明涉及一种层析介质，具体涉及一种用于抗体药物纯化的层析介质。
背景技术
目前，在制药领域，如何提高药物的纯度和生物安全性，是重组蛋白、抗体等生物药研发和生产过程中的关键性步骤。我国药企对于分离介质的获得主要是进口，因此，国内亟需摆脱对进口分离介质的依赖，降低药物的生产成本。
纯化分离用的亲和层析介质主要是琼脂糖产品，但这类产品机械强度较低，从而导致其在装填层析柱后，耐受压力较低，限制了其分离效率的提升空间，同时也抑制了琼脂糖的重复使用次数。
发明内容
针对现有技术的不足之处，本发明的目的在于提供一种用于抗体药物纯化的层析介质。
本发明的技术方案概述如下：
一种用于抗体药物纯化的层析介质，其包括载体和配基，在载体和配基之间还连接有以下片段：-OCH(R)CH(OH)CH2-；
其中，R选自CH3、CH2CH3、CH(CH3)2、CH2CH2Cl和CH2CH2Br中的一种。
优选的是，所述的用于抗体药物纯化的层析介质，其中，所述载体为琼脂糖凝胶或表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球。
优选的是，所述的用于抗体药物纯化的层析介质，其中，所述R为CH3。
优选的是，所述的用于抗体药物纯化的层析介质，其中，所述R为CH2CH3。
优选的是，所述的用于抗体药物纯化的层析介质，其中，所述R为CH(CH3)2。
优选的是，所述的用于抗体药物纯化的层析介质，其中，所述R为CH2CH2Cl。
优选的是，所述的用于抗体药物纯化的层析介质，其中，所述R为CH2CH2Br。
优选的是，所述的用于抗体药物纯化的层析介质，其中，所述载体的粒径为30-100μm。
本发明的有益效果是：本案通过对亲和层析介质表面修饰基团的设计改进，在支链上引入一定位阻的基团，来提高了层析介质的机械强度，从而改善了层析介质在高压力下的分离效率；同时，这种改进操作步骤简单，生产成本低，利于大规模推广应用。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明做进一步的详细说明，以令本领域技术人员参照说明书文字能够据以实施。
本案提供一实施例的用于抗体药物纯化的层析介质，其包括载体和配基，在载体和配基之间还连接有以下片段：-OCH(R)CH(OH)CH2-；
其中，R选自CH3、CH2CH3、CH(CH3)2、CH2CH2Cl和CH2CH2Br中的一种。在现有技术中，R为H原子，但这种分子结构的机械强度低，耐压性较差。
其中，载体优选为琼脂糖凝胶或表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球。载体的合成方法属于现有技术，载体本身也是一种常规市售商品，可以购买。当R为H原子时，琼脂糖凝胶载体的层析柱耐压值一般为0.3-0.5MPa，表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球的层析柱耐压值一般为10-12MPa。
其中，载体的粒径优选为30-100μm。
层析介质的合成步骤如下(载体表面含有多个羟基，以下仅列出一个羟基以示范例)：
配基(L：Ligand)的种类不受限定，可根据待吸附物质的种类而定。例如当需要制备蛋白A亲和层析介质时，配基就选择ProA；当需要制备蛋白G亲和层析介质时，配基就选择ProG。
实施例1
制备过程如下：
1)向1mol载体中加入3-4mol丙酮、1.1-1.2mol环氧氯丙烷和1.5-2mol NaOH，在30-40℃下搅拌1-2h，反应结束后洗涤干燥；载体为琼脂糖凝胶；
2)加入3-5mol的THF、和1.1-1.3mol的NBS溴化试剂，在25-35℃下搅拌10-12h，随后以氯仿萃取3次，以丙酮洗涤干燥；
3)加入1.1mol的RCl或RBr、3-4mol的KOH、2-3mol的甲苯，在40-50℃下搅拌12h，过滤，洗涤干燥；其中，R为CH3；
4)加入1.2mol的配基、5-7mol的乙醇和2-3mol的NaOH，在55-60℃下搅拌反应12-15h，反应结束后真空抽去溶剂，重复三次，即得层析介质。
实施例2
制备过程如下：
1)向1mol载体中加入3-4mol丙酮、1.1-1.2mol环氧氯丙烷和1.5-2mol NaOH，在30-40℃下搅拌1-2h，反应结束后洗涤干燥；载体为琼脂糖凝胶；
2)加入3-5mol的THF、和1.1-1.3mol的NBS溴化试剂，在25-35℃下搅拌10-12h，随后以氯仿萃取3次，以丙酮洗涤干燥；
3)加入1.2mol的RCl或RBr、3-4mol的KOH、3-4mol的正己烷，在30-40℃下搅拌12h，过滤，洗涤干燥；其中，R为CH2CH3；
4)加入1.2mol的配基、5-7mol的乙醇和2-3mol的NaOH，在55-60℃下搅拌反应12-15h，反应结束后真空抽去溶剂，重复三次，即得层析介质。
实施例3
制备过程如下：
1)向1mol载体中加入3-4mol丙酮、1.1-1.2mol环氧氯丙烷和1.5-2mol NaOH，在30-40℃下搅拌1-2h，反应结束后洗涤干燥；载体为表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球；
2)加入3-5mol的THF、和1.1-1.3mol的NBS溴化试剂，在25-35℃下搅拌10-12h，随后以氯仿萃取3次，以丙酮洗涤干燥；
3)加入1.1mol的RCl或RBr、3-4mol的KOH、3-4mol的DMF，在50-60℃下搅拌12h，过滤，洗涤干燥；其中，R为CH(CH3)2；
4)加入1.2mol的配基、5-7mol的乙醇和2-3mol的NaOH，在55-60℃下搅拌反应12-15h，反应结束后真空抽去溶剂，重复三次，即得层析介质。
实施例4
制备过程如下：
1)向1mol载体中加入3-4mol丙酮、1.1-1.2mol环氧氯丙烷和1.5-2mol NaOH，在30-40℃下搅拌1-2h，反应结束后洗涤干燥；载体为表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球；
2)加入3-5mol的THF、和1.1-1.3mol的NBS溴化试剂，在25-35℃下搅拌10-12h，随后以氯仿萃取3次，以丙酮洗涤干燥；
3)加入1.1mol的RCl或RBr、3-4mol的KOH、2-3mol的无水甲苯，在40-50℃下搅拌12h，过滤，洗涤干燥；其中，R为CH2CH2Cl；
4)加入1.2mol的配基、5-7mol的乙醇和2-3mol的NaOH，在55-60℃下搅拌反应12-15h，反应结束后真空抽去溶剂，重复三次，即得层析介质。
实施例5
制备过程如下：
1)向1mol载体中加入3-4mol丙酮、1.1-1.2mol环氧氯丙烷和1.5-2mol NaOH，在30-40℃下搅拌1-2h，反应结束后洗涤干燥；载体为表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球；
2)加入3-5mol的THF、和1.1-1.3mol的NBS溴化试剂，在25-35℃下搅拌10-12h，随后以氯仿萃取3次，以丙酮洗涤干燥；
3)加入1.2mol的RCl或RBr、3-4mol的KOH、3-4mol的DMF，在50-60℃下搅拌12h，过滤，洗涤干燥；其中，R为CH2CH2Br；
4)加入1.2mol的配基、5-7mol的乙醇和2-3mol的NaOH，在55-60℃下搅拌反应12-15h，反应结束后真空抽去溶剂，重复三次，即得层析介质。
下表列出实施例1-5的测试结果：
实施例1 实施例2 实施例3 实施例4 实施例5
层析柱耐压值 1.8MPa 2.1MPa 15MPa 16MPa 16MPa
重复使用次数 120次 110次 200次 200次 200次
尽管本发明的实施方案已公开如上，但其并不仅仅限于说明书和实施方式中所列运用，它完全可以被适用于各种适合本发明的领域，对于熟悉本领域的人员而言，可容易地实现另外的修改，因此在不背离权利要求及等同范围所限定的一般概念下，本发明并不限于特定的细节。

Claims (2)

1.一种用于抗体药物纯化的层析介质，其包括载体和配基，其特征在于，在载体和配基之间还连接有以下片段：-OCH(R)CH(OH)CH2-；
其中，R选自CH3、CH2CH3、CH(CH3)2、CH2CH2Cl和CH2CH2Br中的一种；
所述载体为琼脂糖凝胶或表面键合有琼脂糖分子的聚丙烯酸酯微球；
所述层析介质的合成步骤如下，载体表面含有多个羟基，以下仅列出一个羟基以示范例：
。
2.根据权利要求1所述的用于抗体药物纯化的层析介质，其特征在于，所述载体的粒径为30-100μm。
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