CN106496232B - 一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物及其制备方法 - Google Patents

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    • C07D487/04—Ortho-condensed systems

Abstract

本发明公开了一种具有抗肿瘤活性的1‑(2‑四氢吡喃)‑1H‑吡唑并[3,4‑d]嘧啶类化合物，其通式(Ⅰ)如下。本发明也公开了该化合物的合成方法，以及含所述化合物的药用组合物。本发明还公开了该药物组合物在治疗因蛋白激酶活性异常所引起疾病的应用。本发明开发出一种结构新颖，具有显著抗肿瘤活性的吡唑并[3,4‑d]嘧啶类化合物，该化合物可以用作为BRAF/VEGFR‑2激酶的双靶点抑制剂，在治疗因蛋白激酶活性异常所引起疾病方面有良好的效果和广阔的应用前景。

Description

一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d] 嘧啶类化合物及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物及其制备方法，属于医药领域。
背景技术
恶性肿瘤的治疗长期以来是一个世界性的难题。以往对肿瘤的治疗是通过发现肿瘤并破坏来实现,现在随着对细胞信号传导途径研究的不断深入，人们对肿瘤细胞内部的癌基因及抗癌基因的作用了解得越来越深入,使得针对肿瘤的特异性分子靶点设计新的抗肿瘤药物成为可能。现在已知，促***素原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路与肿瘤细胞的增殖、分化、迁移和凋亡有关。BRAF是RAF三个亚型之一，是MAPK通路重要的转导因子，且BRAF在3个亚型中突变频率最高，大约7％～8％的人类肿瘤发生BRAF突变，ARAF和CRAF则较少发生突变。黑色素瘤中BRAF突变率最高，约40％～68％恶性(转移性)黑色素瘤发生BRAF突变。该突变是第一个在黑色素瘤中被发现的高频率突变基因，目前已经成为黑色素瘤的治疗靶标。
血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)及其受体VEGFR(VEGF receptor)所介导的“出芽式血管生成(sprouting angiogenesis)”，在生理及病理性血管生成中均扮演着重要的角色，尤其在肿瘤血管生成方面起到关键的作用。靶向VEGF以及VEGFR的药物正在不断被开发出来，如bevacizumab、sorafenib、aflibercept等，这些药物以不同的方式抑制VEGF/VEGFR信号通路，在临床上已被证明能有效抑制多种肿瘤的生长，成功实现了相关药物的临床转化。研究认为，VEGF的信号转导途径很有可能是VEGFR-2通过活化PLC(磷脂酶C)，水解产生第二信使DAG(二酰甘油)，进而激活PKC(蛋白激酶)，PKC再激活RAF，RAF通过活化MEK最终激活MAPK。表明了BRAF和VEGFR-2两个靶点在肿瘤的发生发展过程中具有一定的协同作用。
国内外研究现状及分析：Sorafenib是第1个报道的ⅡA型BRAF激酶抑制剂。但是在转移性黑色素瘤的Ⅲ期临床试验中，Sorafenib并没有显著疗效。一种可能是，黑色素瘤依赖周围的新生血管进行转移，另一种可能是，在黑色素瘤中，Sorafenib对RAF激酶没有特异性的作用。而2011年BRAFV600E抑制剂Vemurafenib的上市成为一个重要突破。约有一半的晚期黑色素瘤有变异，在这个人群中Vemurafenib的应答率达到50％，比化疗延长3个月生存期。这个产品当时被认为是黑色素瘤治疗的重要进展，也是个体化治疗的一个成功典范。但不幸的是，在半年左右开始出现耐药。而另一种RAF抑制剂RAF265也被报道为RAF/VEGFR激酶双靶点抑制剂，抑制VEGF诱导的血管生成和突变BRAF，作用于A375M(BRAFV600E)人黑色素瘤细胞系，能够有效的降低肿瘤糖代谢和FDG累积。因此，以BRAFV600E和VEGFR-2为靶点，设计合成BRAFV600E/VEGFR-2激酶的双靶点抑制剂，通过使BRAFV600E和VEGFR-2表达减少，阻断其信号转导通路或耗竭肿瘤细胞产生的血管内皮生长因子而抑制肿瘤血管的生成，切断肿瘤血供，则有望达到抑制肿瘤生长、发展和转移的目的。而双靶点抑制剂在抗肿瘤方面具有更高的选择性和更好的活性。
因此，本领域迫切需要开发出结构新颖，活性强的BRAF/VEGFR-2激酶的双靶点抑制剂。
发明内容
本发明的目的在于提供一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物和其衍生物、以及该物质的合成方法和应用。
本发明的技术方案如下：
一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物，其通式(Ⅰ)如下：
其中X为氧，硫或氮；
连接基团Linker为取代在母体苯环的2位、3位或4位的 其中N原子一端与母体相连；
R1为-H、卤素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4烷硫基或-NO2；R2为取代的4～12元芳杂环基、所述取代芳杂环上的取代基为-H、C1～C6烷基、芳基、-CF3或5～10元芳杂环基；所述芳杂环基上的杂原子个数为1～4个，杂原子为O、S或N；R3为-H、卤素、烷基、-CF3、-NO2或-CN；R4为-H或烷基。
所述的一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物，通式(Ⅰ)中X为氧；连接基团Linker为取代在母体苯环的2位、3位或4位的其中N原子一端与母体相连；R1为-H、卤素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4烷硫基或-NO2；R2为取代的4～12元芳杂环基、所述取代芳杂环上的取代基为-H、C1～C6烷基、芳基、-CF3或5～10元芳杂环基；所述芳杂环基上的杂原子个数为1～4个，杂原子为O或S；R3为-H、卤素、烷基、-CF3、-NO2或-CN；R4为-H；R3、R4所含的氢原子各自独立地被一个或多个相同或不同的G1或G2取代；G1或G2各自独立地选自H、-OH、-NH2、-CN、-CF3、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6芳基、5-6元杂环芳基、C3-6杂脂环基、C1-6烷氧基、C3-6环烷氧基、C6芳氧基、5-7元杂芳氧基、C3-6杂脂环氧基、C1-6烷氨基、C3-6环烷氨基、C6芳氨基、5-7元杂环芳氨基、C3-6杂脂环氨基、C1-6烷氧基-CO-、C3-6环烷氧基-CO-、C6芳氧基-CO-、5-7元杂环芳氧基-CO-、C3-6杂脂环氧基-CO-、C1-6烷氨基-CO-、C3-6环烷氨基-CO-、C6芳氨基-CO-、5-7元杂环芳氨基-CO-、C3-6杂脂环氨基-CO-中的其中一种。
通式(Ⅰ)所示的化合物或其在药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体或前药，该化合物选自1-(3-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3,4-二氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-氯-5-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2,3-二甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(4-氟-3-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-硝基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-氟-5-(三氟甲基)苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-氰基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(5-甲基-2-硝基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-氟苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(4-氟苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2,5-二甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-三氟甲基-4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-三氟-5-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-氯-3-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-环己基-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲、1-(4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲、1-(3-三氟甲基-4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲、1-(3-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲中的其中一种。
所述的一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物合成方法：将4,6-二氯-5-嘧啶甲醛与一水合肼进行环合反应生成4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，在催化剂作用下，与3,4-二氢-2H-吡喃反应，生成4-氯-1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，在保护气体保护下，与对氨基酚反应得到胺类中间体4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯胺，最后与异氰酸酯或硫异氰酸酯等反应得到目标化合物。
所述的催化剂为酸性催化剂和盐类催化剂中的至少一种。
所述的保护气体为氮气和惰性气体中的至少一种。
一种药物组合物，包括下列成分中的至少一种：a)化合物、b)该化合物在药学上可接受的盐、c)该化合物的水合物、d)该化合物的溶剂合物、e)该化合物的多晶型物、f)该化合物的互变异构体、g)该化合物的前药；其中，所述的化合物为通式(Ⅰ)所示的化合物。
所述的一种药物组合物在治疗因蛋白激酶活性异常所引起疾病的应用。
所述的疾病为癌症。
所述的疾病为黑色素瘤、肝癌、肾癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、***区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、***、***癌、***癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌***癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、***癌、***癌、慢性或急性白血病、膀胱癌、肾或输尿管癌、脊柱轴肿瘤、垂体腺瘤、胃肠间质肿瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肥大细胞增多症、胶质瘤、肉瘤、淋巴瘤中的一种或任意几种的组合。
本发明的有益效果是：
本发明开发出一种结构新颖，具有显著抗肿瘤活性的吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物，该化合物可以用作为BRAF/VEGFR-2激酶的双靶点抑制剂，在治疗因蛋白激酶活性异常所引起疾病方面有良好的效果和广阔的应用前景。
具体实施方式
一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物，其通式(Ⅰ)如下：
其中X为氧，硫或氮；
连接基团Linker为取代在母体苯环的2位、3位或4位的 其中N原子一端与母体相连；
R1为-H、卤素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4烷硫基或-NO2；R2为取代的4～12元芳杂环基、所述取代芳杂环上的取代基为-H、C1～C6烷基、芳基、-CF3或5～10元芳杂环基；所述芳杂环基上的杂原子个数为1～4个，杂原子为O、S或N；R3为-H、卤素、烷基、-CF3、-NO2或-CN；R4为-H或烷基。
所述的一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物，通式(Ⅰ)中X为氧；连接基团Linker为取代在母体苯环的2位、3位或4位的其中N原子一端与母体相连；R1为-H、卤素、C1～C4烷基、C1～C4烷氧基、C1～C4烷硫基或-NO2；R2为取代的4～12元芳杂环基、所述取代芳杂环上的取代基为-H、C1～C6烷基、芳基、-CF3或5～10元芳杂环基；所述芳杂环基上的杂原子个数为1～4个，杂原子为O或S；R3为-H、卤素、烷基、-CF3、-NO2或-CN；R4为-H；R3、R4所含的氢原子各自独立地被一个或多个相同或不同的G1或G2取代；G1或G2各自独立地选自H、-OH、-NH2、-CN、-CF3、卤素、C1-6烷基、C3-6环烷基、C2-6烯基、C2-6炔基、C6芳基、5-6元杂环芳基、C3-6杂脂环基、C1-6烷氧基、C3-6环烷氧基、C6芳氧基、5-7元杂芳氧基、C3-6杂脂环氧基、C1-6烷氨基、C3-6环烷氨基、C6芳氨基、5-7元杂环芳氨基、C3-6杂脂环氨基、C1-6烷氧基-CO-、C3-6环烷氧基-CO-、C6芳氧基-CO-、5-7元杂环芳氧基-CO-、C3-6杂脂环氧基-CO-、C1-6烷氨基-CO-、C3-6环烷氨基-CO-、C6芳氨基-CO-、5-7元杂环芳氨基-CO-、C3-6杂脂环氨基-CO-中的其中一种。
通式(Ⅰ)所示的化合物或其在药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体或前药，该化合物选自1-(3-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3,4-二氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-氯-5-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2,3-二甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(4-氟-3-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-硝基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-氟-5-(三氟甲基)苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-氰基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(5-甲基-2-硝基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-氟苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(4-氟苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2,5-二甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-三氟甲基-4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-三氟-5-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-氯-3-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-环己基-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲、1-(4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲、1-(3-三氟甲基-4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲、1-(3-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲中的其中一种。
所述的一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物合成方法：将4,6-二氯-5-嘧啶甲醛与一水合肼进行环合反应生成4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，在催化剂作用下，与3,4-二氢-2H-吡喃反应，生成4-氯-1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，在保护气体保护下，与对氨基酚反应得到胺类中间体4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯胺，最后与异氰酸酯或硫异氰酸酯等反应得到目标化合物。具体合成线路如下：
式中a：Et3N,MeOH；b:PPTs,EtOAc；c:取代的苯酚,Cs2CO3,DMF,N2；d:异氰酸或硫异氰酸酯,CH2Cl2。
合成式中最后的产物即为通式(Ⅰ)所示的化合物。
优选的，所述的催化剂为酸性催化剂和盐类催化剂中的至少一种；进一步优选的，所述的催化剂为盐类催化剂；再进一步优选的，所述的催化剂为对甲苯磺酸吡啶盐。
优选的，所述的保护气体为氮气和惰性气体中的至少一种；进一步优选的，所述的保护气体为氮气、氩气中的其中一种；再进一步优选的，所述的保护气体为氮气。
一种药物组合物，包括下列成分中的至少一种：a)化合物、b)该化合物在药学上可接受的盐、c)该化合物的水合物、d)该化合物的溶剂合物、e)该化合物的多晶型物、f)该化合物的互变异构体、g)该化合物的前药；其中，所述的化合物为通式(Ⅰ)所示的化合物。
进一步优选的，所述的药物组合物还包括辅料；再进一步优选的，所述的辅料包括下列物质中的至少一种：溶剂、抛射剂、增溶剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、助悬剂、包衣材料、芳香剂、抗黏合剂、整合剂、渗透促进剂、pH值调节剂、缓冲剂、增塑剂、助溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、填充剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、表面活性剂、发泡剂、消泡剂、增稠剂、包合剂、保湿剂、吸收剂、稀释剂、絮凝剂与反絮凝剂、助滤剂、释放阻滞剂。
本发明的药物组合物可制成各种剂型：
按照剂型的分散***进行分类，具体来说，可以制成以下剂型：溶液型、胶体溶液型、乳剂型、混悬型、气体分散型、微粒分散型、固体分散型；
按照形态分类，具体来说，可以制成以下剂型：液体剂型(如芳香水剂、溶液剂、注射剂、合剂、洗剂、搽剂等)，气体剂型(如气雾剂、喷雾剂等)，固体剂型(如散剂、丸剂、片剂、膜剂等)，半固体剂型(如软膏剂、栓剂、糊剂等)；
按照给药途径分类，具体来说，可以制成以下剂型：经胃肠道给药的剂型、不经胃肠道给药的剂型。
所述的一种药物组合物在治疗因蛋白激酶活性异常所引起疾病的应用。优选的，所述的疾病为癌症；进一步优选的，所述的疾病为黑色素瘤、肝癌、肾癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、***区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、***、***癌、***癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌***癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、***癌、***癌、慢性或急性白血病、膀胱癌、肾或输尿管癌、脊柱轴肿瘤、垂体腺瘤、胃肠间质肿瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肥大细胞增多症、胶质瘤、肉瘤、淋巴瘤中的一种或任意几种的组合。
优选的，通式(Ⅰ)所示的化合物或其在药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体或前药在制备BRAF/VEGFR-2激酶抑制剂中的应用。
进一步优选的，通式(Ⅰ)所示的化合物或其在药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体或前药在制备治疗和/或预防和/或延缓和/或辅助治疗和/或处理与BRAF/VEGFR-2激酶活性过高相关的疾病的药物中的应用；再进一步优选的，通式(Ⅰ)所示的化合物或其在药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体或前药在制备抗肿瘤药物中的应用；更进一步优选的，下列化合物中的至少一种或其在药学上可接受的盐、水合物、溶剂合物、多晶型物、互变异构体或前药在制备抗肿瘤药物中的应用，如在制备抗***癌药物中的应用，或制备抗黑色素瘤药物中的应用。
本发明中“药学上可接受的盐”是指把母体化合物中的碱性基团转换成盐的形式。药学上可接受的盐包括，但不仅限于，碱性基团例如胺(氨)基的无机或有机酸盐类。本发明药学上可接受的盐可以由母体化合物合成，即母体化合物中的碱性基团与1-4当量的酸在一个溶剂***中反应。合适的盐列举在Remington’s Pharmaceutical Sciences,17thed.,Mack Publishing Company,Easton,Pa.,1985,1418和Journal of PharmaceuticalScience,66,2,1977中。
药学上可接受的酸加成盐可以由无机和有机酸制备如下：由衍生酸加成盐的无机酸包括盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等。由衍生酸加成盐的有机酸包括乙酸、丙酸、乙醇酸、丙酮酸、草酸、苹果酸、丙二酸、琥珀酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、对甲苯磺酸、水杨酸、苯磺酸等。衍生酸加成盐的无机酸和有机酸尤其选自盐酸、磷酸、硫酸、硝酸、高氯酸、氢溴酸、乙酸、苯甲酸和对甲苯磺酸。
以下通过具体的实施例对本发明的内容作进一步详细的说明。
实施例1：
4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶的合成
在100mL三口烧瓶中，加入1.0g 4,6-二氯-5-嘧啶甲醛，20mL甲醇，搅拌溶解，降温至-65℃，滴加0.97mL(1.2eq)的三乙胺。0.274mL(1.0eq)一水合肼用10mL甲醇稀释，用滴液漏斗缓慢滴下。滴毕恢复至室温，反应2～3h，TLC监测。反应结束，旋蒸干溶剂，干燥。用乙酸乙酯溶解固体(30mL×3)，过滤，合并后用饱和NaCl溶液洗涤(60mL×3)。无水MgSO4干燥、旋蒸除溶剂、干燥，得到淡黄色固体，收率68.9％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.51(s,1H),8.84(s,1H),8.45(s,1H).ESI-MS m/z:153[M-H]-。
实施例2：
4-氯-1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶的合成
在100mL三口烧瓶中，加入1.88g 4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，50mL乙酸乙酯，升温至50℃。依次投入50mg的PPTs(对甲苯磺酸吡啶盐，催化剂量)、1.37mL 3,4-二氢-2H-吡喃(1.2eq)。50℃保温反应20-22h，TLC监测。反应结束，降至室温，分别用水(60mL×1)、饱和NaCl溶液(50mL×2)洗涤混合物。无水MgSO4干燥、旋蒸除溶剂、干燥。用石油醚萃取所得固体(60mL×2)，蒸干溶剂，干燥后得淡黄色油状固体，收率76.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.92(s,1H),8.55(s,1H),6.02(dd,J＝10.4,2.4Hz,1H),3.97(d,J＝12.0Hz,1H),3.76–3.70(m,1H),2.49–2.42(m,1H),2.07-2.08(m,1H),1.98–1.94(m,1H),1.85–1.73(m,1H),1.64–1.58(m,2H).ESI-MS m/z:261[M+Na]+。
实施例3：
4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯胺的合成
在100mL三口烧瓶中，加入0.28g对氨基酚，1.51g Cs2CO3(1.2eq)粉末，N2保护下滴入2mL DMF，室温搅拌1.5-2h。后将溶于适量DMF中的0.56g 4-氯-1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶(1.0eq)滴入，反应22-24h，TLC监测。反应结束，用50mL乙酸乙酯稀释后，依次用1M的NaOH溶液(60mL×1)、水(80mL×1)、5％LiCl溶液(50mL×2)洗涤，MgSO4干燥、旋蒸除溶剂、干燥得棕褐色油状固体，收率79.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),7.75(s,1H),6.99–6.95(m,2H),6.67–6.31(m,2H),5.96(dd,J＝10.0,2.4Hz,1H),5.19(s,2H),3.96(d,J＝12.4Hz,1H),3.73–3.67(m,1H),2.48-2.40(m,1H),2.06-2.00(m,1H),1.92–1.88(m,1H),1.79-1.71(m,1H),1.61–1.56(m,2H).ESI-MS m/z:310[M-H]-。
实施例4：
1-(3-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲的合成
在100mL三口烧瓶中，加入4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，适量CH2Cl2，冰浴冷却，滴加1.0eq量的3-甲基苯基异氰酸酯的CH2Cl2。撤去冰浴，室温下反应过夜，TLC监测。反应结束，加入60mL石油醚洗涤，过滤、干燥后得到粗产物，酸性氧化铝柱层析分离(乙酸乙酯/甲醇)得到目标化合物，收率80.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ14.13(s,1H),8.82(s,1H),8.66(s,1H),8.51(s,1H),8.01(s,1H),7.56(d,J＝8.9Hz,2H),7.32(s,1H),7.25(d,J＝8.9Hz,3H),7.17(t,J＝7.7Hz,1H),6.80(d,J＝7.7Hz,1H),2.29(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.68,157.13,155.39,153.00,146.77,139.99,138.36,138.11,132.26,129.04,123.02,122.66,120.47,119.63,117.67,117.24,102.01.ESI-MS m/z:445[M+H]+。
实施5：
1-(3,4-二氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率67.0％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.07(s,1H),8.97(s,1H),8.58(s,1H),8.14(s,1H),7.90(s,1H),7.58–7.52(m,3H),7.37(d,J＝8.4Hz,1H),7.27 (d,J＝8.8Hz,2H),5.99(d,J＝9.6Hz,1H),3.97(d,J＝10.8Hz,1H),3.71(s,1H),2.05(d,J＝12.8Hz,1H),1.93(d,J＝12.4Hz,1H),1.79(s,1H),1.59(s,2H),1.24(s,1H).13CNMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.71,155.73,152.81,147.00,140.36,137.71,132.26,131.45,131.00,123.56,122.66,120.18,119.76,118.82,102.73,82.70,67.55,29.14,25.02,22.59.ESI-MS m/z:499[M+H]+。
实施例6：
1-(2-氯-5-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率69.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.54(s,1H),8.59(s,1H),8.28(s,1H),8.13(s,1H),8.03(s,1H),7.58(d,J＝8.8Hz,2H),7.34(d,J＝8.0Hz,1H),7.28(d,J＝8.8Hz,2H),6.87(d,J＝8.0Hz,1H),5.99(d,J＝10.0Hz,1H),3.97(d,J＝11.2Hz,1H),3.75–3.68(m,1H),2.30(s,3H),2.08–2.00(m,1H),1.93(d,J＝11.6Hz,1H),1.77(s,1H),1.60(s,2H),1.24(s,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.71,155.73,155.68,152.58,146.87,137.90,137.47,135.92,132.26,129.20,124.47,122.72,122.20,119.75,119.45,102.72,82.70,67.54,29.14,25.02,22.59,21.32.ESI-MS m/z:477[M-H]-。
实施例7：
1-(2,3-二甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率65.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.07(s,1H),8.58(s,1H),8.10(s,1H),8.00(s,1H),7.56(t,J＝8.6Hz,3H),7.25(d,J＝8.4Hz,1H),7.05(t,J＝7.8Hz,1H),6.92(d,J＝7.2Hz,1H),5.99(d,J＝9.2Hz,1H),3.97(d,J＝11.2Hz,1H),3.75-3.68(m,1H),2.45(d,J＝10.4Hz,1H),2.27(s,3H),2.16(s,3H),2.05(d,J＝10.8Hz,1H),1.93(d,J＝12.0Hz,1H),1.79(s,1H),1.60(s,2H),1.46(s,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6))δ155.74,153.38, 146.51,138.49,137.31,137.00,132.26,128.07,125.65,125.42,122.60,120.92,119.50,102.70,82.69,67.54,29.14,25.02,22.59,20.75,14.05.ESI-MSm/z:481[M+Na]+。
实施例8：
1-(4-氟-3-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率79.4％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.83(s,1H),8.69(s,1H),8.58(s,1H),8.11(s,1H),7.56(d,J＝8.8Hz,2H),7.38(dd,J＝6.8,2.4Hz,1H),7.30-7.24(m,3H),7.06(t,J＝9.2Hz,1H),5.98(dd,J＝10.4,2.4Hz,1H),3.97(d,J＝10.8Hz,1H),3.74–3.658(m,1H),2.22(s,3H),2.05(d,J＝11.6Hz,1H),1.95–1.90(m,1H),1.80-1.76(m,1H),1.59(s,2H),1.24(s,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.76,155.70,155.54,153.17,146.71,137.99,135.73,132.25,124.79,124.61,122.58,121.94,120.04,118.10,118.03,115.44,115.21,102.65,82.68,67.65,29.10,24.92,22.54,14.72.ESI-MSm/z:485[M+Na]+。
实施例9：
1-(3-硝基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率62.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.41(s,1H),9.11(s,1H),8.59(s,2H),8.16(s,1H),7.85(s,1H),7.74(s,1H),7.59(s,2H),7.29–7.00(m,2H),5.99(d,J＝12.4Hz,1H),5.31(s,1H),3.96(s,2H),3.72(s,2H),2.02(s,2H),1.77(s,1H),1.59(s,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ167.36,163.69,155.70,152.91,148.58,147.07,141.45,137.66,132.23,131.95,130.46,129.04,124.77,122.64,120.27,116.72,112.61,102.74,82.72,67.82,28.77,22.79.ESI-MS m/z:474[M-H]-。
实施例10：
1-(2-氟-5-(三氟甲基)苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率70.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.35(s,1H),8.96(s,1H),8.61(d,J＝22.8Hz,2H),8.16(s,1H),7.55(d,J＝26.4Hz,3H),7.41(s,1H),7.29(d,J＝5.6Hz,2H),5.98(d,J＝8.8Hz,1H),3.95(s,1H),3.71(s,1H),2.03(s,1H),1.92(d,J＝12.4Hz,2H),1.78(s,1H),1.59(s,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.65,155.73,155.64,152.54,147.08,137.40,132.27,129.13,128.99,122.79,119.92,116.94,116.62,116.39,115.63,102.71,82.65,67.55,29.13,25.01,22.60.ESI-MS m/z:517[M+H]+。
实施例11：
1-(3-氰基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率69.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.10(s,1H),9.00(s,1H),8.58(s,1H),8.13(s,1H),8.00(t,J＝1.8Hz,1H),7.71(ddd,J＝3.2,2.0,1.2Hz,1H),7.59(d,J＝2.4Hz,1H),7.57(d,J＝2.0Hz,1H),7.51(t,J＝8.0Hz,1H),7.43(dt,J＝7.6,1.2Hz,1H),7.29–7.27(m,2H),5.99(dd,J＝10.0,2.4Hz,1H),3.18(d,J＝5.2Hz,2H),1.99(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.68,155.73,152.89,146.93,140.99,137.71,132.27,130.61,125.76,123.33,122.68,121.18,120.12,119.29,111.98,102.70,82.65,67.56,60.18,29.13,25.01,22.60,21.17,14.48.ESI-MS m/z:456[M+H]+。
实施例12：
1-(5-甲基-2-硝基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率61.8％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ10.05(s,1H),9.71(s,1H),8.58(s,1H),8.22(s,1H),8.14(s,1H),8.04(d,J＝8.4Hz,1H),7.61(d,J＝8.8Hz,2H),7.29(d,J＝8.4Hz,2H),7.03(d,J＝8.8Hz,1H),5.98(d,J＝9.6Hz,1H),3.97(d,J＝11.2Hz,1H),3.71(dd,J＝12.8,6.4Hz,1H),2.40(s,4H),2.03(s,1H),1.92(d,J＝12.0Hz,1H),1.78(s,1H),1.59(s,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.70,155.76,155.70,152.24,147.09,146.76,137.68,135.52,132.28,125.95,123.53,122.76,122.58,120.21,102.74,82.70,67.60,29.14,25.02,22.60,21.94.ESI-MS m/z:488[M-H]-。
实施例13：
1-(2-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率74.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.41(s,1H),7.95(s,1H),7.81(t,J＝8.4Hz,2H),7.49(d,J＝7.2Hz,1H),7.36(t,J＝7.6Hz,1H),7.19(t,J＝7.6Hz,1H),7.00(s,3H),6.89(t,J＝7.8Hz,2H),6.74(d,J＝8.0Hz,1H),5.37(d,J＝6.0Hz,2H),4.54(s,3H),3.05(s,1H),1.67(d,J＝5.2Hz,5H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ167.01,159.65,151.08,141.82,141.36,140.59,135.03,133.47,129.50,128.93,128.22,126.97,125.17,123.42,122.12,119.87,113.33,112.36,55.14,43.52,24.14.ESI-MS m/z:443[M-H]-。
实施例14：
1-(3-氟苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率61.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.96(s,1H),8.89(s,1H),8.58(s,1H),8.13(s,1H),7.57(d,J＝8.8Hz,2H),7.51(dt,J＝11.6,2.4Hz,1H),7.35–7.26(m,3H),7.15(d,J＝8.0Hz,1H),6.80(td,J＝8.4,2.4Hz,1H),5.98(dd,J＝10.0,2.4Hz,1H),3.97(d,J＝11.2Hz,1H),3.71(ddd,J＝11.6,6.4,4.8Hz,1H),2.06–2.03(m,1H),1.95–1.91(m,1H),1.80–1.72(m,1H),1.63–1.57(m,2H),1.23(s,1H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.71,155.72,152.85,146.87,142.00,137.84,132.24,130.77,130.67,122.63,120.02,116.25,114.39,114.36,108.69,108.48,105.44,102.72,82.69,67.54,29.14,25.02,22.59,21.52.ESI-MS m/z:447[M-H]-。
实施例15：
1-(4-氟苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率66.3％。1H NMR(400MHz,CDCl3)δ8.57(s,1H),7.88(s,1H),7.59(d,J＝7.6Hz,4H),7.54(d,J＝7.7Hz,4H),7.49(s,2H),7.41(d,J＝8.5Hz,4H),7.20(d,J＝7.1Hz,13H),7.13–7.07(m,13H),6.56(s,3H),6.06(d,J＝9.1Hz,1H),4.14(d,J＝11.3Hz,2H),3.89–3.77(m,2H),2.22(d,J＝9.3Hz,13H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ167.35,163.77,155.72,153.11,146.61,138.36,137.74,132.14,131.93,130.58,129.04,128.06,126.55,122.61,121.57,119.56,102.72,82.71,67.81,28.77,22.79,14.26.ESI-MS m/z:447[M-H]-。
实施例16：
1-(2,5-二甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率71.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.19(s,1H),8.59(s,1H),8.12(s,1H),7.93(s,1H),7.70(s,1H),7.58(d,J＝6.8Hz,2H),7.26(d,J＝6.7Hz,2H),7.05(s,1H),6.77(s,1H),5.98(d,J＝9.2Hz,1H),3.97(d,J＝10.0Hz,1H),3.71(s,1H),2.24(d,J＝9.2Hz,6H),2.02(s,1H),1.92(d,J＝12.8Hz,1H),1.78(s,1H),1.59(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.76,155.75,155.64,153.09,146.52,138.36,137.50,135.49,132.27,130.40,124.87,123.80,122.65,122.06,119.49,102.69,99.92,82.65,67.56,29.14,25.01,22.60,21.35,17.90.ESI-MS m/z:457[M-H]-。
实施例17：
1-(3-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率73.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.17(s,1H),9.01(s,1H),8.58(s,1H),8.13(s,1H),8.03(s,1H),7.62–7.51(m,4H),7.30(dd,J＝20.0,7.6Hz,3H),5.98(d,J＝9.2Hz,1H),3.97(d,J＝11.2Hz,1H),3.70(s,1H),2.05–1.99(m,1H),1.92(d,J＝11.6Hz,1H),1.76(s,1H),1.59(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.70,155.72,155.64,152.99,146.90,140.95,137.78,132.26,130.32,122.64,122.23,121.17,120.11,118.53,115.57,114.53,102.70,82.65,67.56,29.13,25.01,22.59.ESI-MS m/z:497[M-H]-。
实施例18：
1-(3-三氟甲基-4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率66.6％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.22(s,1H),8.99(s,1H),8.58(s,1H),8.14(s,2H),7.69–7.57(m,4H),7.27(d,J＝8.8Hz,2H),5.98(d,J＝10.0Hz,1H),3.97(d,J＝11.6Hz,1H),3.74-3.68(m,1H),2.05(d,J＝12.4Hz,1H),1.93(d,J＝12.4Hz,1H),1.77(d,J＝8.0Hz,1H),1.59(s,3H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ163.7,155.7,152.9,147.1,139.8,137.6,132.4,132.3,127.3,123.5,122.7,121.9,120.3,117.3,102.7,82.7,67.5,29.1,25.0,22.6.ESI-MS m/z:531[M-H]-。
实施例19：
1-(3-氟-5-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率60.2％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.31(s,1H),9.06(s,1H),8.58(s,1H),8.15(s,1H),7.73(s,1H),7.64(d,J＝11.2Hz,1H)7.58(d,J＝8.8Hz,2H),7.28(d,J＝8.8Hz,2H),7.24(d,J＝8.5Hz,1H),5.99(dd,J＝10.1,2.1Hz,1H),3.97(d,J＝11.6Hz,1H),3.76-3.66(m,1H),2.45(dd,J＝12.8,4.0Hz,1H),2.05(d,J＝12.5Hz,1H),1.93(dd,J＝13.0,2.6Hz,1H),1.84-1.70(m,1H),1.61(d,J＝10.0Hz,2H).ESI-MS m/z:517[M+H]+。
实施例20：
1-(4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率68.3％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.87(s,1H),8.85(s,1H),8.58(s,1H),8.13(s,1H),7.56(d,J＝8.9Hz,2H),7.51(d,J＝8.8Hz,2H),7.26(d,J＝8.8Hz,2H),7.26(d,J＝8.9Hz,2H),5.98(dd,J＝10.1,1.9Hz,1H),3.97(d,J＝11.2Hz,1H),3.77-3.65(m,1H),2.49-2.41(m,1H),2.05(d,J＝12.5Hz,1H),1.93(dd,J＝12.9,2.3Hz,1H),1.83-1.68(m,1H),1.67-1.53(m,2H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)163.72,155.72,155.68,152.90,146.81,139.08,137.97,132.25,129.03,125.80,122.62,120.18,119.94,102.72,82.70,67.54,29.14,25.03,22.59.13C NMR(101MHz,DMSO)δ164.56,163.86,163.67,161.44,155.68,152.80,147.51,147.15,143.00,137.51,132.23,122.64,120.42,114.97,114.77,110.95,109.05,108.79,102.73,82.70,67.53,29.14,25.02,22.59.ESI-MS m/z:465[M+H]+。
实施例21：
1-(2-氯-5-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率74.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.22(s,1H),8.99(s,1H),8.58(s,1H),8.14(s,2H),7.69–7.57(m,4H),7.27(d,J＝8.8Hz,2H),5.98(d,J＝10.0Hz,1H),3.97(d,J＝11.6Hz,1H),3.74-3.68(m,1H),2.05(d,J＝12.4Hz,1H),1.93(d,J＝12.4Hz,1H),1.77(d,J＝8.0Hz,1H),1.59(s,3H).ESI-MS m/z:533[M+H]+。
实施例22：
1-环己基-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲
参照实施例4的制备方法。收率71.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ8.57(s,1H),8.46(s,1H),8.06(s,1H),7.47(d,J＝8.0Hz,2H),7.18(d,J＝8.0Hz,2H),6.13(d,J＝8.4Hz,1H),5.98(d,J＝9.2Hz,1H),5.59(d,J＝7.2Hz,4H),4.07(s,1H),3.96(d,J＝14.0Hz,1H),3.71(s,1H),2.00(s,1H),1.91(d,J＝14.0Hz,1H),1.80(s,2H),1.72(d,J＝12.0Hz,8H).ESI-MS m/z:437[M+H]+。
实施例23：
1-(3-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲
参照实施例4的制备方法。收率69.5％。1H NMR(400MHz,DMSO-d6)δ9.86(d,J＝7.6Hz,2H),8.60(s,1H),8.15(s,1H),7.60(d,J＝8.8Hz,2H),7.31(d,J＝8.0Hz,4H),7.24(t,J＝7.6Hz,1H),6.97(d,J＝10.8Hz,1H),5.99(d,J＝9.6Hz,1H),3.97(d,J＝11.2Hz,1H),3.74–3.68(m,1H),2.31(s,3H),2.09(s,6H).13C NMR(101MHz,DMSO-d6)δ180.12,163.54,155.68,148.71,139.58,138.20,138.05,137.94,132.31,128.77,128.65,125.65,124.55,122.35,122.23,121.25,102.70,82.65,67.57,31.10,29.14,25.01,22.60,21.47.ESI-MS m/z:461[M+H]+。
实施例24：
1-(4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲
参照实施例4的制备方法。收率为57.9％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.97(s，1H)，9.95(s，1H)，8.60(s，1H)，8.17(s，1H)，7.59(d，J＝8.8Hz，2H)，7.55(d，J＝8.8Hz，2H)，7.41(m，2H)，7.32(d，J＝8.8Hz，2H)，5.99(dd，J＝2.0Hz，2.4Hz，1H),3.97(d，J＝11.6Hz，1H)，3.72(m，1H)，2.46(m，1H)，2.05(d，J＝12.8Hz，1H)，1.93(dd，J＝2.8Hz，2.8Hz，1H)，1.77(m，1H)，1.60(m，2H).ESI-MS m/z:481[M+H]+。
实施例25：
1-(3-三氟甲基-4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲
参照实施例4的制备方法。收率为60.3％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ9.22(s，1H)，8.99(s，1H)，8.58(s，1H)，8.13(d，J＝3.2Hz，2H)，7.68(dd，J＝2.0Hz，2.0Hz，1H)，7.62(d，J＝8.8Hz，1H)，7.59(d，J＝8.8Hz，2H)，7.28(d，J＝9.2Hz，2H)，5.99(dd，J＝2.0Hz，2.4Hz，1H)，3.97(d，J＝11.2Hz，1H)，3.71(m，1H)，2.46(m，1H)，2.05(m，1H)，1.93(m，1H)，1.77(m，1H)，1.60(dt，2H).ESI-MS m/z:549[M+H]+。
实施例26：
1-(3-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲
参照实施例4的制备方法。收率为69.9％。1HNMR(400MHz，DMSO-d6)δ10.12(s，1H)，10.11(s，1H)，8.60(s，1H)，8.19(s，1H)，7.99(s，1H)，7.79(d，J＝8.4Hz，1H)，7.59(q，J＝8.8Hz，7.2Hz，3H)，7.49(d，J＝7.6Hz，1H)，7.34(d，J＝8.8Hz，2H)，6.00(dd，J＝2.0Hz，2.4Hz，1H),3.97(d，J＝11.2Hz，1H)，3.72(m，1H)，2.46(dd，J＝4Hz，4Hz，1H)，2.05(d，J＝13.6Hz，1H)，1.93(dd，J＝2.8Hz，2.8Hz，1H)，1.79(m，1H)，1.61(m，2H).ESI-MS m/z:515[M+H]+。
实施例27：
体外细胞株抑制活性(IC50)测试
采用MTT法测定化合物对高表达VEGFR-2的人脐静脉内皮细胞HUVEC，高表达BRAF(野生型)的人***癌细胞PC-3以及高表达BRAFV600E的人恶性黑色素瘤细胞A375、人结肠癌细胞HT-29、人***癌细胞PC-3、人肺癌细胞A549四种肿瘤细胞株的体外抑制活性，并设定正常细胞犬肾细胞MDCK测定化合物的细胞毒性。
体外培养细胞株，把对数生长期的六种细胞株细胞消化后，吹打成单细胞悬液，分别接种于96孔培养板；每孔5×103个细胞，每孔加入培养基200μL，37℃、5％CO2培养箱中培养过夜。待细胞贴壁后，分别加入不同剂量的受试化合物和阳性对照药索拉菲尼，配置不同浓度的样品，以空白组为阴性对照组，以索拉菲尼为阳性对照组，在培养箱中再培养48h。然后，每孔加入20μL质量浓度为5mg/mL的MTT液，连续培养4h。吸去上清液，每孔加入150μL二甲亚砜，将培养板置于微孔板振荡器上振荡10min，使结晶物溶解。在570nm波长处用酶标仪测吸光度A值，计算抑制率；按Bliss法计算IC50。体外细胞活性测试的结果见下表1。
表1化合物对肿瘤细胞增殖结果
体外细胞活性测试表明，化合物对高表达VEGFR-2、BRAF和BRAFV600E的细胞具有较强的抑制活性，可用于预防或治疗与VEGFR-2、BRAF和BRAFV600E有关的临床疾病，这些疾病可以是黑色素瘤、肝癌、肾癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、皮肤或眼内黑素瘤、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、***区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、子宫内膜癌、***、***癌、***癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌***癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、***癌、***癌、慢性或急性白血病、膀胱癌、肾或输尿管癌、脊柱轴肿瘤、垂体腺瘤、胃肠间质肿瘤、结肠直肠癌、非小细胞肺癌、小细胞肺癌、肥大细胞增多症、胶质瘤、肉瘤、淋巴瘤等。

Claims (8)

1.一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物，其特征在于：该化合物选自1-(3-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3,4-二氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-氯-5-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2,3-二甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(4-氟-3-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-氟-5 -(三氟甲基)苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-氰基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(5-甲基-2-硝基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-氟苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2,5-二甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-三氟甲基-4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(3-氟-5-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(2-氯-5-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-环己基-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]脲、1-(4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲、1-(3-三氟甲基-4-氯苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲、1-(3-三氟甲基苯基)-3-[4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯基]硫脲中的其中一种。
2.权利要求1中所述的一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物合成方法，其特征在于：将4,6-二氯-5-嘧啶甲醛与一水合肼进行环合反应生成4-氯-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，在催化剂作用下，与3,4-二氢-2H-吡喃反应，生成4-氯-1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶，在保护气体保护下，与对氨基酚反应得到胺类中间体4-[[1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶]-4-氧基]苯胺，最后与异氰酸酯或硫异氰酸酯反应得到目标化合物。
3.根据权利要求2中所述的一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物合成方法，其特征在于：所述的催化剂为酸性催化剂和盐类催化剂中的至少一种。
4.根据权利要求3中所述的一种具有抗肿瘤活性的1-(2-四氢吡喃)-1H-吡唑并[3,4-d]嘧啶类化合物合成方法，其特征在于：所述的保护气体为氮气和惰性气体中的至少一种。
5.一种药物组合物，其特征在于：包括下列成分中的至少一种：a）化合物、b）该化合物在药学上可接受的盐；其中，所述的化合物为权利要求1所述的化合物。
6.权利要求5所述的一种药物组合物在制备因蛋白激酶活性异常所引起疾病的药物的应用。
7.根据权利要求6中所述的应用，其特征在于：所述的疾病为癌症。
8.根据权利要求7中所述的应用，其特征在于：所述的疾病为黑色素瘤、肝癌、肾癌、肺癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、卵巢癌、直肠癌、***区癌、胃癌、结肠癌、乳腺癌、输卵管癌、***、***癌、***癌、何杰金病、食道癌、小肠癌、内分泌***癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、***癌、***癌、慢性或急性白血病、膀胱癌、脊柱轴肿瘤、垂体腺瘤、胃肠间质肿瘤、结肠直肠癌、肥大细胞增多症、胶质瘤、肉瘤、淋巴瘤中的一种或任意几种的组合。
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